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BIOQUMICA

Prctico de Laboratorio N 5
Lpidos

Introduccin
Los lpidos son sustancias de origen biolgico, solubles en disolventes orgnicos, y casi o completamente insolubles en agua. Como consecuencia de ello, el trmino lpido abarca a un gran nmero de compuestos orgnicos con estructuras muy diversas; no obstante, poseen en comn la porcin principal de su estructura que es de naturaleza hidrocarbonada y sta es la razn de su escasa o nula solubilidad en agua. Los lpidos desempean diversas funciones biolgicas de gran importancia, debido a que: constituyen las principales reservas energticas de los seres vivos, forman parte de las membranas celulares, regulan la actividad de las clulas y los tejidos. Entre los lpidos se distinguen principalmente: cidos grasos que son cidos carboxlicos de cadena aliftica larga y pueden ser saturados o no saturados. Los Acilglicridos que corresponden a steres de cido graso y del trihidroxialcohol glicerol, siendo molculas apolares, hidrofbicas y prcticamente insolubles en agua. Ceras que corresponden a esteres de alcohol y cidos grasos, cuyas cadenas hidrocarbonadas son largas y punto de fusin elevados. Fosfolpidos que pueden ser derivados del glicerol o de la esfingosina, los primeros correspondes a los fosfoglicridos que poseen en general un cido saturado en el C-1 y un cido graso no saturado en el C-2, y los segundos son los fosfoesfingsidos que tienen un cido graso de cadena larga, grupo fosfato y un alcohol de cabeza polar. Los Esteroides, cuya estructura bsica corresponde al ciclopentano perhidrofenantreno. Y finalmente los Terpenos que estn constituidos por mltiples unidades de isopreno (2-metil-1,3 butadieno).

Materiales y mtodos
Materiales y reactivos: Tubos de ensayo y gradilla Soporte universal, Embudo Papel filtro Mechero, tripoide y rejilla Aceite Agua destilada Etanol CCl4 Glicerol Bisulfato de potasio Solucin 5% AgNO3 CHCL3 Reactivo de Hbl cido palmtico cido oleico Metanol absoluto que contiene Urea Solucin 5% cloruro de calcio NaOH 1 N Reactivo Sudn III Colesterol al 0,1 % Anhdrido actico H2SO4

Mtodo 1. Para realizar las prueba de solubilidad de lpidos se utilizarn tres tubos de ensayo en cada uno agregar 1ml de aceite posteriormente al tubo 1 agregar 3ml de agua al 2 agregar 3ml de etanol y al 3 agregar 3ml de CCl4. Agitar vigorosamente y filtrar para ver cul de estos deja una mancha de grasa

2. La identificacin del Glicerol se realizara en dos pasos. Primeramente se examina una muestra de 1 ml de Glicerol puro, describiendo olor, color y estado fsico, posteriormente se agrega 5 ml de agua y agitar, sealando su solubilidad. A continuacin se realiza el test de acrolena, en la cual se coloca 4 gotas de glicerol en un tubo de ensayo, luego agregar cristales de bisulfato de potasio, calentar el fondo del tubo cuidadosamente. En la boca del tubo colocar un papel filtro impregnado de una solucin al 5% de AgNO3 amonacal. Observar lo que ocurre. 3. En la prueba de la absorcin de halgeno (reaccin de Hbl) se dispone de cuatro tubos de ensayos a los cuales se le agrega 5 ml de CHCL3 y 2,5 ml de reactivo de Hbl a cada uno. Posteriormente se aade respectivamente 0,2 ml de aceite al tubo uno, 0,2 ml de cido palmtico al segundo tubo, 0,2 ml de cido oleico al tercero y 0,2 ml de agua al cuarto tubo.

4. Para la realizar la prueba del complejo de urea se dispone de dos tubos de ensayo, en el primero se disuelve 0,2 g de cido palmtico y en el otro tubo 0,2 ml de cido oleico. Posteriormente se disuelve cada acido con 4ml de metanol y agregar 0,6g de urea calentar si fuera necesario, enfriar y observar los cristales en el microscopio.

5.

La identificacin de grasas se realizara en dos reacciones. Inicialmente se realizar la saponificacin, en la que se agrega a un tubo de ensayo 2 ml de aceite, 1 ml de solucin 5% cloruro de calcio y gotas de NaOH. A continuacin se realiza la reaccin con Sudn, en la que se emplean dos tubos de ensayo a los cuales se le incorpora 2 ml de agua al primero y 2 ml de aceite al segundo. Finalmente se le agrega 5 gotas de Sudn II a cada tubo.

6. La identificacin de colesterol se realiza en un tubo de ensayo al que se le coloca 2 ml de colesterol. Posteriormente se le agrega 10 gotas de Anhdrido actico, mezclando bien. A continuacin se le agrega 2 gotas de H2SO4 y se deja en la oscuridad por 10 minutos.

