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GUÍA TÉCNICA GTC

COLOMBIANA 125


2005-10-26




GUÍA DE REFERENCIAS DE MÉTODOS
HORIZONTALES DE ANÁLISIS MICROBIOLÓGICOS
PARA BEBIDAS, ALIMENTOS Y ALIMENTOS PARA
ANIMALES









E: REFERENCES GUIDE FOR HORIZONTAL
MICROBIOLOGYCAL METHODS FOR BEVERAGE, FOOD
AND ANIMAL FEEDING STUFFS


CORRESPONDENCIA:


DESCRIPTORES: microbiología de alimentos – métodos
horizontales; microbiología de
alimentos – alimentos para animales;
microbiología de alimentos – bebidas.












I.C.S.: 07.100.30

Editada por el Instituto Colombiano de Normas Técnicas y Certificación (ICONTEC)
Apartado 14237 Bogotá, D.C. - Tel. 6078888 - Fax 2221435


Prohibida su reproducción Editada 2005-11-08









PRÓLOGO



El Instituto Colombiano de Normas Técnicas y Certificación, ICONTEC, es el organismo
nacional de normalización, según el Decreto 2269 de 1993.

ICONTEC es una entidad de carácter privado, sin ánimo de lucro, cuya Misión es fundamental
para brindar soporte y desarrollo al productor y protección al consumidor. Colabora con el
sector gubernamental y apoya al sector privado del país, para lograr ventajas competitivas en
los mercados interno y externo.

La representación de todos los sectores involucrados en el proceso de Normalización Técnica
está garantizada por los Comités Técnicos y el período de Consulta Pública, este último
caracterizado por la participación del público en general.

La GTC 125 fue ratificada por el Consejo Directivo de 2005-10-26

Esta guía está sujeta a ser actualizada permanentemente con el objeto de que responda en
todo momento a las necesidades y exigencias actuales.

A continuación se relacionan las empresas que colaboraron en el estudio de esta guía a través
de su participación en el Comité Técnico 25 Microbiología.

3M COLOMBIA -DIVISIÓN DE MICROBIOLOGÍA-
ACEITES Y GRASAS VEGETALES S.A.
ALGARRA S.A.
ALPINA S.A.
AQUALAB LTDA.
ASESORÍAS MICROBIOLÓGICAS
ASINAL LTDA
ASOCIACIÓN COLOMBIANA DE MICROBIOLOGÍA
AVESCO Y KLIK S.A.
BIANÁLISIS
BIOCONTROL LTDA.
BIOIMÁGEN
BIOMERIUX S.A.
BIOQUILAB LTDA.
BIOTRENDS LABORATORIOS
CALIDAD MICROBIOLÓGICA
CARULLA VIVERO S.A.
CERCAL LTDA.
COLEGIO MAYOR DE CUNDINAMARCA
COMPAÑÍA NACIONAL DE CHOCOLATES S.A.
CONGELAGRO
CREPES & WAFLES S.A.
EMPRESA DE ACUEDUCTO Y
ALCANTARILLADO DE BOGOTÁ –E.S.P.–
ENZIPAN DE COLOMBIA LTDA.
FÁBRICA DE ESPECIAS Y CONDIMENTOS
EL REY S.A.
FARMACOOP
FRIGORÍFICO GUADALUPE S.A.
FRIGORÍFICOS COLOMBIANOS S.A.
GASEOSAS COLOMBIANAS S.A.

HOSPITAL DE SAN CRISTÓBAL
HOSPITAL SAN JOSÉ
INSTITUTO NACIONAL DE SALUD
IVONNE BERNIER LABORATORIO LTDA.
-LABFARVE- LABORATORIO DE
FARMACOLOGÍA VEGETAL
LABORATORIO A.B.B.A.
LABORATORIO DE CONTROL DE
CALIDAD DEL EJÉRCITO

LABORATORIO LABCONTROL
LABORATORIOS GRAM
LARKIN
LESNIAK E.U.
LEVAPÁN S.A.
MERCADEO DE ALIMENTOS DE
COLOMBIA S.A.
MERCK S.A.
MICROBIÓLOGOS ASOCIADOS
NULAB LTDA.
PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA








QUÍMICOS Y REACTIVOS LTDA. -QUIMIREL-
REPRESENTACIONES BIOTECNOLÓGICAS
LTDA.
ROCHE DIAGNOSTICS







SECRETARÍA DISTRITAL DE SALUD
SUIZO S.A.
SURTIQUÍMICOS LTDA.
UNIVERSIDAD DE LOS ANDES

Además de las anteriores, en Consulta Pública el Proyecto se puso a consideración de las
siguientes empresas:

ASESORÍAS MICROBIOLÓGICAS
BAVARIA S.A.
CASA LUKER
CENICAÑA
CONGELAGRO
CONSULTORÍAS MICROBIOLÓGICAS
COOPERATIVA DE GANADEROS DE
CARTAGENA LTDA.
EJÉRCITO
FRIGORÍFICO SUIZO S.A.
INGENIO PICHICHI S.A.
INGENIO RIOPAILA
INSTITUTO COLOMBIANO
AGROPECUARIO -ICA-
-INVIMA- INSTITUTO NACIONAL DE
VIGILANCIA MEDICAMENTOS Y
ALIMENTOS
LABORATORIO MICROBIOLÓGICO SIS
LLOREDA GRASAS S.A.
MERCK S.A.
MINISTERIO DE PROTECCIÓN SOCIAL.
NESTLÉ DE COLOMBIA S.A.
PASIFLORA COLOMBIANA S.A.
PRODUCTORA DE CONCENTRADOS Y
JUGOS DE FRUTA
PURIFICACIÓN Y ANÁLISIS DE FLUIDOS
LTDA.
QUALA S.A.
QUIOS LTDA.
-RICA RONDO- INDUSTRIA NACIONAL
DE ALIMENTOS S.A.
TECNIMICRO LABORATORIO DE
ANÁLISIS
UNIDAD ADMINISTRATIVA DE SALUD
PÚBLICA
UNIVERSIDAD CATÓLICA INGECAL
VIKINGOS


ICONTEC cuenta con un Centro de Información que pone a disposición de los interesados
normas internacionales, regionales y nacionales y otros documentos relacionados.

DIRECCIÓN DE NORMALIZACIÓN

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GUÍA DE REFERENCIAS DE MÉTODOS HORIZONTALES DE ANÁLISIS
MICROBIOLÓGICOS PARA BEBIDAS, ALIMENTOS Y ALIMENTOS PARA ANIMALES









1. OBJETO

1.1 Esta guía brinda información sobre los métodos horizontales propuestos por diferentes
entidades oficiales para el análisis de los alimentos. Son criterios mínimos que todos los
laboratorios deberían considerar al establecer sus técnicas de análisis.

1.2 Esta guía fue diseñada para que la utilicen quienes son responsables de realizar los
análisis microbiológicos de alimentos.

1.3 Esta guía presenta las características de los medios de cultivo, tiempos, temperatura y
forma de expresión de los resultados para cada método horizontal propuesto.

1.4 Esta guía no pretende limitar solo el uso de los métodos horizontales, sino por el
contrario presentar también las alternativas de las metodologías propuestas por entidades
oficialmente reconocidas.


2. RESUMEN DE LA GUÍA

Esta guía describe las directrices más importantes a tener en cuenta en la aplicación de un
método horizontal, como son los medios de cultivo, los rangos de temperatura y los tiempos
límites de incubación según el microorganismo a detectar.

Aunque esta guía está prevista para aplicarla a todos los alimentos de consumo humano
incluidos los productos lácteos, y alimentos de consumo animal, pueden existir ciertos
alimentos a los cuales los métodos de ensayos descritos no aplican debido a la naturaleza de
la muestra.


3. IMPORTANCIA Y USO

La escogencia de un método horizontal para la evaluación de un alimento determinando su
inocuidad o rechazo para consumo humano o animal y los resultados de los análisis, se usan
para control de los procesos o evaluación de la conformidad con la reglamentación que
establece los límites de aceptabilidad para un producto.

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2
Los laboratorios que llevan a cabo muestreo de alimentos y generan datos estadísticos, y las
personas que tienen la responsabilidad de seleccionar un laboratorio para realizar estudios de
la calidad de los alimentos, necesitan utilizar criterios, directrices y recomendaciones de
métodos oficiales para la evaluación de sus productos.

La demostración y documentación por parte de un laboratorio de que hubo una selección
apropiada del método para el análisis del alimento, incrementa la credibilidad de los datos
producidos y promueve su aceptación.

Por lo tanto, la guía proporciona recomendaciones para la selección de los diferentes métodos
horizontales utilizados tanto a nivel internacional, como a nivel nacional para cada uno de los
microorganismos que se pueden presentar en una muestra para analizar.



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Tabla 1. Métodos horizontales para hongos y levaduras

Incubación
Entidad
oficial
Principio de la
técnica
Método Alimentos Medio cultivo
Temperatura Tiempo
Expresión de resultados
Filtración por
membrana
hidrofóbica
995.21 Todos los alimentos Agar YM - 11 25
o
C ± 1
o
C 50 h ± 2 h
Número más probable
(NMP)
AOAC 2000
Capítulo 17
Recuento en
placa
997.02 Todos los alimentos
Membrana hidrofóbicas
Yeast and Mold Count
Plate
20
o
C a 25
o
C 5 d Contar cajas hasta 150 Colonias
Recuento en
placa
1 OGY
Recuento en
placa
2 DRBC
Recuento en
placa
3 SMA + Clortetraciclina
STANDARD
METHODS
Dairy
Products
1992 16th
Capítulo 8.10
Recuento en
placa
4
Todos los alimentos
PDA
25
o
C ± 1
o
C 5 d Se cuenta entre 15 y 150 colonias
ICMSF 1984
Recuento en
placa
1 Todos los alimentos
Oxitetraciclina
Gentamicina Extracto de
levadura Glucosa (YGC)
20
o
C a 24
o
C 3 d a 5 d
Se cuenta entre 30 y 300 colonias.
Calcular mohos y levaduras por
aparte
INVIMA 1998
Recuento en
placa
1 Todos los alimentos OGY 22
o
C ± 2
o
C 5 d a 7 d Se cuenta entre 20 y 100 colonias
Continúa . . .



