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XXII Congreso Colombiano de Ingeniería Química Bucaramanga, Agosto 13 a 15 de 2003

Incremento de la producción de alcohol en fermentación de melazas mediante la utilización del complejo enzimático Rhyzozyme
Astrid Acevedo(1,2), Rubén Godoy (1, ) y Gustavo Bolaños(2,
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SUCROMILES S.A., Km. 14 Recta Cali-Palmira y Escuela de Ingeniería Química, Universidad del Valle, Apartado 25360, Cali

Resumen Se realizó un estudio sobre el efecto del complejo enzimático Rhizozyme en la producción de alcohol mediante la fermentación de melazas con S. Cerevisiae. Se construyó un dispositivo a escala piloto de 220 L, que cercanamente representa las características dinámicas, térmicas, químicas y biológicas de un fermentador industrial de 240000 L. Se preparó un diseño experimental para estudiar el efecto de la adición del complejo enzimático en la evolución del grado alcohólico, los azúcares reductores totales y la demanda química de oxígeno resultantes de la fermentación alcohólica. Se observaron incrementos en el grado alcohólico hasta de un 8%, a una concentración de enzima de 35 ppm, sin aumento significativo de la demanda química de oxígeno en la vinaza resultante. La utilización de este complejo enzimático constituye una manera sencilla de aumentar el rendimiento de la producción de alcohol etílico en fermentación de melazas.

Introducción La producción de alcohol etílico mediante fermentación de materias primas ricas en azúcares, melazas entre ellas, es un proceso conocido desde la antigüedad. Sin embargo, debido a su importancia económica, en muchas compañías y centros de investigación alrededor del mundo actualmente se realizan esfuerzos para maximizar la producción de alcohol, y para minimizar el impacto ambiental del proceso. En este trabajo se estudió la utilización del complejo enzimático Rhyzozyme para incrementar la capacidad de producción de alcohol en fermentación de melazas de caña con Sacharomyces cerevisiae. Hipotéticamente, el complejo enzimático actuaría sobre las sustancias no fermentables presentes en la melaza, convirtiéndolas en monosacáridos, aminoácidos libres o simplemente moléculas más sencillas que podrían ser fácilmente asimilables por la levadura, otorgándole de este modo una nutrición más completa y mayor
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Universidad Nacional de Colombia (Bogotá). En pasantía en Sucromiles S.A. Autor a quien debe dirigirse la correspondencia. e mail: gbolano@univalle.edu.co (G. Bolaños).
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en dos reactores de 240000 L. con un volumen de fermentación individual de 187 L. y su sistema de enfriamiento lo constituye un intercambiador de calor de placas. entre otros. Bolaños / XXII Congreso Colombiano de Ingeniería Química. Godoy. en tres reactores (cada uno de 220 L). Mayores detalles sobre el diseño del equipo piloto de fermentación se encuentran en la literatura [1]. químicas y biológicas de un fermentador de 240000 L. un visor de nivel. agitados mecánicamente mediante un impulsor tipo hélice marina que opera a 300 rpm y un serpentín interno como sistema de enfriamiento. químicas y biológicas de un fermentador industrial de 240000 L. 2. La tubería de salida de este tanque tiene un sistema de distribución con tres válvulas y tres buretroles para garantizar una alimentación homogénea a los tres fermentadores. Los experimentos de fermentación se realizaron a tres escalas: 1. Estos reactores se diseñaron y construyeron en este trabajo para representar cercanamente las características dinámicas. 2003 vitalidad. Como se mencionó. 3. A escala de planta piloto. un serpentín en acero inoxidable como sistema de enfriamiento. un sistema de agitación tipo hélice marina que puede operar a 300 rpm.2 Acevedo. una válvula para toma de muestras. y con el cual se efectuó la mayor parte de los experimentos de este estudio. cuyo sistema de agitación funciona mediante recirculación del licor de fermentación por medio de eductores. El sistema esta conformado por tres reactores plásticos de 220 L cada uno. y la relación potencia consumida a volumen de fermentación. la cual se prepara y almacena en el tanque de cabeza. la adición del complejo enzimático al proceso fermentativo podría tener un impacto significativo en la economía del proceso al inducir la producción de mayor cantidad de alcohol por unidad de materia prima. térmicas. A escala de laboratorio. Cerevisiae. Equipo de fermentación a escala piloto Se realizaron fermentaciones en discontinuo con levadura S. El sistema de fermentadores se alimenta con melaza diluida. A escala industrial. Cada fermentador esta dotado con un sistema de alimentación con medidor de flujo. En cada experimento. el tiempo de recirculación del fluido. Para este efecto se especificaron similitudes en el número de Reynolds. uno de los fermentadores se utilizó para correr un blanco. De esta manera. térmicas. y un medidor de dióxido de carbono que trabaja por desplazamiento de volumen. La Figura 1 muestra un esquema del sistema de fermentación a escala piloto que se diseñó y construyó en este trabajo. . en erlenmeyers de 500 mL cerrados con algodón. el sistema de fermentación se diseñó para representar cercanamente las características dinámicas.

