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UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE ZACATECAS

“Francisco García Salinas”
UNIDAD ACADÉMICA DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

“CARACTERIZACIÓN QUÍMICO - MOLECULAR DE VARIEDADES DE CHILES SECOS DEL ESTADO DE ZACATECAS”

TESIS
QUE PARA OBTENER EL GRADO DE

LICENCIADO EN BIOLOGÍA

PRESENTA

DIEGO FLOREZ GUERRERO

ZACATECAS, ZAC. DICIEMBRE DE 2013.

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE ZACATECAS

“Francisco García Salinas”
UNIDAD ACADÉMICA DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

“CARACTERIZACIÓN QUÍMICO - MOLECULAR DE VARIEDADES DE CHILES SECOS DEL ESTADO DE ZACATECAS”

TESIS
QUE PARA OBTENER EL GRADO DE

LICENCIADO EN BIOLOGÍA
PRESENTA

DIEGO FLOREZ GUERRERO

DIRECTORES DE TESIS: M. en C. Edgar León Esparza Ibarra Dr. en C. Francisco Javier Cabral Arellano CO-DIRECTORES DE TESIS: Dra. en C. Josefina Huerta García Dr. en C. Guillermo Rodríguez Hernández

ZACATECAS, ZAC. DICIEMBRE DE 2013.

AGRADECIMIENTOS

A mi Alma Mater la Universidad Autónoma de Zacatecas especialmente a la Unidad Académica de Ciencias Biológicas por permitirme concluir la Licenciatura en Biología. A mis asesores de tesis, al M en C. Edgar León Esparza Ibarrayal Dr. Francisco Javier Cabral Arellano porque sin su apoyo y conocimiento, no fuera posible la realización de este trabajo. A la Dra. Josefina Huerta García, Dr. en C. Guillermo Rodríguez Hernández, M. en C. Perla Ivonne Gallegos Flores y en especial a la M. en C. Lucia Delgadillo Ruiz por su apoyo, consejos y tolerancia, pero sobre todo por la confianza depositada en mi, para la realización de esta tesis, A todas las personas que directa o indirectamente colaboraron con la realización de este trabajo, les estaré eternamente agradecido.

DEDICATORIA

A mi PADRE porque gracias a su apoyo y consejos, el sendero de la vida ha sido más transitable, tú me formaste el coraje para seguir adelante.

A mi MADRE a quien infinitamente estaré agradecido, por todo el cariño, la tolerancia y el apoyo, tú eres la LUZ que me permite seguir avanzando por el camino de la superación.

A mi HERMANO quien ha sabido ser un ejemplo a seguir, la vida me premio con el mejor compañero, el mejor aliado y el mejor consejero para las encrucijadas de la vida.

Sabiendo que jamás encontraré la forma de agradecer su constante apoyo y confianza, sólo espero que comprendan que mis ideales, esfuerzos y logros han sido también suyos e inspirados en ustedes.

ÍNDICE
LISTA DE FIGURAS ................................................................................................ i LISTA DE TABLAS ................................................................................................. ii RESUMEN .............................................................................................................. iii ABSTRACT ............................................................................................................ iv I.- INTRODUCCION ................................................................................................ 1 II. ANTECEDENTES ............................................................................................... 4 2.1 Nomenclatura del Chile. ........................................................................... 4 2.2 Origen del Chile. ....................................................................................... 4 2.3 Propiedades benéficas del Chile. ............................................................. 6 2.4 Chiles secos (Capsicum). ......................................................................... 8 2.5 Características y variedades del Chile. .................................................... 9 2.5.1 Chile Ancho (Chile Poblano). ...................................................... 10 2.5.2 Chile Mirasol o Guajillo. .............................................................. 11 2.5.3 Chile Pasilla. ............................................................................... 12 2.5.4 Chile Mulato. ............................................................................... 13 2.5.5 Chile Puya. .................................................................................. 13 2.6 Situación internacional del Chile en México. .......................................... 14 2.7 Zacatecas, líder nacional en producción de Chiles secos. ..................... 18 III. JUSTIFICACIÓN .............................................................................................. 21 IV. HIPÓTESIS ..................................................................................................... 23 V. OBJETIVOS ..................................................................................................... 23 VI. MATERIALES Y MÉTODOS ........................................................................... 24 6.1 Material biológico.................................................................................... 24

.................... 6............................................................................................................ ............. . 6.......... .................... 6...............................................................................................................2 Extracción de ADN con CTAB............... 25 6.................. .................6...................... 35 VII.....¡Error! Marcador no definido..............................................10 Análisis de los datos............ .. 43 X.....11 Determinación de humedad................. 26 6....... 31 6.................. 42 IX..... 36 VIII...... APÉNDICE ............. LITERATURA CITADA ..............13 Determinación de extracto etéreo............................. 33 6............................................................. 27 6............ ..........9 Secado de geles de poliacrilamida 28 30 30 6.. ...........5 Extracción de proteínas solubles de Chiles...... ................................. .....................3 Electroforesis de ADN en geles de agarosa....... ..............................15 Determinación de cenizas..........4 RAPD´s (Random Amplification of Polymorphic DNA)...............14 Determinación de fibra cruda....................... ¡Error! Marcador no definido.12 Determinación de proteínas. CONCLUSIONES.....7 Electroforesis de proteínas en geles de poliacrilamida desnaturalizantes 6.............. 34 6............ ¡Error! Marcador no definido................... RESULTADOS Y DISCUSIÓN ....8 Tinción de bandas de proteína con colorante azul de Coomassie 6.. 46 ...6 Medición de la concentración de proteínas.......................... 32 6........

Figura 11. Figura 12. Figura 4. Figura 3. Figura 2. Figura 5. Figura 9. Chile Mulato en fresco (izquierda) y Chile Mulato deshidratado (derecha). Análisis proximal de variedades de Chiles secos. 11 12 12 13 13 26 27 29 31 32 33 35 37 39 40 i . Fuente de poder (izquierda) y cámara de electroforesis (derecha). Figura 14. provenientes de la zona centro del estado de Zacatecas. Figura 8. Chile Pasilla en fresco (izquierda) y Chile Pasilla seco (derecha). Espectrofotómetro.LISTA DE FIGURAS Pág. Figura 15. Chile Puya en fresco (izquierda) y Chile Puya seco (derecha).Unidad de destilación rápida. Figura 10. Chile Mirasol en fresco (izquierda) y Chile Mirasol deshidratado (derecha). Figura 13. Figura 6. Figura 1. Figura 7. Digestor de proteína cruda. Crisol con muestra en la Mufla. Chile Ancho (izquierda) y Chile Mulato (derecha). SDS-PAGE al 13 % de proteínas de Chiles (teñido con azul de Coomasie). Secado de geles de poliacrilamida. Electroforésis en gel de agarosa al 1 %. Cámara de electroforesis sumergida.

Rendimiento de proteína en semillas de Chiles. Tabla 4. Tabla 1. Tabla 2. Cantidades para preparar dos minigeles de poliacrilamida.LISTA DE TABLAS Pág. Índices de producción agrícola del Chile en el territorio Mexicano. Buffer CTAB. Índices de producción agrícola del Chile en el Estado de Zacatecas. provenientes de la zona centro del estado de Zacatecas. Tabla 3. 17 19 25 29 38 40 46 ii . Tabla 5. Tabla 6. Análisis proximal de variedades de Chiles secos. Detalle de valores para realizar la curva patrón de proteínas. Tabla 7.

el Chile. algunas de las variedades más importantes de Chiles secos de Zacatecas. Mirasol y Puya. resultando en mejores ingresos para los mismos. Dada la biodiversidad de los Chiles y su diferenciación de acuerdo a su hábitat. como los son: los Chiles Ancho. con el fin de conocer sus características que coadyuven e incidan en los productores de Chile a resguardar y registrar sus germoplasmas.RESUMEN En México. es una de las hortalizas de mayor importancia económica y social. se han ido perdiendo y otras han sido víctima de la biopiratería. apartado y empacado. bioquímica y química. ya que esto les permitiría definir las condiciones de almacenamiento y el tiempo que puede conservarse el producto en el mercado. representa una importante ventaja para los productores. deshidratado. ya que actualmente muchas de las variedades de Chiles nativos. conocer la calidad de los Chiles antes de ser comercializados. ya que cada hectárea plantada requiere de un promedio de 150 jornales. es resultado de la eficiencia en los sistemas de producción. se realizó un primer acercamiento para caracterizar de manera molecular. de las grandes extensiones de tierras que se destinan para ello y del esfuerzo de los campesinos que realizan para obtener el producto. más los requeridos en el acarreo después de la cosecha. Por lo que muchas de ellas. así como mejorar su producción y calidad. ya que forman parte indispensable del régimen alimenticio del pueblo Mexicano al consumirse tanto en estado fresco como seco (deshidratado). . como productora de Chiles secos. no se han registrado. sin perder sus características organolépticas y contenido nutricional. iii . ya que produce más del 60 % del total nacional. Todo ello. Zacatecas es líder nacional en la producción de Chiles secos. se crea la necesidad de diferenciar y caracterizar el germoplasma existente. La trascendencia de esta entidad. es la opción agrícola que ofrece mayores ingresos y además es la principal fuente de empleo en el medio rural. Es por ello que en el presente trabajo. contribuyendo así de manera sustancial con el 35 % del PIB del estado. El cultivo del Chile. Así mismo.

Chili. So many of them have been lost and others have been victims of biopiracy. since this would allow them to define the storage conditions and the time the product can be kept on the market. is the option that offers higher agricultural income and is also the main source of employment in rural areas. That is why in this paper. large tracts of land are used for this and the efforts of the farmers made to obtain the product. thus contributing substantially to 35 % of the state GDP. without losing its organoleptic characteristics and nutritional content. iv . Also. the need to differentiate and characterize the existing germplasm is created. The significance of this entity. All this in order to know their characteristics that contribute and impact on producers of Chili to protect and register their germplasm and improve production and quality. have not been registered. as a producer of dried chillies. Puya and Mirasol. as it produces more than 60 % of the national total. given the biodiversity of Chillies and differentiation according to their habitat. some of the most important varieties of Zacatecas dried chillies. is one of the vegetables of greater economic and social importance. and packaging section. biochemistry and chemistry. as they form an indispensable part of the diet of the Mexican people when consumed both fresh and dry (dehydrated). is a result of efficiency in production systems. Zacatecas is a national leader in the production of dried chillies. resulting in better income for them. since each acre planted requires an average of 150 days. as are the Chiles Ancho. know the quality of the Chillies before being marketed. plus required fees after the harvest. represents an important advantage for producers. The culture of Chili.ABSTRACT In Mexico. As currently thousands of varieties of native Chillies. dehydrated. a first approach was performed to characterize molecular.

