Temas

ambientales
Repblica de Colombia. Ministerio del Medio Ambiente
Instituto de Hidrologa, Meteorologa y Estudios Ambientales, IDEAM
Fsforo total
Mtodo del cido Ascrbico
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Temas ambientales Mtodo del cido Ascrbico
INSTITUTO DE HIDROLOGA, METEOROLOGA Y ESTUDIOS AMBIENTALES, IDEAM
1. SUMARIO Y APLICACIONES
1.1. El fsforo se encuentra en aguas naturales y residuales casi exclusivamente como fosfatos,
los cuales se clasifican en ortofosfatos, fosfatos condensados (piro-, meta-, y otros
polifosfatos) y fosfatos orgnicos. El anlisis de fsforo envuelve dos pasos generales:
(a) conversin de la forma de fsforo de inters a ortofosfato disuelto, y (b) determina-
cin colorimtrica del ortofosfato disuelto.
Las formas de fsforo en una muestra pueden determinarse como total (sin filtracin),
disuelto (en el filtrado de una muestra pasada a travs de un filtro de 0,45 mm de dime-
tro de poro) y en suspensin (en el residuo de filtracin si existe la suficiente cantidad de
fsforo para garantizar tal consideracin), y comprenden en cada caso: Fsforo total (P):
todas las formas de fsforo presentes, se determina despus de digestin con persulfato.
Fsforo reactivo: las formas de fsforo, principalmente inorgnico, que responden a la
prueba colorimtrica sin hidrlisis ni digestin oxidativa preliminares.
Fsforo hidrolizable: fsforo medido despus de hidrlisis con cido sulfrico, menos
el ortofosfato previamente determinado; incluye polifosfatos (P
2
O
7
4
, P
3
O
10
5
, etc.) y algu-
nos fsfatos orgnicos.
Fsforo orgnico total: fsforo inorgnico ms orgnico oxidable medidos previa digestn
con persulfato, y menos el fsforo hidrolizable y ortofosfato.
El mtodo est basado en reacciones especficas para el in ortofosfato, y dependiendo
del pretratamiento hecho a la muestra, se pueden determinar diversas formas de fsforo.
Las formas de fsforo ms comnmente medidas son fsforo y ortofosfato total y disuel-
to; el fsforo hidrolizable se encuentra casi solamente en muestras de aguas residuales.
Se pueden convertir a la forma de ortofosfato los polifosfatos y algunos compuestos
organofosforados por hidrlisis con cido sulfrico, y los compuestos organofosforados
por digestin con persulfato. Todas las formas de fsforo se reportan como miligramos
de fsforo por litro, P-mg/L.
Debido a que el fsforo puede estar presente en combinacin con materia orgnica, para
determinar el fsforo total, debe disponerse de un mtodo de digestin que oxide la
materia orgnica efectivamente para liberar el fsforo como ortofosfato. Existen tres
mtodos de digestin: con cido perclrico, el ms drstico y prolongado; con persulfato,
la tcnica ms simple; y con cido ntrico y cido sulfrico, recomendado para la mayora
de las muestras, y descrito en este protocolo.
Existen tres mtodos para determinar ortofosfato y su seleccin depende principalmente
del nivel de concentracin. El mtodo con cido vanadomolibdofosfrico es aplicable en
el intervalo de 1 a 20 mg P/L; los mtodos de cloruro estanoso y de cido ascrbico son
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aplicables en el intervalo de 0,01 a 6 mg P/L; los dos primeros mtodos se pueden
consultar en Standard methods.
El molibdato de amonio y el tartrato de antimonil potasio reaccionan en medio cido con
el ortofosfato para formar un heteropolicido -cido fosfomolbdico- que es reducido por
cido ascrbico a un complejo azul de molibdeno intensamente coloreado; slo las for-
mas de ortofosfato forman dicho color azul en esta prueba.
La concentracin mnima detectable es aproximadamente de 10 mg P/L. Los intervalos
aproximados de P son los siguientes:
2. LIMITACIONES E INTERFERENCIAS
2.1. El arsenato forma con el reactivo de molibdato un color azul similar al formado por el
fosfato; concentraciones tan bajas como 0,1 mg As/L interfieren con la determinacin.
2.2. Los iones cobre, hierro y silicato no causan interferencias a concentraciones equivalen-
tes a varias veces su concentracin en agua de mar. Sin embargo, una alta concentra-
cin de hierro puede causar precipitacin y la subsecuente prdida de fsforo.
2.3. El cromo hexavalente y el NO
2

interfieren para dar resultados cerca de 3% ms bajos a

concentraciones de 1 mg/L y de 10 a 15% menores a 10 mg/L.
2.4. El sulfuro (Na
2
S) y el silicato no interfieren en concentraciones de 1,0 a 10 mg/L.
