El grado de especificidad de las enzimas es muy alto, pueden distinguir incluso entre diferentes tipos de ismeros.

Se cree que la especificidad de la enzima es debido a la forma particular de una pequea parte conocida como sitio activo, la cual se fija a la contraparte complementaria en el sustrato. Regreso al incio de enzimas

5.4 Factores que afectan la actividad enzimtica.Concentracin del sustrato.- A mayor concentracin del sustrato, a una concentracin fija de la enzima se obtiene la velocidad mxima. Despus de que se alcanza esta velocidad, un aumento en la concentracin del sustrato no tiene efecto en la velocidad de la reaccin. Concentracin de la enzima.- Siempre y cuando haya sustrato disponible, un aumento en la concentracin de la enzima aumenta la velocidad enzimtica hacia cierto lmite. Temperatura.- Un incremento de 10C duplica la velocidad de reaccin, hasta ciertos lmites. El calor es un factor que desnaturaliza las protenas por lo tanto si la temperatura se eleva demasiada, la enzima pierde su actividad. pH.- El pH ptimo de la actividad enzimtica es 7, excepto las enzimas del estmago cuyo pH ptimo es cido. Presencia de cofactores.- Muchas enzimas dependen de los cofactores, sean activadores o coenzimas para funcionar adecuadamente. Para las enzimas que tienen cofactores, la concentracin del cofactor debe ser igual o mayor que la concentracin de la enzima para obtener una actividad cataltica mxima. Lectura 4.1 Lea el texto titulado "Enzimas de fuerza industrial" y realice un cuadro sinptico que muestre los usos de las enzimas indicados en la lectura. Enve su trabajo al correo electrnico del profesor. Actividad 4.4: Resuelva la actividad 4.4 siguiendo el vnculo.

Regreso al incio de enzimas

Mapa conceptual de bioqumica

Zrraga, J.C.; Velzquez, I.; Rodrguez, A.; Castells, Y. Qumica. Mxico, McGraw-Hill, 2003.

6. POLMEROS SINTTICOS Objetivo: Identificar los polmeros sintticos ms importantes, su proceso de formacin y sus aplicaciones ms importantes. 6.1 Definicin 6.2.1 Polmeros de adicin 6.1 Definicin Los polmeros son sustancias formadas a partir de miles de molculas pequeas llamadas monmeros, las cuales se unen para formar molculas de gran tamao. Los monmeros reaccionan entre s para formar esas grandes molculas, cuyas masas moleculares son muy elevadas. Regreso inicio polmeros 6.2.2 Polmeros de condensacin Lectura: Nylon

6.2 Clasificacin de los polmeros Actividad IV-5

6.2 Clasificacin de los polmeros Naturales: Se encuentran en la naturaleza. Ejemplos: Celulosa, almidn,protena, cidos nucleicos, etc. De adicin Sintticos: Generalmente derivados del petrleo. Se elaboran artificialmente. Ejemplos: Polietileno, nylon, tefln, etc.

Polmeros

De condensacin

La celulosa es un polmero natural que se utiliza en la fabricacin de dispensadores de papel para uso hospitalario, industrial y otros.

www.pavimentosonline.com/ sumigran/celulosa_in...

La reaccin para formar polmeros se llama polimerizacin. Existen dos formas para la obtencin de polmeros: Adicin y condensacin. En la adicin los monmeros se unen unos a otros de tal forma que el polmero formado contiene todos los tomos que contenan los monmeros.. En la condensacin el polmero no contiene todos los tomos del monmero, una parte de la molcula de ste forma otros compuestos pequeos, generalmente agua. Regreso inicio polmeros

6.2.1 POLMEROS DE ADICIN En algunos casos, se forman a partir de monmeros que son alquenos, los cuales se unen por el rompimiento del doble enlace yla formacin de dos nuevos enlaces sencillos. El ms sencillo de los polmeros sintticos es el polietileno.

Monmero Etileno

Polmero

Algunos usos Bolsas de plstico que se usan para empacar frutas y verduras, bolsas para prendas destinadas a lavado en seco, botellas, juguetes, aislantes elctricos. Alfombras para interiores y exteriores, botellas, maletas.

Polietileno

Propileno

Poliprepileno

Cloruro de vinilo

Cloruro de polivinilo (PVC)

Envolturas y botellas de plstico transparentes. Losetas para piso, cortinas de bao, plomera, imitacin de cuero. Materiales resistentes al calor y a los agentes qumicos. Recubrimiento antiadherente para utensilios de cocina, aislantes elctricos Muebles de imitacin madera, aislantes de espuma plstica, vasos desechables para bebidas calientes.

Tetrafluoroetileno

Tefln

Estireno

Poliestireno

Uno de los muchos usos del polietileno es la fabricacin de bolsas de plstico para empaque.

www.rubarsa.com/english/ plasticosingles.htm

El tefln es utilizado como recubrimiento antiadherente en sartenes , entre otros usos.

www.hispanodetulsa.com/ news.php?nid=689

Los vasos desechables de poliestierno son utilizados para conservar bebidas calientes.

www.officenet.com.ar/ dept.asp?dept_id=483

Regreso inicio polmeros

6.2.2 POLMEROS DE CONDENSACIN Nylon.El monmero de un tipo de nylon es un cido carboxlico con un grupo amino en el sexto tomo de carbono, el cido 6-aminohexanoico, cuya estructura se muestra a continuacin:

El polmero formado a partir de este monmero es el nylon 6. Este tipo de polmero es una poliamida ya que los enlaces que mantienen unidos a los monmeros son enlaces de amida. Casi todo el nylon se convierte en fibras, que se utilizan para elaborar telas muy parecidas a la seda y a la lana.

El nylon se utiliza en la fabricacin de diversas prendas con una calidad similar a la seda, pero a un costo menor, como es el caso de stos calcetines.

www.f3online.de/bti-f3-shop/ ProductDetailActi...

Dacrn.Es un polister fabricado por condensacin del etilenglicol con cido tereftlico.

Se utiliza para fabricar fibras que se utilizan en la elaboracin de prendas de lava y usar. Muchas telas sintticas se elaboran a partir de este polister.

Muchas telas sintticas se elaboran a partir de dacrn.

www.metallographic.com/ pp.htm

Baquelita.La baquelita fue el primer polmero sinttico. Es un polmero de fenol formaldehdo. Este tipo de resinas son termofijas, o sea que una vez moldeadas no pueden fundirse nuevamente. Se utilizan para unir astillas de madera en paneles de madera aglomerada.

Con la baquelita se fabrican diversos materiales.

www.vetriengineers.com/ english/plasticcompone...

Policarbonatos.Estos polmeros son translcidos como el vidrio, pero duros. Ests caractersticas permiten que se utilicen en la fabricacin de ventanas a prueba de balas y cascos de proteccin.

