“Año de la inversión para el desarrollo rural y la seguridad alimentaria”

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA
FACULTAD DE CIENCIAS ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE BIOTECNOLOGÍA

UNIDAD I

PRÁCTICA Nº01 DOCENTE CURSO ESTUDIANTES

: Curva de calibración de glucosa, etanol y protenias : Angel Castro : Operaciones Unitarias I :

 GARCÍA PÉREZ, Carlos  RIVAS SANDOVAL, Walter CICLO : VIII

Nvo. Chimbote. Octubre de 2013

CURVA DE CALIBRACION DE GLUCOSA. es su biomasa. en los cuales los valores tanto de las absorbancias como de los pesos deben de ser crecientes. resulta de sumo interés poder llegar a determinar. lo cual además se puede determinar mediante densidad óptica con la ayuda de un espectrofotómetro. consumo de las fuentes de C y energía. la cual de encontrarse en un medio de cultivo que contenga todo los nutrientes necesarios para su crecimiento. es conveniente introducir algunas definiciones y hacer ciertas consideraciones sobre algunas “regularidades” observadas experimentalmente en el cultivo de microorganismos. ETANOL Y PROTEINAS INTRODUCCION: La conversión microbiológica de carbohidratos para obtener biomasa y productos de interés industrial es tema de constante actualidad debido a la creciente dependencia de los recursos renovables. generalmente. El grado en que un microorganismo puede transformar los componentes del medio de cultivo en nueva biomasa y productos juega un papel fundamental. la producción de biomasa (biomasa = concentración de microorganismos expresada en gramos de células secas / litro de cultivo). La aparición en el mercado de sensores que permiten medir importantes variables delos cultivos microbianos y el uso de ordenadores acoplados a los biorreactores (biorreactor = recipiente en el cual se cultivan los microorganismos) han ampliado el horizonte para la aplicación de balances de materia y energía. Un aspecto también importante de conocer y determinar durante la cinética de crecimiento de microorganismos. a punto tal que puede llegar a ser factor determinante de la viabilidad de un proceso en gran escala. Los rendimientos alcanzados en biomasa y productos son de relevancia significativa debido a que. el valor de los sustitutos empleados en la formulación de medios de cultivo tiene una importancia sustancial en el costo de operación de las plantas industriales. estimar o predecir rendimientos que den cuenta de las transformaciones que se están llevando a cabo en un biorreactor. . ha de permitir el incremento de éste. Desde este punto de vista. Antes de proceder a considerar el sistema de análisis propuesto. de nitrógeno y Oxígeno y las producción de CO2 y desprendimiento de calor son algunas de las variables que pueden ser estimadas a partir de medidas experimentales y utilizadas en el planteo y cálculo de balances de materia y energía. Los balances de materia y energía resultan a tal fin de suma utilidad y su empleo se ha extendido ampliamente en ciencias básicas y aplicadas. así también mediante el peso seco de la biomasa.

se lee el mismo carácter en la muestra problema y.5-dinitrosalicilico.OBJETIVOS: 1. Para seguir el protocolo descrito por Miller se debe conocer la composición de DNS que está dada por fenol. después. Se basa en la existencia de una relación en principio lineal entre un carácter medible (por ejemplo la absorbancia en los enfoques de espectrofotometría) y la variable a determinar (concentración). empleando la curva de calibración. Las curvas de calibración suelen poseer al menos una fase de respuesta lineal sobre la que se realiza un test estadístico de regresión para evaluar su fiabilidad. mediante la sustitución de la variable independiente de esa función. 2. Elaborar curva de calibrado de DNS. Para ello.5dinitrosalícilico y su conversión en acido 3-amino-5-nitrosalicilico y ácido D-glucónico. se efectúan diluciones de unas muestras de contenido conocido y se produce su lectura y el consiguiente establecimiento de una función matemática que relacione ambas. bisulfito de sodio. Elaborar curva de calibrado para proteínas mediante el método de Lowry. se puede interpolar el dato de la muestra problema hasta encontrar la concentración del analito. sal de Rochelle y ácido 3. Se dice pues que la respuesta de la muestra puede cuantificarse y.5-dinitrosalicilico se convierta en color rojo ladrillo. hidróxido de sodio. se obtiene la concentración de esta. Método del DNS Consiste en la reacción generada por el extremo reductor del azúcar frente el ácido 3. Esta reacción genera que el color amarillo del 3. MARCO TEORICO: Curva de calibrado La curva de calibrado es un método de química analítica empleado para medir la concentración de una sustancia en una muestra por comparación con una serie de elementos de concentración conocida. Para generar la reacción es necesario que la mezcla entre el reactivo y el azúcar reductor se lleve a cabo mediante el calentamiento de la muestra en un choque térmico durante en el cual se procede 5 minutos en un recipiente con agua .

