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El efecto doppler

El efecto Doppler establece el cambio de frecuencia de un sonido de acuerdo al movimiento relativo entre la fuente del sonido y el observador. Este movimiento puede ser de la fuente, del observador o de los dos. Diramos que el efecto Doppler asume la frecuencia de la fuente como una constante pero lo escuchado depende de las velocidades de la fuente y del observador.

Espectrometra
La espectroscopia surgi con el estudio de la interaccin entre la radiacin y la materia como funcin de la longitud de onda (). En un principio se refera al uso de la luz visible dispersada segn su longitud de onda, por ejemplo por un prisma. Ms tarde el concepto se ampli enormemente para comprender cualquier medida en funcin de la longitud de onda o de la frecuencia. Por tanto, la espectroscopia puede referirse a interacciones con partculas de radiacin o a una respuesta a un Dispersin de luz en un prisma triangular campo alternante o frecuencia variante (). Una extensin adicional del alcance de la definicin aadi la energa (E) como variable, al establecerse la relacin E=h para los fotones. Un grfico de la respuesta como funcin de la longitud de onda (o ms comnmente la frecuencia) se conoce como espectro. La espectrometra es la tcnica espectroscpica para tasar la concentracin o la cantidad de especies determinadas. En estos casos, el instrumento que realiza tales medidas es un espectrmetro o espectrgrafo. La espectrometra a menudo se usa en fsica y qumica analtica para la identificacin de sustancias mediante el espectro emitido o absorbido por las mismas. La espectrometra tambin se usa mucho en astronoma y deteccin remota. La mayora de los telescopios grandes tienen espectrmetros, que son usados para medir la composicin qumica y propiedades fsicas de los objetos astronmicos, o para medir sus velocidades a partir del efecto Doppler de sus lneas espectrales.

Mtodos espectromtricos

Segn la naturaleza de la excitacin medida

El tipo de espectrometra depende de la cantidad fsica medida. Normalmente, la cantidad que se mide es una intensidad de energa absorbida o producida. Se pueden distinguir estos tipos de espectrometra segn la naturaleza de la excitacin: * Electromagntica. Interacciones de la materia con radiacin electromagntica como la luz. * De electrones. Interacciones con haces de electrones. La espectroscopia Auger implica inducir el efecto Auger con un haz de electrones. En este caso la medida implica la energa cintica del electrn como variable. * De masa. Interaccin de especies cargadas con campos magnticos y/o elctricos, dando lugar a un espectro de masas. El trmino "espectroscopia de masas" est anticuado, ya que la tcnica es principalmente una forma de medida, aunque produzca realmente un espectro para la observacin. Este espectro tiene la masa (m) como variable, pero la medida es esencialmente de la energa cintica de la partcula. * Acstica. Frecuencia de sonido. * Dielctrica. Frecuencia de un campo elctrico externo. * Mecnica. Frecuencia de un estrs mecnico externo, por ejemplo una torsin aplicada a un trozo de material.
Segn el proceso de medida

La mayora de los mtodos espectroscpicos se diferencian en atmicos o moleculares segn si se aplican a tomos o molculas. Junto con esta diferencia, se pueden distinguir los siguientes tipos de espectrometra segn la naturaleza de su interaccin: * De absorcin. Usa el rango de los espectros electromagnticos en los cuales una sustancia absorbe. Incluye la espectrometra de absorcin atmica y varias tcnicas moleculares, como la espectrometra infrarroja y la resonancia magntica nuclear (RMN). * De emisin. Usa el rango de espectros electromagnticos en los cuales una sustancia irradia (emite). La sustancia primero debe absorber la energa. Esta energa puede ser de una variedad de fuentes, que determina el nombre de la emisin subsiguiente, como la luminiscencia. Las tcnicas de luminiscencia moleculares incluyen la espectrofluorimetra. * De dispersin. Mide la cantidad de luz que una sustancia dispersa en ciertas longitudes de onda, ngulos de incidencia y ngulos de polarizacin. El proceso de dispersin es mucho ms rpido

que el proceso de absorcin/emisin. Una de las aplicaciones ms tiles es la espectroscopia Raman.

Tipos de espectrometra
ESPECTROMETRA DE ABSORCIN

La espectrometra de absorcin es una tcnica en la cual la energa de un haz de luz se mide antes y despus de la interaccin con una muestra. Cuando se realiza con lser de diodo ajustable, se la conoce como espectroscopia de absorcin con lser de diodo ajustable. Tambin se combina a menudo con una tcnica de modulacin, como la espectrometra de modulacin de longitud de onda, y de vez en cuando con la espectrometra de modulacin de frecuencia a fin de reducir el ruido en el sistema.
ESPECTROMETRA DE FLUORESCENCIA

La espectrometra de fluorescencia usa fotones de energa ms elevada para excitar una muestra, que emitir entonces fotones de inferior energa. Esta tcnica se ha hecho popular en aplicaciones bioqumicas y mdicas, y puede ser usada con microscopa confocal, transferencia de energa entre partculas fluorescentes, y visualizacin de la vida media de fluorescencia.
ESPECTROMETRA DE RAYOS X

