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HUMAN TENOCYTES ARE STIMULATED TO PROLIFERATE BY ACETYLCHOLINE THROUGH AN EGFR SIGNALLING PATHWAY

1. 2. 3. 4. 5. G Fong⇓, L J Backman, G Andersson, A Scott, P Danielson

Abstracto
Introducción Los estudios sobre la rótula y los tendones de Aquiles humano han demostrado que las células del tendón no sólo tienen la capacidad de producir la acetilcolina (ACh), sino también expresar los receptores muscarínicos de ACh (mAChRs), de subtipo M2 (M 2 R), y que tanto la producción y el receptor expresión parece estar aumentado en tendinosis.Hipercelularidad y la angiogénesis son características histopatológicas clave en el tejido tendinosis. En este estudio, el objetivo fue probar la hipótesis de que la ACh aumenta la tasa de proliferación de tenocitos través de mAChR estimulación, así como investigar si este mecanismo está mediado por la activación extracelular (fosforilación) del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR), que tiene han mostrado inducir la síntesis de ADN y la proliferación celular en otros tipos de células fibroblásticas, a través de una vía intracelular incluyendo la activación / fosforilación de la proteína activada por mitógeno quinasas ERK1 / 2. Métodos tenocitos Aquiles humano se sembraron en placas de cultivo de células y se incubaron en condiciones privadas de suero. Las células fueron pre-tratados con el inhibidor de EGFR AG1478, la metaloproteinasas de matriz (MMP) GM6001 inhibidor o antagonista mAChR atropina. Después las células se estimularon con ACh (10 -6 M) o el vehículo. Para determinar los niveles de fosfato ERK1 / 2 y fosfo-EGFR, se realizó un análisis de transferencia Western. 5-bromo-2'-desoxi-uridina (BrdU) y la tinción de cristal violeta se utilizaron para evaluar la proliferación celular y la viabilidad celular, respectivamente. Resultados Las células de los tendones humanos primarios en cultivo expresado enzimas relacionadas con la síntesis de ACh (colina acetiltransferasa y transportador vesicular de acetilcolina), junto con vimentina y tenomodulin, que confirman el fenotipo tenocitos. Las células también expresaron la M 2 R. Mediante la administración exógena de ACh, los tenocitos fueron estimuladas a proliferar de manera significativa y aumento de la viabilidad.Además, Western blot mostró que la ACh estimulación resultó en aumento de la fosforilación de EGFR y ERK1 / 2. Cuando las células se expusieron a la atropina, o la sustancia de EGFR-bloqueo, el efecto proliferativo de ACh disminuyó. Al mismo tiempo, el aumento de ERK1 / 2 fosforilación inducida por incubación con ACh fue bloqueada de manera efectiva en la presencia del antagonista de la atropina mAChR. La inhibición de EGFR o MMP con los bloqueadores específicos reduce la fosforilación de ERK1 / 2. Discusión Sobre la base de los resultados del presente estudio, así como de los estudios previamente establecidos, proponemos que tenocitos humanos, con su capacidad innata para producir acetilcolina, aumentan la producción de ACh durante el desarrollo de la tendinosis. A través de un bucle autocrino, la ACh producido por tenocitos estimula mAChRs en la superficie de la célula, activando de esta manera las MMP para escindir un ligando de EGFR asociada a la superficie

pero en la etapa crónica proliferación tenocitos excesiva podría ser perjudicial para la estructura y la función del tendón. un posible objetivo para el futuro de modulación de estos procesos en la tendinosis. pues. El sistema colinérgico no neuronal del tejido del tendón es. En una etapa temprana de la tendinosis. El ligando se une a EGFR que a su vez aumenta después de la activación de ERK1 / 2 fosforilación.celular. . Ver una versión más grande:   En una nueva ventana Descargar como diapositivas de PowerPoint Figura 1. Esquema de las vías celulares propuestos implicados en la proliferación inducida por ACh de las células del tendón humanos. hipercelularidad podría ser una parte de una curación o respuesta adaptativa. ACh estimula unidas a la membrana receptores ACh muscarínicos (mAChRs) que a su vez activan las metaloproteinasas de matriz (MMP) para escindir un ligando EGFR asociada a la superficie celular. lo que lleva a un aumento de la proliferación celular y la hipercelularidad como se ve en la tendinosis (figura 1 ). El ligando se une a EGFR que a su vez aumenta la proliferación celular a través de la fosforilación de la proteína activada por mitógeno quinasas ERK1 / 2.