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4
Tabla 1. (Continuación)

Incubación Entidad
oficial
Principio de la
técnica
Método Alimentos Medio cultivo
Temperatura Tiempo
Expresión de resultados
DRBC (M183)
DG18 ( M184)
PCA (M124)+
Cloranfenicol
Agar maltosa (M185)
Agar extracto Malta
(M182)
Recuento en
placa/dilución
Capítulo 18 Todos los alimentos
Agar Papa Dextrosa
(M127)
25 °C ± 1 °C 5 d
DRBC (M183)
Recuento en
placa directo
Capítulo 18
Habas, nueces,
condimentos, café,
coco, etc. Alimentos
que deben ser
abiertos con pinzas
DG18 ( M184)
25°C ± 1 °C 5 d
Contar cajas entre 10 - 150 colonias
FDA - BAM
2001
Microscopia
Fluorescencia
Cuantificación
levaduras
viables y no
viables
Capítulo 18
Bebidas y muestras
liquidas
Azul de Anilina NaOH




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Tabla 1. (Continuación)


Incubación
Entidad
oficial
Principio de la
técnica
Método Alimentos Medio cultivo
Temperatura Tiempo
Expresión de resultados
20.52 Todos los alimentos
Agar Plate
count+Cloramfenicol
22 °C a 25
o
C 5 d
Contar entre 15 - 150 colonias.
Reportar como UFC por g o ml
20.53
Cereales, arroz,
nueces y condimentos
Agar DG18 22 °C a 25
o
C 5 d
Contar entre 15 - 150 colonias.
Reportar como UFC por g o ml
20.541 Mohos acidofílicos Agar ADYS 25
o
C 5 d a 7 d
20.542
Mohos
Aflatosxigénicos
Agar AFPA 32
o
C 42 h a 48 h
20.543 Especies de Fusarium Agar CZID 25
o
C 7 d
20.545 Especies De Mucor Agar MYCK 25
o
C 5 d
20.546
Especies De
Penicilium
Agar DRYES 20
o
C 7 d a 8 d
20.547
Levaduras resistentes
a preservantes
Agar Agar MAA o TGY 25 °C a 30
o
C 3 d a 5 d
20.548 Hongos Xerofílicos Agar DG18 o MY50G 25
o
C ± 1 °C 7 d
APHA
Capítulo 20
Recuento
20.549
Levaduras dominantes
en alimentos
Agar MEA o TGY 25
o
C ± 1 °C 3 d
Contar entre 15 - 150 colonias.
Reportar como UFC por g o ml

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Tabla 1. (Final)



Incubación Entidad
oficial
Principio de la
técnica
Método Alimentos Medio cultivo
Temperatura Tiempo
Expresión de resultados
NTC 4132
ICONTEC
Recuento en
placa
ISO 7954
Todos los alimentos
Agar extracto
levadura, dextrosa,
cloranfenicol
25
o
C ± 1 °C 3 d a 5 d
Contar entre 15 - 150 colonias.
Reportar como UFC por g o ml
PDA
PLATE COUNT AACC
Recuento en
placa
AACC 4250 Todos los alimentos
AGAR MALTA
22 °C a 25
o
C 3 d a 5 d
Contar entre 15 - 150 colonias.
Reportar como UFC por g o ml


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Tabla 2. Métodos horizontales para listeria monocytogenes

Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas
Entidad
oficial
Principio
de la
técnica
Método Alimentos
Medio (s)
de cultivo
Tiempo y
Tempera-
tura °C
Medio (s)
de cultivo
Tiempo y
Tempera-
tura °C
Medio (s) de
cultivo
Tiempo y
Temperatura °C
Medio (s) de
cultivo
Tiempo y
Tempera-
tura °C
Expresión de
resultados
OXA, Iluminación de Henry
PALCAM,
35
o
C/24 h a 48 h
Coloración Gram,
Catalasa, Oxidasa
Prueba
CAMP Agar
sangre
35
o
C/48 h
LPM+esculin/
Fe
3+,

TSBYE*(A
partir de este
se inoculan
las
bioquímicas
35
o
C/24 h
LPM y pasar
a:
30
o
C/24 h a 48 h
Reducción de
Nitrato (Caldo
Nitrato M108)
35
o
C/5 d
TSAYE 30
o
C/24 h a 48 h SIM o MTM Amb/7 d
FDA-BAM
2001
Detección Capítulo 10
Todos los
alimentos
Caldo EB 30
o
C 4 h
EB+acrifla-
vina, ácido
nalidixico y
ciclohexam
ida
30
o
C 44 h


Caldo
carbohidratos
+: Dextrosa,
Esculina,
Maltosa,
Ramnosa,
Manitol,
Xilosa
35
o
C/7 d
Presencia
ó ausencia
Continúa...
* Hacer pruebas bioquímicas de acuerdo a cada entidad oficial

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Tabla 2. (Continuación)

Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas
Entidad
oficial
Principio
de la
técnica
Método Alimentos
Medio (s)
de cultivo
Tiempo y
Temperatura °C
Medio (s)
de cultivo
Tiempo y
Temperatuta °C
Medio (s) de
cultivo
Tiempo y
Temperatura
°C
Medio (s) de
cultivo
Tiempo y
Temperatura °C
Expresión
de
resultados
Kits para Elisa
FDA-
BAM
2001
Detección
Capítulo
10
Todos los
alimentos
Caldo EB 30 °C 4h
EB+acrifla-
vina, ácido
nalidixico y
ciclohexami
da
30
o
C 44 h
Serología
Agar Oxford y
Agar Palcam.
Pasar a:
35
o
C ± 2
o
C/
24 h ± 48 h
Método Iluminación Henry
Agar Triptosa
ácido
nalidixico.
Pasar a:
Coloración Gram, Catalasa,
Oxidasa
Productos
Lácteos
Caldo EB
30
o
C ± 2
o
C/24 h -
48 h
Agar
movilidad-
nitrato
modificado
Hatano
Schuch
Temperatura
ambiente / 2 d -
5 d
Hemólisis 35
o
C ± 2

C/24 h
CAMP
Xilosa,
Ramnosa,
Manitol
35
o
C ± 2
o
C/24 h
- 48 h
INVIMA Detección No. 20
Productos
cárnicos
Caldo LEB
+ acriflavina
1 %
30
o
C ± 2
o
C/18 h
-24 h
Caldo
LEB2+
acriflavina
0,2 %
30
o
C ± 2
o
C/18 h -
24 h
Agar tripticasa
soya extracto
Levadura
TSA-YE

35
o
C ± 2
o
C/
18 h a 24 h

Serología



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Tabla 2. (Continuación)

Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas
Entidad
oficial
Principio
de la
técnica
Método Alimentos
Medio (s)
de cultivo
Tiempo y
Temperatura °C
Medio (s)
de cultivo
Tiempo y
Temperatura °C
Medio (s) de
cultivo
Tiempo y
Temperatura
°C
Medio (s) de
cultivo
Tiempo y
Temperatura °C
Expresión
de
resultados
Agar sangre 48 h 37 ºC
Caldo TSYE:
Utilización de
carbohidratos
7 d 37 ºC
Agar para
motilidad
2 d -7 d 25 ºC
Enriqueci-
miento y
Aislamiento
993.12
Lácteos,
derivados
lácteos,
cárnicos,
derivados
cárnicos.
Medio de
enriqueci-
miento
selectivo
completo
48 h 30º C
Medio Oxford
medio TSYE
48 h 37 ºC
Medio de test
CAMP
18 h -24 h 37 ºC
AOAC
Inmunopre
cipitación
997.03
Productos
lácteos,
carnes
rojas,
cerdo,
aves y
derivados,
productos
marinos,
frutas,
vegetales,
pastas,
chocolate,
huevos y
harina de
hueso


caldo MFB
+Lic. O
Caldo
Frazer
28 h ±2 h 30 ºC BLEB 24±2h 30ºC INMUNOPRECIPITACIÓN
Presencia ó
ausencia

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Tabla 2. (Continuación)

Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas
Entidad
oficial
Principio
de la
técnica
Método Alimentos
Medio (s)
de cultivo
Tiempo y
Temperatura °C
Medio (s)
de cultivo
Tiempo y
Temperatura °C
Medio (s) de
cultivo
Tiempo y
Temperatura
°C
Medio (s) de
cultivo
Tiempo y
Temperatura °C
Expresión de
resultados
Coloración Gram, Catalasa
Motilidad
25 ºC ± 2 ºC 2 d -
5 d
Agar sangre
de cordero
35 ºC ± 2 ºC 24 h
± 2 h
Fermenta-
ción de
carbohidra-
tos: ramnosa,
xilosa,
manitol
35 ºC ± 2 ºC
24 h - 48 h hasta
5 d
NTC 4666
ISO
11290-1
Detección
y aisla-
miento
todos los
alimentos
Caldo
Fraser
media
concentra-
ción. Caldo
Leb 1
Caldo
Palcam
24 h 30 ºC ± 2 ºC
Caldo
Fraser +
agentes
selectivos.
Caldo Leb
2 Caldo
Palcam
24 h -48 h a 30 ºC
± 2 ºC
Agar Oxford
Agar Palcam y
pasar a
TSYEA
24 h - 48 h a
35 ºC ± 2 ºC
para
TSYEA:18 h -
24 h a 35 ºC ±
2 ºC
Serología, CAMP
Presencia ó
ausencia
Agar Oxford y
Palcam ó
24 h a 48 h 35
ºC
Coloración Gram, Catalasa,
Oxidasa
Agar LPM, y
pasar a :
24 h a 48 h 30
ºC
36.511
leche y
productos
lácteos
Caldo M52 48 h 30 ºC
TSA-YE
24 h - 48 h 30
ºC
Fermentación del manitol,
ramnosa y xilosa
Caldo UVM
y pasar a :
22 h ± 2 h 30 ºC
± 2 ºC
26 h a 48 h 35
ºC
APHA
Capítulo
36
36512
Aisla-
miento e
Identifica-
ción
Productos
cárnicos

Caldo FB 26 h -48 h 35 ºC
Agar MOX
26 h a 48 h
35 ºC ± 2 ºC
Hemólisis en agar sangre de
caballo
Presencia ó
ausencia



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Tabla 2. (Final)

Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas
Entidad
oficial
Principio
de la
técnica
Método Alimentos
Medio (s)
de cultivo
Tiempo y
Temperatu-ra °C
Medio (s)
de cultivo
Tiempo y
Temperatura °C
Medio (s) de
cultivo
Tiempo y
Temperatura
°C
Medio (s) de
cultivo
Tiempo y
Temperatura °C
Expresión de
resultados
agar LMP
24 h a 48 h 30
ºC
Coloración Gram, Catalasa,
Oxidasa
Agar oxford
pasar a :
24 h a 48 h 35
ºC
Agar sangre
de cordero
48 h 35 ºC
TSA-YE 24 h 30º C
Urea
Red de
nitratos
TSI
5 d 35 ºC
SIM
7 d temperatura
ambiente
MR-VP 48 h 35 ºC
Fermenta-
ción
carbohidratos
TSBYE +
Dextrosa,
esculina,
maltosa,
ramnosa,
manitol,
xilosa
7 d 35 ºC
Standard
Methods
for Dairy
products
Detección 5,4A
todos los
alimentos
Caldo LEB 2 días 30 ºC

CAMP






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Tabla 3. (Métodos horizontales para Salmonella spp.

Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas
Entidad
oficial
Principio
de la
técnica
Método Alimentos
Medio (s)
de cultivo
Tiempo y
Temperatura
°C
Medio (s)
de cultivo
Tiempo y
Temperatura
°C
Medio (s)
de
cultivo
Tiempo y
Tempera-
tura °C
Medio (s)
de cultivo
Tiempo y
Temperatura °C
Expresión
de
resultados
Huevos, leche,
ponqués, bizcochos,
pan, formulas
infantiles, caseína,
Harina de soya,
fideos, macarrones,
spaghetti, queso,
ensaladas
preparadas(con
jamón, huevo, pollo,
atún, pavo), frutas y
vegetales
deshidratados,
carnes, crustáceos,
pescados, coco,
ancas de rana,
carcasas de conejo
Caldo
Lactosa
35
o
C/ 24 h ±
2 h
PARA ALIMENTOS CON
ALTA CARGA
MICROBIANA
CONSULTAR NORMAS
NTC 4491-1
NTC 4491-2
NTC 4491-3
NTC 4491-4
TSI, LIA
Urea
conven-
cional
35
o
C/24 h ± 2 h
Cáscara De Huevo,
Huevo Liquido, Huevo
cocido, colores,
sabores
Caldo
TS+Sulfato
Ferroso
35
o
C/ 24 h ±
2 h
Rappaport
Vassiliadis
(RV) y
42
o
C ± 0,2
o
C/
24 h ± 2 h
UREA
Rápida
37
o
C ± 0,5
o
C/2 h
Baño de María
Leche en polvo
Solución
Verde
Brillante
35
o
C/ 24 h ±
2 h
Caldo
Tetrationato
(TT)
43
o
C ± 0,2
o
C/
24 h ± 2 h
Antisuero
flagelar
polivalente
48
o
C a 50
o
C/1 h
Baño de María
FDA -
BAM
Detección Capítulo 5
Levadura seca,
especias
Caldo TS
35
o
C/ 24 h ±
2 h


Agar BS,
XLD y HE
35
o
C/ 24 h
± 2 h
Antisuero
somático
polivalente
1 min
Presencia ó
ausencia
Continúa...

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Tabla 3. (Continuación)

Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas
Entidad
oficial
Principio
de la
técnica
Método Alimentos
Medio (s)
de
cultivo
Tiempo y
Temperatura
°C
Medio (s)
de cultivo
Tiempo y
Temperatura
°C
Medio (s)
de
cultivo
Tiempo y
Tempera-
tura °C
Medio (s)
de cultivo
Tiempo y
Temperatura °C
Expresión
de
resultados
Dulces
Reconsti-
tuted
nonfat dry
milk
35
o
C/ 24 h ±
2 h
PARA ALIMENTOS CON
ALTA CARGA
MICROBIANA
CONSULTAR NORMAS
NTC 4491-1
NTC 4491-2
NTC 4491-3
NTC 4491-4

Caldo Rojo
fenol
dulcitol o
Caldo Base
Púrpura
con 0,5 %
dulcitol
35
o
C/48 h ± 2 h
Rappaport
Vassiliadis
(RV) y
42
o
C ± 0,2
o
C/
24 h ± 2 h
Para cultivos mixtos
Caldo
Triptona o
Triptofano
35
o
C/24 h ± 2 h
XLD Caldo KCN 35
o
C/ 48 h ± 2 h
Agar Mac
Conkey
Caldo
Malonato
35
o
C/48 h ± 2 h
Caldo
Tetrationato
(TT)

35
o
C ± 2,0
o
C/
24 h ± 2 h
Agar HE
35 °C/ 24 h
± 2 h
Test Indol
Caldo
Lactosa
Rojo Fenol,
o Lactosa
Púrpura
35
o
C/48 h ± 2 h
Caldo
Sacarosa
Rojo Fenol,
o Sacarosa
Púrpura
35
o
C/48 h ± 2 h
FDA -
BAM
Detección Capítulo 5
Jugo Naranja
(Pasteurizado y No
Pasteurizado
Caldo
Pre-
enriqueci
miento
Universal
35
o
C/ 24 h ±
2 h

Caldo MR-
VP
35
o
C/48 h ± 2 h
Presencia ó
ausencia


GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125

14
Tabla 3. (Continuación)

Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas
Entidad
oficial
Principio de
la técnica
Método Alimentos
Medio (s)
de cultivo
Tiempo y
Tempera-
tura °C
Medio (s) de
cultivo
Tiempo y
Temperatura
°C
Medio (s) de
cultivo
Tiempo y
Temperatura
°C
Medio (s) de
cultivo
Tiempo y
Temperatura °C
Expresión
de
resultados

Agar Citrato
Simmons
35
o
C/96 h ± 2 h
FDA -
BAM
Detección Capítulo 18

Todos los
alimentos

Agua De
Peptona
Tamponada

35
o
C ± 2
o
C/
18 h -24 h Caldo Selenito
Cistina y
35
o
C ± 0,2
o
C/
18 h - 24 h
Coloración
Gram
LIA
Agar UREA
Lactosa
Glucosa
Sacarosa
Lisina
Movilidad
Caldo Red
Nitrato TSI
Citrato
Simmons
Agar
fenilalanina
Caldo
Triptofano
Caldo MR-
VP
INVIMA Detección
Leche en
Polvo
Agua
destilada +
5 ml de
solución
Verde
Brillante
0,1%
35
o
C/18 h -
24 h
Caldo
Tetrationato
(TT)+0,2 ml
Solución de
Yodo + 0,1 ml
Solución
acuosa de
verde brillante
0,1 %
43
o
C ± 0,2
o
C/
18 h - 24 h
Agar BS,
Agar XLD y
Agar Verde
brillante
lactosa
sacarosa con
novobiocina
35
o
C ± 2
o
C/
24 h ± 2 h
Oxidasa
35
o
C ± 2
o
C/24 h
- 48h



GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125

15
Tabla 3. (Continuación)

Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas
Entidad
oficial
Principio
de la
técnica
Método Alimentos
Medio (s) de
cultivo
Tiempo y
Temperatura
°C
Medio (s) de
cultivo
Tiempo y
Tempera-
tura °C
Medio (s)
de cultivo
Tiempo y
Temperatura
°C
Medio (s) de
cultivo
Tiempo y
Temperatura °C
Expre-
sión de
resulta-
dos
Leche Cruda,
leche
pasteurizada.
Quesos, yogurt
Caldo
Lactosa
35
o
C/24 h ± 2 h
Caldo
Selenito
Cistina y
TSI, LIA
35
o
C/25 h ± 2 h
y 48 h ± 2 h
Leche en polvo,
caseína, postres
congelados,
mantequilla
Solución
Verde
Brillante
35
o
C/24 h ± 2 h
Caldo
Tetrationato
(TT)
35
o
C/24 h ±
2 h
Agar BS,
Agar XLD
y Agar HE
35
o
C/24 h ± 2 h
UREA
Convencional
35
o
C/24 h ± 2 h
UREA Rápida
37
o
C ± 0,5
o
C/2
h Baño de María
Antisuero
flagelar
polivalente
48
o
C - 50
o
C/ 1
h Baño de
María
Antisuero
somático
polivalente
1 min
Agar Lisina
Decarboxilasa
35
o
C/48 h ± 2 h
Caldo Rojo
fenol dulcitol
o Caldo Base
Púrpura con
0,5% dulcitol
35
o
C/48 h ± 2 h
Caldo
Triptona o
Triptofano
35
o
C/24 h ± 2 h
Caldo KCN 35
o
C/48 h ± 2 h
Standard
Methods
Detección
Capítulo 5
No. 5,4 B
Todos los
alimentos
Caldo
Lactosa
35
o
C/24 h ± 2 h
Caldo
Tetrationato
(TT)
35
o
C/24 h ±
2 h
Agar BS,
Agar XLD
y Agar HE
35
o
C/24 h ± 2 h
Caldo
Malonato
35
o
C/48 h ± 2 h
Presenci
a ó
ausencia

GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125

16
Tabla 3. (Continuación)

Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas
Entidad
oficial
Principio
de la
técnica
Método Alimentos
Medio (s)
de cultivo
Tiempo y
Temperatura °C
Medio (s) de
cultivo
Tiempo y
Tempera-
tura °C
Medio (s)
de cultivo
Tiempo y
Temperatura
°C
Medio (s) de
cultivo
Tiempo y
Temperatura °C
Expresión
de
resultados
Test Indol
Caldo Lactosa
Rojo Fenol, o
Lactosa
Púrpura

35
o
C/48 h ± 2 h
Caldo
Sacarosa Rojo
Fenol, o
Sacarosa
Púrpura
35
o
C/48 h ± 2 h
Caldo MR-VP 35
o
C/48 h ± 2 h
Agar Citrato
Simmons
35
o
C/96 h ± 2 h
Standard
Methods
Detección
Capítulo 5
No. 5,4 B
Todos los
alimentos
Caldo
Lactosa
35
o
C/24 h ± 2 h
Caldo
Tetrationato
(TT)
35
o
C/24 h ±
2 h
Agar BS,
Agar XLD y
Agar HE
35
o
C/24 h ± 2
h
Sistemas multitest Rápidos



GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125

17
Tabla 3. (Continuación)

Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas
Entidad
oficial
Principio
de la
técnica
Método Alimentos
Medio (s) de
cultivo
Tiempo y
Tempera-
tura °C
Medio (s) de
cultivo
Tiempo y
Temperatura °C
Medio (s)
de cultivo
Tiempo y
Tempera-
tura °C
Medio (s) de
cultivo
Tiempo y
Tempera-
tura °C
Expresión
de
resultados