Añadir 5 ml de agua destilada a cada tubo de ensayo. Mantener la mezcla en baño de agua a ebullición durante 5 minutos. pasados estos. existe en dos formas una azul y otra naranja. Entre las sustancias que interfieren están los detergentes y las soluciones básicas. 3. 2. Las proteínas se unen a la forma azul para formar un complejo proteína-colorante con un coeficiente de extinción mayor que el colorante libre. rápido.5 mL reactivo de Lowry. dejar reposar por 15 minutos. 5. MATERIALES Y MÉTODOS Elaboración de curva de calibrado para glucosa: Método de DNS 1. en solución ácida.95 mL de agua destilada y 0. 4 Leer la absorbancia a 500 nm. . agitar energéticamente y dejar 30 min en reposo. 0. Leer las muestras a una longitud de onda de 540 nm.hirviendo para permitir la apertura de la molécula en forma de anillo y dejar el extremo reductor expuesto para la reacción. luego enfriar con agua helada por un tiempo de 3 minutos. 2 3 Agitar energéticamente y dejar 15 minutos. agitar hasta homogenizar la solución obtenida. Se añade 1 mL de reactivo DNS a cada tubo de ensayo que contiene 1 mL de muestra a analizar. Agregar 5 mL de reactivo de Folin. Determinacion de proteínas por el método de Lowry: 1 Colocar la muestra problema 0. utilizando agua como blanco. Método de Bradford para determinación de proteínas Se basa en la unión de un colorante.05 mL. barato y pocas sustancias interfieren en su determinación. simple. Este método es sensible (1-15 μg). 4. La concentración se obtiene interceptando la medida de absorbancia en la curva de calibrado. Comassie Blue G-250 (también Serva Blue) a las proteínas. Luego se establece el choque térmico sumergiendo la muestra durante 5 minutos en hielo para detener tal reacción y finalmente es leído por medio de espectrofotometría a 540nm. El colorante.

1 0 Concentracion g/L Blanco 0.887 1.2 0.9442x + 0.115 0.737 0.018 0.4 0.7 0. .5 0.317 0.6 1.4 1. Llenar la siguiente tabla para azucares reductores por DNS Tubo Solucion estándar de glucosa Agua destilada mL (0.1 0.6 0.0 1.0446 R² = 0.027 Gráfica 1.152 0.9 1 1 0.2 Absorbancia a 540 nm 1 0.5 0.5 Concentración de glucosa en g/L 0.771 0.9 0.2 0.317 0.3 0.5 2 2.2 0 0 0.8 2 Absorbancia nm 0.4 0.027 540 y = 1.6 0.8 0.887 1.446 0.7 0.2 1.9901 1.588 0.4 0.737 0.446 0.3 0.8 0.RESULTADOS: A.1 g en 50 mL) en mL 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 0 0.018 0. Curva de calibrado de la concentración de la glucosa mediante el método de DNS.2 0.5 1 1.8 0.6 1.

028 0.0052 0.6 0.7 0.015 0.2 0.8 0.4 0.B.2 0.045 .8 0.3 0.4 0.6 0.2 Blanco 0.6 0.8 1 0.008 0.4 0. Llenar la siguiente tabla para determinación de proteína Lowry: Tubo Solucion estándar de Agua destilada Concentracion (mg/mL) Absorbancia (500 nm) seroalbumina (1 mg/ml) en (mL) mL 1 2 3 4 5 6 0 0.045 7 1 0 1 0.025 0.3 0.

R² = 0. 3. debido al coeficiente de correlación lineal obtenido.9901. Producción de etanol por zymomonas mobilis. R² = 0. mejor dicho que a mayor concentración de glucosa en las soluciones se obtendrá mayor absorbancia. Analytical Biochemistry 72: 248-254. México distrito federal. 2.9969. 2010.DISCUSION: Hartree (1972). lo cual es validado con la gráfica y el coeficiente de correlación lineal obtenido. Tesis de maestría. 2007. se dieron de manera decreciente y de forma proporcional al contenido de glucosa en las muestras utilizadas. Buitrago Estrada Johana Carlina. relación entre la concentración de glucosa en las soluciones y la absorbancia tienen un comportamiento lineal. Trabajo de Grado para optar el titulo de microbiólogo Industrial. lo cual nos indica que el comportamiento de los puntos. A. CONCLUSION:  Lo obtenido es adecuado y confiable para realizar la curva de calibrado para determinar las concentraciones de glucosa en otras soluciones. México. las lecturas de absorbancia obtenidas en la elaboración de la curva de calibrado para determinación de glucosa. Bradford M (1976) A rapid and sensitive method for quantification of microgram quantities of protein utilizing the principles of protein-dye binding. Alarcón Elías. BIBLIOGRAFIA: 1. Tenjo Camacho Dolly Giselle. . Obtencion de un sustrato Fermentable de origen vegetal y su evaluación con células libres de Saccharomyces cerevisiae.