12 semanas.4 meses antes del tratamiento. Los pacientes tenían síntomas durante un promedio de 34. Hayedeh Behzad Br J Sports Med 2013. se inyecta bajo la guía del ultrasonido en las zonas tendinopathic. Resultados 99 tendones fueron tratados con edad promedio 48. La tendinopatía es un estado de engrosamiento del tendón y el dolor crónico.1136/bjsports-2013-092459. la tendinosis tendón de la corva proximal (22). y la liberación de sustancias que influyen sustancialmente el comportamiento tenocitos que podrían tener relevancia para mejorar los resultados después de una lesión o uso excesivo.INFLAMMATORY MECHANISMS INVOLVED IN TENDON OVERUSE: RECENT INSIGHTS   Alex Scott. el trabajo previo ha encontrado que mastocitos están presentes en mayor número en el tendón crónicamente en exceso. Una disminución en la VAS de 20 se consideró una mejora clínicamente significativa. destinadas a estimular la curación de tendones degenerativas. la inhibición de mastocitos resulta en una reducción de TGF-beta-genes relacionados (relacionado con la cicatrización) y reduce la cantidad de engrosamiento del tendón después de una lesión. la tendinosis patelar (10). Es posible que una estrategia clínica que incorpora inhibidores de mastocitos podría mejorar en los resultados con el tratamiento estándar.5 años (rango 19-82). el masaje. formando elaborados uniones intercelulares. Trabajos recientes han demostrado que la carga repetitiva de las células del tendón humanos derivados conduce a la regulación positiva de TAC1. tanto SP y uno de sus principales objetivos-la mastocitos están excesivamente representados en el tejido tendinopathic. J Drezner. 3 y que desgranulan en respuesta a la SP.31 Introducción generadores de la etiología. han mostrado una promesa. A Rao Br J Sports Med 2013. Todos los tendones fueron evaluados mediante ecografía musculoesquelética y los pacientes recibieron tratamiento con AB. la acupuntura y / o quiropráctica. inyecciones de corticosteroides. fasciosis plantar (9) y otros tendinopatías (30). rico en leucocitos PRP (LR-PRP). Por ejemplo.47:e2 doi:10. Las terapias biológicas. Métodos El propósito de este estudio fue investigar prospectivamente el efecto clínico del tratamiento con AB o PRP inyección en pacientes con tendinopatía crónica. 2 Además. las puntuaciones de resultado validadas específicas del sitio. Los pacientes mayores de 18 años eran elegibles para el estudio si tenían más de 3 meses de los síntomas y habían fracasado el tratamiento conservador típico como la terapia física. Así. Los mastocitos tienen una alta afinidad por tenocitos humanos. 44% eran mujeres y 56% hombres.1136/bjsports-2013-092459.47:e2 doi:10. 6 meses y un año. y dolor en la tendinopatía crónica aún no se han dilucidado. la tendinosis de Aquiles (11). o PRP-leucocitos pobres (LP-PRP). por lo general como resultado de uso excesivo. como sangre autóloga (AB) y plasma rico en plaquetas (PRP) inyecciones. 4 Además.10 Esta presentación sintetizar y revisar los resultados recientes de nuestro laboratorio y otros "en los mecanismos inflamatorios implicados en las lesiones por uso excesivo del tendón. Los pacientes fueron seguidos utilizando escalas de dolor analógica visual (EAV). y una escala de Likert de post-tratamiento a las 6 semanas. la liberación de sustancias que influyen directamente en la remodelación del colágeno tenocitos humano. patogenia. el ARNm que codifica para la sustancia P 1 -un neuropéptido pro-inflamatoria que se sabe que contribuyen al dolor del tendón. .Likert puntuaciones posteriores al tratamiento de gran parte o completamente resuelto también se consideraron clínicamente significativos. 5 PLATELET RICH PLASMA FOR CHRONIC TENDINOPATHY    K Harmon. Las condiciones tratadas incluyen epicondilosis lateral (17). pero la investigación clínica es limitada. los mastocitos inducen un gran aumento de la COX-2 expresión por tenocitos humanos.

