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CLASIFICACIN DE LAS BACTERIAS. CARACTERSTICAS GENERALES DE LAS FAMILIAS ENTEROBACTERIACEAS, MICROCOCACEAS, VIBRIONACEAS Y ESTREPTOCOCACEAS NDICE
1. INTRODUCCIN ................................................................................................................ 1 2. SISTEMA DE CLASIFICACIN UNIVERSAL PARA LAS BACTERIAS: BERGEY'S MANUAL OF DETERMINATIVE BACTERIOLOGY. ........................................................... 1 3. F. ENTEROBACTERIACEAS ............................................................................................ 3
3.1. ENTEROBACTERIAS. CLASIFICACIN ............................................................................................. 3 3.2. INTERS CLNICO DE LAS ENTEROBACTERIAS: ACCIN PATGENA .................................... 5 3.3. AISLAMIENTO. CARACTERES BIOQUMICOS. DIAGNSTICO BACTERIOLGICO DE LA FAMILIA ENTEROBACTERIACEAS ............................................................................................................... 5
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1. INTRODUCCIN
En general, las formas de vida pertenecen a dos reinos: el animal y el vegetal. Sin embargo, existen formas muy sencillas de vida que no son fciles de clasificar taxonmicamente. ste sera el caso de los microorganismos. Algunos de ellos presentan caracteres del reino animal, como su capacidad de movimiento, produccin de energa, etc, mientras que otros microorganismos se asocian a vegetales, porque presentan clorofila y obtienen energa a partir de la luz por fotosntesis, tal y como lo hacen las plantas verdes. Precisamente, por estas similitudes y diferencias con ambos reinos, ha sido necesario adoptar decisiones arbitrarias que han permitido poder clasificar taxonmicamente los microorganismos. Todo comenz con Darwin, en 1859, cuando consider a los microorganismos como seres vivientes que no tenan porque pertenecer claramente a uno u otro grupo. Posteriormente Haeckel, en 1866, fue ms all, y habl de un tercer reino denominado protista que inclua seres vivos con caractersticas animales y vegetales y cuya organizacin era demasiado sencilla. A partir de aqu, y segn el grado de complejidad de sus estructuras celulares, los protistas se dividieron en: 1. Protistas superiores, que corresponden a hongos, protozoos y casi todas las algas que poseen clulas eucariotas (ncleo verdadero) semejantes a plantas o animales y englobados en estos reinos. 2. Los protistas inferiores, que incluyen las bacterias y el grupo de algas cianofceas, que se caracterizan por ser clulas procariotas. Actualmente las bacterias forman un reino propio denominado MONERAS. Durante el siglo XX se ha intentado crear un sistema de clasificacin til y universalmente aceptado para las bacterias. En la actualidad el sistema de clasificacin ms aceptado a nivel mundial es el Manual de Bergey (Bergey's Manual of Determinative Bacteriology), cuya primera edicin apareci en 1923. Ha permitido clasificar todas las bacterias hasta el momento encontradas en un total de 19 secciones subtituladas con nombres comunes de tipo descriptivo y afines, tal y como se indicar a continuacin. Aqu van a ser expuestas las ms importantes, aunque para ms detalle, sera conveniente la consulta de la octava edicin de Bergey's Manual (1974). La novena edicin del Manual (1994) para identificacin (no para clasificacin, que sera el Manual Bergeys de bacteriologa Sistemtica) clasifica las bacterias en cuatro categoras: 1. Eubacterias gram negativas con pared celular: grupos del 1-16. 2. Eubacterias gram positivas con pared celular: grupos del 17-29 3. Eubacterias carentes de pared celular: grupo 30 4. Arqueobacterias: grupos 31-35
2. SISTEMA DE CLASIFICACIN UNIVERSAL PARA LAS BACTERIAS: BERGEY'S MANUAL OF DETERMINATIVE BACTERIOLOGY.
Las bacterias se encuentran clasificadas dentro del reino Moneras, donde se incluye un total de 19 secciones. - Seccin V: en dicha seccin nos vamos a encontrar el Orden Espiroquetales, con la Familia Espiroquetaceae, que engloba un total de 5 gneros. Aqu s se encuentran muchas especies patgenas para el hombre Gneros: Spirochaeta, Treponema, Borrelia, Leptospira y Cristispira Ejemplo de especies patgenas para el hombre: Treponema pallidum (sfilis), Borrelia recurrentes (fiebres recurrentes), Leptospira spp (leptospirosis).
