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Tema 5.

Enzimas

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TEMA 5. ENZIMAS 1. Introducción 2. Las enzimas como catalizadores 3. Nomenclatura y clasi icación de enzimas !. "o actores enzim#ticos 5. Modelos de actuación de las enzimas $. "in%tica enzim#tica

1.- Introducción Las enzimas son &rote'nas es&ecializadas en la "AT(LISIS de las reacciones )ioló*icas. Se trata+ &ues+ de sustancias naturales ,ue se caracterizan &or su alto &oder catal'tico y &or su alta especificidad -&or uno o m#s sustratos.. El nom)re de enzima -/en la le0adura/. no se em&leó 1asta 1233+ &ero muc1o antes ya se sos&ec1a)a ,ue ciertos catalizadores )ioló*icos inter0en'an en la ermentación del az4car &ara ormar alco1ol -de a1' ,ue inicialmente se conocieran como ermentos.. As' en 1235+ 5erzelius descu)rió ,ue el almidón se 1idroliza)a m#s r#&idamente y con m#s e iciencia+ en una disolución de destace de malta -actualmente identi icada como una enzima.+ ,ue en una disolución de #cido sul 4rico. En 1263+ 57c1ner+ consi*uió e8traer las enzimas ,ue cataliza)an la ermentación alco1ólica de las c%lulas de le0adura. No o)stante 1u)o de es&erar 1asta 162$+ cuando Sumner consi*uió &uri icar y cristalizar &or &rimera 0ez una enzima+ una ureasa+ demostrando su naturaleza &roteica. En la actualidad se conocen m#s de 2999 enzimas di erentes+ muc1as de las cuales se 1an aislado en orma &ura y 1omo*%nea.

2. Las enzimas como catalizadores La unción &rinci&al de las enzimas es actuar como catalizadores de las reacciones de los seres 0i0os. "omo tales catalizadores tienen ciertas caracter'sticas ,ue 0amos a estudiar a continuación. Todas las reacciones ,u'micas tienen lu*ar &or,ue cierta racción de la &o)lación de mol%culas reactantes+ &oseen la su iciente ener*'a

u'micas . Enzimas 2 como &ara alcanzar un estado acti0ado+ llamado estado de transición+ en el . Nomenclatura clasificación de las enzimas .ueda li)re+ y &uede ser de nue0o utilizado. El catalizador se com)ina con los reactantes de modo transitorio acti0#ndolos+ &roduciendo un estado de transición de menor ener*'a . Este estado de transición reside en la cima de la )arrera ener*%tica .ue se rom&an o se esta)lezcan enlaces &ara ormar los &roductos. 3.uellas reacciones .Tema 5. <no de ellos es la ele0ación de la tem&eratura -ya . Esta es una caracter'stica com4n de las enzimas de)ido a su alta especificidad &or los sustratos+ la cu#l &uede ser a)soluta &ara un 4nico sustrato+ o relati0a cuando &ermite la reacción de com&uestos di erentes &ero con una estructura similar. E8isten dos m%todos *enerales mediante los cuales &uede acelerarse la 0elocidad de una reacción .ue &ro0oca un incremento en la 0elocidad de 0i)ración de las mol%culas.ue son esenciales e indis&ensa)les &ara .u'mica + no catalizada y catalizada.u'mica.ue es muy ele0ada la &ro)a)ilidad de .ue ten*an lu*ar+ de manera es&ec' ica+ a. En ella se &uede a&reciar como el catalizador enzim#tico )a=a a4n m#s la )arrera ener*%tica. La Ta)la 1+ muestra una com&aración de las ener*'as de acti0ación &ara la descom&osición del &eró8ido de 1idró*eno+ en ausencia o &resencia de un catalizador.ue en la reacción no catalizada.ue se&ara los reactantes de los &roductos+ como muestra la :i*ura 1. Las enzimas cuidan de .ue la c%lula 0i0a. En ella se o)ser0a el dia*rama de ener*'a &ara una reacción . <na 0ez ormado los &roductos el catalizador . donde la energía libre de activación es la cantidad de ener*'a necesaria &ara lle0ar todas las mol%culas de un mol de sustancia+ a una tem&eratura determinada+ al estado de transición. el otro consiste en utilizar un catalizador. La es&eci icidad de las enzimas es muy im&ortante &ara los seres 0i0os.ue estos com&uestos &ueden e8&erimentar. "ada c%lula contiene 0arios cientos de miles de com&uestos di erentes+ y e8isten muc1as com)inaciones &osi)les entre las reacciones ..

