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Cin. Agron.

, 13 (1/2): 77-82 Dezembro, 1982 - FrtaIeza-Cear

COMPARAO ENTRE DOIS MTODOS UTILIZADOS


CROMOSSOMOS DE RHOEO SPATHACEA

PARA MEDIR

MARIA DAS GRAAS LIMA DIAS** FANUEL PEREIRA DA SILVA** JOSE FERREIRA ALVES***

INTRODUO
o estudo dos cromossomosem plantas muito utilizado em pesquisas bsicas, como a Citotaxonomia, e em pesquisas aplicadas, especialmente na agricultura, ajudando a esclarecercasosde esterilidade de hbridos, isolamento reprodutivo e presena,em alguns vegetais, de caracteresassociados produo. S~gundo Stern (11), Rhoeo spathacea uma monocotilednea da famlia Commelinacea. Em alguns Estados do Nordeste brasileiro, ela comumente conhecida como Uru-de-Pobre(Braga3). O interesseem torno desta planta fundamenta-se nas observaesde pesquisadores como Billing (2) e Flagg(4) de que os 2n = 12 cromossomosde Rhoeo apresentam-se envolvidos em translocaes recprocas. Como conseqncia deste raro comportamento citolgico, seus cromossomospossuemapenassegmentos homlogos terminais ,(Koller, 7).
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Este trabalho tem como objetivos estudar o caritipo de R. spathacea e identificar possveisdiferenasentre seus cromossomos, utilizando dois mtodos de medidas.
MATERIAIS E MTODO

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A anlise dos cromossomossomticos de Rhoeo sp foi realizadaem metfases obtidas de clulas meristemticas do pice de raizes. A tcnica empregada no preparo de lminas seguiu, em linhas gerais, quela descrita por Bandel (1). Pr-tratamento em colchicina 0,5%, durante duas horas a 25C. Fez-sea fixao em cido actico glacial, clorofrmio e lcool absoluto nas propores de 1:3:3, por 14 horas e tratamento durante 5 minutos, em partes iguais de lcool etlico e cido clordrico. As lminas foram preparadas por esmagamento em Carmim actico a 1%. Das preparaescitolgicas obtidas, pelo uso da tcnica descrita acima, 15 Parte da Dissertao de Mestradoapresentada metfasesforam selecionadase, inicialpelo primeiro autor, ao Departamento de Fitomente, analisadas atravs de desenhos tecnia do Centro de Cincias ,L\grrias da Univeresquemticos, em folhas de pepel. Das sidade Federal do Cear, Brasil. Professor Assistente do Centro de Cincias Biolmetfasesestudadas,as sete que apresengicas da Universidade de Alagoas, Brasil. tavam os cromossomos uniformemente Professores do Centro de Cincias Agrrias da corados e de contornos ntidos foram Universidade Federal do Cear, Brasil. fotografadas.

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Adotou-se por modelo experimental um fatorial 2 x 12, no delineamento cpio serviu para medir o comprimento inteiramente casualizado,com 7 repetidos cromossomos nas sete metfases es. Os tratamentos foram represenescolhidas(Mtodo 1). tados por dois mtodos de mediesde Foi tambm utilizado para medidas cromossomos combinados, cada um, a cromossomicas o mtodo citdo por Giannoni & Ferrari (5), descrito abaixo 12 diferentes cromossomos. A avaliao dos resultados constou (Mtodo 2). Os negativos das metfases foram de anlise estatstica dos dados, com a montados em guias positivos. Cada uma comparao de mdias pelo teste de das metfasesfoi projetada sobre uma Tukey, ao nvel de 5% de probabilidade. folha de papel branca por meio de um projetor Kodak. Os contornos dos cro- RESULTADOS E DISCUSSO

Um micrmetroadaptado ao micros-

mossomos ..foram desenhados

com lpis

de ponta fina. Uma linha passandopelo eixo das cromtides foi percorrida por uma carretilha de passos iguais e que deixa a marca endelvel da roda dentada no verso do papel branco quando est apoiado em papel carbono. Aps este procedimento, contaram-se os pontos marcadosem cada cromossomo.A soma dos pontos forneceu o comprimento total de cada cromossomo. A vantagem dessemtodo a de permitir que sejam consideradas as curvaturas cromossmicas. As equaes de Levan et alii (8), apresentadas abaixo, foram utilizadas para o clculo do ndice centromrico (i) e relao de braos (r), onde: i = 100s/c r = 1/s e c = 1 + S Os valores encontrados para ndice centromrico e relao de braos foram empregadosna elaboraodo cari6tipo e idiograma de R. spathacea.Em lugar do comprimento total, que varivel entre clulas, utilizou-se o comprimento relativo, para a identificao dos cromossomosde Rhoeo. A classificaodos cromossomos de acordo com a posiodo centrmero: foi feita consultando-sea Tabela citada por Levan et alii (8) e utilizando-se a nomenclatura abaixo, citada por Giannoni & Ferrari (5). M = metacntrico m = metacntrico
sm= submetacntrico st = subtelocntrico t = telocntrico
T

A anlise de metfases de R. spathacea veio confirmar os estudos de Satterfield & Mertens (10) de que a
espcie portadora de 2n

