You are on page 1of 21

Metabolitos secundarios de las plantas

http://es.wikipedia.org/wiki/Metabolitos_secundarios_de_las_plantas Se llama metabolitos secundarios de las plantas a los compuestos químicos sintetizados por las plantas que cumplen funciones no esenciales en ellas, de forma que su ausencia no es fatal para la planta, ya que no intervienen en el metabolismo primario de las plantas. Los metabolitos secundarios de las plantas intervienen en las interacciones ecológicas entre la planta y su ambiente. También se diferencian de los metabolitos primarios en que cada uno de ellos tiene una distribución restringida en el Reino de las plantas, a veces a sólo una especie o un grupo de ellas, por lo que muchos de ellos son útiles en Botánica Sistemática. Por muchos años el valor adaptativo de la mayoría de los metabolitos secundarios fue desconocido. Muchas veces fueron pensados simplemente como productos finales de procesos metabólicos, sin función específica, o directamente como productos de desecho de las plantas. En general fueron percibidos como insignificantes por los biólogos por lo que históricamente han recibido poca atención por parte de los botánicos. Muchas de las funciones de los metabolitos secundarios aún son desconocidas. El estudio de estas sustancias fue iniciado por químicos orgánicos del siglo XIX y de principios del siglo XX, que estaban interesados en estas sustancias por su importancia como drogas medicinales, venenos, saborizantes, pegamentos, aceites, ceras, y otros materiales utilizados en la industria. De hecho, el estudio de los metabolitos secundarios de las plantas estimuló el desarrollo de las técnicas de separación, la espectroscopía para dilucidar su estructura, y metodologías de síntesis que hoy constituyen la fundación de la química orgánica contemporánea. En estudios biológicos más recientes se determinó que la mayoría de los metabolitos secundarios cumplen funciones de defensa contra predadores y patógenos, actúan como agentes alelopáticos (que son liberados para ejercer efectos sobre otras plantas), o para atraer a los polinizadores o a los dispersores de las semillas (Swain 1973,1 Levin 1976,2 Cronquist 19773 ). El reconocimiento de propiedades biológicas de muchos metabolitos secundarios ha alentado el desarrollo de este campo, por ejemplo en la búsqueda de nuevas drogas, antibióticos, insecticidas y herbicidas. Además, la creciente apreciación de los altamente diversos efectos biológicos de los metabolitos secundarios ha llevado a reevaluar los diferentes roles que poseen en las plantas, especialmente en el contexto de las interacciones ecológicas. Los metabolitos secundarios de las plantas pueden ser divididos en 3 grandes grupos, en base a sus orígenes biosintéticos:4 5 1. Terpenoides. Todos los terpenoides, tanto los que participan del metabolismo primario como los más de 25.000 metabolitos secundarios,4 son derivados del compuesto IPP (Isopentenil difosfato o "5-carbono isopentenil difosfato") que se forman en la vía del ácido mevalónico. Es un grupo grande de metabolitos con actividad biológica importante (Goodwin 19716 ). Están distribuidos ampliamente en las plantas y muchos de ellos tienen funciones fisiológicas

primarias. Unos pocos, como los que forman los aceites esenciales, están restringidos a solo algunas plantas. 1. Compuestos fenólicos como los fenilpropanoides y sus derivados. Los más de 8.000 compuestos fenólicos que se conocen están formados o bien por la vía del ácido shikímico o bien por por la vía del malonato/acetato. 2. Compuestos nitrogenados o alcaloides. Los alrededor de 12.000 alcaloides que se conocen,4 que contienen uno o más átomos de nitrógeno, son biosintetizados principalmente a partir de aminoácidos. Los alcaloides poseen una gran diversidad de estructuras químicas (Robinson 19817 ). Son fisiológicamente activos en los animales, aún en bajas concentraciones, por lo que son muy usados en medicina. Ejemplos conocidos son la cocaína, la morfina, la atropina, la colchicina, la quinina, y la estricnina. La biosíntesis de los metabolitos secundarios entonces, parte del metabolismo primario de las plantas del que se desvía acorde con las vías generales que se muestran en el siguiente cuadro:

Vías generales del metabolismo secundario de las plantas, que producen los 3 tipos generales de compuestos secundarios: productos nitrogenados, productos fenólicos, y terpenoides. También se muestra su relación con el metabolismo primario. Dibujado a
partir de Taiz, Lincoln y Eduardo Zeiger. "Secondary Metabolites and Plant Defense". En: Plant Physiology, Fourth Edition. Sinauer Associates, Inc. 2006. Capítulo 13.

También hay compuestos clasificados como metabolitos secundarios que cumplen también funciones primarias en las plantas. pero los productos finales son muy variados entre especies de plantas. hidrosolubles. defensa ante el herbivorismo. Cumplen funciones de defensa. entre otros. que se sintetizan a partir de fenilalanina y malonil-CoA. Antocianinas y otros flavonoides. Se encuentran en algunos grupos emparentados de familias de astéridas. Rodman et al. Hay tanta variabilidad entre especies (se han enumerado alrededor de 9. Los metabolitos secundarios de las plantas también se pueden dividir en más categorías menos abarcativas. por la acción de una sola enzima se convierte en lo que se considera un metabolito secundario. además de los terpenoides y los alcaloides encontramos:  Betalaínas. y tienen por lo tanto una distribución restringida a sólo algunos taxones emparentados. presentes en las vacuolas celulares de las plantas. según Judd et al. Los flavonoides más conocidos son las antocianinas. por lo que se encuentran en dos líneas de plantas no emparentadas filogenéticamente: todos los Brassicales por un lado. por lo que la diferencia entre las vías bioquímicas es difusa. Se encuentran en todas las embriofitas. De ellos se derivan los aceites de mostaza. Las betalaínas son pigmentos rojos y amarillos que están presentes solamente en los Caryophyllales excepto Caryophyllaceae y Molluginaceae (Clement et al. pigmentos de las flores de muchas plantas. Glucósidos cianogenéticos. Grupo grande de metabolitos no nitrogenados. Glucosinolatos (en inglés llamados "mustard oil glucosides"). ni origen biosintético). antes Euphorbiaceae. al ser hidrolizados por las enzimas myrosinasas (Rodman 198110 ). ni estructura química. cumplen funciones de atracción de polinizadores y dispersores. Evolutivamente se originaron dos veces. Todos los flavonoides comparten la vía biosintética central. pigmentación.. y en Drypetes (familia Putranjivaceae. cuyos pigmentos son antocianinas (que son flavonoides). Al igual que los demás pigmentos. formados por la unión de unidades de acetato por la vía de los ácidos grasos.Hay que tener en cuenta que la diferencia entre metabolitos primarios y metabolitos secundarios es sólo funcional (no pueden ser distinguidos en base a moléculas precursoras. 19949 ).8 clasificados según su vía biosintética y estructura química. 198111 ). ya que al ser hidrolizados por algunas enzimas liberan ácido cianhídrico (Hegnauer 197712 ). Son compuestos fenólicos. como absorción de luz ultravioleta y protección contra el herbivorismo. y a veces un compuesto considerado metabolito primario. mientras que otros parecen haber aparecido una sola vez. Poliacetilenos.000 flavonoides y se siguen contando13 ) que son útiles para diferenciar entre especies de plantas. y probablemente tienen funciones adicionales.     . Algunos tipos parecen haberse originado muchas veces evolutivamente. proceso llamado cianogénesis. Tienen funciones de protección contra la luz ultravioleta. en contraste de la mayoría de las otras plantas.

