You are on page 1of 52

UJI DAYA HAMBAT DAN ANALISIS KLT BIOAUTOGRAFI EKSTRAK AKAR DAN BUAH BAKAU (Rhizophora stylosa Griff

.) TERHADAP Vibrio harveyi

AKHYAR N111 05 033

PROGRAM STUDI FARMASI FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS HASANUDDIN MAKASSAR 2010

UJI DAYA HAMBAT DAN ANALISIS KLT BIOAUTOGRAFI EKSTRAK AKAR DAN BUAH BAKAU (Rhizophora stylosa Griff.) TERHADAP Vibrio harveyi

SKRIPSI untuk melengkapi tugas-tugas dan memenuhi syarat-syarat untuk mencapai gelar sarjana

AKHYAR N111 05 033

PROGRAM STUDI FARMASI FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS HASANUDDIN MAKASSAR 2010

ABSTRAK Penelitian uji daya hambat dan analisis KLT bioautografi ekstrak akar dan buah bakau (Rhizophora stylosa Griff.) terhadap Vibrio harveyi telah dilakukan. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui apakah ekstrak akar dan buah bakau (Rhizophora stylosa Griff.) dapat menghambat pertumbuhan Vibrio harveyi dan membandingkan daya hambatnya pada ekstrak dengan tingkat kepolaran yang berbeda yaitu pada ekstrak nheksan, ekstrak n-butanol dan ekstrak air berdasarkan pada pengukuran diameter daerah hambatan yang terbentuk dengan metode difusi agar. Akar dan buah tanaman bakau (Rhizophora stylosa Griff.) diekstraksi dengan metanol menggunakan metode refluks pada akar dan soxhletasi pada buah, lalu dipartisi dengan pelarut n-heksan, n-butanol dan air. Ekstrak akar dan buah bakau dapat menghambat pertumbuhan Vibrio harveyi dan ekstrak n-butanol akar dan buah memiliki rata-rata diameter daerah hambatan terbesar yaitu berturut-turut 15,5 mm dan 15,4 mm. Penentuan Kadar Hambat Minimal (KHM) yaitu keduanya memiliki nilai KHM yang sama yaitu 0,31%. Pengujian KLT bioautografi dengan pengelusi n-butanol : Asam asetat : Air (4 : 1 : 5) diperoleh daerah hambatan pada noda dengan Rf 0,13 pada akar dan 0,11 pada buah. Hasil identifikasi menunjukkan noda tersebut merupakan senyawa fenolik.

vi

ABSTRACT A research about antibacterial activity and TLC bioautography analyse of root and fruit extract of mangrove (Rhizophora stylosa Griff.) to Vibrio harveyi had been done. This research aim to know whether root and fruit extract of mangrove (Rhizophora stylosa Griff.) can inhibit growth Vibrio harveyi and compared their inhibitory in different polarity, that are nheksan extract, n-butanol extract, and water extract base on measurement of inhibitory zone diameters which formed with agar diffution method. Root and fruit of mangrove (Rhizophora stylosa Griff.) were extracted with methanol using refluks method for root and soxhlet method for fruit, then partitioned with n-heksan, n-butanol and water. Root and fruit extract can inhibit growth of Vibrio haveyi and n-butanol extract of root and fruit had the biggest average inhibitory zone diameter that are 15,5 mm and 15,4 mm. Minimal Inhibitory Concentration (MIC) determinate are 0,31% for both of them. TLC bioautografi assay with eluen n-butanol : asetat acid : water (4 : 1 : 5) is obtained inhibitory zone at pocks with Rf 0,13 for root and 0,11 for fruit. Result of identification shown that the pocks are phenolic.

vii

DAFTAR ISI

Halaman

UCAPAN TERIMA KASIH .................................................................... iv ABSTRAK ............................................................................................ vi ABSTRACT .......................................................................................... vii DAFTAR ISI ......................................................................................... viii DAFTAR TABEL .................................................................................. xi DAFTAR GAMBAR .............................................................................. xii DAFTAR LAMPIRAN ........................................................................... xiii BAB I. PENDAHULUAN .................................................................... 1 BAB II. TINJAUAN PUSTAKA........................................................... 5 II.1 Uraian Tumbuhan ............................................................... 5 II.1.1 Klasifikasi Tumbuhan ................................................. 5 II.1.2 Nama Daerah ............................................................. 5 II.1.3 Morfologi Tumbuhan .................................................. 6 II.1.4 Kegunaan Tumbuhan ................................................. 7 II.1.5 Kandungan Kimia ....................................................... 7 II.2 Metode Ekstraksi Bahan Alam ............................................ 7 II.2.1 Definisi Ekstrak .......................................................... 7 II.2.2 Definisi Ekstraksi ........................................................ 7 II.2.3 Tujuan Ekstraksi......................................................... 7 II.2.4 Jenis-Jenis Ekstraksi.................................................. 9

viii

......2.......................... 11 II...................................................................7................2......... 29 III... 30 III..............................5.......................................................2 Mekanisme Antimikroba ....... 20 II.................................... 32 III...............4 Partisi Ekstrak Metanol .......................................................................2 KLT Bioautografi ....... 31 III..........6 Pengujian Secara Mikrobiologi ...........................2 Pengolahan Sampel .................................1 Klasifikasi ......................2..4....7 Metode Pemisahan ...... 30 III.3 Sterilisasi Alat . 29 III.. 17 II.. 17 II.......................6 Ekstraksi secara Soxhletasi ............ 32 ix ......... 9 II. 29 III.......1 Antimikroba .................2...............1 Pengambilan Sampel ....5 Pembuatan Larutan Ekstrak ................................................................................ 12 II.....3 Ekstraksi Sampel .....2 Sifat dan Morfologi ................2..............7.......................... 29 III..................... 17 II...................II............................... 20 II........................................ 11 II............ 31 III.............................................. 9 II..........................2 Pengambilan dan Penyiapan Sampel Penelitian ...........3 Tinjauan Umum Vibriosis .......2.....5 Uraian Bakteri............................. 24 BAB III..............................2.................... PELAKSANAAN PENELITIAN .................................................1 Penyiapan Alat dan Bahan ....................4 Penyiapan Bahan Penelitian ........... 10 II....1 Kromatografi Lapis Tipis ..... 17 II....4 Tinjauan Umum Antimikroba ............5 Ekstraksi secara Refluks ..........................................4...........................5...................

.......... 33 III.........................2 Penyiapan Bakteri Uji ....2...........................................1 Hasil Penelitian ...........1 Pembuatan Medium ............................1 Kesimpulan ......................4........2 Pembuatan Suspensi Bakteri .................................................8 Pengujian KLT Bioautografi.................9 Identifikasi Senyawa Kimia ..................................... 37 BAB V.................................................................... 32 III....... 33 III.... 32 III.................. 41 LAMPIRAN................. 34 III..................................2 Pembahasan ....6 Penentuan Nilai KHM ....... 40 V.... HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................................................................................................................................................. 34 III...2...2 Saran ......... 35 BAB IV..................................4........4............ 44 x ..................... KESIMPULAN DAN SARAN . 36 IV......................4............................. 34 III.7 Pemisahan Senyawa secara KLT ................. 40 DAFTAR PUSTAKA ........................................................III..................10 Pengolahan dan Analisis Data ........................ 32 III........ 40 V.......5 Pengujian Daya Hambat ............... 36 IV.....................1 Peremajaan Bakteri .................................... 33 III............................................................................

550 km2) maupun jumlah spesies (±45 spesies). baik dari segi kuantitas area (±42. diare. sebagian spesies tanaman tersebut bahkan telah diuji secara klinis kandungan fitokimia. Tanaman bakau banyak digunakan masyarakat sebagai astrigen. fungi dan virus (3). Tanaman bakau di Indonesia merupakan yang terbanyak di dunia. khasiat dan keamanan penggunaannya (1). hemorrhagin. 1 . dan disentri (4). Semakin mahalnya harga obat modern dipasaran merupakan salah satu alasan untuk menggali kembali penggunaan obat tradisional.BAB I PENDAHULUAN Indonesia memiliki ribuan jenis tumbuhan yang tersebar di berbagai daerah. Tanaman bakau mempunyai banyak manfaat. Masyarakat Indonesia telah lama mengenal dan memakai obat tradisional untuk mengobati berbagai macam penyakit. Banyak jenis tanaman obat di Indonesia yang telah dimanfaatkan sebagai bahan baku obat. di mana keanekaragaman hayati yang ada tersebut dapat dimanfaatkan sebagai bahan baku obat modern dan tradisional. Sejumlah spesies tanaman bakau secara turun-temurun digunakan sebagai obat dan saat ini ekstraknya telah terbukti menyembuhkan penyakit pada manusia dan hewan termasuk penyakit yang disebabkan oleh bakteri. mulai dari manfaat ekologi sampai dengan sebagai sumber pangan dan obat (2). obat angina. diabetes.