Agar Lisina
Hierro
35
o
C a 37
ºC durante
24 h
Presencia ó
ausencia
de
Salmonella
en g de
producto.
Levadura
desecada
Agua destilada
leche en polvo
descremada y
entera
Agua destilada
+ 2 ml de
solución verde
brillante al
1 %
caramelos y
dulces
Leche en polvo
reconstituida
con verde
brillante
ICMSF Detección. 1
Subproductos
grasos de
animales, coco
Caldo lactosa
+ 1 % de
Tergitol o agua
de peptona
tamponada
con 0,22 % de
Tergitol

Caldo
tetrationato
verde
brillante
43 ºC ± 0,05 ºC
24 h.
Agar sulfito
bismuto
35 ºC a 37 ºC
durante 48 h
Agar triple
azúcar hierro


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18
Tabla 3. (Continuación)


Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas
Entidad
oficial
Principio
de la
técnica
Método Alimentos
Medio (s)
de
cultivo
Tiempo y
Temperatura
°C
Medio (s)
de cultivo
Tiempo y
Temperatura
°C
Medio (s)
de cultivo
Tiempo y
Tempera-
tura °C
Medio (s) de
cultivo
Tiempo y
Temperatura °C
Expresión
de
resultados
PARA ALIMENTOS CON
ALTA CARGA
MICROBIANA
CONSULTAR NORMAS
NTC 4491-1
NTC 4491-2
NTC 4491-3
NTC 4491-4
Agar BS
Agar XLD
Agar HE
35
o
C/24 h ±
2 h
TSI
Urea
convencional
35
o
C/24 h ± 2 h
Rappaport
Vassiliadis
(RV)
42 ºC ± 0,2
o
C/
24 h ± 2 h
LIA 35
o
C/48 h ± 2 h
Caldo
TBG
43 ºC ± 0,2
o
C/
24 h ± 2 h
UREA Rápida
37 ºC ± 0,5
o
C/
2 h Baño de
María
Antisuero
flagelar
polivalente
48 ºC a 50
o
C/
1 h Baño de
María
Antisuero
somático
polivalente
1 min
APHA
Método de
Referencia
37.5
Huevos, leche,
ponqués,
bizcochos, pan,
formulas
infantiles, caseína,
Harina de soya,
fideos,
macarrones,
spaghetti, queso,
ensaladas
preparadas(con
jamón, huevo,
pollo, atún, pavo),
frutas y vegetales
deshidratados,
carnes,
crustáceos,
pescados, coco,
ancas de rana,
carcasas de
conejo
Caldo
Lactosa
35
o
C/24 h ± 2 h


Caldo Rojo
fenol dulcitol
o Caldo Base
Púrpura
bromocresol
con 0,5 %
dulcitol
35
o
C/48 h ± 2 h
Presencia/
ausencia

GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125

19
Tabla 3. (Continuación)

Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas
Entidad
oficial
Principio
de la
técnica
Método Alimentos
Medio (s) de
cultivo
Tiempo y
Temperatura °C
Medio (s)
de cultivo
Tiempo y
Temperatura
°C
Medio (s)
de cultivo
Tiempo y
Tempera-
tura °C
Medio (s) de
cultivo
Tiempo y
Temperatura °C
Expresión
de
resultados
Caldo Triptona
o Triptofano
35
o
C/24 h ± 2 h
Caldo KCN 35
o
C/48 h ± 2 h
Caldo
Malonato
35
o
C/48 h ± 2 h

PARA ALIMENTOS
CON ALTA CARGA
MICROBIANA
CONSULTAR NORMAS
NTC 4491-1
NTC 4491-2
NTC 4491-3
NTC 4491-4
Test Indol 35 ºC 24 h
Cáscara De
Huevo, Huevo
Liquido, Huevo
cocido, colores,
sabores,
Levadura seca,
Caldo TS 35
o
C 24 h ± 2 h Caldo SC
35 °C/24 h ±
2 h
Caldo Lactosa
púrpura
bromocresol o
rojo fenol
35
o
C/24 h a
48 h
Leche en polvo
Solución
Verde
Brillante
35
o
C/24 h ± 2 h
Caldo
TBG
35 °C/24 h ±
2 h
Caldo
Sacarosa Rojo
Fenol, o
Sacarosa
Púrpura
35
o
C/48 h ± 2 h
especias de
cebolla y ajo
Caldo
lactosa
35
o
C/24 h ± 2 h Caldo MR-VP 35
o
C/8 h ± 2 h
Método de
Referencia
37.5
Dulces
Caldo
lactosa
35
o
C/24 h ± 2 h


Agar Citrato
Simmons
35
o
C/96 h ± 2 h
Agar Lisina
y Agar HE
ó
43
o
C/24 h
APHA
Filtración
Por
membrana
Hidrofóbica
37.72
leche en polvo,
huevo
pulverizado,
queso
pulverizado,
pimienta,
chocolate y pollo
crudo
Caldo
lactosa,
Caldo TS,
Solución
Verde
Brillante
35
o
C/18 h a 24h
Caldo
TBG
35
o
C/6 h a
8 h
Agar EF-18 35
o
C/24 h





GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125

20
Tabla 3. (Continuación)

Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas
Entidad
oficial
Principio de la
técnica
Método Alimentos
Medio (s) de
cultivo
Tiempo y
Temperatura °C
Medio (s)
de cultivo
Tiempo y
Temperatura °C
Medio (s) de
cultivo
Tiempo y
Tempera-
tura °C
Medio (s) de
cultivo
Tiempo y
Tempera-
tura °C
Expresión
de
resultados
Todos los
alimentos
Caldo lactosa,
Caldo TS,
Solución
Verde Brillante
35
o
C/24 h ± 2 h Caldo TBG
35
o
C/6 h a
8 h
Inmunodifusion 37.73
Carnes crudas
Caldo lactosa,
Caldo TS,
Solución
Verde Brillante
35
o
C/24 h ± 2 h Caldo TGB
42
o
C ± 0,5
o
C/
6 h a 8 h
1-2 TEST
system
35
o
C/14 h
Inmunoensayo
Enzimático
37.74
Todos los
alimentos
Medio no
selectivo
35
o
C/24 h ± 2 h
Caldo SC o
TGB
35
o
C/18 h a
24 h

Caldo -M

35
o
C/6 h
APHA
Test Rápidos
para la
detección de
Salmonella
37.8
Todos los
alimentos y
muestras
ambientales

Métodos multitest aprobados
por la AOAC


GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125

21
Tabla 3. (Continuación)
Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas
Entidad
oficial
Principio de
la técnica
Método Alimentos Medio (s)
de
cultivo
Tiempo y
Temperatura
°C
Medio (s)
de cultivo
Tiempo y
Tempera-
tura °C
Medio (s)
de
cultivo
Tiempo y
Tempera-
tura °C
Medio (s)
de
cultivo
Tiempo y
Temperatura °C
Expresión
de
resultados
Huevos deshidradatos,
Caldo
lactosa
24 h ± 2 h a
35 ºC
Agar TSI
y LIA
24 h ± 2 h a 35 ºC
Leche entera en polvo
Agua +
1%
solución
de
coloración
verde
brillante
24 h ± 2 h a
35 ºC
Caldo
selenito
cistina + 1-
10 ml caldo
tetrationato
Test de
ureasa
Baño de maría 2 h
a 35
o
C ± 0,5 ºC
Levadura activa
desecada
Caldo
tripticasa
de soya
24 h ± 2 h a
35 ºC
Caldo
selenito
cistina
Caldo
lactosa
rojo de
fenol
48 h ± 2 h a 35 ºC
Ajo y cebolla en polvo
Caldo
tripticasa
de soya
24 h ± 2 h a
35 ºC
Caldo
sucrosa
rojo de
fenol
48 h ± 2 h a 35 ºC
Chocolates de leche y
caseína
Caldo
lactosa+
%
solución
de
coloración
verde
brillante
24 h ± 2 h a
35 ºC
Medio
MR/VP
48 h± 2 h a 35 ºC
Detección. 967.25
Leche en polvo
instantánea libre de
grasa
Solución
verde
brillante
24 h ± 2 h a
35 ºC
Caldo
selenito
cistina + 1-
10 ml caldo
tetrationato
24 h ± 2 h
a 35 ºC
XLD,
Agar
Sulfito
Bismuto,
Agar para
entéricos
Hektoen
24 h ± 2 h a
35 ºC
Agar
citrato de
Simmons
96 h ± 2 h a 35 ºC
AOAC
Kit de
identificación
bioquímica
978,24 (a) Todos los alimentos
Métodos multitest aprobados
por la AOAC

Presencia ó
ausencia

GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125

22
Tabla 3. (Continuación)

Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas
Entidad
oficial
Principio de
la técnica
Método Alimentos
Medio (s)
de cultivo
Tiempo y
Temperatura
°C
Medio (s)
de cultivo
Tiempo y
Tempera-
tura °C
Medio (s)
de
cultivo
Tiempo y
Tempera-
tura °C
Medio (s)
de
cultivo
Tiempo y
Temperatura °C
Expresión
de
resultados

Test
Serológicos
Aglutinación Todos los alimentos

Método de
búsqueda por
anticuerpos
fluorescentes
975.54 Todos los alimentos
ISO-GRID 991.12 Todos los alimentos
AOAC
Método de
búsqueda
monoclonal
calorimétrico
EIA
986.35 Todos los alimentos
Positivo ó
negativo





GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125

23
Tabla 3. (Continuación)

Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas
Entidad
oficial
Principio de la
técnica
Método Alimentos
Medio (s)
de cultivo
Tiempo y
Temperatura
°C
Medio (s)
de cultivo
Tiempo y
Tempera-
tura °C
Medio (s)
de
cultivo
Tiempo y
Tempera-
tura °C
Medio (s)
de
cultivo
Tiempo y
Temperatura °C
Expresión
de
resultados
Método de
búsqueda
monoclonal
calorimétrico
EIA
987.11
Todo tipo de alimentos
excepto materias
primas de alimentos o
alimentos con alta
carga microbiana