Cuando los rayos X con suficiente frecuencia (energa) interaccionan con una sustancia, los electrones de las capas interiores del tomo se excitan a orbitales vacos externos, o bien son eliminados completamente, ionizndose el tomo. El "agujero" de la capa interior se llena entonces con electrones de los orbitales externos. La energa disponible en este proceso de excitacin se emite como radiacin (fluorescencia) o quitar otros electrones menos enlazados del tomo (efecto Auger). La absorcin o frecuencias de emisin (energas) son caractersticas de cada tomo especfico. Adems, para un tomo especfico se producen pequeas variaciones de frecuencia (energa) que son caractersticas del enlace qumico. Con un aparato apropiado pueden medirse estas frecuencias de rayos X caractersticas o energas de electrones Auger. La absorcin de rayos X y la espectroscopia de emisin se usan en qumica y ciencias de los materiales para determinar la composicin elemental y el enlace qumico. La cristalografa de rayos X es un proceso de dispersin. Los materiales cristalinos dispersan rayos X en ngulos bien definidos. Si la longitud de onda de los rayos X incidentes es conocida, se pueden calcular las distancias entre planos de tomos dentro del cristal. Las intensidades de los rayos X dispersados dan informacin sobre las posiciones atmicas y permiten calcular la organizacin de los tomos dentro de la estructura cristalina.

ESPECTROMETRA DE LLAMA

Las muestras de solucin lquidas son aspiradas en un quemador o una combinacin de nebulizador/quemador, desolvatadas, atomizadas, y a veces excitadas a un estado electrnico de energa ms alta. El uso de una llama durante el anlisis requiere combustible y oxidante, tpicamente en forma de gases. Los gases combustibles comunes que se usan son el acetileno (etino) o el hidrgeno. Los gases de oxidante suelen ser el oxgeno, el aire, o el xido nitroso. Estos mtodos son a menudo capaces de analizar elementos metlicos en partes por milln, billones, o posiblemente rangos ms bajos de concentracin. Son necesarios detectores de luz para detectar la luz con informacin que viene de la llama. * Espectrometra de emisin atmica. Este mtodo usa la excitacin de la llama; los tomos son excitados por el calor de la llama para emitir luz. Este mtodo suele usar un quemador de consumo total con una salida de incineracin redonda. Se utiliza una llama de temperatura ms alta que la usada en la espectrometra de absorcin atmica para producir la excitacin de tomos de analito. Ya que los tomos de analito estn excitados por el calor de la llama, no es necesaria ninguna lmpara elemental especial. Puede usarse un policromador de alta resolucin para producir una intensidad de emisin contra el espectro de longitud de onda por encima de un rango de longitudes de onda que muestran lneas de excitacin de elementos mltiples. O bien puede usarse un monocromador en una longitud de onda determinada para concentrarse en el anlisis de un solo elemento en una cierta lnea de emisin. La espectrometra de emisin de plasma es una versin ms moderna de este mtodo. * Espectrometra de absorcin atmica (a menudo llamada AA). Este mtodo usa un nebulizador pre-quemador (o cmara de nebulizacin) para crear una niebla de la muestra, y un quemador en forma de ranura que da una llama de longitud de ruta ms larga. La temperatura de la llama es lo bastante baja como para no excitar los tomos de la muestra de su estado basal. El nebulizador y la llama se usan para desolvatar y atomizar la muestra, pero la excitacin de los tomos de analito se realiza mediante lmparas que brillan a travs de la llama en varias longitudes de onda para cada tipo de analito. En la absorcin atmica, la cantidad de luz absorbida despus de pasar por la llama determina la cantidad de analito en la muestra. Suele usarse un horno de grafito para calentar, desolvatar y atomizar la muestra con el fin de obtener una mayor sensibilidad. El mtodo del horno de grafito tambin puede analizar algn slido o muestras mezcladas. A causa de su buena sensibilidad y selectividad, es un mtodo que todava se usa para el anlisis de ciertos microelementos en muestras acuosas (y otros lquidos). * Espectrometra de fluorescencia atmica. Este mtodo usa un quemador con una salida de incineracin redonda. La llama se usa para solvatar y atomizar la muestra, y una lmpara emite luz a una longitud de onda especfica en la llama para excitar los tomos de analito. Los tomos de ciertos elementos pueden entonces fluorescer, emitiendo luz en diferentes direcciones. La intensidad de esta luz fluorescente sirve para cuantificar la cantidad del elemento analizado en la

muestra. Tambin puede usarse un horno de grafito para la espectrometra de fluorescencia atmica. Este mtodo no es tan comn como el de absorcin atmica o el de emisin de plasma.
ESPECTROMETRA DE EMISIN DE PLASMA

Es

similar

la

emisin

atmica

por

llama,

la

ha

sustituido

en

gran

parte.