Penggunaan antibiotik dalam waktu lama akan . Salah satu spesies bakteri Vibrio adalah Vibrio harveyi. terjadi penurunan produksi udang di Indonesia mulai tahun 2003 hingga sekarang. Dampak yang ditimbulkan oleh penyakit tersebut adalah kematian udang secara massal yang mengakibatkan kerugian bagi pembudidaya udang windu (9). Pada saat permintaan udang dunia terus meningkat. Vibriosis biasanya ditanggulangi menggunakan senyawa kimia sintetik seperti antibiotik.) merupakan salah satu produk unggulan perikanan Indonesia. terutama jenis udang-udangan (Crustacea). Hasil produksi perikanan di Indonesia terus meningkat dari tahun ke tahun. Permintaan pasar terhadap udang windu sangat tinggi. ikan dan kerang-kerangan (6). Penyakit pada udang windu yang mulai meresahkan masyarakat pembudidaya udang windu adalah penyakit vibriosis. Penurunan tersebut terutama disebabkan oleh serangan infeksi bakteri akibat buruknya kondisi perairan sehingga terjadi kegagalan panen (8). Hal ini disebabkan banyaknya keistimewaan yang dimiliki oleh udang windu dibandingkan dengan produk perikanan lainnya (7). baik di dalam negeri maupun dari luar negeri. Vibrio harveyi merupakan bakteri patogen yang menyebabkan penyakit vibriosis pada udang. Udang windu (Panaeus monodon Fab.2 Genus Vibrio merupakan bakteri penyebab beberapa penyakit. seperti vibriosis dan cholera (5).

3 menimbulkan sejumlah masalah utamanya resistensi bakterial dan residu yang dapat mencemari lingkungan. Berdasarkan uraian di atas. pencarian senyawasenyawa antibakteri dari bahan alam yang efek sampingnya kurang saat ini menjadi perhatian utama (9). Kemudian untuk mengetahui senyawa aktif yang bersifat sebagai antibakteri digunakan metode KLT bioautografi. Sebuah penelitian melaporkan bahwa pemberian ekstrak buah tanaman bakau dapat menekan tingkat kematian udang windu (Panaeus monodon Fab.) pada konsentrasi tertentu akan menghambat pertumbuhan Vibrio harveyi. ekstrak n-butanol dan ekstrak air serta mengetahui senyawa apa yang dapat menghambat pertumbuhan Vibrio harveyi. akan tetapi masih terbatas penelitian untuk mengidentifikasi senyawa bioaktifnya (3).) yang telah diinfeksi Vibrio harveyi (8). .) dapat menghambat pertumbuhan Vibrio harveyi dan membandingkan daya hambatnya pada ekstrak dengan tingkat kepolaran yang berbeda yaitu pada ekstrak n-heksan. Meskipun tanaman bakau memiliki banyak potensi. Oleh karena itu. Metode yang digunakan pada penelitian ini adalah metode difusi agar dengan pemberian ekstrak sampel pada medium yang telah ditumbuhkan Vibrio harveyi dengan hipotesis bahwa pemberian ekstrak akar atau buah tanaman bakau (Rhizophora stylosa Griff. maka telah dilakukan penelitian untuk mengetahui apakah ekstrak tanaman bakau (Rhizophora stylosa Griff.

) serta mengidentifikasi senyawa diharapkan yang dapat menghambat acuan Vibrio harveyi. Tujuannya untuk membandingkan daya hambat ekstrak n-heksan. ekstrak n-butanol dan ekstrak air dari akar dan buah tanaman bakau (Rhizophora stylosa Griff. .4 Maksud dari penelitian ini adalah untuk mengetahui aktivitas antibakteri ekstrak akar dan buah tanaman bakau (Rhizophora stylosa Griff. bahan Penelitian alam ini menjadi penggunaan dalam penanggulangan penyakit vibiosis pada budidaya udang windu.) terhadap Vibrio harveyi.

1.2 Nama Daerah (12.13) Jawa Madura Bugis Seram Aru Aceh : tancang.BAB II TINJAUAN PUSTAKA II.1.11) Kerajaan Divisi Subdivisi Kelas Subkelas Bangsa Suku Marga Jenis : Plantae : Spermatophyta : Angiospermae : Dicotyledonae : Dialypetalae : Myrtales : Rhizophoraceae : Rhizophora : Rhizophora stylosa Griff.1 Klasifikasi Tumbuhan (10. II. tanjang : tinjang : bangko : abat : kailau : bangka 5 . 1 Uraian Tumbuhan II.

dengan tinggi akar mencapai 0. Tinggi 4-8 m. terletak berhadapan. Perbungaan terjadi sepanjang tahun. diabetes. bisul dan typhoid. Diameter batang mencapai 20 cm. kecil-kecil. hipokotilnya berwarna hijau memanjang. bertangkai. berambut panjang hingga 8 mm. Bunga berkelompok dalam payung tambahan yang bertangkai dan menggarpu di ketiak. licin seperti kulit. lepra. disentri.4 Kegunaan Tumbuhan (15. II. Daun tunggal.1. obat angina. terkumpul di ujung ranting. . diare. menghentikan perdarahan (hemorrhagin). 3. hijau atau hijau muda kekuningan. Buah hijau kecoklatan. tabung kelopak bertaju sekitar 1.1.13. 8-16 kuntum. dengan akar tunjang yang menyolok dan bercabangcabang. tebal. melengkung. panjang sampai dengan 4 cm. Daun penumpu cepat rontok. Hipokotil berbintil agak halus. Helai daun elips. hepatitis.5-1 m di atas lumpur. demam. Buah berbentuk telur memanjang sampai mirip buah pir yang kecil. dengan kuncup tertutup daun penumpu yang menggulung runcing. malaria.5-13 × 7-23 cm. putih. antiseptik. anti muntah. leher kotiledon kuning kehijauan ketika matang. 20-35 cm. Daun mahkota putih.16) Digunakan masyarakat sebagai astrigen.5 cm.14) Pohon besar.3 Morfologi Tumbuhan (12. berujung runcing. meninggalkan bekas serupa cincin pada buku-buku yang menggembung.6 II.

steroid.dan limonoid. naphthofurans. flavonoid. forbol ester. polyfenol. keterosiklik oksigen.1 Definisi Ekstrak (18) Ekstrak adalah sediaan kering.2. Umumnya.2 Definisi Ekstraksi (18. Proses terekstraksinya zat aktif . sesquiterpene. alkaloid. flavonoid. II. sehingga diperlukan metode ekstraksi dan pelarut tertentu dalam mengekstraksinya. saponin. feromon. minyak esensial. naphthoquinone.7 II.5 Kandungan Kimia (15.2 Metode Ekstraksi Bahan Alam II. namun sel tanaman dan hewan berbeda demikian pula ketebalannya. hewan dan beberapa jenis ikan dan termasuk biota laut. Zat-zat aktif tersebut berada di dalam sel. senyawa sulfur. diluar pengaruh cahaya matahari langsung. gula. lemak dan hidrokarbon.17) Tanaman bakau mengandung tannin. benzoquinone. gibberellin. o-metil-inositol. II. sterols. karbohidrat. kental atau cair dibuat dengan mengekstraksi simplisia nabati atau hewani menurut cara yang cocok. iridoid glikosida.19) Ekstraksi adalah penyarian zat-zat berkhasiat atau zat-zat aktif dari bagian tanaman obat. alkaloid dan asam amino bebas. zat aktif yang terkandung dalam tanaman maupun hewan lebih larut dalan pelarut organik. triterpene. asam lemak bebas termasuk PUFAs (asam lemak tak jenuh ganda).2.1. di. rotenone. flavoglican. alkohol alipatik rantai panjang dan lemak jenuh.