Inmunoensayo
enzimático
policlonal para
salmonellas
mótiles y no
mótiles
992.11 Todos los alimentos
Ensayo de
inmunofluores-
cencia unido a
una enzima
996.08 Todos los alimentos
AOAC
Inmunodifusión
para
salmonellas
mótiles
989.13 Todos los alimentos
Positivo ó
negativo












GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125

24
Tabla 3. (Continuación)

Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas
Entidad
oficial
Principio de la
técnica
Método Alimentos
Medio (s) de
cultivo
Tiempo y
Tempera-
tura °C
Medio (s) de
cultivo
Tiempo y
Tempera-
tura °C
Medio (s)
de cultivo
Tiempo y
Tempera-
tura °C
Medio (s)
de cultivo
Tiempo y
Temperatura
°C
Expresión
de
resultados
MSRV 993.07 Cocoa y chocolate
MSRV 995.07
Productos lácteos
deshidratados

Método de
conductancia
991.38 Todos los alimentos
Pollo, ostras, setas,
camarones, alimento
para aves y alimentos
altamente
contaminados
Caldo
lactosa
24 h ± 2 h a
35 ºC
Detección. 995.2
Ancas de rana
Caldo
lactosa
24 h ± 2 h a
35 ºC
medio
Rappaport-
Vassiliadis
+1-10 ml
caldo
tetrationato
Baño de
maría
24 h ± 2 h
a 42
o
C ±
0,2 ºC
Agar
Sulfito
Bismuto,
agar para
entéricos
Hektoen y
XLD
24 h ± 2 h a
35 ºC
TSI y LIA
24 h ± 2 h a
35 ºC
Inmunoensayo
enzimático
policlonal con
caldo RV y caldo
tetrationato
998.09 Todos los alimentos
AOAC
INMUNOPRECIPI
TACIÓN para
salmonelas
mótiles y no
mótiles
999.09 Todos los alimentos
Positivo ó
negativo


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25
Tabla 3. (Final)

Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas
Entidad
oficial
Principio
de la
técnica
Método Alimentos
Medio (s)
de cultivo
Tiempo y
Tempera-
tura °C
Medio (s) de
cultivo
Tiempo y
Temperatura °C
Medio (s)
de cultivo
Tiempo y
Tempera-
tura °C
Medio (s) de
cultivo
Tiempo y
Tempera-
tura °C
Expresión
de
resultados
medio
Rappaport-
Vassiliadis/
medio verde
malaquita o
Tetrationate
16 h a 18 h a 42,5 ºC
± 0,5 ºC
TSI, LIA y
Urea
NTC Detección 4574
Alimentos de
consumo
humano y para
animales
Agua
peptonada
tamponada,
Caldo
lactosado
18 h - 24 h a
35 ºC ± 2 ºC
Medio
Selenito/cistina
16-18 H a 35 ºC ± 2
ºC
Agar
Rambach,
agar
Hektoen,
agar
McConkey,
agar sulfito
bismuto,
agar
salmonella-
shiguella
(SS), agar
verde
brillante
A. XLD
24 h a 48 h
a 35 ºC ± 2
ºC
Serología:
sueros poli-
monovalentes
24 h - 48 h a
35 ºC ± 2 ºC
Presencia
ó ausencia
de
Salmonella
en 25 g de
producto.
AACC 4225A
Todos los
alimentos
Caldo
nutritivo
24 h ± 2 h a
35 ºC
Selenito cistina
tetrationato
24 h ± 2 h a 42 ºC
Agar
Hektoen,
XLD, SB,
McConkey
24 h 35ºC
Agar TSI, LIA
y serológico
en BHI
24 h 35 ºC


GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125

26
Tabla 4. Métodos horizontales para aerobios

Incubación
Entidad
oficial
Principio de
la técnica
Método Alimentos
Medio
cultivo
Temperatura Tiempo
Expresión de
resultados
Recuento en
placa
966.23
Desmenuzados,
congelados,
precocidos,
preparados,
nueces y
carnes
Agar Plate
count
35
o
C ± 2 ºC 48 h ± 2 h
Conteo: 30 - 300 UFC
Reportar como:
UFC/g
Filtración por
membrana
Hidrofóbica
986.32
Leche
Pasterizada,
Huevos en
polvo y cremas
TSFA 32
o
C 48 h ± 2 h
Total de bacterias/g o
ml
Recuento en
Placa
988.18
Productos
Lácteos
Gel de
pectina
32
o
C ± 1 ºC 48 h ± 3 h
Conteo: 25 - 250 UFC
Reportar como:
UFC/g
AOAC 2000
Capítulo 17
Recuento en
Placa
990.12
Todos los
alimentos
Membrana
hidrofóbicas
Aerobic
Count
35
o
C ± 1 ºC 48 h ± 3 h
Conteo 30-300 UFC
Reportar como UFC/g
o ml
Recuento en
Placa
6,2 Class O
Productos
Lácteos
Standard
Methods
Agar
32
o
C ± 1 ºC 48 h ± 3 h
Conteo: 25 - 250 UFC
Reportar como:
UFC/g o ml
STANDARD
METHODS
Diary
products
1992 16th
Capítulo 6
Recuento en
placa
6.3
Productos
Lácteos
Membrana
hidrofóbicas
Aerobic
Count
32
o
C ± 2 ºC 48 h ± 3 h
Conteo: 25 - 250 UFC
Reportar como:
UFC/g
Recuento
estándar en
placa
Método 1
Todos los
alimentos
Agar Plate
Count
29
o
C a 31
o
C
48 h
3d
Conteo: 30 - 300 UFC
Reportar como:
UFC/g
Recuento en
placa de
siembra por
extensión en
superficie
Método 2
Todos los
alimentos
Agar Plate
count
29
o
C a 31
o
C

72 h
Conteo: 30 - 300 UFC
Reportar como:
UFC/g
Recuento en
placa por
siembra de
gotas en
superficie
con asa
calibrada
Método 3
Todos los
alimentos
Agar Plate
count
29
o
C a 31
o
C 48 h
Conteo: 30 - 300 UFC
Reportar como:
UFC/g
ICMS 1984
Recuento en
placa por
siembra con
asa calibrada
Método 4
Todos los
alimentos
Agar Plate
count
29
o
C a 31
o
C 48 h
Conteo: 30 - 300 UFC
Reportar como:
UFC/g
INVIMA 1998
Recuento en
placa
No. 2
Todos los
alimentos
Agar Plate
Count
35
o
C ± 2
o
C 48 h ± 2 h
Conteo: 30 - 300 UFC
Reportar como:
UFC/g
Todos los
alimentos
35
o
C ± 2
o
C 48 h ± 2 h
Conteo: 30 - 300 UFC
Reportar como:
UFC/g o ml FDA - BAM
2001
Recuento en
Placa
Capítulo 3
Lácteos
Agar Plate
count
32
o
C ± 1
o
C 48 h ± 2 h
Conteo: 25 - 250 UFC
Reportar como:
UFC/g
Continúa . . .


GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125

27
Tabla 4. (Final)

Incubación
Entidad
oficial
Principio
de la
técnica
Método Alimentos
Medio
cultivo
Temperatura Tiempo
Expresión de
resultados
Recuento
en placa
7.62
Todos los
alimentos
Agar Plate
count
Recuento
directo en
placa
7.63
Todos los
alimentos
Agar Plate
count
Filtración
por
membrana
7.71
Todos los
alimentos
Agar Plate
count
Recuento
en placa
7.72
Todos los
alimentos
Membrana
hidrofóbicas
Aerobic
Count
Conteo: 30 - 300
UFC Reportar como:
UFC/g o ml
Método
Pectin gel
7.73 Redi-gel
Método
Membrana
hidrofobica
7.74
Aerobic
count hgmf
Método
placa en
espiral
7.75
Productos
lácteos
Agar Plate
count
Conteo: 25 - 250
UFC Reportar como:
UFC/g o ml
Método de
asa
calibrada
7.76
Todos los
alimentos
Agar Plate
count
Recuento
en placa
por siembra
de gotas en
superficie
con asa
calibrada
7.77
Todos los
alimentos
Agar Plate
count
APHA
Capítulo 7
2001
7.78
Todos los
alimentos
Simplate
25 °C a 35 ºC 48 h ± 2 h
Conteo: 30 - 300
UFC Reportar
como: UFC/g o ml
ICONTEC
Recuento
Placa
NTC
4519/ISO
4833
Todos los
alimentos
Standard
Plate Count
35
o
C ± 2
o
C 48 h ± 2 h
Conteo: 30 - 300
UFC
Reportar como:
UFC/g
Agar Plate
Count
AACC
Recuento
Placa
AACC 4211
Todos los
alimentos
Buffer
fosfato
(diluciones)
35
o
C ± 2
o
C 48 h ± 2 h
Conteo: 30 - 300
UFC
Reportar como:
UFC/g


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28
Tabla 5. Métodos horizontales para Staphylococcus. Aureus

Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas
Entidad oficial
Principio de
la técnica Método Alimentos
Medio (s)
de
cultivo
Tiempo y
Tempera-
tura °C
Medio (s) de
cultivo
Tiempo y
Tempera-
tura °C
Medio (s)
de
cultivo
Tiempo y
Temperatura °C
Medio (s)
de cultivo
Tiempo y
Temperatura °C
Expresión
de
resultados
1. Caldo
BHI
35
o
C - 37°C/
18 h -24 h
Número Más
Probable
987.09
Todos los
alimentos
Caldo
tripticasa
soya + 10 %
NaCl + 1 %
Piruvato Na
35
o
C/48 h
Agar
Baird
Parker
35 ºC - 37
o
C/
48 h
2.
Coagulasa*
35
o
C - 37 °C/
4 h -18 h máx 48
h
Reportar el
NMP según
Tabla
1. Caldo
BHI
35
o
C - 37°C/ 18
h - 24 h
AOAC 2000
Capítulo 17.5.02
Aislamiento y
enumeración
en superficie
975.55
Todos los
alimentos
Agar
Baird
Parker
35 ºC-37
o
C/48 h
2.
Coagulasa*
35
o
C - 37 °C/
4h -18 h máx 48 h
Contar las
cajas que
tengan entre
20 y 200
colonias
STANDARD
METHOS
Diary products
Cap 5

Aislamiento y
enumeración
en superficie
5.4 (f)
Todos los
alimentos





Agar
Baird
Parker
35 ºC/45 h - 48 h
1. Caldo
BHI
35
o
C/18 h - 24 h
Contar cajas
entre 20 -
200 colonias

Continúa . . .