Aproximadamente el 75% de los antibióticos conocidos son producidos por actinomicetos. RELACIONES ENTRE TROFOFASE . los más importantes para la salud humana son los metabolitos secundarios. En estado natural. Donde se incluyen. de los que se han descubierto más de 5000. (iii) Cada uno de estos productos es producido por un grupo muy reducido de organismos. cuyas características son: (i) No son necesarios para el crecimiento del microorganismo que los produce. además de los antibióticos.es/sefin/MI/tema08MI. por lo que son muy importantes las técnicas de conservación de estos microorganismos. De todos los productos tradicionales obtenidos por fermentación. sus funciones se hallan ordenadas a la supervivencia de la especie. (iv) La producción puede perderse fácilmente por mutación espontánea (degeneración de la raza). por ejemplo Streptomyces gryseus produce al menos 40 antibióticos diferentes.METABOLITOS SECUNDARIOS DE INTERES INDUSTRIAL http://nostoc. II. una única cepa de una especie del género Streptomyces produce 32 antraciclinas diferentes. Los metabolitos secundarios mejor conocidos son los antibióticos. Algunas especies son excepcionales productores de antibióticos. alcaloides (ácido lisérgico).html Los metabolitos secundarios son moléculas sintetizadas por determinados microorganismos. normalmente en una fase tardía de su ciclo de crecimiento. ciertas toxinas (micotoxinas).usal. aunque la mayoría carecen de utilidad pues son tóxicos para los organismos vivos. (ii) Generalmente se producen como mezclas de productos muy relacionados químicamente entre sí. Por ejemplo. pero cuando los microorganismos que los producen se desarrollan en cultivo puro los metabolitos secundarios no desempeñan esa misión. factores de crecimiento vegetal (giberelinas) y pigmentos.IDIOFASE . cifra que aumenta a razón de una media aproximada de 300 por año.

esta simplificación nos permite comprender mejor la fermentacción industrial de los metabolitos secundarios. para posteriormente. e idiofase. Este retraso en la formación de metabolitos secundarios es uno de los principales mecanismos mediante el cual los microorganismos productores de antibióticos evitan el suicidio. puesto que al comienzo de la fase logarítmica de crecimiento son sensibles a su propio antibiótico. Sin embargo. Los factores que ponen en marcha la producción de metabolitos secundarios al final de la trofofase no se conocen. III. en otras. durante la idiofase. se ha puesto de manifiesto la existencia de sistemas de regulación que juegan un papel importante en la síntesis de determinados productos industriales. volverse resistentes al antibiótico que están produciendo. fase de crecimiento logarítmico donde normalmente no se producen los metabolitos secundarios. sintetizándose a partir de este momento los enzimas necesarios para la biosíntesis de estos metabolitos secundarios. EFECTO DE LOS PRECURSORES . La explicación puede ser que al faltar nutrientes se alteren los metabolitos primarios y se originen inductores de los enzimas encargados de la síntesis de los metabolitos secundarios. fase estacionaria donde normalmente se producen los metabolitos secundarios. debemos alterar esas condiciones en el momento adecuado para asegurar una excelente producción del metabolito secundario. Otra explicación puede ser que al faltar la fuente de Carbono cesa la represión por catabolito. si nosotros queremos producir un metabolito secundario primero debemos asegurar las condiciones apropiadas durante la trofofase para un buen crecimiento y después. e independientemente de este aspecto general del metabolismo secundario. apareciendo los enzimas que están específicamente relacionados con la formación de metabolitos secundarios.En el metabolismo secundario las fases de crecimiento se denominan trofofase. Es decir. es un hecho que en este punto hay unos cambios muy fuertes en la composición enzimática de las células. sin embargo es el Nitrógeno o el Fósforo. En algunas ocasiones el nutriente responsable es una fuente de Carbono. Aunque es una simplificación pensar sólo en dos fases. únicamente se sabe que este mecanismo se dispara normalmente cuando algún nutriente del medio se ha agotado. Cualquiera que sea el mecanismo general por el que se dispara el metabolismo secundario al final de la trofofase.