Ekstraksi secara panas yaitu dengan metode refluks dan destilasi uap air. zat aktif akan terlarut sehingga terjadi perbedaan konsentrasi antara larutan zat aktif di dalam sel dan pelarut organik diluar sel. dan proses ini berulang terus sampai terjadi keseimbangan antara konsentrasi zat aktif di dalam sel dan di luar sel. .8 dalam tanaman adalah pelarut organik akan menembus dinding sel dan masuk ke dalam rongga sel yang mengandung zat aktif.4 Jenis-jenis Ekstraksi (20) Proses ekstraksi dapat dilakukan secara panas dan secara kering. Zat aktif akan larut dalam pelarut organik dan karena adanya perbedaan antara konsentrasi di dalam dan konsentrasi diluar sel.3 Tujuan Ekstraksi (19) Tujuan ekstraksi adalah untuk menarik komponen kimia yang terdapat dalam bahan alam baik dari tumbuhan.2. Proses ini berlangsung terus menerus sampai terjadi keseimbangan konsentrasi zat aktif di dalam dan di luar sel. mengakibatkan terjadinya difusi pelarut organik yang mengandung zat aktif keluar sel.2. Maka larutan terpekat akan berdifusi ke luar sel. II. hewan dan biota laut dengan pelarut organik tertentu. Proses ekstraksi ini berdasarkan pada kemampuan pelarut organik untuk menembus dinding sel dan masuk dalam rongga sel yang mengandung zat aktif. II. perkolasi dan soxhletasi. sedangkan ekstraksi dingin yaitu dengan maserasi.

akan menyari kembali sampel yang berada pada labu alas bulat. cairan penyari dipanaskan sehingga menguap. Filtrat yang diperoleh dikumpulkan dan dipekatkan.9 II. demikian seterusnya berlangsung secara berkesinambungan sampai penyarian sempurna. namun proses ekstraksinya secara dingin.2. sehingga metode soxhlet digolongkan dalam cara dingin. uap-uap cairan penyari terkondensasi pada kondensor bola menjadi molekul-molekul cairan penyari yang akan turun kembali menuju labu alas bulat. uap cairan penyari terkondensasi menjadi molekul-molekul air oleh pendingin balik dan turun menyari simplisia dalam klongsong dan selanjutnya masuk kembali ke dalam labu alas bulat setelah melewati pipa sifon. . Metode soxhletasi bila dilihat secara keseluruhan termasuk cara panas. penggantian pelarut dilakukan sebanyak 3 kali setiap 3-4 jam. II.2. Proses ini berlangsung hingga penyarian zat aktif sempurna yang ditandai dengan beningnya cairan penyari yang melalui pipa sifon atau jika diidentifikasi dengan kromatografi lapis tipis tidak memberikan noda lagi.5 Ekstraksi secara Refluks (20) Prinsip kerja pada metode refluks yaitu Penarikan komponen kimia yang dilakukan dengan cara sampel dimasukkan ke dalam labu alas bulat bersama-sama dengan cairan penyari lalu dipanaskan.6 Ekstraksi secara Soxhletasi (20) Soxhletasi merupakan penyarian simplisia secara berkesinambungan.

Vibrio menyerang dengan merusak lapisan kutikula yang mengandung khitin dikarenakan Vibrio memiliki chitinase. . vibrio menginfeksi organisme yang telah terlebih dahulu terinfeksi penyakit lain. vibrio masuk melalui kontak langsung dengan organisme.3 Vibriosis (21. II.10 Sample atau bahan yang akan diekstraksi terlebih dahulu diserbukkan dan ditimbang kemudian dimasukkan ke dalam klongsong yang telah dilapisi dengan kertas saring sedemikian rupa (tinggi sample dalam klongsong tidak boleh melebihi pipa sifon). Aliran air dan pemanas dijalankan hingga terjadi proses ekstraksi zat aktif sampai sempurna (biasanya 20-25 kali sirkulasi). Sebagai patogen primer. Setelah itu kondensor dipasang tegak lurus dan diklem pada statif dengan kuat.22) Vibrio merupakan penyebab utama penyakit vibrisis pada udang atau penyakit udang menyala dan dapat berperan sebagai patogen primer ataupun patogen sekunder. lipase. Selanjutnya labu alas bulat diisi dengan cairan penyari yang sesuai kemudian ditempatkan di atas water bath atau hiting mantel dan diklem dengan kuat kemudian klongsong yang telah diisi sampel dipasang pada labu alas bulat yang dikuatkan dengan klem dan cairan penyari ditambahkan untuk membasahkan sample yang ada dalam klongsong. sedangkan sebagai patogen sekunder. Vibriosis ini pada umumnya menyerang udang pada stadia mysis sampai awal pasca larva. dan protease. Ekstrak yang diperoleh dikumpulkan dan dipekatkan dengan rotavapor.

Oxytetracycline 2 ppm. Furazalidon 2-4 ppm. Dalam pembicaraan disini. yang dimaksud dengan mikroba terbatas pada jasad renik yang tidak termasuk kelompok parasit. Artinya. badan mempunyai bercak merah-merah (red discoloration ) pada pleopod dan abdominal serta pada malam hari terlihat menyala. Penanganan yang paling umum dilakukan untuk mengatasi vibriosis akibat infeksi Vibrio harveyi adalah dengan menggunakan bahanbahan kimia seperti : Chloramphenicol 1. khususnya mikroba yang merugikan manusia. nafsu makan hilang. II.4 Tinjauan Umum Antimikroba II. dan Prefuran 1. berenang lambat.4. Udang yang terkena vibriosis akan menunjukkan gejala nekrosis. obat tersebut haruslah bersifat sangat toksik untuk . Obat yang digunakan untuk membasmi mikroba.11 Ciri-ciri udang yang terserang vibriosis antara lain kondisi tubuh lemah. Akan tetapi sebagian besar obat-obatan yang digunakan tersebut pada akhirnya tidak efektif dan dapat mengakibatkan kelainan (deformities) pada larva udang serta dapat juga berakibat berkembangnya resistensi bakteri terhadap obat. penyebab infeksi pada manusia. Bagian mulut kehitaman karena kolonisasi bakteri pada esophagus dan mulut.5-2.9 ppm. ditentukan harus memiliki sifat toksisitas selektif setinggi mungkin.0 ppm.1 Antimikroba (23) Antimikroba ialah obat pembasmi mikroba.

ada antimikroba yang bersifat menghambat pertumbuhan mikroba. umpamanya bensil penisilin dan streptomisin. penisilin G bersifat aktif terhadap bakteri gram positif. Kadar minimal yang diperlukan untuk menghambat pertumbuhan mikroba atau membunuhnya. Antimikroba tertentu aktivitasnya dapat meningkat dari bakteriostatik menjadi bakterisid bila kadar antimikrobanya ditingkatkan melebihi KHM. dan juga terhadap Rickettsia dan Chlamydia. II. tetapi relatif tidak toksik untuk hospes. Berdasarkan Sifat toksisitas selektif. dikenal sebagai aktifitas bakteriostatik. Sifat antimikroba dapat berbeda satu dengan lainnya. sedangkan bakteri Gram-negatif pada umumnya tidak peka (resisten) terhadap penisilin G. masing-masing dikenal sebagai kadar hambat minimal (KHM) atau kadar bunuh minimal (KBM). streptomisin memiliki sifat yang sebaliknya. Sifat toksisitas selektif yang absolut belum atau mungkin tidak akan diperoleh. tetrasiklin aktif terhadap beberapa bakteri gram-positif maupun bakteri gram megatif.2 Mekanisme Antimikroba (23) Pemusnahan mikroba dengan antimikroba yang bersifat bakteriostatik masih tergantung dari kesanggupan reaksi daya tahan . dan berspektrum luas umpamanya tetrasiklin dan kloramfenikol. Umpamanya. dikenal sebagai aktifitas bakterisid. Batas antara kedua jenis spektrum ini kadang tidak jelas.4. dan ada yang bersifat membunuh mikroba. Berdasarkan perbedaan ini antimikroba dibagi menjadi dua kelompok.12 mikroba. yaitu berspektrum sempit.

