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Microbiologia Geral

Darlene Ana de Paula Vieira Nayara Cludia de Assuno Queiroz Fernandes

INSTITUTO FEDERAL DE EDUCAO, CINCIA E TECNOLOGIA GOIS


Campus Inhumas

Inhumas - GO 2012

Presidncia da Repblica Federativa do Brasil Ministrio da Educao Secretaria de Educao Prossional e Tecnolgica Instituto Federal de Educao, Cincia e Tecnologia de Gois Este Caderno foi elaborado em parceria entre o Instituto Federal de Educao, Cincia e Tecnologia de Gois/IFG-Inhumas e a Universidade Federal de Santa Maria para o Sistema Escola Tcnica Aberta do Brasil Rede e-Tec Brasil.
Equipe de Elaborao Instituto Federal de Educao, Cincia e Tecnologia de Gois/ IFG-Inhumas Reitor Paulo Csar Pereira/IFG-Inhumas Diretor Geral Cleiton Jos da Silva/IFG-Inhumas Coordenao Institucional Daniel Aldo Soares/IFG-Inhumas Professor-autor Darlene Ana de Paula Vieira/IFG-Inhumas Nayara Cludia de A. Queiroz Fernandes/IFG-Inhumas Equipe Tcnica Renata Luiza da Costa/IFG-Inhumas Rodrigo Cndido Borges/IFG-Inhumas Shirley Carmem da Silva/IFG-Inhumas Viviane Margarida Gomes/IFG-Inhumas Comisso de Acompanhamento e Validao Colgio Tcnico Industrial de Santa Maria/CTISM Coordenador Institucional Paulo Roberto Colusso/CTISM Coordenao Tcnica Iza Neuza Teixeira Bohrer/CTISM Coordenao de Design Erika Goellner/CTISM Reviso Pedaggica Andressa Rosemrie de Menezes Costa/CTISM Francine Netto Martins Tadielo/CTISM Marcia Migliore Freo/CTISM Reviso Textual Daiane Siveris/CTISM Lourdes Maria Grotto de Moura/CTISM Vera Maria Oliveira/CTISM Reviso Tcnica Josiane Pacheco Menezes/CTISM Diego Pascoal Golle/CTISM Ilustrao Rafael Cavalli Viapiana/CTISM Diagramao Gustavo Schwendler/CTISM Leandro Felipe Aguilar Freitas/CTISM Mara Rodrigues/CTISM Muren Fernandes Massia/CTISM

Ficha catalogrca elaborada por Maria Aparecida Rodrigues de Souza CRB 1/1497 bibliotecria do IFG Campus Inhumas
Vieira, Darlene Ana de Paula V658m Microbiologia Geral / Darlene Ana de Paula Veira, Nayara Cludia de Assuno Queiroz. Inhumas: IFG; Santa Maria: Universidade Federal de Santa Maria, 2012. 100 p. : il. Bibliograa. Caderno elaborado em parceria entre o Instituto Federal de Educao, Cincia e Tecnologia de Gois/IFG-Inhumas e a Universidade Federal de Santa Maria para o Sistema Escola Tcnica Aberta do Brasil e-Tec Brasil. 1. Microbiologia Geral. 2. Microrganismos. 3. Fernandes, Nayara Cludia de Assuno Queiroz. I. Ttulo. CDD 579

INSTITUTO FEDERAL
RIO GRANDE DO SUL

Apresentao e-Tec Brasil


Prezado estudante, Bem-vindo ao e-Tec Brasil! Voc faz parte de uma rede nacional pblica de ensino, a Escola Tcnica Aberta do Brasil, instituda pelo Decreto n 6.301, de 12 de dezembro de 2007, com o objetivo de democratizar o acesso ao ensino tcnico pblico, na modalidade a distncia. O programa resultado de uma parceria do Ministrio da Educao, por meio das Secretarias de Educao a Distncia (SEED) e de Educao Prossional e Tecnolgica (SETEC), as universidades e escolas tcnicas estaduais e federais. A educao a distncia no nosso pas, de dimenses continentais e grande diversidade regional e cultural, longe de distanciar, aproxima as pessoas ao garantir acesso educao de qualidade e ao promover o fortalecimento da formao de jovens moradores de regies distantes dos grandes centros geogrca e ou economicamente. O e-Tec Brasil leva os cursos tcnicos a locais distantes das instituies de ensino e para a periferia das grandes cidades, incentivando os jovens a concluir o ensino mdio. Os cursos so ofertados pelas instituies pblicas de ensino, e o atendimento ao estudante realizado em escolas-polo integrantes das redes pblicas municipais e estaduais. O Ministrio da Educao, as instituies pblicas de ensino tcnico, seus servidores tcnicos e professores acreditam que uma educao prossional qualicada integradora do ensino mdio e da educao tcnica, capaz de promover o cidado com capacidades para produzir, mas tambm com autonomia diante das diferentes dimenses da realidade: cultural, social, familiar, esportiva, poltica e tica. Ns acreditamos em voc! Desejamos sucesso na sua formao prossional!

Ministrio da Educao Janeiro de 2010


Nosso contato etecbrasil@mec.gov.br

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Indicao de cones
Os cones so elementos grficos utilizados para ampliar as formas de linguagem e facilitar a organizao e a leitura hipertextual. Ateno: indica pontos de maior relevncia no texto.

Saiba mais: oferece novas informaes que enriquecem o assunto ou curiosidades e notcias recentes relacionadas ao tema estudado. Glossrio: indica a denio de um termo, palavra ou expresso utilizada no texto. Mdias integradas: sempre que se desejar que os estudantes desenvolvam atividades empregando diferentes mdias: vdeos, lmes, jornais, ambiente AVEA e outras. Atividades de aprendizagem: apresenta atividades em diferentes nveis de aprendizagem para que o estudante possa realiz-las e conferir o seu domnio do tema estudado.

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Tecnologia da Informtica

Sumrio
Palavra do professor-autor Apresentao da disciplina Projeto instrucional Aula 1 Principais reas da microbiologia e microscopia 1.1 Apresentao 1.2 Microbiologia bsica 1.3 Microbiologia aplicada 1.5 Microscopia Aula 2 A clula 2.1 Apresentao 2.3 Diferenas entre organismos procariontes e eucariontes 2.4 Citoplasma 2.5 Organelas citoplasmticas Aula 3 Bactrias: morfologia e estruturas 3.1 Apresentao 3.2 Bactrias 3.3 Morfologia: tamanho, forma e arranjos bacterianos 3.4 Estruturas externas da clula bacteriana 3.5 Membrana plasmtica modelo mosaico uido 3.6 Estruturas internas da clula bacteriana Aula 4 Bactrias: reproduo, nutrio e crescimento 4.1 Apresentao 4.2 Reproduo bacteriana 4.3 Nutrio das bactrias 4.4 Crescimento das bactrias 9 11 13 15 15 15 16 17 23 23 26 27 27 37 37 37 37 41 47 48 51 51 51 55 56

1.4 Caractersticas dos principais grupos de microrganismos 16

2.2 A clula: unidade fundamental da vida que se ligam ao DNA. 23

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Aula 5 Fungos (leveduras): morfologia e estruturas 5.1 Apresentao 5.2 Fungos 5.3 Leveduras 5.4 Estruturas da clula da levedura

61 61 61 62 64

Aula 6 Fungos (leveduras): reproduo, nutrio e crescimento 67 6.1 Apresentao 67 6.2 Reproduo das leveduras 6.3 Nutrio das leveduras 6.4 Crescimento das leveduras Aula 7 Metabolismo e cintica dos microrganismos 7.1 Apresentao 7.2 Metabolismo 7.3 Microrganismos para aplicao em processos industriais 7.4 Cintica dos processos fermentativos 7.5 Mtodos para quanticao do crescimento Aula 8 Provas bioqumicas e cultura de microrganismos 8.1 Apresentao 8.2 Provas bioqumicas 8.3 Prova da motilidade 8.4 Meios de cultivo 8.5 Tcnicas de semeadura 8.6 Mtodo do Nmero Mais Provvel (NMP) Referncias Currculo do professor-autor 67 69 70 73 73 73 78 79 84 87 87 87 90 91 92 96 99 100

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Palavra do professor-autor
A disciplina de microbiologia, juntamente com a matemtica, a qumica e a fsica, constitui um dos ramos fundamentais das cincias bsicas. O conhecimento e o estudo detalhado dos microrganismos e de suas funes permitem estabelecer seu uso em aplicaes muito variadas, desde o campo mdico, alimentar e ambiental, agrcola e industrial. Desse modo, a microbiologia consolida-se como um dos pilares da biotecnologia. Neste caderno apresentaremos a microbiologia geral, que voltada para o estudo da morfologia, seus arranjos e reaes aos processos de colorao, siologia, metabolismo, caracterizao e identicao dos microorganismos. Ao adentrar o universo microbiolgico, voc ter condies de multiplicar seu conhecimento, mas como em toda disciplina, no sero esgotados os assuntos aqui iniciados, proporcionando a retomada e a complementao dos assuntos abordados atravs de atividades e sugestes de estudo no ambiente virtual de ensino-aprendizagem do curso. Uma fonte importante de consulta sero os stios eletrnicos sobre microbiologia. Tambm, para que se possa aproveitar melhor o presente material, sugerimos caro estudante, que voc faa uma leitura cuidadosa do texto, explorando tambm as guras que acompanham e ilustram as explicaes. Como em todo curso, ou em qualquer situao nova, existiro momentos desaadores, que nos levaro a mudanas, as quais so imprescindveis para a nossa formao. Bons estudos.

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Apresentao da disciplina
No se pode ensinar tudo a algum, pode-se apenas ajud-lo a encontrar por si mesmo.
Galileu Galilei

A microbiologia [do grego: mikros (pequeno), bios (vida) e logos (cincia)] o estudo dos organismos microscpicos e de suas atividades. Preocupa-se com a forma, a estrutura, a reproduo, a siologia, o metabolismo e a identicao dos microrganismos. Assim a microbiologia envolve o estudo de organismos procariotos (bactrias, archaeas), eucariotos inferiores (algas, protozorios, fungos) Figura A. A microbiologia teve incio com o polimento de lentes, feitas a partir de peas de vidro, combinadas at produzir aumentos sucientemente grandes que possibilitassem a visualizao dos microrganismos. Os relatos de Robert Hooke e Antony van Leeuwenhoek possibilitaram as primeiras observaes de bactrias e outros microrganismos. Embora no tenha sido, provavelmente, o primeiro a ver as bactrias e os protozorios, o holands Antony van Leeuwenhoek (1632-1723) foi o primeiro a relatar suas observaes, com descries precisas e desenhos. Embora van Leeuwenhoek seja considerado o pai da microbiologia, os relatos de Hooke, descrevendo a estrutura de um bolor, foram publicados anteriormente aos de Leeuwenhoek. Assim, esses dois pesquisadores so considerados os pioneiros nessa cincia.

Para saber mais sobre a forma de algumas bactrias e a histria da microbiologia, acesse: http://www.portalsaofrancisco. com.br/alfa/microbiologia/ microbiologia-3.php

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Figura A: Exemplos de microorganismos: (a) Archeae; (b) Bactria; (c ) Fungo Penicilium; (d) Alga; (e) Protozorio Tripanossoma cruzi e (f) Vrus HIV
Fonte: (a) www.microbiologybytes.com (b) http://www.sciencemusings.com/blog/uploaded_images/Bacteria-772833.jpg (c ) http://faculty.clintoncc.suny.edu (d) http://lectoracorrent.blogspot.com (e) http://cbme.usp.br (f) http://pathmicro.med.sc.edu/lecture/hiv9.htm

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Palavra instrucional Projeto do professor-autor


Disciplina: Microbiologia Geral (carga horria: 60h). Ementa: Morfologia, estrutura celular e reproduo de bactrias e leveduras. Bioqumica das fermentaes. Velocidade de reaes fermentativas e fatores que as inuenciam. Fatores que inuenciam no desenvolvimento de microorganismos. Procedimentos bsicos de anlises microbiolgicas. Unidades de medidas, sistemas de unidades e fatores de converso para expressar os resultados das anlises efetuadas.

AULA

OBJETIVOS DE APRENDIZAGEM
Reconhecer a importncia da microbiologia nas diferentes reas biolgicas. Compreender as principais caractersticas dos microrganismos. Compreender a importncia da microscopia no estudo da microbiologia, reconhecendo as principais partes e os tipos de microscpio. Entender como as imagens so ampliadas.

MATERIAIS
Apostila didtica, composta de introduo, objetivos e um roteiro de estudo, composto por textos, guras, exemplos, equaes, links, mdias integradas, questionamentos, reexes, lembretes, atividades de aprendizagem e sntese. No ambiente virtual sero disponibilizadas atividades complementares, bem como fruns para discusso. Apostila didtica, composta de introduo, objetivos e um roteiro de estudo, composto por textos, guras, exemplos, equaes, links, mdias integradas, questionamentos, reexes, lembretes, atividades de aprendizagem e sntese. No ambiente virtual sero disponibilizadas atividades complementares, bem como fruns para discusso. Apostila didtica, composta de introduo, objetivos e um roteiro de estudo, composto por textos, guras, exemplos, equaes, links, mdias integradas, questionamentos, reexes, lembretes, atividades de aprendizagem e sntese. No ambiente virtual sero disponibilizadas atividades complementares, bem como fruns para discusso.

CARGA HORRIA (horas)

1. Principais reas da microbiologia e microscopia

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2. A clula

Compreender que as clulas so unidades fundamentais da vida. Diferenciar clulas procariontes de clulas eucariontes.

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3. Bactrias: morfologia e estrutura

Conhecer as bactrias: seu tamanho e sua morfologia. Compreender as estruturas das clulas bacterianas. Entender e diferenciar bactrias Gram positivas de Gram negativas. Identicar estruturas da membrana e do citoplasma bacteriano.

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AULA

OBJETIVOS DE APRENDIZAGEM
Compreender os tipos de reproduo bacteriana. Conhecer as formas de obteno de energia das bactrias. Entender e diferenciar macro de micronutrientes. Compreender as fases da curva de crescimento das bactrias. Compreender os fatores que limitam o crescimento das bactrias.