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- Seccin VI: en dicha seccin se encuentran las bacterias curvadas o espiraladas e incluye la Familia Espiracaceae con los gneros Spirilum y Campylobacter, alguna de cuyas especies se asocia a procesos patgenos del hombre. Adems, dentro de dicha seccin, existe un total de 4 gneros de afiliacin dudosa, no asociados a procesos infecciosos en el hombre. - Seccin VII: en esta seccin se incluyen bacilos y cocos aerobios Gram-. Se va a dividir en un total de 5 familias. Nos encontramos con bacterias con gran importancia clnica para el hombre, como el gnero Pseudomonas, el Gnero Brucella, agente etiolgico de las brucelosis o fiebres de malta en el hombre, o algunas especies del Gnero Bordetella, como B. pertussis, responsable de la tosferina. - Seccin VIII: en esta seccin se encuentran los bacilos Gram- anaerobios facultativos. Est formada por dos importantes familias: Familia Enterobacteriaceae Familia Vibrionaceae La Familia Enterobacteriaceas est formada por un total de 12 gneros: Gnero Escherichia Gnero Serratia Gnero Salmonella Gnero Proteus Gnero Shigella Gnero Yersinia Gnero Enterobacter Gnero Edwardsiella Gnero Citrobacter Gnero Hafnia Gnero Klebsiella Gnero Erwinia Estos gneros presentan especies patgenas para el hombre, por ejemplo Salmonella typhi (fiebres tifoideas), Shigella disenteriae (disentera bacilar), Yersinia pestis (peste), etc. La familia Vibrionaceas se caracteriza por presentar forma de coma o bacilo incurvado. Incluye un total de 5 gneros, entre ellos el Gnero Vibrio, que presenta especies patgenas para el hombre, como por ejemplo la especie Vibrio cholerae, agente etiolgico del clera. Adems, en la seccin VIII se incluye aproximadamente un total de 9 gneros de afiliacin hasta el momento dudosa. Dentro de estos gneros se encuentran especies con inters clnico para el hombre, como es el caso del Gnero Haemophylus con la especie H. influence, responsable de algunas meningitis en nios. Seccin X: en esta seccin se encuentran cocos y cocobacilos Gram- y aerobios. Se incluye la Familia Neiseriaceae con los gneros Neisseria, Branhamella, Moraxella y Acinetobacter, con importancia clnica para el hombre en alguna de s especies como por ejemplo N. meningitidis (meningitis) y N. gonorroheae (gonorrea). - Seccin XIV: en esta seccin se encuentran bacterias en forma de coco y Gram+. Familia Micrococaceas, con 3 gneros: Gnero Micrococcus, Gnero Staphylococcus y Gnero Planococcus. Alguno de stos presenta gran inters clnico para el hombre, como S. aureus. Familia Streptococaceas, con un total de 5 gneros, siendo el Gnero Streptococcus el ms importante de todos ellos debido al efecto patgeno para el hombre de alguna de sus especies, como por ejemplo, S. pyogenes. - Seccin XV: en esta seccin se encuentran las bacterias bacilares y cocoideas formadoras de endosporas. Incluye la Familia Bacilaceas: Gnero Bacillus Gnero Clostridium De todos estos gneros los ms importantes desde un punto de vista clnico son el Gnero Bacillus [p.e. B. antrhacis (antrax o carbunco)] y el Gnero Clostridium [p.e., Cl. tetani (ttanos)] y Cl. botulinum (botulismo), etc.
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- Seccin XVI: aqu se encuentran las bacterias bacilares Gram- no formadoras de esporas. Incluye la Familia Lactobacilaceas con el Gnero Lactobacillus, que tiene inters en la industria alimenticia y otros gneros como Listeria. - Seccin XVII: en esta seccin se encuentran los actinomices y otros microorganismos relacionados. Se incluyen el Orden Actinomicetales, con un total de 7 familias, y otros microorganismos relacionados con esta seccin, tales como el Gnero Corinebacterium. Orden Actinomicetales. Presenta las siguientes familias: Familia Actinomicetaceas, con un total de 5 gneros de los que el ms importante desde un punto de vista clnico para el hombre es el Gnero Actinomyces. Familia Micobacteriaceas, con el Gnero Mycobacterium, que presenta gran importancia clnica por su efecto patgeno, p.ej.: Mycobacterium tuberculosis (tuberculosis) y Mycobacterium leprae (lepra). Dentro de esta seccin se encuentran adems el Gnero Corynebacterium con alguna especie patgena para el hombre, p.e. Corynebacterium diptheriae. - Seccin XVIII: en esta seccin se encuentran todas las Rickettsias, que son bacterias que presentan ciertas similitudes con virus. En esta seccin nos encontramos 2 importantes rdenes: Orden Rickettsiales y Orden Clamidiales. A) Orden Rickettsiales. Incluye las siguientes familias: Familia Rickettsiaceas. Importante, desde un punto de vista clnico para el hombre, es el gnero Rickettsia. B) Orden Clamidiales. Incluye una sola familia: Familia Chlamidiaceas, que presenta un solo gnero, el Gnero Chlamydia, del que se han descrito procesos patgenos para el hombre en alguna de sus especies. - Seccin XIX: esta seccin la forman micoplasmas, que son bacterias que se diferencian del resto porque no presentan pared bacteriana. Aqu se encuentra la Familia Micoplasmaceae con el Gnero Mycoplasma, del que alguna de sus especies se ha asociado a ciertos procesos patgenos.