Dengan mekanisme kerja ini diperoleh bakteriostatik. Antimikroba yang termasuk dalam kelompok ini ialah sulfonamid. asam p-aminosalisilat (PAS) dan sulfon. Peranan lamanya kontak antara mikroba dan antimikroba dalam kadar efektif juga sangat menentukan untuk mendapatkan efek. Berdasarkan sifat kompetisi. Apabila sulfonamid dan sulfon menang bersaing dengan PABA untuk diikutsertakan dalam pembentukan asam folat. Mikroba membutuhkan asam folat untuk kelangsungan hidupnaya. Antimikroba yang menghambat metabolisme sel mikroba. . khususnya pada tuberkulostatik. dihidrofolat harus diubah menjadi bentuk aktifnya yaitu asam tetrahidrofolat. antimikroba dibagi dalam lima kelompok: 1. trimetoprim. Enzim dihidrofolat reduktase yang berperan disini dihambat oleh trimetoprim. efek sulfonamid dapat diatasi dengan meningkatkan kadar PABA. kuman patogen harus mensintesis sendiri asam folat dari asam amino benzoat (PABA). Untuk dapatbekerja. Akibatnya. sehingga asam dihidrofolat tidak dapat direduksi menjadi asam tetrahidrofolat yang fungsional. maka terbentuk analog asam folat yang nonfungsional. kehidupan mikroba akan terganggu.13 tubuh hospes. Berdasarkan mekanisme kerjanya. Berbeda dengan mamalia yang mendapatkan asam folat dari luar.

ternyata jumlah fosfornya menurun. Obat yang termasuk dalam kelompok ini adalah polimiksin. dan sikloserin. vankomisin.14 2. Sikloserin menghambat reaksi yang paling dini dalam proses sintesis dinding sel. 3. vankomisin. Antimikroba yang menghambat sintesis dinding sel mikroba. Polimiksin tidak efektif terhadap kuman Gram-positif karena jumlah fosfor bakteri ini rendah. diikuti berturut-turut oleh basitrasin. Antimikroba yang mengganggu keutuhan membran sel mikroba. yang menghambat reaksi terakhir (transpeptidase) dalam rangkaian reaksi tersebut. golongan polien serta berbagai antimikroba kemoterapeutik. Dinding sel bakteri. Obat yang termasuk dalam kelompok ini ialah penisilin. Antibiotik polien bereaksi dengan struktur sterol yang terdapat pada membran sel fungus sehingga mempengaruhi permeabilitas selektif membran . basitrasin. terdiri dari polipeptidoglikan yaitu suatu kompleks polimer mukopeptida (glikopeptida). Kuman Gram-negatif yang menjadi resisten terhadap polimiksin. sefalosporin. dan diakhiri oleh penisilin dan sefalosporin. umpamanya antiseptik surface active agents. Pollimiksin sebagai senyawa amonium-kuatener dapat merusak membran sel setelah bereaksi dengan fosfat pada fosfolipid membran sel mikroba. yang merupakan dasar efek bakterisidal pada kuman yang peka. Oleh karena tekanan osmotik dalam sel kuman lebih tinggi daripada di luar sel maka kerusakan dinding sel kuman akan menyebabkan terjadinya lisis.

15 tersebut. nukleotida dan lain-lain. Antibiotik aminoglikosid lainnya yaitu gentamisin. dapat merusak permeabelitas selektif dari membran sel menyebabkan keluarnya berbagai komponen penting dari dalam sel mikroba yaitu protein. dan kloramfenikol. asam nukleat. dengan bantuan mRNA dan tRNA. Penghambatan sintesis protein terjadi dengan berbagai cara. Bakteri tidak sensitif terhadap antibiotik polien. Untuk berfungsi pada sintesis protein. Sintesis protein berlangsung di ribosom. sel mikroba perlu mensintesis berbagai protein. Antiseptik yang mengubah tegangan permukaan (surface active agents). Untuk kehidupannya. kedua komponen ini akan bersatu pada pangkal rantai mRNA menjadi ribosom 70S. dan neomisin memiliki mekanisme kerja yang sama. kanamisin. Obat yang termasuk kelompok ini ialah golongan aminoglikosid. tetrasiklin. makrolid. linkomisin. . Antimikroba yang menghambat sintesis protein sel mikroba. Akibatnya akan terbentuk protein yang abnormal dan nonfungsional bagi sel mikroba. Streptomisin berikatan dengan komponen ribosom 30S dan menyebabkan kode pada mRNA salah dibaca oleh tRNA pada waktu sintesis protein. yang berdasarkan konstanta sedimentasi dinyatakan sebagai ribosom 30S dan 50S. karena tidak memiliki struktur sterol pada membran selnya. Pada bakteri. ribosom terdiri atas dua sub unit. 4. namun potensinya berbeda.

rantai polipeptida tidak dapat diperpanjang karena lokasi asam amino tidak dapat menerima kompleks tRNA-asam amino yang baru.asam amino pada lokasi asam amino. dan golongan kuinolon. Kloramfenikol berikatan dengan ribosom 50S dan menghambat pengikatan asam amino baru pada rantai polipeptida oleh enzim peptidil transferase. Akibatnya. Tetrasiklin berikatan dengan ribosom 30S dan menghalangi masuknya kompleks tRNA. 5. Yang lainnya walaupun bersifat antimikroba. Golongan kuinolon menghambat enzim DNA girase pada kuman yang fungsinya menata kromosom yang . Antimikroba yang termasuk dalam kelompok ini ialah rifampisin. Linkomisin juga berikatan dengan ribosom 50S dan menghambat sintesis protein.16 Eritromisin berikatan dengan ribosom 50S dan menghambat translokasi kompleks tRNA-peptida dari likasi asam amino ke lokasi peptida. Rifampisin. pada umumnya hanya digunakan sebagai obat antikanker. salah satu derivat rifamisin. Antimikroba yang menghambat sintesis asam nukleat sel mikroba. tetapi beberapa obat dalam kelompok terakhir ini dapat pula digunakan sebagbai antivirus. karena sifat sitotoksisitasnya. berikatan dengan enzim polimerase-RNA (pada sub unit) sehingga menghambat sintesis RNA dan DNA oleh enzim tersebut.

2 Sifat dan Morfologi Dinding sel kaku.17 sangat panjang menjadi bentuk spiral sehingga bisa muat dalam sel kuman yang kecil. dan rongga mulut hewan (termasuk manusia). gram negatif.1 Klasifikasi Divisi Kelas Bangsa Suku Marga Jenis : Protophyta : Schizomycetes : Eubacteriales : Enterobacteriaceae : Vibrio : Vibrio harveyi II. habitat pada lingkungan akuatik.6 Pengujian Secara Mikrobiologi (26. ukuran sel 1-4 µm. serta proses fermentasi karbohidratnya tidak membentuk gas. motil karena flagela kutub tunggal (monotoric flagel). katalase positif. oksidase positif. Walaupun pada umumnya pengujian . bentuk koma atau batang terpilin.5 Uraian Bakteri (24. II. tidak membentuk spora. 27) Dikenal beberapa cara pemeriksaan dan pengujian secara mikrobilogis terhadap kemampuan antimikroba dari bahan-bahan kemoterapeutika seperti antibiotika. organ-organ reproduktif.5.25) II.5. patogenetik bagi binatang (termasuk manusia). II. sel tunggal. saluran pencernaan.

namun ada juga bahan-bahan lain yang diduga mempunyai daya hambat atau Secara umum dapat dilakukan dengan dua cara: 1.7 – 1 cm. Metode difusi dengan kertas saring Cara ini menggunakan kertas saring yang dibuat dengan bentuk dan ukuran tertentu. biasanya dengan garis tengah 0. c. . berdasarkan hambatan yang terjadi. kemudian larutan contoh dimasukkan ke dalamnya. Pada cara ini digunakan plat silinder yang diletakkan pada media. Metode difusi dengan mangkuk pipih Cara ini sama dengan silinder pipih. Metode difusi (penyerapan) Pada metode ini kemampuan antimikroba ditentukan membunuh mikroba. Metode difusi dengan silinder pipih Cara ini didasarkan atas perbadingan antara luas daerah hambatan yang dibentuk larutan contoh terhadap pertumbuhan mikroba dengan daerah hambatan yang dibentuk oleh larutan pembanding. namun perbedaannya disini menggunakan lubang yang dibuat langsung pada medium. Beberapa modifikasi metode ini adalah: a. b.18 dilakukan terhadap kebanyakan antibiotika. yang nanntinya akan dicelupkan ke dalam larutan contoh dan larutan pembanding. Pengamatan dilakukan setelah masa inkubasi dengan melihat daerah hambatan yang terbentuk.