* Hacer pruebas bioquímicas de acuerdo a cada entidad oficial

GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125

29
Tabla 5. (Continuación)

Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas
Entidad oficial
Principio de
la técnica Método Alimentos
Medio (s)
de
cultivo
Tiempo y
Tempera-
tura °C
Medio (s)
de cultivo
Tiempo y
Tempera-
tura °C
Medio (s)
de
cultivo
Tiempo y
Temperatura °C
Medio (s) de
cultivo
Tiempo y
Temperatura
°C
Expresión
de
resultados
2. Coagulasa* 35 ºC/6 h
3. Catalasa
4. Glucosa 37 ºC/5 d
5. Manitol 37 ºC/5 d
6. Sensibilidad
Lisostafina
35 ºC < 2 h
7. Nucleasa
Termoestable
35 ºC/4 h
Numero mas
probable
5.4 (f.4)
Todos los
alimentos
Caldo
tripticasa
soya +
cloruro de
sodio
35
o
C/48 h
Agar
Baird
Parker
35 ºC/48 h
8. Produccion
de enterotoxin
35 ºC - 37 ºC/
18 h -24 h
Número más
probable
(NMP)
Aislamiento y
enumeración
en superficie
Productos
lácteos
Agar
Manitol
agar
S110
37
o
C/24 h Similar al anterior
Contar cajas
entre 20 -
200 colonias
STANDARD
METHOS
Diary products
Cap 5
Número Más
Probable
5.4 (f.5)
Leches






Caldo
Giolitti
cantoni
Caldo
Lactosa
salado
37
o
C/24 h Similar al anterior
Número más
probable
(NMP)

* Hacer pruebas bioquímicas de acuerdo a cada entidad oficial

GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125

30
Tabla 5. (Continuación)

Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas
Entidad oficial
Principio de
la técnica Método Alimentos
Medio (s)
de
cultivo
Tiempo y
Tempera-
tura °C
Medio (s) de
cultivo
Tiempo y
Temperatura
°C
Medio (s)
de cultivo
Tiempo y
Temperatura °C
Medio (s)
de cultivo
Tiempo y
Temperatura °C
Expresión
de
resultados
Caldo BHI 35
o
C/18 h -24 h
1 Caldo BHI
35
o
C/18 h -
24 h
Agar Baid
Parker
35
o
C-37
o
C/30 h
-48 h Coagulasa* 35 ºC/4 h -24 h
2
Agar yema
de huevo
polimixina
telurito 35
o
C-37
o
C/24 h
Caldo BHI 35
o
C/18 h -24 h
3
Agar
Kranep
35
o
C-37
o
C/30 h
-48 h
Coagulasa* 35 ºC/4 h -24 h
Aislamiento y
enumeración
en superficie
4






Agar
difosfato de
fenolftaleina
con
polimixina
35
o
C-37
o
C/24 h
-48 h
Caldo BHI 35
o
C/18 h -24 h
Contar cajas
entre 20 -
200
colonias/
UFC por g o
ml
ICMSF 1984
Numero mas
probable
5
Todos los
alimentos
Caldo telurito
manitol
glicina
35
o
C - 37
o
C/
24 h -48 h
Agar leche
sal
37
o
C/24 h Coagulasa* 35 ºC/4 h -24 h
Número
más
probable
1. Caldo
BHI
35
o
C ± 2
o
C/18 h
-24 h
INVIMA 1998
Capítulo 2
Numeral 8
Todos los
alimentos






Agar Baid
Parker
35
o
C ± 2
o
C/48 h
2.
Coagulasa*
35
o
C ± 2
o
C/
6 h y descartar a
las 24 h
Contar cajas
entre 20 -
200
colonias.
REPORTAR
como UFC
por g o ml

* Hacer pruebas bioquímicas de acuerdo a cada entidad oficial

GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125

31
Tabla 5. (Continuación)

Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas
Entidad oficial
Principio
de la
técnica
Método Alimentos Medio (s)
de cultivo
Tiempo
y
Tempe-
ratura °C
Medio (s) de
cultivo
Tiempo y
Tempera-
tura °C
Medio (s)
de cultivo
Tiempo y
Temperatura °C
Medio (s) de
cultivo
Tiempo y
Temperatura °C
Expresión
de
resultados
1. Caldo BHI
35
o
C ± 2
o
C/
18 h -24 h
2. Coagulasa*
35
o
C ± 2
o
C/6 h
y descartar a las
24 h
3. Catalasa
4. Glucosa 37
o
C/7 d
5. Manitol 37
o
C/7 d
6.
Sensibilidad
Lisostafina
35 ºC/2 h
Recuento


Agar Baid
Parker
35 ºC/45 h - 48 h
7. Nucleasa
Termoestable
35 ºC/4 h
Contar cajas
entre 20 -
200 colonias
1. Caldo BHI
35
o
C ± 2
o
C/
18 h -24 h
FDA -BAM 2001
NMP
Capítulo
12
Productos en
los que se
espere un
pequeño
numero de
S.aureus y
alimentos
que
contengan
una gran
población de
especies
competitivas




Caldo
Tripticasa
Soya+NaCl+
Piruvato de
sodio
35
o
C/48 h
± 2 h
Agar Baird
Parker
35 ºC/48 h
2. Coagulasa*
35
o
C ± 2
o
C/6 h
y descartar a las
24 h
Reportar el
NMP según
Tabla de
NMP

* Hacer pruebas bioquímicas de acuerdo a cada entidad oficial

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32
Tabla 5. (Continuación)

Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas
Entidad
oficial
Principio de la
técnica Método Alimentos Medio (s)
de cultivo
Tiempo y
Temperatura
°C
Medio (s)
de cultivo
Tiempo y
Temperatura °C
Medio (s)
de cultivo
Tiempo y
Temperatura °C
Medio (s)
de cultivo
Tiempo y
Temperatura
°C
Expresión
de
resultados
1. Caldo
BHI
35 ºC - 37 ºC/
18 h - 24 h Procedimiento
de
Enriquecimiento
selectivo
39.51
Alimentos
que
contienen
una pequeña
población de
células
injuriadas


Caldo
Tripticasa
Soya +
NaCl
35 ºC - 37 ºC/
24 h ± 2 h
Agar Baird
Parker
35 ºC - 37 ºC/
46 h ± 2 h
3.
Coagulasa:
plasma +
EDTA
35
o
C-37
o
C/
6 h
Contar cajas
entre 20 -
200 colonias
1. Caldo
BHI
35
o
C - 37
o
C/
18 h -24 h
Procedimiento
de
Enriquecimiento
selectivo
39.52
Ingredientes
alimenticios
crudos y
alimentos no
procesado
de los cuales
se espera
que
contenga
grandes
poblaciones
de especies
competitivas
Caldo
Tripticasa
Soya+NaCl
+Piruvato
de sodio
35 ºC -37 ºC/
48 h ± 2 h
Caldo
Giolitti
Cantoni
35 ºC - 37 ºC/
24 h - 48 h
Agar Bard
Parker
35
o
C-37
o
C/48 h
± 2 h
3.
Coagulasa:
plasma +
EDTA
35
o
C - 37
o
C/
6 h
Reportar
NMP de
Estafilococos
Coag /g
1. Caldo
BHI
35
o
C - 37
o
C/
18 h - 24 h
Conteo en
Superficie
39.53
Alimentos
crudos y no
procesados
Agar Baird
Parker
sembrar
0,3 ml en 3
cajas 35 ºC-37 ºC/45 h
- 48 h
3.
Coagulasa:
plasma +
EDTA
35
o
C - 37
o
C/
6 h
Contar cajas
entre 20 -
200 colonias
APHA 2000
Capítulo 39
Enumeración
directa de
S.aureus
Coagulasa
Positiva
39.57
Quesos,
leche y
postres a
base de
leche








Agar
Fibrinoge-
no Plasma
de conejo
35 ºC-37 ºC/48 h


REPORTAR
como # de
S.aureus por
g o ml de
producto


GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125

33
Tabla 5. (Final)

Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas
Entidad
oficial
Principio de la
técnica Método Alimentos Medio (s)
de cultivo
Tiempo y
Tempera-
tura °C
Medio (s) de
cultivo
Tiempo y
Temperatura
°C
Medio (s)
de cultivo
Tiempo y
Temperatura °C
Medio (s) de
cultivo
Tiempo y
Temperatura °C
Expresión
de
resultados
Agar Baid
Parker sin
yema de
huevo
35
o
C - 37
o
C/
48 h

APHA
2000
Capítulo
39
Enumeración
directa de
S.aureus
Coagulasa y
Termonucleasa
positiva
39.58
Alimentos
crudos y
procesados

Agar Baird
Parker +
Plasma
Telurito
fibrinogeno
+piruvato
de sodio
35
o
C - 37
o
C/8 h
Agar DNA
Azul de
toluidina
35
o
C - 37
o
C/4 h
Contar entre
10-100
colonias
típicas
Agar Baid
Parker
35
o
C ± 2
o
C/24 h
ICONTEC NTC 4779
Todos los
alimentos

Medio
plasma de
conejo
fibrinogeno
35
o
C ± 2
o
C/18 h
- 72 h
Coagulasa:
plasma +
EDTA
35
o
C/4 h -24 h

Contar entre
20-200
colonias
1. Caldo BHI
35
o
C -37
o
C/
18 h - 24 h
AACC
Todos los
alimentos

Agar Baid
Parker

35
o
C - 37
o
C/48 h

2.
Coagulasa:
plasma +
EDTA
35
o
C-37
o
C/18 h
- 24 h
Positivo o
negativo



GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125

34
Tabla 6. Métodos horizontales para Bacillus cereus

Incubación
Entidad oficial
Principio
de la
técnica
Método Alimentos Medio cultivo
Tempera-
tura
Tiempo
Expresión de
resultados
Recuento
en placa
980.31 D
Todos los
alimentos
Agar MYP 30 ºC 24 h a 48 h
Conteo: 15-
150 colonias
típicas con
halo de
lecitinasa
30 ºC 48 h ± 2 h
NMP de B
cereus
confirmados
AOAC 2000
Capítulo 17
NMP para
alimentos
que
contienen
10
3
UFC/g
980.31 E
Todos los
alimentos
Caldo
tripticasa soya
polimixina/
confirmar en
MYP
30 ºC 24 h a 48 h
ICMSF 1984
Recuento
en placa
siembra
por estria
en
superficie