* Espectrometra de plasma de corriente contnua (DCP). Un plasma de corriente contnua se crea por una descarga elctrica entre dos electrodos. Es necesario un gas de apoyo al plasma, y el ms comn es el argn. Las muestras pueden ser depositadas en uno de los electrodos. * * Espectrometra Espectrometra de de emisin emisin ptica por descarga acoplada luminiscente inductivamente (GD-OES) (ICP-AES)

plasma-atmica

* Espectrometra de ruptura inducida por lser (LIBS), tambin llamada espectrometra de plasma inducida por lser (LABIOS) * Espectrometra de plasma inducida por microondas(MIP)
ESPECTROMETRA DE CHISPA O ARCO

Se usa para el anlisis de elementos metlicos en muestras slidas. Para materiales no conductores, se usa polvo de grafito para hacer conductora la muestra. En los mtodos de espectroscopia de arco tradicionales se usa una muestra slida que es destruida durante el anlisis. Un arco elctrico o chispa se pasan por la muestra, calentndola a alta temperatura para excitar los tomos. Los tomos de analito excitado emiten luz en varias longitudes de onda que pueden ser detectadas mediante mtodos espectroscpicos comunes. Ya que las condiciones que producen la emisin por arco no son controladas cuantitativamente, el anlisis de los elementos es cualitativo. Hoy da, las fuentes de chispa con descargas controladas bajo una atmsfera de argn permiten que este mtodo pueda ser considerado eminentemente cuantitativo, y su uso est muy extendido en los laboratorios de control de produccin de fundiciones y aceras.
ESPECTROMETRA VISIBLE

Muchos tomos emiten o absorben la luz visible. A fin de obtener un espectro lineal fino, los tomos deben estar en fase gaseosa. Esto significa que la sustancia tiene que ser vaporizada. El espectro se estudia en absorcin o emisin. La espectroscopia de absorcin visible a menudo se combina con la de absorcin ultravioleta (espectroscopia UV/Vis). Aunque esta forma pueda ser poco comn al ser el ojo humano un indicador similar, todava se muestra til para distinguir colores.

ESPECTROMETRA ULTRAVIOLETA

Todos los tomos absorben en la regin ultravioleta (UV) ya que estos fotones son bastante energticos para excitar a los electrones externos. Si la frecuencia es lo bastante alta, se produce la fotoionizacin. La espectrometra UV tambin se usa para la cuantificacin de protenas y concentracin de ADN, as como para la proporcin de protenas y ADN en una solucin. En las protenas se encuentran generalmente varios aminocidos, como el triptfano, que absorben la luz en el rando de 280nm. El ADN absorbe la luz en el rango de 260nm. Por esta razn, la proporcin de absorbancia 260/280nm es un buen indicador general de la pureza relativa de una solucin en trminos de estas dos macromolculas. Tambin pueden hacerse estimaciones razonables de la concentracin de ADN o protenas aplicando la ley de Beer.
ESPECTROMETRA INFRARROJA

La espectrometra infrarroja ofrece la posibilidad de medir tipos diferentes de vibraciones en los enlaces atmicos a frecuencias diferentes. En qumica orgnica, el anlisis de los espectros de absorcin infrarroja indica qu tipo de enlaces estn presentes en la muestra.
ESPECTROMETRA RAMAN

La espectrometra Raman usa la dispersin inelstica de la luz para analizar modos vibracionales y rotatorios de las molculas. Las "huellas digitales" que resultan son una ayuda para el anlisis.
ESPECTROMETRA DE RESONANCIA MAGNTICA NUCLEAR (RMN)

La espectrometra de resonancia magntica nuclear analiza las propiedades magnticas de ciertos ncleos atmicos para determinar diferentes ambientes locales electrnicos del hidrgeno, carbono, u otros tomos en un compuesto orgnico u otro compuesto. Se usa para determinar la estructura del compuesto.
ESPECTROMETRA DE FOTOEMISIN

La fotoemisin puede referirse a: * Emisin de electrones a partir de la materia despus de la absorcin de fotones energticos (efecto fotoelctrico). * Emisin de fotones a partir de los semiconductores y metales cuando los electrones que fluyen en el material pierden energa mediante deceleracin o recombinacin.
ESPECTROMETRA MSSBAUER

La espectrometra de transmisin o conversin electrnica (CEMS) de Mssbauer prueba las propiedades de los ncleos de istopos especficos en ambientes atmicos diferentes, analizando

la absorcin resonante de rayos gamma de energa caracterstica, lo que se conoce como efecto de Mssbauer.
OTROS TIPOS DE ESPECTROMETRA