2. dan Turch. dapat menggunakan beberapa jenis antibiotika untuk satu jenis strain paatogen yang ditest. Shenis. pada setiap kertas cakram (paper disc). Metode dilusi (pengenceran) Pada cara ini. yang biasa juga disebut penetapan dengan cara turbidimetri atau tabuung. yang dimodifikasi oleh Bauer. Kirby.19 Cara difusi ini telah direkomendasikan oleh NCCLS dan International Collaborative Study (ICL) and Regulation. menggunakan pengenceran secara seri dari antimikroba dalam media broth dengan konsentrasi yang berbedabeda. Keuntungan dari cara ini adalah prosedurnya sederhana (mudah dan praktis). Hanya saja konsentrasi obat telah ditentukan masing-masing oleh pabriknya. dan kekeruhan yang terjadi diukur dengan alat fotoelektrik kolorimeter serta dapat diketahui konsentrasi terendah yang masih dapat menghambat pertumbuhan bakteri uji tersebut (MIC=Minimum Inhibitory Concentration) Kekurangan dari cara ini adalah prosedurnya lebih panjang dan jenis antibiotik yang digunakan terbatas. Potensi antimikroba dapat diketahui dengan melihat kekeruhan yang terjadi akibat dari pertumbuhan bakteri uji pada konsentrasi tertentu. kemudian ditanami dengan bakteri uji. .

tetapi lebih sering kita mencoba-coba saja karena waktu yang diperlukan sebentar.7. 30) Kromatografi Lapis Tipis adalah salah satu analisis yang digunakan untuk memisahkan senyawa secara cepat berdasarkan prinsip adsorbsi dan partisi. Hal ini yang menyebabkan terjadinya pemisahan. 29. Karena adanya perbedaan daya serap absorben terhadap senyawa. Fase diam yang digunakan dalam KLT merupakan penjerap berukuran kecil dengan diameter partikel antara 10-30 µm. Adsorben berupa serbuk halus yang dilapiskan secara merata dan tipis (0. maka senyawa akan bergerak dengan kecepatan berbeda. Memilih pelarut untk kromatografi lapis tipis dapat dipilih dari pustaka. Sistem yang paling sederhana adalah campuran pelarut organik yang dipakai untuk memisahkan molekul yang mempunyai satu atau dua gugus fungsi. Fase gerak harus mempunyai kemurnian yang sangat tinggi karena KLT merupakan teknik yang sensitif . maka semakin baik kinerja KLT dalam hal esensi dan resolusinya.2 ml) di atas lempeng kaca sebagai fase diam dan pelarut pengembang sebagai fase gerak. Berikut beberapa petunjuk dalam memilih dan mengoptimasi fase gerak: a.7 Metode Pemisahan II.1. Semakin kecil ukuran rata-rata partikel fase diam dan semakin sempit kisaran ukuran fase diam.1 Kromatografi Lapis Tipis (28.20 II.

Tepi bagian bawah . Penambahan pelarut yang bersifar sedikit polar seperti dietil eter ke dalam pelarut non polar seperti metil benzenakan meningkatkan harga Rf secara signifikan.8 untuk memaksimalkan pemisahan. Bila sampel telah ditotolkan maka tahap selanjutnya adalah mengembangkan sampel tersebut dalam suatu bejana kromatografi yang sebelumnya telah dijenuhi dengan uap fase gerak. d. Solur-solut ionik dan solut-solut polar lebih baik digunakna campuran pelarut sebagai fase geraknya. polaritas fase gerak akan menentukan kecepatan migrasi solut yang berarti juga menetukan nilai Rf. Hasil penelitian menunjukkan bahwa penotolan sampel secara otomatis lebih dipilih daripada penotolan secara manual terutama jika sampel yang akan ditotolkan lebih dari 15 µl. Penotolan sampel yang tidak tepat akan menyebabkan bercak menyebar dan puncak ganda. seperti campuran air dan metanol dengan perbandingan tertentu.2-0. c. Untuk pemisahan dengan menggunakan fase diam polar seperti silika gel.21 b. jika sampel yang digunakan terlalu banyak maka akan menurukan resolusi. Daya elusi fase gerak harus diatur sedemikian rupa sehingga harga Rf terletak antara 0. Penambahan sedikit asam etanoat atau amonia masing-masing akan meningkatkan solut-solut yang bersifat basa dan asam. Pemisahan pada kromatografi Lapis tipis yang aptimal akan diperoleh hanya jika menotolkan sampel dengan ukuran bercak sekecil mungkin. Sebagaimana dalam prosedur kromatografi yang lain.

biasanya bejana dilapisi dengan kertas saring.22 lempeng lapis tipis yang telah ditotoli sampel dicelupkan ke dalam fase gerak kurang lebih 0. Cara kimia yang biasa digunakan adalah mereaksikan bercak dengan suatu pereaksi melalui cara penyemprotan sehingga bercak menjadi jelas. Untuk melakukan penjenuhan fase gerak. Bercak pemisahan pada KLT umumnya merupak bercak yang tidak berwarna. dengan demikian bercak akan kelihatan hitam sedangkan latar belakangnya akan kelihatan berflouresensi. Cara fisika yang dapat digunakan untuk menampakkan bercak adalah dengan pencacahan radioaktif dan flouresensi sinar utraviolet. Berikut adalah cara-cara kimiawi untuk mendeteksi bercak: . Tinggi fase gerak dalam bejana harus di bawah lempeng yang telah berisi totolan sampel. Bejana kromatografi harus tertutup rapat dan sedapat mungkin volume fase gerak sedikit mungkin (akan tetapi mampu mengelusi lempeng sampai ketinggian lempeng yang telah ditentukan). misalkan dengan lembar aluminium dan sebagainya. maka dapat dikatakan bahwa fase gerak telah jenuh.5-1 cm. Selama proses elusi. Jika senyawa tidak dapat berflouresensi maka bahan penjerapnya akan diberi indikator yang berflouresensi. Untuk penentuannya dapat dilakukan secara kimia dan fisika. membuat bercak akan terlihat jelas. Flouresensi sinar ultraviolet terutama untuk senyawa yang dapat berflouresensi. bejana kromatografi harus ditutup rapat. Jika fase gerak telah mencapai ujung atas kertas saring.

c. Kadang-kadang lempeng dipanaskan terlebih dahulu untuk mempercepat reaksi pembentukan warna dan intensitas warna bercak. Memaparkan lempeg dengan uap iodium dalam chamber tertutup e. Melakukan scanning pada permukaan lempeng dengan densitometer. d. Menyemprot lempeng dengan asam sulfat pekat atau asam nitrat pekat lalu dipanaskan untuk mengoksidasi solut-solut organik yang akan nampak sebagai bercak hitam smpai kecoklat-coklatan. yaitu reagen umum (yang berlaku untuk hampir semua senyawa organik) dan reagen selektif yang hanya mendeteksi jenis atau golongan senyawa tertentu. b.23 a. Solut-solut yang mampu menyerap sinar akan dicatat sebagai puncak (peak) dalam pencatat (recorder) Reagen yang digunakan sebagai penampak bercak dalam KLT dapat dibedakan menjadi 2. Mengamati lempeng di bawah lampu ultraviolet yang dipasang panjang gelombang emisi 254 atau 366 untuk menampakkan solut sebagai bercak yang gelap atau bercak yang berflouresensi terang pada dasar yang berflouresensi seragam. Menyemprot lempeng KLT dengan reagen kromogenik yang akan bereaksi secara kimia dengan seluruh solut yang mengandung gugus fungsional tertentu sehingga bercak menjadi berwarna. suatu instrumen yangdapat mengukur intensitas radiasi yang direfleksikan dari permukaan lempeng ketika disinari dengan lampu UV atau lampu sinar tampak . .

Struktur kimia dari senyawa yang dipisahkan b. Pelarut sebagai fase gerak dan derajat kemurniannya d. antitumor dan lain-lain dari substansi yang diteliti. Kejenuhan dari uap dalam chamber e. dimana senyawa antimikrobanya dipindahkan dari lapisan KLT ke medium agar yang telah diinokulasikan dengan merata bakteri uji yang . 31) Menurut Betina (1972) bioautografi adalah suatu metode pendeteksian untuk mememukan suatu senyawa antimikroba yang belum teridentifikasi dengan cara melokalisir aktivitas antimikroba tersebut pada suatu kromatogram.24 Nilai Rf (Reterdation factor) merupakan parameter karakteristik kromatografi lapis tipis. Jumlah cuplikan yang digunakan.2 KLT Bioautografi (26. Sifat dari penyerap (adsorben) dan derajat aktifitasnya c. antiprotozoa. Ciri khas dari prosedur bioautografi adalah didasarkan atas teknik difusi agar. Nilai Rf ini didefinisikan sebagai perbandingan antara jarak yang ditempuh senyawa degan jarak yang ditempuh pelarut pengembang. II. Metode ini memanfaatkan pengerjaan Kromatografi Lapis Tipis (KLT). Nilai ini merupakan ukuran kecepatan migrasi suatu senyawa pada kromatogram.7. Jarak yang ditempuh senyawa Rf = Jarak yang ditempuh pelarut pengembang Beberapa faktor yang dapat mempengaruhi nilai Rf aadalah: a. Pada bioautogafi ini didasarkan atas efek biologi berupa antibakteri.