Todos los
alimentos
Agar yema de
huevo
polimixina o
yema de
huevo sal
polimixina
cloruro de
trifeniltrtrazolio
35 ºC -37 ºC 24 h
Reportar como
presuntos de
B cereus las
colonias
típicas. Hacer
confirmación
INVIMA 1998
Recuento
en placa
siembra
0,1 ml en
superficie
con varilla
de hockey
9
Todos los
alimentos
Agar selectivo
para Cereus
según Mossel
35
o
C ± 2
o
C 18 h a 24 h
Reportar como
presuntos de
B cereus las
colonias
típicas. Hacer
confirmación
Recuento
en placa
siembra de
0,1 ml en
superficie
D
Todos los
alimentos
Agar manitol
yema de
huevo
polimixina
MYP
30 ºC 24 h
Reportar
UFC/g7ml de
B cereus las
colonias
típicas.
Caldo
tripticasa soya
polimixina
30 ºC 48 h ± 2 h
FDA - BAM
2001 Capítulo
14
NMP E
Todos los
alimentos
Agar MYP 30 ºC 24 h
Hacer
confirmación
Hacer lectura
tabla NMP
APHA
Capítuloítulo 32
2001
Recuento
en placa
32.21
Todos los
alimentos
Agar MYP y
Agar KG (Kin-
Goepfert)
30
o
C -32 ºC 20 h a 24 h
Conteo: 30-
300
NMP 32.22
Todos los
alimentos
Caldo
tripticasa soya
polimixina
30 ºC 48 h
Hacer lectura
NMP
ICONTEC
Recuento
Placa
siembra de
0,1 ml en
superficie
NTC 4679
Todos los
alimentos
Agar MYP 30 ºC ± 2
o
C 18 h a 24 h
Conteo entre
15-150
colonias
AACC
Recuento
Placa

Todos los
alimentos




79
o
C - 80 ºC 12 min
Standard
methods Diary
Products
Capítulo 8
Esporas de
Bacillus
8.9
Leche
cruda
SMA + 0,1 %
almidón
soluble
30 ºC ± 1
o
C 48 ºC
Esporas
aerobias
mesófilas/ ml
* Hacer confirmación mediante pruebas bioquímicas


GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125

35
Tabla 7. Métodos horizontales para Clostridium

Incubación Incubación Entidad
oficial
Principio de la
técnica
Método Alimentos
Medio
cultivo
Temperatura Tiempo
Pruebas
confirmativas
T
O
Tiempo
Expresión de
resultados
Medio de
tioglicolato
fluido
35 ºC 18 h a 24 h TSC sin
yema de
huevo
35 ºC 20 h
caldo de
esporulación
35 ºC 24 h
Medio gelatina
lactosa y
nitrato motility
35 ºC 24 h
Recuento en
placa
976.3
Todos los
alimentos
TSC con
yema de
huevo
35 ºC 24 h
Caldo PY para
colonias
atípicas
35 ºC 24 h
20- 200 UFC/ g o ml
AOAC 2000
Capítulo 17
Número más
probable
993.10 Mariscos IMM
45 ºC en baño
de maría
16 h a 18 h
Medio
modificado de
C. perfringens
45 ºC 24 h NMP Bacterias/g o ml
Agar leche
lactosa yema
de huevo +
antitoxina
polivalente
35
o
C - 37 ºC
en
anaerobiosis
18 h a 24 h
Tipificación
serológica

Fermentación
de
carbohidratos/
medio de carne
cocida
35
o
C - 37 ºC
en
anaerobiosis
18 h a 24 h
ICMSF
Recuento en
placa e
identificación
1 británico
Todos los
alimentos
Agar
sangre de
caballo
35
o
C a 37 ºC
en
anaerobiosis y
aerobiosis
48 h
caldo peptona
+ lactosa,
glucosa,
sacarosa,
maltosa
35
o
C - 37 ºC
en
anaerobiosis
48 h
30 - 300 UFC/g o ml
Continúa . . .

GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125

36
Tabla 7. (Continuación)

Incubación Incubación Entidad
oficial
Principio de la
técnica
Método Alimentos
Medio
cultivo
Temperatura Tiempo
Pruebas
confirmativas
Temperatura Tiempo
Expresión de
resultados
Detección por
enriquecimiento*
Todos los
alimentos
de baja
carga
microbiana
Medio de
carne
cocida
35
o
C a 37 ºC 18 h a 24 h
Agar sangre de
caballo
35
o
C - 37 ºC
en
anaerobiosis
y aerobiosis
24 h Presencia ó ausencia
Número más
probable *

Todos los
alimentos
Medio de
carne
cocida
35
o
C a 37 ºC
en
anaerobiosis
24 h
Agar sangre de
caballo
35
o
C - 37 ºC
en
anaerobiosis
48 h
NMP Bacterias/ g o
ml
Recuento en
placa
Todos los
alimentos
Agar sulfito
cicloserina/
Agar
triptosa
sulfito
cicloserina
Agar
perfringens
de Shahidi-
Ferguson
35
o
C a 37 ºC
en
anaerobiosis
20 h a 24 h
Agar movilidad
nitrato
suplementado
Caldo gelatina
lactosa Yema
de huevo
Hemólisis
35
o
C - 37 ºC 24 h 20 - 200 UFC/ g o ml
ICMSF
Detección por
enriquecimiento
2
norteamericano
Todos los
alimentos
de baja
carga
microbiana
medio
fluido
tioglicolato
46 ºC ± 0,5
o
C
37 ºC ± 0,5
o
C
4 h a 6 h
18 h a 24 h
Agar yema de
huevo de
McClung y
Toabe Agar
sangre de
oveja
35
o
C - 37 ºC
en
anaerobiosis
24 h Presencia ó ausencia
Recuento de
esporas
No. 10
Todos los
alimentos
Agar SPS
Agar sulfito
cicloserina
35 ºC ± 2
o
C 72 h 5 - 50 colonias
Caldo
tioglicolato
Caldo de carne
35 ºC 24 a 48 h
20 - 200 UFC/ g o ml
INVIMA
1998
Recuento en
placa
No. 11
Todos los
alimentos
Agar SPS
Agar
triptosa
sulfito
cicloserina
35 ºC ± 2
o
C 48 h
Bioquímicas: Catalasa, movilidad nitrato, lactosa y gelatina


GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125

37
Tabla 7. (Final)

Incubación Incubación
Entidad
oficial
Principio de la
técnica
Método Alimentos Medio cultivo
Temperatura Tiempo
Pruebas
confirmativas/
bioquímicas
Temperatura Tiempo
Expresión de
resultados
medio de carne
cocida
24 h a 48 h
Caldo de
tioglicolato fluido
35 ºC
18 h a 24 h
FDA- BAM
2001
Recuento en
placa
Capítulo 16
Todos los
alimentos
Agar TSC sin
yema de
huevo
35 ºC en
anaerobiosis
20 h a 24 h
medio leche-
hierro modificado
46 ºC en baño
de maría
2 h
20-200 UFC/g o ml
Recuento en
placa
34.71
Todos los
alimentos
Caldo hígado
Caldo
peptona-
glucosa
extracto de
levadura
35 ºC a 37 ºC 20 h a 24 h
Agar TSC + yema
de huevo
35 ºC 18 h a 24 h UFC/g ó ml
APHA
Capítulo 34
2001
Recuento en
placa
34.72
Todos los
alimentos
Agar TSC 35 ºC a 37 ºC 18 h a 24 h
Agar TSC sin
yema de huevo
35 ºC - 37 ºC 18 h a 24 h 20-200 UFC/g ó ml
Medio fluido de
tioglicolato
35 ºC ± 2 ºC
en
anaerobiosis
18 h a 24 h
Método A. Medio
SL
46 ºC en baño
de agua
18 h a 24 h
ICONTEC
Recuento en
placa
NTC 4834
Todos los
alimentos
Agar triptosa
sulfito
cicloserina
libre de yema
de huevo Agar
SPS
Agar TSN
35 ºC ± 2 ºC
en
anaerobiosis
24 h a 72 h
Método B. Caldo
fluido de
tioglicolato Caldo
de carne cocida
46 ºC ± 0,5 ºC
35 ºC
3 h a 4 h
24 h a 48 h
15-150 UFC/g ó ml
* Hacer las pruebas bioquímicas indicadas en el recuento en placa e identificación


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38
Tabla 8. Métodos horizontales para Coliformes

Prueba presuntiva Prueba confirmativa
Incubación Incubación
Entidad
oficial
Principio de la
técnica
Método
Alimentos
Medio cultivo
Temperatura Tiempo
Medio
cultivo
Temperatura Tiempo
Expresión de
resultados
recuento en gel
de pectina
989.11 Productos lácteos VRB redigel 32 ºC ± 1 ºC 24 h ± 2 h 25-250 UFC/g o ml
Película
rehidratable
Membrana
hidrofóbicas
986,33
989,10
leche y productos
lácteos
Placa membrana
hidrofóbicas para
recuento de
coliformes
32 ºC ± 1 ºC 24 h ± 2 h 15-150 UFC/ml
Película
rehidratable
Membrana
hidrofóbicas
996.02 Productos lácteos HSCC 32 ºC ± 1 ºC 24 h ± 2 h > 150 UFC/g o ml
Película
rehidratable
Membrana
hidrofóbicas
991.14
Todos los
alimentos
Membrana
hidrofóbicas E. coli
count plate
35 ºC ± 1 ºC 24 h ± 2 h 15-150 UFC/ml
Discos 992.30
Todos los
alimentos
Caldo LST 35 ºC ± 1 ºC 24 h ± 2 h
Discos SSD
+ MUG
35 ºC 24 h a 48 h
Presencia / ausencia
E. coli
m-FC 35 ºC TSAM 44,5 ºC ± 0,5 ºC 24 h ± 2 h Coliformes/ ml o g
AOAC
2000
Capítulo 17
Filtración por
membrana
hidrofóbica
983.25
Todos los
alimentos
TBA para E. coli 44,5 ºC ± 0,5 ºC
24 h ± 2 h