Cacos de proteccin de policarbonatos.

www.tatoo.ws/outdoors/ photo/cascos/half_dome.jpg

Lectura Lea el texto titulado "Nylon" y escriba un comentario acerca del tema. Envelo por correo electrnico a su profesor. Regreso inicio polmeros Actividad 4.5: Resuelva la actividad IV-5 siguiendo el vnculo.

Dos notables propiedades de las enzimas las habilitan para funcionar como catalizadores bajo las apacibles condiciones presentes en las clulas: su enrome poder cataltico y su alto grado de especificad. El inmenso poder cataltico hace que las velocidades de las reacciones catalizadas enzimaticamente sean 10 veces mayores de que las reacciones no catalizadas no correspondientes en condiciones similares La especificad exquisita de las enzimas su habilidad para actuar selectivamente en un sustrato o un numero selecto de sustratos qumicamente similares No sorprende que las reacciones catalizadas por enzimas de los aminocidos tengan lugar mucho mas rpidamente de lo que hacen la de los aminocidos a pesar de que ambos esteroionomeros de un aminocido dado son los mismos tamaos y poseen el mismo grupo R. Se han clasificado en la base de datos mas de 3.700 enzimas cada una con las cuales cataliza una reaccion qumica nica o un conjunto de reacciones estrechamente relacionadas. 1.3.2 MODO DE ACCION Una enzima por si misma no puede llenar acabo de una reaccion, sin funcin es modificar la velocidad de reaccion entendindose como tal la cantidad del producto formada por una unidad de tiempo. Tal variacin se debe a la disminucin de energa de activacin en una reaccion qumica. La energa de activacin es la energa necesaria para convertir los reactivos activos en formas moleculares inestables denominadas especies en estado de transicin que pueden ser mayor energa libre que los reactivos y los productos Su modote accin se refieren a que tienen protenas que tienen uno o mas lugares denominados sitios activos a los cuales se une al sustrato es decir la sustancia sobre la que acta la enzima. El sustrato es modificado qumicamente y convertido en uno o ms productos. Como esta reaccion es generalmente reversible puede ser expresada de la siguiente manera:

Fuente: http://www.ehu.es/biomoleculas/enzimas/enz2.htm Donde ES es un complejo enzima sustrato intermediario. Las enzimas aceleran la reaccion hasta que se alcanza un equilibrio y pueden ser tan eficaces como para que la velocidad de reaccion sea de 10 a 18 mayor veces mas rpida que en ausencia de un catalizador Una caractersticas de las enzimas es su especificad de manera que cada enzima particular acta solo sobre un determinado sustrato. Las enzimas suelen ser tan especificas que son encapaces de actuar sobre sustancias estrechamente relacionadas. 1.4 NOMENCLATURA DE LAS ENZIMAS Como la funcin de las enzimas es catalizar reacciones especficas es conveniente denominar las enzimas de acuerdo con estos reacciones determinadas. El mtodo general se basa en la adicin del sufijo asa el nombre del sustrato es un lpido atacado por la enzima lipasa. No obstante aun se utilizan nombres como el de la tripsina y pepsina atribuidos a ciertas enzimas que se propusieran una nomenclatura mas adecuadas

Una comisin sobre nzimas a ideado a una enzima completo aunque complejo para la clasificacin y nomenclatura de las enzimas estos se clasifican en 6 grupos principales de acuerdo con el tipo de reaccin que catalizan los grupos son los siguientes: - Oxido reductasa: Estas enzimas que catalizan las reacciones de oxidacin- reduccin, incluyen oxidasas, peroxidasas

Transferasa: Enzima que catalizan la transferencia de un grupo qumico de una molcula a otra ejemplo: transaminasas Hidrolasas: Este es un gran grupo de enzimas que catalizan la Hidrlisis de diversos sustratos : peptidazas Liasas: En este grupo se incluyen las enzimas que catalizan la eliminacin de grupos sustratos Isomerazas: Enzimas que catalizan diferentes tipos de reacciones de isomerazion Ligazas: La funcin de esta enzimas es la de unir dos molculas mediante enlaces

1.5 CLASIFICACION DE LAS ENZIMAS - Oxido reductasa: Estas enzimas que catalizan las reacciones de oxidacin- reduccin, incluyen oxidasas, peroxidasas

Transferasa: Enzima que catalizan la transferencia de un grupo qumico de una molcula a otra ejemplo: transaminasas Hidrolasas: Este es un gran grupo de enzimas que catalizan la Hidrlisis de diversos sustratos : peptidazas Liasas: En este grupo se incluyen las enzimas que catalizan la eliminacin de grupos sustratos Isomerazas: Enzimas que catalizan diferentes tipos de reacciones de isomerazion Ligazas: La funcin de esta enzimas es la de unir dos molculas mediante enlaces CAPITULO II

Propiedades y especificidad de las enzimas

2.1 PROPIEDADES DE LAS ENZIMAS Como sucede con todos los catalizadores, las enzimas tienen las siguientes propiedades: -No sufren cambios irreversibles durante a reaccin por lo que cada molcula de enzima puede participar de manera repetida en reacciones individuales -No tienen efecto en la termodinmica de la reaccin esto quiere decir que las enzimas no aportan energa para una reaccin qumica por o que no determina si una reaccin es favorable( exorgonica) o desfavorable (endorgonica) desde el punto de vista termodinmico. -Las enzimas son catalizadores muy eficientes -Son altamente especficos para sus sustratos y para cada uno de su reaccin -pueden estar sujetos a regulacin en su actividad: Regulacin alosterica