dengan . yaitu dimana mikroorganismenya tumbuh secara langsung di atas lempeng Kromatografi Lapis Tipis (KLT) Prinsip kerja dari metode ini adalah suspensi mikroorganisme uji yang peka dalam medium cair disemprotkan pada permukaan Kromatografi Lapis Tipis (KLT) yang telah dihilangkan sisa-sisa eluen yang menempel pada lempeng kromatogram. Bioautografi Langsung Bioautografi langsung. sebab dapat melokalisir aktivitas meskipun dalam senyawa aktif tersebut terdapat dalam bentuk senyawa kompleks dan dapat pula diisolasi langsung dari komponen yang aktif. Biautografi dapat dipertimbangkan karena paling efisien untuk mendetekski komponen antimikroba. Pengeringan Kromatogram dilakukan secara hati-hati dengan menggunakan hair dryer untuk menghiangkan sisa eluen.25 peka. Setelah itu dilakukan inkubasi pada suhu dan waktu tertentu. Zona hambatan ditampakkan oleh aktivitas senyawa aktif yang terdapat di dalam bahan yang diperiksa terhadap pertumbuhan mikroorganisme uji. Senyawa dalam lempeng kromatogram dideteksi dengan menggunakan sinar UV pada panjang gelombang 254 nm dan 366 nm. yaitu: 1. Setelah diketahui letak dan jumlah senyawa aktif yang terpisah atau terisolasi. Bioautografi dapat dibagi atas tiga kelompok. Dari hasil inkubasi pada suhu dan waktu tertentu akan terlihat zona hambatan di sekeliling spot dari KLT yang telah ditempelkan pada media agar.

2.5 mg/ml) dan selanjutnya diinkubasi kembali selama 4 jam pada suhu 370C. lempeng kromatografi tersebut dipindahkan dari permukaan medium. INTB (5 mg/ml) serta MTT (2. Senyawa antimikroba yang telah berdifusi dari lempeng kromatogram ke dalam media agar akan menghambat pertumbuhan bakteri setelah diinkubasi pada waktu dan suhu yang tepat sampai . Lempeng KLT diinkubasi semalam (1x24 jam) dalam box plastik dan dilapisi dengan kertas. Clipton). Lempeng kromatografi tersebut ditempatkan di atas permukaan Nutrien Agar yang telah diinokulasikan dengan mikroorganisme yang sensitif terhadap senyawa antimikroba yang dianalisis.26 timbulnya noda (spot) pada lempeng KLT. selanjutnya disemprotkan suspense bakteri uji sebanyak 5-6 ml di atas permukaan lempeng KLT tadi secara merata. Bioautografi kontak Bioautografi kontak. Setelah 15-30 menit. Besarnya lempeng KLT yang sering digunakan adalah 20x20 cm dan untuk meratakan suspensi bakteri yang telah disemprotkan dapat menggunakan alat putar atau roller yang dilapisi dengan kertas kromatogram (Whatman. Metode ini didasarkan atas difusi dari senyawa yang telah dipisahkan dengan Kromatogafi Lapis Tipis (KLT) atau kromatografi kertas. kemudian disemprot dengan 5 ml larutan TTC (20 mg/ml)atau INT (5 mg/ml). dimana senyawa antimikroba dipindahkan dari lempeng KLT ke medium agar yang telah diinokulasikan bakteri uji yang peka secara merata dan melakukan kontak langsung.

27 noda yang menghambat pertumbuhan mikroorganisme uji tampak pada permukaan membentuk zona yang jernih. sehingga permukaan tertutup oleh medium agar yang berfungsi sebagai base layer. Zona inhibisi diidentifikasi setelah diinkubasi. Kemudian diinkubasi pada suhu dan waktu yang sesuai. Bioautografi pencelupan Bioautografi pencelupan. dimana medium agar telah diinokulasikan dengan suspensi bakteri dituang di atas lempeng Kromatografi Lapis Tipis (KLT) Pasa prakteknya metode ini dilakukan sebagai berikut yaitu bahwa lempeng kromatografi yang telah dielusi diletakkan dalam cawan petri. dituangkan medium yang telah disuspensikan mikroba uji yang berfungsi sebagai seed layer. Nicolous dkk. Medium agar yang lain didinginkan pada suhu 48 0C dan diinokulasi dengan organism yang diuji. dengan melihat langsung pada lempeng KLT yang tidak . Untuk memperjelas digunakan indicator aktivitas dehidrogenase. Beberapa modifikasi metode KLT Bioautografi telah ditemukan. 3. Sedangkan kline dan Goalb menyemprotkan medium agar secukupnya pada lempeng KLT dan segera dipadatkan.3. dituangkan langsung pada permukaan lempeng yang telah disiapkan. Setelah base layernya memadat.5 trifeniltetrazoliumklorida (TTC) dan ditanami dengan organism yang diuji di atas kromatogram. menuangkan medium agar berisi 2.

menyatakan bioautografi ssecara langsung. Menurut Horman dan Fuchs. Ketersebaran bakteri pada lempeng dan memungkinkan terjadi kontaminasi. Beberapa prosedur yang dikemukakan di atas masing-masing memiliki kelebihan dan kekurangan. . Sedangkan Land dan Lyon. Sedang metode bioautografi pencelupan merupakan metode yang paling tepat sebab tidak dipengaruhi oleh kemungkinan adanya kontaminasi.28 tembus cahaya. tetapi mempunyai kekurangan karena keterbatasan mikroorganisme yang dapat tumbuh secara langsung di atas lapisan kromatografi. Masalah perbedaan difusi dari senyawa-senyawa dari kromatogram ke plat agar dipermudah denga deteksi bioautografi secara langsung. bioautografi kontak merupakan tipe yang paling sering digunakan. untuk aktivitas antibakteri sangat sensitif dan melokalisir senyawa-senyawa yang aktif. tetapi metode ini membutuhkan peralatan mikrobiologi yang cukup rumit. menindihkan lempeng kromatografi pada medium agar pembenihan. Bickel dkk.

lampu spiritus. biakan murni Vibrio harveyi.1 Penyiapan Alat dan Bahan Alat-alat yang digunakan dalam penilitian ini adalah alat soxhletasi. medium nutrien broth (NB). chamber. pipet mikron (Socorex). oven (Memmert).Merck®). timbangan kasar (O’haus). inkubator (Memmert).Merck®). eksikator.9% (Otsuka).2. natrium klorida 0. n-heksan.1 Pengambilan Sampel Sampel penelitian yang digunakan berupa akar dan buah bakau (Rhizopora stylosa Griff. cawan petri. corong pisah. medium Muller Hinton agar (MHA). autoklaf (Memmert). medium triptycasein soy agar (TSA). III. Propinsi Sulawesi Selatan. 29 . labu ukur 10 ml.) diperoleh dari Kabupaten Sinjai. air suling. lempeng KLT silika gel 60 F254 (E.). Bahan-bahan yang digunakan adalah akar dan buah bakau (Rhizophora stylosa Griff. jangka sorong.2 Pengambilan dan Penyiapan Sampel Penelitian III. kapas. n-butanol. alat refluks. timbangan analitik (Sartorius). metanol. dimetil sulfoksida (DMSO) (E. paper disc (Oxoid).BAB III PELAKSANAAN PENELITIAN III. Laminar air flow. Erlenmeyer (Pirex). rotavapor (Buchii). aluminium foil.

2. sampel diangin-anginkan tanpa sinar matahari langsung. diekstraksi dengan cara refluks menggunakan cairan penyari metanol. Ekstrak metanol cair yang diperoleh dipekatkan dengan menggunakan rotavapor kemudian diuapkan hingga diperoleh ekstrak metanol kental.) yang telah dikumpulkan dibersihkan dan dicuci dengan air. Sebanyak 100 gram sampel dimasukkan ke dalam labu alas bulat lalu ditambahkan metanol hingga seluruh bagian sampel terendam (± 500 mL). Ekstrak metanol cair yang diperoleh kemudian dipekatkan dengan menggunakan rotavapor kemudian diuapkan hingga diperoleh ekstrak metanol kental. Ekstraksi dilakukan hingga 25 siklus.2 Pengolahan Sampel Sampel akar dan buah bakau (Rhizophora stylosa Griff. kemudian dibasahkan dengan penyari. selanjutnya sampel siap diekstraksi.) yang telah diolah.30 III. Labu dipanaskan dengan bantuan penangas air hingga penyari mendidih (suhu ± 800C). Sampel buah bakau (Rhizophora stylosa Griff. Labu alas bulat dirangkai dengan alat refluks dan dipanaskan dengan bantuan penangas air hingga penyari mendidih (suhu ± 800C). Labu alas bulat diisi dengan 500 ml penyari.) yang telah diolah diekstraksi dengan cara soxhletasi menggunakan cairan penyari metanol. Ekstraksi dilakukan selama 4 jam. kemudian dirajang. Sebanyak 70 gram sampel dimasukkan dalam pipa klonsong. .3 Ekstraksi Sampel Sampel akar bakau (Rhizophora stylosa Griff. Setelah itu.2. III.