* Fotoacstica. Mide las ondas sonoras producidas por la absorcin de radiacin. * Fototermal. Mide el calor desarrollado por la absorcin de radiacin. * De dicroismo circular. * De actividad ptica Raman. Usa los efectos de la actividad ptica y la dispersin para revelar informacin detallada sobre los centros quirales de las molculas. * De terahertzios. Usa longitudes de onda por encima de la espectrometra infrarroja y por debajo de las microondas o medidas de onda milimtricas. * De dispersin inelstica de neutrones, como la espectroscopia Raman pero con neutrones en vez de fotones. * De tnel de electrones inelsticos. Usa los cambios de corriente debidos a la interaccin de vibraciones electrnicas inelsticas a energas especficas que tambin pueden medir transiciones pticamente prohibidas. * Auger. Se usa para estudiar superficies de materiales a microescala. A menudo se usa en relacin con la microscopa de electrones. * De cavidad en anillo. * De transformacin de Fourier. La transformacin Fourier es un mtodo eficiente para tratar datos de espectros obtenidos usando interfermetros. Casi toda la espectrometra infrarroja (FTIR) y la resonancia magntica nuclear (RMN) se realizan con la transformacin de Fourier. * De tiempo resuelto. Se usa en situaciones donde las propiedades cambian con el tiempo. * Mecnica. Implica interacciones con vibraciones macroscpicas, como los fotones. Un ejemplo es la espectrometra acstica, que implica ondas sonoras. * De fuerza. Usa una tcnica analtica basada en AFM. * Dielctrica. * Infrarroja termal. Mide la radiacin termal emitida por materiales y superficies, y se usa para determinar el tipo de enlaces presentes en una muestra, as como su ambiente reticular. Estas tcnicas son muy usadas por los qumicos orgnicos, mineralogistas y gelogos.

Espectrmetros
Un espectrmetro (tambin llamado espectroscopio o espectrgrafo) es un instrumento ptico que se usa para medir las propiedades de la luz sobre una porcin especfica del espectro electromagntico. Su utilidad es realizar anlisis espectroscpicos para identificar materiales. La variable medida es generalmente la intensidad de la luz, pero tambin podra ser, por ejemplo, el estado de polarizacin. La variable independiente es, por lo general, la longitud de onda de la luz, que suele expresarse como una fraccin de metro, aunque a veces se expresa como una unidad directamente proporcional a la energa del fotn, tales como el nmero de onda o los voltios de los electrones (que tiene una relacin recproca a la longitud

Espectrmetro

de

onda).

Un espectrmetro se usa en espectroscopia para producir lneas espectrales y medir sus longitudes de onda e intensidades. Son instrumentos que funcionan en una amplia variedad de longitudes de onda, desde rayos gamma y rayos X hasta el infrarrojo lejano. Si la regin de inters est restringida a un rango cercano al espectro visible, el estudio se llama espectrofotometra. En general, cada espectrmetro funcionar sobre una pequea porcin de este rango total debido a las diferentes tcnicas usadas para medir las distintas porciones del espectro. Por debajo de las frecuencias pticas (es decir, en el rango de las microondas y radiofrecuencias), el analizador de espectro es un dispositivo electrnico estrechamente relacionado.

Espectroscopios

Los espectroscopios se usan a menudo en astronoma y en algunas ramas de la qumica. Los primeros aparatos de este tipo eran simplemente un prisma con graduaciones que marcaban las longitudes de onda de la luz. Los espectroscopios modernos, como los monocromadores, generalmente usan una rejilla de difraccin, una hendidura mvil y una especie de fotodetector, adems de estar automatizados y controlados por un ordenador. El espectroscopio fue inventado por Gustav Robert Georg Kirchhoff y por Robert Wilhelm Bunsen. Cuando un material se calienta hasta la incandescencia emite una luz que es caracterstica de la composicin atmica del material. Las frecuencias de luz particulares dan lugar a bandas bruscamente definidas en la escala, que son similares a huellas digitales. Por ejemplo, el elemento sodio tiene una doble banda amarilla muy caracterstica, conocida como lneas D del sodio a 588.9950 y 589.5924 nanmetros, cuyo color ser familiar a quien haya visto una lmpara de vapor de sodio de baja presin.

Comparacin de diferentes espectrmetros basados en la difraccin: reflexin ptica, refraccin ptica y fibra ptica.

En el diseo del espectroscopio original, a principios del siglo XIX, la luz entraba en una hendidura y una lente colimadora transformaba la luz en un haz delgado de rayos paralelos. La luz pasaba entonces por un prisma (en espectroscopios porttiles, por lo general un prisma Amici) que refractaba el haz de luz en un espectro, debido a que las diferentes longitudes de onda eran refractadas en cantidades diferentes por la dispersin. Esta imagen se vea entonces a travs de un tubo con una escala que se transpona sobre la imagen espectral, permitiendo su medida directa. Con el desarrollo de la pelcula fotogrfica, se cre el espectrgrafo, que era ms exacto. Estaba basado en el mismo principio que el espectroscopio, pero tena una cmara en lugar del tubo de inspeccin. En aos recientes, la cmara ha sido sustituida por circuitos electrnicos construidos alrededor del tubo fotomultiplicador, permitiendo el anlisis espectrogrfico en tiempo real con mucha ms exactitud. En los sistemas espectrogrficos tambin se usan series de fotosensores en lugar de la pelcula. Tal anlisis espectral, o espectroscopia, se ha convertido en un importante instrumento cientfico para analizar la composicin de material desconocido, y para estudiar fenmenos y teoras astronmicas. El espectrmetro mide longitudes de onda.

