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Fosfatasa Antrtico Nmero de catlogo Tamao Concentracin M0289S 1.000 unidades 5.000 unidades / ml M0289L 5.000 unidades 5.

000 unidades / ml Descripcin Fosfatasa Antrtico cataliza la eliminacin de fosfato 5 'de ADN y ARN. Dado que los fragmentos de fosfatasa tratados carecen de la 'fosforilo termini requerido por ligasas, que no puede auto-ligarse 5 (1). Esta propiedad se puede utilizar para disminuir el vector de fondo en las estrategias de clonacin. Destacamientos Elimina fosfatos 5 'de ADN, ARN, rNTPs y dNTPs Previene la recirculacin de vectores de clonacin Inactivado por calor en 5 minutos a 70 C Permite la ligadura sin purificar el ADN vector Aislado de una fuente recombinante Fuente del producto Precio $ 60.00 $ 240.00

Una cepa de E. coli que porta el gen TAB5 AP, clonado originalmente en el plsmido PNI (2), reclonado en el plsmido pEGTAB7-4.1 (3).

Reactivos suministrados

Los siguientes reactivos se suministran con este producto: Reaccin fosfatasa Antrtico: 10X Ventajas y caractersticas Aplicaciones Extraccin de fosfatos 5 'de ADN, ARN, rNTPs y dNTPs Preparacin de las plantillas para el etiquetado final 5 ' Prevencin de la recircularizacin de vectores de clonacin La eliminacin de dNTPs y pirofosfato de reacciones de PCR La desfosforilacin de protenas Propiedades y Uso

Definicin de Unidad Una unidad se define como la cantidad de enzima que desfosforilara 1 g de ADN vector pUC19 cortado con HindIII (5 'que sobresale extremos), HincII (embota extremos) o PstI (5' extremos empotrada) en 30 minutos a 37 C. La desfosforilacin se define como la inhibicin> 95% de la recirculacin en una reaccin de auto-ligacin y se mide por la transformacin en E. coli.

Condiciones de reaccin Buffer de reaccin 1X Antrtico Fosfatasa Incubar a 37 C

1X Antrtica fosfatasa Reaction Buffer: 50 mM Bis-Tris-propano-HCl 1 mM de MgCl2 0,1 mM ZnCl2 pH 6 @ 25 C Temperatura de almacenamiento -20 C Condiciones de almacenamiento MM de Tris-HCl 10 1 mM de MgCl2 DTT 1 mM 50% de glicerol 0,01 mM ZnCl2 pH 7.4 @ 25 C La inactivacin de calor 70 C durante 5 min Los pesos moleculares Aparente: 35 kDa Terica: 69 kDa Unidad de Condiciones El ADN del vector se desfosforila en tampn de endonucleasa de restriccin suplementado con Antrtico Fosfatasa Buffer de reaccin. La ligacin se realiz con 50 ng de vector usando el kit de ligamiento de rpida NEB (NEB # M2200).

Control de calidad Ensayos de Control de Calidad Las siguientes pruebas de control de calidad se llevan a cabo en cada lote nuevo y renan las caractersticas adecuadas para el producto. Individuales datos del lote se pueden encontrar en el resumen del producto Hoja / Datacard o manual que se puede encontrar en la seccin Documentos de Apoyo de esta pgina.

Endonucleasa Actividad (mellar): El producto se prueba en una reaccin que contiene un sustrato de ADN superenrollado. Despus de la incubacin durante 4 horas el porcentaje convertido a la forma mellada se determina por electroforesis en gel de agarosa. Actividad exonucleasa (Radiactividad de prensa): El producto se prueba en una reaccin que contiene una mezcla de radiomarcado nica y el ADN de doble cadena. Despus de la incubacin durante 4 horas la actividad exonucleasa se determina por el % de liberacin de nucletidos radiactivos.

Prueba funcional (desfosforilacin): La fosfatasa alcalina se prueba en una reaccin con ADN linealizado. Despus de la incubacin, el ADN se lig y se transform en clulas competentes. El grado de desfosforilacin se determin por comparacin con el ADN linealizado de que no se trata con la fosfatasa alcalina. Pureza de protenas (SDS-PAGE): La pureza fsica se evalua mediante la comparacin de las bandas de protenas contaminantes en una muestra de concentrado a la protena de la banda de inters en una muestra de dilucin conocida. La pureza se determin por SDSPAGE. RNasa Actividad (2 horas de digestin): El producto se prueba en una reaccin que contiene un sustrato de ARN. Despus de la incubacin durante 2 horas no hay degradacin detectable del sustrato de ARN tal como se determina por electroforesis en gel.

Notas
Aadiendo un dcimo del volumen de la Antrtida Fosfatasa Buffer de reaccin proporcionar la cantidad de Zn2 + que la enzima requiere para la actividad.