es lo que se conoce como biosíntesis dirigida. INDUCCION ENZIMATICA A lo largo de los estudios sobre el papel que el triptófano juega como estimulador de la biosíntesis de alcaloides por Claviceps (Cornezuelo del centeno) se puso de manifiesto que la inducción enzimática juega un papel importante en la producción de metabolitos secundarios. Esto es debido a que su síntesis por el microorganismo no es el factor limitante de la producción del metabolito secundario. Ocasionalmente se encuentra un precursor que incrementa de forma notable la producción de este metabolito secundario. Este efecto se debe normalmente a la interacción de estos compuestos con los mecanismos reguladores del microorganismo productor. incluyen la adición de centenares de aditivos en los medios de cultivo que puedan actuar como posibles precursores del producto que estamos investigando. IV.Las manipulaciones. ya que su efecto estimulador se debe en gran parte a la inducción de la síntesis de los enzimas que dan lugar a la síntesis de los alcaloides. sin embargo. estudiando estos efectos se puso de manifiesto que los mecanismos reguladores de los microorganismos ejercen un efecto notable en la producción de los metabolitos secundarios. no es un factor limitante. En estos casos. los precursores no muestran ninguna actividad. Si bien el triptófano es un precursor en la biosíntesis de estos alcaloides. tanto estimuladores como inhibidores en la producción del metabolito secundario por parte de una molécula no precursora. determinados aminoácidos específicos en la producción de actinomicinas y tirociclinas. la adición de aditivos ha revelado efectos dramáticos. Existen tres razones que han llevado a esta conclusión: . ácidos benzoicos sustituidos en la formación de novobiocinas. Precisamente. El precursor puede incluso dirigir la síntesis de un determinado producto de entre varios que se producían anteriormente. En muchas fermentaciones. Como ejemplos de precursores están el ácido fenilacético en el caso de la producción de bencil penicilina. tanto del medio de cultivo como de las condiciones ambientales que se llevan a cabo durante el screening secundario de una forma sistemática.

que no son precursores. V. por lo que su efecto no puede ser debido al hecho de aportar azufre. Otro caso de regulación por retroalimentación sucede cuando la ruta metabólica ramificada.(i) Los análogos del triptófano. Otro efecto de inducción similar es el de la metionina en la biosíntesis de cefalosporina por Cephalosporium acremonium. como es el caso de la lisina y la penicilina en Penicillium chrysogenum. La conversión de manósido estreptomicina en estreptomicina se cataliza mediante el enzima -D-manosidasa que es inducido por manano. La inducción también juega un papel muy importante en determinar la relación entre los componentes de la mezcla que se produce en una fermentación. además. es decir. penicilina y otros antibióticos limitan su propia producción actuando por retroalimentación generalmente sobre el primer enzima de la ramificación que conduce a la síntesis de este metabolito. Por ejemplo. el cloranfenicol al igual que la cicloheximida. (ii) El triptófano se debe añadir durante la trofofase ya que si se añade durante la idiofase tiene poco efecto. estimulan la producción de los alcaloides. REGULACION POR RETROALIMENTACION La regulación por retroalimentación también parece jugar un papel fundamental en el metabolismo secundario. la estimulación de la formación de cefalosporina C se debe a un efecto de inducción. conduce a su vez a la síntesis de un metabolito primario. en la fermentación para la producción de estreptomicina se produce estreptomicina y manósido estreptomicina. (iii) El triptófano añadido es absorbido por la célula durante la fase de crecimiento y alcanza su mayor concentración intracelular justo antes de la síntesis de los alcaloides. pero no se . la metionina puede ser reemplazada por su análogo norleucina que no tiene azufre en su molécula. A pesar de que la metionina provee azufre al antibiótico. Por ejemplo. mediante la cual se sintetiza el metabolito secundario. Se llegó a esta conclusión ya que la metionina debe añadirse durante la trofofase. En un primer momento se encontró que la L-lisina disminuía la producción de penicilina. que no se incorporan a la molécula del alcaloide.

Un ejemplo lo tenemos en la biosíntesis de estreptomicina donde actúan varias fosfatasas en la formación de estreptidina y en el último paso. Durante el desarrollo de la producción de penicilina se observó que la glucosa. En algunos casos se explica ya que los intermediarios de la ruta metabólica del producto que nos interesa están fosforilados. Los mecanismos moleculares de la regulación catabólica se esclarecieron en la década de los 70. Mientras existe glucosa en el medio de cultivo el nivel intracelular de AMPc es sumamente reducido. aunque el producto final no lo esté. REGULACION CATABOLICA La represión catabólica fue observada en la industria de antibióticos mucho antes de que se conociera y se entendiera el significado general de este fenómeno. se observó que la lactosa. era un sustrato muy malo para la producción de penicilina. Muchas fermentaciones se inhiben por ortofosfato (H3PO4) a concentraciones (>10 mM) que no son inhibidoras para el crecimiento. denominada "proteína receptora de . El AMPc sintetizado forma un complejo con una proteína existente en la célula. que es el primer enzima en la biosíntesis de lisina. el medio clásico de Jarvis y Johnson lleva una mezcla de glucosa y lactosa. VI. desfosforilación de la estreptomicina fosfato. es un buen sustrato para la producción de penicilina. que soporta un crecimiento muy pobre. Cuando la glucosa del medio se agota.sabía porqué. que era una magnífica fuente de carbono para el crecimiento del microorganismo. debido a que la glucosa inhibe la actividad adenilciclasa. la concentración intracelular de AMPc aumenta rápidamente. Por lo tanto. sin embargo. donde el enzima que cataliza esta reacción también está inhibida por el fosfato inorgánico. cuyo nivel intracelular es inverso a la concentración de glucosa en el medio de cultivo. Hoy sabemos que la regulación catabólica está mediada por el nivel intracelular de un nucleótido especial. Otro camino mediante el cual actúa la regulación por retroalimentación en la formación de metabolitos secundarios implica la inhibición y la represión de las fosfatasas por fosfato. el monofosfato cíclico de adenosina (AMPc). enzima que interviene en la síntesis de AMPc. hasta que se descubrió que el -aminoadipato es un intermediario en la biosíntesis de los dos. lisina y penicilina. La disminución en la formación de penicilina por lisina está causada por la inhibición por retroalimentación de la homocitrato sintasa. Las fosfatasas actuarían en estos intermediarios.