Espectrgrafos

Un espectrgrafo es un instrumento que transforma una forma de onda de dominio temporal entrante en un espectro de frecuencia, o generalmente en una secuencia de tales espectros. Hay varias clases de mquinas a las que se llama espectrgrafos, segn la naturaleza precisa de las ondas. Los primeros espectrgrafos usaban papel fotogrfico como detector. La clasificacin espectral de estrellas y el Esquema de un espectrmetro de rejilla descubrimiento de la secuencia principal, la ley de Hubble y la secuencia de Hubble, se hicieron con espectrgrafos que usaban papel fotogrfico. El pigmento vegetal fitocromo fue descubierto con un espectrgrafo que usaba plantas vivas como detectores. Los espectrgrafos ms recientes usan detectores electrnicos, como cmaras CCDs que pueden usarse tanto para luz visible como para luz ultravioleta. La eleccin exacta del detector depende de las longitudes de onda de la luz que va a ser registrada. El prximo Telescopio Espacial de James Webb contendr un espectrgrafo cercano al infrarrojo (NIRSpec) y un espectrmetro en mitad del infrarrojo (MIRI). Un espectrgrafo de escala usa dos rejillas de difraccin, giradas 90 grados una respecto a la otra y colocadas cerca. Por lo tanto, se usa un punto de entrada y no una hendidura, mientras que un segundo chip CCD registra el espectro. Con este pequeo chip se consigue un espectro muy fino, y tiene como ventaja que la ptica colimadora no tiene que ser optimizada para coma o astigmatismo, ya que la aberracin esfrica puede ser establecida a cero. A veces al espectrgrafo se le llama policromador, como analoga de monocromador

Espectrometra de emisin
La espectrometra de emisin es una tcnica espectroscpica que analiza las longitudes de onda de los fotones emitidos por los tomos o molculas durante su transicin desde un estado excitado a un estado de inferior energa. Cada elemento emite un conjunto caracterstico de longitudes de onda discretas en funcin de su estructura electrnica. Mediante la observacin de estas longitudes de onda puede determinarse la composicin elemental de la muestra. La

espectrometra de emisin se desarroll a finales del siglo 19, y los esfuerzos tericos para explicar los espectros de emisin atmica condujeron a la mecnica cuntica. Hay muchas maneras en que los tomos pueden ser llevados a un estado excitado. El mtodo ms simple es calentar la muestra a una temperatura alta, producindose las excitaciones debido a las colisiones entre tomos de la muestra. Este mtodo se utiliza en la espectrometra de emisin de llama, y fue tambin el mtodo utilizado por Anders Jonas ngstrm cuando descubri el fenmeno de las lneas de emisin discretas en 1850. A pesar de que las lneas de emisin estn causadas por una transicin entre estados energticos cuantizados, y pueden ser muy agudas a primera vista, tienen una anchura finita; es decir, se componen de ms de una longitud de onda de luz. Esta ampliacin de la lnea espectral tiene muchas causas diferentes. Las lneas de emisin en los gases calientes fueron descubiertas por ngstrm, y la tcnica fue desarrollada por David Alter, Gustav Kirchhoff y Robert Bunsen. La espectrometra de emisin suele llamarse a menudo espectrometra de emisin ptica, debido a la naturaleza de la luz que se emite.
TCNICA EXPERIMENTAL EN LA ESPECTROMETRA DE EMISIN POR LLAMA

La solucin que contiene la sustancia que va a ser analizada se conduce al quemador y se dispersa en la llama como un spray fino. El solvente se evapora en primer lugar, dejando partculas slidas finamente divididas que se desplazan a la regin ms caliente de la llama, donde se producen tomos e iones gaseosos. Los electrones son entonces excitados, tal como se describi ms arriba. Es comn usar un monocromador para permitir una deteccin fcil. En un nivel simple, la espectrometra de emisin por llama se puede observar utilizando slo un mechero Bunsen y muestras de metales. Por ejemplo, el metal sodio colocado en la llama se iluminar de amarillo, el metal calcio de rojo y el cobre crear una llama verde. Hay cuatro etapas principales durante la espectrometra de emisin por llama:

