UNIVERSIDAD CENTROOCCIDENTAL “LISANDRO ALVARADO” DECANATO DE CIENCIAS DE LA SALUD DEPARTAMENTO DE MEDICINA PREVENTIVA Y SOCIAL SECCION DE MICROBIOLOGÍA

Microbiología Médica I

TALLER DE PRUEBAS BIOQUÍMICAS BÁSICAS UTILIZADAS EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA
Yudy Aranguren, octubre 2011

PASOS PARA EL DIAGNOSTICO: 1.- MUESTRA:

2.- DIRECTO: Coloraciones: Gram

3.- CULTIVO

4.- PRUEBAS BIOQUIMICAS

PRUEBAS BÁSICAS PARA EL DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO DE COCOS GRAM POSITIVO .

H2O2 + catalasa = H2O + ½ O2 Son catalasa negativo: Son catalasa positivo: . con en peróxido de hidrógeno (H2O2) al 3%.PRUEBA DE LA CATALASA La determinación de la presencia de catalasa • Se pone en contacto una pequeña cantidad de cultivo bacteriano de 24-48 horas de incubación. • La liberación de O2 indica la presencia de catalasa.

8%.PRUEBA DE LA REDUCCIÓN DE NITRATOS A NITRITOS • Permite determinar la capacidad de un organismo de reducir el nitrato en nitritos por algunas especies bacterianas que poseen la enzima nitrato-reductasa • Se agrega a un cultivo en caldo unas gotas de: . • Se observa un cambio de color: • Positivo: Rojo ladrillo • Negativo: Sin cambio de color - + . .6%.Reactivo A: solución de dimetilnaftilamina 0.Reactivo B: solución de ácido sulfanílico 0.

particular ayuda a su • La acidez que se produce en el medio se pone en evidencia a través del cambio de color de un indicador de pH - + • Se puede evidenciar la producción de gas AGAR SALADO MANITOL .FERMENTACIÓN DE CARBOHIDRATOS • La fermentación de un carbohidrato (azucares) por un microorganismo en identificación.

PRUEBAS SEGUNDARIAS 1.COAGULASA 2.SENSIBILIDAD O RESISTENCIA A LA NOVOBIOCINA ...

PRUEBA DE LA COAGULASA La determinación de la presencia de la enzima coagulasa: • Se pone en contacto una pequeña cantidad de cultivo bacteriano con plasma con anticoagulante e + incubar 4 horas a 37ºC. COAGULASA POSITIVA Staphylococcus aureus NEGATIVA Staphylococcus epidermidis Staphylococcus saprophyticus + - .

PRUEBA DE SENSIBILIDAD .

SENSIBILIDAD A LA NOVOBIOCINA SENSIBILIDAD A LA NOVOBIOCINA SENSIBLE-SIN CRECIMIENTO RESISTENTE-CON CRECIMIENTO Staphylococcus epidermidis Staphylococcus saprophyticus NOVOBIOCINA NOVOBIOCINA Sin crecimiento alrededor del disco de Novobiocina Con crecimiento alrededor del disco de Novobiocina .

5% per o NO a 7% NaCl .CRECIMIENTO EN ALTAS CONCENTRACIONES DE SAL COCOS GRAM POSITIVOS • Género Staphylococcus crece a altas concentraciones de sal (7% NaCl) • Género Streptococcus NO crece a altas concentraciones de sal (7% NaCl) + - • Género Enterococcus crece a altas concentraciones de sal de 6.

Staphylococcus aureus crece y fermenta el manitol (color amarillo del medio) ...Staphylococcus epidermidis y Staphylococcus saprophyticus Crecen y NO fermentan el manitol (color rosado del medio) 3..CRECIMIENTO EN ALTAS CONCENTRACIONES DE SAL Agar Salado Manitol: Crecimiento con o sin fermentación de manitol 1.Género Streptococcus no crece a 7% de NaCl 2.

PATRONES DE HEMÓLISIS .