Resultados y observaciones
1. Solubilidad de los lpidos N Tubo 1 2 3 Observaciones No se observa mancha de grasa No se observa mancha de grasa Se observa mancha de grasa

2. Identificacin de glicerol Caractersticas Glicerol puro Color Incoloro Estado fsico Lquido Solubilidad en agua Olor Soluble inodoro

Test de acrolena Caf verdoso Desprendimiento de vapores blancos y formacin de slido en el tubo. Insoluble Olor desagradable

Ecuacin reaccin de acroleina:

3. Absorcin de halgeno (Reaccin de Hbl) N Tubo Observaciones 1 Se observan dos fases una inferior transparente y una superior de color rojo. 2 La solucin es transparente. 3 La solucin se torna de color rojo. 4 La solucin es transparente.

4. Complejos de urea N Tubo 1 2 Observaciones liquido Espeso con pelotitas de color blanco

5. Identificacin de grasas a. Saponificacin N Tubo 1 Observaciones En el fondo del tubo de ensayo se observa una fase trasparente sobre la que se encuentra una pelcula de grasa dura, en la parte superior se encuentra el aceite.

b. Reaccin con Sudn III

N Tubo 1 2

Observaciones La solucin se torna completamente roja. La solucin se torna de color rojo anaranjado, siendo ms densa y con la presencia de micro-gotas de aceite suspendida en la solucin.

6. Identificacin de colesterol. Reaccin de Lieberman Burchard N Tubo 1 Observaciones Color verde claro

Conclusiones y discusin

En base a la realizacin del presente laboratorio podemos concluir lo siguiente: La naturaleza apolar de los lpidos se debe a la presencia de residuos de cidos grasos que contienen largas cadenas hidrocarbonadas alifticas, estos se disolvern solo con solventes de similar naturaleza, esto se puede observar en la actividad nmero uno de solubilidad de los lpidos, en donde el aceite solo fue disuelto por el tetracloruro, un solvente apolar, estos solventes apolares tienen la capacidad de disolver una cantidad suficiente de aceite como para dejar un deposito al evaporarse. Al realizar la experiencia de glicerol ms agua, se esperara que no se disolvieran ya que el glicerol esta dentro del grupo de los lpidos, sin embargo este se solubiliza debido a los grupos de hidrxidos que presenta, los cuales interaccionan con el agua siendo los responsables de su solubilidad. En la formacin de acrolena, producida por la deshidratacin del glicerol en presencia de bisulfato de potasio es posible evidenciarla gracias a la liberacin de gases que corresponden a la acrolena. Estos gases desprendidos al ponerlos en contacto con AgNO3 amoniacal en papel filtro, producen la transformacin de plata a plata metlica. Para analizar el comportamiento de lpidos, frente a halgenos, utilizamos el reactivo de Hubl, el cual posee el halgeno I2. Dicho reactivo permite la adicin de halgeno a los dobles enlaces de los cidos grasos no saturados, debido a esto, solo los cidos grasos con estas caractersticas reaccionaran: aceite y acido oleico. Es necesario esperar unos minutos, ya que la velocidad de incorporacin del halgeno a los enlaces etilnicos depender de la estructura del cido, halgeno utilizado, disolventes y catalizadores empleados. Los tubos restantes, con agua y acido palmtico, no reaccionan por la ausencia de dobles enlaces. Los cidos grasos saturados de elevado peso molecular forman complejos de inclusin con urea en la que la relacin de las molculas albergadoras es aproximadamente la misma que para los correspondientes alcanos. En el acido oleico, un acido graso insaturado, el doble enlace cis 9-10 y la combinacin de los tomos de carbono tetradrica y trigonal produce una molcula curvada. La molcula entera no puede entrar en un nico canal, de tal forma que la cadena C1-C9 entra en uno y la otra parte de la cadena C10-C18 se introduce en un segundo canal formando un ngulo con el primero. Las grasas reaccionan en caliente con el hidrxido sdico o potsico descomponindose en los dos elementos que las integran: glicerina y cidos grasos. stos se combinan con los iones sodio o potasio del hidrxido para dar jabones, que son en consecuencia las sales sdicas o potsicas de los cidos grasos. Las hidrlisis en presencia de alcalis se denomina saponificacin y da como producto una mezcla de jabones y glicerina. Debido a esto se observan tres fases en el tubo que se realiza la saponificacin: una inferior clara que contiene la solucin de sosa sobrante junto con la glicerina formada, otra intermedia semislida que es el jabn formado y una superior lipdica de aceite inalterado.

El Sudn III es un colorante que se utiliza para detectar especficamente las grasas, porque es insoluble en agua y en cambio es soluble en las grasas. Al ser de color rojo, cuando se disuelve tie las grasas de color rojo anaranjado. El tubo que contena agua se tio de rojo debido al tinte que posee, no obstante, la reaccin en el tubo que tena aceite se produjo de manera ms intensa al ser soluble en las grasas. En esta reaccin el colesterol sufre una oxidacin gradual, formndose una molcula de colestapolieno que posee un doble enlace adicional al colesterol, la etapa inicial consiste en la protonacin del OH del colesterol, desprendindose agua, obtenindose el ion carbonio 3,5colestadieno que constituye el primer paso de la reaccin de color. la oxidacin del ion carbonio por el so2 produce un cido colesta-hexano-sulfonico cromoforo, produciendo la tonalidad verdosa.