1. Evaporacin: La muestra que contiene partculas metlicas se deshidrata por el calor de la llama, y el disolvente se evapora. 2. Atomizacin: En esta etapa, los iones metlicos que se encontraban en el disolvente se reducen a tomos de metal. Por ejemplo, Mg2 + (aq) + 2e Mg (g). Los electrones en los tomos de metal absorben la energa del calor de la llama y pasan a niveles ms altos de energa. 3. Excitacin: Los electrones en estado basal de los tomos de metal son ahora capaces de

absorber la energa del calor de la llama. El cuanto (cantidad) de energa absorbido depende de las fuerzas electrostticas de atraccin entre los electrones con carga negativa y el ncleo de carga positiva. Esto, a su vez, depende del nmero de protones en el ncleo. Como los electrones absorben energa, se desplazan a niveles ms altos de la energa y pasan a estado excitado. 4. Emisin de radiacin: Los electrones en estado excitado son muy inestables y se mueven hacia un estado basal con bastante rapidez. Cuando lo hacen, emiten la energa que absorbieron. Para algunos metales, esta radiacin corresponde a longitudes de onda de luz en la regin visible del espectro electromagntico, y se observan como un color caracterstico del metal. Como los electrones de diferentes niveles de energa son capaces de absorber luz, el color de la llama ser una mezcla de todas las diferentes longitudes de onda emitidas por los distintos electrones en el tomo de metal que se investiga.

Espectrometra de absorcin atmica


En qumica analtica, la espectrometra de absorcin atmica es una tcnica para determinar la concentracin de un elemento metlico determinado en una muestra. Puede utilizarse para analizar la concentracin de ms de 62 metales diferentes en una solucin. Aunque la espectrometra de absorcin atmica data del siglo XIX, la forma moderna fue desarrollada en gran medida durante la dcada de los 50 por un equipo de qumicos de Australia, dirigidos por Alan Walsh.
PRINCIPIOS EN LOS QUE SE BASA

La tcnica hace uso de la espectrometra de absorcin para evaluar la concentracin de un analito en una muestra. Se basa en gran medida en la ley de Beer-Lambert. En resumen, los electrones de los tomos en el atomizador pueden ser promovidos a orbitales ms altos por un instante mediante la absorcin de una cantidad de energa (es decir, luz de una determinada longitud de onda). Esta cantidad de energa (o longitud de onda) se refiere especficamente a una transicin de electrones en un elemento particular, y en general, cada longitud de onda corresponde a un solo elemento. Como la cantidad de energa que se pone en la llama es conocida, y la cantidad restante en el otro lado (el detector) se puede medir, es posible, a partir de la ley de Beer-Lambert, calcular cuntas de estas transiciones tienen lugar, y as obtener una seal que es proporcional a la concentracin del elemento que se mide.

INSTRUMENTOS

Para analizar los constituyentes atmicos de una muestra es necesario atomizarla. La muestra debe ser iluminada por la luz. Finalmente, la luz es transmitida y medida por un detector. Con el fin de reducir el efecto de emisin del atomizador (por ejemplo, la radiacin de cuerpo negro) o del ambiente, normalmente se usa un espectrmetro entre el atomizador y el detector. Tipos de atomizadores Para atomizar la muestra normalmente se usa una llama, pero tambin pueden usarse otros atomizadores como el horno de grafito o los plasmas, principalmente los plasmas de acoplamiento inductivo. Cuando se usa una llama, se dispone de tal modo que pase a lo largo lateralmente (10 cm) y no en profundidad. La altura de la llama sobre la cabeza del quemador se puede controlar mediante un ajuste del flujo de mezcla de combustible. Un haz de luz pasa a travs de esta llama en el lado ms largo del eje (el eje lateral) e impacta en un detector.

ESPECTRO ULTRAVIOLETA-VISIBLE

Un espectro ultravioleta-visible es esencialmente un grfico de absorbancia de luz frente a una longitud de onda en el rango del ultravioleta o la luz visible. Este espectro puede ser producido directamente con los espectrofotmetros ms sofisticados, o bien pueden registrarse los datos de una sola longitud de onda con los instrumentos ms simples. La longitud de onda se representa con el smbolo . Del mismo modo, para una determinada sustancia, puede hacerse un grfico estndar del coeficiente de extincin () frente a la longitud de onda (). Este grfico estndar sera efectivamente "la concentracin corregida" y, por tanto, independiente de la concentracin. Para una sustancia determinada, la longitud de onda en la cual se produce el mximo de absorbancia en el espectro se llama max, y se pronuncia "lambda-max". Las reglas de Woodward-Fieser son un conjunto de observaciones empricas que pueden utilizarse para predecir max, la longitud de onda de la absorcin UV-Vis, para compuestos orgnicos conjugados como dienos y cetonas. Las longitudes de onda de los picos de absorcin pueden correlacionarse con los tipos de enlace en una determinada molcula, y son valiosos para determinar los grupos funcionales dentro de la molcula. La absorcin UV-Vis no es, sin embargo, una prueba especfica para ningn compuesto determinado. La naturaleza del disolvente, el pH de la solucin, la temperatura, la concentracin de electrolitos, y la presencia de sustancias interferentes pueden influir en los espectros de absorcin de los compuestos, as como las variaciones en la anchura de la hendidura (ancho de banda efectivo) en el espectrofotmetro.