MATERIAIS
Apostila didtica, composta de introduo, objetivos e um roteiro de estudo, composto por textos, guras, exemplos, equaes, links, mdias integradas, questionamentos, reexes, lembretes, atividades de aprendizagem e sntese. No ambiente virtual sero disponibilizadas atividades complementares, bem como fruns para discusso. Apostila didtica, composta de introduo, objetivos e um roteiro de estudo, composto por textos, guras, exemplos, equaes, links, mdias integradas, questionamentos, reexes, lembretes, atividades de aprendizagem e sntese. No ambiente virtual sero disponibilizadas atividades complementares, bem como fruns para discusso. Apostila didtica, composta de introduo, objetivos e um roteiro de estudo, composto por textos, guras, exemplos, equaes, links, mdias integradas, questionamentos, reexes, lembretes, atividades de aprendizagem e sntese. No ambiente virtual sero disponibilizadas atividades complementares, bem como fruns para discusso. Apostila didtica, composta de introduo, objetivos e um roteiro de estudo, composto por textos, guras, exemplos, equaes, links, mdias integradas, questionamentos, reexes, lembretes, atividades de aprendizagem e sntese. No ambiente virtual sero disponibilizadas atividades complementares, bem como fruns para discusso. Apostila didtica, composta de introduo, objetivos e um roteiro de estudo, composto por textos, guras, exemplos, equaes, links, mdias integradas, questionamentos, reexes, lembretes, atividades de aprendizagem e sntese. No ambiente virtual sero disponibilizadas atividades complementares, bem como fruns para discusso.

CARGA HORRIA (horas)

4. Bactrias: reproduo, nutrio e crescimento

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5. Fungos (leveduras): morfologia e estruturas

Conhecer os fungos: suas principais caractersticas. Conhecer a importncia das leveduras nos processos industriais. Identicar as formas e os arranjos morfolgicos das leveduras. Compreender as estruturas das clulas das leveduras.

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6. Fungos (leveduras): reproduo, nutrio e crescimento

Compreender os tipos reprodutivos das leveduras. Conhecer as formas de obteno de energia das leveduras. Entender a nutrio das leveduras. Compreender a curva de crescimento e os fatores que limitam o crescimento das leveduras.

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7. Metabolismo e cintica dos microrganismos

Compreender o metabolismo e a cintica dos microrganismos. Diferenciar e entender anabolismo e catabolismo. Conhecer tipos fermentativos. Entender o rendimento energtico na respirao e na fermentao. Entender os clculos do tempo de gerao e a taxa de crescimento.

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8. Provas bioqumicas e cultura de microrganismos

Conhecer princpios e procedimentos de diversas provas (testes) bioqumicas usadas na identicao de microrganismos. Conhecer tcnica de enumerao e deteco de microrganismos Mtodo do Nmero Mais Provvel (NMP).

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Aula 1 Principais reas da microbiologia e microscopia

Meditai se s as naes fortes podem fazer cincia ou se a cincia que as torna fortes.
Oswaldo Cruz

Objetivos
Reconhecer a importncia da microbiologia nas diferentes reas biolgicas. Compreender as principais caractersticas dos microrganismos. Compreender a importncia da microscopia no estudo da microbiologia, reconhecendo as principais partes e os tipos de microscpio. Entender como as imagens so ampliadas.

1.1 Apresentao
As informaes aqui apresentadas auxiliaro na compreenso de algumas reas de atuao da microbiologia, assim como na apreenso das principais caractersticas dos microrganismos. Existem numerosos aspectos no estudo da microbiologia, que dividido em duas reas: a microbiologia bsica e a microbiologia aplicada.

1.2 Microbiologia bsica


A Microbiologia Bsica estuda: A natureza e as propriedades dos microrganismos (morfolgicas, siolgicas, bioqumicas, etc.). Caractersticas morfolgicas (tamanho e forma das clulas, composio qumica, etc.).

Aula 1 - Principais reas da microbiologia e microscopia

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Caractersticas siolgicas (nutrio e condies de crescimento e reproduo). Atividades bioqumicas (obteno de energia pelos microrganismos). Caractersticas genticas (hereditariedade e variabilidade das caractersticas). Caractersticas ecolgicas (microrganismos no ambiente e sua relao com outros organismos). Potencial patognico dos microrganismos. Classicao (relao taxonmica entre os grupos dos microrganismos).

1.3 Microbiologia aplicada


A microbiologia aplicada estuda o controle e o uso dos microrganismos de maneira benca (processos industriais, controle de pragas e de doenas, produo de alimentos, etc.).
Para saber mais sobre a importncia da microbiologia, acesse: http://www.portalsaofrancisco. com.br/alfa/microbiologia/ microbiologia-2.php

Na rea industrial, os microrganismos so utilizados na sntese de substncias qumicas como cido ctrico, antibiticos mais complexos e enzimas. Na rea ambiental, os microrganismos so usados como agentes de biodegradao e de limpeza ambiental, no controle de pragas, etc. A microbiologia mdica trata dos microrganismos causadores de doenas e da preveno e controle das mesmas. A microbiologia dos alimentos est relacionada com doenas transmitidas por alimentos, controle de qualidade e produo de alimentos (queijos, bebidas, pes, etc.).

1.4 Caractersticas dos principais grupos de microrganismos


Os microrganismos procariontes compreendem as bactrias, que se dividem em eubactrias e arqueobactrias, e os microrganismos eucariontes, que compreendem os protozorios e alguns fungos. (Quadro 1.1)

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Quadro 1.1: Caractersticas dos principais grupos de microrganismos


Microrganismos Caractersticas Acelulares; menores e mais simples, em estrutura que as bactrias; contm geralmente apenas um tipo de cido nuclico (DNA ou RNA), protegido por uma capa protica; podem multiplicar-se apenas dentro das clulas vivas. Porm, poucos vrus de DNA, como o citomegalovrus e o vrus da hepatite B, podem iniciar a sntese de molculas de RNA enquanto ainda esto se formando, de modo que a partcula viral contm os dois tipos de cidos nuclicos (DNA e RNA). So procariontes; no possuem membrana nuclear (carioteca) e estruturas membranosas intracelulares organizadas; so divididas em dois grupos: Eubactrias e Arqueobactrias. Apresentam vrias formas (esfrica, bastonete e espirilo), aparecem isoladas ou em formas de colnias; variam de 0,2 5,0 m; so unicelulares e algumas apresentam agelos. So semelhantes s eubactrias, mas apresentam diferenas importantes quanto a sua composio qumica, habitam ambientes extremos como os de altas concentraes salinas, os de acidez e os de temperatura. So eucariontes; unicelulares, no apresentam parede celular rgida, no contm clorola; alimentam-se por ingesto; alguns movem-se por meio de agelos ou clios e so amplamente distribudos na natureza. So eucariontes; com parede celular rgida; uni ou pluricelulares; desprovidos de clorola; alimentam-se por absoro. So conhecidos como bolores, leveduras e cogumelos. So fungos multicelulares e produzem estruturas lamentosas (hifas e miclios). So fungos unicelulares e apresentam formas variadas (esfrica a ovide; elipside a lamentosos). So eucariontes; contm clorola (realizam fotossntese); podem ser uni ou pluricelulares; apresentam parede celular rgida; crescem em diversos ambientes, mas a maioria aqutica.

1. Vrus

DNA cido desoxirribonuclico. RNA cido ribonuclico. procariontes Seres unicelulares que no possuem carioteca. carioteca Membrana que separa o material gentico do citoplasma. eucariontes Seres uni ou pluricelulares que possuem carioteca.

2. Bactrias Eubactrias

Arqueobactrias

3. Protozorios

4. Fungos Bolores Leveduras

5. Algas

Classicao dos seres vivos http://vsites.unb.br/ib/cel/ microbiologia/intromicro/ intromicro.html#classicacao

Fonte: Adaptado de Amabis e Martho, 2004

1.5 Microscopia
O microscpio um instrumento indispensvel para os trabalhos laboratoriais, tornando possvel a observao de estruturas invisveis a olho nu. Os microscpios so classicados dependendo do princpio no qual a ampliao baseada. Eles podem ser: pticos empregam dois sistemas de lentes, ocular e objetiva, atravs das quais a imagem ampliada obtida. (Figura 1.1) Eletrnicos empregam um feixe de eltrons para produzir a imagem ampliada. O microscpio ptico utilizado para observar clulas procariotas e eucariotas, e o eletrnico, detalhes celulares e vrus.

Aula 1 - Principais reas da microbiologia e microscopia

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Figura 1.1: Partes do microscpio ptico


Fonte: CTISM

1.5.1 Partes mecnicas do microscpio


P (1) d suporte ao microscpio, garantindo a estabilidade. Brao (3) haste vertical ou inclinvel xada base. Platina (4) plataforma na qual se colocam as preparaes a serem observadas. Apresenta no centro, uma abertura por onde passam os raios luminosos. Revlver (6) suporte das objetivas, xado extremidade inferior do tubo, serve para facilitar a substituio de uma objetiva por outra, colocando-as por rotao em posio de observao.

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Canho (7) suporte cilndrico da ocular. Parafuso macromtrico ou dos grandes deslocamentos (2) permite movimentos de grande amplitude e rpidos, por deslocamento vertical da platina. indispensvel para fazer as focagens. Parafuso micromtrico ou de focagem lenta (3) permite movimentos lentos do deslocamento da platina para focagens mais precisas.

1.5.2 Partes pticas do microscpio


Sistema de ampliao consiste na associao de dois conjuntos de lentes (objetiva e ocular), constituindo u m sistema ptico composto. A ampliao total resulta do produto da capacidade de ampliao da objetiva pela capacidade de ampliao da ocular. Veja a Tabela 1.1.
Tabela 1.1: Produtos da ampliao do microscpio ptico
Ampliao Objetiva 4x 10x 45x 100x Fonte: Adaptado de http://www.mundodacana.com Ocular 10x 10x 10x 10x Ampliao nal Objetiva x ocular 40x 100x 450x 1000x

Objetiva aumenta a imagem do objeto. Objetiva de imerso a lente que fornece maior aumento, muito usada em laboratrio de microbiologia. necessrio leo de imerso para assegurar um trajeto do raio luminoso opticamente homogneo entre a lmina e a lente objetiva. Depois do uso, devem-se limpar as superfcies pticas com papel absorvente com um pouco de xilol, pois restos de leo podem danicar o sistema ptico do microscpio. Ocular lente que aumenta a imagem recebida da objetiva. Sistema de iluminao consiste na associao de trs peas fundamentais: Espelho duplo ou fonte de luz destina-se a reetir para a platina a luz que recebe da fonte luminosa.

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Diafragma regula a intensidade de luz no campo visual do microscpio. Condensador distribui regularmente no campo visual do microscpio a luz reetida pelo espelho ou diretamente da fonte luminosa.
Quadro 1.2: Comparativo de diferentes tipos de microscpios
Tipo de microscpio Ampliao mxima til Observao do espcime Microrganismos e tecidos corados ou descorados; as bactrias, geralmente coradas, aparecem com a cor do corante Microrganismos vivos sem prvia preparao; aparecem brilhantes ou iluminados sobre um campo escuro Aplicaes Caractersticas morfolgicas grosseiras de bactrias, leveduras, bolores, algas e protozorios Microrganismos que exibem algumas caractersticas morfolgicas especiais quando vivos e em suspenso uida; por exemplo, as espiroquetas Tcnica de diagnstico em que o corante uorescente xado ao organismo revela a sua identidade Exame de estruturas celulares em microrganismos maiores e vivos; por exemplo, leveduras, algas, protozorios e algumas bactrias Exame das ultra-estruturas das clulas Microbianas e de vrus

Campo claro

1.000 2.000

Campo escuro

1.000 2.000

Fluorescncia

1.000 2.000

Luminoso e corado; cor do corante uorescente

Contraste de fase

1.000 2.000

Graus variveis de iluminao

Eletrnico Fonte: Pelczar et al, 1996

200.000 400.000

Observado em tela uorescente

Tendo em vista que a base desta disciplina trabalhar com microrganismos, importante ter uma noo da escala de tamanho e das diferentes unidades de comprimento.
Quadro 1.3: Unidades de comprimento utilizadas
Unidade de comprimento Micrmetro Nanmetro Angstrom Fonte: Raven et al, 2001 Smbolo mm nm Equivalncia milsima parte do milmetro milsima parte do micrmetro dcima parte do nanmetro

Unidades mtricas usadas em microbiologia so: micrmetro e nanmetro.

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Resumo
Nessa aula estudamos as reas de atuao da microbiologia; os grupos de microrganismos e suas caractersticas; e os principais tipos de microscpios. Dentre os microrganismos daremos destaque nas prximas aulas s bactrias e aos fungos, em especial s leveduras.

Atividades de aprendizagem
1. O que estuda a microbiologia e qual a sua importncia? 2. O que estuda a microbiologia bsica? E a microbiologia aplicada? 3. Cite dois exemplos da utilizao dos microrganismos em processos industriais. 4. Qual a diferena entre as eubactrias e as arqueobactrias? 5. Como so classicados os fungos? 6. Como constitudo o sistema de ampliao de um microscpio? 7. Se voc estiver observando uma estrutura ao microscpio ptico em que a ocular fornece aumento de 10 vezes e a objetiva de 25 vezes, em quanto estar sendo aumentado o seu objeto de estudo? 8. Explique de forma simplicada, o que se consegue analisar utilizando um microscpio de campo claro e um microscpio de contraste de fase.

Aula 1 - Principais reas da microbiologia e microscopia

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Aula 2 A clula

A honestidade foi e ser sempre a arma decididamente mais forte para todas as lutas da humanidade que vive e progride.
Enrico Fermi

Objetivos
Compreender que as clulas so unidades fundamentais da vida. Diferenciar clulas procariontes de clulas eucariontes.

2.1 Apresentao
As informaes aqui apresentadas ajudaro voc a compreender melhor que a clula a unidade bsica da vida, e entender as diferenas entre uma clula procarionte e uma clula eucarionte, que de fundamental importncia para o estudo dos microrganismos.

