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Université Pierre et Marie Curie

LCHI3-336

Travail Expérimental Personnalisé
2013/2014

Début de la synthèse d'inhibiteurs de glucosidases
Soumaya Benmedjadi Hasnae Chami

Enseignant : Julien Rossignol

I NTRODUCTION
Nous tenons à remercier notre enseignant encadrant, monsieur Julien Rossignol. Ainsi que le personnel du quatrième étage du bâtiment F. Le diabète de type 2 qui survient généralement après l'âge de 40 ans est non-insulinodépendant (DNID); L’insuline est sécrétée par le pancréas en quantité insuffisante par rapport aux besoins. Cela provoque une perturbation de la consommation du glucose par l'organisme, ce qui conduit à une élévation du glucose dans le sang qu'on appelle hyperglycémie. L’alpha-glucosidase est une enzyme de type glycosidase qui dégrade les dissacharides en monossacharides en agissant sur les liaisons alpha 1,4 .

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Pour inhiber l’action de l’alpha -glucosidase, le Salacinol est une molécule zwitterionique qui prend la place du glucose dans l’enzyme. Cet inhibiteur compétitif est composé d’un cation sulfonium stabilisé par un anion sulfate. La molécule Salacinol a été isolée par l’équipe du professeur Yoshikawa de l’université de Kyoto à partir des tiges et des racines de la plante ayurvédique Salacia Reticula. Durant notre TEP la première étape de la synthèse d’un analogue de molécule Salacinol à partir du Dglucose a été réalisée. L’équipe du professeur Yoshikawa de l'université de Kyoto a établi un début de schéma réactionnel pour obtenir l’analogue du Salacinol à partir du D -glucose. On commence par la synthèse du 4,6-O-

Les glucosidases catalysent l'hydrolyse des liaisons glycosidiques (covalentes) entre le groupement réducteur hydroxyle de la fonction alcool du carbone hémiacétalique d'un ose (carbone anomérique) et le groupement acide (hydrogène libre) d'une autre molécule. La formation de cette liaison produit de l'eau. Le blocage de l'enzyme alpha-glucosidase permet de réduire les glycémies après le repas. Ces produits provoquent un étalement dans le temps du passage sanguin du glucose avec une réduction de l'hyperglycémie postprandiale sans entraîner d'hyperinsulinomie réactionnelle.

1. Le diabète. Une épidémie silencieuse. (2013) Edition LeBord de l'eau. 2. Marsaudon E. (2004). 200 questions-clès sur le diabète : Savoir, comprendre pour mieux vivre. Editions Ellebore. 220 pages 3. Biological evaluation of de-O-sulfonated analogs of salacinol, the role of sulfate anion in the side chain on the alpha-glucosidase inhibitory activity. Bioorganic & Medicinal Chemistry.

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I- P RÉSENTATION

DES MÉTHODES

Benzylidene-D-glucose à partir du D-glucose Mécanisme: en utilisant comme réactifs un benzaldéhyde et le Chlorure de Zinc qui est un acide de Lewis.

On va donc procéder à une deuxième expérience pour produire le 4,6-O-Benzylidene acétal à partir d'un β-D-glucopyranoside. Mais cette fois-ci on protège le OH anomérique car on pense qu’une réaction parasite se produisant entre les hydroxyles 1 et 2 empêche la réaction des hydroxyles 4 et 5. Pour la réaction de l’anomère méthylé, les réactifs sont l'acide de Lewis Cu(OTf)2 et le benzaldéhyde diméthyle acétal. La réaction a fonctionné. Parallèlement, on procède à la synthèse de l'oléfine à partir du méthyl 4,6-O-benzylidene-α-Dglucopyranoside.

L’absence de réaction peut s’expliquer par l'utilisation d'un acide de Lewis. Donc pour l’expérience suivante, l'acide de Lewis Cu(OTf)2 sera remplacé par l'acide organique APTS en gardant le même réactif.

