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FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGÍA AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE CIANOBACTERIAS, BACTERIAS PÚRPURAS, BACTERIAS VERDES PREPARACIÓN DE LA COLUMNA DE WINOGRADSKY

CURSO

: MICROBIOLOGÍA ACUATICA

DOCENTE

: M.Sc. OLGA FANCIA ARANA

NOMBRE

:

HERNANDEZ OBREGON ESWIN DAVID

CÓDIGO

: 081823 - C

CICLO

: 2012-II
Lambayeque, Mayo del 2013

y la interdependencia que llega a existir entre ellos (las actividades de un microorganismo permite el crecimiento de otro y viceversa). Zona aerobia (rica en Oxígeno). Entre cuatro y seis semanas después de su instalación. La columna aquí descrita se enfoca directamente al ciclo del Azufre. además. carbono y otros elementos. Esta columna es un sistema completo y autónomo de reciclamiento. Comenzando desde la parte más profunda de la columna: Zona anaerobia (sin Oxígeno). OBJETIVOS:  Preparación de la columna de winogradsky  Aislamiento e identificación de cianobacterias. la columna debe estabilizarse en tres ambientes básicos distintos en los que se desarrollarán comunidades bacterianas específicas en función de sus requisitos medioambientales. bacterias púrpuras. bacterias verdes. ilustra como diferentes microorganismos desarrollan sus ciclos. pero se podría realizar con los otros ciclos biogeoquimicos tales como del nitrógeno.INTRODUCCIÓN La columna de Winograsky es una demostración de cómo los microorganismos ocupan “microespacios” altamente específicos de acuerdo con sus tolerancias medioambientales y sus necesidades vitales (requerimientos de carbono y energía) y que. . mantenido solo por la energía de la luz.

Además. es la más superficial. el proceso de adaptación a los diferentes ambientes empleando diferentes estrategias para la obtención de energía. La columna de Winogradsky es un sistema que permite observar en el laboratorio el proceso evolutivo de los microorganismos. de un modo similar a lo que ocurre en la naturaleza. es decir. quien usó la columna para estudiar los microorganismos del suelo. se desarrollará una sucesión de comunidades bacterianas interrelacionadas metabólicamente. dispone de una alta concentración de oxígeno . que se podrán observar fácilmente por su distinta coloración. se pueden diferenciar tres zonas características en base a su concentración relativa de oxígeno: 1) zona aeróbica.MARCO TEÓRICO: Columna De Winogradsky Esta técnica fue desarrollada inicialmente por el microbiólogo ruso Sergei Winogradsky(1856-1953). Una vez que se prepare la columna y se exponga a la luz solar. la columna es un sistema anóxico en miniatura que puede usarse como suministro a largo plazo de bacterias para cultivos de enriquecimiento Microorganismos de la columna de Winogradsky Una vez establecida la columna.

con una menor concentración de oxígeno 3) zona anaeróbica. en la zona anaeróbica superior predominan las bacterias fotosintéticas anaerobias. Zona anaeróbica Estazona contiene H2S (procedente del fondo). inmediatamente debajo de la anterior. uno de oxígeno y otro de sulfuro de hidrógeno (H2S) Comenzando desde la parte más profunda de la columna. por lo tanto. Mientras que. las bacterias reductoras del sulfato producensulfuro. y en la columna se observan una serie de bandas de colores rojo y verde:  Bacterias rojas no del azufre: Rhodospirillum Rhodomicrobium Rhodopseudomonas Son Bacterias anaerobias fotoorganótrofas. tenemos:  Zona anaerobia (sin Oxígeno)  Zona microaerofila  Zona aerobia (rica en Oxígeno). Las bacterias verdes no del azufre son termófilas y.2) zona microaerófila. Bacterias rojas del azufre Chromatium Thiospirillum Forman una capa de color rojo-púrpura Thiocapsa  Bacterias verdes del azufre Chlorobium Pelodyctium Estas bacterias son fotolitótrofas y realizan una fotosíntesis anoxigénica. que sólo pueden realizar la fotosíntesis en presencia de una fuente de carbono orgánico Forman una capa de color rojo-anaranjado. y al producir oxígeno ayudan a mantener la aerobiosis en la zona superior de la columna. De modo que se establecen dos gradientes en la columna. no crecen en la columna a temperatura ambiente. que constituye el lecho de lodo. Las algas y cianobacterias forman una capa superficial de color verde brillante. no producen oxígeno ya que no utilizan H2O como elemento reductor sino H2S. en el fondo de la columna. que provoca el crecimiento de bacterias rojas y verdes del azufre (fotótrofosanoxigénicos). generando en este proceso sulfatos La reacción que tiene lugar es la siguiente: .