2.2 A clula: unidade fundamental da vida que se ligam ao DNA


A clula a unidade estrutural e funcional dos organismos vivos, ou seja, todos os seres vivos so formados por clulas. Os menores so constitudos por uma nica clula, os maiores por bilhes. A percepo de que todos os organismos so compostos por clulas foi um dos mais importantes avanos cientcos. A palavra clula no sentido biolgico foi usada, pela primeira vez, pelo cientista ingls Robert Hooke no sculo XVII. As clulas surgem de outras clulas preexistentes. As formas mais simples de vida so clulas solitrias (organismos unicelulares), enquanto as formas superiores contm associaes de clulas, constituindo colnias de organismos unicelulares ou constituindo organismos pluricelulares mais complexos. As clulas podem apresentar estrutura e forma variadas.

Aula 2 - A clula

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membrana plasmtica Membrana que separa os contedos celulares do ambiente externo.

Todas as clulas compartilham dois aspectos essenciais. O primeiro uma membrana externa, a membrana plasmtica. O outro o material gentico (informao hereditria) que regula a atividade da clula, possibilitando a sua reproduo e a passagem das suas caractersticas para a sua descendncia.
A organizao do material gentico uma das caractersticas que separa as clulas procariontes das clulas eucariontes. Nas clulas procariontes, o material gentico (DNA) est na forma de uma grande molcula circular, conhecida como cromossomo. Em clulas eucariontes, o DNA linear e fortemente ligado a protenas especiais, conhecidas como histonas, formando certo nmero de cromossomos complexos. As clulas dos microrganismos podem ser divididas em duas categorias: Clulas Eucariticas apresentam um ncleo separado do citoplasma por uma membrana nuclear (carioteca); Clulas Procariticas apresentam material nuclear sem membrana. Veja as Figuras 2.1, 2.2 e 2.3.

histonas So protenas que se ligam ao DNA.

Figura 2.1: Clula bacteriana


Fonte: CTISM

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Microbiologia Geral

Os procariontes consistem de duas linhagens distintas: Bactria (ou eubactria) e Archea. So os menores organismos e os mais simples estruturalmente. Em termos evolutivos, eles so tambm os mais antigos organismos da Terra (foram encontrados fsseis de cerca de 3,5 bilhes de anos).

Figura 2.2: Clula vegetal


Fonte: CTISM

Aula 2 - A clula

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Figura 2.3: Clula animal


Fonte: CTISM

2.3 Diferenas entre organismos procariontes e eucariontes

O Quadro 2.1 apresenta as principais caractersticas das clulas de procariontes e de eucariontes.


Quadro 2.1: Diferenas entre clulas procariontes e clulas eucariontes
Caractersticas Grupos pertencentes Tamanho da clula Ncleo Organelas membranosas Clulas procariontes Bactrias e cianobactrias 0,2 - 5,0 m Ausente ausncia de carioteca (membrana nuclear) Ausentes Presente Presente e complexa bioquimicamente (parede celular bacteriana tpica apresenta peptidoglicano) Distribudos no citoplasma Clulas eucariontes Protozorios, algas, fungos, vegetais e animais 10 - 100 m Presente presena de carioteca (membrana nuclear) Presentes Presente em clulas animais Quando presente simples quimicamente (apenas plantas e fungos) Distribudos no retculo endoplasmtico, na mitocndria e no cloroplasto

Glicoclice Zona rica em carboidratos na superfcie das clulas.

Glicoclice ou glicoclise Parede celular

Ribossomos

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Caractersticas DNA Grupos pertencentes Diviso celular Fonte: Junqueira & Carneiro, 2005

Clulas procariontes Cromossomo nico, circular, sem histona Bactrias e cianobactrias Fisso binria

Clulas eucariontes Cromossomos mltiplos, linear, com histona Protozorios, algas, fungos, vegetais e animais Mitose e meiose

2.4 Citoplasma
O citoplasma o espao intracelular (dentro da clula) preenchido por uma matriz semiuida que tem a consistncia de gel, denominada hialoplasma, na qual est mergulhado tudo o que se encontra dentro da clula, tal como molculas e organelas. O citoplasma constitudo principalmente de gua (80%), mas tambm contm ons, sais minerais e molculas, tais como protenas, carboidratos e o RNA, que correspondem aos 20% restantes.

2.5 Organelas citoplasmticas


Como vimos os organismos procariontes no possuem ncleo organizado e geralmente so pequenos. Caracterizam-se por no possurem organelas envoltas por membranas, tais como o retculo endoplasmtico, o complexo de Golgi, as mitocndrias e os plastos. As clulas eucariontes so mais complexas e so tpicas de protozorios, fungos, animais e vegetais. Uma organela citoplasmtica pode ser denida como uma determinada parte do citoplasma responsvel por uma ou mais funes especiais. As organelas mais importantes esto citadas abaixo. Ribossomos Mitocndrias Complexo de Golgi Centrolo Lisossomo Retculo endoplasmtico liso

Aula 2 - A clula

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Retculo endoplasmtico rugoso Cloroplastos Flagelos

2.5.1 Ribossomos
So responsveis pela sntese de protena. Eles no so limitados por membranas e, portanto, ocorrem tanto em procariontes quanto em eucariontes. Os ribossomos de eucariontes so ligeiramente maiores que os de procariontes. Eles so compostos por duas subunidades de tamanhos diferentes. Bioquimicamente, o ribossomo consiste em RNA ribossmico (RNAr) e umas 50 protenas estruturais. Veja na Figura 2.4.

Figura 2.4: Estrutura de um ribossomo


Fonte: CTISM

2.5.2 Mitocndrias
So formadas por duas membranas, uma externa e outra interna. Enquanto a membrana externa lisa, a membrana interna possui inmeras pregas, chamadas cristas mitocondriais. A cavidade interna das mitocndrias preenchida por um uido, denominado matriz mitocondrial, que contm grande quantidade de enzimas dissolvidas, necessrias para a extrao de energia dos nutrientes. Figura 2.5. As mitocndrias so de fundamental importncia no processo de respirao celular e no fornecimento de energia a partir da quebra da glicose.

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Figura 2.5: Estrutura de uma mitocndria


Fonte: CTISM

2.5.3 Complexo de Golgi


So estruturas membranosas, formadas por bolsas achatadas e empilhadas cuja funo elaborar e armazenar protenas advindas do retculo endoplasmtico. abundante em clulas secretoras. Figura 2.6.

Figura 2.6: Estrutura do complexo de Golgi


Fonte: CTISM

2.5.4 Centrolos
formado por um par de cilindros cuja parede constituda por nove conjuntos de trs microtbulos cada, e, geralmente, ocorrem aos pares nas clulas. Os centrolos so desprovidos de membrana, sua constituio de natureza protica. Os centrolos originam estruturas locomotoras, denominadas clios e agelos, que diferem entre si quanto ao comprimento e nmero por clula. Figura 2.7.

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Figura 2.7: Estruturas dos centrolos


Fonte: CTISM

2.5.5 Lisossomos
So pequenas bolsas portadoras de enzimas digestivas. Elas so liberadas pelo complexo de Golgi, com a nalidade de promover a digesto de substncias englobadas pelas clulas. Pode tambm digerir componentes da prpria clula, promovendo a morte celular para uma contnua renovao. Figura 2.8.

Figura 2.8: Ao dos lisossomos


Fonte: CTISM

2.5.6 Retculo endoplasmtico liso


uma rede de estruturas tubulares e vesiculares achatadas e interligadas formada por uma membrana dupla, amplamente distribuda pela clula e em comunicao com a membrana plasmtica ou com a carioteca. No apresenta ribossomos aderidos membrana externa. responsvel pela sntese de todos os lipdios que constituem a membrana plasmtica, incluindo fosfolipdios e colesterol. Figura 2.9.

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Figura 2.9: Representao do retculo endoplasmtico liso


Fonte: CTISM

2.5.7 Retculo endoplasmtico rugoso


De formato achatado e com ribossomos aderidos, o retculo endoplasmtico rugoso est presente em maior nmero nas clulas especializadas na secreo de protenas. Figura 2.10.

Figura 2.10: Representao do retculo endoplasmtico rugoso


Fonte: CTISM

2.5.8 Cloroplasto
So delimitadas por duas membranas lipoproticas uma externa lisa e outra interna que forma dobras para o interior da organela. Esse conjunto bem organizado de membranas formam pilhas unidas entre si, chamadas de grana. Cada elemento da pilha, que tem o formato de moeda, o tilacide. Todo esse conjunto de membranas encontra-se mergulhado em um udo gelatinoso que preenche o cloroplasto, o estroma, onde h enzimas, DNA, pequenos ribossomos e amido. As molculas de clorola localizam-se nas membranas

Aula 2 - A clula

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dos tilacides, tal sistema , portanto, a sede das reaes fotoqumicas responsveis pela captao e transformao da energia luminosa em energia qumica.

Figura 2.11: Partes do cloroplasto


Fonte: CTISM

2.5.9 Flagelos
Os agelos das bactrias (procariontes) so compostos por uma protena chamada agelina, os de eucariontes, so extenses lamentosas citoplasmtica, frequentes em protozorios, esponjas e gametas mveis. O agelo de eucarionte completamente diferente do agelo bacteriano, tanto em termos de estrutura como em origem evolucionria, mas a funo em ambos a mesma: criar movimentos.

Figura 2.12: Diferenas entre agelos bacterianos e agelos animais


Fonte: CTISM

No Quadro 2.2, verique as principais estruturas celulares, suas funes e ocorrncias.

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Quadro 2.2: Organelas citoplasmticas


Organela Funo Procarionte Eucarionte

Responsvel pela sntese (produo) de protenas

Presente

Presente

Responsvel pela respirao celular

Ausente

Presente

Armazena e secreta diversas substncias

Ausente

Presente

Atua na diviso celular

Ausente

Presente, exceto em vegetais e fungos

Digesto intracelular

Ausente

Presente

Aula 2 - A clula

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Quadro 2.2: Organelas citoplasmticas


Organela Funo Procarionte Eucarionte

Transporte de substncias e produo de esterides

Ausente

Presente

esterides So hormnios responsveis pela harmonia das funes no organismo.

Transporte de substncias e sntese de protenas

Ausente

Presente

Atua na fotossntese

Ausente

Presente em vegetais e algas

Para saber mais sobre clula como unidade biolgica, acesse: http://www.portalsaofrancisco. com.br/alfa/citologia/ citologia-3.php

Deslocamento celular

Presente

Presente apenas em animais (gametas)

Resumo
Nessa aula estudamos a clula, unidade fundamental dos seres vivos. Vimos que as clulas dos microrganismos podem ser procariontes (no apresentam ncleo denido) ou eucariontes (com ncleo denido). Alm disso, tambm estudamos as principais diferenas entre esses tipos celulares.

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Atividades de aprendizagem
1. Dena clulas procariontes e clulas eucariontes. 2. Quais as principais diferenas entre uma clula procarionte e uma eucarionte? 3. Que grupos pertencem aos procariontes? E aos eucariontes? 4. Qual a constituio do citoplasma da clula? 5. Qual organela citoplasmtica est presente nos procariontes? 6. Qual a diferena entre o DNA dos procariontes e o DNA dos eucariontes? 7. Quais as duas linhagens de procariontes? 8. Qual a constituio do citoplasma? 9. As bactrias so seres procariontes por que: a) Podem apresentar formas de resistncia que so os esporos. b) Possuem uma parede celular espessa, constituda de polissacardeos, protenas e lipdios. c) No possuem ncleo organizado envolto pela carioteca. d) Possuem estruturas locomotoras denominadas agelos. e) Podem reproduzir-se sexuadamente por conjugao.

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10. Numere os elementos da coluna da direita com os seus correspondentes da coluna da esquerda. Estrutura celular (1) Retculo endoplasmtico liso (2) Lisossomo (3) Mitocndria (4) Aparelho Golgiense (5) Ribossomo (6) Membrana plasmtica (__) Responsvel pelo transporte de substncias e produo de esterides. (__) Promove a digesto intracelular. (__) Mantm a seletividade das clulas. (__) Realiza sntese e transporte de substncias. Funo (__) Responsvel pela respirao aerbica. (__) Responsvel pela sntese de protenas.

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Aula 3 Bactrias: morfologia e estruturas

O que sabemos uma gota, o que ignoramos um oceano.


Isaac Newton

Objetivos
Conhecer as bactrias: seu tamanho e sua morfologia. Compreender as estruturas das clulas bacterianas. Entender e diferenciar bactrias Gram-positivas de Gram-negativas. Identicar estruturas da membrana e do citoplasma bacteriano.

3.1 Apresentao
As anlises das caractersticas morfolgicas das bactrias so importantes para classicao preliminar e para o conhecimento de algumas propriedades importantes do ponto de vista industrial.

3.2 Bactrias
So organismos unicelulares. Podem ser encontrados de forma isolada ou em colnias; so constitudos por uma clula (unicelulares), no possuem ncleo celular denido (procariontes) e no possuem organelas membranosas.

3.3 Morfologia: tamanho, forma e arranjos bacterianos


As bactrias so variveis quanto ao tamanho e quanto s formas que apresentam.

Aula 3 - Bactrias: morfologia e estruturas

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3.3.1 Tamanho bacteriano


A unidade de medida das bactrias o mm (micrmetro) que equivale a 103 mm. Muitas bactrias medem de 2 a 6 mm de comprimento e 1 a 2 mm de largura. Tamanho varivel: 0,1 0,2 m 5,0 mm

3.3.2 Morfologia das bactrias: formas e arranjos bacterianos


Embora existam milhares de espcies bacterianas, elas podem ser agrupadas em trs tipos morfolgicos gerais: cocos, bacilos e espiralados. a) Formas de cocos (esfricas) o grupo de bactrias mais homogneo em relao ao tamanho. Os cocos tomam denominaes diferentes de acordo com o seu arranjo (Figura 3.1). Micrococos cocos. Diplococos cocos agrupados aos pares. Ttrades agrupamentos de quatro cocos. Sarcina agrupamentos de oito cocos em forma cbica. Estreptococos cocos agrupados em cadeias. Estalococos cocos agrupados em grupos irregulares, lembrando cachos de uva.