Sólo cuando la glucosa ha desaparecido se produce el enzima que es inducido por manano. Este es el caso de la producción de estreptomicina por Streptomyces gryseus. INCREMENTO DE LA PRODUCCION DE METABOLITOS SECUNDARIOS . Puesto que en la biosíntesis de clortetraciclina donde intervienen 72 intermediarios. el manano es el inductor de la manosidasa que convierte la manósido estreptomicina en estreptomicina. este efecto del fosfato no se debe a la regulación por retroalimentación de fosfatasas. En este caso la represión catabólica juega un papel fundamental en el porcentaje de manósido estreptomicina producido en esta fermentación. este enzima no se sintetiza si hay glucosa (>0. VIII. Este complejo de proteína receptora y AMPc actúa sobre el gen promotor al objeto de inducir la síntesis de los enzimas necesarios para la utilización de otras fuentes de carbono distintas a la glucosa. la idiofase comienza cuando se agota el fosfato en el medio. ninguno de ellos fosforilado. una poco productora (200 µg/mL) y la otra muy productora (2000 µg/mL) de clortetraciclina. Como ya hemos dicho. VII. es posible que esta regulación esté mediada por la carga energética ya que el contenido en ATP de dos cepas de Streptomyces aureofaciens.5%) en el medio debido a la represión catabólica. Sin embargo. La glucosa inhibe gran cantidad de metabolitos secundarios. difieren en que la cepa menos productora tiene de 2 a 4 veces más ATP que la más productora. sin embargo. En las fermentaciones para la producción de clortetraciclina. durante la producción de clortetraciclina.AMPc". En ambas cepas la concentración de ATP aumenta en la trofofase y disminuye en la idiofase. La represión catabólica también juega un papel importante en la determinación de la concentración relativa de cada uno de los antibióticos de una misma familia química que se producen en una fermentación. REGULACION POR EL ESTADO O CARGA ENERGETICA La producción de clortetraciclina se reduce en gran cantidad cuando existe fosfato inorgánico en el medio.

Manipulación ambiental Catabolito: eliminación de la glucosa del medio.Selección de mutantes mal regulados A. éste reanuda la producción del antibiótico natural. Mutasíntesis Se realiza mediante la mutación en el gen que codifica para un precursor del antibiótico natural. De los mutantes obtenidos se seleccionan aquellos que no sean productores del antibiótico (se seleccionan aquellas cepas que poseen una proteína inactiva). Inducción: adición de manano al medio. luz ultravioleta o NTG. C. Resistencia a análogos La estrategia es la misma que la descrita con los metabolitos primarios.. Estos mutantes se vuelven a someter a mutación y se seleccionan aquellas cepas que sean de nuevo productoras del antibiótico (se obtienen mutantes dobles desregulados en un gen en el que actúa esa proteína inactiva). con lo que se consigue la síntesis de una molécula de antibiótico incompleta. 1. Revertientes La estrategia consiste primeramente en seleccionar las mejores cepas productoras del antibiótico. nitrosoguanidina).. Estas cepas se someten a mutación con un agente mutágeno (UV. Carga energética: disminución de fosfato en el medio. Precursores: adición de precursores al medio. . De esta manera se pueden obtener nuevos antibióticos simplemente añadiendo precursores con estructuras ligeramente diferentes. B.La mayoría de los controles descritos en este capítulo se eliminan mediante manipulación ambiental o mediante la obtención de mutantes mal regulados. 2. Cuando se añade al medio el precursor que no puede sintetizar el microorganismo.

En la trofofase (fase de crecimiento de los microorganismos) no se producen metabolitos secundarios. A diferencia de lo que sucede con los metabolitos primarios. Compuestos nitrogenados o alcaloides. se llama metabolitos secundarios de los organismos a todos aquellos compuestos orgánicos sintetizados por el organismo que no tienen un rol directo en el crecimiento o reproducción del mismo. la ausencia de algún metabolito secundario no le impide la supervivencia. por lo que son muy usados en medicina. . Compuestos fenólicos como los fenilpropanoides y sus derivados. Los alrededor de 12.000 metabolitos secundarios. Unos pocos. tanto los que participan del metabolismo primario como los más de 25. N o P. En el caso de los microorganismos. aún en bajas concentraciones. Están distribuidos ampliamente en las plantas y muchos de ellos tienen funciones fisiológicas primarias. Para que se produzca el metabolito secundario. la quinina. pero sigue metabólicamente activo). Al faltar algunos de estos factores. en base a sus orígenes biosintéticos:[4] [5] Terpenoides. si bien se verá afectado por ella.TIPOS DE METABOLITOS SECUNDARIOS? En Bioquímica. y la estricnina. Se sabe que el paso de trofofase a idiofase se produce cuando algún nutriente del medio es limitante.000 alcaloides que se conocen. Todos los terpenoides.000 compuestos fenólicos que se conocen están formados o bien por la vía del ácido shikímico o bien por por la vía del malonato/acetato.[4] son derivados del compuesto IPP (Isopentenil difosfato o "5-carbono isopentenil difosfato") que se forman en la vía del ácido mevalónico. se altera la producción de metabolitos primarios y se originan inductores de enzimas que darán lugar a metabolitos secundarios Los metabolitos secundarios de las plantas pueden ser divididos en 3 grandes grupos. No se conocen bien los factores que disparan la producción de metabolitos secundarios. la morfina. al comienzo de la idiofase. Es en la idiofase normalmente. la atropina. Suele tratarse de C. la colchicina. a veces gravemente. están restringidos a solo algunas plantas. Los más de 8. Ejemplos conocidos son la cocaína.[4] que contienen uno o más átomos de nitrógeno. los metabolitos secundarios mejor conocidos son los antibióticos. la producción de metabolitos secundarios no se produce inmediatamente después de la conclusión de la trofofase. Son fisiológicamente activos en los animales. Como mecanismo de defensa. como los que forman los aceites esenciales. son biosintetizados principalmente a partir de aminoácidos. primero hay que asegurar unas condiciones óptimas durante la trofofase. deben hacerse resistentes a sus propios antibióticos. Primero. Los alcaloides poseen una gran diversidad de estructuras químicas (Robinson 1981[7] ). Es un grupo grande de metabolitos con actividad biológica importante (Goodwin 1971[6] ). cuando se producen (fase en la que el microorganismo no crece.