Luego se cargó durante 8 h continuas la melaza diluida a una concentración de azúcares reductores de 23 %m/v. se determinó la concentración de etanol por medio de una oxidación con dicromato de potasio (0. mientras que en los experimentos a escala planta piloto y a nivel industrial se adicionó antibiótico con el mismo propósito. Una vez realizada la inoculación. La población de levadura del inóculo típicamente estuvo por encima de 100x106 células/mL.7 y la temperatura se mantuvo entre 32 y 34 °C. El inóculo en cada caso fue un 30 % del volumen total de fermentación. Se permitió entonces la fermentación por 30 h con agitación. y luego por 18 h adicionales sin agitación. se encendió la agitación y se adicionó una cantidad especificada del complejo enzimático. 2003 3 Figura 1.2 mEq/cm3 ) y de la titulación . Se esterilizó la melaza utilizada en los experimentos a escala de laboratorio. los tres reactores piloto se inocularon paralelamente con levadura proveniente de la etapa de reproducción de la planta industrial. Godoy. Bolaños / XXII Congreso Colombiano de Ingeniería Química.Acevedo. Después del período de fermentación de 48 horas. Esquema del sistema de fermentación a escala piloto. El volumen de inóculo fue 30% del volumen total de fermentación. Se adicionó antiespumante PROPEG EM-300 (Protécnica Ingeniería. Cali) a las fermentaciones a escala piloto e industrial. Materiales y Métodos Durante una corrida experimental. Durante la fermentación se controló el pH en 4. con una viabilidad mínima del 97 %.

