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SARA MARTN REVELLADO 1 GRADO EN FARMACIA PRCTICA DE GENTICA

Objetivo: el objetivo general de esta prctica es identificar trangenes. Se trata de averiguar, de


una camada de ratones, cules son transgnicos y cules no lo son, centrndonos en la
presencia o no del gen CG3, cuyo exn 11 amplificaremos mediante una serie de pasos que se
especificarn ms adelante.
Materiales:
(Nos referiremos especficamente a los materiales empleados en el fragmento de prctica
llevado a cabo)
3 tubos Eppendorf.
Etanol.
Cloruro sdico.
Agua desinizada.
Mquina centrifugadora.
Agarosa.
Aproximadamente 100mL de tampn TBE 1X.
Bromuro de Etidio.
Microondas.
Peine.
Pipeta de 20-200
Pipeta 100-1000
Puntas.
Cubeta con electrodos.
Introduccin:
De 12 ratones nacidos de una misma camada, se espera a que sean destetados y les
cortaremos un pedazo de cola de la que extraeremos ADN que posteriormente se purifica. Una
vez tenemos estos, lo que se har ser amplificar un determinado transgen y observaremos las
muestras mediante electroforesis. Lo descrito en este informe se centrar en parte del
procesamiento del ADN ya extrado y en la ltima etapa, electroforesis, ya que gran parte del
proceso se nos presentaba ya realizado.
Procedimiento:
Se distinguen 3 fases en el proceso:
1. EXTRACCIN DE ADN GENMICO
Constituye las primeras etapas del proceso y en su gran parte ya se nos presenta
llevada a cabo. En nuestro caso tenemos un tubo eppendorf en el que ya se encuentra la
muestra de teijodo con el tampn de lisis y las proteinasas aadidas.
Nuestro objetivo, se centrar pues, en hacer que las protenas se precipiten. Para ello
comenzaremos aadiendo a nuestros 50 de muestra 250 de agua que pipetearemos
con una pipeta de 100-1000. Posteriormente, aadiremos 1/10 del volumen de la
muestra el NaCl, en nuestro caso, 30 para acabar aadiendo tres veces el volumen que
ya tenemos en el eppendorf de etanol (en nuetro caso aadiremos aproximadamente
1000).
Procederemos agitando nuestra mezcla hasta visualizar un hilillo blanco que resalte en
la mezcla, que ser nuestro ADN. En este momento, introduciremos la muestra a
centrifugar a 12000 rpm durante un tiempo de entre 2 y 5 minutos.
No seguiremos el procesamiento de nuestra muestra, sino que saltaremos algunos
pasos hasta llegar a la electroforesis en la que emplearemos muestras que ya haba sido

tratadas anteriormente.
2. PCR
Debido a las caractersticas del proceso, no lo hemos llevado a cabo en esta prctica,
consistira en amplificar el determinado gen que nos interesa, empleando, un ADN
molde, oligonucletidos especficos para amplificar el exn 11 del gen CG3, adems de
algunos otros reactivos. La PCR tiene, adems unas condiciones especficas para
llevarse a cabo.
3. ELECTROFORESIS EN GEL DE AGAROSA
-Preparacin del gel:
En primer lugar tenemos que llevar a cabo la preparacin del gel de agarosa para
verterlo en la cubeta de la electroforesis y que solidifique:
En un matraz, vertemos 100mL de nuestro tampn TBE del que disponamos 1l 10X.
Como necesitamos un gel al 1,5%, verteremos exactamente 1,5g de polvos de agarosa.
Procedemos a mezclar la agarosa con el tampn para obtener el gel aplicando calor a la
mezcla, calentando con un microondas haciendo que se funda la agarosa y se diluya
completamente.
Verteremos el gel en la cubeta y lo dejaremos enfriar. Tras un tiempo, el estar
completamente fro, se forma un gel de estructura gelatinosa. Adems, introducimos
dos peines que harn que se formen dos filas de pequeos pocillos al solidificar el gel.
-Carga de las muestras:
Como las muestras que hemos manipulado en el apartado anterior no estn listas para
esta fase del proceso, tomaremos otras ya preparadas, que hayan pasado por las
correspondiente PCR. Aadiremos a cada muestra Bromuro de Etidio y pipetearemos
esto el cada uno de los pocillos formados por el gel.
Para finalizar, se tapa la cubeta de electroforesis y se conectan los electrodos.
Esperaremos a que se produzca la electroforesis y una vez finalizada, ya podemos
visualizar mediante luz UV. Aparecen desplazados las muestras pertenecientes a
ratones transgnicos y no tan desplazados aquellos que no estn mutados y que, por lo
tanto, podemos concluir que no poseen el gen CG3.