8.mx Mario Rodríguez-Monroy. se muestra que la combinación de la agregación con otras estrategias tales como la selección de líneas celulares. Morelos. Se discute la inducción de la agregación celular en los cultivos in vitro como una de las estrategias para favorecer la acumulación de estos compuestos químicos. it is shown that the combination of aggregation with other strategies such as selection of cell lines. elicitation or precursor addition constitutes an alternative for the development of bioprocesses based on plant cell cultures for the production of high value chemical compounds. Instituto Politécnico Nacional (CINVESTAV-IPN). Este efecto positivo podría ser explicado como consecuencia de la formación de estructuras morfogénicas y/o por una condición de estrés por limitaciones de oxígeno al interior de los agregados. Colonia San Isidro. e-mail: gttapia@ipn. En esta revisión se ilustra la diferenciación y compartamentalización celular como eventos necesarios para la síntesis de metabolitos secundarios en las plantas. The induction of in vitro cell aggregation is discussed as one of the strategies to stimulate the accumulation of the compounds of interest.mx Resumen El cultivo de células vegetales es una alternativa biotecnológica para la producción de metabolitos secundarios. Gabriela Trejo-Tapia y Mario Rodríguez-Monroy Gabriela Trejo-Tapia. México. Centro de Desarrollo de Productos Bióticos (CeProBi-IPN). Centro de Investigación y Estudios Avanzados. This review illustratates cell differentiation and compartmentalization as necessary events for the biosynthesis of chemical compounds. Finalmente. Sin embargo. A agregação celular na produção de metabólitos secundários nos cultivos vegetais in vitro. Doctor en Ciencias. la elicitación y la adición de precursores constituye una alternativa para desarrollar bioprocesos a partir de células vegetales in vitro para la producción de compuestos químicos de alto valor agregado. Universidad Autónoma de México. CeProBi-IPN. la productividad de los sistemas in vitro es menor a la obtenida de plantas. México. Investigadora. México 62731. Finally. Yautepec. Summary Plant cell culture represents a biotechnological alternative to direct extraction of whole plant for production of secondary metabolites.La agregación celular en la producción de metabolitos secundarios en cultivos vegetales in vitro. Doctora en Ciencias. Dirección: Departamento de Biotecnología. Investigador.5 Carretera Yautepec-Jojutla. However. CeProBi-IPN. México. e-mail: mrmonroy@ipn. Km. Cellular aggregation in secondary metabolite production in in vitro plant cell cultures. This positive effect might be explained as a consequence of the development of morphogenic structures and/or a stress condition induced by oxygen limitation in the interior of the aggregates. Resumo . the productivity of in vitro systems is lower than that obtained from plants.

pesticidas. bajo condiciones estaciónales o de estrés (Verpoorte et al. (Kieran et al. estos compuestos se extraen de plantas silvestres o cultivadas. Las plantas son fuente de una amplia variedad de compuestos químicos. además de cultivos de órganos como brotes y raíces. Los sistemas que operan a nivel comercial usan principalmente cultivos de células en suspensión (Zhao et al.. . se mostra que a combinação da agregação com outras estratégias tais como a seleção de linhas celulares.O cultivo de células vegetais é uma alternativa biotecnológica para a produção de metabólitos secundários. pudiéndose citar entre ellos la producción de shikonina por células de Lithospermum erythrorhizon y de Taxol por células de Taxus spp. 2005). Discute-se a indução da agregação celular nos cultivos in vitro como uma das estratégias para favorecer a acumulação destes compostos químicos. lo que tiene una serie de desventajas. 2002). Su acumulación en las plantas es baja y lenta. los casos exitosos que justifican técnica y económicamente su operación a nivel comercial son limitados. Es decir.. ocurre en células. Asimismo. en fases determinadas del ciclo de vida de la planta. para obtener 1g de vinblastina. ya que está regulada espacial y temporalmente. a elicitação e a adição de precursores constituem uma alternativa para desenvolver bioprocessos a partir de células vegetais in vitro para a produção de compostos químicos de alto valor agregado. es posible obtener cultivos de células no diferenciadas. Finalmente. 2005) aunque también se reporta un proceso que opera con raíces transformadas (Guillon et al. después de más de 40 años de investigación y desarrollo tecnológico. son ejemplos de fármacos que se obtienen de plantas cuya demanda es difícil de abastecer. Aceptado: 18/09/2007. Este efeito positivo poderia ser explicado como conseqüência da formação de estruturas morfogênicas e/ou por uma condição de estresse por limitações de oxigênio ao interior dos agregados. (Zhao et al. que son utilizados como fármacos. 2001). Modificado: 17/09/2007... potente antileucémico. Puede existir alta variabilidad entre poblaciones e inclusive entre individuos. su explotación comercial está basada en la recolección de material en su hábitat natural. Nesta revisão se ilustra a diferenciação e compartimentalização celular como eventos necessários para a síntese de metabólitos secundários nas plantas. 2004).. Comúnmente. órganos y tejidos específicos. Palabras Clave/ Agregación Celular / Compartamentalización / Diferenciación / Metabolitos Secundarios / Recibido: 16/05/2007. entre otros. Don (Sottomayor et al. El cultivo de células y tejidos vegetales se basa en el principio de totipotencia celular. Mediante esta herramienta. como callos y suspensiones celulares. compuesto de alta demanda por su actividad citotóxica.) G. que establece que a partir de cualquier célula de una planta es posible regenerar un individuo completo. En el caso de plantas silvestres.. El cultivo masivo de células vegetales se ha propuesto como una alternativa biotecnológica para el desarrollo de sistemas de producción de metabolitos secundarios (Sharp y Doran. saborizantes y fragancias. conocidos como metabolitos secundarios. a produtividade dos sistemas in vitro é menor à obtida de plantas. se necesita la corteza de 1000 árboles de Taxus brevifolia L. colorantes. lo que ha provocado que muchas estén amenazadas o en peligro de extinción. No entanto. y la del alcaloide vinblastina. 2006). Sin embargo. se necesita media tonelada de hojas secas de Catharanthus roseus (L. La producción del Taxol®. frecuentemente incluyendo la raíz. 1997). Para preparar 1kg de Taxol.