12 cromos-

somos. Medidascromossmicasobtidas pelo Mtodo -1 permitiram calcular o comprimento absoluto mdio dos cromossomos, cujo valor 8,54u. No reconhecimento dos cromossomos, elaborao do cari6tipo e idiograma foram utilizados o comprimento relativo e a posio do centrmero estabelecidos pelos ndices centromricos e relao de braos. Levanet ali i (8) apontaram a localizaodo centrmero como o mais vantajoso marco para identificao morfol6gica dos cromossomos. Os dados do comprimento relativo (em % do lote diploide) dos ndicescentromricos e relao de braos, calculados a partir das medidas feitas pelos Mtodos 1 e 2, so apresentadasnas Tabela I e 11. As Tabelas I e II contm as mdias, desvios-padres e coeficientes de variao. Diferenas entre coeficientes de variao indicam que h diferentes grausde contrao entre os cromossomos das metfases analisadas. A Tabela III contm a mdia dos valoresencontrados pelos Mtodos 1 e 2 para comprimento relativo, relao de braos e (ndicescentromricos. Uma comparao entre as mdias da Tabela III (b e c) com os valores de r e i tabelados por Levan et alii

telocntricn

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(8) permitiu a clasificao dos cromossomos de Rhoeo em metacntricos (m) e submetacntricos (sm) (Tabela 111). As F igu ras 1a, 1b e 1c mostram respectivamente, uma das metfases analisadas, o caritipo e o idiograma de R. spathacea. No caritipo e no idiograma, os cromossomos aparecem enumerados de um a doze, obedecendo ordem do mais metacntrico ao mais submetacntrico. As diferenas entre comprimentos relativos e posies dos centrmeros nos doze cromossomos aparecem mais claramente no idiograma do que no cari6tipo, isto porque, no caritipo, os cromossomos apresentam curvaturas que dificultam a comparao. O teste de Tukey aplicado s mdias da Tabela III (coluna b) mostrou que o comprimento do cromossomo 2 diferiu significativamente, ao nvel de 5% dos demais. Por outro lado, o comprimento do cromossomo 1 diferiu, pelo mesmo teste, dos cromossomos 6 e 8. A no significncia entre o tamanho dos outros cromossomos vem demonstrar que os cromossomos de Rhoeo no apresentam grande variao entre seus comprimentos, ocorrendo uma maior variao no tamanho dos cromossomos entre clulas do que na mesma clula. Segundo Gottschalk (6), as variaes no comprimento cromossmico que ocorrem entre clulas so decorrentes da espiralizao cromossmica que tem incio na prfase e se completa no final da metfase. Apesar das afirmaes de pesquisadores como Flagg (4); Lin & Paddock (9) de que nenhum dos cromossomos de Rhoeo estruturalmente semelhante a outro, no foram encontradas diferenas significativas entre todos os 12 cromossomos. A diferena encontrada entre os mtodos utilizados para medir os cromossomos deve ter sido produzida pela sobreposio de cromossomos envolvendo a rea do centrmero. Quando se utiliza o mtodo 1 (medidas cromossmicas feitas diretamente na metfase escolhida com auxlio do microscpio).

<{ -l W m <{ f-

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possvel a observao de objetos superpostos, o que no ocorre quando se utiliza o mtodo 2 (medidasem fotografias de metfases). A comparaoentre as mdias pelo teste de Tukey, permitiu a obteno dos resultados III (coluna c). mostrados na Tabela .

CONCLUSOES o estudo dos cromossomossomticos de Rhoeo spathacea analisadosem sete metfases forneceu os seguintes
dados:

- Os cromossomosde clulas som-

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ticas de Rhoeo apresentamgrandetamanho com valor mdio de 8,54 u. - Os valores para comprimento relativo, frrdices centromricos e relao de braos, obtidos por dois mtodos, permitiram estabelecer que Rhoeo apresenta cromossomos metacntricos e submetacntricos. - O comprimento relativo no variou muito entre os doze cromossomos de Rhoeo e as maiores diferenas foram encontradas entre as posies dos centrmeros.

SUMMARY
The somatic chomosomesof Rhoeo spathecea were studied in detail employing two diferent methods of measurement. Ali the 12 (twelve) chomosomes were classified and numbered sequentially based on the length in ~ descending arder and position of the centromere. The mean length, arm ratio and centromeric indices were also used to classify the chomosomes. It was found that most of them possessed median to Sub-mediancentromeres.The statistical analysis indicated that the twelve chomosomesof Rhoeo spathacea did not vary very much in length. However, considerable differences were found among the chromosomesfor their centromeric positions.
..J W m ~ I-

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TABELA III
Mdia dos Comprimentos Relativos, Relaode Braose I'ndicesCentrom~ricos dos Cromossomosna Metfase

Mittica de R. spathacea,obtidos pelos M~todos 1 e 2. Fortaleza, Cear, Brasil.


Cromossomos (a) Comprimento relativo (b)

Indice centromrico (c) 49,50a 47,64ab 45,86bc 43,43cd 41,57de 40,00ef 38,57fg 36,29gh 33,86hi 31,28ij 29,43jl 26,501

Relao de braos (d)

Classificao (e)

3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

9,03b 10,22a 8,85bc 8,29bc 7,95bc 7,79c 8,08bc 7,69c 7,99bc 8,18bc 8,29bc 8,22bc

1,02 1,07 1,24 1,25 1,41 1,51 1,62 1,77 1,96 2,19 2,35 2,69

metacntrico metac4ntrico metacntrico metacntrico metacntrico metacntrico metacntrico submetacntrico submetacntrico submetacntrico submetacntrico submetacntrico