4. Biological evaluation of de-O-sulfonated analogs of salacinol, the role of sulfate anion in the side chain on the alpha -glucosidase inhibitory activity. Bioorganic & Medicinal Chemistry 5. Copper(II) Triflate : A Versatile Catalyst for the One-Pot Preparation of Orthogonally Protected Glycosides. Adv. Synth. Catal 6.Lindhorst T. K. (2007). Essentials Of Carbohydrate Chemistry And Biochemistry. 332 pages. Wiley-VCH.

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L’acétylation du D-glucose permet de protéger le carbohydrate pour bloquer la réactivité des autres hydroxyles. Il existe un glucose actif qui réagira avec l'alcool pour former les glycosides contenant une fonction acétal en position. L'acétylation du D-glucose avec l’acide acétique anhydre donne un anomère alpha ou béta en fonction des conditions cinétiques ou thermodynamiques.

anomérique est déprotégée afin de pouvoir poursuivre la réaction. L'expérience consiste à former le 4,6-O-Benzylidene -D-glucose à partir de D-glucose per-acétylé. Ensuite le glycosyl trichloroaceimidate est synthétisé et il donnera un anomère alpha ou beta en fonction des conditions cinétiques ou thermodynamiques. contrôle cinétique

contrôle thermodynamiques Conditions cinétiques : Fournit le produit formé le plus rapidement. conditions thermodynamiques: Fournit le produit le plus stable Mecanisme:

D’abord, tous les groupements sont protégés par acétylation. Ensuite la fonction liée au carbone

7. Carbohydrate Chemistry-Glycoside Synthesis. Supplemental Material for Online Publication. Vicotoria University Of Wellington. CHEM 305. Stocker etal. Supporting Info J. Chem. Ed.

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II- P RÉSENTATION

DES RÉSULTATS

de chlorure de zinc. C’est la première étape du mécanisme en vue de la synthèse de l’analogue du Salacinol. Mais la réaction n’a pas eu lieu puisqu’aucun produit ne s’est formé. On postule que l’absence de produit serait due à une réaction parasite des hydroxyles en position 1 et 2 en effet, le OH anomérique aurait pu jouer un rôle perturbateur par formation de l'acétal entre le OH 1 et 2. Donc pour tenter d’éviter cette réaction indésirable, la position anomérique est protégée (2). Mais ce changement de paramètre n’a pas pour autant conduit à la formation de produit car la poudre blanche obtenue a été étudiée par RMN mais ne correspond pas au produit attendu. Seuls les réactifs de départ auraient été détectés par RMN. Donc pour la troisième expérience, l’acide de Lewis est remplacé par un acide organique (3). Parallèlement, une autre manipulation a été lancée sur l’acétylation et déprotection de l’acétal.

(1)Le D-glucose devrait donner du 4,6-O-Benzylidene-D-glucose en présence de benzaldéhyde et

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Pour obtenir un anomère déprotégé la décantation a été suivie par le séchage et de l’évaporation de la solution dans l'évaporateur rotatif. Les quelques milligrammes de produit solide obtenu Le diol est mélangé au Chlorodiphénylphosphine, ne sont pas solubles dans le chloroforme. Par imidazol et iodine dans le toluène pour éliminer les manque de temps on n’a pas pu à le caractériser deux OH et obtenir une double liaison. On pourra par la suite la réduire. Synthèse de l'oléfine à partir du méthyl 4,6-Obenzylidene-alpha-D-glucopyranoside

La CCM donne un produit pur. Rapport frontal (Ether de Pétrole/ Acétate d’éthyle: 3/1): réactif: 0,23, produit:0,41

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III- D ISCUSSION
Dans le mécanisme de production de l’analogue du Salacinol, la première étape est la synthèse de 4,6-O-Benzylidene-D-glucose à partir de D-glucose. La réaction du α-D-glucospyranoside en présence d'ATPS et de ph-CH-(OM)2 donne le 4,6-O-Benzylidene-α-D-glucopyranoside. En revanche le D-glucose n'a pas donné le produit attendu dans notre expérience lorsqu'on l'a mélangé avec l'acide de Lewis. On suppose que c'est grâce à l'utilisation de l'acide organique au lieu de l'acide de Lewis que la réaction a pu avoir lieu. L’acide organique serait plus efficace pour obtenir un produit mais ceci ne peut pas être confirmé puisque d’autres équipes ont pu obtenir des résultats en utilisant comme réactif l’acide de Lewis. De plus l'utilisation d'un D-glucose protégé en position anomérique faciliterait la réaction. Pour ce qui est de l'acétal protégé en position anomérique