+ #: igasas . Incluso al*unas se conocen de 1ace muc1o tiem&o y mantienen su nom)re+ sin dar in ormación al*una del sustrato o la reacción . centro catal'tico &rimario+ 2.ue catalizan -tri&sina..ue catalizan+ as' la lactato deshidrogenasa cataliza la reducción de &iru0ato a lactato -4ltima eta&a de la *lucolisis. &uede ser un ion met$lico o )ien una mol%cula or*#nica+ llamada coen%ima+ aun.ue otras necesitan+ adem#s uno o m#s com&uestos no &roteicos+ llamados cofactores.Tema 5.ormación de enlaces con consumo de AT?. El com&le=o enzimaBco actor catal'ticamente acti0o reci)e el nom)re de holoen%ima. Enzimas 3 Muc1as enzimas 1an sido desi*nadas a>adiendo el su i=o -asa al nom)re del sustrato+ es decir+ la mol%cula so)re la cu#l e=erce su acti0idad catal'tica. ?or e=em&lo la ureasa cataliza la 1idrólisis de la urea+ y la arginasa cataliza la 1idrólisis de la ar*inina. La Ta)la 2 reco*e dic1a clasi icaciónA 1: oxido-reductasas -reacciones de o8idoBreducción. .2.ue al*unos enzimas necesitan de am)os. "uando se se&ara el co actor+ la &rote'na restante+ .+ 2: Transferasas -trans ieren *ru&os uncionales. "ofactores enzim#ticos La acti0idad de al*unas enzimas de&ende solamente de su estructura como &rote'na+ mientras . Las Ta)las 3a y 3) reco*en al*unas enzimas . !.+ 4: iasas -reacciones de adición a los do)les enlaces. *ru&o &uente &ara reunir el sustrato y la enzima+ 3. No o)stante e8iste una clasi icación sistem#tica de las enzimas .ue &or s' misma es inacti0a catal'ticamente+ se desi*na con el nom)re de apoen%ima.ue &recisan iones met#licos y coenzimas. a*ente esta)ilizante de la acti0idad enzim#tica -con ormación.ue las di0ide en $ *randes *ru&os+ cada uno de los cuales se di0ide a su 0ez en su)clases. En las enzimas el ion met#lico &uede actuar comoA 1. El co actor -:i*.+ 3: Hidrolasas -reacciones de 1idrólisis. @tras enzimas 1an reci)ido su nom)re en unción del ti&o de reacción .+ !: "somerasas -reacciones de isomerización....

A.ue la del sustrato -:i*. 5.ue sólo una &e. Enzimas ! ?or su &arte cada uno de las coenzimas catalo*ados contiene+ como &arte de su estructura+ una mol%cula de al*una vitamina& -sustancias or*#nicas .ue+ en cantidades m'nimas+ son 0itales &ara el uncionamiento de todas las c%lulas+ y de)en i*urar en la dieta de al*unas es&ecies.ue interacciona con el sustrato y en la .3. esta re*ión . ?or lo *eneral+ la mol%cula de enzima es muc1o mayor . Las coenzimas act4an &or lo *eneral como trans&ortadores intermedios de #tomos es&ec' icos o de electrones. Modelos de actuación de las enzimas ?ara e8&licar la acti0idad catal'tica de las enzimas+ se 1a &ro&uesto un mecanismo c'clico *eneral+ en dos eta&as+ . El centro acti0o es una re*ión tridimensional es&ec' ica con una 4nica distri)ución de los *ru&os .uellos co actores . y reci)en el nom)re centros catalíticos.+ &ara ormar el com&le=o enzimaBsustrato -ES.ue &osi)ilitan la unión de la enzima al sustrato -estos *ru&os no tienen &or .u% ser necesariamente consecuti0os.ue tiene lu*ar la reacción+ se denomina sitio activo de la enzima.ue>a &arte de la enzima est# im&licada en la ormación del com&le=o..+ .ue est#n uertemente unidos a la a&oenzima son denominados grupos prost'ticos.. &or lo .Tema 5.uien &ro&uso .ue 0uel0e a estar dis&oni)le &ara reaccionar con otra mol%cula de sustrato. S C E DEEEEEF GESH D E E E E E F ? C E En la &rimera eta&a+ la enzima -E. El modelo m#s conocido so)re el mecanismos de reacción de las enzimas+ es el de :isc1er+ . en otros casos los coenzimas est#n unidos d%)ilmente a la a&oenzima y act4an undamentalmente como uno de los sustratos es&ec' icos de la enzima. se une a la mol%cula de sustrato -S. y al enzima -E.ue se re&resenta en la i*ura si*uiente.ue la mol%cula de sustrato se ada&ta al centro acti0o de la . En una se*unda eta&a+ el com&le=o se ra*menta dando lu*ar al &roducto -?.