3. F. ENTEROBACTERIACEAS
Las Enterobacterias corresponden a una gran familia de bacilos o cocobacilos Gramaerobios y/o anaerobios facultativos, mviles (con flagelacin peritrica) o inmviles, que la ltima edicin del Manual de Bergey's clasifica, junto a la Familia Vibrionaceas, dentro de la Seccin VIII. Las Enterobacterias se caracterizan por ser fermentadoras de glucosa con o sin produccin de gas (metabolismo oxidativo-fermentativo), suelen ser huspedes habituales del tracto gastrointestinal del hombre y de los animales, produciendo en muchas ocasiones efectos patgenos de gravedad variable, en otros casos pueden actuar como saprfitos formando parte de la flora gastroinstestinal, aunque tambin como consecuencia de esto se puede encontrar en el agua y en el suelo. Van a ser bastante resistentes a los agentes externos; de ah su amplia distribucin. En muchos casos, las Enterobacterias se pueden comportar como potencialmente patgenas, es decir, cuando las condiciones del husped se lo permiten (bajas defensas) originando numerosas infecciones de tipo oportunista. Esta familia interesa en gran medida para anlisis microbiolgicos porque, adems de ser alterantes de determinados alimentos incluso patgenos, indican la CALIDAD MICROBIOLGICA DE LOS ALIMENTOS. Para ello se realiza un recuento de UFC/g.
3.1.
ENTEROBACTERIAS. CLASIFICACIN
De acuerdo con la ltima edicin del Manual de Bergey's, la Familia Enterobacteriaceas y la Familia Vibrionaceas se encuentran englobadas en la Seccin VIII. Concretamente la Familia Enterobacteriaceas se va a clasificar en funcin de sus caracteres bioqumicos (pruebas
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bioqumicas) y sus propiedades antignicas. Las caractersticas ms importantes de la Familia Enterobacteriaceae son las siguientes: Bacilos o cocobacilos Gram-. Aerobios y anaerobios facultativos. De 1 a 4 m de longitud. Pueden ser mviles (flagelos peritricos) o inmviles. No producen citocromo oxidasa. Oxidasa (-) Fermentan la glucosa en todos los casos, presentando un metabolismo fermentativo. Reducen los nitratos a nitritos y, en ocasiones, a nitrgeno atmosfrico. Son capaces de fermentar otros azcares y alcoholes con la consiguiente produccin de cidos y, en ocasiones, tambin gas. (Estudio realizado en medio KIA). Puede producir gran cantidad de fermentos, como por ejemplo gelatinasas, descarboxilasas, ureasas, galactoxidasas, desaminasas, etc. Algunas son capaces de producir SH 2 como, por ejemplo, Proteus. Otras producen indol, como E. coli, lo que facilita su identificacin. Presenta similitudes bioqumicas con otras familias, como por ejemplo Vibrionaceae; de ah que se estudien conjuntamente, aunque esta ltima es oxidasa (+). As, pues, de acuerdo con todo lo dicho, todas las enterobacterias pueden clasificarse atendiendo a sus propiedades bioqumicas; de hecho en la ltima edicin del Manual del Bergey's se han tomado como base para su clasificacin estudios bioqumicos, que han dado lugar a ms de 20 gneros con un total aproximado de 100 especies; de acuerdo con esto tenemos: Gnero Salmonella: S. choleraeuis, S. typhi, S. paratyphi, S. enteritidis, etc. Gnero Shigella: S. dysenteriae entre las especies ms importantes. Gnero Eschericha: E. coli, E. blattae (especie nueva). Gnero Citrobacter: C. flerundii, entre las especies ms importantes. Gnero Klebsiella: K pneumoniae, K. terrigena, etc. Gnero Enterobacter: E. cloacae, E. aerogenes, etc. Gnero Hafnia. Gnero Serratia: S. marcescens, S. liquefaciens, etc. Gnero Proteus: P. vulgaris, P. miriabilis, etc. Gnero Providencia: P. alcalifaciens, etc. Gnero Morganella: M. morgan, la ms importante. Gnero Yersinia: Y, pestis, Y. enterocolitica, entre las especies ms importantes. Las Enterobacterias siempre fueron clasificadas segn su capacidad para fermentar la lactosa, con la consiguiente produccin de cido, en tres grupos: Enterobacterias fermentadoras rpidas de lactosa (coliformes): Son microorganismos indicadores de la calidad microbiolgica de los alimentos y de la sanidad. Incluyen los gneros Escherichia, Enterobacter y Klebsiella. Enterobacterias fermentadoras de lactosa, ms lentamente:* poco / no coliformes Gneros Citrobacter, Serratia, Hafnia, Yersinia y la especie Shigella sonnei. Enterobacterias no fermentadoras de lactosa (no coliformes), que incluyen los gneros Salmonella, Shigella, Proteus, Morganella, Providencia y Edwardsiella.
