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AISLAMIENTO BACTERIANO

INTRODUCCIN Las bacterias se aslan con el propsito de llegar a su identificacin de acuerdo con su desarrollo. Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe de reunir una serie de condiciones que son: temperatura, condicin adecuada de humedad as como un grado correcto de pH, consistencia adecuada del medio, presencia o ausencia de oxgeno y luz ambiental. Temperatura: Depende del microorganismo a crecer por ejemplo, los patgenos humanos; crecen alrededor de 37C. Condicin adecuada de humedad: Un nivel mnimo de humedad tanto en el medio como en la atmosfera es imprescindible para un buen desarrollo de las clulas vegetales microbianas. pH: Grado de acides o alcalinidad es importante para algunos microorganismos aunque la mayora de ellas se desarrollan mejor en medios con un pH neutros. Consistencia adecuada del medio: Partiendo de un medio lquido se puede modificar su consistencia aadindole productos adecuados para llegar a estado semislido o slido. Presencia o ausencia de oxigeno: Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmosfera con oxgeno normal con acepcin de los microorganismos anaerobios que se desarrollan sin oxgeno. Luz ambiental: La mayora de los microorganismos crecen mejor en la oscuridad cumpliendo con todos los factores se puede tener xito en el cultivo de un microorganismo. Los medios atendiendo a su utilidad prctica se agrupan en: -Medio rico no selectivo: Pueden crecer casi todas las bacterias (Agar Sangre) -Medio selectivo: Contiene algunas sustancias que evitan el crecimiento de ciertos microorganismos (Manitol sal, Salmonella, Chiguella, etc.) -Medio diferencial: Permite evidenciar caractersticas metablicas. -Medio enriquecido: Tiene como base un medio no selectivo agregndole componentes (Agar chocolate)

MATERIALES Muestra de suelo Agares Nutritivo B de King TSA Mechero Asa de vidrio Tubos eppendorfs Pipetas

METODOLOGA Se tomaron 10 gramos de muestra de suelo y se agregaron a un frasco que contena 90 ml de agua, luego se agreg 1 gota de Tween 20, se procedi a agitar durante 15 minutos, a partir de dicha solucin se procedi a hacer diluciones seriadas 1:10.

Despues de tener las diluciones se procedio a sembrar las diluciones marcadas como -3, -4 y -5 en diferentes agares. -3: Agar Nutritivo -4: A. Nutritivo, B de King y TSA -5: A. Nutritivo, B de King y TSA Para la siembra se utilizo una asa de vidrio, ademas, para la respectiva siembra en el agar TSA los tubos fueron sometidos a choque termico (80C por 15 minutos)para asegurar la obtencin de microorganismos productores de esporas.

Las cajas de petri fueron guardadas a temperatura ambiente durante 24 horas.

RESULTADOS Se observo que hubo crecimiento de microorganismos transcurridas las 24 horas, pero no se puede llegar auna conclusin de que tipo de microorganismos eran ya que la falta de tiempo no permitio ver la evolucion de las cajas.

PRUEBAS BIOQUMICAS: METABOLISMO BACTERIANO

INTRODUCCIN El metabolismo microbiano es el conjunto de procesos por los cuales un microorganismo obtiene la energa y los nutrientes (carbono, por ejemplo) que necesita para vivir y reproducirse. Los microorganismos utilizan numerosos tipos de estrategias metablicas distintas y las especies pueden a menudo distinguirse en base a estas estrategias. Las caractersticas metablicas especficas de un microorganismo constituyen el principal criterio para determinar su papel ecolgico, su responsabilidad en los ciclos biogeoqumicos y su utilidad en los procesos industriales. Los distintos tipos de metabolismo microbiano se pueden clasificar segn tres criterios distintos: 1. La forma la que el organismo obtiene el carbono para la construccin de la masa celular:

Auttrofo. El carbono se obtiene del dixido de carbono (CO2). Hetertrofo. El carbono se obtiene de compuestos orgnicos (glucosa, por ejemplo).

Mixtrofo. El carbono se obtiene tanto de compuestos orgnicos como fijando el dixido de carbono.

2. La forma en la que el organismo obtiene los equivalentes reductores para la conservacin de la energa o en las reacciones biosintticas:

Littrofo. Los equivalentes reductores se obtienen de compuestos inorgnicos. Organtrofo. Los equivalentes reductores se obtienen de compuestos orgnicos.

3. La forma en la que el organismo obtiene la energa para vivir y crecer:


Quimitrofo. La energa se obtiene de compuestos qumicos externos. Fottrofo. La energa se obtiene de la luz.