-Son eficiente en pequeas cantidades, las enzimas no sufre cambios al catalizar las reacciones qumicas de manera que una pequea cantidad de enzima puede catalizar repetidas veces una reaccion -Aceleran las reacciones qumicas su sufrir modificaciones. No alteran las concentraciones de equilibrio de la reaccion solo que esta al alcance , mas rpidamente cambiando el mecanismo de reaccion -Modifican el carcter exotrmico o endotrmico de la reaccion. 2.2 ESPECIFIDAD ENZIMATICA Una de las caractersticas mas importantes de las enzimas es su alta especificad sobre la reaccion que catalizan. Cada enzima cataliza un solo tipo de reaccion y casi siempre acta sobre un nico sustrato o un grupo reducido de ellos. Esta especificad se debe a la complementariedad que debe existir entre el sustrato y el centro activo de la enzima. En 1984, Emil fisher propuso la hiptesis de la llave y la cerradura para explicar la especificad enzimatica. Segn esta hiptesis la especificad entre la enzima y el sustrato es como la que existe entre una llave y una cerradura. Se pensaba que el centro activo tenia una forma tridimensional determinada y el sustrato seria complementario a el y encajara perfectamente. Otra teora fue la de Daniel Koshland propuso la Hiptesis del ajuste inducido o se la mano y el guante que es la que se acepta en la actualidad. Dice que la especificad radica en los aminocidos de union del centro activo, que son los encargados de establecer enlaces dbiles con el sustrato. Realizada la fijacin la enzima posee libertad para cambiar su forma y amoldarse al sustrato de tal manera que el centro activo quede correctamente situado. Esta teora afirma que no hay una adaptacin predeterminada como ocurre en el modelo de la llave cerradura, sino una adaptacin inducida por los aminocidos de union La especificad se estable a dos niveles: 2.2.1 Especifidad de accin: es decir una enzima solo puede realizar un determinado tipo de reaccion: Hidrlisis, Oxido Reduccin 2.2.2 Especifidad de sustrato: Esto significa que cada enzima solo puede actuar sobre un sustrato o sobre un reducido de sustratos Absoluta: La enzima acta sobre un nico sustrato De grupo: La enzima acta sobre un grupo de sustratos 2.3 EL SITIO ACTIVO Es el lugar de unin entre el sustrato a una enzima y donde se da la reaccion de catlisis se denomina centro activo. En el centro activo encontramos restos de aminocidos con sustituyentes funcionales para la catlisis de un sustrato. Al haber pero muchsimas variedades de reacciones que pueden ser catalizadas, no hay suficientes combinaciones de restos de aminocidos para hacer catlisis especfica para una de estas combinaciones, por tanto nuestras clulas utilizan las llamadas Coenzimas. Las Coenzimas acostumbran a sr complejas molculas orgnicas que sufren modificaciones durante la reaccion enzimatica para ayudar a la modificacin final del sustrato.

Tambin puede servir como donadoras o aceptadoras de hidriones y electrones o pueden transferir grupos funcionales, Tras la catlisis la coenzima vuelve a su estado original. Si la coenzima se queda unida de forma temporal a la enzima es llamada cosustrato. Siesta anclada a la enzima la lamamos Grupo prosttico. Los centros activos de las enzimas pueden ser desnaturalizados, es decir, inactivada su especificad de unin por la modificacin de las protenas de la unin con el sustrato. La desnaturalizacin puede darse por una variacin alta de temperatura o de PH del ambiente donde se encuentre. 2.4 EL COMPLEJO ENZIMA SUSTRATO Las enzimas dirigen las transformaciones qumicas y energticas que tienen lugar en cada clula. Pero para realizar estas funciones bsicas y vitales para nuestra vida deben tener una capacidad de interaccionar de forma especifica y reversible con ligandos, que viene dad por su conformacin espacial en el lugar de la union. Para que la enzima modifique el ligando(sustrato a partir de ese momento) este debe encajar en el lugar de la union de la enzima. Por esto decimos que hay una complementariedad geomtrica entre la enzima y sustrato. Los lugares de union acostumbran a estar en unas hendiduras de la superficie de de la enzima formando como un bolsillo en el cual entra el sustrato. De esta manera la superficie de interaccin entre el sustrato y enzima es mayor y las posibilidades de conferir especificad con el sustrato aumenta. La especificad de la union es tan alta que la enzima es capaz de distinguir entre sustratos esteroisomeros, por lo que decimos que las enzimas presentan electroespecifidad. La electroespecifidad puede servir en casos concretos para separar rutas de formacin y degradacin de productos, que se realizan de forma simultanea. Este hecho se debe a que las enzimas son molculas asimtricas. La union se mantiene gracias a las fuerzas de enlaces no covalentes entre tomos del sustrato y la enzima, como los enlaces de van der. walls , enlace por puente de hidrogeno o puentes salinos durante la catlisis pero la union es temporal por tanto cuando la reaccion enzimatica finalizan se separan la enzima y el producto. 2.4.1 Enlace Llave cerradura: El sustrato encaja perfectamente en e centro activo gracias a una complementariedades moleculares y electroestticas con la enzima de manera tal que este no cambia su forma(El sustrato seria la llave y el centro activo o la enzima seria la cerradura)

FUENTE: http://es.wikipedia.org/wiki/Complejo_enzima-sustrato

2.4.2 Enlace inducido: El sustrato NO encaja perfectamente en e centro activo cambia su formacin espacial provocando un ambiente favorable a la unin y reaccion con el sustrato de manera que se une a este para proceder con la catlisis. En este caso no encontramos la misma especificad como en el enlace de tipo llave- cerradura, por lo que la enzima pude reaccionar con varios sustratos de conformaciones parecidas.

FUENTE:http://es.wikipedia.org/wiki/Complejo_enzima-sustrato CAPITULO III

Factores enzimticos
3.1 FACTORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD ENZIMATICA 3.1.1Temperatura: Las enzimas son inactivadas por e calor a temperaturas de 50C-60C inactivan rpidamente la mayor parte de las enzimas. Esta inactivaron es irreversible, pues al enfriar no se obtiene actividad otra vez. Esto explica que casi todo los organismos resulten muertos a una exposicin a temperatura elevada: Sus enzimas se inactivan y resultan incapaces de reanudar su metabolismo. Las Enzimas no son inactivadas por la congelacin; las reacciones que producen tienen a lugar muy lentamente a temperaturas bajas, o se detienen, pero la actividad cataltica reaparece si la temperatura vuelve a su estado normal 3.1.2 Acidez: Las enzimas son sensibles a los cambios de PH o sea de acidez o alcalinidad en el medio. La mayor parte de enzimas intracelulares tienen PH ptimos cerca de la neutralidad, por lo que no actan en medios cidos ni alcalinos, los cidos y bases enrgicos las inactivan irreversiblemente. 3.1.3Concentracin de Enzima, substrato y Cofactor: Si el PH y la temperatura de un sistema enzimtico se mantiene constante pero hay exceso de substrato, la intensidad de la reaccion es directamente proporcional a la cantidad de enzima presente. 3.1.4Venenos Enzimticos: Algunas enzimas resultan muy sensibles a ciertos venenos como el acido cianuro fluoruro lewisita etc. Resultan inactivadas aun frente a concentraciones bajas de estos venenos Aun las enzimas pueden actuar como venenos si se encuentran en lugar in adecuado. Varios tipos de venenos que viene de los animales como la de la serpiente abeja y escorpin deben su poder letal a las enzimas que destruyen glbulos rojos y otros tejidos.