Esta clasificacin fue de gran utilidad ya que las enterobacterias patgenas, como por ejemplo Shigella o Salmonella, se incluyen dentro de las no fermentadoras de lactosa, pero existen numerosas excepciones como la Yersinia pestis que es una bacteria que fermenta de forma lenta la lactosa y tambin es muy patgena para el hombre; de ah que esta ltima clasificacin no se utilice demasiado desde un punto de vista taxonmico.
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coliformes, medio agar ENDO, medio agar Hektoen para aislar enterobacterias patgenas, etc. c) El tercer paso de la identificacin de enterobacterias consiste en la realizacin de pruebas bioqumicas que incluyen las siguientes: prueba de Hugh-Leiffson (O/F, oxidacin-fermentacin), que permitir apreciar el metabolismo oxidativo y/o fermentativo (fermentativo para las enterobacterias); prueba en medio KIA (kligleriron-agar), que permitir demostrar si el microorganismo problema utiliza la glucosa y/o lactosa, con o sin produccin de SH 2 y/o gas; prueba del indol en medio lquido peptonado; prueba de la reduccin de nitratos a nitritos en caldos nitratados; prueba de la utilizacin del citrato, determinacin de su movilidad en medio ornitinmovilidad, por ejemplo; prueba de la produccin de la Beta-galactoxidasa (ONPG); prueba del rojo de metilo en medio de caldo glucosado; prueba de la determinacin de la acetoina (prueba de Voges-Proskauer); y finalmente, la prueba para determinar la produccin de desaminasas, que proporciona un carcter diferencial importante. En bacteriologa es muy frecuente determinar las pruebas bioqumicas a efectos prcticos a travs de pruebas multitest de determinacin rpida, como por ejemplo, las tiras API; en el caso concreto de enterobacterias son especialmente tiles las tiras 20E, que corresponden a pruebas multitest con un total de 20 pruebas claves para determinacin rpida de enterobacterias.
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5.2.
El efecto ms o menos patgeno de S. aureus para el hombre depender de: Antgenos presentes en la pared: presentan propiedades antifagocitarias e inducen a la formacin de estructuras pigenas, muy caractersticas. Toxinas: - hemolisinas, lisan con facilidad los eritrocitos adems de tener efectos txicos sobre otras clulas - enterotoxinas: enterotoxinas, que son responsables de casos de intoxicaciones alimentarias y cuadros de enterocolitis Enzimas (coagulasas, penicilinasas, etc). La coagulasa es capaz de coagular el plasma sanguneo. Las penicilinasas van a romper el anillo B-lactmico de las penicilinas, creando resistencias frente a estos antibiticos. As pues, y en funcin de la mayor o menor presencia de estos factores de virulencia, S. aureus puede ser o no altamente patgeno para el hombre; de cualquier forma, S. aureus es frecuente en
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la mucosa nasal, en la piel (sobre todo en las manos), o en la flora bacteriana normal de la persona sana. Se exige el anlisis en todos los alimentos debiendo presentar ausencia de este microorganismo en 25 g de producto.
5.3.1. Aislamiento:
a) Se necesitar de medios selectivos que faciliten el crecimiento de estafilococos e inhiban el crecimiento de otros grmenes contaminantes. Para ello consideraremos el carcter halfilo de Staphylococcus, es decir, S. aureus es capaz de crecer en medios ricos de cloruro sdico; adems, es capaz de fermentar el manitol, lo que le distinguir de otros. Por esto, el medio especialmente utilizado es el medio manitol salado o medio Chapman, que va a impedir el crecimiento de muchsimos otros microorganismos y la fermentacin del manitol diferenciar S. aureus del resto de Staphylococcus. b) Si partimos de muestras no contaminadas se puede utilizar agar sangre que permita observar las caractersticas de las colonias, su color y su posible hemlisis.
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