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Figura 3.1: Diferentes arranjos de bactrias esfricas (cocos): (a) Coco: Methanococcus sp; (b) Diplococo: Neisseria sp (gonococo); (c) Ttrade: Deinococcus sp; (d) Sarcina: Methanosarcina sp; (e) Estreptococo: Streptococcus sp e (f) Estlococo: Staphylococcus sp
Fonte: (a) http://microbewiki.kenyon.edu/images/2/22/methanococcus_6.gif (b) http://student.ccbcmd.edu/courses/bio141/labmanua/lab1/dkngon.html (c) http://fpslivroaberto.blogspot.com/2009_08_01_archive.html (d) http://faculty.ksu.edu.sa/3822/picture%20library%2002/forms/allitems.aspx (e) http://www.britannica.com/ebchecked/topic/48203/bacteria/39338/capsules-and-slime-layers?anchor=toc39338 (f) http://staphylococcusaureustreatment.com

b) Forma de bastonete so clulas cilndricas em forma de bastonete; apresentam grande variao na forma e no tamanho entre gneros e espcies (Figura 3.2).

Figura 3.2: Exemplos de bastonetes: (a) Halobacterium e (b) Salmonella, causadora de aguda infeco intestinal em humanos
Fonte: (a) http://www.foxnews.com/scitech/2010/05/07/aliens-saturn-titan/ (b) http://www.icb.ufmg.br/big/vacinas/Salmonella.htm

Aula 3 - Bactrias: morfologia e estruturas

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As clulas bacterianas cilndricas ou em bastonetes (bacilos) no apresentam a mesma disposio dos cocos, mas podem apresentar-se isolados, aos pares (diplobacilos) e em cadeias (estreptobacilos). Em alguns casos esses arranjos no constituem padres morfolgicos caractersticos, mas devido s etapas de crescimento ou s condies de cultivo. De um modo geral, essas duas formas de bactrias (cocos e bacilos) so as mais comuns entre as contaminantes nas indstrias de acar e de lcool.

c) Formas espiraladas caracterizadas por clulas em espiral; dividem-se em: Espirilos possuem corpo rgido e movem-se custa de agelos externos. Ex.: Gnero Aquaspirillium (Figura 3.3). Espiroquetas so exveis e locomovem-se geralmente por contraes do citoplasma, podendo dar vrias voltas completas em torno do prprio eixo. Ex.: Gnero Treponema (Figura 3.3).

Figura 3.3: Exemplos de bactrias com formas espiraladas: (a) espirilo e (b) espiroqueta Leptospira interrogans, causadora da leptospirose
Fonte: (a) http://mikroby.blox.pl/html/1310721,262146,21.html?341847 (b) http://mac122.icu.ac.jp/gen-ed/higher-plants-etc.html

Observao Alm desses trs tipos morfolgicos, existem algumas formas de transio (Figura 3.4). Bacilos muito curtos: cocobacilo. Unidades celulares que se assemelham a uma vrgula: vibrio.

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Figura 3.4: Formas bacterianas de transio: exemplos de vibries (a) Vibrio cholerae, causador da clera em humanos e (b) Vibrio vulnicus, agressiva bactria carnvora
Fonte: (a) e (b) http://visualsunlimited.photoshelter.com

3.4 Estruturas externas da clula bacteriana


O tamanho, a forma e o arranjo das bactrias constituem sua morfologia, sua aparncia externa; a observao interna das estruturas celulares permite conhecer um pouco o funcionamento da bactria no ambiente.

3.4.1 Parede celular


A parede celular uma estrutura rgida que est presente em quase todas as bactrias e localiza-se acima da membrana citoplasmtica. Ela contm polmeros complexos conhecidos como peptidioglicanos, que so responsveis pela sua rigidez. A parede celular impede que a clula estoure em decorrncia do grande turgor, atua como uma barreira de proteo contra determinados agentes qumicos e fsicos externos e funciona como suporte de antgenos somticos bacterianos. As bactrias podem ser divididas em dois grandes grupos, com base na capacidade de suas paredes celulares xarem o corante violeta cristal: as Gram-positivas (que coram em roxo) e as Gram-negativas (que coram em vermelho). A parede celular de bactrias Gram-positivas composta basicamente por peptideoglicano, que constitui uma espessa camada ao redor da clula. Outros polmeros, tais como cidos lipoteicicos e polissacardeos, tambm podem estar presentes nessa camada (Figura 3.5).

polmeros Macromolculas formadas a partir de unidades estruturais menores.

Aula 3 - Bactrias: morfologia e estruturas

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delgada (ou delgado) Fina ou no

Nas bactrias Gram-negativas o peptideoglicano constitui uma camada basal delgada, sobre a qual se encontra outra camada, denominada membrana externa que composta por lipoprotenas, fosfolipdios, protenas e lipopolissacardeos (Figura 3.6). O processo de colorao de Gram consiste basicamente em tratar bactrias sucessivamente com cristal violeta, lugol, lcool e fucsina (Figura 3.7). O cristal violeta e o lugol penetram tanto nas bactrias Gram-positivas quanto nas Gram-negativas, formando um complexo de cor roxa. O tratamento com lcool a etapa diferencial; nas Gram-positivas, o lcool no retira o complexo cristal violeta+lugol, pois a sua ao desidratante faz com que a espessa camada de peptideoglicano torne-se menos permevel, retendo o corante. Nas Gram-negativas, devido pequena espessura da camada de peptideoglicano, o complexo corado extrado pelo lcool, deixando as clulas descoradas. O tratamento com fucsina no altera a cor roxa das Gram-positivas, ao passo que as Gram-negativas descoradas pelo lcool tornam-se avermelhadas (Figura 3.7). A colorao de Gram amplamente utilizada para identicar e classicar bactrias.

O processo de colorao de Gram usado para classicar as bactrias em Gram-positivas ou Gram-negativas, conforme xam ou no o corante. Essa classicao importante, pois as bactrias Gram-positivas so mais sensveis penicilina e sulfa. Este processo de colorao um dos mais importante mtodos realizados em laboratrio de microbiologia.

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Figura 3.5: Parede celular de bactria Gram-positiva


Fonte: CTISM

Figura 3.6: Parede celular de bactria Gram-negativa


Fonte: CTISM

Aula 3 - Bactrias: morfologia e estruturas

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Figura 3.7: Processo de colorao do Gram


Fonte: Adaptado de http://pathmicro.med.sc.edu/fox/gram-st.jpg

Figura 3.8: (a) Micrograa da parede celular de bactria Gram-negativa; (b) indicao de suas partes; (c) micrograa da parede celular de bactria Gram-positiva e (d) indicao de suas partes
Fonte: (a) e (c) http://visualsunlimited.photoshelter.com (b) e (d) CTISM

3.4.2 Flagelos
So organelas especiais (apndices delgados) responsveis pela locomoo das bactrias. De acordo com o nmero e distribuio dos agelos, as bactrias podem ser classicadas como: atrquias (sem agelos), monotrquias (um nico agelo), antrquias (um agelo em cada extremidade), lofotrquias (um tufo

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de agelos em uma, ou ambas as extremidades) e peritrquias (apresentando agelos ao longo de todo o corpo bacteriano), veja Figura 3.9.

Figura 3.9: Exemplos de bactrias com agelos: (a) monotrquia Pseudomonas aeruginosa; (b) antrquia Fetus venerealis; (c) lofotrquia Spirillum volutans e (d) peritrquia Salmonella
Fonte: (a), (b), (c) e (d) http://visualsunlimited.photoshelter.com

Algumas bactrias movimentam-se por outros meios, diversos da atividade agelar, tais como o deslizamento provocado pelo uxo protoplasmtico ou pela resposta txica (fototaxia, quimiotaxia).

3.4.3 Plos (fmbrias)


So apndices nos, retos e curtos que esto presentes em muitas bactrias Gram-negativas. So encontrados tanto nas espcies mveis como nas imveis e, portanto, no desempenham papel relativo mobilidade. Os plos originam-se de corpsculos basais na membrana citoplasmtica e sua funo parece estar relacionada com a troca de material gentico durante a conjugao bacteriana (fmbria sexual) com a aderncia s superfcies mucosas. As fmbrias podem ser removidas sem comprometimento da viabilidade celular e regeneram-se rapidamente (Figura 3.10).

Aula 3 - Bactrias: morfologia e estruturas

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Figura 3.10: Exemplos de bactrias mbriadas: (a) bactria Escherichia coli recoberta de fmbrias e (b) com fmbrias e agelos
Fonte: (a) e (b) http://visualsunlimited.photoshelter.com

3.4.4 Glicoclice
formado por uma substncia mucilaginosa ou gelatinosa (viscosa) e ca ligada parede celular como um revestimento externo. Se o glicoclice estiver organizado de maneira denida e acoplado rmemente parede celular, recebe o nome de cpsula (Figura 3.11); se estiver desorganizado e sem qualquer forma frouxamente acoplada parede celular, recebe o nome de camada limosa. O glicoclice pode ser de natureza polissacardica (um ou vrios tipos de acares como galactose, ramnose, glicana, etc.) ou polipeptdica (cido glutmico). O glicoclice desempenha papel importante na infeco, permitindo que a bactria patognica se ligue a tecidos especcos do hospedeiro. Acredita-se que o glicoclice possa proteger as bactrias da dessecao.

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Figura 3.11: Micrograa eletrnica com destaque para a cpsula de uma bactria
Fonte: http://visualsunlimited.photoshelter.com

3.5 Membrana plasmtica modelo mosaico uido


Fina membrana que separa a parede celular do citoplasma. Sua espessura da ordem de 7,5 nanmetros e composta principalmente por uma bicamada de fosfolipdeos (20 a 30%) e protenas (50 a 70%); desempenha importante papel na permeabilidade seletiva da clula (Figura 3.12). A membrana o stio da atividade enzimtica especca e do transporte de molculas para dentro e para fora da clula. Ela difere da membrana plasmtica das clulas eucariticas por: no apresentar esterides em sua composio; ser sede de numerosas enzimas do metabolismo respiratrio das bactrias (mesmas funes das cristas mitocondriais); controlar a diviso bacteriana atravs dos mesossomos. Os mesossomos so invaginaes da membrana plasmtica que podem ser simples dobras ou estruturas tubulares ou vesiculares. Alguns autores associam ainda aos mesossomos o valor funcional das mitocndrias, atribuindo a eles o papel na respirao bacteriana.
Para saber mais sobre estrutura de membrana, acesse: http://vsites.unb.br/ib/cel/ microbiologia/morfologia1/ morfologia1.html#ultraestrutura

Aula 3 - Bactrias: morfologia e estruturas

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Figura 3.12: Representao esquemtica da membrana plasmtica


Fonte: CTISM

3.6 Estruturas internas da clula bacteriana


3.6.1 Citoplasma
Para saber mais sobre morfologia da membrana, acesse: http://vsites.unb.br/ib/cel/ microbiologia/morfologia3/ morfologia3.html

composto pela poro uida e contm substncias dissolvidas e partculas, tais como ribossomos, e material nuclear ou nucleide, rico em DNA.

3.6.2 Incluses citoplasmticas


As incluses so formaes no vivas existentes no citoplasma, como gros de amido, gotas de leo, chamadas de grnulos, e podem servir como fonte de material de reserva ou energia.

3.6.3 Nucleide e plasmdeos


As clulas bacterianas no contm o ncleo tpico das clulas animais e vegetais. O cromossomo bacteriano consiste de um cromossomo nico e circular e ocupa uma posio prxima ao centro da clula. Pode ser chamado de nucleide. Vrias bactrias apresentam tambm molculas de DNA extracromossomal, denominadas plasmdeos, as quais so geralmente circulares, contendo muitas vezes genes que conferem caractersticas adaptativas vantajosas ao microrganismo. As bactrias so importantes nos processos biotecnolgicos na indstria, agricultura e na medicina.

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Resumo
Ao nal dessa aula compreendemos a morfologia e a estrutura das clulas bacterianas. Na aula seguinte, abordaremos os processos de reproduo, nutrio e crescimento, fundamentais nas indstrias que utilizam os potenciais microbiolgicos.

Atividades de aprendizagem
1. Qual o conceito de bactrias? 2. Qual a unidade utilizada para medir as bactrias? 3. Como as bactrias so divididas quanto forma e ao arranjo? 4. De acordo com a parede celular bacteriana, como as bactrias so classicadas? 5. Qual a principal substncia que compe a parede celular das bactrias? Qual sua funo e como podemos diferenciar a parede celular de bactrias Gram+ das Gram-? 6. De acordo com o nmero e distribuio dos agelos, como as bactrias podem ser classicadas? 7. Qual a funo dos plos nas bactrias? 8. Qual a funo do glicoclice? 9. O que compe a membrana citoplasmtica das bactrias? O que a diferencia da membrana citoplasmtica das clulas eucariticas? 10. Cite e comente as estruturas internas da clula bacteriana.

Aula 3 - Bactrias: morfologia e estruturas

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Aula 4 Bactrias: reproduo, nutrio e crescimento


A diferena entre o possvel e o impossvel est na vontade humana.
Louis Pasteur

Objetivos
Compreender os tipos de reproduo bacteriana. Conhecer as formas de obteno de energia das bactrias. Entender e diferenciar macro de micronutrientes. Compreender as fases da curva de crescimento das bactrias. Compreender os fatores que limitam o crescimento das bactrias.

4.1 Apresentao
A diviso dessas aulas (3 e 4) em duas partes deve-se ao grande volume de informaes exigido para compreender a morfologia e a siologia das bactrias. Nessa aula veremos os processos reprodutivos, de nutrio e do crescimento bacteriano.

4.2 Reproduo bacteriana


As bactrias geralmente reproduzem-se assexuadamente por sso binria ou cissiparidade. Nesse processo reprodutivo ocorre replicao do cromossomo e uma nica clula divide-se em duas; em seguida ocorre a diviso do cromossomo bacteriano replicado e o desenvolvimento de uma parede celular transversal (Figura 4.1). A sso binria no o nico mtodo reprodutivo assexuado entre as bactrias. Tambm pode ocorrer esporulao e brotamento.
Para saber mais sobre reproduo, acesse: http://vsites.unb.br/ib/cel/ microbiologia/divisao/divisao. html#ssao

Aula 4 - Bactrias: reproduo, nutrio e crescimento

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Figura 4.1: (a) Fisso binria e (b) exemplo de diviso binria em bactria Moraxella catarrhalis
Fonte: (a) CTISM (b) http://www.avelox.com/scripts/pages/en/microsites/electronmicrographs/index.php?page=3

Embora no ocorra reproduo sexuada, pode ocorrer troca de material gentico entre as bactrias. Tal recombinao gentica pode ocorrer por transformao, conjugao ou transduo. a) Transformao incorporao de fragmentos de DNA perdidos por outra bactria que se rompeu. Esse mecanismo demonstra formalmente que o DNA a base qumica da hereditariedade (Figura 4.2).