6 semanas antes del tratamiento y la media de seguimiento fue de 39. Métodos tenocitos humanos primarios fueron aisladas de los tendones isquiotibiales de donantes sanos.2. sin embargo. aunque sólo el 40% mejoró al menos 20 puntos en EVA. Para LP-PRP la duración media de los síntomas fue de 37. el aumento del número de mastocitos se han detectado en las muestras de la tendinopatía rotuliana humanos. Microscopía de luz y electrónica se utilizaron para examinar una asociación física entre las células cebadas (HMC-1) y tenocitos. 10 tenían AB. De los pacientes que mejoraron. . A Scott Br J Sports Med 2013. Los mecanismos moleculares que subyacen en el desarrollo de la tendinitis son poco conocidos. Disminución promedio en la EVA fue de 15. 54% de los pacientes LR-PRP se calificaron como su mayor parte o completamente mejorado.45 Introducción La tendinopatía. Deberían llevarse a cabo más estudios que comparen estos tratamientos entre sí. la duración media de los síntomas fue de 12. La inmunotinción para el factor de células madre (SCF). mostró que la expresión homogénea de esta proteína en la superficie de tenocitos. Conclusión Las terapias biológicas tales como AB y PRP inyección fueron moderadamente eficaces para el tratamiento de la tendinopatía recalcitrante.4 semanas. En otros experimentos. un factor de crecimiento de mastocitos. Para LR-PRP la duración media de los síntomas fue de 35. Para la inyección AB. 50% de los pacientes LP-PRP se calificaron como su mayor parte o completamente mejorado.1. afecta negativamente a millones de personas en los entornos deportivos y ocupacionales en todo el mundo.47:e2 doi:10.3 semanas. El presente estudio se llevó a cabo para determinar los efectos de los mastocitos en fibroblastos aislados de tendones humanos (tenocitos) y explorar un posible papel de los mastocitos en el desarrollo de la tendinopatía.1136/bjsports-2013-092459. pero para aquellos que mejoró.De los pacientes con al menos 12 semanas de seguimiento. La disminución media de VAS fue de 25 y para los que mejoró fue 29. 60% de las personas con inyecciones AB consideraban su mayor parte o completamente mejorado. Además. Ensayo de contracción de gel de colágeno se utilizó para examinar los efectos de los mastocitos en tenocitos aislados. qPCR mostró un aumento en la expresión de SCF tenocitos mRNA en la presencia de mastocitos. La viabilidad celular y la proliferación se evaluó mediante el ensayo de MTS. la disminución media de la EVA fue de 23.8 meses y la media de seguimiento fue de 33. La expresión de genes se cuantificó por qPCR. EFFECTS OF MAST CELLS ON THE FUNCTION OF ISOLATED HUMAN TENOCYTES   H Behzad. una condición patológica causada por el uso excesivo del tendón. 70% de los pacientes ABI tenía alguna mejora. Los mastocitos son conocidos por aumentar la proliferación de fibroblastos y la producción de colágeno que conduce a la fibrosis en algunos tejidos. con otras opciones de tratamiento y el placebo para definir mejor su utilidad clínica e indicaciones en el tratamiento de la tendinitis crónica. in vitro. Resultados HMC-1 mastocitos se muestran mediante microscopía óptica y electrónica de unirse físicamente a tenocitos primarios a través de uniones adherentes. se observó una disminución de 30. y PRP parece ser más eficaz que el AB.9. La disminución media de VAS fue de 21.2 semanas.1.8. 77 LR-PRP y 12 inyecciones LP-PRP. 78% de los pacientes mejoraron en absoluto con el 62% que tiene por lo menos una disminución de 20 puntos en la EVA.3 meses y la media de seguimiento fue de 22. 92% de los pacientes mejoraron en absoluto con 83% la disminución de EVA de al menos 20.

Discusión Estos hallazgos sugieren que. lo que parece estar impulsado por el TGF-β1. Ensayo de MTS mostró un aumento mediada por mastocitos en la supervivencia y la proliferación tenocitos. o bien a través de la asociación física con tenocitos y / o liberación de mediadores. Otros estudios están en marcha para investigar los mecanismos moleculares de las interacciones célula-mástil tenocitos y si éstas podrían desempeñar un papel en la patogénesis de la tendinopatía. los mastocitos podrían jugar un papel en la regulación y activación de tenocitos.tanto en las células cebadas y sonicados mastocitos. . se mostró a inducir tenocitos mediada por la contracción del gel de colágeno.