3.1.5 PH: Los cambios de PH alteraran considerablemente la naturaleza inica de los enzimas se sabe poco de las variaciones del PH en las enzimas.

http://www.ehu.es/biomoleculas/enzimas/enz2.htm 3.2 INHIBIDORES ENZIMATICOS Son molculas que se unen a enzimas y disminuyen su actividad puesto que el Bloqueo de una enzima puede matar a un organismo patgeno o corregir un desequilibrio metlico. Sin embargo no todas las molculas que se unen a las enzimas sin inhibidores, los activadores enzimticos se unen a las enzimas y se incrementan su actividad. La union de un inhibidor puede impedir la entrada del sustrato al sitio activo de la enzima y obstaculizar que la enzima catalice su reaccion correspondiente. La union del inhibidor puede ser reversible e irreversible. Normalmente los inhibidores irreversibles reaccionan con la enzima de forma covalente y no clasifican su estructura qumica a nivel de residuos esenciales de los aminocidos necesarios para la actividad enzimatica. En cambio los reversibles se unen a la enzima de forma no covalente donde da lugar a diferentes tipos de inhibicin dependiendo si el inhibidor se una a la enzima, al complejo: enzima sustrato o ambos -se unen a las enzimas mediantes interacciones no covalentes= puentes de hidrogeno, enlaces inicos - Los inhibidores y el sitio activo se combinan para producir una union fuerte y especifica. Al contrario que ocurre con el sustrato y los inhibidores irreversibles no experimentan reacciones qumicas cuando se une a la enzima y pueden ser eliminados fcilmente por dilucin o por dilisis. 3.2.1TIPOS DE INHIBIDORES 3.2.1.1 Inhibidor Reversible: 3.2.1.1.1 Inhibicin Competitiva: El sustrato y el inhibidor no se pueden unir a la misma enzima al mismo tiempo, esto ocurre cuando el inhibidor tiene afinidad por el sitio activo de una enzima en el que se una el sustrato. El sustrato y el inhibidor compiten por el acceso al sitio activo de la enzima. Este tipo de inhibidor se puede superar con concentraciones suficientes altas del sustrato, es decir dejando afuera el inhibidor.

FUENTE: http://es.wikipedia.org/wiki/Complejo_enzima-sustrato 3.2.1.1.2 Inhibicin Mixta: El sustrato en el inhibidor afecta la unin del sustito y viceversa; este tipo de inhibidor se puede reducir pero no se puede superar al aumentar la concentraciones del sustrato aunque si se dan las cosas que se unan el sitio activo. Aunque es posible que los inhibidores de tipo mixta se unen al sitio activo (efecto alosterico) Donde el inhibidor se une a otro sitio activo que no es el sitio activo de la enzima todo esto es un sitio alosterico cambia con la formacin da la afinidad del sustrato por el sitito activo reducido. 3.2.1.1.3Inhibicin No Competitiva: Es una forma de una inhibicin mixta donde la unin del inhibidor con la enzima reduce su actividad pero no acepta la unin del sustrato. El grado de inhibicin depende de su concentracin.

Fuente: http://es.wikipedia.org/wiki/Complejo_enzima-sustrato 3.2.1.2 Inhibidor Irreversible: La inhibicin irreversible es diferente de la in activacin enzimtico reversible. Los inhibidores irreversibles son generalmente especficos para un tipo de enzima y no inactivan todas las protenas. No funcionan destruyendo la estructura proteinica, sino alterando especficamente la estructura tridimensional del sitio activo inhabilitndola. Los inhibidores irreversibles dan lugar a una inhibicin dependiente del tiempo y por ello su potencia no puede ser caracterizada mediante la determinacin del valor. Esto se debe a la cantidad de enzima activa a la concentracion dada de inhibidor irreversible ser diferente dependiendo del tiempo de preincubacin del inhibidor con la enzima.

Conclusiones

- La clula puede compararse con un minsculo laboratorio, en el cual tiene la sntesis y la degradacin de un gran numero de sustancias. Estos procesos son efectuados por enzimas a la temperatura normal del organismo ya que a temperaturas sobre lo normal se produce la desnaturalizacin y la in activacin de las enzimas y con PH normal para efectuar sus procesos. - Las enzimas son los catalizadores biolgicos. que es una sustancia que acelera las reacciones qumicas si modificarse lo que significa que puede ser utilizado una y otra vez. - Las enzimas son protenas que tienen uno o ms lugares llamados sitios activos a los cuales se les unen el sustrato, es decir, la sustancia sobre la que acta la enzima. El sustrato es modificado qumicamente y convertido uno o mas productos E + S = [ES] = E+P Donde [ES] es un complejo enzima - sustrato intermediario. Las enzimas aceleran la reaccin hasta que se alcanza un equilibrio y puedan ser eficientes como para que la velocidad de reacciones sea de 10 a 10 veces mas rpida que en ausencia de un catalizador. - Una caracterstica muy importante de la actividad enzimtico es su especificad de manera que cada enzima particular acta sobre un determinado sustrato. - Las enzimas suelen ser tan especficas que son incapaces de actuar sobre las sustancias estrechamente relacionadas. - Las enzimas vienen a ser las protenas catalticas que aceleran la velocidad de las reacciones celulares al bajar la energa de activacin y estabilizar las intermediaciones del estado de transicin. - El sitio activo de la enzima comprende dos partes adicionales una regin de unin de sustrato y la otra cataltica. - En el centro activo encontramos restos de aminocidos constituyentes funcionales para la catlisis del sustrato, estos utilizan las llamadas coenzimas que son molculas orgnicas que sufren modificaciones durante la reaccin enzimtico para ayudar a la modificacin final del sustrato.

Reaccin modelo.

Michaelis y Menten propusieron un modelo simple para explicar la mayora de las reacciones catalizadas por enzimas. En este modelo la enzima se combina reversiblemente con su substrato para formar el complejo enzima-sustrato (ES) que subsecuentemente se rompe para formar el producto, hecho que regenera a la enzima. El modelo para una molcula de sustrato se muestra a continuacin:

k1 k 2 (1) ES ES EP k 1

en donde:

S es el substrato E es la enzima ES es el complejo enzima substrato o complejo de Michaelis y Menten k1,k-1 y k2 son las constantes de velocidad de la reaccin.

Ecuacin de Michaelis y Menten Consideraciones necesarias para derivar la ecuacin de Michaelis-Menten Conclusiones importantes sobre la cintica de MichaelisMenten. Grfico de Lineweaver-Burke

Cintica de Michaelis-Menten
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La cintica de Michaelis-Menten describe la velocidad de reaccin de muchas reacciones enzimticas. Recibe este nombre en honor a Leonor Michaelis y Maude Menten. Este modelo slo es vlido cuando la concentracin del sustrato es mayor que la concentracin de la enzima, y para condiciones de estado estacionario, es decir, cuando la concentracin del complejo enzima-sustrato es constante.

ndice
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1 Determinacin de constantes 2 Velocidad de reaccin 3 Constante de Michaelis 4 Ecuacin 5 Fuentes

Determinacin de constantes [editar]

Para determinar la velocidad mxima de una reaccin enzimtica, la concentracin de sustrato ([S] ) se aumenta hasta alcanzar una velocidad constante de formacin de producto. Esa es la velocidad mxima (Vmax) de la enzima. En ese caso, los sitios activos de la enzima estn saturados con sustrato.