Figura 4.2: Transformao bacteriana


Fonte: CTISM

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b) Conjugao duas clulas bacterianas geneticamente diferentes trocam DNA atravs de plo sexual (Figura 4.3).

Figura 4.3: (a) Conjugao bacteriana e (b) exemplo de conjugao entre bactrias
Fonte: (a) CTISM (b) http://www.focus.it/Salute/fotodelgiorno/Cellule_mortali_ma_immortali.aspx

c) Transduo molculas de DNA so transferidas de uma bactria para outra usando os vrus como vetores (bacterifagos). Quando o bacterifago entra numa clula bacteriana, o DNA do vrus mistura-se com uma parte do DNA bacteriano, de modo que o vrus passa a carregar essa parte do DNA. Se o vrus infecta uma segunda bactria, o DNA da primeira pode misturar-se com o DNA da segunda. Essa nova informao gentica ento replicada a cada nova diviso (Figura 4.4).

Aula 4 - Bactrias: reproduo, nutrio e crescimento

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Figura 4.4: Transduo bacteriana


Fonte: CTISM

d) Tempo de gerao o tempo necessrio para que uma clula bacteriana se divida ou para que a populao duplique. Esse tempo pode variar de 15 a 20 minutos ou at algumas horas. O tempo de gerao depende da espcie bacteriana e das condies ambientais, ou seja, as bactrias so capazes de crescer numa ampla faixa de condies fsicas, podendo utilizar alimentos muito diferentes. Contudo, seu crescimento requer condies especcas para uma dada espcie. e) Endsporos (esporos) formas dormentes de clulas bacterianas so produzidas por certas espcies de bactrias em situaes de escassez de nutrientes (Figura 4.5). Os esporos representam uma fase latente (repouso) da clula: so extremamente resistentes aos agentes fsicos e qumicos adversos, demonstrando uma estratgia de sobrevivncia. O endsporo resiste at que as condies melhorem e muitos resistem at mesmo gua fervente. A indstria de alimentos preocupa-se em tomar providncias para que os endsporos no estejam presentes durante o

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processo de acondicionamento dos alimentos. Todas as bactrias dos gneros Bacillus e Clostridium produzem endsporos.

Figura 4.5: (a) Formao do endsporo; (b) e (c) exemplos de endosporos


Fonte: (a) CTISM (b) http://www.technolog.friko.pl/neoalmanach/5.mikrobiologia/4.html (c) http://visualsunlimited.photoshelter.com

4.3 Nutrio das bactrias


Do ponto de vista nutricional, as bactrias podem ser divididas em classes siolgicas dependendo da forma de obteno de fontes de energia e carbono para a realizao de suas atividades vitais: Fototrcos so organismos que utilizam a energia radiante (luz) como fonte. Bactrias auttrofas: fotossintetizantes e quimiossintetizantes.

Aula 4 - Bactrias: reproduo, nutrio e crescimento

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Quimiotrcos so organismos incapazes de utilizar a energia radiante; dependem da oxidao de compostos qumicos para a obteno de energia. Bactrias hetertrofas: quimiossintetizantes.

4.3.1 Nutrientes
So as substncias encontradas no ambiente, que participam do metabolismo celular (anabolismo e catabolismo), podendo ser divididos em dois grandes grupos: macronutrientes, que so necessrios em grandes quantidades e micronutrientes, necessrios em pequenas quantidades (Quadro 4.1). Principais macronutrientes Carbono, Nitrognio, Hidrognio, Fsforo, Enxofre, Potssio, Magnsio, Clcio, Sdio e Ferro. Principais micronutrientes Cobalto, Zinco, Molibdnio, Cobre, Mangans e Nquel.
Quadro 4.1: Macronutrientes
Principais elementos C H O N P S K Mg Ca Na Fe Forma em que so encontrados CO2 e composto orgnico H2O e composto orgnico H2O e O2 NH3, NO3 e composto orgnico PO4 H2S, SO4 e composto orgnico K+ Mg+2 Ca+2 Na+ Fe+3 e composto orgnico

Fonte: http://vsites.unb.br/ib/cel/microbiologia/nutricao/nutricao.html#nutricao

4.4 Crescimento das bactrias


um somatrio dos processos metablicos progressivos, que normalmente conduz diviso (reproduo diviso binria ou brotamento) com produo de duas clulas-lhas a partir de uma bactria. Dessa forma, o crescimento exponencial (crescimento logartmico). Em microbiologia, o termo crescimento refere-se a um aumento do nmero de clulas e no ao aumento das dimenses celulares.

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Microbiologia Geral

Curva de crescimento bacteriano tem quatro fases, conforme a Figura 4.6.

Figura 4.6: Curva de crescimento bacteriano


Fonte: CTISM

4.4.1 Fatores limitantes do crescimento bacteriano


A oferta de nutrientes o principal fator que limita o crescimento bacteriano. Outros fatores importantes no crescimento bacteriano so: temperatura, pH, disponibilidade de O2 e quantidade de gua. Temperatura algumas bactrias crescem melhor em temperaturas baixas, outras em temperaturas intermedirias e outras em temperaturas altas. A temperatura tima de crescimento aquela em que o microrganismo cresce mais rapidamente. Em temperaturas mais favorveis para o crescimento, o nmero de divises celulares por hora, chamada de taxa de crescimento, dobra para cada aumento de temperatura de 10C. H trs temperaturas importantes a conhecer: mnima, tima e mxima (nessa ltima as enzimas so danicadas pelo calor e a clula para de crescer). De acordo com a temperatura de crescimento, possvel distinguir, pelo menos, trs grupos siolgicos de bactrias: as psicrlas tm tempera-

Aula 4 - Bactrias: reproduo, nutrio e crescimento

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tura tima de crescimento entre 15 - 25C; as meslas tm temperatura tima de crescimento entre 25 - 45C; e as termlas tm temperatura tima de crescimento entre 45 - 80C. pH quanto tolerncia ao pH, as bactrias podem ser acidlas, neutroflicas e alcallas. Normalmente, o pH timo bem denido para cada espcie e a maioria das bactrias no cresce em valores de pH acima ou abaixo de seu pH timo.
Tabela 4.1: Classicao das bactrias quanto a tolerncia ao pH
Bactrias Acidlas Neutrlas Alcallas Fonte: http://vsites.unb.br/ib/cel/microbiologia/nutricao/nutricao.html#nutricao Crescimento faixa de pH 0,1 a 5,4 5,5 a 8,5 8,5 a 11,5

Oxignio quanto respirao, as bactrias podem ser: aerbias estritas (necessitam de O2 para crescer), anaerbias estritas (s crescem na ausncia de O2), microaeroflicas (precisam de O2, mas em presso inferior atmosfrica) e anaerbias facultativas ou aerotolerantes (crescem na presena ou ausncia de O2). Veja Figura 4.7.

Figura 4.7: Cultura de microorganismos com diferentes necessidades de O2: (a) aerbios; (b) anaerbios estritos; (c) anaerbios facultativos; (d) microaerlos e (e) anaerbios aerotolerantes
Fonte: CTISM

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Microbiologia Geral

gua essencial a qualquer microrganismo; embora a necessidade seja variada, somente endsporos bacterianos podem sobreviver sem gua.

Resumo
Nessa aula, tivemos a compreenso dos tipos reprodutivos, as formas de obteno de energia, macro e micronutrientes, as fases de crescimento e os fatores que limitam o crescimento bacteriano. Na prxima aula, iniciaremos o estudo dos fungos, em especial as leveduras.

Atividades de aprendizagem
1. Dena reproduo assexuada por cissiparidade ou sso binria. 2. Explique, por meio de esquemas com texto explicativo, o processo de recombinao gentica por transformao. 3. Descreva a reproduo em que uma bactria transmite a outra bactria material gentico atravs de plos sexuais. 4. Represente esquematicamente o processo de recombinao gentica por transduo. 5. O que se entende como endsporo ou esporo bacteriano? 6. Do ponto de vista nutricional, como as bactrias podem ser divididas? 7. Diferencie macronutrientes de micronutrientes e d exemplos de cada um. 8. Comente sobre as fases de crescimento das bactrias, caracterizando cada uma delas. 9. Quais os principais fatores limitantes do crescimento bacteriano? 10. De acordo com a temperatura e as necessidades de oxignio, como as bactrias podem ser classicadas? 11. D a classicao das bactrias de acordo com o timo de pH. 12. Diferencie bactrias aerbias de bactrias anaerbias.

Aula 4 - Bactrias: reproduo, nutrio e crescimento

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Aula 5 Fungos (leveduras): morfologia e estruturas


A persistncia o caminho do xito.
Charles Chaplin

Objetivos
Conhecer os fungos: suas principais caractersticas. Conhecer a importncia das leveduras nos processos industriais. Identicar as formas e os arranjos morfolgicos das leveduras. Compreender as estruturas das clulas das leveduras.

5.1 Apresentao
Os fungos so importantes nas indstrias qumicas, farmacuticas, de alimentos e tambm na agricultura. Voc j ouviu falar de leveduras, bolores, cogumelos, orelhas de pau. Todos so seres vivos que possuem caractersticas semelhantes, prprias do reino dos fungos. Nesta aula e neste caderno daremos nfase s leveduras.

5.2 Fungos
Os fungos so organismos eucariontes, aclorolados, heterotrcos e absorve componentes orgnicos como fonte de energia. So aerbicos em sua grande maioria, mas alguns so anaerbicos estritos e facultativos. Podem ser uni ou multicelulares e reproduzem-se sexuada ou assexuadamente. Possuem parede celular rgida que pode ser composta de celulose, glicanas, mananas ou quitina e membrana celular com esteris presentes. Seu principal material de reserva o glicognio. Os fungos estudados em microbiologia compreendem as leveduras e os bolores. As leveduras so unicelulares, no-lamentosas, apresentam em mdia de
aclorolados Que no possuem clorola. Clorola: grupo de pigmentos fotossintticos presente nos cloroplastos (organelas presentes nas clulas das plantas e algas, ricos em clorola), responsvel pela colorao verde das plantas.

Aula 5 - Fungos (leveduras): morfologia e estruturas

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1 a 5 m de dimetro e de 5 a 30 m de comprimento. Elas so geralmente ovais, podendo apresentar morfologia alongada ou esfrica. As leveduras no possuem agelos, so imveis. Os bolores so organismos pluricelulares, que se apresentam lamentosos ao microscpio ptico a fresco com baixa ampliao. Ao exame macroscpico apresentam crescimento caracterstico com aspecto aveludado ou cotonoso (algodo) ou como borra de caf (Aspergillus niger).

5.3 Leveduras
So fungos da classe dos ascomicetos, os quais pertencem ao lo Ascomycota. Este lo caracteriza-se por possuir fungos nos quais a produo de esporos ocorre em esporngios especcos, denominados de ascos.

5.3.1 Caractersticas
So microrganismos eucariontes, unicelulares, desenvolvem-se na fermentao alcolica. Apresentam membrana celular bem denida, pouco espessa em clulas jovens, e rgidas em clulas adultas. As leveduras no formam lamentos, so imveis, quimio-heterotrcos e aerbios facultativos (metabolismos oxidativo e fermentativo). Reproduzem-se assexuada e sexuadamente. No so capazes de utilizar amido e celulose como fonte de carbono.

5.3.2 Importncia
Nas indstrias, as leveduras apresentam os seguintes pontos de interesse: so utilizadas na produo do lcool industrial e de todas as bebidas alcolicas destiladas ou no; so utilizadas na panicao; so prejudiciais conservao de frutos e de sucos vegetais, pois so agentes de fermentao; algumas espcies so patognicas s plantas, animais e ao homem.

5.3.3 Tamanho das clulas das leveduras


O tamanho das clulas de leveduras variado, mas, numa cultura jovem, os tamanhos das clulas podem ser bem uniformes em algumas espcies ou extremamente heterogneos em outras. Estas disparidades podem ser usadas

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Microbiologia Geral

para fazer a diferenciao entre as espcies e algumas vezes at mesmo entre linhagens da mesma espcie. De maneira geral, as leveduras industriais variam consideravelmente no que se refere a suas dimenses. A unidade de medida das leveduras assim como das bactrias o m (micrmetro), que equivale a 10-3 mm. Muitas leveduras tem de 5 a 30 m de comprimento e de 1 a 5 m de largura.

5.3.4 Morfologia das leveduras


A clula da levedura pode apresentar vrias formas, as quais podem ser o resultado da maneira de reproduo vegetativa, bem como das condies de cultivo e da idade da cultura. Veja alguns exemplos na Figura 5.1.

Figura 5.1: Forma de leveduras


Fonte: CTISM

Aula 5 - Fungos (leveduras): morfologia e estruturas

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5.4 Estruturas da clula da levedura


A maioria das investigaes feitas sobre as estruturas da clula de levedura baseada em trabalhos com Saccharomyces cerevisiae. As informaes sobre a citologia da levedura tm sido feitas por observaes diretas ao microscpio ptico, por tcnica de colorao da clula para componentes especcos, por microscopia eletrnica de transmisso, bem como por microscopia de varredura. Assim, possvel vericar que as principais estruturas das leveduras so: parede celular, membrana plasmtica, ncleo, mitocndrias e vacolos (Figura 5.2).

Figura 5.2: Estrutura da levedura Sacharomyces cerivisiae


Fonte: CTISM

5.4.1 Parede celular das leveduras


A parede celular responsvel pela forma da levedura. No caso das Saccharomyces cerevisiae, a parede formada por glicano (30 a 34%) e manano (30%). Ela na nas clulas jovens e espessa nas adultas. As protenas tambm esto presentes nas paredes celulares das leveduras, cerca de 6 a 8%; os lipdeos variam de 8,5 a 13,5%. A quantidade de quitina varia conforme a espcie, sendo que Saccharomyces cerevisiae apresenta entre 1 a 2% desse composto.

quitina Polissacardeos encontrados na parede celular dos fungos e no exoesqueleto dos artrpodos.