Esta planta es originaria de las regiones cálidas. Los descubrimientos arqueológicos en Teotihuacán han revelado que el cultivo de Chile fue primero que el de jitomate y maíz. su domesticación data desde hace ocho mil años (Rojas. 1 .Tzys” (de Ak hierba y Tzyr picante). Capsicum chínense. “Cocopatic” (muy picantes) y “Cocopalatic” (picantísimos). tomate verde (Physalis coztomatl) y el tabaco (Nicotiana tabacum). Capsicum frutenscens y Capsicum annuum. templadas y frías de México (Ruiz et al. Capsicum pubescens. 1980). Junto con el de aguacate (Persea americana). Los estudios taxonómicos coinciden en que son cinco las especies cultivadas: Capsicum baccatum. También en la época Prehispánica. por que define. “Zak . siendo un ingrediente indispensable en la cocina Mexicana. Por ejemplo. caracteriza y hace único el sabor del platillo. por lo que la dieta diaria de la sociedad Prehispánica consistía aparte del chile. los indígenas creían que los Chiles tenían propiedades medicinales y nutritivas..INTRODUCCION El Chile Capsicum annum y frutescens.I.. junto con la papa (Solanum tuberosum). Todos los Chiles son del genero Capsicum de la familia de las solanáceas. de todas ellas. en nuestros días los nutriólogos han confirmado dicha teoría. 1997). Esta planta se cultiva y consume desde la época Prehispánica.. tomate (Solanum lycopersicon). Su consumo puede ser en fresco o seco y como verdura o condimento. Durante esta época. en maíz y frijol (Ruiz et al. 2008). Casseres. 1991). laúltima es la más importante. GRIN por sus siglas en ingles. 1977. pertenecen a la familia de las solanáceas y a la subfamilia solanoideae e incluye 3 mil 211 accesiones (Red de trabajo e información de Recursos Genéticos. los Mayas nombraron así a una deidad cósmica que aludía a las características del Chile. se verifican términos en Náhuatl para categorizar la gran variedad de Chiles según su grado de picor como: “Conoc” (picantes).

4 % de los Chiles en el mundo.Pakistán (5. Perú (7. Turquía (7. en términos de porcentaje y son: India (50.5). la producción mundial de Chile en fresco o verde fue de 25.3).9 megatoneladas (MT = 1000000000 Kilogramos). el rendimiento fluctúa alrededor de 1 tonelada por hectárea. siendo la especie Capsicum annum L. en términos de porcentaje.5).6).5). Indonesia (3.5) e Italia (1.De acuerdo con las estadísticas de la Organización para la Alimentación y la Agricultura (FAO.4).3). China(11.1).6). En México.7 millones de hectáreas (ha). Estados Unidos de América (3. El Chile es 2 . México ocupo el noveno lugar mundial en la producción de Chile seco. Vietnam (3.2). México (6.4). Myanmar (3. con una producción de 58 mil toneladas en una superficie cultivada de 33 mil hectáreas.7) y Hungría (2. ya que según el Informe del Plan Rector Nacional del Sistema Producto Chile (PRN-SPCH. donde por lo regular se produce a cielo abierto. Etiopia (5.0). España (4.3).México (2. Éste es cultivado en 104 países y en aproximadamente 1. el cultivo del Chile. Egipto(1. El rendimiento varía desde 1 hasta 280 toneladas(ton) por hectárea en Etiopia y Holanda. Los diez países con mayor producción a cielo abierto. en países en desarrollo. Nigeria (2. La producción del Chile seco es de suma importancia económica en México.4). 2008). se enlistan a continuación: China (50. En contraste. tanto en estado fresco como deshidratado. la más utilizada debido a la diversidad de tipos existentes en el País y a las distintas formas en que se puede consumir.2). Republica de Corea (1. El extraordinario rendimiento que registra Holanda es debido a que se produce bajo sistemas de protección agrícola. Cabe señalar que China es el productor líder al cosechar el 50. Bangladesh (8. Diez son los países líderes en la producción de Chile seco. 2007).8).4). respectivamente. ya que forman parte indispensable del régimen alimenticio del pueblo Mexicano.8). es una de las hortalizas de mayor importancia económica y social.

que se cultiva principalmente en la región del altiplano. de las cuales se obtuvo una producción de 284. contribuyendo así de manera sustancial al Producto Interno Bruto (PIB) del estado. En el ciclo agrícola primavera-verano del 2001.187 ton de Chile verde.4 ton de Chile seco. 2002). 2002). a pesar de que existen tecnologías que han sido generadas y validadas (Cabañas. ya que cada hectárea plantada requiere de un promedio de 150 jornales. en Zacatecas se cultivó una superficie de 32. los de tercera calidad o pintos.837. Zacatecas es líder nacional en la producción de Chile seco. 2002). que todas las especies hortícolas. más los requeridos en el acarreo (después de la cosecha). apartado y empacado (Bravo et al. deshidratado. equivalente a 56..rico en vitaminas. cubriendo el 25 % del área de riego en la entidad. que son cosechados se utilizan en la elaboración de moles y el 50% restante se consume directamente. minerales y es el más alto en su contenido de vitamina C. se destinan a la industria de colorantes y de salsas (Gómez y Schwentesius. con un valor de $1’109. 1994). El 50 % de los Chiles de primera y segunda calidad.396. 3 .032 ha. El Chile para secado (tanto en planta como deshidratado) es la opción agrícola que ofrece mayores ingresos y es la principal fuente de empleo en el medio rural. ya que en éste se produce más del 60 % del total nacional.000 (SAGARPA. Cabe mencionar que los rendimientos que se obtienen en esta hortaliza son bajos.

aun sin cosecharse se le conoce como Chile Ancho) (Almanza. Algunos botánicos lo relacionan con la palabra griega “Kapto” que significa morder. los términos en Náhuatl: “Cococ”. que son: picantes. Actualmente. El Chile pertenece al género Capsicum.1 Nomenclatura del Chile. Desde la época Prehispánica. se utilizaban para categorizar la gran variedad de Chiles según su grado de pungencia o picor. 2012).2 Origen del Chile. La palabra española “Chile” es la que sigue siendo utilizada en México y América central. ANTECEDENTES 2. en el lenguaje popular en México. muy picantes y picantísimos. Güero o Largo). “Cocopatic” y “Cocoplatic”. 1993). en Francés Pimenten Reage o Poive Rouge. denominado así en el siglo XVI por los herbarios europeos y es miembro de la familia de las plantas solanáceas. En Ingles se llama Chili Pepper. La historia del uso Prehispánico del Chile ha quedado registrada en algunos textos escritos acerca de las comidas de los Mexicas por Fray Bernardino de 4 . En varias lenguas occidentales el Chile lleva un nombre relacionado con la pimienta. se utilizan varios nombres según su: a) apariencia (Chile Verde. El cultivo del Chile en México es de suma importancia y su nombre proviene del Náhuatl “Chilli” que fue modificado a Chile por los españoles o como Pimiento en algunos países de Europa Occidental.II. Aunque los Arahuacos (grupo cultural de la zona del Caribe) lo denominaban Ají o Axi (Zegbe. b) procedencia (Poblano o Jalapeño) o c) etapa de madurez (por ejemplo el Chile Poblano se le llama Chile Verde y cuando el fruto se ha secado. 2. en Italiano Peperone y en Portugués Pimentao Picante.

y domesticado por primera vez en México. por lo que hoy en día. calabazas y Chiles (Gómez y Hernández. Junto con la calabaza. y se convirtió en un cultivo de uso mundial. en la cual se hallaron especímenes de cacahuates. Asia y África por los conquistadores Españoles y Portugueses. el Chile fue la base de la alimentación de las culturas de Mesoamérica. Las especies domesticadas evolucionaron de diferentes especies espontaneas.C.) en la cueva de Coxcatlan Puebla y en Ocampo Tamaulipas (Long-Solís. el maíz y el frijol. El Chile fue llevado de América a Europa. muchas de las variedades de Chile son el producto de las modificaciones del hombre. suele crecer como perene en zonas tropicales. fechada en 6000 a. 1998). en un estudio citogenético realizado por Bárbara Pickersgill (1998). Este producto también figuró entre los tributos fijados por el “Tlatoani” de México. según se aprecia en el códice Mendocino (Long-Solís. antes ydurante los primeros tiempos de la conquista. originado entre Perú y Bolivia. esto con base al hallazgo de restos de Chile fechados (5000 a 7000 a.C. en los Andes y en una excavación en Paloma Perú. Es probable que el Chile fuera el primer cultivo domesticado en Mesoamérica y las semillas de Chile más antiguas que se encontraron eran pequeñas. Por otra parte. 2000). que describió desde los manjares exclusivos del emperador.Sahagún.C.También restos arqueológicos verifican su antigüedad desde 2500 a. La domesticación de esta variedad ocurrió en Mesoamérica con una 5 . 1998). hasta los más modestos bocados de los plebeyos y en ese abanico de platillos el ingrediente común era el Chile. estableció que el Chile se desarrolló de un material ancestral que contenía un cariotipo asociado con plantas del sur de México y Guatemala. que es una planta anual que sin embargo. Casi todos los Chiles cultivados en México pertenecen a la variedad annum.