Coliformes fecales/ ml
o g
Recuento en
placa
7.8 VRBA 32 ºC ± 1 ºC 24 h ± 2 h Caldo BGB 32 ºC ± 1 ºC 48 h ± 3 h >150 UFC/g o ml
Número más
probable
7.9 caldo LST 35 ºC ± 1 ºC 24 h ± 2 h Caldo BGB 35 ºC ± 1 ºC 48 h ± 3 h NMP/ g ó ml
L- EMB
Tubo SMA
35 ºC ± 1 ºC 24 h ± 2 h Test Completo
en medio líquido
7.10
Productos lácteos
caldo LST 35 ºC ± 1 ºC 24 h ± 2 h
Tubo LST 35 ºC ± 1 ºC 48 h ± 2 h
Presencia ó ausencia
Medio
rehidratable
7.13 Productos lácteos
Membrana
hidrofóbicas VRBA
32 ºC ± 1 ºC 24 h ± 2 h >150 UFC/g o ml
Gel de pectina 7.14 Productos lácteos VRB redigel 32 ºC ± 1 ºC 24 h ± 2 h Caldo BGB 32 ºC ± 1 ºC 48 h ± 3 h 25-250 UFC/g o ml
Medio caldo para
coliformes
35 ºC 3 h
Standard
Methods
Capítulo 7
Impedancia para
detección de
coliformes
7.15
Leche, materia
prima, crema y
mezcla de helado
Impedancia 35 ºC 14 h
Caldo BGB 32 ºC 48 h
Recuento por
impedancia de
coliformes/ ml

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39
Tabla 8. (Continuación)

Prueba presuntiva Prueba confirmativa
Incubación Incubación
Entidad
oficial
Principio de la
técnica
Método
Alimentos
Medio cultivo
Temperatura Tiempo
Medio cultivo
Temperatura Tiempo
Expresión de
resultados
Número más
probable
1 Nortea-
mericano
Todos los
alimentos
Caldo lauril sulfato
triptosa
35 ºC a 37 ºC 24 h y 48 h
Caldo lactosa
bilis verde
brillante 2 % ó
Agar eosina
azul de metileno
ó Agar Endo
35 ºC a 37 ºC 24 h a 48 h
NMP Coliformes/
ml o g
Número más
probable
2
británico
Todos los
alimentos
Caldo MacConkey 35 ºC a 37 ºC 24 h y 48 h
NMP Coliformes/
ml o g
Número más
probable
3
Todos los
alimentos
Caldo lactosa bilis
verde brillante
35 ºC a 37 ºC 24 h y 48 h
Agar bilis
lactosa rojo
neutro ó Agar
Endo
35 ºC a 37 ºC 24 h y 48 h
NMP Coliformes/
ml o g
Recuento en placa 4
Todos los
alimentos
Agar bilis lactosa
rojo neutro verde
brillante
35 ºC a 37 ºC 24 h
< 150 colonias
UFC/ml o g
Número más
probable
coliformes fecales
1
norteame
ricano
Todos los
alimentos
Caldo lauril sulfato
triptosa
35 ºC a 37 ºC 24 h y 48 h Caldo EC 44,5 ºC ± 0,2 ºC 24 h y 48 h
NMP Coliformes/
ml o g
ICMSF
Número más
probable
coliformes fecales
2
Europeo
Todos los
alimentos
Caldo MacConkey 35 ºC a 37 ºC 24 h y 48 h
Caldo lactosa
bilis verde
brillante 2% e
Indol
44 ºC ± 0,1 ºC 24 h y 48 h
NMP Coliformes/
ml o g
Número más
probable
No. 13
Todos los
alimentos
Caldo lactosado
bilis verde brillante
2 %
35 ºC ± 2 ºC 24 h a 48 h
Agar EMB Agar
VRBA
Agar Endo
35 ºC ± 2 ºC 24 h y 48 h
NMP de
coliformes/ g ó ml
INVIMA
1998
Número más
probable de
coliformes fecales
No. 14
Todos los
alimentos
Caldo lactosado
bilis verde brillante
2 %
35 ºC ± 2 ºC 24 h a 48 h
Caldo lactosado
bilis verde
brillante 2 % y
Caldo triptófano
44,5 ºC ± 0,5 ºC
en baño de agua
48 h
NMP de coliformes
fecales/g ó ml

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40
Tabla 8. (Continuación)

Prueba presuntiva Prueba confirmativa
Incubación Incubación
Entidad
oficial
Principio de la
técnica
Método Alimentos
Medio cultivo
T
o
Tiempo
Medio
cultivo
T
o
Tiempo
Expresión de
resultados
Número más
probable
Caldo lauril triptosa 35 ºC ± 1 ºC 48 h ± 2 h
Caldo
BGLB
35 ºC 48 h ± 2 h
NMP de coliformes /g
ó ml
Recuento en
placa
Todos los
alimentos
VRBA
35º C 32ºC para
prod. lácteos
18 h a 24 h
Caldo
BGLB
35 ºC
24 h - 48 ±
2 h
25- 250 UFC/ g ó ml
Caldo EC 45,5 ºC ± 0,2 ºC 48 h ± 2 h
FDA - BAM
2001
Número más
probable para
coliformes
fecales
Capítulo 4
Mariscos Caldo lauril triptosa 35 ºC 48 h ± 2 h
Caldo L-
EMB
35 ºC
18 h - 24 ±
2 h
NMP de coliformes
fecales /g ó ml
Número más
probable
8,71- 8,72
Caldo lauril sulfato
triptosa
35º C ± 0,5 ºC
24 h - 48 h
± 2 h
Caldo bilis
verde
brillante
35 ºC ± 0,5 ºC 48 h ± 2 h
NMP de coliformes /g
ó ml
Recuento en
placa para
microorganis-
mos no
estresados
8.73 VRBA 35 ºC 18 h - 24 h
Sugiere
Caldo bilis
verde
brillante
35 ºC ± 0,5 ºC 48 h ± 2 h 15-150 UFC/g ó ml
TSA
Temperatura
ambiente
2 h ± 0,5 h
Recuento en
placa para
microorg
estresados
8.74
VRBA
35º C 32 ºC para
productos lácteos
18 h - 24 h
15-150 UFC/g ó ml
Recuento en
Membrana
hidrofóbicas
8.75 VRBA
35º C 32 ºC para
productos lácteos
24 h ± 2 h UFC/g ó ml
APHA
Capítulo 8
2001
Gel de pectina
Redigel
8.76
Todos los
alimentos
Medio VRB Redigel
35 ºC 32 ºC
para productos
lácteos
24 h ± 2 h

UFC/g ó ml

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41
Tabla 8. (Final)

Prueba presuntiva Prueba confirmativa
Incubación Incubación
Entidad
oficial
Principio de la
técnica
Método Alimentos
Medio cultivo
Temperatura Tiempo
Medio
cultivo
Temperatura Tiempo
Expresión de
resultados
Membrana
hidrofóbica
8.77 Agar m-FC 35 ºC 24 h ± 2 h


NMP coliformes/g ó
ml
Número más
probable para
coliformes fecales
8.81

Caldo lauril sulfato
triptosa
35 ºC ± 0,5 ºC
24 h -48 h ±
2 h
Caldo EC 45,5 ºC ± 0,2 ºC 48 h ± 2 h
NMP de coliformes
fecales /g ó ml
Número más
probable para
coliformes y E. coli
8.931
Todos los
alimentos
Caldo LST+ MUG 35 ºC 24 h h± 2 h L-EMB 35 ºC
18 h a 24 ±
2 h
NMP de coliformes/g
ó ml
Recuento en placa
para coliformes y E.
coli
8.933
Todos los
alimentos
Agar VRBA+MUG 35 ºC 18 h a 24 h 15-150 UFC/g ó ml
Recuento en placa
HGMF+ MUG para
coliformes y E. coli
8.934
Todos los
alimentos
LMG+MUG 35 ºC 24 h ± 2 h
NMP de coliformes/g
ó ml
Recuento en
Membrana
hidrofóbicas
8.935
Todos los
alimentos
Membrana
hidrofóbicas E.coli
count plate
35 ºC 24 h ± 2 h 15-150 UFC/g ó ml
APHA
Capítulo 8
2001
Recuento en
Colichrome
8.936
Todos los
alimentos
Redigel colichrome
35º C 32 ºC
para productos
lácteos
24 h - 48 h












15-150 UFC/g ó ml
AACC
Número más
probable para
coliformes y E. coli
4215
Todos los
alimentos
Caldo LST 35 ºC 48 h ± 2 h Caldo BGLB 35 ºC 48 h ± 2 h
NMP de coliformes/g
ó ml
* Hacer pruebas bioquímicas de acuerdo a cada entidad oficial






GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125

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BIBLIOGRAFÍA


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th
Edition. Dr. William Horwitz, Volume I y
II. 2000. USA.

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Detection in Food and Cosmetic Products. FDA - BAM 2001

NTC 4132:1997, Microbiología. Guía general para el recuento de mohos y levaduras. técnica
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Colony count technique at 25°C.

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NTC 4666 - ISO 11290-1: 1999, Microbiología de alimentos y alimentos para animales. Método
horizontal para la detección de Listeria monocytogenes. Parte 1. Método de detección.

ICMSF, 1986. Ecología microbiana de los alimentos. Volumen 1. Significado y métodos de
Recuento. Ed. Acribia, Zaragoza.

NTC 4574:1999, Microbiología de alimentos y de alimentos para animales. Guía general sobre
métodos para detección de Salmonella.

NTC 4491-1:2005, Microbiología de alimentos y alimentos para animales. Preparación de
muestras para ensayo, suspensión inicial y diluciones decimales para análisis microbiológico.
Parte 1. Reglas generales para la preparación de la suspensión inicial y de diluciones
decimales.

NTC 4491-2:2004, Microbiología de alimentos y alimentos para animales. Preparación de
muestras para ensayo. Suspensión inicial y diluciones decimales para análisis microbiológico.
Parte 2. reglas especificas para la preparación de carne y productos carnicos.

NTC 4491-3:2004, Microbiología de alimentos y alimentos para animales. Preparación de
muestras para ensayo, suspensión inicial y diluciones decimales para análisis microbiológico.
Parte 3. Reglas especificas para preparación de muestras de pescado y productos de la pesca.

NTC 4491-4:2005, Microbiología de alimentos y alimentos para animales. Preparación de
muestras para ensayo, suspensión inicial y diluciones decimales para análisis microbiológico.
Parte 4: Reglas especificas para la preparación de productos diferentes de leche, productos
lácteos, carne, productos cárnicos, pescados y productos de la pesca.

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