5.4.2 Membrana citoplasmtica


A membrana citoplasmtica est localizada abaixo da parede celular e sua funo permitir a entrada seletiva de nutrientes e proteger a levedura da perda de pequenas molculas, por vazamento do citoplasma. A composio qumica da membrana composta por glicoprotenas, lipdeos e ergosterol (diferente das membranas dos mamferos que contm colesterol).

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5.4.3 Estruturas de superfcie


Algumas leveduras so cobertas por um material limoso, viscoso e aderente, que a substncia capsular. A maior parte das cpsulas de leveduras constituda de polissacardeo.

5.4.4 Citoplasma
O citoplasma composto pela poro uida na qual as organelas esto localizadas. Ele contm enzimas, carboidratos de reserva (glicognio e trealose) e grandes quantidades de ribossomos e polifosfato. De 1 a 5% do DNA das leveduras pode estar presente no citoplasma.

5.4.5 Ncleo
O ncleo das clulas das leveduras facilmente observado no campo claro do microscpio ptico. Ele bem denido, pequeno esfrico ou reniforme, circundado por uma membrana semipermevel e com funes metablicas e reprodutivas.

reniforme Que tem a forma de um rim.

5.4.6 Vacolos
Quando as clulas de leveduras so vistas ao microscpio de contraste de fase, pode-se observar um ou mais vacolos de tamanhos diferentes (0,3 a 3,0 mm de dimetro). Eles tm aparncia esfrica e so mais transparentes a um feixe de luz que o citoplasma que os circunda. Ao microscpio eletrnico pode-se observar que o vacolo cercado por uma membrana simples e a sua constituio est relacionada ao transporte de substncias que so armazenadas no vacolo, tais como enzimas, aminocidos livres e lipdeos. Os vacolos tambm servem como vesculas de armazenamento para vrias enzimas hidrolticas.

5.4.7 Mitocndrias
So organelas membranosas, no gnero Saccharomyces, elas esto geralmente bem prximas da periferia da clula, mas em leveduras aerbias apresentam-se distribudas pelo citoplasma. O nmero de mitocndrias pode variar de um a vinte por clula. Essas organelas so envolvidas por membranas externas e internas; a membrana interna forma as cristas mitocondriais. Elas so importantes nos processos de converso aerbios de energia. As leveduras so clulas eucariontes. As clulas eucariontes so mais complexas que as clulas procariontes (bactrias).

Aula 5 - Fungos (leveduras): morfologia e estruturas

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Resumo
Nessa aula estudamos as caractersticas, a importncia das leveduras nos processos industriais, a morfologia (forma), o tamanho e as estruturas que compe uma clula de levedura. Na aula seguinte, veremos a reproduo, a nutrio e o crescimento das leveduras.

Atividades de aprendizagem
1. D as principais caractersticas dos fungos. 2. Quais os fungos que so estudados em microbiologia? 3. Microscopicamente, quais as caractersticas tpicas das leveduras? 4. Quais os principais tipos morfolgicos das leveduras? 5. Qual a composio da parede celular nas leveduras? 6. D a composio qumica da membrana plasmtica das leveduras. 7. Qual a composio da cpsula das leveduras? 8. Quais os carboidratos de reserva que so encontrados no citoplasma de uma clula de levedura? 9. Quais as funes do vacolo nas leveduras? 10. Descreva as mitocndrias presentes nas leveduras. 11. Esquematize uma clula de uma levedura com todas as suas estruturas.

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Microbiologia Geral

Aula 6 Fungos (leveduras): reproduo, nutrio e crescimento


A melhor maneira de ter uma boa idia ter muitas idias.
Linus Pauling

Objetivos
Compreender os tipos reprodutivos das leveduras. Conhecer as formas de obteno de energia das leveduras. Entender a nutrio das leveduras. Compreender a curva de crescimento e os fatores que limitam o crescimento das leveduras.

6.1 Apresentao
Nessa aula, estudaremos a reproduo das leveduras, sua nutrio e seu crescimento, importantes nos processos industriais.

6.2 Reproduo das leveduras


As leveduras reproduzem-se assexuadamente por brotamento ou gemulao. Nesse tipo de reproduo, na superfcie da clula-me, forma-se uma pequena protuberncia (broto) que se transforma em uma clula-lha. Cada broto que se separa pode tornar-se uma nova levedura ou pode permanecer ligada clula-me, formando uma cadeia. Durante sua vida, uma clula madura produz, por gemulao, uma mdia de 24 clulas-lhas. As gemulaes sucessivas so sempre formadas em locais diferentes na superfcie celular, permanecendo cicatrizes das gmulas como resultado desse processo de reproduo. Veja exemplos de brotamento na Figura 6.1.

Aula 6 - Fungos (leveduras): reproduo, nutrio e crescimento

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Figura 6.1: Reproduo de levedura por brotamento: (a) etapas do desenvolvimento do broto em uma levedura; (b) e (c) micrograas eletrnicas mostrando o brotamento e as cicatrizes decorrentes do mesmo
Fonte: (a) CTISM (b) http://www.scientistlive.com/European-Food-Scientist/Ingredients/Eliminate_&lsquo%3Benemy&rsquo%3B_yeast/19429/ (c) http://www.microbiologyonline.org.uk/about-microbiology/introducing-microbes/fungi

Alm da reproduo assexuada por brotamento ou gemulao, as leveduras podem reproduzir-se assexuadamente por cissiparidade ou diviso binria, forma pela qual os organismos unicelulares reproduzem-se pela simples diviso da clula (igual reproduo que ocorre nas bactrias). As leveduras tambm se reproduzem por esporos a formao de esporos sexuados de grande importncia biolgica. A esporulao constitui uma fase do ciclo sexual da levedura, isto , a alternncia da condio haplide e diplide. Esse ciclo permite levedura sofrer recombinaes genticas, mutao, hibridao e seleo, processos esses que levam a mudanas evolutivas (melhoramento gentico). Para que a esporulao ocorra, so necessrias condies de aerobiose, uma vez que pouco ou nenhum esporo formado sob

haplide Clulas com ncleo com n cromossomos. diplide Clulas com ncleo 2n cromossomos.

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condies de anaerobiose (fermentao). J na sso a levedura aumenta de tamanho ou se alonga, o ncleo divide-se e so formadas duas clulas-lhas. Durante os perodos de rpida multiplicao, as clulas podem dividir-se sem separar-se, formando cadeias de clulas.

6.3 Nutrio das leveduras


Os fungos (leveduras) so seres heterotrcos e retiram os nutrientes do meio ambiente circundante. Atravs da digesto enzimtica externa, transformam as substncias de maneira que possam ser absorvidas. Se o substrato for completamente oxidado, diz-se que h respirao; se o substrato for parcialmente degradado, acarretando a formao de metablitos, diz-se que h fermentao. A levedura como entidade independente realiza a fermentao do acar com o objetivo de conseguir a energia qumica necessria sua sobrevivncia, sendo o etanol apenas e to somente um subproduto desse processo. Se o homem pretende beneciar-se dessa habilidade metablica, ele deve buscar os conhecimentos que lhe permitam propiciar s leveduras, condies ideais para que as mesmas trabalhem a seu favor, isto , com maior ecincia na produo do etanol. A clula de levedura possui estruturas para a adequao de sua atividade metablica; a fermentao alcolica (gliclise anaerbia) ocorre no citoplasma, enquanto que a oxidao total do acar (respirao) d-se na mitocndria. De maneira geral, as leveduras necessitam de quatro elementos bsicos: Carbono, Hidrognio, Nitrognio e Oxignio, alm de outros em menor quantidade: Fsforo, Enxofre, Ferro, Zinco, Cobre, Potssio, Magnsio e Clcio. Alguns fungos necessitam ainda de determinados fatores de crescimento, como por exemplo, a tiamina. As leveduras, para crescer, necessitam de uma fonte de carbono e de uma fonte orgnica ou inorgnica de nitrognio. Necessidades nutricionais as leveduras necessitam dos mesmos elementos qumicos que as outras formas de vida. Fatores de crescimento as leveduras necessitam de determinados fatores de crescimento tais como vitaminas.

Aula 6 - Fungos (leveduras): reproduo, nutrio e crescimento

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6.4 Crescimento das leveduras


As leveduras precisam de acares para crescer. Atravs da metabolizao dos acares, elas produzem lcool e dixido de carbono. Por isso, as leveduras tornam-se importantes na indstria de alimentos. O crescimento das leveduras pode ser considerado um aumento no nmero de clulas. Dessa forma, igual ao crescimento das bactrias, o crescimento exponencial (crescimento logartmico). A curva de crescimento das leveduras, assim como a das bactrias, tem quatro fases, conforme a Figura 6.2.

Figura 6.2: Curva de crescimento das leveduras


Fonte: CTISM

6.4.1 Fatores limitantes do crescimento das leveduras


Quase todos os fungos, quando cultivados em condies favorveis e de abundncia de alimentos de fcil assimilao, crescem rapidamente e, quando o alimento tende a diminuir, o crescimento tambm diminui. Outros fatores

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importantes no crescimento dos fungos, em especial das leveduras, so: temperatura, pH, luz e quantidade de gua. Temperatura a temperatura tem efeito marcante nos fungos; de uma maneira geral, o timo para todos os fungos est entre 20C 30C, embora diferentes espcies tenham outros timos de temperatura. Psicrlos so organismos com timo de temperatura abaixo de 20C; alguns continuam crescendo mesmo em temperaturas muito baixas (organismos marinhos e aqueles que causam deteriorao em alimentos congelados). Meslos, inclui a maioria, tem timo entre 20C e 45C. Termlos tem timo de temperatura acima de 45C, incluem fungos de compotas, pilhas de feno em fermentao e fontes termais. pH as leveduras crescem em variao de pH entre 2,5 e 8,5, mas, de maneira geral, o pH timo neutro, sendo que as mesmas no toleram pH alcalino. Oxignio as leveduras so capazes de crescimento anaerbio facultativo. Elas podem utilizar o oxignio ou um composto orgnico como aceptor nal de eltrons, isso permite que esses fungos sobrevivam a vrios ambientes. Em presena de oxignio, as leveduras respiram aerobicamente para metabolizar carboidratos e formar dixido de carbono e gua; na ausncia de oxignio elas fermentam os carboidratos e produzem etanol e dixido de carbono. gua indispensvel para o crescimento dos fungos. Pouqussimos fungos podem desenvolver-se em pequeno grau de umidade.

Resumo
Nessa aula, tivemos a compreenso dos tipos reprodutivos, a nutrio, as fases de crescimento e os fatores que limitam o crescimento das leveduras. Na aula seguinte, iniciaremos o estudo do metabolismo e da cintica dos microrganismos.

Aula 6 - Fungos (leveduras): reproduo, nutrio e crescimento

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Atividades de aprendizagem
1. Descreva a reproduo assexuada que ocorre nas leveduras. 2. Quando ocorre o processo de formao de esporos nas leveduras? 3. Descreva o processo nutricional das leveduras. 4. Quais os produtos que so formados durante a fermentao? 5. Onde ocorre o processo de fermentao alcolica no interior das clulas? E o processo de respirao? 6. Compare o crescimento das leveduras com o crescimento das bactrias. 7. Comente de forma explicativa os fatores que limitam o crescimento das leveduras.

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Aula 7 Metabolismo e cintica dos microrganismos


A primeira e melhor vitria conquistar a si mesmo.
Plato

Objetivos
Compreender o metabolismo e a cintica dos microrganismos. Diferenciar e entender anabolismo e catabolismo. Conhecer tipos fermentativos. Entender o rendimento energtico na respirao e na fermentao. Entender os clculos do tempo de gerao e a taxa de crescimento.

7.1 Apresentao
Nessa aula, estudaremos sobre o metabolismo e a cintica dos microrganismos. Como j vimos nas aulas anteriores, o crescimento dos microrganismos depende de vrios fatores, tais como disposio de nutrientes e pH. Conheceremos tambm as principais caractersticas dos microrganismos utilizados nos processos industriais.

7.2 Metabolismo
Conjunto de todas as reaes bioqumicas que ocorrem em uma clula ou organismo, indispensveis para a manuteno da estrutura e da siologia. Essas reaes so responsveis pelos processos de sntese e degradao dos nutrientes na clula e constituem a base da vida, permitindo o crescimento e a reproduo das clulas. O metabolismo catalisado por sistemas integrados de enzimas que mediam reaes que requerem energia e constitudo pelo anabolismo e pelo catabolismo.

Aula 7 - Metabolismo e cintica dos microrganismos

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Metabolismo do grego metabole: mudana, transformao. So dois tipos gerais de reaes: Aquelas envolvidas na utilizao de energia anabolismo. Aquelas que envolvem liberao de energia catabolismo. O metabolismo a manuteno das atividades vitais de uma clula; a sntese de compostos orgnicos, componentes estruturais e funcionais, e a degradao de compostos orgnicos para a sntese de ATP.

sntese Produo. ATP Adenosina trifosfato.

Neste material que aborda os microrganismos, metabolismo so todas as atividades qumicas realizadas pelos microrganismos.

7.2.1 Anabolismo
o conjunto de todas as reaes de sntese de compostos orgnicos estruturais (protenas da membrana plasmtica, glicoprotenas) e funcionais (enzimas, hormnios) de uma clula; a sntese de molculas complexas a partir de molculas simples; h consumo de ATP, que foi liberado pelo catabolismo e que no foi usado; so reaes endoenergticas (absorve energia); exemplos disso a fotossntese e a quimiossntese. Essas reaes so importantes para o crescimento, a construo e o reparo de estruturas celulares. Fotossntese a sintese de carboidratos a partir de gua (H2O) e dixido de carbono (CO2), utilizando energia luninosa, que absorvida pela clorola e transformada em energia qumica (ATP), Figura 7.1.

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Figura 7.1: Equao da fotossntese


Fonte: CTISM

A equao acima mostra o processo de sntese de compostos orgnicos a partir de substncias inorgnicas (gua, que absorvido pelas razes, e dixido de carbono, retirado do ar atmosfrico pelas folhas). A energia luminosa transformada em energia qumica, com auxlio da clorola. Quimiossntese um processo de sntese de substncias orgnicas que utiliza o dixido de carbono (CO2) como fonte de carbono, mas em vez de utilizar a energia luminosa, usa a energia proveniente da oxidao de substncias inorgnicas, como a amnia, o enxofre, os nitritos e o ferro.