vitamina A y C. 6 . que es una de las verduras que tiene más vitamina C y que está implicada en la absorción de hierro (Raud et al.. que en cualquier otro País (Pozo y Ramírez. Los beneficios del Chile se deben principalmente a su alto contenido de capsinoides. completa la dosis diaria recomendada de esta en proporción de una cucharada cafetera. Además forma parte de la comida básica y cabe resaltar que hay más variedades de Chiles cultivados en México. Éste es originario de la cuenca del Amazonas y se cree fue introducido a la península de Yucatán por Cuba. Que es el grupo de más importancia en el mundo y de distribución geográfica más amplia. 2. Este se distingue del resto de los Chiles. Como el pimiento morrón. donde el Chile rojo en polvo. pero lo ingerimos en cantidades más pequeñas. como el Habanero o el Manzano. Quintana Roo y Yucatán. Otras especies cultivadas en México. 2003). Chiapas y algunas zonas de Michoacán. Los Chiles de color naranja. y también es conocido como ciruelo o perón. La vitamina A juega un importante rol en la visión y crecimiento de los huesos. De hecho los Chiles tienen más vitamina C que muchos productos. este Chile no se puede secar o deshidratar. Otra especie es la Capsicum pubescens (Chile Manzano) originario de los andes y que se cultiva en México a pequeña escala. lo que reduce el riesgo de degeneración muscular. por tener semillas negras y al igual que el habanero.evolución probable de la variedad glabriusculum / aviculare. Veracruz. 1991). por lo que se consume solamente fresco. estos se cultivan en Campeche.3 Propiedades benéficas del Chile. principalmente en lugares altos que superan los 2000 metros sobre el nivel del mar (msnm) como en la sierra de Puebla. es el Capsicum chinenese (Chile Habanero). son buenos en contenido de leucina y Xantina.

es usado en parches musculares para dolores.La capsaicina es la sustancia química que le confiere a todo Chile su pungencia o picor y está concentrada en la sección transversal del Chile. así como 7 . ayuda a tratar la hipotermia. el Chile además de ser un alimento que nos proporciona nutrientes. mecánicos y térmicos. 1992). incrementa la circulación sanguínea. Por otro lado las oleorresinas. que provocan estímulos: químicos. provienen de Chiles picantes deshidratados y se utilizan comercialmente en la industria alimenticia. La capsaicina da lugar a un grupo de alcaloides naturales llamados capsinoides. y como es rico en vitaminas E y B.. Con todas estas propiedades. provee al cuerpo con efectos antiinflamatorios. La capsantina es el ingrediente que mas determina la cantidad de pigmento en un Chile. En la industria avícola. su consumo produce un color amarillo fuerte en las yemas de los huevos y en la piel del pollo. están determinadas por el tipo y cantidad de capsinoides presentes en cada variedad de Chile. tiene otros beneficios para la salud entre los que se encuentra que es auxiliar en los problemas de caspa y la resequedad del cuero cabelludo. estimulan el sistema nervioso y son antioxidantes (Rumsfield y West. Respecto a los capsinoides. anaranjado o amarillo. salchichas y mortadelas. reduce el dolor de picaduras de insectos. estos nos ayudan a dilatar los vasos sanguíneos. ya que acelera el metabolismo. limpia los senos nasales y quema calorías. clasificados como toxinas neutrales. Ahora bien el sabor y la potencia de la pungencia. 1991). es auxiliar en la prevención del cáncer. para agregar un sabor picante a la comida y en la farmacéutica como estimulante. ya que produce un color rojo vivo. Algunos empleos de la oleorresina Capsicum son principalmente como condimento en la preparación de ciertas carnes frías como chorizos. ya que estas vitaminas actúan como antioxidantes evitando que se generen radicales libres (Deal et al.

se aplica como estimulante y en investigaciones medicas recientes. no al tabaco en sí. como venados. como el Chipotle y el Chile Morita. 1991). que se emplea principalmente como pigmento para darle un sabor sutil a los alimentos. en la agricultura se usa como repelente en los productos químicos aplicados para evitar daños por animales intrusos. Se utiliza el término "Chile seco" para designar una gran variedad de Chiles que se dejan madurar y deshidratar. Existen otros diferentes tipos de oleorresinas. algunos se hacen ahumados. Por otra parte en la industria farmacéutica. ya que es un pigmento importante en la fabricación de lápices labiales.. entre otros. 2. coyotes o mapaches. por el sabor agradable que obtiene en combinación con el tabaco.también condimenta la mayonesa y la salsa cátsup. no es retenible por los filtros antigás. siendo esta destinada estratégicamente a servir de gas rompe mascaras provocando toses y estornudos que obliguen a quitarse la careta protectora.. 2005). La irritación de garganta que molesta a los fumadores se debe a la oleorresina Capsicum.4 Chiles secos (Capsicum). Guajillo y Pasilla se destinan principalmente a la industria 8 . como al ron agregándole un sabor agradable. que por ser una molécula menor. Los Chiles Mulatos. La oleorresina Capsicum tiene más usos. colorantes y polvos faciales (Méndez et al. que también son utilizadas en la industria como la oleorresina Paprika. Además sus tonos de color rojo son apreciados en la industria cosmética. donde se emplea en la fabricación del llamado gas Pepper. Ya secos. En la fabricación de aerosoles defensivos. pero dotada de igualpoder picante. En la industria tabacalera se utiliza en la elaboración de cigarros. el Mulato y el Guajillo. estos Chiles son muy utilizados en la cocina Mexicana. como la industria militar. como el Chile Ancho. se ha comprobado su valor para bloquear la transmisión del dolor (Alameda et al. Mirasol.

9 . 2. dependiendo de la intensidad del sol y la temperatura. son de color blanco y a veces púrpura. La paja permite el paso de aire y elimina cualquier exceso de humedad para evitar que los frutos se pudran. hermafroditas y se forman en las axilas de las ramas. en pasta y como salsas. Las flores son perfectas. Las hojas son planas. curtidos. deshidratados. Sus raíces llegan a profundizar entre setenta y 120 centímetros. son de color verde obscuro. El Chile es una planta de comportamiento anual y perenne. Su altura normal es de sesenta centímetros. en los que los Chiles se ponen a una temperatura de 70 ºC durante treinta horas. Existe una amplia variedad de productos industriales hechos a partir del Chile que se usa en la cocina y en el mercado los hay congelados. Se extiende una capa de paja o ramas secas.se voltea el Chile para que la parte de abajo también reciba los rayos del sol. Los Chiles se secan al sol o en plantas deshidratadoras. Cuando se seca la parte superior. La cosecha de Chile se hace manualmente cuando se va a destinar para el deshidratado. enlatados. es decir. El secado bajo este método dura de diez a veinte días. simples y de forma alargada y ovoide. se acomodan en un lugar plano con un ligero declive para evitar encharcamientos en caso de que llueva. Tiene tallos erectos con ramas. El secado en máquinas es más rápido y práctico cuando se trata de grandes cantidades. Además el Chile se ha utilizado con fines medicinales (Almanza. en el caso del Chile Pasilla y Mulato. 1993).5 Características y variedades del Chile. En general se van cortando a medida que los frutos cambian de color. por lo general de verde a rojo.artesanal del mole. se cortan cuando cambian de color verde a café obscuro. donde se coloca el Chile maduro recién cosechado. Hacia los lados también se extienden hasta un metro con veinte centímetros. Si se van a poner al sol.

2012). En Aguascalientes y algunas regiones del Bajío recibe el nombre de Chile Joto y en Durango de Chile Corazón. Para germinar en nueve o doce días. o el menos.1 Chile Ancho (Chile Poblano). es el nombre que se da en México a una de las variedades frescas del Capsicum annuum. por lo que no es muy picante.El color verde de los Chiles se debe a que acumulan grandes cantidades de clorofila. se prepara un almácigo o semillero para luego cambiar la planta a su lugar definitivo. El Chile Poblano es una variedad de Capsicum que tiene un fruto muy grande y con bajo contenido de capsaicína. Los Chiles pican debido a uno de ellos. debido a la presencia de ciertos pigmentos. 1992). También en estado fresco o seco recibe en algunas regiones de México el nombre de Chile Ancho. Este sistema permite un mejor control de las condiciones ambientales. es ideal para preparar Chiles rellenos. sobre todo si el aire es seco. tiene riego constante y permite seleccionar las mejores plantas (Zegbe. algunos Chiles se hacen curvos y toman un color rojo o amarillo. Cuando maduran. el Chile necesita climas cálidos para desarrollarse bien.5. porque en este caso se detiene el crecimiento de la planta. Con temperatura superior a los 35 ºC. El almácigo está tapado. la humedad y la salud de la planta. puesto que por su tamaño. necesita una temperatura de 24 ºC. se mide el contenido de capsaicina en el fruto (Rumsfield y West. Para determinar cuál es el Chile más picoso del mundo. Para su cultivo. llamado capsaicina. 2.En el sistema de siembra por trasplante. El Chile Poblano seco produce dos 10 . Se le emplea intensivamente en la gastronomía Mexicana. Es sensible a las bajas temperaturas. o los que están entre esos dos extremos. Lo importante es que la temperatura no baje de 10 ºC. como la temperatura. la fructificación es débil o nula. El Chile Poblano.

variedades. es el más utilizado dentro del país en cualquier tipo de platillos preparados con carnes rojas y blancas. Figura 1.5. de piel tersa y con forma triangular alargada. Se trata de los Chiles Mulatos y los Chiles Anchos. 11 . salsas picantes. además es un ingrediente fundamental en la preparación de moles. El Chile Ancho es rojizo a contra luz y el Mulato es café (Figura 1) (Long. Junto con el Chile Ancho. etc.2 Chile Mirasol o Guajillo. Chile Ancho (izquierda) y Chile Mulato (derecha). Es de color café rojizo. La diferencia entre ambos es de orden genético y se distinguen por su color y sabor. aunque después es necesario colarlo para eliminar el exceso de residuos de la epidermis. 2. Por lo común. se usa mezclado con otros Chiles para dar mejor sazón a las salsas y debe de estar siempre remojado para poder molerlo perfectamente. 1998). adobos. Mide en promedio 10 cm de largo y 3 cm en la parte más ancha (Figura 2).