Diagrama de velocidad de reaccin y constante de Michaelis-Menten.

Velocidad de reaccin [editar]

La velocidad V indica el nmero de molculas del sustrato que se convierten en producto por segundo. Con concentraciones crecientes de sustrato[S], la enzima va acercndose asintticamente a su velocidad mxima Vmax, pero nunca la alcanza. Por esta razn, no hay un valor de [S] determinado para la Vmax. De todas formas, se puede definir un parmetro

caracterstico de la enzima empleando la concentracin de sustrato a la cual se alcanza la mitad de la velocidad mxima (Vmax/2).

Constante de Michaelis [editar]

Como se acaba de mencionar, aunque es imposible medir exactamente la concentracin de sustrato que da Vmax, las enzimas pueden caracterizarse mediante la concentracin de sustrato a la cual la velocidad de reaccin es la mitad de la velocidad mxima. Esta concentracin de sustrato se conoce como constante de Michaelis-Menten (KM). Para enzimas que exhiben una cintica de Michaelis-Menten simple esta constante representa la constante de disociacin del complejo enzima-sustrato (ES) (o la inversa de la afinidad entre enzima y sustrato). Valores bajos indican que el complejo ES est unido muy fuertemente y raramente se disocia sin que el sustrato reaccione para dar producto. En estos casos se obtendr una KM diferente segn el sustrato especfico sobre el que acte la enzima (como sucede en el caso de enzimas que actan sobre sustratos anlogos) y segn las condiciones de reaccin en que se realicen las mediciones. Nota: KM solo se puede usar para determinar la afinidad de una enzima por un sustrato k2 es limitante de la velocidad, por ejemplo, k2 << k1 y KM se convierte en k-1/k1. Generalmente, k2 >> k1 o bien k2 and k1 son comparables. Nelson, DL., Cox, MM. (2000) Lehninger Principles of Biochemistry, 3rd Ed., Worth Publishers, USA

Ecuacin [editar]
La derivacin de Michaelis y Menten est descrita por Briggs y Haldane. Se obtiene de la siguiente manera: Se supone que la reaccin enzimtica es irreversible, y que el producto no se liga con la enzima despus de la reaccin.

Siguiendo la aproximacin del estado estacionario, que seala que la concentracin del complejo enzima-sustrato (ES) es pequea y se mantiene casi constante a lo largo de la reaccin enzimtica:

Se define:

Entonces:

(1)

La velocidad de reaccin es:

(2) La concentracin total de la enzima:

Por lo tanto: (3)

Sustituyendo (3) en (1) da:

Reordenando:

(4) Sustituyendo (4) en (2) :

Esta ecuacin se puede analizar experimentalmente con un diagrama de Lineweaver-Burke o un diagrama de Eadie-Hofstee.

E0 es el total de enzima. No es prctico medir la cantidad de complejo enzima-sustrato durante la reaccin, por lo que debe escribirse sta en trminos de cantidad total o inicial de enzima, que es una cantidad conocida. d[P]/dt o V0 es la velocidad de formacin del producto. k2[E0] o Vmax es la velocidad mxima. k2 se denomina con frecuencia kcat.

Cabe observar que [S] es grande comparada con Km, [S]/(Km + [S]) tiende a 1. La velocidad de formacin de producto es igual a k2[E0] en ese caso. Cuando [S] es igual a Km, [S]/(Km + [S]) vale 0.5. En ese caso, la velocidad de formacin de producto es la mitad de la mxima (1/2 Vmax). Representando grficamente V0 frente a [S] se puede fcilmente determinar Vmax y Km. Esto requiere una serie de experimentos a E0 constante y diferentes concentraciones de sustrato [S].

Los estudios sistemticos del efecto de la concentracin inical del sustrato sobre la actividad enzimtica comenzaron a realizarse a finales del siglo XIX. Ya en 1882 se introdujo el concepto del complejo enzimasustrato como intermediario del proceso de catlisis enzimtica. En 1913, Leonor Michaelis (foto de la izquierda) y Maud Menten (foto de la derecha) desarrollaron esta teora y propusieron una ecuacin de velocidad que explica el comportamiento cintico de los enzimas.

Para explicar la relacin oservada entre la velocidad inicial (v0) y la concentracin inicial de sustrato ([S]0) Michaelis y Menten propusieron que las reacciones catalizadas enzimticamente ocurren en dos etapas: En la primera etapa se forma el complejo enzima-sustrato y en la segunda, el complejo enzima-sustrato da lugar a la formacin del producto, liberando el enzima libre:

En este esquema, k1, k2 y k3 son las constantes cinticas individuales de cada proceso y tambin reciben el nombre de constantes microscpicas de velocidad. Segn esto, podemos afirmar que:

v1 = k1 [E] [S] v2 = k2 [ES] v3 = k3 [ES]

Se puede distinguir entre enzima libre (E) y enzima unido al sustrato (ES), de forma que la concentracin total de enzima, [ET], (que es constante a lo largo de la reaccin) es: [ET] = [E] + [ES] Como [E] = [ET] - [ES], resulta que: v1= k1[S] [ET] - k1 [S] [ES]

Este modelo cintico adopta la hiptesis del estado estacionario, segn la cual la concentracin del complejo enzima-sustrato es pequea y constante a lo largo de la reaccin (Figura de la derecha). Por tanto, la velocidad de formacin del complejo enzima-sustrato (v1) es igual a la de su disociacin (v2+ v3): v1 = v2 + v 3 Adems, como [ES] es constante, la velocidad de formacin de los productos es constante: v = v3 = k3 [ES] = constante. Como v1=v2+v3, podemos decir que: k1[S] [ET] - k1 [S] [ES] = k2 [ES] + k3 [ES]

Despejando [ES], queda que: , siendo , en donde la expresin (k2+k3)/k1 se ha sustitudo por KM, o constante de Michaelis-Menten. Este enlace nos aporta una explicacin sobre las razones que hacen de la KM un parmetro cintico importante. Por lo tanto, en el estado estacionario, la velocidad de formacin del producto es: v = v3 = k3 [ES] = Para cualquier reaccin enzimtica, [ET], k3 y KM son constantes. Vamos a considerar dos casos extremos:

A concentraciones de sustrato pequeas ([S] << KM) v = (k3 [ET]/KM) [S]. Como los trminos entre parntesis son constantes, pueden englobarse en una nueva constante, kobs, de forma que la expresin queda reducida a: v = kobs [S], con lo cual la reaccin es un proceso cintico de primer orden. A concentraciones de sustrato elevadas ([S] >> KM), v = k3 [ET]. La velocidad de reaccin es independiente de la concentracin del sustrato, y por tanto, la reaccin es un proceso cintico de orden cero. Adems, tanto k3 como [ET] son constantes, y nos permite definir un nuevo parmetro, la velocidad mxima de la reaccin (Vmax): Vmax = k3 [ET], que es la velocidad que se alcanzara cuando todo el enzima disponible se encuantra unido al sustrato.