2.5. En muestras con un contenido de 5 a 20 % de sal, el error es menor del 1 %.
2.6. La turbidez de la muestra debe eliminarse por filtracin previa al anlisis de ortofosfato.
Las muestras para fsforo total o hidrolizable total deben filtrarse slo despus de la
digestin.
3. TOMA Y PRESERVACIN DE MUESTRAS
3.1. Si se desea diferenciar las formas de fsforo disuelto, filtrar la muestra inmediatamente
despus de su recoleccin.
L / g m , P e d o d a m i x o r p a o l a v r e t n I m c , z u l e d o s a P
0 , 2 - 0 3 , 0 5 , 0
0 3 , 1 - 5 1 , 0 0 , 1
5 2 , 0 - 1 0 , 0 0 , 5
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3.2. Preservar por congelamiento a 10C o menos. Agregar 40 mg de HgCl
2
/L a las muestras,
especialmente cuando vayan a ser almacenadas por un periodo prolongado. PRECAUCIN:
el HgCl
2
es una sustancia peligrosa; tomar las precauciones apropiadas para su disposicin.
3.3. No adicionar cido o CHCl
3
como preservativo cuando se vayan a determinar las espe-
cies de fsforo. Si solamente se va a determinar fsforo total, agregar 1 mL de HCl
concentrado por litro de muestra o congelar sin ninguna adicin.
3.4. Las muestras con bajas concentraciones de fsforo no se deben almacenar en botellas
plsticas a menos que se congelen, debido a que los fosfatos se pueden adsorber en las
paredes plsticas.
3.5. Enjuagar todos los recipientes de vidrio con HCl diluido y caliente, y luego enjuagar
varias veces con agua destilada. Para lavar la vidriera empleada en el anlisis de fosfato,
nunca usar detergentes comerciales que contengan fosfato.
4. APARATOS
4.1. Bloque (Rack) de digestin:
4.2. Balones micro-kjeldahl.
4.3. Equipo colorimtrico: se requiere uno de los siguientes:
4.3.1. Espectrofotmetro, con fototubo infrarrojo para usar a 880 nm, provisto de una celda con
paso de luz de 2,5 cm o mayor.
4.3.2. Fotmetro de filtro, equipado con un filtro de color rojo y paso de luz de 0,5 cm o mayor.
4.4. Vidriera lavada con cido: para determinar bajas concentraciones de fsforo; la conta-
minacin con fosfato es comn debido a su absorcin en las superficies de vidrio y se
debe evitar el uso de detergentes comerciales que contienen fosfato. Lavar toda la vidriera
con HCl diluido y caliente y enjuagar uy bien con agua destilada. Es preferible reservar la
vidriera solamente para las determinaciones de fosfato, y si despus de su uso se lava
y guarda llena de agua, el tratamiento con cido solo se requiere ocasionalmente.
5. REACTIVOS
5.1. cido sulfrico, H
2
SO
4
, concentrado.
5.2. cido ntrico, HNO
3
, concentrado.
5.3. Fenolftaleina en solucin acuosa.
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5.4. Hidrxido de sodio, NaOH, 1 N.
5.5. cido sulfrico, H
2
SO
4
, 5N: Diluir 70 mL de H
2
SO
4
concentrado a 500 mL con agua des-
tilada.
5.6. Solucin de tartrato de antimonil potasio: Disolver 1,3715 g de K(SbO)C
4
H
4
O
6
H
2
O en
400 mL de agua destilada en un baln aforado de 500 mL y llevar a volumen. Almacenar
en una botella con tapn de vidrio.
5.7. Solucin de molibdato de amonio: Disolver 20 g de (NH
4
)
6
Mo
7
O
24
4H
2
O en 500 mL de
agua destilada. Almacenar en una botella con tapn de vidrio.
5.8. cido ascrbico, 0,1 M: Disolver 1,76 g de cido ascrbico en 100 mL de agua destilada.
esta solucin es estable por cerca de una semana a 4C.
5.9. Reactivo combinado: Mezclar los siguientes reactivos en su orden y proporciones para
100 mL de reactivo combinado: 50 mL de H
2
SO
4
5N, 5 mL de solucin de tartrato de
antimonil potasio, 15 mL de solucin de molibdato de amonio, y 30 mL de solucin de
cido ascrbico. Mezclar despus de la adicin de cada reactivo. Dejar que todos los
reactivos alcancen la temperatura ambiente antes de mezclarlos. Si se forma turbidez en
el reactivo combinado, agitar y dejar en reposo por unos minutos hasta que desaparezca
la turbidez. El reactivo es estable por 4 h.
5.10. Solucin patrn de fosfato: Disolver en agua destilada 219,5 mg de KH
2
PO
4
anhidro y
diluir a 1000 mL; 1,00 mL = 50,0 mg PO
4
3
-P
5.11. Solucin estndar de fosfato: Diluir 50,0 mL de la solucin patrn de fosfato a 1000 mL
con agua destilada; 1,00 mL = 2,50 mg P.