2500 CMC-ase. y contiene esencialmente una mezcla de amilasas. este componente desactivaría las enzimas presentes en el complejo [7-10]. celulasa. La Figura 3 muestra el efecto inhibitorio del antiespumante a la fermentación alcohólica suplementada con el complejo enzimático.4 Acevedo. Resultados y discusión La Figura 2 muestra la evolución de la concentración de alcohol en fermentaciones a escala de laboratorio. Para explicar estos resultados. En todos los experimentos el complejo enzimático se adicionó inmediatamente después de haber inoculado el fermentador. concentración de glucosa en el alimento. utilizando 50 ppm de antiespumante y dos concentraciones de complejo enzimático. sobre salvado de trigo. Experimentos posteriores a escala de l aboratorio mostraron que a concentraciones superiores a 500 ppm el antiespumante inhibe la acción del complejo enzimático. Dicho complejo es el producto de la fermentación de Rhizopus sp. Pese a lo anterior. 2003 del exceso con sulfato ferroso amónico (0. 5000 AP [3-5].15 mEq/cm3 ) en medio ácido [2]. celulasas. Esta diferencia representa un incremento en la producción de etanol del 6. Bolaños / XXII Congreso Colombiano de Ingeniería Química. Esta baja concentración de antiespumante permite controlar la formación de espuma y como se observa. por encima de cierta concentración. adición de antibiótico. concentración del complejo enzimático. Godoy. 50000 SKB. y adición de antiespumante. Entre los factores evaluados se cuentan: presencia del hongo Rhizopus niveus en la fermentación. la cual corresponde a cerca de la décima parte de la concentración recomendada por los proveedores con base en estudios de fermentacion de materias azucaradas de maíz. no inhibe la actividad del complejo enzimático. La Figura 4 muestra la evolución de la concentración de etanol en fermentaciones a escala piloto. Durante el período de fermentación también se determinaron los azúcares totales reductores por el método de Fehling [2]. se realizó una campaña experimental a escala de laboratorio para establecer el factor o factores que podrían inhibir la actividad del complejo enzimático a escala piloto. . amilopectinasa. Se encontró que solo este último factor tiene un efecto detectable sobre el progreso de la fermentación en presencia del complejo enzimático. Puede observarse que a partir de la fase de adaptación se desarrolla una mayor producción de alcohol cuando la fermentación se suplementa c on 50 ppm del complejo enzimático.7% a las 48 horas de fermentación. Notése en esta figura que no existe una diferencia significativa entre adicionar 35 ppm y 50 ppm del complejo enzimático a la fermentación. De acuerdo con la literatura. La concentración del complejo enzimático utilizada para los experimentos estuvo entre 35 y 60 ppm. El complejo enzimático utilizado se obtuvo de ALLTECH [3]. y amilopectinasas cuyas actividades son: amilasa. Este antiespumante se prepara con base en silicona [6]. 12 experimentos realizados en planta piloto en condiciones similares a las del laboratorio no mostraron un incremento significativo de la producción de alcohol. tipo de melaza.

5 8 Con antiespumante Blanco 50 ppm de complejo enzimático Sin antiespumante Figura 3.5 9 8.Acevedo. Godoy. Efecto inhibitorio del antiespumante en la fermentación alcohólica suplementada con el complejo enzimático. 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 8 16 24 32 Tiempo de fermentación (h) 40 48 Blanco 50 ppm de complejo enzimático Figura 2. Evolución de la concentración de alcohol en fermentaciones a escala de laboratorio. Grado alcohólico ( %v/v) a las 30 h. 2003 5 10 Concentración de alcohol (% v/v). de fermentación 10.5 10 9. . Bolaños / XXII Congreso Colombiano de Ingeniería Química.

los cuales no fueron determinados en este trabajo. Luego de establecer el efecto que el complejo enzimático tiene sobre la producción de etanol a escalas laboratorio y piloto. Evaluaciones financieras realizadas con base en la información obtenida en este trabajo muestran que esta concentración de complejo enzimático hace que el proceso sea económicamente factible. Esta figura se construyó con los resultados de 12 corridas experimentales a nivel industrial. Evolución de la concentración de etanol en fermentación a escala piloto. y 50 ppm de complejo enzimático. con 50 ppm de antiespumante y dos concentraciones de complejo enzimático. La Figura 6 muestra el efecto de la concentración del complejo enzimático sobre la fermentación. lo cual se atribuye a la evaporación del alcohol y a la formación de compuestos indeseados al finalizar la fermentación.5 % a las 25 horas de fermentación. La Figura 5 muestra la evolución de la concentración de alcohol en experimentos a escala industrial.5 % a las 30 h de fermentación. Note que una concentración del complejo enzimático de 35 ppm tiene un efecto tan importante como una concentración de 50 ppm. Godoy. . se procedió a realizar fermentaciones a escala industrial. Este valor tiende a disminuir hasta 6. Puede observarse que se presenta un incremento de la producción de alcohol de 7. En consecuencia. En estos experimentos se utilizó una concentración de 50 ppm de antiespumante. 35 ppm puede lograr el mismo incremento de la concentración de alcohol a un costo menor. 2003 Concentración de alcohol (% v/v) 8 7 6 5 4 3 2 0 35 ppm de complejo enzimático 50 ppm Blanco de complejo enzimático 5 10 15 20 25 30 Tiempo de fermentación (h) Figura 4. Bolaños / XXII Congreso Colombiano de Ingeniería Química.6 Acevedo. al cabo de 30 h.