Si introducimos el parmetro Vmax en la ecuacin general de la velocidad, (la frmula recuadrada

anteriormente), obtenemos la expresin ms conocida de la ecuacin de Michaelis-Menten:

CINTICA ENZIMTICA
Los principios generales de las reacciones qumicas se aplican tambin a

las reacciones enzimticas. Por este motivo, antes de empezar con la cintica qumica, se van a repasar algunos conceptos bsicos de cintica qumica. A continuacin, se describirn los siguientes conceptos:

Cintica enzimtica Modelo cintico de Michaelis-Menten Clculo de la KM y la Vmax de un enzima Actividad enzimtica

CONCEPTOS BSICOS DE CINTICA QUMICA

En una reaccin de orden cero, la velocidad de formacin del producto es independiente de la concentracin de sustrato: v = k En una reaccin de primer orden la velocidad de formacin de los productos es directamente proporcional a la concentracin del sustrato: v = k [A]. As, en la reaccin: sacarosa + agua glucosa + fructosa

La velocidad de hidrlisis de la sacarosa es, en todo momento, proporcional a la concentracin de sacarosa. Dicho matemticamente, donde [A] es la concentracin de sacarosa a cada tiempo (t) y k es la constante de proporcionalidad. Se dice que sta es una reaccin de primer orden. Una reaccin de segundo orden es aquella en la que la velocidad de formacin del producto depende

de la concentracin de dos sustratos (como en una reaccin de condensacin): v = k [A1] [A2]

del cuadrado de la concentracin de un nico sustrato (reaccin de dimerizacin): v = k [A]2

En la tabla siguiente se resumen los distintos tipos de reaccin, y la forma de calcular sus parmetros cinticos.
ORDEN CERO Expresin diferencial de la velocidad Ecuacin integrada de la velocidad Vida media (t1/2) Representacin que da lugar a una recta Signo de la pendiente Significado de la pendiente Significado de la ordenada en el origen [A]0 es [A] vs t negativo -k [A]0 b Ln[A] vs t negativo -k Ln[A]0 eb 1/b 1/[A] vs t positivo k [A] = -kt + [A]0 Ln[A] = -kt + Ln[A]0 PRIMER ORDEN SEGUNDO ORDEN

CINTICA ENZIMTICA
La cintica enzimtica estudia la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas. Estos estudios proporcionan informacin directa acerca del mecanismo de la reaccin cataltica y de la especifidad del enzima. La velocidad de una reaccin catalizada por un enzima puede medirse con relativa facilidad, ya que en muchos casos no es necesario purificar o aislar el enzima. La

medida se realiza siempre en las condiciones ptimas de pH, temperatura, presencia de cofactores, etc, y se utilizan concentraciones saturantes de sustrato. En estas condiciones, la velocidad de reaccin observada es la velocidad mxima (Vmax). La velocidad puede determinarse bien midiendo la aparicin de los productos o la desaparicin de los reactivos.

Al seguir la velocidad de aparicin de producto (o de desaparicin del sustrato) en funcin del tiempo se obtiene la llamada curva de avance de la reaccin, o simplemente, la cintica de la reaccin. A medida que la reaccin transcurre, la velocidad de acumulacin del producto va disminuyendo porque se va consumiendo el sustrato de la reaccin (Figura de la derecha). Para evitar esta complicacin se procede a medir la velocidad inicial de la reaccin (v0). La velocidad inicial de la reaccin es igual a la pendiente de la curva de avance a tiempo cero (Figura de la derecha). De esta forma, la medida de v0 se realiza antes de que se consuma el 10% del total del sustrato, de forma que pueda considerarse la [S] como esencialmente constante a lo largo del experimento. Adems, en estas condiciones no es necesario considerar la reaccin inversa, ya que la cantidad de producto formada es tan pequea que la reaccin inversa apenas ocurre. De esta forma se simplifican enormemente las ecuaciones de velocidad.

Para estudiar la cintica enzimtica se mide el efecto de la concentracin inicial de sustrato sobre la velocidad inicial de la reaccin, manteniendo la cantidad de enzima constante. Si representamos v0 frente a [S]0 obtenemos una grfica como la de la Figura de la derecha. Cuando [S]0 es pequea, la velocidad inicial es directamente proporcional a la concentracin de sustrato, y por tanto, la reaccin es de primer orden. A altas [S]0, el enzima se encuentra saturada por el sustrato, y la velocidad ya no depende de [S]0. En este punto, la reaccin es de orden cero y la velocidad es mxima (Vmax).

MODELO CINTICO DE MICHAELISMENTEN

Los estudios sistemticos del efecto de la concentracin inical del sustrato sobre la actividad enzimtica comenzaron a realizarse a finales del siglo XIX. Ya en 1882 se introdujo el concepto del complejo enzima-sustrato como intermediario del proceso de catlisis enzimtica. En 1913, Leonor Michaelis (foto de la izquierda) y Maud Menten (foto de la derecha) desarrollaron esta teora y propusieron una ecuacin de velocidad que explica el comportamiento cintico de los enzimas.

Para explicar la relacin oservada entre la velocidad inicial (v0) y la concentracin inicial de sustrato ([S]0) Michaelis y Menten propusieron que las reacciones catalizadas enzimticamente ocurren en dos etapas: En la primera etapa se forma el complejo enzima-sustrato y en la segunda, el complejo enzima-sustrato da lugar a la formacin del producto, liberando el enzima libre:

En este esquema, k1, k2 y k3 son las constantes cinticas individuales de cada proceso y tambin reciben el nombre de constantes microscpicas de velocidad. Segn esto, podemos afirmar que:

v1 = k1 [E] [S] v2 = k2 [ES] v3 = k3 [ES]

Se puede distinguir entre enzima libre (E) y enzima unido al sustrato (ES), de forma que la concentracin total de enzima, [ET], (que es constante a lo largo de la reaccin) es: [ET] = [E] + [ES] Como [E] = [ET] - [ES], resulta que: v1= k1[S] [ET] - k1 [S] [ES]

Este modelo cintico adopta la hiptesis del estado estacionario, segn la cual la concentracin del complejo enzima-sustrato es pequea y constante a lo largo de la reaccin (Figura de la derecha). Por tanto, la velocidad de formacin del complejo enzima-sustrato (v1) es igual a la de su disociacin (v2+ v3): v1 = v2 + v3 Adems, como [ES] es constante, la velocidad de formacin de los productos es constante: v = v3 = k3 [ES] = constante. Como v1=v2+v3, podemos decir que: k1[S] [ET] - k1 [S] [ES] = k2 [ES] + k3 [ES]