PATRONES DE HEMÓLISIS AGAR SANGRE ALFA: Lisis parcial de los glóbulos rojos BETA: Lisis total de los glóbulos rojos ALFA BETA GAMMA GAMMA: Sin lisis .

PRUEBA DE CAMP Prueba de CAMP: Las especies del genero Streptococcus del grupo B ( BETA HEMOLITICOS) produce un factor que aumenta la beta hemólisis de una cepa indicadora de Staphylococcus aureus. Staphylococcus aureus Streptococcus agalactiae Streptococcus pyogenes .

AUTOEVALUACIÓN TIPO DE HEMÓLISIS NO HEMOLITICO .

youtube.com/watch?v=Zks-2AZuZ1Y&feature=related .CLASIFICACION DE LANCEFIELD PARA ESTREPTOCOCOS BETA HEMOLITICOS http://www.

Extracto soluble de la pared celular por acción enzimática + Partículas de látex cubiertos de anticuerpos específicos CLASIFICACION DE LANCEFIELD PARA BETA HEMOLITICOS .

PRUEBA DE SENSIBILIDAD A LA BACITRACINA Pruebas para diferenciar estreptococos Beta hemolíticos (Grupo A y Grupo C) Con crecimiento alrededor del disco de Bacitracina Sin crecimiento alrededor del disco de Bacitracina .

PRUEBA DE SENSIBILIDAD A LA OPTOQUINA Pruebas para diferenciar Streptococcus pneumoniae y otros estreptococos Alfa hemolíticos (Streptococcus mitis) Streptococcus pneumoniae Streptococcus mitis DISCO DE OPTOQUINA DISCO DE OPTOQUINA Sin crecimiento alrededor del disco de Optiquina Con crecimiento alrededor del disco de Optiquina .

PRUEBA DE SENSIBILIDAD A BILIS Pruebas para diferenciar Streptococcus pneumoniae y otros estreptococos Alfa hemolíticos (Streptococcus mitis) Streptococcus mitis NO lisado en presencia de Bilis Streptococcus pneumoniae lisado en presencia de Bilis .

PRUEBAS BÁSICAS PARA EL DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO DE BACILOS GRAM NEGATIVOS .

MUESTRA: 2.DIRECTO: Coloraciones: Gram 3...PASOS PARA EL DIAGNOSTICO: 1.CULTIVO 4..PRUEBAS BIOQUIMICAS ..

FERMENTACIÓN DE LACTOSA EN MEDIO MAC CONKEY .

eso ayuda en el proceso de clasificación • Se realiza una siembra pinchando el medio con la aguja bacteriológica. y tras incubar 24 h.PRUEBA DE MOVILIDAD • Permite conocer si las bacterias en estudio son móviles o no. . se observa si se ha producido crecimiento entorno a la zona inoculada.

PRUEBA DEL INDOL • Se cultiva la especie en estudio en un caldo rico en triptofano para que se produzca el Indol • Se agrega al cultivo tres gotas del reactivo de Kovack (P-dimetil-aminobenzaldehido ) • Se determina la presencia de Indol a través de la formación de un anillo rojo en la superficie del caldo + - .

Medio citrato de Simmons .PRUEBA DEL CITRATO Determina si el organismo bacteriano en cuestión se desarrolla o no en un medio que contiene citrato como única fuente de carbono.

KLIGLER: Agar triple azucar hierro .

n-dimetil p-fenilendiamina • Este reactivo es rápidamente transformado a un Prueba de oxidasa producto oxidado de color púrpura dentro de 30 segundos en presencia de citocromo oxidasa.PRUEBA DE LA OXIDASA • Prueba secundaria • Permite conocer la presencia o ausencia del “citocromo C” en bacterias y es una característica fisiológica muy utilizada en taxonomía • Se toma una pequeña cantidad de cultivo bacteriano de 24-48 horas de edad y se transfiere a un trozo de papel filtro previamente embebido en n. .