31 III. Kedua lapisan pelarut dipisahkan sehingga diperoleh ekstrak larut n-butanol dan ekstrak larut air. dengan menimbang masing-masing 2 gram ekstrak n-heksan. Ekstrak n-Butanol dan Ekstrak Air Dibuat larutan masing-masing ekstrak dengan konsentrasi 20% b/v. III. lalu didiamkan hingga lapisan air dan n-butanol terpisah.2. Pertama-tama ekstrak metanol dilarutkan dengan air kemudian dimasukkan ke dalam corong pisah dan ditambahkan pelarut n-heksan kemudian digojog.5 Pembuatan Larutan Ekstrak n-Heksan. Ekstrak larut n-heksan diuapkan pelarutnya hingga diperoleh ekstrak kering. Kedua lapisan pelarut dipisahkan sehingga diperoleh ekstrak larut n-heksan dan ekstrak larut air. ekstrak nbutanol dan ekstrak air akar dan buah bakau (Rhizophora stylosa Griff. lalu didiamkan hingga lapisan air dan n-heksan terpisah.2. .).4 Partisi Ekstrak Metanol Kedua ekstrak metanol dipartisi dengan cara ekstraksi cair-cair. Ekstrak air dimasukkan kembali ke corong pisah dan ditambah pelarut n-butanol yang telah dijenuhkan dengan air kemudian digojog. kemudian dilarutkan dengan DMSO dan dicukupkan volumenya hingga 10 ml. Ekstrak larut n-butanol dan ekstrak larut air diuapkan pelarutnya hingga diperoleh ekstrak kering.

4 Penyiapan Bahan Penelitian III. lalu dicukupkan volumenya dengan air suling hingga 1000 ml. Alat-alat plastik (tidak tahan terhadap pemanasan tinggi) dan alat gelas berskala disterilkan dalam autoklaf selama 15 menit pada suhu 121oC tekanan 2 atm.4.0. . III.2 Penyiapan Bakteri III.1 Pembuatan Medium Bahan-bahan yang digunakan untuk pembuatan medium ditimbang dan dimasukkan ke dalam Erlenmeyer. lalu dicek dan ditetapkan pH dengan indikator universal pada pH 7.4. kemudian diinkubasi pada suhu 37oC selama 24 jam.2. Alat-alat logam disterilkan dengan pemanasan langsung pada lampu spiritus hingga memijar.3 Sterilisasi Alat Alat-alat yang digunakan dicuci dengan detergen.32 III.1 Peremajaan Bakteri Vibrio harveyi yang berasal dari biakan murni diambil satu ose lalu diinokulasikan dengan cara digoreskan dengan medium TSA miring. Alat-alat gelas disterilkan dengan menggunakan oven pada suhu 180oC selama 2 jam. III. kemudian dibilas dengan air suling.4. disterilkan pada autoklaf dengan suhu 121 oC tekanan 2 atm selama 15 menit. kemudian dilarutkan dengan air suling hingga 800 ml. Setelah itu.

Ditambahkan 0. Paper disc ditetesi 20 µl larutan masing-masing ekstrak dan larutan DMSO sebagai control negatif lalu diletakkan di atas medium. 1.2 Pembuatan Suspensi Bakteri Vibrio harveyi yang telah diremajakan disuspensikkan dengan larutan NaCl 0.4. kemudian diinkubasi pada suhu 37oC selama 24 jam lalu diukur diameter zona hambatan yang terbentuk.31%. 5%.5 Pengujian Daya Hambat Suspensi Vibrio harveyi sebanyak 0.33 III. 0.2. kemudian dibiarkan memadat. 0.62%.9% steril.15% sebanyak 5 ml ke dalam tabung kesatu sampai tabung kedelapan. 2.25%. . 10%. dan 0. III.2 ml dimasukkan kedalam cawan petri kemudian medium MHA steril pada suhu sekitar 40-45oC dituang secara aseptis ke dalam cawan petri sebanyak 15 ml dan dihomogenkan. III.5%.6 Penentuan Kadar Hambat Minimal (KHM) Medium NB steril dituang secara aseptis ke dalam 8 buah tabung reaksi steril masing-masing sebanyak 5 ml dan ditambahkan ekstrak dengan konsentrasi 20%.2 ml suspensi Vibrio harveyi ke dalam masing-masing tabung. kemudian diinkubasi pada suhu 37oC selama 24 jam dan diamati kekeruhan yang terbentuk untuk penentuan nilai KHM-nya (lampiran 3).

Sampel tersebut ditotolkan pada KLT ukuran 8 x 3 cm. lempeng KLT yang telah dielusi diletakkan di atas permukaan media agar. kemudian medium yang telah ditempati lempeng KLT diinkubasi pada suhu 37oC selama 24 jam. dengan cara lempeng KLT diaktifkan dengan pemanasan dalam oven pada suhu 110oC selama 30 menit sebelum digunakan. kemudian dielusi di dalam chamber yang sudah jenuh dengan cairan pengelusi hingga batas 1 cm dari tepi atas lempeng.2 ml suspensi Vibrio harveyi dituang ke dalam cawan petri steril dan dibiarkan memadat. Lempeng dikeluarkan dari chamber dan diangin-anginkan hingga cairan pengelusi menguap. III. III.7 Pemisahan Senyawa Secara Kromatografi LapisTipis (KLT) Ekstrak sampel yang memiliki zona hambatan kemudian dipisahkan secara KLT.34 III.8 Pengujian KLT Bioautografi Medium MHA sebanyak 15 ml yang telah dicampur dengan 0. Setelah 30 menit lempeng tersebut diangkat dan dipindahkan. Setelah media memadat. Selanjutnya diamati di bawah sinar UV 254 dan 366 dan dihitung nilai Rf nodanya. diamati zona hambatan yang terbentuk.9 Identifikasi Senyawa Kimia Noda yang membentuk zona hambatan pada lempeng KLT disemprot dengan pereaksi semprot untuk menentukan jenis senyawa yang menghambat pertumbuhan Vibrio harveyi .

10 Pengumpulan dan Analisis Data Data dikumpulkan dengan mengukur diameter zona hambatan.35 III. menentukan nilai KHM.11 Pengambilan Kesimpulan Kesimpulan diambil berdasarkan analisis data dan pembahasan hasil. III. Rf noda dan jenis senyawa yang menghambat pertumbuhan Vibrio harveyi. .

yaitu pada sinar UV 254 nm diperoleh 2 noda dengan Rf 0. Hasil pengukuran diameter daerah hambatan ekstrak metanol (ekstrak awal) akar dan buah bakau (Rhizophora stylosa Griff. Hasil pemisahan komponen kimia n-butanol akar dan buah bakau (Rhizophora stylosa Griff. 0.) diperoleh rata-rata yaitu berturut-turut 7.1 Hasil Penelitian 1.49 pada akar dan 0.47 pada buah.) diperoleh ratarata diameter daerah hambatan adalah 10. 15. Hasil pengukuran diameter daerah hambatan ekstrak n-heksan. serta pada sinar UV 366 nm terdapat 4 noda dengan Rf 0. 0. 2.4 mm. 36 . dan 0.9 mm.11.49. Sedangkan buah bakau (Rhizophora stylosa Griff. ekstrak n-butanol dan ekstrak air dari akar bakau (Rhizophora stylosa Griff.5 mm.4 mm (lihat tabel 2).31% (lihat tabel 3 dan gambar 3). Hasil penentuan nilai KHM ekstrak n-butanol akar dan buah bakau (Rhizophora stylosa Griff.47.4 mm.80 dan 0. 15.) diperoleh nilai KHM untuk keduanya adalah 0. dan 8.5 mm pada ekstrak metanol buah (lihat tabel 1).72. 0.) dengan menggunakan eluen n- butanol:asam asetat:air (4:1:5) diperoleh jumlah noda yang sama. dan 0.94 pada akar dan 0.98 pada buah (lihat gambar 4 dan 5).BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN IV. 4.70. 3. dan 0.7 mm.13. 0. dan 8.) 6.84.4 mm pada ekstrak metanol akar dan 10.