Espectrometra Raman
La espectrometra Raman es una tcnica espectroscpica utilizada en fsica de la materia condensada y tambin en qumica para el estudio de los modos vibracionales, rotacionales y otros de baja frecuencia en un sistema. Se basa en la dispersin inelstica, o dispersin Raman, de la luz monocromtica, que por lo general procede de un lser en el rango visible, infrarrojo cercano, o ultravioleta cercano. La luz lser interacta con fonones u otras excitaciones en el sistema, por lo que la energa de los fotones lser se desplaza hacia arriba o hacia abajo. Normalmente, la muestra se ilumina con un rayo lser. La luz del punto iluminado se recoge con una lente y se enva a travs de un monocromador. Las longitudes de onda cercanas a la lnea lser, debidas a la dispersin elstica de Rayleigh, son filtradas, mientras que el resto de la luz recogida se dispersa en un detector. La dispersin Raman espontnea es generalmente muy dbil, y como resultado la principal dificultad de la espectrometra Raman es separar la luz dbil dispersada inelsticamente de la luz intensa lser por dispersin de Rayleigh. Histricamente, los espectrmetros Raman utilizaban rejillas de difraccin hologrfica y mltiples etapas de dispersin para lograr un alto grado de rechazo lser. En el pasado, los detectores de eleccin para las configuraciones de dispersin Raman eran los fotomultiplicadores, lo que daba lugar a largos tiempos de adquisicin. Sin embargo, la instrumentacin moderna en casi todo el mundo emplea filtros de muesca o borde para rechazar el lser, as como espectrgrafos y detectores CCD. Hay diferentes tipos avanzados de espectrometra Raman, como la de superficie potenciada, la polarizada, la estimulada, la de transmisin, la compensada espacialmente y la hper-Raman.
TEORA BSICA

El efecto Raman se produce cuando la luz incide sobre una molcula e interacta con la nube de electrones de los tomos de esa molcula. El fotn incidente excita uno de los electrones a un estado virtual. La molcula se excita desde el estado basal a un estado de energa virtual, y se relaja a un estado vibracional excitado, lo que genera la dispersin de Raman Stokes. Si la molcula ya se encontraba en un estado elevado de energa vibracional, la dispersin Raman se llama entonces dispersin Raman anti-Stokes. Para que la molcula exhiba el efecto Raman es necesario un desplazamiento en la polarizabilidad molecular, o cantidad de deformacin de la nube de electrones con respecto a la coordenada vibracional. La cantidad del desplazamiento de polarizabilidad determinar la intensidad de la dispersin Raman, siempre que el desplazamiento Raman sea igual al nivel vibracional que est involucrado.

HISTORIA

Aunque la dispersin inelstica de la luz la predijo Smekal en 1923, no fue hasta 1928 cuando se observ en la prctica. El efecto Raman fue nombrado despus de que uno de sus descubridores, el cientfico indio Sir CV Raman, observara el efecto por medio de la luz del sol (en 1928, junto con KS Krishnan e independientemente de Grigory Landsberg y Leonid Mandelstam). Raman gan el Premio Nobel de Fsica en 1930 por este descubrimiento, realizado utilizando la luz del sol, un filtro fotogrfico de banda estrecha para crear luz monocromtica y un filtro "cruzado" para bloquear esta luz monocromtica. Posteriormente, el arco de mercurio se convirti en la principal fuente de luz, primero con deteccin fotogrfica y, a continuacin, con deteccin espectrofotomtrica. En la actualidad, se utilizan lseres como fuentes de luz.
APLICACIONES

La espectrometra Raman se utiliza comnmente en qumica, ya que la informacin vibracional es muy especfica para los enlaces qumicos de las molculas. Por lo tanto, proporciona una huella dactilar de la molcula que puede ser identificada. La regin de huella digital de las molculas orgnicas est en el rango de 500-2000 cm -1. Otra forma de uso de la tcnica es el estudio de cambios en las uniones qumicas, por ejemplo cuando un sustrato se aade a una enzima. Los analizadores de gases Raman tienen muchas aplicaciones prcticas. Por ejemplo, se usan en medicina para el seguimiento en tiempo real de las mezclas de gases respiratorios y la anestesia durante la ciruga. En fsica del estado slido, la espectrometra Raman espontnea se utiliza para, entre otras cosas, caracterizar los materiales, medir la temperatura, y encontrar la orientacin cristalogrfica de una muestra. Al igual que ocurre con molculas individuales, un material slido tiene modos de fonn caractersticos que pueden ayudar a identificarlo. Adems, la espectrometra Raman se puede utilizar para observar otras excitaciones de baja frecuencia en los slidos, como plasmones, magnones, y excitaciones de brecha en superconductores. La seal Raman espontnea proporciona informacin sobre la poblacin de un modo fonn determinado en el rango entre la intensidad Stokes (desplazada hacia abajo) y anti-Stokes (desplazada hacia arriba). La dispersin Raman mediante un cristal anisotrpico da informacin sobre la orientacin del cristal. La polarizacin de la luz de dispersin Raman en relacin con el cristal, y la polarizacin de la luz lser, pueden utilizarse para conocer la orientacin del cristal, siempre que la