Despejando [ES], queda que: , siendo , en donde la expresin (k2+k3)/k1 se ha sustitudo por KM, o constante de Michaelis-Menten. Este enlace nos aporta una explicacin sobre las razones que hacen de la KM un parmetro cintico importante. Por lo tanto, en el estado estacionario, la velocidad de formacin del producto es: v = v3 = k3 [ES] = Para cualquier reaccin enzimtica, [ET], k3 y KM son constantes. Vamos a considerar dos casos extremos:

A concentraciones de sustrato pequeas ([S] << KM) v = (k3 [ET]/KM) [S]. Como los trminos entre parntesis son constantes, pueden englobarse en una nueva constante, kobs, de forma que la expresin queda reducida a: v = kobs [S], con lo cual la reaccin es un proceso cintico de primer orden. A concentraciones de sustrato elevadas ([S] >> KM), v = k3 [ET]. La velocidad de reaccin es independiente de la concentracin del sustrato, y por tanto, la reaccin es un proceso cintico de orden cero. Adems, tanto k3 como [ET] son constantes, y nos permite definir un nuevo parmetro, la velocidad mxima de la reaccin (Vmax): Vmax = k3 [ET], que es la velocidad que se alcanzara cuando todo el enzima disponible se encuantra unido al sustrato.

Si introducimos el parmetro Vmax en la ecuacin general de la velocidad, (la frmula recuadrada

anteriormente), obtenemos la expresin ms conocida de la ecuacin de Michaelis-Menten:

Hay enzimas que no obedecen la ecuacin de Michaelis-Menten. Se dice que su cintica no es Michaeliana. Esto ocurre con los enzimas alostricos, cuya grfica v frente a [S] no es una hiprbola, sino una sigmoide (Figura de la derecha). En la cintica sigmoidea, pequeas variaciones en la [S] en una zona crtica (cercana a la KM) se traduce en grandes variaciones en la velocidad de reaccin.

CLCULO DE LA KM Y DE LA Vmax DE UN ENZIMA La representacin grfica de la ecuacin de Michaelis-Menten (v0 frente a [S]0) es una hiprbola (Figura de la izquierda). La Vmax corresponde al valor mximo al que tiende la curva experimental, y la KM corresponde a la concentracin de sustrato a la cual la velocidad de la reaccin es la mitad de la Vmax.

Para determinar grficamente los valores de KM y Vmax es ms sencillo utilizar la representacin doble recproca (1/v0 frente a 1/[S]0), ya que es una lnea recta. Esta representacin doble recproca recibe el nombre de representacin de Lineweaver-Burk (Figura de la derecha). Es una recta en la cual:

La pendiente es KM/Vmax La abscisa en el origen (1/v0 = 0) es -1/KM La ordenada en el origen (1/[S]0 = 0) es 1/Vmax

De esta forma, a partir de los datos experimentales se puede calcular grficamente, los valores de KM y Vmax de un enzima para diversos sustratos.

ACTIVIDAD ENZIMTICA
Se define la unidad de actividad enzimtica (U) como la cantidad de enzima que cataliza la conversin de 1 mol de sustrato en un minuto. La actividad especfica es el nmero de unidades de enzima por miligramo de protena (U/mg prot) o por mililitro de disolucin (U/ml). Recientemente, el Sistema Internacional de unidades (SI) ha definido la unidad de actividad enzimtica como la cantidad de enzima que transforma 1 mol de sustrato por segundo. Esta unidad se llama katal (kat). Como 1 mol son 106 moles y 1 minuto son 60 segundos, resulta que 1 katal equivale a 60 x 106 U. Esta unidad es muy grande, de forma que se utilizan frecuentemente los submltiplos como el microkatal (kat, 10-6 kat) o el nanokatal (nkat, 10-9 kat). Cuando se conoce el peso molecular del enzima puro y el nmero de centros activos por molcula de enzima, las medidas de actividad enzimtica permiten calcular el nmero de recambio del enzima, o sea, el nmero de reacciones elementales que realiza el enzima por cada centro activo y por unidad de tiempo.

MOTIVOS QUE HACEN DE KM UN PARMETRO CINTICO IMPORTANTE

CINETICA ENZIMATICA

Dada la reacin: A ----> B , donde A es el sustrato (reactante) y B el producto, la velocidad (o la tasa de rapidez), u, es la cantidad de B formado o la cantidad de A consumido por unidad de tiempo. As:

La relacin matemtica entre la tasa de rapidez y la concentracin de reactantes e la ley de rapidez. Para esta reaccin la ley de rapidez es:

donde n es el orden de la reaccin, determinado experimentalmente y k es la constante de rapidez. Reaccin de Cero Orden: la rapidez es independiente de la concentracin del reactante: v= k[A] Una reaccin enzimtica es de cero orden cuando la enzima est saturada del sustrato. En este caso, la formacin del producto procede a una rapidez lineal con respecto al tiempo. La adicin de ms sustrato no aumenta la rapidez de la reaccin.

Reaccin de Primer Orden: la rapidez depende de la concentracin del reactante elevado a la primeta potencia: v=k[A]1 El paso determinante de la reaccin es unimolecular (no se requieren colisiones moleculares; slo una molcula es necesaria para alcanzar el estado de transicin). La rapidez es directamenete proporcional a la [A]. La unidad de k es 1/seg. Una grfica de v vs [A] da una lnea recta cuya pendiente es igual a k.

A mayor disponibilidad de A mayor la rapidez de la reaccin. Un analisis de la rapidez de una reaccin de un slo sustrato y catalizada por una enzima genera resusltados muy diferentes a los esperados. A baja [A] la es proporcional a la [A]: la reaccin tiene una cintica de primer orden. Sin embargo v no aumenta proporcionalmente segn [A] aumenta: en su lugar, comienza a nivelarse. Cuando [A] es lo suficientemente alta, u es virtualmente indepentiente de [A] y tiende a un lmite mximo. El valor de u en ese lmite se indica como Vmax. Como la rapidez ya no es dependiente de [A| a esas altas concentraciones, se dice que la enzima est saturada del sustrato y la reaccin sigue una cintica de cero orden.