Il est dommage de ne pas avoir eu de produit pour le caractériser par RMN par manque de produit et de temps. L'avantage de la synthèse de l'oléfine est qu'on peut la fonctionnaliser par exemple avec une hydroboration ou la réduire pour obtenir un sucre désoxygéné en positions 2 et 3. Lors de la synthèse de l’oléfine, nous nous sommes arrêtés à la décantation et le produit n’a pas été évaporé à l’évaporateur rotatif par manque de temps.

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C ONCLUSION

Nous avons introduit une nouvelle façon de synthèse du 4,6 -O-benzylidene-α-Dglucopyranoside. Cependant pour continuer la synthèse en vue de produire l’analogue du Salacinol, il faut maintenant voir si l’anomère protégé pourra réagir ou s’il faudra d’abord déprotéger la fonction anomérique Le D-glucose réagira préférentiellement lorsque le réactif est un acide organique. La méthylation de la fonction anomérique joue aussi un rôle déterminant pour permettre la formation du méthyl 4,6-O-benzylidene-α-D-glucopyranoside. D'autre part, il serait intéressant d'étudier les autres réactions possibles pour l'acétal déprotégé en position anomérique. Comme par exemple la formation des thiols, des N3, d’amine, et la formation de disaccharides. En ce qui concerne l’oléfine, il serait intéressant d’étudier l'influence des hydroxyles 2 et 3 sur l'inhibition des glucosidases par exemple.

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BIBLIOGRAPHIE

Le diabète. Une épidémie silencieuse. (2013) Edition LeBord de l'eau. Marsaudon E. (2004). 200 questionsclès sur le diabète : Savoir, comprendre pour mieux vivre. Editions Ellebore. 220 pages. Yoshikawa M. ; Morikawa T. ; Matsuda H. ; Tanabeb G. ; Muraokab O. (2001). Absolute Stereostructure of Potent -Glucosidase Inhibitor, Salacinol, with Unique Thiosugar Sulfonium Sulfate Inner Salt Structure from Salacia reticulata. Bioorganic & Medicinal Chemistry 10 (2002) 1547– 1554. Akase T. ; Shimada T. ; Harasawa Y. ; Akase T. ; Ikeya Y. ; Nagai E. ; Iizuka S. ; Nakagami G. ; Iizaka S. ; Sanada H. ; Aburada M. ; (2008). Preventive Effects of Salacia reticulata on Obesity and Metabolic Disorders in TSODMice. Hindawi Publishing Corporation Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. Volume 2011, Article ID 484590, 10 pages Tanabe G. ; Yoshkai K. ; Hatanaka T. ; Yamamoto M. ; Shao Y. ; Minematsu T. ; Muraoka O. ; Wang T. ; Matsuda H. ; Yoshikawa M. ; (2006). Biological evaluation of de-Osulfonated analogs of salacinol, the role of sulfate anion in the side chain on the alpha-glucosidase inhibitory activity. Bioorganic & Medicinal Chemistry 15 (2007) 3926-3937. www.sciencedirect.com

Carbohydrate Chemistry-Glycoside Synthesis. Supplemental Material for Online Publication. Vicotoria University Of Wellington. CHEM 305. Stocker etal. Supporting Info J. Chem. Ed. Tran A.;Jones R. A. ; Pastor J.;Boisson J. ; Smith N.;Galan M. C. (2011). Copper(II) Triflate : A Versatile Catalyst for the One-Pot Preparation of Orthogonally Protected Glycosides. Adv. Synth. Catal. 2011, 353, 2593-2598. 2011 Wiley-VCH Verlag GmbH&Co. KGaA, Weinheim. Liu Z. ; Classon B. (1989). A Novel Route to Olefins from Vicinal Diols. J. Org. Chem. 1990, 55, 4273-4275. American Chemical Society. Lindhorst T. K. (2007). Essentials Of Carbohydrate Chemistry And Biochemistry. 332 pages. Wiley-VCH. Gilles Furelaud. UPMC. Le diabète de type II (page consultée le 21/01/2014) http://www.snv.jussieu.fr/vie/dossiers/ diabete/type_II/type_II.htm Mohan S.; Pinto B.M. ; (2007). Zwitterionic glycosidase inhibitors: salacinol and related analogues. Carbohydrate Research. Volume 342, Issues 12–13, 3 September 2007, Pages 1551–1580. http://www.sciencedirect.com