estructura cristalina sea conocida. Las fibras activas Raman, como la aramida y el carbono, tienen modos vibracionales que muestran un cambio en la frecuencia Raman con estrs aplicado. Las fibras de polipropileno tambin exhiben cambios similares. El modo de respiracin radial es una tcnica de uso habitual para evaluar el dimetro de los nanotubos de carbono. La espectrometra Raman compensada espacialmente (SORS), que es menos sensible a las capas superficiales que la espectrometra Raman convencional, se puede utilizar para descubrir la falsificacin de medicamentos sin necesidad de abrir su embalaje interior, y para monitorizacin no invasiva de tejido biolgico. La espectrometra Raman se puede utilizar tambin para investigar la composicin qumica de documentos histricos, como el Libro de Kells, y contribuir al conocimiento de las condiciones sociales y econmicas en el momento en que los documentos fueron producidos. Esto es especialmente til porque la espectrometra Raman es una forma no invasiva que permite preservar este tipo de materiales.
MICROESPECTROMETRA RAMAN

La espectrometra Raman ofrece varias ventajas para el anlisis microscpico. Dado que se trata de una tcnica de dispersin, las muestras no necesitan ser fijadas o seccionadas. Los espectros Raman pueden ser obtenidos a partir de un volumen muy bajo (<1 m de dimetro); estos espectros permiten la identificacin de especies presentes en ese volumen. El agua no interfiere de manera apreciable. Por lo tanto, la espectroscopia Raman es adecuada para el examen microscpico de minerales, materiales como cermica y polmeros, y clulas y protenas. Un microscopio Raman consiste de un microscopio ptico estndar con un lser de excitacin, un monocromador y un detector sensible (como un dispositivo de carga acoplada (CCD), o un tubo fotomultiplicador (PMT)). En visualizacin directa, todo el campo de visin se examina por dispersin sobre una pequea gama de nmeros de onda (turnos Raman). Por ejemplo, un nmero de onda caracterstico para el colesterol podra ser utilizado para registrar la distribucin de colesterol en un cultivo celular. El otro enfoque es la visualizacin hiperespectral o las imgenes qumicas, en las que miles de espectros Raman son adquiridos por todo el campo de visin. Los datos pueden ser utilizados para generar imgenes que muestran la ubicacin y la cantidad de distintos componentes. Tomando el ejemplo del cultivo celular, una imagen hiperespectral podra mostrar la distribucin de colesterol, as como de protenas, cidos nucleicos y cidos grasos. Las tcnicas sofisticadas de procesamiento de imgenes y seales pueden utilizarse para ignorar la presencia de agua, los

medios de cultivo y otros interferentes. La microscopa Raman y, en particular, la microscopa confocal, disponen de una resolucin espacial muy alta. Por ejemplo, las resoluciones laterales y de profundidad son de 250 nm y 1,7 m, respectivamente, utilizando un microespectrmetro confocal Raman con la lnea de 632,8 nm de un lser de He-Ne con una abertura de 100 m de dimetro. Dado que las lentes objetivo de los microscopios enfocan el rayo lser a varios micrmetros de dimetro, el resultado del flujo de fotones es mucho mayor que los que se logran en las configuraciones Raman convencionales. Esto tiene el beneficio aadido de una mayor desactivacin de la fluorescencia. Sin embargo, el alto flujo de fotones tambin puede causar la degradacin de la muestra, y por esta razn algunas configuraciones requieren un sustrato que conduzca trmicamente (lo que acta como un disipador de calor) a fin de mitigar este proceso. Mediante el uso de la microespectrometra Raman, se pueden medir los espectros Raman, resueltos en vivo en el tiempo y el espacio, de regiones microscpicas de la muestra. Como resultado de esto, puede eliminarse la fluorescencia del agua, el medio y los intermediarios. En consecuencia, este tipo de espectrometra es apropiada para examinar protenas, clulas y rganos. Para muestras biolgicas y mdicas, la microscopa Raman generalmente utiliza lseres de infrarrojo cercano (diodos de 785 nm y 1064 nm). Esto reduce el riesgo de daar la muestra mediante la aplicacin de alta potencia. Sin embargo, la intensidad del Raman en infrarrojo cercano es baja (debido a la dependencia -4 de la intensidad de dispersin Raman), y la mayora de detectores requieren mucho tiempo de registro. En la actualidad se dispone de detectores ms sensibles, por lo que esta tcnica es apropiada para uso general. La microscopa Raman de muestras inorgnicas, tales como rocas, cermicas y polmeros, puede utilizar una gama ms amplia de longitudes de onda de excitacin.