.uedando la enzima li)re &ara comenzar de nue0o el &roceso catal'tico..ue el sitio acti0o no necesita ser una ca0idad &re0ia *eom%tricamente r'*ida y &ree8istente+ sino .ue tam)i%n enca=e el &roducto de la reacción.ue se induce y ada&ta al sustrato cuando interacción con %l -:i*.ue no se o)ser0a en los catalizadores no enzim#ticos+ se trata de la saturación con el sustrato+ entendida en t%rminos de ocu&ación de los centros acti0os de todas las mol%culas de enzima. La :i*ura 3d muestra el caso de una enzima -car)o8i&e&tidasa. @tra 1i&ótesis m#s moderna es la del en%ima flexible o de a(uste inducido -modelo de Ios1land.+ &osee una con ormación inicial .uematiza este modelo.ue tienen una relación com&lementaria.+ se acti0an los enlaces .ue se encuentran los centros catal'ticos -Ar*B1!5+ JluB 239+ tyrB2!2. 3).u'micas son a&lica)les a las reacciones catalizadas &or las enzimas+ en los seres 0i0os.ue lo 1ar'a una lla0e al enca=ar en una cerradura+ es decir+ .ue sea re0ersi)le el &roceso+ a la 0ez de)e estar &er ectamente dise>ado &ara . No o)stante+ estas muestran -adem#s del enómeno de la es&eci icidad+ antes comentado.ue su*iere .Tema 5. y el co actor -Zn. Inde&endientemente del modelo+ una 0ez ormado el com&le=o enzima sustrato+ mediante un mecanismo de distorsión -:i*ura 3".ue se com&orta se*4n el modelo de Ioc1land+ en ella se &uede 0er como en el sitio acti0o+ en el .ue se modi ica al interaccionar con el sustrato y ormal el com&le=o GES].ue rom&er y se a&ro8iman los *ru&os . "in%tica enzim#tica.ue si el centro acti0o &osee una estructura &redise>ada &ara el sustrato+ caso de .+ . Los &rinci&ios *enerales de la cin%tica de las reacciones .ue de)e tener una dis&osición es&acial &recisa y es&ec' ica .ue 1ay . No o)stante+ el incon0eniente de esta 1i&ótesis es . un ras*o caracter'stico . La :i*ura ! muestra el e ecto de la concentración del sustrato so)re la 0elocidad de la reacción catalizada &or un enzima+ en la cu#l se distin*uen tres asesA . En la :i*ura 3A se es.ue 1ay .ue enlazar+ a0oreciendo la ormación del &roducto resultante de la reacción catalizada y . Enzimas 5 enzima del mismo modo . $.

2. La Im nos indica la concentración de sustrato a la cu#l la 0elocidad de reacción es la mitad de la 0elocidad m#8ima+ este &ar#metro es inde&endiente de la concentración de enzima+ y es caracter'stico de cada enzima se*4n el sustrato utilizado -si tiene 0arios. en la zona intermedia de GSH la 0elocidad del &roceso de=a de ser lineal+ y a esta zona se la denomina de cin%tica mi8ta. &ara una concentración )a=a de sustrato+ la 0elocidad es directamente &ro&orcional a la concentración del sustrato -lineal. y corres&onde a los Mmoles de sustrato consumido en 1 min. 1 < E Mmol SNmin A &artir de la i*ura se de inen dos &ar#metros cin%ticos de *ran im&ortancia+ . Enzimas $ 1. La 0elocidad de una reacción catalizada &resentada en la i*ura+ nos indica la cantidad de sustrato consumido o &roducto ormado &or unidad de tiem&o+ en el Sistema Internacional se desi*na &or K<L -unidad de acti0idad enzim#tica.. Este com&ortamiento es caracter'stico de la mayor'a de las enzimas y ue estudiado &or Mic1aelis y Menten en 1613.Tema 5. As'+ cuanto . &ara una concentración alta de sustrato+ la 0elocidad de la reacción se 1ace &r#cticamente constante e inde&endiente de la concentración de sustrato+ la cin%tica se considera de orden cero. No o)stante+ la Im nos da m#s in ormación+ &ues tam)i%n nos indica la a inidad .. 3. La 0elocidad m#8ima se o)tiene cuando la 0elocidad de reacción se 1ace inde&endiente de la concentración de sustrato. Este 0alor de&ende de la cantidad de enzima . y la cin%tica se denomina de &rimer orden.ue ten*amos.ichaelis -Im.ue son caracter'sticos de cada enzima+ la velocidad m$xima )*max++ y la constante de .ue &osee la enzima &or el sustrato+ siendo %sta mayor+ cuanto menor es la Im.