..Los cultivos de células no diferenciadas presentan velocidades de crecimiento mayores a los de células diferenciadas u órganos (raíces y brotes). Por ello. 2002) y el uso de suspensiones celulares agregadas o poco diferenciadas podría representar una de las limitantes para el desarrollo comercial de sistemas biológicos en biorreactores.. la productividad del sistema in vitro puede ser menor tanto en biorreactor como en matraz y. En otros casos es necesario el desarrollo de órganos de almacenamiento.. 1995. 2001). 1998a). y 4) la especialización para la biosíntesis y/o acumulación de metabolitos (St-Pierre et al. se presenta el caso de los alcaloides indólicos. diferentes clases de metabolitos secundarios requieren diferentes grados de diferenciación celular o tisular. lo que representa ventajas para el desarrollo. así como revisar el papel de la agregación celular en los cultivos in vitro para la producción de estos compuestos. debido a que la mayoría de las enzimas de la ruta de biosíntesis se localizan en estos organelos. 2006). en consecuencia. la falta de diferenciación celular en los cultivos puede ocasionar que la concentración del metabolito en el cultivo sea menor que en la planta. Sin embargo. control y manipulación de procesos a escala industrial. De-Luca y St-Pierre. Kino-Oka et al. 3) la organización de las células para constituir los diferentes tejidos y órganos de la planta. desde el punto de vista tecnológico su cultivo a gran escala es más complejo y costoso (Verpoorte et al. La formación de gradientes físicos o bioquímicos debidos a la organización celular es también un factor importante. es decir. que si bien presentan rendimientos mejores a los de las células en suspensión. el cual es influenciado por un número de factores. 1999.. por ello se ha buscado promover la diferenciación de cultivos de células en suspensión para incrementar la producción de metabolitos secundarios. En las plantas. la acumulación de isoprenoides depende de la diferenciación de plástidos. Tal es el caso del establecimiento de cultivos clorófilos. el proceso no es económicamente renTable (Verpoorte et al. estructurales y/o funcionales diferentes a las de la célula progenitora. bioquímicos y fisiológicos mediante los cuales una célula meristemática adquiere propiedades metabólicas. 2000). los procesos de transferencia de masa son más eficientes y pueden desarrollarse cultivos con densidades celulares más elevadas. El objetivo del presente trabajo es mostrar la complejidad anatómica y biosintética que representa para la planta la acumulación de metabolitos secundarios. La producción y acumulación de metabolitos secundarios es una expresión de un estado particular de diferenciación celular. Estos compuestos se encuentran principalmente en plantas de . Diferenciación Celular y Biosíntesis de Metabolitos Secundarios: Los Alcaloides Indólicos Para ejemplificar la estrecha relación entre la biosíntesis de un metabolito secundario y la diferenciación celular en las plantas. Por ejemplo. la diferenciación consiste en el conjunto de procesos moleculares. Pero las alternativas más exploradas han sido la selección de líneas celulares con agregados de "mayor" tamaño y el desarrollo de agregados con células "especializadas" (Jianfeng et al. 2002). 2) la formación de pared celular secundaria característica de las células que constituyen el tejido vascular. además. se presentan: 1) el desarrollo de organelos como los plástidos para realizar la fotosíntesis (cloroplastos) o vacuolas en donde se biosintetizen y acumulen metabolitos secundarios.. como los pelos glandulares y las células laticíferas en el caso de los alcaloides (Samanani y Facchini. Como alternativa a las suspensiones celulares se ha considerado el uso de sistemas in vitro diferenciados como son brotes o raíces. con cloroplastos funcionales (Taya et al. Entre otros cambios.

lo que muestra claramente la necesidad de transporte de intermediarios entre los distintos organelos celulares. La distribución celular de algunas de las enzimas involucradas en la biosíntesis de los alcaloides indólicos ha sido estudiada en plantas de C. tallos y botones florales. tallo y flores. Por su parte. Mientras que la catarantina se encuentra en cualquier órgano de la planta.. las enzimas desacetoxivindolina-4-hidroxilasa (D4H) y acetilvindolina 4-O-acetiltransferasa (DAT) están restringidas a células especializadas conocidas como laticíferas e idioblastos de hojas. La triptamina. es sintetizada en el citosol. rosesus (St-Pierre et al. y en el protodermo y células corticales que rodean el meristemo apical de la punta de las raíces. el precursor iridoide. es importante considerar que al interior de la célula también existe una compartamentalización de la ruta de biosíntesis (Figura 2). la vindolina es sintetizada únicamente en las hojas y tallo (De-Luca y Cutler. 1999). Los estudios (St-Pierre et al. 2006) muestran la separación espacial de la ruta de biosíntesis de vindolina en células particulares de hoja.. De-Luca y StPierre. es sintetizada en seis pasos a partir del alcaloide tabersonina. e indican que la ruta temprana. vindolina y catarantina son sintetizadas en el citosol. Lo anterior muestra en su conjunto que la biosíntesis de la vinblastina requiere células de diferentes tipos y con determinadas características . Uno de los estudios más completos es el correspondiente a la biosíntesis del alcaloide bisindólico vinblastina en C. 2000). ocurre en las capas epidérmicas de hojas y tallos inmaduros. 2000). Las enzimas triptofano descarboxilasa (TDC) y estrictosidina sintasa (STR) se localizan en las células epidérmicas de tallos. Rubiaceae y Nissaceae y se caracterizan por la presencia de los núcleos indólico e iridoide. De manera similar. mientras que su condensación con la secologanina. 1999. la que va a la triptamina. hojas y botones florales. tiene lugar en la vacuola (Verpoorte. los cuales provienen de la triptamina y la secologanina (Roberts y Strack. Loganiaceae. pero su condensación para dar lugar a la vindolina ocurre en la vacuola. La vinblastina resulta de la condensación de los alcaloides catarantina y vindolina. 1999). ésta última. 1987.las familias Apocinaceae. a su vez. Samanani y Facchini. el precursor indólico. La biosíntesis de los alcaloides indólicos es sumamente compleja y todavía no se conocen todas las enzimas involucradas. Por otro lado. mientras que las etapas tardías correspondientes a la biosíntesis de vindolina se localizan en células laticíferas e idioblastos (Figura 1). ni los mecanismos que regulan su biosíntesis. roseus.

2002). La Agregación Celular como Alternativa para la Acumulación de Metabolitos Secundarios en Cultivos In Vitro Las suspensiones vegetales están formadas por células meristemáticas.. como se indicó anteriormente. 1999. . es decir células no diferenciadas. necesario para la biosíntesis de metabolitos secundarios. 1999). St-Pierre et al. que a la vez puede favorecer el transporte de intermediarios. Meyer et al. Roberts y Strack. que no se separan después de la división y forman agregados multicelulares de diferente tamaño y forma (Figura 3a.(Figura 1) además de la especialización intracelular que involucra a múltiples compartimentos celulares (Figura 2.. La tendencia natural a agregarse está regulada por la cohesividad de la pared celular y permite la comunicación célula-célula.