Es por esto que. de color negro intenso. aparecen microorganismos capaces de realizar respiración anaeróbica y fermentación.  Bacterias reductoras del sulfato (BRS): Desulfovibrio Desulfobacter Desulfotomaculum Desulfomonas Usan el sulfato.Estos microorganismos aparecen como zonas decrecimiento en el lodo de la columna. u otras formas parcialmente oxidadas de azufre como el tiosulfato y generan grandes cantidades de H2S en el proceso. parte de éste difunde hacia arriba a lo largo de la columna de sedimentos y es utilizado por las bacterias verdes y rojas del azufre que crecen en las zonas superiores. ácido acético. fermentan la glucosa para obtener la energía que necesitan. . a su vez.) como productos finales de esa fermentación. los sedimentos acuáticos son frecuentemente negros. Estos compuestos orgánicos serán. respirados por las bacterias reductoras del sulfato. produciendo sulfuro de hierro (II). La reacción sería la siguiente: Sin embargo. En la zona anaerobia más profunda. ácido láctico. aparecen las bacterias del género Clostridium Clostridium : Son anaerobias estrictas. etc. no todo el H2S reacciona con el hierro (II). en la naturaleza. Cuando la celulosa se agote. que precipita y da el color negro. Estas bacterias degradan la celulosa hasta residuos de glucosa y. pero también pueden desarrollarse en el agua si los fotótrofos oxigénicos son escasos. La reacción de reducción bacteriana del sulfato es la siguiente: Este H2S reaccionará con el hierro presente en el sedimento. y no empiezan a crecer hasta que el oxígeno desaparece del sedimento. produciendo una serie de compuestos orgánicos simples (etanol. usarán la materia orgánica producida por el resto de bacterias. ácido succínico. a continuación.  Bacterias fermentadoras Utilizan la celulosa del papel aportado como fuente primaria para su metabolismo.

creando condiciones similares a las que existen en un lago con sedimentos ricos en nutrientes . el de oxígeno y el de sulfuro de hidrógeno. microorganismos mixótrofos. que aparecen normalmente en hábitats acuáticos ricos en materia orgánica (estanques poco profundos. arroyos. El agua de la parte superior de la columna contiene abundantes poblaciones de microorganismos aerobios. lo que les permite moverse y establecerse en nuevas áreas.Zona microaerófila Esla zona en la que solapan ambos gradientes. Estos géneros acumulan gránulos de azufre en sus citoplasmas por oxidación del H2S. etc. Aparecen bacterias oxidadoras del azufre como Beggiatoa Thiothrix Thiobacillus Usan como fuente de carbono la materia orgánica y oxidan el H2S que llega por difusión desde las capas inferiores a azufre elemental. así como microorganismos fotosintéticos: algas (diatomeas) y cianobacterias filamentosas. El oxígeno que producen estos productores primarios difunde desde la superficie.) Suelen ser microorganismos flagelados. los gránulos de azufre elemental intracitoplasmático presentes en estas bacterias empiezan a desaparecer por oxidación total a sulfato: Zona aeróbica Esta es la parte de la columna más rica en oxígeno y más pobre en azufre. cuando la concentración de H2S es muy baja. Si se deja evolucionar el sistema. por lo tanto. La reacción química que se lleva a cabo es la siguiente (reacción de Bunsen): Son.

se puede introducir una pipeta larga para recoger una pequeña muestra de lodo o agua. que puede ser usada en microscopía y para inocular medios de cultivo de enriquecimiento para aislamiento y caracterización MATERIALES Y REACTIVOS Muestra: Agua residual Lodo residual .Bacterias que encontramos en la columna Para el estudio de las bacterias de la columna de Winogradsky.