7.2.2 Catabolismo
o conjunto de todas as reaes de degradao dos compostos orgnicos complexos em compostos orgnicos mais simples, com liberao de ATP. Fornece energia requerida para os processos vitais, incluindo movimento, transporte e sntese de molculas complexas; exemplos disso so a respirao celular (aerbica) e a fermentao.

Aula 7 - Metabolismo e cintica dos microrganismos

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Respirao aerbica quebra de molculas orgnicas, geralmente a glicose, em presena de O2 com liberao de energia, dixido de carbono e gua. A energia liberada armazenada em molculas de ATP. mais eciente na obteno de energia do que a fermentao.

A respirao aerbica se desenvolve em trs etapas: Gliclise ocorre no hialoplasma da clula, o conjunto de reaes iniciais da degradao (quebra) da glicose. Tem incio com a ativao da glicose, que recebe dois grupos fosfato, fornecidos pelo ATP, que se transforma em ADP. Ciclo de Krebs ocorre na matriz mitocondrial. Basicamente, nesta segunda fase, opera-se a ciso (oxidao) da molcula de triose (acar de trs carbonos) em trs molculas de dixido de carbono, com liberao de eltrons e prtrons, que so temporariamente capturados por transportadores especcos: os NAD e os FAD. Cadeia respiratria ocorre no interior das cristas mitocondriais, o hidrognio liberado nas vrias etapas combina-se com o oxignio e forma gua. Tal reao libera uma grande quantidade de energia, que armazenada sob forma de molculas de ATP.
Quadro 7.1: Rendimento energtico da respirao aerbica
Etapa Gliclise Ciclo de Krebs Cadeia Respiratria Local Hialoplasma Matriz mitocondrial Cristas mitocondriais Produo 4 ATP 2 ATP 32 ATP Gasto 2 ATP -----

LUCRO: 36 ATP Na respirao uma molcula de glicose gera 36 a 38 ATP Fonte: Raven, 2001

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Figura 7.2: Etapas da respirao aerbica


Fonte: CTISM

Fermentao conjunto de reaes qumicas (na ausncia de oxignio) controladas por enzimas. A fermentao conduz, geralmente, ciso parcial da molcula de glicose, resultando em disponibilidade energtica inferior se comparada respirao aerbia. Esse processo tem grande importncia econmica, sendo utilizado na fabricao de lcool combstivel, de bebidas alcolicas, pes e outros alimentos. Na fermentao uma molcula de glicose gera 2 ATP. A fermentao depende do tipo de microrganismo presente. Veja alguns exemplos:

Aula 7 - Metabolismo e cintica dos microrganismos

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Fermentao alcolica produzido, como produto nal, o etanol e o dixido de carbono, produtos utilizados pelo homem na produo de lcool combustvel, vinho, cerveja e outras bebidas alcolicas, e tambm na produo dos pes. Fermentao lctica produzido, como produto nal, geralmente a partir da lactose do leite. O acmulo de cido lctico abaixa o pH e causa a coagulao das protenas, formando coalho, usado na fabricao de queijos e iogurtes. Fermentao actica o produto nal o cido actico que causa o azedar do vinho e dos sucos de frutas, transformando-os em vinagre. A presena de leveduras contaminantes (selvagem) tem trazido srios problemas para a fermentao, tanto na produo de vinhos como na fabricao de cerveja. Os problemas referem-se ao processo fermentativo e, principalmente deteriorao do produto nal, provocando o aparecimento de sabores e aromas que descaracterizam a bebida. Na produo de lcool, a partir do melao e/ou do caldo-de-cana, a presena de leveduras contaminantes tem sido pouco ou raramente mencionada. Aplicaes dos processos fermentativos os processos fermentativos so utilizados industrialmente na produo de etanol, vinagres, cidos orgnicos, bebidas alcolicas, tais como vinho, cerveja, sidra, aguardente, e tambm alimentos fermentados.

Para saber mais sobre metabolismo microbiano, acesse: http://vsites.unb.br/ib/cel/ microbiologia/metabolismo/ metabolismo.html

7.3 Microrganismos para aplicao em processos industriais


Para que um microrganismo seja aplicado na indstria, necessrio que ele tenha as seguintes caractersticas: no ser patognico; apresentar elevada ecincia na converso do substrato em produto; no exigir condies de processo muito complexas;

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no exigir meio de cultura muito dispendioso; apresentar constncia quanto ao comportamento siolgico; permitir a rpida liberao do produto para o meio, etc.

7.4 Cintica dos processos fermentativos


A cintica do crescimento microbiano permite o conhecimento das condies favorveis para conduzir e controlar os processos fermentativos. So dois os objetivos da cintica do crescimento microbiano: medir as velocidades de transformaes que ocorrem durante os processos fermentativos, como o consumo de substratos, acmulo de produtos e de biomassas; estudar a inuncia de fatores como a temperatura, pH, gua, oxignio, etc. O crescimento do microrganismo ocorre em diversos ambientes fsicos e qumicos. Os microrganismos desenvolvem suas atividades vitais em meios de elevada complexidade, transformando substncias em outras, podendo conduzir a resultados de interesse econmico. O processo fermentativo consiste numa complexa transformao de nutrientes de um meio de cultura, pela ao metablica dos microrganismos presentes, em produtos e mais clulas microbianas (Figura 7.3).

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Figura: 7.3: Representao grca de um processo fermentativo qualquer


Fonte: CTISM

O crescimento dos microrganismos ocorre somente quando certas condies fsicas e qumicas so satisfeitas, tais como: pH, temperatura e nutrientes, e pode ser denido como um aumento ordenado dos seus constituintes qumicos, caracterizado por um aumento no nmero de clulas e/ou acrscimo da massa celular. Como j vimos nas aulas anteriores, o crescimento microbiano tem quatro fases (fase lag ou de espera, fase log exponencial, fase estacionria e fase de morte ou de declnio). Um modelo de crescimento microbiano pode apresentar os mais variados graus de complexidade, dependendo da situao fsica e da cintica pretendida. Relembrando que, quando falamos em crescimento microbiano, nos referimos ao nmero e no ao tamanho das clulas.

7.4.1 Crescimento microbiano tempo de gerao


Durante a fase exponencial, cada microrganismo divide-se em intervalos constantes. Assim, a populao duplicar num intervalo especco de tempo chamado tempo de gerao (g), o tempo necessrio para uma populao

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microbiana duplicar em massa ou em nmero. Varia conforme o tipo de microrganismo, a idade, a espcie, as condies do meio, dentre outros fatores.

7.4.2 Expresses matemticas para a determinao dos parmetros de crescimento microbiano


7.4.2.1 Clculo do tempo de gerao (g)
Se um tubo de cultura for inoculado com uma clula que se divide com um tempo de gerao de 20 minutos, a populao ser de 2 clulas ao m de 20 minutos, 4 clulas ao m de 40 minutos, etc. Como a populao duplica em cada gerao, o aumento populacional dado por 2n, onde n o nmero de geraes. O tempo de gerao pode ser calculado quando uma cultura encontra-se em fase exponencial. Tratando-se de bactrias e leveduras que se multiplicam por diviso binria, temos:

Onde: Nt = nmero de microrganismos ao nal no tempo t; N0 = nmero inicial de clulas; n = nmero de geraes no tempo t.
Tabela 7.1: Crescimento microbiano exponencial
Tempo (minuto) 0 20 40 N de divises 0 1 2 2n 20 = 1 21 = 2 22 = 4 Populao (N02n) 1 2 4 log Nt 0.000 0.301 0.602

Logritimizando a expresso N = N0.2n temos que:

Resolvendo para n temos que:

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Como log2 = 0.301 ento temos:

A partir dessa equao, possvel calcular o nmero de geraes (n) que ocorreram em uma cultura se o nmero inicial de clulas for conhecido. Exemplo Calcular o nmero de gerao de uma cultura cuja populao celular passa de 103 para 108 aps 5 horas de cultivo. n = (log Nt - log N0) / 0,301 n = (8 - 3) / 0,301, ento n = 16,6 geraes O nmero de geraes 16,6 geraes

O nmero de geraes n pode tambm ser dado por: Onde: t = tempo de cultura ou tempo de crescimento; g = tempo de gerao; n = nmero de geraes no tempo t.

Tendo o valor de (n) pode-se calcular o tempo de gerao (g): Exemplo Calcular o tempo de gerao de uma cultura cuja populao celular passa de 103 para 108 aps 5 horas de cultivo.

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n = (log Nt - log N0) / 0,301 n = (8 - 3) / 0,301, ento n = 16,6 geraes g = t/n g = 5/16,6, ento g = 0,3 horas O tempo para duplicar a populao celular foi de 0,3 horas O tempo de gerao varivel para os diferentes microrganismos e depende dos fatores genticos, nutricionais e ambientais. A taxa de crescimento num sistema fechado pode ser expressa por meio de uma constante mdia da taxa de crescimento (k), ou seja, o nmero de geraes por unidade de tempo muitas vezes expresso em geraes por hora. k = 1/g ou g = 1/k k = (log Nt - log N0)/0,301.t ou g = 0,301.t/ (log Nt - log N0) t = tempo Exemplo Uma populao bacteriana aumenta de 103 clulas para 109 clulas em 10 horas. Calcule a taxa de crescimento e o tempo de gerao. k = (log Nt - log N0)/0,301.t k = (9 3)/0,301.10 k = 2 geraes/hora g = 1/k g = 1/2 g = 0,5 horas

Para saber mais sobre crescimento, acesse: http://vsites.unb.br/ib/cel/ microbiologia/crescimento/ crescimento.html

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7.5 Mtodos para quanticao do crescimento

Para saber mais sobre quanticao do crescimento, acesse: http://vsites.unb.br/ib/cel/ microbiologia/crescimento/ crescimento.html#medidas

Existem diferentes processos para medir o crescimento microbiano, determinar a taxa de crescimento e o tempo de gerao. A massa microbiana e o nmero de clulas podem ser seguidos porque o crescimento conduz a um aumento de ambos. Os principais mtodos so: a) Quanticao direta: Contagem em placas; Filtrao; Contagem direta ao microscpio. b) Quanticao indireta: Turbidimetria;

Turbidimetria Refere-se aos mtodos de anlise de solues coloidais ou de suspenses, baseado na medio da absoro de luz.

Atividade metablica.

Resumo
Nessa aula foi possvel compreender os processos metablicos que ocorrem nos microrganismos, conhecer os tipos de fermentaes e o rendimento energtico nesses processos. Tambm vimos um pouco sobre cintica das fermentaes, tempo de gerao e taxa de crescimento.

Atividades de aprendizagem
1. O que metabolismo? 2. Diferencie anabolismo de catabolismo. 3. O que so reaes endoenergticas? 4. Qual o rendimento energtico na respirao celular e na fermentao? 5. Diferencie fermentao alcolica, lctica e actica.

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6. Quais os objetivos da cintica do crescimento microbiano? 7. Calcule o nmero de gerao de uma cultura cuja populao celular passa de 102 para 1010 aps 4 horas de cultivo. 8. Calcule o tempo de gerao de uma cultura cuja populao celular passa de 105 para 1015 aps 5 horas de cultivo. 9. Uma populao bacteriana aumenta de 102 clulas para 1012 clulas em 10 horas. Calcule a taxa de crescimento e o tempo de gerao.

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Aula 8 Provas bioqumicas e cultura de microrganismos


Na natureza nada se perde, nada se cria,tudo se transforma.
Antoine Lavoisier

Objetivos
Conhecer princpios e procedimentos de diversas provas (testes) bioqumicas usadas na identicao de microrganismos. Conhecer a tcnica de enumerao e deteco de microrganismos Mtodo do Nmero mais Provvel (NMP).

8.1 Apresentao
Nesta aula, estudaremos a investigao das atividades metablicas dos microrganismos in vitro, chamada de provas (testes) bioqumicas, que auxiliam na identicao de grupos ou espcies de bactrias ou leveduras atravs da vericao das transformaes qumicas, que ocorrem num determinado substrato, pela ao das enzimas. Como muitas vezes um determinado microrganismo possui um sistema enzimtico especco, promovendo transformao bioqumica especca, as provas bioqumicas podem ser utilizadas na prtica para a sua caracterizao. Tambm sero estudadas algumas tcnicas de enumerao e deteco dos microrganismos.

8.2 Provas bioqumicas


8.2.1 Prova de catalase
A catalase uma enzima que decompe o perxido de hidrognio (H2O2) em gua e oxignio. produzida por muitos microrganismos, e usualmente empregada para diferenciar Staphylococcus, catalase positivos, de Streptococcus, catalase negativos. Observao A prova considerada positiva quando h borbulhamento ou efervescncia devido liberao do oxignio.

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8.2.2 Prova da citocromo-oxidase


citocromos uma pequena protena heme.

Sistema enzimtico relacionado com os citocromos da cadeia respiratria de alguns microrganismos. A prova considerada positiva quando, na mistura do reagente com a massa bacteriana, desenvolve-se a cor prpura em at 1 minuto. Na reao negativa, no h desenvolvimento de cor prpura.

8.2.3 Utilizao de fontes de carbono


a) Provas fermentativas (glicose, lactose, sacarose, manose, xilose, sorbitol, etc.). Um determinado carboidrato pode ser fermentado e originar diferentes produtos nais, o que depende do microrganismo envolvido. Isso pode gerar gs, que pode ser detectado pela presena de bolhas no tubo de Durham, e cidos orgnicos, que podem ser detectados pela mudana de cor do indicador. Mesmo com uma reao negativa, o microrganismo pode ter utilizado outros nutrientes do meio de cultura do teste, como a peptona. As leituras devem ser feitas em, no mximo, 24h, uma vez que uma incubao prolongada pode mascarar a produo de cido, pois ocorre produo de substncias alcalinas resultantes da ao enzimtica sobre outros substratos. b) Hidrlise do amido As molculas de amido so constitudas por amilose e amilopectina as quais so rapidamente hidrolisadas por algumas bactrias, que usam as suas a-amilases, originando dextrinas, glicose e maltose. Utiliza-se uma soluo de iodo para indicar a presena de amido. Quando o iodo entra em contato com o amido, forma um complexo azul acastanhado. O amido hidrolisado no produz alterao de cor. Se aparecer uma zona clara aps a adio de iodo a um meio que contenha amido e crescimento bacteriano, porque a a-amilase foi produzida pela bactria. Se no ocorrer uma zona clara, o amido no foi hidrolisado.