Concentración de alcohol después de 30 h de fermentación a escala industrial.5 5.5 7.0 8.5 4.5 7.0 6. Bolaños / XXII Congreso Colombiano de Ingeniería Química.5 3.5 9.5 0 5 10 15 20 Tiempo de fermentación (h) 25 30 50 ppm de complejo enzimático Blanco Figura 5.0 7.Acevedo.5 8.5 6.5 8. Efecto de la concentración del complejo enzimático sobre la fermentación. 2003 7 Concentración de alcohol (%v/v) 9. Concentración de alcohol (%v/v) 9. para dos concentraciones del complejo enzimático.5 6. Godoy. al cabo de 30 h.0 Blanco 50ppm 35 ppm Concentración de complejo enzimático Figura 6 . .

“The alcohol textbook”.. concentraciones de 50 ppm de antiespumante controlan la formación de espuma sin inhibir la actividad del complejo enzimático. . Para su utilización hay que tener en cuenta que las enzimas son altamente sensibles a los factores externos y se pueden inhibir fácilmente.. (2002). “Tecnología de las enzimas”. Cali. Normas “ISO 9000 de SUCROMILES S. 3. Palmira.P. “Industrial enzymes and their applications ” pp 40-72 y 216-218. Murtagh J.A. Kelsall D. Tesis M. 1999. 8. 2nd edition. http//www. y Hubble J. con incrementos en la producción de alcohol de hasta un 8%. 1990. Murtagh J.E.ar/aam/revbol32/v32-4-04. 5. pp. Nottingham University Press. 2003. “Estudio de planta piloto sobre el efecto del complejo enzimático Rhyzozyme en la fermentación alcohólica”.. 19-32. 4. “Influencia del amaranto en la producción de α -amilasa empleando Aspergillus niger nrrl 3112”. 9. 37-49.E. Gacesa P.. 1995.. 10. Acribia S. Kelsall D. En este trabajo se encontró que para concentraciones del complejo enzimático entre 35 y 60 ppm. Alltech “Ficha técnica del complejo enzimático ”. 2001. Protécnica Ingeniería. 2000. 1998. Bolaños / XXII Congreso Colombiano de Ingeniería Química.drwebsa. Zaragoza. “The alcohol textbook”. Lorda G.Sc. Mariani G. 7. Lyons T. Universidad del Valle. 2000. A. pp.P. Agradecimientos Este trabajo ha sido elaborado gracias a la colaboración de la Universidad del Valle y la financiación de SUCROMILES S.. John Wiley. 2. La utilización del complejo enzimático Rhyzozyme constituye entonces un método sencillo de incrementar la producción de alcohol en fermentación de melazas de caña. España. Nottingham University Press. pp. and Ollis D. Bibliografía 1. Godoy. Asociación Argentina de microbiología. “Biochemical engineering fundamentals”. Mc Graw-Hill. Sucromiles. Cali.A. 6.R. Bailey J. Acevedo. 2003 Conclusión La utilización del complejo enzimático Rhyzozyme constituye una alternativa técnica y económicamente factible para el mejoramiento de la productividad de etanol a escala industrial.. Lyons T.1986. Uhlig H. Los autores agradecen a estas dos entidades por hacer posible este proyecto.A”. Nottingham University Press.com. 81-88. y Balatti P.8 Acevedo.R. “Ficha técnica del antiespumante Propeg Em-300”.