12 .3 Chile Pasilla. Para no confundirlo con el Chile Pasilla de Oaxaca. 2. Es de color café negruzco. Su forma es alargada y el fruto mide de 15 a 20 cm de largo y de 2 a 3 cm de ancho. se puede cocinar en rodajas. Chile Mirasol en fresco (izquierda) y Chile mirasol deshidratado (derecha). que adquiere al secarse. se elabora una gran variedad de salsas y diferentes tipos de moles y adobos. similar al de la uva pasa. Su nombre se debe al aspecto arrugado. Con él. Chile Pasilla en fresco (izquierda) y Chile Pasilla seco (derecha).Figura 2. Suele acompañar distintos platillos con carnes rojas y blancas. frito y servido como guarnición (Figura 3). se le conoce también como Chile Mexicano. arrugada y de sabor picante. Figura 3. con una superficie brillante.5.

aunque es más delgado y picante. El fruto seco es muy parecido al Chile Guajillo. algunas veces resulta picoso.5. Es un tipo de Chile Poblano que se comercializa seco o deshidratado. El fruto fresco es conocido en la ciudad de México como Chile Guajillo Puya o Guajillo del que pica. 2. Es muy parecido al chile Ancho. Chile Mulato en fresco (izquierda) y Chile Mulato deshidratado (derecha). 13 .5 Chile Puya. El fruto seco presenta una epidermis gruesa y el sabor es por lo regular dulce. Figura 5.2. pero con un sabor muy particular.5.4 Chile Mulato. Es típico en la preparación del mole Poblano y otros platillos (Figura 4). Mide en promedio 12 cm de largo y 7 cm de Ancho. Chile Puya en fresco (izquierda) y Chile Puya seco (derecha). Figura 4. cercano al chocolate. mide aproximadamente 10 cm de largo y 2 cm de ancho (Figura 5).

6 % de 1980 a la fecha. El consumo de Chiles por persona es mayor al consumo de arroz y de papa que en 2001 se registró un consumo per cápita de 8. Esto representa un incremento del 17. Sinaloa y Zacatecas como principales productores del cultivo con más de la mitad del volumen nacional en su conjunto. mientras que Zacatecas es el de mayor superficie sembrada. 2011). reportando 7 toneladas por hectárea (SAGARPA. El Chile en verde (fresco) sigue siendo. lo que ha abierto camino poco a poco a los Chiles picosos (Pozo y Ramírez. por una parte. 2006).7 kilogramos. debido a la gran cantidad de inmigrantes que lo demandan y por la población en general. Jalapeño. México destaca a nivel mundial por tener la mayor variabilidad genética de Capsicum annum. de Árbol. Pasilla. El consumo en Países. en todo el mundo. Guajillo. En el caso de Sinaloa. una importante fuente de alimentación para la población Mexicana (FAOSTAT. Ancho. Cabe mencionar que el orden de importancia se modifica al comparar los rendimientos de estos tres estados. En 2009 destacaron Chihuahua.6 Situación internacional del Chile en México. etc. junto con el maíz y el frijol. entre los que destacan el Serrano. Mientras que desde hace muchos siglos ha sido consumido principalmente en Países en vía de desarrollo como los Latinoamericanos.2. El Chile es una especie que ha tenido un considerable aumento de consumo en los últimos años. un estado con alto grado de tecnificación. 14 . como los de la Unión Europea y Estados Unidos ha ido en aumento. en Chihuahua 20 toneladas por hectárea. ya que existen más de 40 diferentes tipos de Chiles que han dado origen a un gran número de variedades. Africanos y Asiáticos. se registró una cosecha de 40 toneladas por hectárea. 2003). que ha empezado a dar sabor a sus platillos con el Chile Pimiento o dulce.

44 toneladas. Los Chiles frescos importados en 2005.960 toneladas. Abarcando los tres más del 64 % del volumen y en 73 % del valor económico de las exportaciones mundiales. tanto en Chiles enteros como molidos. De acuerdo a las estadísticas de los últimos años. representaron el 85. seguido de España y Holanda.55 % del total de las importaciones. época en las que las producciones en Estados Unidos y Canadá son bajas. ya que frecuentemente presentan residuos de pesticidas. En el 2010 se registró una exportación de 15 . con un volumen de 432.163. eso contrasta con las exportaciones de Chile en verde (fresco). y por lo tanto los Chiles Mexicanos pueden competir con ventaja.459.000 dólares (SAGARPA.431. México se ubicó como el principal exportador de Chiles en el mundo. 2011). especializados en la producción de Chiles secos en donde el productor ha ido adaptando e innovando a sus condiciones.57 dólares (SAGARPA. los Chiles secos son un componente económico importante para el consumo nacional. está limitada a la alta exigencia y severas sanciones con relación a las condiciones de inocuidad y seguridad. las cuales en 2003 representaron una aportación de 424. para 2010 se registró una exportación con valor aproximado de 1. revelan una marcada tendencia a importar Chiles secos y a exportar Chiles frescos. Esta condición de Chiles deshidratados.151.930. Hay estados y regiones productoras.Por otra parte. La exportación de Chiles deshidratados. debido al uso de sistemas artesanales y tradicionales en el secado y empacado de los Chiles. mecanismos y procesos que han permitido ofertar una amplia gama de Chiles. 2011). En 2004. con 41. según datos de la FAO. Debido a esto más del 95 % del total de las exportaciones se realizan durante el periodo comprendido de diciembre a abril. fragmentos de insectos o roedores. permite almacenar el producto por varios meses y así buscar mejores oportunidades en el mercado.

2011). así como de la disponibilidad del mismo en la época oportuna (SAGARPA. logra cosechas de excelente calidad durante los meses invernales. 16 . Respecto al valor de las exportaciones de Chiles. el rendimiento (ton/ha).2. sobresale Holanda que con un menor volumen que los de España y México. tomando en cuenta la superficie sembrada (ha). Cabe mencionar que los precios de venta de los Chiles.735. La tabla 1 representa los índices de producción agrícola de la modalidad en riego y temporal de Chile en el territorio Mexicano.379. la superficie cosechada (ha). Esto se debe principalmente a que la producción de Holanda al ser de invernadero con condiciones controladas.80 toneladas lo que mantiene a México como el principal exportador de Chile en el mundo. con lo que se obtiene los mejores precios en los mercados internacionales. el precio por tonelada y el valor de su producción (miles de pesos). la producción (ton). recibe mayor proporción del valor de las exportaciones. dependen en gran medida del tipo y la calidad.

48 6.87 210.219.52 418.87 427.38 110.09 52.33 85.694.704.693.191.67 5.740.632.00 11 5.435.52 85.24 84.463.30 491.05 3.07 15.01 23.50 651.91 23.36 801.53 11.19 3.91 1.61 25.73 152 164.13 36.8 478 3 3.003.312.03 17.934.478.02 4.1 1.13 2.435.688.04 1.27 5.60 15.50 6.336.188.821.881. Superficie Sembrada (ha) Aguascalientes Baja California Baja California Sur Campeche Chiapas Chihuahua Coahuila Colima Distrito Federal Durango Guanajuato Guerrero Hidalgo Jalisco México Michoacán Morelos Nayarit Nuevo León Oaxaca Puebla Querétaro Quintana Roo San Luis Potosí Sinaloa Sonora Tabasco Tamaulipas Tlaxcala Veracruz Yucatán Zacatecas 781 579 1.91 5.709.26 6.52 20.450.16 17.70 1.57 2.40 18 26.9 32.48 Valor Producción (Miles de Pesos) 60.048.08 4. 17 .41 2.189.445.625.548.771.258.92 79.94 11.428.7 3.53 25.723.624.43 65.971.178.044.563.606.979.75 1.606.64 25.50 870.103.48 282.7 26.750.01 17.37 26.63 2.38 24.426.14 470.95 117.564.847.00 2.344.75 83.264.15 56.80 Rendimiento (ton/ha) 16.32 5.5 3.27 10.54 36.140.50 3.15 11.82 536.166.49 65 31.735.93 556.18 31.80 153.9 8.55 9.70 137.157.295.923.30 23.352.821.76 621.63 6.489.413.32 272.263.142.50 3.562.144.846.22 23.44 8.360.30 702 2.83 174.052.284.94 333.28 52.895.848.13 52.304.994.22 64.323.764.985.429.048.236.661.00 1.54 20.50 2.93 86.43 13.58 562.56 6 7.66 27.29 4.852.30 18.468.086.30 15.00 148.19 11.33 Estado Fuente: SIAP.50 99. Índices de producción agrícola de Chile en el territorio Mexicano.00 1.942.Tabla 1.17 64. 2011.916.70 14.211.39 11.39 138.292.379.10 83.778.203.05 6.69 82.223.76 11.833.835.613.52 10.49 46.08 1.393.99 4.74 59.200.21 Producción (ton) 12.98 348.

muestran que los que cuentan con una mayor superficie cosechada y de producción son: Chile Jalapeño. líder nacional en producción de Chiles secos. de las cuales más del 90 % cuenta con sistemas de riego. Los Chiles secos. La información del 2003 que se tiene respecto a las variedades o tipos específicos que se siembran. Del total de la superficie cosechada de Chiles en México. Mulato. siendo Zacatecas el principal productor y le siguen en orden de importancia San Luis Potosí. Los Chiles secos son un componente económico importante para el consumo nacional. en 18 .. que son la principal limitante de la producción. Mirasol. así como a la ausencia de programas de rotación de cultivos. Pasilla y Puya.7 Zacatecas. de ahí a Aguascalientes y actualmente a Zacatecas y Durango. y el Ancho sobresale entre los deshidratados (FAOSTAT. representa hoy en día uno de los principales cultivos de la agricultura Zacatecana. En un principio la producción se desplazo de Puebla a Guanajuato. La producción se encuentra concentrada en algunos estados del centro.. migra de una región a otra o de un estado a otro. destacando las variedades: Ancho. Dentro del grupo de hortalizas en el ámbito estatal. 2006). Esta constante migración se debe al poco desarrollo tecnológico que se tiene para el control de enfermedades.2. Jalisco y Michoacán (Reyes et al. Poblano. 2002). 2002). Anaheim y Bell entre los Chiles verdes (en fresco). Serrano. La superficie sembrada nacional del Chile fluctúa alrededor de las 140 mil hectáreas. La dinámica de siembra y de producción de Chiles secos. lo que obliga a los productores a buscar nuevas áreas no infectadas (Bravo et al.actualmente se orienta a la producción de Chiles secos. Durango y aun con marcada presencia en el mercado nacional Guanajuato. Este desplazamiento se debe a la incidencia de enfermedades y al mal manejo de agua.