6. PROCEDIMIENTO
6.1. Filtracin preliminar. Las muestras para la determinacin de fsforo disuelto reactivo,
fsforo disuelto hidrolizable con cido, y fsforo disuelto total, se deben filtrar a travs de
membranas de 0,45 mm de dimetro de poro. Las muestras de difcil filtracin se pueden
prefiltrar con un filtro de fibra de vidrio.
Debido a que los filtros de membrana pueden contribuir con cantidades significativas de
fsforo, antes de su uso lavarlos por remojo en agua destilada, por alguno de los siguien-
tes mtodos: (a) remojar 50 filtros en 2 L de agua destilada durante 24 h; (b) remojar 50
filtros en 2 L de agua destilada por 1 h., cambiar el agua destilada, y dejarlos en remojo
otras 3 h., o (c) lavarlos por filtracin con varias porciones de 100 mL de agua destilada;
este procedimiento requiere determinaciones de blanco ms frecuentes para asegurar la
consistencia de los lavados y para evaluar diferentes lotes de filtros.
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6.2. Digestin con cido sulfrico-cido ntrico. En un baln micro-kjeldahl colocar una al-
cuota de muestra que contenga la cantidad deseada de fsforo (establecida segn el
mtodo colorimtrico a emplear); los estndares para la curva de calibracin se llevan a
travs de este mismo procedimiento de digestin. Agregar 1 mL de H
2
SO
4
concentrado y
5 mL de HNO
3
concentrado. Realizar la digestin hasta obtener un volumen de 1 mL y
continuar hasta que la solucin se torne incolora, con lo que se remueve el HNO
3
.
Enfriar y agregar aproximadamente 20 mL de agua destilada. 0,05 mL (1 gota) de
fenolftaleina, y la cantidad necesaria de solucin de NaOH 1 N requerida para producir
un tenue color rosado. Transferir la solucin neutralizada, si es necesario filtrada para
remover material particulado o turbidez, a un baln aforado de 100 mL. Agregar los
lavados de filtracin y llevar a volumen con agua destilada.
6.3. Determinacin de fsforo. Transferir una alcuota de 50,0 mL de muestra a un tubo de
ensayo limpio o a un erlenmeyer de 125 mL. Agregar 0,05 mL (1 gota) de fenolftaleina; si
se desarrolla un color rojo, agregar solucin de H
2
SO
4
5N gota a gota hasta descargar el
color. Agregar 8,0 mL del reactivo combinado y mezclar completamente. Despus de
mnimo 10 min. pero antes de 30 min., medir la absorbancia de cada muestra a 880 nm,
con un blanco de reactivos como solucin de referencia.
6.4. Correccin por turbidez o color. El color natural del agua generalmente no interfiere a la
longitud de onda empleada. Para aguas altamente coloreadas o turbias, preparar u blan-
co por adicin a la muestra de todos los reactivos a excepcin del cido ascrbico y el
tartrato de antimonil potasio. Restar la absorbancia del blanco de la absorbancia de cada
muestra.
6.5. Preparacin de la curva de calibracin. Preparar curvas de calibracin individuales con
una serie de seis estndares en el intervalo de fosfato adecuado segn el paso de luz de
la celda. Usar un blanco de agua destilada con el reactivo combinado para hacer las
lecturas fotomtricas para la curva de calibracin. La grfica de absorbancia contra con-
centracin de fosfato da una lnea recta que pasa por el origen. Llevar al menos un
estndar de fosfato con cada grupo de muestras.
7. CLCULOS
7.1.
mg P / L
mg P (en aproximadamente 58 mL de volumen final) 1 000
mL de muestra
=

8. PRECISIN
8.1. Los valores de precisin y exactitud dados en la tabla 4500-P:I del Standard methods
son para el procedimiento de solucin sencilla de la edicin 13. El presente procedimien-
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to difiere en las relaciones de reactivo a muestra, en la no adicin de solvente, y las
condiciones de acidificacin. Esta tcnica es superior en precisin y exactitud a la tcni-
ca previa en el anlisis de agua destilada y agua superficial al nivel de 228 g P/L (tabla 1) .
Tabla 1. Comparacin de precisin y exactitud de los mtodos del cido ascrbico
9. QUMICO RESPONSABLE
Elaboracin protocolo: Laboratorio de Qumica Ambiental del IDEAM Montaje tcnica:
Laboratorio de Qumica Ambiental
10. FECHAS
Elaboracin protocolo: agosto de 1997 Montaje tcnica: Calibracin: Revisin: agosto de
1997.