CaSO4 (sulfato de calcio) PROCEDIMIENTO Preparación de lodo residual enriquecido. pilón. Yema de huevo cocido.De la columna: Tubo o probeta de 200 x 20 mm. CaCO3 (carbonato de calcio) como agente reductor. Aserrín fino. Papel periódico remojado y desmenuzado. Hojas secas. Mortero. Colocar en el mortero la yema de huevo más el polvo de las alas de insecto y hojas secas. Alas de insectos. Cuchara. . Reactivos Extractos de levadura.

Agregar luego lodo residual no enriquecido. Agregar aserrín fino. siguiendo el mismo proceso anterior. Cubrir luego con una tapa de vaselina. . aproximadamente un tercio de la probeta. evitando la formación de burbujas. unos 3cm aproximadamente. tratando de no manchar las paredes ni formando burbujas. Agregar agua residual. Agregar luego lodo residual. Luego agregar el papel periódico y mezclar.Homogenizar el contenido. hasta 1/3 de ella. Agregar reactivos. Preparación de la columna de Winogradski. y homogenizar lo mejor posible. Agregar el lodo residual enriquecido a la probeta. formando una mezcla homogénea.

Cubrir la probeta con doble papel de aluminio y amarar fuertemente para asegurar un ambiente anaerobio. Incubación: Colocar el tubo en posición vertical con luz artificial continua. Sacar muestra de agua. . por 2 semanas. Del aislamiento e identificación: Retirar cuidadosamente el papel aluminio de la probeta. de las paredes de la probeta (muestra 1) a viales estériles. retirar la vaselina.

Identificación y Resultados RESULTADO FINAL DE NUESTRA COLUMNA. también realizar el mismo procedimiento (Bacterias sulfito reductoras) Hacer tinción gram de cada muestra (2 laminas).De la capa de bacterias verdes hacer un raspado de las paredes y colocar a viales con agua esteril o solución salina fisiológica esteril. Identificar por morfología. Del fondo de la probeta.Grupo 1 Zona A Zona B Zona C Zona D .

Fotografías de internet Fotografía tomada de nuestra columna .ZONA A  No se logró identificar especies de esta zona. ZONA B Se logró identificar las siguientes especies  ESPECIE: Beggiatoa sp.(bacteria sulfito oxidasa) Fotografías de internet Fotografía tomada de nuestra columna  ESPECIE: Thiobacillus sp. .

(bacteria pùrpura) Fotografías de internet Fotografía tomada de nuestra columna  ESPECIE: Rhodospirillum sp Fotografías de internet Fotografía tomada de nuestra columna .ZONA C Se logró identificar las siguientes especies  ESPECIE: Chromatium sp .

ZONA D Se logró identificar las siguientes especies  ESPECIE: Clostridium Fotografía de internet Fotografía tomada de nuestra columna  ESPECIE: Desulfovibrio (bacteria reductora de sulfatos) Fotografías de internet Fotografía tomada de nuestra columna .

 La columna de Winogradsky es una demostración de cómo los microorganismos ocupan micrositios muy específicos de acuerdo a su medio ambiente y sus tolerancias de carbono y las necesidades de energía.uaemex.pdf . RECOMENDACIONES  Se recomienda que mientras más expuesto a la luz se encuentre la columna el desarrollo de los microorganismos será mucho más rápido. LINKOGRAFÌA  http://www.  Se logro el estudio microbiológico de cada estrato y el aislamiento de un determinado tipo de bacterias.microinmuno.mx/pdf/920/92050311.htm  http://microilustres.qb.html  http://redalyc.uba.  Cada capa formada en este ecosistema representa el nicho ecológico de un grupo de microorganismos.CONCLUSIÓN.fcen. que se adapta a tales condiciones por el sustrato que metaboliza.ar/SeminarioBiodiversidad.com/2007/01/winogradsky-sergei-1856-1953.blogspot.