121.00 45 462 140 495 81..121.885.145.544.las últimas dos décadas el cultivo de Chile ha ocupado el primer lugar.356. Tabla 2.00 Producción Rendimiento (ton) 375 33.080.03 13.12 205.413.349. La producción varia de un tipoa otro y principalmente se debe a la diferente tecnología que se utiliza teniendo un efecto en el volumen de producción (Reyes et al.00 28. Fue la década pasada el inicio de este auge en la producción del Chile en Zacatecas. Puya. tanto por superficie como por el valor de la producción generada.00 2.318. el rendimiento (ton/ha). el precio por tonelada y el valor de producción (miles de pesos).31 2.39 270 2.94 161.135. Dentro de las variedades de Chile que se cultivaron en el estado de Zacatecas destacan el Ancho.20 19 . Para 1992.445.00 12.95 Valor de Producción (miles de pesos) 2. la producción (ton). 2002).129.27 1. Municipio Apulco Calera Cañitas de Felipe Pescador Chalchihuites Concepción del Oro Cuauhtémoc Francisco R.417. los cuales existe la referencia de ciertos tipos de Chile por municipio.811. Murguia Fresnillo General Enrique Estrada General Superficie Sembrada (ha) 75 2.00 (ton/ha) 5 13.00 391.00 222 5 60 20 45 7.344.91 68. Mirasol.7 7 11 11. En la tabla 2 podemos observar los índices de producción agrícola en la modalidad riego y temporal de Chile en el Estado de Zacatecas.470.00 1.00 2.54 10. 2002).53 6. Mulato y Pasilla. tomando en cuenta la superficie sembrada (ha). la superficie cosechada (ha). Índices de producción agrícola del Chile en el Estado de Zacatecas.77 11.520.89 9 7. ocupo el 86 % de la superficie sembrada de un total de 26 especies que integraron el grupo de hortalizas (SAGARPA.

06 4.028.000.63 13.40 2.4 3.25 2.717.699.942.100.97 8 9.690.67 5.04 7.PánfiloNatera Guadalupe Huanusco Jalpa Jerez Juan Aldama Loreto Luis Moya Mazapil Miguel Auza Morelos Nochistlan de Mejia Noria de Ángeles Ojocaliente Panuco Pinos Rio Grande Sain Alto Sombrerete Tabasco Tepetongo Trancoso Vetagrande Villa de Cos Villa García Villa González Ortega Villa Hidalgo Valparaíso Villanueva Zacatecas TOTAL 3.20 306 6.00 2.54 14.149.15 5 5.209.49 5.80 6.96 10.96 4.972.00 87 920 5.40 522 6.631. 2011).00 22.931.5 5.560.00 1.926.43 Fuente: (SIAP.01 270.80 610 100 562.65 45 802.60 14. 20 .00 19.66 4.65 16.712.68 948.08 11.135.82 10 6.734.00 7.5 4.57 11.25 1.00 67.100.39 40.00 1.00 6.5 8 9.21 456.387.825.60 7.00 10 11 265 105 150 95 80 45 843 37 250 450 1.275.5 14.890.357.379.00 10 163 495 6 115 654 31.090.991.250.072.373.32 2.5 15.833.89 71.6 14.00 105.906.00 40.75 9.69 16.92 4.07 11.00 7.50 53.00 522.910.142.639.895.00 185 1.5 468 540 7.00 348.142.530.50 974.43 14.928.5 2.050.732.00 196 195 130 130 6 75 920.85 12 9.615.29 4.00 1.902.852.294.118.80 1.68 11.90 3.5 1.970.67 7.20 171.630.00 652.39 1.50 2.256.00 166 154.14 2.

Así mismo. como productora de Chiles secos. empleando la técnica molecular de “RAPD´s” (Random Amplification of Polymorphic DNA). se extrajeron sus ADN y se montaron algunos ensayos para determinar su posible grado de polimorfismo entre ellos. Para la caracterización molecular de los variantes de Chiles secos. JUSTIFICACIÓN En México. ya que produce más del 60 % del total nacional. se han ido perdiendo y otras han sido víctima de la biopiratería. el Chile. apartado y empacado. como los son: los Chiles Ancho. sin perder sus características organolépticas y contenido nutricional.III. Mirasol y Puya. deshidratado. es resultado de la eficiencia en los sistemas de producción. conocer la calidad de los Chiles antes de ser comercializados. más los requeridos en el acarreo después de la cosecha. es la opción agrícola que ofrece mayores ingresos y además es la principal fuente de empleo en el medio rural. ya que esto les permitiría definir las condiciones de almacenamiento y el tiempo que puede conservarse el producto en el mercado. Dada la biodiversidad de los Chiles y su diferenciación de acuerdo a su hábitat. Donde el polimorfismo que se observa entre distintos 21 . Por lo que muchas de ellas. Zacatecas es líder nacional en la producción de Chiles secos. de las grandes extensiones de tierras que se destinan para ello y del esfuerzo de los campesinos que realizan para obtener el producto. es una de las hortalizas de mayor importancia económica y social. El cultivo del Chile. algunas de las variedades más importantes de Chiles secos de Zacatecas. ya que forman parte indispensable del régimen alimenticio del pueblo Mexicano al consumirse tanto en estado fresco como seco (deshidratado). contribuyendo así de manera sustancial con el 35 % del PIB del estado. Es por ello que en el presente trabajo. La trascendencia de esta entidad. ya que actualmente muchas de las variedades de Chiles nativos. no se han registrado. se crea la necesidad de diferenciar y caracterizar el germoplasma existente. se realizó un primer acercamiento para caracterizar de manera molecular. bioquímica y química. ya que cada hectárea plantada requiere de un promedio de 150 jornales. representa una importante ventaja para los productores.

así como mejorar su producción y calidad. Todo ello.individuos. se realizó en base a la expresión de sus proteínas. En cuanto a la caracterización bioquímica de los Chiles secos. resultando en mejores ingresos para los mismos. sin embargo se utilizó un procedimiento rápido y barato para poder caracterizar las proteínas de Chiles utilizando las semillas. consiste en la presencia o ausencia de fragmentos de ADN amplificado. que los sistemas de purificación de proteínas con un nivel alto de calidad. Y por último se realizó una caracterización química mediante un análisis bromatológico o proximal. que son la última parte del flujo de la información genética y que caracteriza el genotipo conjuntamente con el fenotipo. entonces estos pueden ser caracterizados por la expresión de proteínas específicas. con el fin de conocer sus características que coadyuven e incidan en los productores de Chile a resguardar y registrar sus germoplasmas. cabe mencionar. son en general caros y tardados. por lo menos suficiente para una buena separación de las mismas por su peso molecular. Si los genes de estos Chiles tienen una expresión diferencial. Ya que es posible determinar el patrón electroforético de sus proteínas. 22 .

III.IV. para determinar los parámetros nutrimentales de las variedades de Chiles secos: Ancho. el grado de polimorfismos existente entre las variedades de Chiles secos: Ancho. V. Identificar por electroforésis SDS-PAGE. Mirasol y Puya. Evaluar molecularmente por RAPD´s. II. OBJETIVOS OBJETIVO GENERAL Caracterizar a nivel químico y molecular algunas de las variedades de Chiles secos del Estado de Zacatecas. que caracterizan la calidad de los Chiles secos del Estado de Zacatecas. Mirasol y Puya. el patrón de proteínas presentes en las semillas de las variedades de Chiles secos: Ancho. HIPÓTESIS Existen diferencias a nivel químico y molecular. OBJETIVOS ESPECÍFICOS I. Mirasol y Puya. Realizar un análisis proximal. 23 .

A. 6. 98066.VI. V.000 rpm y se tomó el sobrenadante y se pasó a un tubo eppendorf limpio y estéril. 6.1 Material biológico. Al día siguiente se agregó 700 l de cloroformo:octanol (24:1) para inactivar la enzima. Después se tomó el polvo fino con una espátula y se puso en un tubo eppendorf estéril de 1.. MATERIALES Y MÉTODOS El presente trabajo se realizó en el Laboratorio de Biotecnología de la Unidad Académica de Ciencias Biológicas de la Universidad Autónoma de Zacatecas Campus II.000 rpm durante 15 minutos. con una temperatura promedio de 16 °C y una altura de 2496 metros sobre el nivel del mar. Zac.5 ml. se mezcló en vortex y se dejó incubar por un periodo de tiempo de 60 minutos a 60 ºC en baño maria.000 rpm durante 15 minutos 24 . de C.P. ubicada en Avenida Preparatoria s/n Colonia Hidráulica.2 Extracción de ADN con CTAB. provenientes de la zona centro del estado de Zacatecas. al cual se le adicionaron 700 l de buffer de lisis: CTAB (Tabla 3). Las muestras de Chiles secos fueron proporcionadas por la Empresa Integradora Comercial Agrícola de Zacatecas S. Las semillas de Chile en germinación. Luego se centrifugó 10 minutos a 14. Mirasol y Puya. Luego se centrifugó a 14. Las muestras fueron de las variedades de Chiles: Ancho. Se transfirió el sobrenadante (fase acuosa) a otro tubo eppendorf limpio y estéril para agregarle 1. C. Zacatecas.5 l de RNasa (1mg/ml) e incubar a 37 ºC durante toda la noche en una incubadora. después se le adicionaron 700 l de cloroformo:octanol (24:1) y se mezcló vigorosamente con vortex y luego se centrifugó nuevamente a 14. se sometieron a pulverización en un mortero de porcelana con nitrógeno líquido.