11. REFERENCIAS
Standard methods for the examination of water and wastewater. American Public Health
Association, American Water Works Association, Water Pollution Control Federation. 19ed.,
New York, 1995 Methods for chemical analysis of water and wastes. United States
Environmental Protection Agency. Cincinnati, 1983.
12. BIBLIOGRAFA
RODIER, J. Anlisis de aguas: aguas naturales, aguas residuales, agua de mar. Omega, Bar-
celona, 1981. SAWYER, C y McCARTY, P. Chemistry for environmental engineering. McGraw
Hill, New York, 1996 GARAY, J, PANIZZO, L, LESMES, L, RAMIREZ, G y SANCHEZ, J.
Manual de tcnicas analticas de parmetros fsico-qumicos y contaminantes marinos. Cen-
tro de Investigaciones Oceanogrficas e Hidrogrficas. Cartagena, 1993
o d i c l e d o d o t M
o c i b r c s a
n i c a r t n e c n o C
, P e d
o t a f s o f o t r O
L / g o t l e u s i d
e d N
s o i r o t a r o b a l
r a d n t s e n i c a i v s e D
% a v i t a l e r
% o v i t a l e r r o r r E
a u g A
a d a l i t s e d
e d a u g A
o r
a u g A
a d a l i t s e d
a u g A
o r e d
d r a d n a t S
. d e 3 1 , s d o h t e M
8 2 2 8 7 8 , 3 7 1 , 2 1 0 , 4 8 0 , 2
e t n e s e r p o d o t M 8 2 2 8 3 0 , 3 5 7 , 1 8 3 , 2 9 3 , 1
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FSFORO (TOTAL)
DIGESTIN CON H
2
SO
4
-HNO
3
MTODO DEL CIDO ASCRBICO
1. Filtracin Preliminar
2. Digestin con H
2
SO
4
-HNO
3
3. Determinacin de fsforo
50 filtros de
membrana de
0,45 m de dim.
de poro
Para determincacin
de fsforo disuelto se
deben filtrar las
muestras y pretratar
los filtros as:
Remojar en 2 L de agua por 1 hora Cambiar el agua Remojar 3 horas
Varias porciones de 100 mL de agua Lavar por filtracin
Requiere
blancos mas
frecuentes.
Filtrar muestras Remojar en 2 L de agua por 24 horas
1 mL de
H
2
SO
4

conc.
5 mL de
HNO
3
conc.
20 mL
agua
1 gota
fenolftaleina
NaOH 1N
Alcuota de
muestra
1
, blanco y 6
estndares
En baln
microkjeldahl
Digestin2
(1mL incolora)
Enfriar
Cantidad suficiente para
obtener color rosa tnue
No
Llevar a volumen
Agua destilada
Agregar los
lavados de
filtracin
Filtrar con
membrana de
0,45 m de
dim. de poro
Turbidez
Muestra
dirigida
Si
Transferir a un
baln aforado
de 100 mL
Tubo de
ensayo o
erlenmeryer
de 125 mL
Medir Abs. a 800 nm despus
de 10 min. y antes de 30 min.;
ajustar cero con blanco
3
Color
rojo
Alcuota de
50 mL de
muestra dil.
Descargar
color
1 gota de
fenolftaleina
Mezclar
Mezclar en su orden; agitar despus de cada adicin Si se forma turbidez, agitar y dejar en reposo por unos minutos
Estable por
4 horas
H
2
SO
4
5N
gota a gota
50 mL
5 mL
15 mL
30 mL
100 mL
de agua
1,76 de cido
ascrbico
20 g de
(NH
4
)
6
Mo
7
O
24
.
4H
2
O
500 mL
de agua
1,3715 de
K(SbO)C
4
H
4
O
6
.
1/2
H
2
O
400 mL de agua en
baln de 500 mL
Llevar a
volumen
70 mL de
H
2
SO
4
conc.
Diluir a 500 mL
con agua
8 mL
Si
No
Reactivo
combinado
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4. Curva de calibracin
Solucin
patrn
Diluir a
1.000 mL
Agua
destilada
Diluir a
1.000 mL
Solucin
estndar
Preparar
6 estndares
1 mL=2,50 g PO
4
.
-P 50 mL
219,5 KH
2
PO
4
1
Alcuota de muestra que contenga la cantidad apropiada de fsforo, establecida segn el mtodo colorimtrico; en este caso, 50 mL.
2
Realizar la digestin hasta obtener un volumen de 1 mL y continuar hasta que la solucin se torne incolora.
3
Para aguas altamente coloreadas o turbias, preparar un blanco por adicin de todos los reactivos, excepto cido ascrbico y tartrato de
antimonil potasio; restar la absorbancia del blanco de la absorbancia de cada muestra.
Preparar curvas de calibracin con seis estndares en el intervalo de fsforo adecuado. Usar un blanco de agua con reactivo combinado
para ajustar el cero; llevar al menos un estndar con cada grupo de muestras.