8.2.4 Provas IMViC (Indole, Methyl-red, Voges-proskauer, Citrate)


Estas provas permite diferenciar os principais grupos de Enterobacteriaceae, pois so baseadas nas propriedades bioqumicas e nas reaes enzimticas na presena de substratos especcos.

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a) Prova do Indol O indol produzido a partir do triptofano existente no meio de cultura sob a ao da triptofanase, h tambm a produo de cido pirvico e amnia. O indol pode ser detectado pela formao de um anel rosa, pink, na parte superior do tubo, aps a adio de p-dimetilaminobenzaldedo (reativo de Erlich). b) Prova do Vermelho de Metila (VM) Esta prova avalia a capacidade do microrganismo de oxidar a glicose com produo e estabilizao de altas concentraes de produtos nais cidos. Serve para diferenciar organismos entricos, em particular, Escherichia coli de Escherichia aerogenes. Embora todas as enterobactrias fermentem glicose, alguns microrganismos, durante a fase nal de incubao, convertem esses cidos em produtos no cidos como o etanol, o que resulta num pH mais elevado (pH 6). O indicador de pH o vermelho de metila que, em pH abaixo de 4,4 vermelho e acima de 6 amarelo. c) Prova de Voges-Proskauer (VP) H bactrias que utilizam a fermentao butilenogliclica. Elas fermentam a glicose, produzindo acetil-metil-carbinol (acetona), butilenoglicol e pequenas quantidades de cidos. Quando KOH (4 gotas do Barrit II) adicionado e na presena de O2 atmosfrico, a acetona oxidada a diacetil. A adio de alfa-naftol (10 gotas do Barrit I), nessa reao, catalisa a produo de um anel vermelho tijolo, aps 10 - 15 minutos. Adicionar primeiro o Barrit I, depois o Barrit II e agitar o tubo para expor ao oxignio. d) Citrato Este teste determina se a bactria capaz de utilizar o citrato de sdio como nica fonte de carbono para o seu metabolismo e crescimento. Deve ser utilizado o meio Citrato de Simmons, composto por citrato de sdio, fosfato de amnia e por azul de bromotimol. Com a facilidade do transporte de citrato pela citrato-permease, ela utilizada pela citrase com produo de hidrxido de amnia, o que eleva o pH fazendo com que a reao torne-se azul. Nesse teste, utilizam-se tubos com meio inclinado para ter mais acesso ao oxignio, necessrio para a utilizao do citrato. O CO2 produzido reage com o sdio do citrato formando carbonatos de reao alcalina.

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8.2.5 Utilizao de fontes de protenas, aminocidos e enzimas


a) Prova do sulfureto de hidrognio (H2S) Algumas bactrias so capazes de degradar compostos que contm enxofre (como o tiossulfato de sdio e a cistena das peptonas), atravs da tiossulfato redutase, produzindo H2S que incolor. Este reage com o ferro (indicador) e forma um precipitado preto (sulfeto ferroso). Para que esta reao ocorra, necessrio que o meio esteja cido. b) Hidrlise da gelatina O objetivo desta prova determinar a capacidade do microrganismo de excretar uma enzima hidroltica extracelular, chamada gelatinase, capaz de degradar a gelatina. A gelatina uma protena produzida pela hidrlise do colgeno. Abaixo dos 25C mantm as suas propriedades de gel e slida, enquanto acima dos 25C lquida. Determinados microrganismos tm capacidade de produzir a gelatinase, que atua hidrolisando a gelatina em aminocidos. Se a degradao ocorre, no se conseguem restaurar as caractersticas de gel da gelatina, mesmo a baixas temperaturas (ca lquido). A hidrlise da gelatina uma caracterstica importante na diferenciao dos microrganismos e pode tambm ser usada para determinar a sua patogenicidade.

8.3 Prova da motilidade


A prova da motilidade indica, indiretamente, a produo de agelos. No uma prova bioqumica, e sim siolgica, mas auxilia na identicao de bactrias. A prova efetuada inoculando-se, em linha reta, atravs da tcnica da puntura (com agulha), 2/3 de um meio semisslido. A prova indica motilidade quando os microrganismos crescem deslocando-se da linha de inoculao, turvando o meio. A prova negativa quando os microrganismos cam restritos ao local da inoculao sem, contudo, turvar o meio.

Observao O objetivo da prova de motilidade determinar se um microrganismo mvel ou imvel, ou seja, se tem ou no agelo.

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8.4 Meios de cultivo


Os meios de cultivo, tambm chamados meios de cultura, consistem em material nutritivo, preparado em laboratrio, que se destina ao cultivo articial de microrganismos. Os meios de cultivo devem conter as substncias exigidas pelas bactrias para o seu crescimento e multiplicao. Para que possam fazer a sntese de sua prpria matria nutritiva, devem dispor de fontes de carbono (protenas e acares), fontes de nitrognio (peptonas) e fontes de energia. So tambm necessrios alguns sais inorgnicos, vitaminas e outras substncias que favorecem o crescimento. Alm de nutrientes, igualmente necessrio que as condies de oxignio (presena ou ausncia), pH e presso osmtica sejam adequadas ao cultivo do microrganismo.

8.4.1 Classicao dos meios de cultivo


a) Quanto ao estado fsico Meios lquidos so aqueles em que os nutrientes esto dissolvidos em uma soluo aquosa. O crescimento bacteriano, nesse meio, muda seu aspecto, ou seja, o meio sofre uma turvao. Meios semisslidos so aqueles que possuem, na sua composio, alm dos nutrientes, uma pequena porcentagem de gar, polissacardeo proveniente de algas marinhas. So geralmente utilizados em tubos e, a partir desse tipo de cultura, possvel observar a motilidade bacteriana. Meios slidos so aqueles que possuem uma porcentagem maior de gar (2%), alm dos nutrientes. Podem ser dispostos em tubos ou em Placas de Petri, dependendo da nalidade. Atravs do meio slido em placas de Petri, possvel, utilizando-se a tcnica do esgotamento, conseguir o isolamento de colnias bacterianas. o meio ideal para que seja feito o estudo da morfologia colonial. J a cultura em gar inclinado, fornece somente o crescimento bacteriano com a obteno de uma biomassa de microrganismos. b) Quanto funo Meios simples possuem os componentes essenciais para o crescimento de microrganismos pouco exigentes. Ex.: caldo simples. Meios complexos so adicionadas ao meio simples substncias enriquecedoras como sangue, soro, ovo, extrato de leveduras, etc. Ex.: gar sangue.

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Meios seletivos so aqueles que favorecem o desenvolvimento de determinados microrganismos em detrimento de outros, geralmente pela adio de substncias inibidoras. Ex.: gar Salmonella-Shigella. Meios diferenciais permite o desenvolvimento de grupos de microrganismos com caractersticas relativamente denidas, o que permite diferenciar um grupo ou uma espcie de microrganismo. Ex.: gar MacConkey.

Observao Os meios de cultivo so preparados e armazenados seguindo um rigoroso controle de qualidade, pois devem ser mantidas todas as suas propriedades nutricionais e garantida a esterilidade at o momento de sua utilizao.

8.5 Tcnicas de semeadura


A escolha da tcnica para o cultivo de microrganismos em condies laboratoriais varia de acordo com o tipo de meio de cultura e a nalidade do cultivo, porm algumas regras devem ser seguidas nas inoculaes: a) A agulha e ala bacteriolgica devem ser esterilizadas por ambagem antes e aps qualquer cultivo. Deve-se tomar cuidado para esfri-las antes da coleta. b) Os recipientes devem sempre ser abertos prximos chama do bico de Bunsen. c) Deve-se evitar ao mximo que as tampas dos tubos e placas quem abertos sob a bancada durante o cultivo.

Observao Nunca se deve colocar o tampo do tubo sobre a bancada.

As alas e agulhas bacteriolgicas so feitas de o de platina ou nquel-cromo.

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8.5.1 Semeadura da amostra em superfcie


a) Tcnica I Meio lquido Primeiro, mergulha-se a ala de platina esterilizada na cultura bacteriana. Em seguida, a ala carregada de bactrias deve ser mergulhada no tubo com o meio de cultivo e agita-se a ala (Figura 8.1). O objetivo dessa tcnica observar a respirao das bactrias.

Figura 8.1: Esquema da tcnica de semeadura em meio lquido


Fonte: CTISM

b) Tcnica II Meio semisslido Primeiro, mergulha-se a agulha de nquel-cromo esterilizada na cultura bacteriana. Em seguida, feita uma injeo com a agulha carregada de bactrias no meio de cultivo semisslido (Figura 8.2). O objetivo dessa tcnica observar a motilidade das bactrias.

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Figura 8.2: Esquema da tcnica de semeadura em meio semisslido


Fonte: CTISM

c) Tcnica III Meio slido (gar inclinado) Primeiro, mergulha-se a ala de platina esterilizada na cultura bacteriana; depois, encosta-se levemente a ala no tubo com o meio de cultura na parte mais baixa do plano inclinado e eleva-se, fazendo estrias na superfcie do gar (Figura 8.3). O objetivo dessa tcnica obter uma concentrao de massa bacteriana.

Figura 8.3: Esquema da tcnica de semeadura em meio slido (gar inclinado)


Fonte: CTISM

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d) Tcnica IV Meio slido (placa de Petri tcnica do esgotamento) Divide-se a placa de Petri em trs partes, fazendo linhas com a caneta retroprogetor na parte de baixo da placa. Mergulha-se a ala de platina esterilizada na cultura bacteriana. Devem ser feitas estrias em cada diviso, respeitando as linhas e utilizando da melhor forma possvel toda a superfcie da placa (Figura 8.4). O objetivo dessa tcnica obter (isolar) culturas puras de amostras que contenham microbiota mista, sendo igualmente til para o estudo da morfologia colonial.

Figura 8.4: Esquema da tcnica de semeadura em meio slido (placa de Petri tcnica do esgotamento)
Fonte: CTISM

e) Tcnica V Meio slido (placa de Petri tcnica de Pour-Plate) Semear, com pipeta esterilizada, 0,1 ml de suspenso contendo bactrias, no fundo da placa de Petri esterilizada. Verter o meio de cultura (gar simples) dissolvida a 40 45C. Submeter a placa a movimentos rotatrios suaves, com a nalidade de misturar o inculo com o gar. Esperar solidicar o meio.

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O objetivo da tcnica de semeadura em Pour-Plate obter colnias isoladas (qualitativo) ou realizar contagem de colnias em placas (quantitativo). Nessa tcnica, deve-se tomar cuidado para no adicionar o meio em temperatura elevada sobre o inculo, pois isso poder matar as bactrias.

8.6 Mtodo do Nmero Mais Provvel (NMP)


O mtodo do NMP permite calcular o nmero de um microrganismo especco numa amostra, utilizando tabelas de probabilidade. Diluies decimais da amostra so inoculadas em sries de tubos contendo meio lquido seletivo (Figura 8.5). Os tubos so positivos quando tm crescimento e/ou produo de gs de fermentao.

Figura 8.5: Diluies decimais da amostra inoculadas em sries de tubos contendo meio lquido seletivo
Fonte: CTISM

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A densidade bacteriana determinada pela combinao de resultados positivos e negativos numa tabela designada NMP. Esse mtodo constitudo por trs testes: a) Teste presuntivo; b) Teste conrmativo; c) Teste completo. O teste presuntivo fornece uma estimativa preliminar da densidade do grupo bacteriano baseada no enriquecimento em meio minimamente restritivo. Os resultados deste teste no podem ser usados sem conrmao posterior. O teste conrmativo a segunda etapa do NMP. Os tubos considerados positivos no teste anterior so inoculados em tubos de meio mais seletivo e inibidor. As reaes positivas so lidas e a densidade calculada com a ajuda da tabela NMP. O teste completo a terceira etapa. utilizada apenas na determinao do nmero de coliformes totais. Os tubos positivos do teste anterior so submetidos a testes adicionais para isolamento e identicao dos microrganismos. Devido morosidade deste teste, ele, normalmente, no utilizado.

Resumo
Nessa aula, tivemos a compreenso de como realizar algumas provas bioqumicas e tcnicas de enumerao e deteco dos microrganismos, as quais exigem uma boa carga de conhecimento em microbiologia.

Atividades de aprendizagem
1. Para que servem as provas bioqumicas? 2. Quando a prova de catalase considerada positiva? 3. Quando a prova da citocromo-oxidase considerada positiva? 4. Por que as leituras das provas fermentativas devem ser feitas em, no mximo, 24 horas?

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5. Comente sobre a prova vermelho de metila (VM). 6. Descreva a prova de motilidade. 7. O que so meios de cultivos ou meios de cultura? 8. Classique os meios de cultivos: a) Quanto ao estado fsico. b) Quanto funo. 9. Cite as regras que devem ser seguidas durante as inoculaes. 10. Diferencie as tcnicas de semeaduras em meio lquido, em meio semisslido e em meio slido. 11. Comente sobre o mtodo do nmero mais provvel (NMP).

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Referncias
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Currculo do professor-autor
Darlene Ana de Paula Vieira Professora do Instituto Federal de Educao, Cincia e Tecnologia de Gois IFGois, atuando na rea biolgica. Formada em biologia pela Pontifcia Universidade Catlica de Gois (1998), com mestrado em Biologia pela Universidade Federal de Gois (2006). Acumulou experincia prossional de mais de 14 anos na rea de educao. Iniciou as suas atividades prossionais em 1994, como professora da rede estadual de educao. Nayara Cludia de Assuno Queiroz Fernandes atua como Tcnica em Laboratrio de Cincias no Instituto Federal de Educao, Cincia e Tecnologia de Gois. Possui graduao em Farmcia pela Universidade Federal de Gois (2005), com especializao em Cincias Biolgicas pelas Faculdades Integradas de Jacarepagu (2009). Acumulou experincia prossional na rea de Farmcia Clnica, com aperfeioamento em Farmacologia Clnica pelo Instituto de Ensino Ethosfharma (2006).

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