se le adicionó 4. previamente armada con su peine y se dejó gelificar la solución de agarosa. Buffer CTAB.3 Electroforesis de ADN en geles de agarosa. 1mM de EDTA pH 8. Finalmente se dejó secar la pastilla de ADN a temperatura ambiente y se resuspendió en 50 l de buffer TE 1X (10 mM de Tris-HCl pH 8. Stock H2O destilada Tris 1 M (pH=7. Tabla 3.0).5 l de bromuro de etidio (10 mg/ml). Se puso la solución a calentar en el horno de microondas y se dejó ahí.y nuevamente se pasó el sobrenadante a un tubo eppendorf limpio y estéril.5) NaCl 5 M EDTA 5 M (pH=8. al cual se le adicionó 700 l de etanol absoluto para precipitar el ADN. 1 mM EDTA) para obtener una concentración del 1 %. Después se retiró el peine 25 . Se pusieron 3 gramos de agarosa en un matraz Erlenmeyer y se disolvieron en 300 ml de buffer TAE 1 X (40 mM Tris-acetato. Posteriormente se removió el etanol por decantación y se realizaron 2 lavados con 700 l de etanol al 70 %. Se mezcló bien y se vació el contenido a una cámara de electroforésis sumergida (Figura 6).000 rpm durante 15 minutos y se decantó el sobrenadante. hasta que desaparecieron los grumos formados.0. Después. se dejó enfriar y cuando llegó a una temperatura cercana a los 60 °C. los lavados se hicieron con una centrifugación a 14. Cada muestra de ADN (100 g) se preparó con 10 l de la muestra más 2 l de buffer de carga para ácidos nucleícos. de vez en cuando se sacó el matraz y se agitó para luego observar si ya se había disuelto la agarosa.0) CTAB β-Mercaptoetanol 14M  Final 100 mM 700 mM 50 mM 2% 140 mM 100 ml 65 ml 10 ml 14 ml 10 ml 2 ml 1 ml 6.

así como las condiciones de amplificación en el termociclador. Se puso con cuidado. dando un total de 100 g. Posteriormente se capturó la imagen y se realizó el análisis densitométrico de las bandas. 26 . el buffer TAE 1 X para el corrimiento. para verificar la integridad del ADN genómico.a g t c t ttt c c .4 RAPD´s (Random Amplification of Polymorphic DNA). 6.3´ y el iniciador 5´. y se le aplicó una corriente constante de 80 Volts por 30 minutos.3´ de Capsicum annuum. 201205). No. Una vez terminada la electroforésis. fueron los especificados en el manual del Kit de la enzima Taq DNA polimerasa (1000 U) de Qiagen (Cat. Figura 6.del gel y se cargó cada pozo con la muestra. sometiendo el ADN aislado de las variedades de Chiles secos a amplificación con los iniciadores 5´. Las cantidades de muestra y reactivos. También junto con las muestras se corrió un marcador de longitud nucleotídica () en el cual se pusieron 4 l equivalentes a 25 g de ADN. Cámara de electroforésis sumergida.g a c a t a c ccc . Estos se realizaron mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR: Polymerase Chain Reaction). se puso el gel en el transiluminador y se encendió la lámpara de luz UV para visualizar las bandas teñidas con el bromuro de etidio.

se extrajó el sobrenadante y se transfirió a tubos eppendorf. contenía 800 l de NaCl 150 mM + 200 l de solución de trabajo Bradford (Ver Apéndice). 27 . según lo describe Nambara et al. Figura 7.6 Medición de la concentración de proteínas. Nonidet NP-40 0. 1976).6.5 %).5. NaCl 140 mM.. Se pesó 1gr de muestra de semillas de Chiles en germinación y se sumergieron en nitrógeno líquido. 1992. a este se le adicionó buffer de extracción NET-2 (Tris-HCl 500 mM pH 7. Las muestras se guardaron a menos 4 ºC para su posterior cuantificación. para todos los extractos se utilizaron 20 µl de buffer de extracción por cada miligramo de muestra. Para la determinación de la cantidad de proteínas se midió de manera colorimétrica en el espectrofotómetro (Figura 7). El blanco para ajustar el espectrofotómetro a cero. para posteriormente triturarlas en mortero de porcelana hasta obtener un polvo fino. Se mezclaron los tubos en el vórtex y se dejaron reposar por 3 minutos a temperatura ambiente. donde se adicionaron en varios tubos eppendorf cantidades de 1 a 5 μl de muestra ajustando a un volumen d e 800 l con solución de NaCl 150 mM y luego se añadieron 200 l de solución de trabajo Bradford (Bradford. Espectrofotómetro.5 Extracción de proteínas solubles de Chiles. Posteriormente se sometieron a agitación en vórtex y se centrifugaron a 6000 rpm durante 10 minutos. 6. Después se transfirieron a una cubeta de plástico y se leyó la absorbancia a una densidad óptica de 595 nanómetros en la región visible.

Una vez gelificado. preparada en buffer de muestra para proteína y se añadió lentamente buffer de corrida 1X sobre los pozos cargados con la muestra y se corrió el gel a 100 volts constantes por aproximadamente 3 horas usando una fuente de poder Power Pac de Bio-Rad (Figura 8). Se dejó polimerizar por aproximadamente 20 minutos y luego se decantó el isopropanol. se removió el peine despacio y con cuidado posteriormente se añadió buffer de corrida 1X y se secaron los pozos con tiras cortadas de papel filtro. Después se preparó y adicionó el gel concentrador colocando previamente el peine con el número de pozos deseado en la cámara de electroforesis. El gel se cargó con 60 g de proteína por carril (15 μl de muestra). luego se colocó la mezcla poco a poco en la cámara. Después se centrifugó a máxima velocidad (14. Se cargaron los pozos con la muestra de interés. dejando espacio para poner el gel concentrador e inmediatamente se adicionó isopropanol 1:1 en agua (v/v). 6. posteriormente se secó con papel absorbente. para linearizar el gel y para que gelifique más rápido al estar en un ambiente de anaerobiosis (Tabla 4).La cantidad de proteína se calculó. Para visualizar las bandas de proteínas se utilizó una minicámara de electroforesis dual Mini protean II de Bio-Rad (Figura 9). luego se puso a hervir la muestra contenida en un tubo eppendorf por 5 minutos en un baño con agua. Para ello.7 Electroforesis de proteínas en geles de poliacrilamida desnaturalizantes. interpolando la densidad óptica obtenida en una curva patrón de proteína (ver apéndice) o sacando la regresión lineal y sustituyendo el valor en la ecuación de una recta. esta se preparó calculando la cantidad de muestra necesaria para 10 corrimientos y se diluyó en un volumen de 150 μl de buffer de muestra para proteínas. primero se armó la minicámara y se preparó el gel separador.000 rpm) por 10 28 . Cada determinación se realizó por triplicado.

5 M.60 ml 0 ml 1. 1970. 4.8 %) Tris-Cl 1. Al final de la electroforesis. o tridestilada SDS al 10 % PSA al 10 % Temed Modificado de Laemmli U.segundos. Tabla 4. pH 8. pH 6.5 M.50 ml 0 ml 3.8 H2O bidest. Fuente de poder (izquierda) y cámara de electroforesis (derecha). Soluciones Gel separador al 13 % Gel concentrador al 4.33 ml 2. Figura 8.10 l en un carril de un marcador de peso molecular. Cantidades para preparar dos minigeles de poliacrilamida.00 ml 2. K.32 ml 80 l 25 l 5 l 29 .17 ml 200 l 75 l 11 l 0. se tiñó el gel para visualizar las bandas de proteína. Se pusieron también.8 Tris-Cl 0.5 % Acrilamida – bis acrilamida (30:0.

hasta que se observó un fondo claro y se visualizaran las bandas de proteína para posteriormente poder analizar el gel. donde el colorante azul de Coomassie se une a las proteínas de manera no específica.3 g a 1 g por banda de proteína.6.9 Secado de geles de poliacrilamida. evitando la formación de burbujas (Figura 9). 6. 30 . 1991). Después se desechó la solución de tinción y se colocó al gel en la solución desteñidora de ácido acético al 10 %. el gel y el papel de celofán dulce se embebieron por 30 minutos en un recipiente de vidrio que contenía solución de secado para geles (Ver Apéndice). El gel se dejó secar a temperatura ambiente por 3 días (Bollag y Edelstein. Después. primero se colocó el gel de poliacrilamida en un recipiente de plástico. al cual se le adicionó solución fijadora para tinción de Coomassie (Ver Apéndice) hasta cubrir totalmente el gel y se agitó suavemente por 15 minutos en un orbital shaker. Se agitó suavemente. Para realizar esta tinción. Luego se colocó el gel en medio de dos trozos de papel celofán formando un sándwich. Luego se decantó la solución fijadora y se cubrió el gel con solución de tinción rápida de Coomassie (Ver Apéndice) y se agitó suavemente por 2 horas o hasta observar las bandas teñidas. se puso el emparedado sobre una placa de vidrio y se estiró. posteriormente se colocó encima un marco de plástico y se sujetó con pinzas de clip.8 Tinción de bandas de proteína con colorante azul de Coomassie. Para conservar los geles se llevaron a cabo los siguientes pasos: Primero. siendo el límite de detección de 0.

Secado de geles de poliacrilamida. Luego se sometieron a un análisis densitométrico semi-cuantitativo. proteína cruda. con el fin de calcular el tamaño en base a estándares de peso.10 Análisis de los datos. 6. Las imágenes de las bandas de proteína. Por último. Por último se pesaron las cajas de Petri y la diferencia de pesos indicó el porciento de humedad. con el software Quantity One de marca Bio-Rad.11 Determinación de humedad. 6. 31 . con base a las técnicas de la AOAC (Association of Oficial Analytica Chemists). se sacaron de la estufa y se pasaron al desecador por 15 minutos. Las cajas Petri se sacaron de la estufa y se pasaron al desecador por 30 minutos.Figura 9. Se pesaron las cajas de Petri vacías y agregaron 10 gramos de muestra. se efectuó por triplicado el análisis proximal. extracto oleoso. las cajas Petri que se utilizaron. Para la determinación de humedad. se metieron las cajas de Petri a una estufa a 70 ºC durante 18 horas. 1994). Después que se pesó. cenizas y por diferencia el extracto libre de nitrógeno para cada una de las variedades de Chiles secos (AOAC. fibra cruda. determinando humedad. se capturaron con un fotodocumentador ChemiDoc marca Bio-Rad.