A )a=a GS] -es decir+ si Im FFF GS].entenA 0 E Oma8 GSH N -ImCGSH.ue no todas eran . &or otro lado+ a altas GS] -es decir+ ImDDDDGS ].Tema 5. Al*unos ti&os de Leucemia -en la .uedando un e8&resión del ti&oA 0 E PQ GS] -cin%tica de &rimer orden. &ueden e0itarse &or la administración de una enzima la -sparraginasa+ . a &artir de ella &odemos e8&licar matem#ticamente las tres ases de la cur0a de Mic1aelis -:i*. La relación entre la 0elocidad de reacción+ la concentración de sustrato+ 0elocidad m#8ima y la Im+ . el &ro)lema a&areció cuando se utilizaron distintas uentes de as&arra*inasa+ descu)ri%ndose . des&reciar'amos Im rente a GS]+ con lo .ue los *ló)ulos )lancos &roli eran anormalmente.+ la una cin%tica de orden cero y 1a)r'amos alcanzado la saturación.ue mayor ser# la a inidad 1acia ese sustrato+ o dic1o de otra orma+ si es &oco a 'n necesitar# m#s sustrato &ara alcanzar ese 0alor de 0elocidad.ue 0 E Oma8 -.ue la Asn &resente en la san*re es un &rinci&io nutriti0o &ara el crecimiento de los lin ocitos mali*nos.!.ue cataliza la reacción de 1idrólisis de la Asn a As& Asn C R2@ DEEEEEEF As& C NRC! este descu)rimiento condu=o a la conclusión de . Enzimas 3 menor sea la Im menor ser# la cantidad de sustrato+ necesaria &ara alcanzar la mitad de la 0elocidad m#8ima+ &or lo ..uedan re le=adas en la ecuación de . El tramo intermedio+ en el .ue la GS ] ≈ Im corres&ondiente a una cin%tica de orden mi8to y se =usti ica directamente+ con la ecuación de Mic1aelis.ue &ueden tener estos &ar#metros+ en es&ecial la Im.ichaelis-. ?ero+ 0eamos un e=em&lo de la im&ortancia .ue ser'a constante. el termino ImCGS] &odemos a&ro8imarlo a la Im+ .

+ en ella -:i*. As'+ la enzima . 5./0oli. Estas enzimas de di erentes uentes -animal+ 0e*etal o micro)iana.ue acilitan el c#lculo de la Im y la Oma8+ todos ellos se 1acen en )ase a trans ormaciones matem#ticas de la ecuación de Mic1aelis y entre ellas la m#s utilizada es la re&resentación de LineSea0erB5urP tam)i%n conocida como do)lesB in0ersos.+ ten'an di erente Im res&ecto a la Asn.uellas enzimas con el 0alor de Im muy )a=o -una alta a inidad.ue &resenta)a menor Im resultó ser la de una )acteria -.+ ser'an ca&aces de &ro0ocar la 1idrólisis de la Asn. En &rinci&io+ &odr'an o)tenerse a &artir de la cur0a de Mic1aelis de la i*ura+ &ero e8isten m%todos *r# icos m#s ia)les .+ utiliz#ndose &ara detener la en ermedad. . Al inal se encontró la razón. se re&resenta 1N0 rente a 1NGS ]+ se o)tiene una recta cuya intersección con el e=e de T es B1NPm+ y con el e=e U es 1N Oma8+ siendo la &endiente ImNOma8. "omo la GAsnH en la san*re es muy )a=a+ sólo a.Tema 5. Es &ues de 0ital im&ortancia conocer estos &ar#metros cin%tico. Enzimas 2 e icientes.