El factor ms comn que afecta la rapidez de una reaccin es el cambio en concentracin de reactantes ya que esto afecta el equilibrio. Para los procesos enzimticos hay dos posibilidades: (a) Cambios en la concentracin de la enzima.Para la reaccin: <CENTER donde: S=sustrato E= enzima ES=complejo enzima/sustrato P= producto; y k1 y k2 = constantes de rapidez de cada reaccin,

la velocidad inicial, v, (velocidad medida cuando apenas ha reaccionado el sustrato) es proporcional a la concentracin de enzima [E]: v [E] . Sin embargo, segn procede la reaccin, esta proporcionalidad no es tan notable. Veamos: si consideramos la reaccin como:

entonces v1 = k1[S][E] y v2= k2[E][P]. Como la reaccin est en equilibrio entonces v1 = v2 , por lo que:

Como [ E ] se cancela, entonces:

Por lo tanto, la [ E ] no afecta la Keq, lo que equivale a decir que la enzima afecta la rapidez de la reaccin pero no las constantes de rapidez, cuya proporcin es la Keq. La constante de equilibrio ser la misma con o sin catlisis enzimtica. (b) Cambios en la concentracin del sustrato: con otras condiciones constante, si la [ S ] aumenta entonces la velocidad inicial,v, aumenta hasta un valor mximo, Vmax, y no ms all. Este mximo se alcanza cuando la enzima se satura del sustrato. Para la reaccin:

(k1/k2 representan las constante de rapidez de la reaccin directa e inversa, respectivamente) Se asume que: (a) k2 es insignificante cuando se compara con k1 (b) la rapidez de formacin de ES es igual a la rapidez de su degradacin por el transcurso de la reaccin. Esto se conoce como la presuncin del estado invariable. Por lo tanto, la expresin de rapidez para la reaccin de ES ser:

v = / t = k3[ ES ] Ahora bien: (a) si la rapidez de formacin de ES es = k1[ S ][ E ]; y (b) si la rapidez de disociacin de ES es = (k2 + k3)[ ES ], entonces, por la presuncin del estado invariable: k1[S][E] = (k2 + k3)[ES] por lo que:

La expresin

se conoce como la constante de Michaelis-Menten (km), cuya dimensin es moles/litro (Molaridad). Usando otras consideraciones, se logra derivar la ecuacin conocida la Ecuacin de Michaelis-Menten:

donde v = velocidad (rapidez) inicial y Vmax = velocidad (rapidez) mxima que la reaccin puede alcanzar. Si km = [S], entonces

Si se grafica v vs [S] tenemos que:

Km es la concentracin de S, [ S ], a la que la enzima est a la mitad de su velocidad mxima (punto 'b' en la grfica). Desde el origen hasta el punto 'c' de la grfica, la enzima presente no est totalmente combinada con el sustrato. En los puntos 'a' y 'b', aumentando o disminuyendo [ S ] aumenta o disminuye [ ES ], por lo que v depender de [S] (reaccin de primer orden). En el punto 'c', toda la enzima est esencialmente combinada con el sustrato (saturada), por lo que cualquier aumento en [S] no altera la rapidez de reaccin: no hay enzima libre para reaccionar (reaccin de orden cero). La ecuacin de Michaelis-Menten describe el comportamiento de muchas enzimas segn [ S ] vara. A esos efectos: (a) Si Km es la [ S ] que produce la mitad de la Vmax, entonces en ese punto la enzima esta "media" saturada. Km se puede calcular experimentalmente de la grfica de v vs [ S ]. (b) Si [ S ] es mucho menor que Km (punto 'a' en la grfica), entonces la ecuacin de Michaelis-Menten ser:

lo que implica que cuando la concentracin del sustrato es considerablemente menor que la requerida para obtener la mitad de la Vmax (el valor de Km), entonces la velocidad v depender de [ S ] (reaccin de primer orden). (c) Si [ S ] es mucho mayor que Km (punto 'c' en la grfica) entonces la ecuacin de Michaelis-Menten ser:

lo que implica que la velocidad medida es realmente la velocidad mxima posible (enzima saturada; reaccin de cero orden). Importancia de la constante de Michaelis-Menten, Km: -es una constante que es caracterstica de cada enzima y su sustrato bajo condiciones especficas. -puede reflejar la afinidad de la enzima por su sustrato (a menor valor de Km mayor la afinidad de la enzima para la formacin del complejo ES). -permite interpretar el mecanismo de la reaccin enzimtica. Como regla general, si [ S ]>100(Km), entonces v = Vmax y la cintica es de cero orden; si [ S ]< 0.01(Km), la cintica es de primer orden. - permite calcular cuanto sustrato usar. Muy pocas enzimas dan curvas de saturacin que permitan la evaluacin de Vmax y Kmde la grfica de v vs [ S ]. En este caso se recurre a las grficas de Lineweaver-Burk, que parte de una ecuacin del tipo y = mx+b , que es la grfica de una lnea recta. Esta ecuacin surge del recproco de la ecuacin de Michaelis-Menten:

-la pendiente m es Km/Vmax; -el intercepto en "y" es 1/Vmax -el intercepto en "x" es -1/Km Km se puede calcular de la pendiente o del intercepto en "y" o del negativo del intercepto en "x".

La ecuacin de Lineweaver-Burk permite evaluar la reacciones enzimticas con inhibidores. Otra forma de medir eficiencia cataltica es por el nmero de vuelco o de recambio (turnover number), kcat : kcat = Vmax/[ Etotal ] donde [ Etotal ] es la concentracin total de la enzima= [ E ] + [ ES ], donde [ E ] es la concentracin de la enzima libre y [ ES ] es la concentracin de la enzima en el complejo enzima sustrato. kcat es una medida de la mxima actividad enzimtica; se asume que la enzima esta totalmente saturada con el sustrato, por lo que la reaccin procede a la mxima rapidez. Se han encontrado muchas enzimas que no dan cintica de saturacin hiperblica o clsica de Michaelis-Menten. Para estas enzimas, una grfica de v en funcin de [S] da una curva sigmoidal.

Curva de saturacin sigmoidal. Parece que la reaccin sigmoidea se debe a la presencia de focos de enlaces mltiples en la enzima, situados probablemente en subunidades diferentes. La interaccin de un sustrato en un foco ocasiona un cambio en la configuracin de la estructura terciaria de la protena, que puede dar como resultado un cambio en la afinidad de un foco libre para los sustratos (Alosterismo o efecto alostrico: un efector o modulador se une de forma nocovalente a una protena y afecta -positiva o negativamente- su actividad).

La constante de Michaelis-Menten (KM) es un parmetro cintico importante pr mltiples razones:

KM es la concentracin de sustrato para la cual la velocidad de reaccin es la mitad de la velocidad mxima. En efecto, si KM = [S], la ecuacin de Michaelis-Menten se reduce a: v = Vmax/2. El valor de KM da idea de la afinidad del enzima por el sustrato: A menor KM, mayor afinidad del enzima por el sustrato, y a mayor KM, menor afinidad. Este hecho tiene fcil explicacin si tenemos en cuenta que KM se define como

Hay enzimas que no obedecen la ecuacin de Michaelis-Menten. Se dice que su cintica no es Michaeliana. Esto ocurre con los enzimas alostricos, cuya grfica v frente a [S] no es una hiprbola, sino una sigmoide (Figura de la derecha). En la cintica sigmoidea, pequeas variaciones en la [S] en una zona crtica (cercana a la KM) se traduce en grandes variaciones en la velocidad de reaccin.