Luego se transfirió el contenido del matraz cuantitativamente a la unidad de destilación rápida (Figura 11). En un matraz de digestión del aparato semi-micro Kjeldahl. Se lavó las paredes del matraz con poco agua y se adicionó lentamente 7 ml de ácido sulfúrico concentrado dejando escurrir por las paredes del matraz y haciéndolo girar.12 Determinación de proteínas. 32 . Digestor de proteína cruda. Después se enfrió el matraz y se adicionó cuidadosamente 20 ml de agua a la mezcla. Se Adicionó 1 gr de una mezcla de 10 partes de sulfato de potasio y una parte de sulfato cúprico.6. se agitó hasta disolver. Luego se adicionó con precaución 1 ml de peróxido de hidrogeno al 30 % resbalándolo por las paredes del matraz y se calentó el matraz hasta que la mezcla adquirió una coloración azul claro (Figura 10). se depositaron las muestras. Figura 10.

Al terminar la destilación. El extracto etéreo (EE) hace referencia a un grupo de compuestos lipídicos que son insolubles en agua pero solubles en éter. cloroformo o benceno (Maynard et al. se retiró el matraz recibidor y se lavó el extremo del tubo del refrigerante con una pequeña cantidad de agua.5 % de ácido bórico. Se destilaron de 80 a 100 ml dentro de un matraz conteniendo 15 ml de solución 1. Se tituló el destilado con solución de ácido sulfúrico 0. calculando que el volumen gastado no sea mayor de 15 ml. Previamente 33 .01 N. 1994)..13 Determinación de extracto etéreo. El método oficial utiliza éter dietílico para disolver todos los compuestos liposolubles presentes en la muestra (AOAC. Cuando el contenido de nitrógeno de la muestra tomada fue mayor de 2 a 3 mg se tituló el destilado con solución de ácido sulfúrico 0.5% y se lavó el embudo con 10 ml de agua e inmediatamente se efectuó la destilación.02 N.Figura 11. Unidad de destilación rápida. 3 gotas de rojo de metilo-azul de metileno y suficiente agua para cubrir el extremo del tubo del refrigerante. 1979). 1995). Se adicionaron a través del embudo 30 ml de hidróxido de sodio al 2. El EE en los forrajes está compuesto fundamentalmente por triacilglicéridos en las semillas y galactolípidos y fosfolípidos en las hojas (Van Soest. 6. Se realizó también una destilación simultánea para el blanco de reactivos.

Posteriormente se filtró y lavo con agua caliente. Con papel tornasol se midió su pH. El residuo se colocó nuevamente en el vaso y se le agregaron 100 ml de NaOH al 2. Luego se agregaron 200 ml de H2SO4 al 1. Esta es la razón por la que Weiss et al. también incluye compuestos que se disuelven en éter pero que tienen baja digestibilidad. Se midió el pH con papel tornasol.tanto la muestra colocada en los beakers como en el dedal deben ser puestos a secar a 100 ºC durante al menos 1 hora y 5 horas..25 %. Se pesó el papel filtro (pesar una muestra del papel filtro. Posteriormente el éter es evaporado y al residuo resultante se le denomina el extracto etéreo. (1992) calculan la digestibilidad de las grasas no a partir del contenido de EE si no a partir del contenido de ácidos grasos (AG) (AG = EE – 1). esto ayudó para conocer el porciento de humedad del papel) y este se colocó en el embudo y se empezó la filtración.5 % y 100 ml de agua destilada. Se calentaron a ebullición y se dejó la muestra durante 30 minutos. 1997). como son las ceras y los aceites esenciales (Galyean. Un limitante de esta técnica es que además de extraer ácidos grasos. colocar el papel filtro en la estufa. Se calentaron a ebullición y se dejó la muestra durante 30 minutos. se adiciona el éter. respectivamente.14 Determinación de fibra cruda. el cual se activa y se deja en funcionamiento durante cerca de 16 horas trabajando a una tasa de extracción de 2 a 3 gotas por segundo. Se pasó el papel a la estufa durante 18 horas y luego se colocó el papel en el desecador durante 30 minutos y por último se pesó el papel. 6. Se pesaron 2 gramos de muestra y vaciaron en un vaso de precipitado de 500 ml. se instalan los beakers y los dedales con las muestras en el extractor. pasarlo al desecador durante 30 minutos y pesarlo. Posteriormente. 34 .

en la mufla como se muestra en la Figura 12.6.15 Determinación de cenizas. Se adicionó 1 gr de muestra y luego se incineró con mechero hasta que cesó el humo negro. Cálculos: % Cenizas = [(P1 – P2) / M] *100 P1 = Peso del crisol vacío P2 = Peso del crisol con las cenizas M = Peso de la muestra en gramos Figura 12. Crisol con muestra en la Mufla. posteriormente se calentó el crisol con la mezcla a 550 ºC hasta que las cenizas se tornaron blancas luego se pesó el crisol. 35 . Se obtuvo el peso constante de un crisol de porcelana a 600 o 800 ºC.

Cabe mencionar que son los primeros ensayos por esta metodología en el laboratorio. estableciendo el bandeo generado con cada iniciador utilizado.VII. en donde está simbolizando la presencia de cada banda con un 1 y la ausencia de banda con un 0.3´ y el iniciador 5´. Mi-2 y Mi-3) y Puya (Pu-1. que son fragmentos amplificados al azar de ADN genómico. observándose solo algunos barridos. Los cuales se sometieron a la amplificación por PCR. se obtuvieron algunas bandas solo en la muestra Pu-1 y Pu-2. 36 . An-2 y An-3). montar bien las condiciones de la técnica de RAPD´s. Los resultados se pusieron en tablas (no mostradas). que aparecen al usar “iniciadores” de oligonucleótidos de secuencia arbitraria en la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). En cuanto a las variedades de Chiles Ancho (carriles del 2 al 4) y Mirasol (carriles de 5 al 7). ya que solo con este iniciador se obtuvieron resultados favorables. Mirasol (Mi-1. empleando los iniciadores (primers) 5´.G A C A T A C CCC – 3. Para ello se extrajeron los nueve ADN de los Chiles secos de las variedades: Ancho (An1. Pu-2 y Pu-3). por lo que es necesario para más estudios. Se puede observar que en los Chiles secos de las variedad Puya (carriles del 8 al 10). probando o diseñando más iniciadores relacionados para establecer polimorfismos entre las selecciones de Chiles para su tamizado. RESULTADOS Y DISCUSIÓN Para la caracterización molecular. utilizamos los marcadores RAPD´s (Random Amplication of Polymorphic DNA). En siguiente figura (13). lo que nos indica que hay diferencias entre la misma variedad.G A C A T A C CCC . El polimorfismo entre dos individuos está generalmente representado como la presencia o ausencia de fragmentos de ADN amplificado visualizados en geles de agarosa.A G T C T TTT C C . no se alcanzaron a distinguir bandeos homólogos.3´ de Capsicum annuum. se muestra el bandeo generado en el gel solo por el iniciador 5´.

Mirasol y Puya.G A C A T A C CCC . 1999).1 2 3 4 5 6 Mi-2 7 8 9 10 HindIII An-1 An-2 An-3 Mi-1 Mi-3 Pu-1 Pu-2 Pu-3 - Banda 1 Banda 2 - Banda 3 Banda 4 Figura 13. así como la cantidad total de las proteínas de las diferentes variedades de chile (Tabla 5). en donde los números de los carriles corresponden a las variedades de Chiles secos. El enfoque se centró en las etapas iniciales de la germinación en Chiles. lo cual limitó el rendimiento total.3´. Los embriones de los diferentes Chiles lograron ser extraídos de manera adecuada y el rendimiento de proteína de los embriones fue similar en cuanto a valores de concentración. puesto que en esta fase del ciclo biológico no se encontraron reportes de estudios de proteínas en Chile. pero no limitó la concentración en 37 . Con respecto a la identificación por electroforésis SDS-PAGE. Amplificación de ADN de Capsicum usando el marcador RAPD 5´. del patrón de proteínas presentes en las semillas de las variedades de Chiles secos: Ancho. Electroforésis en gel de agarosa al 1%. Podemos mencionar que las concentraciones obtenidas de embriones no se obtuvieron en cantidad suficiente. en tanto que en otros modelos sí (Luft y Dix.

25 2. Los procedimientos de extracción de las proteínas no permitieron eliminar algunos compuestos y pigmentos que interfieren con la separación de las proteínas en condiciones reductoras.65 0.12 0. como se muestra en la mayoría de las variedades de Chile.05 2.53 Rendimiento g/l 1. los cuales interfirieron con la separación y una buena resolución del bandeo.volumen.14 2. Al separar las proteínas por electroforesis se observó un patrón de bandeo diversificado lo cual permite diferenciar los Chiles estudiados (Figura 14). colorantes y otros carbohidratos presentes en la muestra.85 2. La mayoría de las bandas fueron por debajo de 50 Kilodaltones de peso molecular.91 2.76 1.67 2. Tabla 5. es difícil resolver con una buena resolución. debido a la presencia de polifenoles.72 0.13 1.58 2. Rendimiento de proteínas en semillas de Chile.28 2. lo que indica una buena ejecución de los procedimientos de extracción de las proteínas. Variedad de Chile Ancho (An-1) Ancho (An-2) Ancho (An-3) Mirasol (Mi-1) Mirasol (Mi-2) Mirasol (Mi-3) Puya (Pu-1) Puya (Pu-2) Puya (Pu-3) Semilla g 1. 38 .42 0.45 1.34 Las concentraciones de los extractos de proteínas de embriones permitieron separar las proteínas de diferentes Chiles en base a su peso molecular y resolver por electroforesis en geles de poliacrilamida desnaturalizantes al 13%.31 0. Sin embargo.