1997). Estos agregados se caracterizan por medir varios milímetros e incluso centímetros de diámetro. Este tipo de agregados son considerados como un grupo de células "auto-inmovilizadas". son esféricos. o debido a su adhesión llegan a obstruir las tuberías en los biorreactores. lo que dificulta mantenerlos en suspensión.Las suspensiones celulares son un sistema in vitro utilizado ampliamente en investigación por ser el más práctico para el cultivo a gran escala y presenta múltiples ventajas para el control de parámetros en los biorreactores (Kieran et al. Las células que conforman una suspensión "fina" son relativamente similares y resulta difícil que en cada una de ellas se lleven a cabo todos los procesos necesarios para la biosíntesis de metabolitos secundarios antes mencionados: síntesis de intermediarios. . por mencionar algunas dificultades de índole tecnológica. de superficie lisa. En condiciones óptimas. Los agregados tienden a sedimentar más fácilmente que las células libres. condensación. las células que los conforman pueden proliferar sin perder su integridad. transporte y acumulación (Figura 3b). cohesivos y presentan cierto grado de diferenciación celular o tisular (Figura 3c). Por ello se plantea que la formación de agregados o el cultivo de órganos puede ser una alternativa más atractiva para la síntesis y acumulación de metabolitos secundarios. tanto en matraz como en biorreactor (Tabla I).. Para lograr las mejores condiciones de transferencia de masa se prefieren las suspensiones celulares formadas por células individuales o agregados "pequeños". La influencia de la agregación y el tamaño de los agregados celulares en la acumulación de metabolitos secundarios se han estudiado en varias especies.

. Es decir.. las células aisladas de Salvia officinalis L. ya que las células localizadas en el interior de un agregado de un tamaño relativamente grande no están expuestas de manera . el grado de agregación y el tamaño de los agregados celulares influyen en el nivel de producción de metabolitos secundarios. roseus de 3-7mm de diámetro produjeron dos veces más alcaloides que las suspensiones finas (Zhao et al. Se observó una relación directa entre el tamaño de los agregados de Fragaria ananassa R. suspensiones de agregados de 3-7mm acumularon seis veces más metabolitos que las suspensiones finas. produjeron 50 veces más ácido ursólico (terpeno) que los agregados (Bolta et al. la línea "agregada" produjo 95% más antocianinas que la "fina" (Edahiro y Seki. 2006). los agregados de C. Inclusive. Los agregados de 24mm de Rhodiola sachalinensis A. no es claro de qué manera afectan la fisiología y el metabolismo de las células. y 2) está relacionada con la morfogénesis. efectivamente. Bor. 2005). Por otro lado. La mayoría de las explicaciones apuntan en dos sentidos: 1) la agregación influye sobre las condiciones locales de las células que conforman un agregado celular. en un reactor tipo airlift. 2003). de 3-6mm de diámetro para la producción de quinina y quinidina. y la producción de antocianinas. ¿Por qué agregados "más grandes" (1mm) producen más metabolitos secundarios que agregados "pequeños" (<1mm)?. Sin embargo. acumularon hasta diez veces más salidrósidos que agregados de tamaño menor (Jianfeng et al..Hoekstra (1993) propuso el cultivo de agregados de Cinchona ledgeriana Moens. 1998a. Tamaño de los Agregados y Procesos de Transferencia de Masa Las diferencias en la producción de metabolitos secundarios observada entre los agregados y las suspensiones "finas" han sido analizadas considerando problemas de difusión de nutrientes. En contraste. 2001). el tamaño de los agregados influye en los procesos de transferencia de masa. Los estudios anteriores muestran que. b).. En otro estudio la producción de jaceosidina e hispidulina en Saussurea medusa fue mayor en agregados de 2-4mm de diámetro (Fu et al.

la producción de tiofeno (metabolito con actividad insecticida) fue proporcional al aumento del diámetro del agregado. si está asociada al O2. ceq : concentración de O2 en el equilibrio (mol·m-3). representando hasta el 90% del total producido. lo que podría ser consecuencia de la importancia que tiene el O2 como nutriente para el desarrollo de cultivos aeróbicos.4mm. lo hicieron en niveles de 840mmol·cm-3 de células.0mm. De manera contraria. Se determinó que en un agregado de 1mm de diámetro. en suspensiones de C. Como consecuencia de lo anterior. Hulst et al. iluminación.0 a 12. puede inhibirse la producción del compuesto. la difusión del O2 ha recibido la mayor atención. generando una condición de estrés y como la acumulación de metabolitos secundarios. 1989) como (1) donde dcrit : diámetro crítico. así como el diámetro crítico (dcrit. Este parámetro se define como el diámetro máximo para la respiración ilimitada a través del agregado y se calcula la ecuación 1 (Hulst et al. y OUR: velocidad de consumo de O2 (mol·m-3). Incluso. Meyer et al. 1999. la producción de ajmalicina (alcaloide indólico) está inhibida en . Este resultado lo atribuyeron a que en los agregados de ese tamaño. O2 y otros factores microambientales en comparación a las células localizadas en la periferia (Hulst et al.4-5.. es considerado como un nutriente limitante en los cultivos en suspensión debido a su baja solubilidad en agua. De : coeficiente de difusión efectiva de O2 (m2·s-1)..8mm de diámetro y observaron que a partir de los 3. El O2 se constituye como un nutriente fundamental en los procesos de oxidación y para la obtención de energía por parte de las células. las células del centro estaban limitadas en su disponibilidad de O2 y por lo tanto "estresadas".. como lo son las células vegetales en suspensión (Kieran et al. 2002). 1989... (1989) establecieron líneas celulares de Tagetes patula con agregados de 1. 1997). Es decir. Pépin et al. las células del centro de un agregado "grande" pueden llegar a estar limitadas en su disponibilidad de O2.similar a los nutrientes. sin embargo. Los agregados de 1mm no excretaron los metabolitos. De los factores mencionados. cs : concentración de O2 en la superficie del agregado (mol·m-3). en los agregados más productivos las células están limitadas por O2. Con la finalidad de probar esta hipótesis se ha determinado para una serie de líneas celulares el perfil de concentración de O2 en función del diámetro del agregado. la concentración de O 2 en el centro es solo de 30% en comparación a la superficial. la cantidad de tiofeno excretada al medio dependió del tamaño del agregado. mientras que los de 1. Tabla II). y es cercana a cero en agregados de 3mm. de apenas 8mg·l-1. O bien. roseus cultivadas en un biorreactor tipo tanque agitado.