MATERIALES Agares Kligler Citrato de Simmons Nitrato Lisina SIM Mechero Asa de inoculacin

METODOLOGA Se realiza inoculacin de la siguiente manera: Se esteriliza la aguja de inoculacin, luego se toma inoculo de la muestra a analizar (muestra problema: casa 2). Agar Kligler- introducir el asa de inoculacin hasta la mitad del agar, luego hacer una estra simple sobre la superficie.

Agar citrato Simmons- sin esterilizar el asa, realice una estra simple sobre la superficie

Agar Nitrato- sin esterilizar el asa, realice una estra simple sobre la superficie.

Agar Lisina Hierro- sin esterilizar la aguja, realice una estra simple sobre la superficie.

Agar SIM- sin esterilizar el asa, introdzcala hasta la mitad del agar.

Resultados

Agar Kligler- no se produjo cambio de PH, por lo cual el medio se mantuvo igual, pero hubo crecimiento de microorganismos.

Agar citrato Simmons- no se produjo cambio de PH, por lo cual el medio se mantuvo igual, no hubo crecimiento de microorganismos.

Agar Nitrato- no se produjo cambio de PH, por lo cual el medio se mantuvo igual, pero hubo crecimiento de microorganismos.

Agar Lisina Hierro- se produjo un leve cambio de PH, por lo cual el medio se torn azuloso en los extremos de la superficie donde hubo crecimiento de microorganismos.

Agar SIM- no se produjo cambio de PH, por lo cual el medio se mantuvo igual, pero hubo crecimiento de microorganismos formando una pelcula sobre la superficie del agar.

COLORACIN: TINCIN DE GRAM INTRODUCCIN Es un tipo de tincin diferencial empleado en Bacteriologa para la visualizacin de bacterias, sobre todo en muestras clnicas. Se utiliza tanto para poder referirse a la morfologa celular bacteriana como para poder realizar una primera aproximacin a la diferenciacin bacteriana, considerndose Bacteria Gram positiva a las bacterias que se

visualizan de color morado, y Bacteria Gram negativa a las que se visualizan de color rosa o rojo o grosella. Los fundamentos de la tcnica se basan en las diferencias entre las paredes celulares de las bacterias Gram positivas y Gram negativas La pared celular de las bacterias Gram positivas posee una gruesa capa de peptidoglicano, adems de dos clases de cidos teicoicos: Anclado en la cara interna de la pared celular y unido a la membrana plasmtica, se encuentra el cido lipoteicoico, y ms en la superficie, el cido teicoico que est anclado solamente en el peptidoglicano (tambin conocido como murena) Por el contrario, la capa de peptidoglucano de las Gram negativas es delgada, y se encuentra unida a una segunda membrana plasmtica exterior (de composicin distinta a la interna) por medio de lipoprotenas. Tiene una capa delgada de peptidoglicano unida a una membrana exterior por lipoprotenas. La membrana exterior est hecha de protena, fosfolpido y lipopolisacrido. Por lo tanto, ambos tipos de bacterias se tien diferencialmente debido a estas diferencias constitutivas de su pared. La clave es el peptidoglicano, ya que es el material que confiere su rigidez a la pared celular bacteriana, y las Gram positivas lo poseen en mucha mayor proporcin que las Gram negativas. La diferencia que se observa en la resistencia a la decoloracin, se debe a que la membrana externa de las Gram negativas es soluble en solventes orgnicos, como por ejemplo la mezcla de alcohol/acetona. La capa de peptidoglucano que posee es demasiado delgada como para poder retener el complejo de cristal violeta/yodo que se form previamente, y por lo tanto este complejo se escapa, perdindose la coloracin azul-violcea. Pero por el contrario, las Gram positivas, al poseer una pared celular ms resistente y con mayor proporcin de peptidoglicanos, no son susceptibles a la accin del solvente orgnico, sino que este acta deshidratando los poros cerrndolos, lo que impide que pueda escaparse el complejo cristal violeta/yodo, y manteniendo la coloracin azul-violcea.

MATERIALES Cultivos bacterianos Asa Microscopio Colorantes para la tincin Portaobjetos Aceite de inmersin

METODOLOGA Hacer el extendido de las bacterias Dejar secar a temperatura ambiente y fijarlas utilizando un mechero. Agregar cristal violeta y esperar 1 minuto. Todas las clulas gram positivas se tien de color azul-prpura. Enjuagar con agua. Agregar lugol y esperar 1 minuto. Enjuagar con agua. Agregar alcohol acetona y esperar 8-10 segundos. Enjuagar con agua. Tincin de contraste agregando safranina y esperar 30 segundos. Este tinte dejar de color rosado-rojizo las bacterias Gram negativas.

Observar al microscopio ptico a 100x con aceite de inmersin.

RESULTADOS En la muestra haba una mezcla de bacterias. Por esta razn en nuestras observaciones pudimos diferenciar: Cocos gram+ Cocos gramBacilos gram+ Bacilos gram-