12%). Hasil identifikasi menunjukkan senyawa tersebut termasuk senyawa fenolik. Hasil pengujian KLT bioautografi diperoleh 1 noda yang menghambat yaitu noda dengan Rf 0.13 pada akar dan 0. Akar bakau berupa akar tunjang yaitu akar yang keluar dari batang dan tumbuh menuju tanah. 90 gram ekstrak metanol buah (rendamen 12.18%) dan 50. akar tersebut merupakan bentuk adaptasi bakau untuk dapat tumbuh pada lingkungan yang berlumpur dengan kadar oksigen rendah.).2 Pembahasaan Sampel yang digunakan pada penelitian ini adalah bagian akar dan buah bakau (Rhizophora stylosa Griff.5 mm pada buah.) dapat menghambat pertumbuhan Vibrio harveyi.11 pada buah (lihat gambar 6). ini ditandai dengan terbentuknya daerah bening di sekitar paper disc. IV. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak metanol akar dan buah bakau (Rhizophora stylosa Griff. hasil ekstraksi 600 gram akar dan 420 gram buah bakau (Rhizophora stylosa Griff.08 gram ekstrak metanol akar (rendamen 12.) dengan cairan penyari metanol diperoleh 73. Terbentuknya . Buah bakau merupakan buah hipokotil yang tumbuh sejak buah masih berada di pohonnya.37 5. 6.4 mm pada akar dan 10. Akar diekstraksi dengan metode refluks dan buah dengan metode sohxletasi. Nilai rata-rata diameter daya hambat diantara keduanya relatif sama yaitu 10.

4 mm pada buah.4 mm pada buah. 13. dan 6.58 gram ekstrak n-butanol.55 gram ekstrak n-heksan. 7.4 mm pada akar dan 6.7 mm pada akar dan 8.12 gram ekstrak n-butanol.68 gram ekstrak air pada partisi ekstrak metanol akar.) diperoleh 5. Hasil uji daya hambat menunjukkan bahwa ekstrak n-butanol akar dan buah bakau memiliki rata-rata diameter daerah hambat yang paling besar yaitu 15. dan ekstrak nheksan memiliki rata-rata daerah hambatan paling kecil yaitu 7. Hasil tersebut menunjukkan bahwa senyawa yang paling aktif menghambat pertumbuhan Vibrio harveyi bersifat polar. membran sitoplasma. kemudian ekstrak air yaitu 8.9 mm pada buah.03 gram ekstrak nheksan.71 gram ekstrak air pada partisi ekstrak metanol buah.5 mm pada akar dan 15. dan 10.38 daerah hambatan di sekitar paper disc menunjukkan bahwa di dalam ekstrak akar dan buah bakau terdapat senyawa yang bersifat sebagai antibakteri terhadap Vibrio harveyi. serta 4. Menurut Subandrio (1995) bahan aktif yang bersifat sebagai antibakteri dapat mengganggu proses fisiologis dan menghalangi terbentuknya komponen sel bakteri seperti sintesis dinding sel. Hasil tersebut menunjukkan bahwa senyawa pada bakau (Rhizophora stylosa Griff. Partisi dilakukan terhadap ekstrak metanol akar dan buah bakau (Rhizophora stylosa Griff. Hasil partisi 30 gram ekstrak metanol akar dan buah bakau (Rhizophora stylosa Griff.) banyak larut pada penyari yang bersifat polar.) dilakukan untuk membandingkan daya hambat ekstrak berdasarkan kelarutannya pada cairan penyari dengan tingkat kepolaran yang berbeda. .

dan 0. Senyawa fenolik ini berinteraksi dengan sel bakteri melalui proses . 0. 0.11 pada buah. akan lebih mudah menembus lapisan fosfolipid membran sel sehingga lebih cepat mengganggu fungsi fisiologis bakteri dan pada akhirnya sel akan mengalami kematian. Kneblock (1989) menyatakan bahan aktif yang memiliki daya larut yang lebih tinggi pada pelarut polar. 0.39 sintesis protein dan sintesis asam nukleat. 0.94 pada akar dan 0. Hasil pemisahan komponen kimia dan KLT bioautografi ekstrak nbutanol akar dan buah bakau (Rhizophora stylosa Griff.) dengan menggunakan eluen n-butanol:asam asetat:air (4:1:5) masing-masing diperoleh 5 noda dengan nilai Rf 0. Noda yang menghambat pertumbuhan Vibrio harveyi adalah noda dengan Rf 0. Hasil penyemprotan noda yang menghambat tersebut dengan pereaksi FeCl3 1% memberikan warna hijau kehitaman yang menandakan bahwa senyawa yang besifat sebagai antibakteri tersebut adalah senyawa fenolik.31%.47.98 pada buah. Senyawa tersebut diduga merupakan jenis senyawa yang sama karena memiliki nilai Rf yang hampir sama.84.72. 0. 0.70.80 dan 0. Penentuan nilai Konsentrasi Hambat Minimal (KHM) dilakukan untuk mengetahui konsentrasi terkecil ekstrak n-butanol akar dan buah bakau yang masih dapat menghambat pertumbuhan Vibrio harveyi dengan menggunakan metode dilusi pada medium Nutrien Broth (NB).11.13 pada akar dan 0.13. Hasil uji KHM menunjukkan bahwa nilai KHM kedua ekstrak tersebut adalah 0.49.

40 adsorbsi yang melibatkan ikatan hidrogen. . diikuti penetrasi fenol ke dalam sel dan menyebabkan denaturasi protein. Pada kadar rendah terbentuk kompleks protein-fenol dengan ikatan yang lemah dan segera mengalami peruraian. Dinding sel bakteri terdiri dari polipeptidoglikan yaitu suatu kompleks polimer mukopeptida (glikopeptida) yaitu kompleks polimer dari asam amino yang diikat secara bersilang oleh rantai polipeptida.

4. 40 . 3. 2. V. maka dapat disimpulkan bahwa : 1. Komponen kimia pada akar dan buah bakau yang bersifat sebagai antibakteri merupakan senyawa fenolik. Ekstrak n-butanol akar dan buah bakau memiliki daya hambat terhadap Vibrio harveyi yang lebih kuat dibanding ekstrak n-heksan dan ekstrak air.31%.BAB V KESIMPULAN DAN SARAN V.2 Saran Perlu dilakukan isolasi senyawa kimia yang bersifat sebagai antibakteri pada akar dan buah bakau. Kadar Hambat Minimal (KHM) ekstrak n-butanol akar dan buah bakau adalah 0.1 KESIMPULAN Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan. Ekstrak akar dan buah bakau dapat menghambat pertumbuhan Vibrio harveyi dengan kekuatan yang relatif sama.

Hasil Uji daya hambat ekstrak bakau (Rhizophora stylosa Griff.). B=ekstrak metanol akar. Foto hasil penelitian A B C Gambar 1.).52 Lampiran 6. A=control negatif. Hasil uji daya hambat ekstrak metanol (ekstrak awal) akar dan buah bakau (Rhizophora stylosa Griff. C=ekstrak metanol buah Akar Buah A D D A B C C B Gambar 2. A= control negatif B= ekstrak n-heksan C= ekstrak n-butanol D=ekstrak air .

25% 0.62% 0.25% 0. Hasil KLT Ekstrak n-butanol Akar bakau (Rhizophora stylosa Griff).) terhadap Vibrio harveyi 5 4 3 2 2 1 UV 254 nm UV 366 nm H2SO4 10% FeCl3 1% Gambar 4.53 20% 10% 5% 2.5% 1.15% Akar Buah Gambar 3.15% 20% 10% 5% 2. Hasil penentuan nilai MIC ekstrak n-butanol akar dan buah bakau (Rhizophora stylosa Griff.31% 0.5% 1. eluen n-butanol:asam asetat:air (4:1:5) .62% 0.31% 0.

) .54 5 4 3 2 2 1 UV 254 nm UV 366 nm H2SO4 10% FeCl3 1% Gambar 5. Hasil KLT bioautografi ekstrak n-butanol Akar dan buah bakau (Rhizophora stylosa Griff. Hasil KLT Ekstrak n-butanol buah bakau (Rhizophora stylosa Griff) eluen n-butanol:asam asetat:air (4:1:5) Akar Buah Gambar 6.

) .) Gambar 8.55 Gambar 7. Tanaman bakau (Rhizophora stylosa Griff.) Gambar 9. Akar bakau (Rhizophora stylosa Griff. Akar bakau (Rhizophora stylosa Griff.