los agregados de R. se formaron a partir de explantes de cotiledones y no de tallos u hojas (Wu et al. Los estudios histológicos de los agregados de C. 2007). medusa productores de jaceosidina mostraron potencial para regenerar plantas (Fu et al. En estos agregados la producción del alcaloide ajmalicina fue mayor que en las suspensiones no transformadas.. y 5) la modificación en la concentración de otros componentes del medio de cultivo como vitaminas o sacarosa (Zhao et al. Entonces. Recientemente Montiel et al.. 2001). como ocurre en las suspensiones "finas" (Figura 3). sachalinesis presentaron en su centro tejido de parénquima y en las capas periféricas células meristemáticas rodeadas por una capa epidérmica. las células que conformaban esos agregados de 250mm no deberían estar limitadas por O2. 2007). 1989. Zhao et al. en la especie Calophyllum inophyllum Linn. sachalinensis. 3) la modificación en la relación auxina/citocinina (Hoekstra. 2001) permitieron conocer que no solo estaban formados por células meristemáticas. roseus (Zhao et al. 2005). ledgeriana y C. 1993)... 2) la sustitución de la citocinina cinetina por 6-bencilaminopurina (Hoekstra. la limitación de O 2 no explica en todos los casos las diferencias observadas en el nivel de metabolitos secundarios en función del tamaño del agregado. R.agregados con diámetro >250mm (Kebler et al.. la geraniol-10-hidroxilasa (G10H) y la 1-deoxi-D-xilulosa 5-fosfato sintasa (DXS). 1993. En lo que al explante se refiere. En agregados compactos de Hypericum perforatum L. 1993.. 2001).. 1999).4diclorofenoxiacético por una auxina más débil como el ácido a-naftalenacético o el ácido 3-indol acético (Hulst et al. por lo que se propuso que el comportamiento de los agregados "grandes" (³1000mm) podría explicarse en base a problemas de difusión de O2. mientras que en R.8mm. Para ello se busca generar "agregados compactos" o compact callus aggreggates (CCA) y tratar de evidenciar la formación de estructuras morfogénicas que pudieran asociarse con la producción de metabolitos secundarios.. roseus promueve el desarrollo de agregados globulares con células tipo parénquima. El desarrollo de líneas celulares con las características antes descritas ha sido resultado principalmente de la manipulación de los componentes del medio de cultivo y el tipo de explante. compuestos con actividad antidepresora. Agregación y Morfogénesis Como se discutió en la sección anterior. las cuales están . (2007) reportaron que la expresión del gen Agl12 de Arabidopsis thaliana en suspensiones celulares de C. b) y C.. 2003). 1993). 2006). el uso de nodos/internodos favoreció el desarrollo de agregados compactos en comparación a hoja (Pawar et al.. Por ejemplo. roseus presentaron tejido vascular. 1) la sustitución del ácido 2. la limitación de este nutriente no explica la disminución en la acumulación de ajmalicina. Calcularon que un agregado de 250mm está formado por más de 1500 células y que el dcrit era de 3. 1995). por lo que se ha intentado determinar si la agregación celular de los cultivos in vitro implica un proceso de diferenciación celular. En particular. 1998a. Hoekstra. Chang et al. El gen Agl12 actúa al nivel de la expresión de genes que codifican para dos enzimas de la ruta de biosíntesis de alcaloides.. ledgeriana (Hoekstra.. los agregados compactos de S. Previamente se demostró que existe una correlación positiva entre la concentración de O2 disuelto y la producción del alcaloide (Schlatmann et al. Estos antecedentes muestran que el grado de agregación y compactación están relacionados con la morfogénesis. sachalinensis (Jianfeng et al. se observó la acumulación de hipericinas. Es decir. 4) el aumento en la concentración de nitrato. en las células de la superficie del agregado durante la etapa tardía de crecimiento (Song et al. Mientras los agregados de C.

1999). se ha recurrido a combinar la agregación con otras estrategias como la selección de líneas celulares. Al adicionar glucosa al medio de cultivo la capacidad de biotransformación a rosina se duplicó (György et al. 2006). Qu et al. Estos resultados muestran que los factores de transcripción involucrados en la diferenciación a tejidos u órganos pueden constituir una nueva herramienta de la ingeniería metabólica para diseñar cultivos in vitro capaces de producir metabolitos secundarios. rosavina y rosarina. la elicitación y la adición de precursores. A continuación se presentan algunos ejemplos. rosea se estimuló la producción de rosina y rosavina mediante la biotransformación del cinamil-alcohol (György et al. O bien. 2005. . (2006) propusieron que la adición de fenilalanina (30mmol·l -1) y metil jasmonato (218mmol·l-1) a agregados de 50mm de V. En cultivos de CCA de R. la elicitación o la adición de precursores.involucradas en la biosíntesis de la secologanina (precursor terpénico). La combinación de la agregación con otras estrategias. Combinación de la Agregación con otras Estrategias Los trabajos reseñados mostraron que la agregación promueve la producción de metabolitos secundarios. constituye una alternativa para desarrollar bioprocesos in vitro para la producción de compuestos químicos de alto valor agregado. es una especie vegetal de interés medicinal que acumula en su rizoma salidrósidos y los glicósidos de cinamil-alcohol. tales como la selección de líneas celulares. rosina.. Sin embargo.. sachalinensis se observó que una mayor relación auxina:citocininas era benéfica tanto para el desarrollo de los agregados como para la producción de los salidrósidos (Xu et al. Los resultados reseñados muestran que la obtención de agregados celulares es una estrategia que favorece la síntesis y acumulación de metabolitos secundarios en los cultivos in vitro. esto no ha sido suficiente para desarrollar bioprocesos económicamente rentables. En CCA de R. Rhodiola rosea L. Por otro lado. vinifera estimulaba hasta en cinco veces la producción de antocianinas. Por ello. En otro caso. a utilizar a los agregados como "biotransformadores". Estos agregados podrían asemejar hasta cierto punto la compartamentalización que se presenta en las plantas y que permite la biosíntesis de compuestos químicos. Se observó también que la adición al medio de cultivo de sacarosa (100g·l -1) tuvo un efecto positivo en la síntesis de los compuestos químicos. 2004). se observó la formación de nuevos compuestos químicos con potencial biológico..