39 . carril 8 Puya (Pu-1). es diferente del An-1 y An-2. carril 2 Ancho (An-1). donde se puede apreciar claramente la expresión diferencial de proteínas entre los Ancho. Pu-2 y Pu3 son más parecidos entre sí y menos parecidos ambos al Pu-1. carril 6 Mirasol (Mi-2). SDS-PAGE al 13% de Chiles (teñido con azul de Coomasie). carril 4 Ancho (An-3). carril 3 Ancho (An-2). pues cada uno de ellos presenta variación de bandas específicas. carril 5 Mirasol (Mi-1).1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 PM An-1 An-2 An-3 Mi-1 Mi-2 Mi-3 Pu-1 Pu-2 Pu-3 208 116 84 66 47 Figura 14. carril 7 Mirasol (Mi-3). 2002). carril 9 Puya (Pu-2) y carril 10 Puya (Pu-3). En tanto que para el caso de los Puyas. Se observa un patrón parecido de las proteínas por pesos moleculares del grupo de Chiles Puya (carriles 8-11). así como del grupo de Chiles Mirasol (carriles 5-7). Estos resultados apuntan a un patrón diferencial de proteínas y por tanto a un patrón de expresión de genes específico de cada variedad (Ancho y Puya) en los embriones en proceso de germinación temprana (Bentsink y Koornneef. Se observan las bandas de los pesos moleculares en kDa. Se aprecia claramente que el An-3. (carril 1) y de las proteínas de Chiles secos (carriles 2-10).

7 12.1 4.Por último se realizó un análisis proximal. Mirasol y Puya. Una vez que se determinó el análisis proximal de los Chiles Ancho. provenientes de la zona centro del estado de Zacatecas (*) (g/100g).8 Proteína cruda 12.7 (*) Promedio de tres determinaciones 45 40 35 30 % 25 20 15 10 5 0 Humedad Extracto oleoso Proteína cruda Fibra cruda Cenizas Extracto libre N2 Figura 15. se tabularon y graficaron.7 Cenizas Extracto libre N2 31. para observar los resultados porcentuales de los diferentes parámetros evaluados (Tabla 6 y Figura 15). Mirasol y Puya.0 15.66 10. Análisis proximal de variedades de Chiles secos. Análisis proximal de variedades de Chiles secos. Ensayo (%) Variedad Humedad de chile Ancho Mirasol Puya 14.0 37. Tabla 6.67 4. para determinar los parámetros nutrimentales de las variedades de Chiles secos: Ancho.0 4.5 Fibra cruda 29.0 40.5 16.2 Extracto oleoso 7.13 15.9 10.70 20.75 11. 40 . provenientes de la zona centro del estado de Zacatecas.

lo cual es relativamente significativo y esto es de importancia dependiendo del destino para alimentación humana o animal. 41 . ya que en este caso le da un sabor muy parecido al chocolate.1 %). Lo cual. los Chiles Mirasol y Puya dieron los valores más altos. éstas nos revelan el contenido inorgánico. Estos valores. encontrándose el valor más bajo en el Chile Ancho (7. se puede observar que el Chile Ancho. ya que a mayor contenido de grasa es mayor la rancidez. en cuanto al contenido de extracto libre de nitrógeno. 37 % y 40.En la tabla 6 y Figura 15. Cabe destacar que la fibra cruda cuando se incluye en la dieta.75 %) con respecto de los otros Chiles. en todas las muestras de Chile deshidratadas nos dio valores aproximados en el rango de 12 % a 15. corresponden a los carbohidratos digeribles que son transformados en energía al momento de digerirlos. pero también mayor riqueza de ácidos grasos. Esto pudiera limitar su conservación en función de la rancidez.76 %). En este caso. Esto puede ser tomado como una desventaja.7 %).70 %). Este último valor corresponde a que es un Chile muy delgado. ya que se ha visto que al alimentar gallinas con Chile. En cuanto al contenido de proteínas. es el que presenta mayor contenido de humedad (14.5%.3 %) con respecto de los demás Chiles. los cuales serían focos probables de contaminación. el Chile Puya fue el que presento mayor cantidad de grasas (14. mientras que la más baja cantidad se encontró en el chile Puya (16.7 % respectivamente. el Chile Ancho fue el que tuvo mayor contenido (29. siendo su contenido muy similar en todos los Chiles estudiados (4. no se determinaron los elementos específicos contenidos en las muestras y ello se realizará en un trabajó posterior. En cuanto a las cenizas. En cuanto al contenido oleoso. ya que la humedad puede propiciar el desarrollo de bacterias y mohos. si se considera almacenarlo por periodos largos. el pigmento proteico del Chile se refleja en el color del huevo. el contenido de grasa es un aspecto importante por su influencia en el sabor del producto. Por último. Respecto a la fibra cruda. mejora la digestión.0 % a 4.

podría ser soporte a futuro de caracterización de la colección de germoplasma de Chiles nativos del Estado de Zacatecas. Mirasol y Puya. El presente trabajo. En este sentido los datos experimentales apuntan hacia aspectos que requieren mayores estudios. La caracterización del perfil electroforético de las proteínas en embriones de Chile permitió diferenciar. que debe ser mejorada por los productores con procesos de desecación más especializados. el Chile Puya fue el que tuvo mayor concentración. Se requiere probar más iniciadores relacionados para establecer polimorfismos entre las selecciones de Chiles para su tamizado por RAPD´s.VIII. 42 . Con respecto al extracto oleoso. siendo el Chile Mirasol el que tuvo mayor contenido de humedad y fibra cruda. mientras que los Chiles Mirasol y Puya son los que contienen más carbohidratos digeribles. CONCLUSIONES. Todos los Chiles dieron valores muy similares en cuanto a los parámetros de proteína cruda y contenido de cenizas. entre las variedades de Chiles secos Ancho. como la humedad.

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Numero de tubo 0 (blanco) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Cloruro de sodio 0. Tabla 7. para su posterior uso. APÉNDICE Curva patrón de proteína.15 M 800 l 799 l 795 l 790 l 785 l 780 l 775 l 770 l 765 l 760 l 755 l Stock de albúmina (1mg/ml) 0 l 1 l 5 l 10 l 15 l 20 l 25 l 30 l 35 l 40 l 45 l Concentración final de proteína 0 g 1 g 5 g 10 g 15 g 20 g 25 g 30 g 35 g 40 g 45 g 46 . Detalle de valores para realizar la curva patrón de proteínas.X. adicionando el NaCl 150 mM (0.01 g (10 mg) de ésta proteína y disolver en 10 ml de NaCl 150 mM.15 M) necesario para tener un volumen de 800 l. diferentes concentraciones de la solución estándar de proteína. 2) Colocar en una serie de tubos eppendorf. Procedimiento:1) Preparar una solución stock de albúmina sérica bovina a una concentración de 1 mg por mililitro. como se muestra en la tabla de abajo (hacer por triplicado). pesar . hacer alicuotas de 1ml y almacenar a -20 °C.

47 . Después interpolar la densidad óptica obtenida de la muestra problema en la gráfica ó hacer los siguientes cálculos utilizando la ecuación de una recta. luego sustituyendo los valores obtenidos a partir de una regresión lineal de los valores de la curva patrón por el método de mínimos cuadrados.9992 <0001 2. tendríamos 0. nos daría 0.0 0.01474 = 2.01474 0. Por ejemplo.4 0.2 0.3 Y=A+B*X Param Valor sd A 0.209. 4) Dejar reposar durante 3 minutos.00532 B 0. luego vortexear. si la densidad óptica fue de 0. Ej: 2.1692 0. luego dividir este resultado entre la dilución si es que la hay.1692/0.0 0 50 100 150 200 250 Proteína (µg ml -1) 3) Adicionar a cada tubo 200 l de la solución de trabajo Bradford para tener un volumen final de 1 ml.4 0. 5) Después ajustar a cero con el blanco y leer la absorbancia en luz visible a una longitud de onda de 595 nm.22812E-4 0.1 0.7/5 que son los microlitros de la muestra problema.209-0.54 g de proteína por microlitro.2 0.54 mg/ml.7. despejando nos quedaría que x= y-a/b. este valor hay que sustituirlo en la sig.0081 R = 0. y por último se calcula la concentración total de proteína por mililitro de muestra.CURVA PATRON DE ALBUMINA SERICA BOVINA 0 50 100 150 200 250 0. la cual para este caso sería de 540 g/ml = 0.1 0. formula: Y= a+bx.3 Densidad Optica (595nm) 0. Graficar la densidad óptica versus la concentración de proteína.

Solución de tinción rápida de azul de Coomassie Mezclar 0.87 g de cloruro de sodio (0. 20 ml de ácido fosfórico al 88 % y 35 mg (.006 %) con 100 ml de ácido acético glacial (10 %) y aforar a 1 litro con agua destilada. para su uso. 1. Solución de secado para geles de poliacrilamida Mezclar 50 ml de ácido acético (10 %) con 15 ml de glicerol (3 %) y aforar a 500 ml con agua destilada. 48 . con 50 ml de ácido acético glacial (10 %) y aforar a 500 ml con agua destilada. Después filtrar en papel filtro (Whatman No. Almacenar indefinidamente a temperatura ambiente. Mezclar 10 ml de etanol al 95 %. Almacenar indefinidamente a temperatura ambiente.Solución de cloruro de sodio 150 mM Disolver 0. luego debe ser filtrada nuevamente.0 ml de ácido fosfórico al 88 % y 3. Almacenar a 4 °C. Almacenar indefinidamente a temperatura ambiente en frasco ámbar. Solución stock Bradford. Mezclar 42.15 M) en 100 ml de agua destilada. Almacenar indefinidamente a temperatura ambiente. Solución de trabajo Bradford. Esta solución es estable indefinidamente a temperatura ambiente. Almacenar en frasco ámbar. Estable por un par de meses.06 g de azul brillante de Coomassie G ó G-250 (0. 3.5 ml de etanol al 95 %. Solución fijadora para tinción de Coomassie Mezclar 125 ml de metanol óisopropanol (25 %).0 ml de la solución stock Bradford. Solución desteñidora de ácido acético al 10 % Mezclar 50 ml de ácido acético (10 %) con 450 ml de agua destilada.035 g) de azul brillante de Coomassie G-250.1) y almacenar a 4 °C en un frasco ámbar.5 ml de agua destilada.