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P ARTIE
S YNTHÈSE
DU MÉTHYL

EXPERIMENTALE
ALPHA - D - GLUCOPYRANOSIDE

4,6 - O - BENZYLIDÈNE –

Le DMF sec (40ml) est introduit dans un ballon de (250 ml), dans lequel le méthyl α-Dglucopyranoside (9 .7 g) et le benzaldéhyde dimethylacetal (7 .6 g) sont dissous. Ensuite, l'acide p -toluène sulfonique (25mg) est introduit dans un ballon lui-même attaché à l'évaporateur rotatif, sous vide, et abaissés dans un bain d'eau à environ 60 °C pour éliminer le méthanol qui se forme pendant la réaction. Après 1 heure, tout le DMF est éliminé par évaporation, la température du bain d'eau est portée à environ 100 ° C. Puis le ballon est retiré de l’évaporateur, une solution de carbonate acide de sodium (1g dans 50ml d’eau) est ajoutée, et le mélange est chauffé à 100 ° C jusqu'à dissolution complète du produit. Le mélange est refroidi à température ambiante, le produit est filtré, lavé soigneusement avec de l'eau et séché pendant 4h à 60 ° C. le méthyl 4,6-O-benzylidène– α-Dglucopyranoside est obtenu sous la forme de poudre blanche avec un rendement de 95% (7.1g). Température de fusion: 168°C RMN DU 1 H,(400 MH Z , CDC L 3 ) : 7.47 ( M , 2H), 7.35 ( M , 3H), 5.53 ( S , 1H), 4.80 ( D , J=3.9, 1H), 4.29 ( DD , J=9.6, 4.2, 1H), 3.93 ( TD , J=9.3, 1.6, 1H), 3.69 ( M , 2H), 3.63 ( TD , J=9.2, 3.9, 1H), 3.46 ( S , 3H), 2.34 ( D , J=9.4, 1H). La loi de karplus: En mesurant le couplage 3J des protons anomériques H1 il est possible de déterminer la configuration alpha ou beta de la liaison. La valeur de ce couplage dépend de l’angle dièdre formé entre les H1 et H2 éloignées de 3 liaisons. En effet, sur la RMN, l’anomère alpha a pour constante de couplage comprise entre 8 et 10 hertz alors que l’anomère beta la valeur de la costante de couplage est inférieure à 4 hertz.

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S YNTHÈSE

DE

2,3,4,6 - TETRA - O - ACETYL - D - GLUCOSE

L’acide acétique (sec) (5,6 mmol) est ajouté à une solution d’éthylènediamine (4,8 mmol) dans du THF (100 ml) sous atmosphère d’azote et à température ambiante. Une suspension blanche est observée. Le D-glucose penta-acétate (4 mmol) est ensuite introduit et la solution est agitée à température ambiante pendant 20h. Puis une CCM est réalisée. Dans un ballon à décanter de l’eau (40 ml) est ajoutée au mélange, puis la solution est extraite avec de l’acétate d’éthyle (3*30 ml), la phase organique est lavée avec du HCl (2M), une solution aqueuse saturée de NaHCO 3 puis de l’eau. La solution est séchée avec MgSO4 et filtrée sur Büchner puis évaporée. On obtient une très faible quantité de produit Rapports frontaux (Ether de pétrol/ Acétate d’éthyle: 3/1): Réactif: 0,16—Produit: 0,05. Remarque: Le réactif a migré plus que le produit car il est moins polaire.

Annexe: liste des abréviations utilisées
ATPS: acide para-toluene sulfonique MgSO4: sulfate de magnésium Ac: Acétal NaHCO 3: bicarbonate de sodium DMF:diméthylformamide THF: ttrahydrofurane AcOH: acide acétique