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Micronutrimentos y reparacin del DNA TAGS: reparacin del DNA reparacin de escisin de base reparacin de escisin de nucletido micronutrimentos

tos antioxidantes La evidencia epidemiolgica apunta bastante uerte !acia una asociacin entre el consumo de rutas y verduras y la prevencin de varios tipos de c"ncer# pero todav$a existe debate y con usin sobre los mecanismos del e ecto protector% &or muc!os a'os# se mantuvo la !iptesis del antioxidante: rutas y verduras invariablemente contienen antioxidantes (vitaminas ) y *# carotenoides# lavonoides# etc%+: el da'o al "cido desoxirribonucleico (DNA# por sus siglas en ingl,s+ por radicales libres puede resultar en mutaciones y eventualmente en c"ncer- los antioxidantes eliminan los radicales libres y previenen este da'o- por lo tanto# los antioxidantes deben ser responsables de la proteccin contra el c"ncer% *xiste bastante evidencia de .ue los antioxidantes o los alimentos ricos en antioxidantes# administrados a voluntarios en pruebas de intervencin en e ecto disminuyen el nivel de oxidacin endgena al DNA medida en lin ocitos y aumentan la resistencia de los lin ocitos al da'o oxidativo ex vivo% &ero el nivel de oxidacin de bases a!ora se reconoce como muc!o menor (por rdenes de magnitud+ de lo .ue se supon$a y en algunos casos las especies reactivas de ox$geno (/0S# por sus siglas en ingl,s+ est"n involucradas en la proteccin inmune y en las rutas de se'ali1acin celular# por lo .ue suprimirlas en exceso podr$a ser per2udicial% Nuestras de ensas antioxidantes endgenas (catalasa y superxido dismutasa# glutatin y en1imas asociadas# y mol,culas como alb3mina y "cido 3rico con propiedades antioxidantes+ son evidentemente capaces de mantener a las /0S y sus e ectos en un nivel ba2o# tolerable y tal ve1 deseable% Al mismo tiempo# pruebas cl$nicas a gran escala con suplementos antioxidantes y muerte o en ermedad como resultado inal# !an producido resultados poco alentadores# y los meta4an"lisis muestran una asociacin positiva entre la suplementacin con antioxidantes (al menos con dosis elevadas+ y la mortalidad general% As$ .ue la !iptesis antioxidante est" siendo seriamente reconsiderada% La modulacin nutricional de los niveles de da'o al DNA# como un posible biomarcador de carcinog,nesis# !a sido extensamente revisada% Sin embargo# !ay un consenso sobre .ue deber$a prestarse m"s atencin a biomarcadores alternativos y mecanismos de .uimioprevencin% Las rutas y verduras no son solamente ve!$culos para los antioxidantesestos contienen innumerables micronutrimentos# muc!os de los cuales tienen propiedades antioxidantes# pero es claro .ue 2uegan muc!os di erentes papeles en el metabolismo% Los micronutrimentos tienen e ectos en las rutas de biotrans ormacin y desintoxicacin ase 5 y ase 55# en las rutas de se'ali1acin celular y en los sistemas endgenos antioxidantes% *n muc!os estudios se !a identi icado a los micronutrimentos como moduladores signi icativos de la expresin g,nica% 6n atributo de los micronutrimentos .ue !asta !ace algunos a'os no era considerado es la !abilidad para modular las rutas de reparacin del DNA% *xisten varias rutas de reparacin: reenlace de .uiebres (S7# por sus siglas en ingl,s+ en cadenas individuales y en dobles cadenas# reparacin de escisin de base (7*/# por sus siglas en ingl,s+ de bases oxidadas o al.uiladas 4al.uilacin es la trans erencia de un grupo al.uilo entre mol,culas4# reparacin de escisin de nucletido (N*/# por sus siglas en ingl,s+ de aductos (parte del DNA unida covalentemente a un compuesto cancer$geno+ voluminosos y entrecru1amientos intracadena distorsionadores de !,lice# reparacin de discordancias# reparacin de entrecru1amientos intercadena# y es posible .ue cada una de ellas tenga di erentes modos de regulacin%

*xisten varios en o.ues para medir la reparacin y su in!ibicin o aumento por actores nutricionales o de otro tipo% Las investigaciones pueden reali1arse en cultivo celular# en animales o en pruebas de intervencin en !umanos% Los niveles de expresin de los genes asociados a la reparacin del DNA pueden ser medidos por ensayos de micromatri1 (microarrays+ o por reaccin en cadena de polimerasa con transcripcin inversa (/T4&)/# por sus siglas en ingl,s+% *l enotipo (actividad de en1ima reparadora+ es valorado por un ensayo de 8desa $o9# tratando c,lulas con un agente da'ino y monitoreando la remocin del da'o en el tiempo# o por un en o.ue in vitro# incubando un extracto libre de c,lulas con un sustrato de DNA .ue contiene un da'o espec$ ico% *s debatible cual es la me2or medida de la capacidad de reparacin# derivada del ensayo de 8desa $o9% Si se estudian puntos de tiempo a intervalos cercanos despu,s del inicio de la incubacin# la tasa inicial de remocin del da'o puede ser estimada# pero esto depender" probablemente del nivel de da'o incidente# el cual es posible .ue var$e entre individuos (por e2emplo# como una uncin del estatus antioxidante+% 6n par"metro .ue toma esto en consideracin es la vida media (t:;<+de remocin de da'o# .ue tambi,n re.uiere de mediciones del da'o en varios puntos de tiempo para estar seguro de estimar con precisin el punto medio% Lo .ue claramente no es muy in ormativo (pero .ue se emplea con recuencia+ es una medicin individual del da'o residual en un cierto tiempo despu,s del da'o incidente 4usualmente un tiempo en donde la mayor$a del da'o !a sido reparado% *l ensayo cometa (un m,todo simple para la medicin de los .uiebres de cadena (S7s+ del DNA# basado en la rela2acin del superenrollamiento del DNA por .uiebres y subsecuente extensin del DNA para ormar una =cola= ba2o electro oresis se una con muc!a recuencia para monitorear el reenlace de los S7s por las c,lulas- tambi,n se aplica para la reparacin de bases oxidadas# incorporando una digestin del DNA con ormamidopirimidina DNA glicosilasa (>&G+ o endonucleasa 555 para convertir las purinas o pirimidinas oxidadas# respectivamente# en S7s% La alternativa al ensayo de 8desa $o9# el ensayo de reparacin in vitro# toma varias ormas- el sustrato puede ser un oligonucletido o pl"smido dise'ado con una base alterada espec$ ica en la secuencia# siendo la actividad de reparacin indicada por una muesca del DNA o la incorporacin de un nucletido eti.uetado en un parte de reparacin% Alternativamente# puede usarse el ensayo cometa# en el cual el sustrato est" en la orma de nucleoides embebidos en agarosa# derivados por lisis de c,lulas tratadas con un agente da'ador de DNA espec$ ico% Modulacin de la reparacin del DNA por micronutrimentos en clulas cultivadas *l e ecto de los carotenoides en la reparacin de S7 !a sido estudiado en c,lulas cultivadas% Se incubaron c,lulas Molt4:? (una linea celular de lin ocitos !umanos+ con una solucin @ AM de B4caroteno# luteina o B4criptoxantina y se indu2o da'o al DNA con perxido de !idrgeno (C<0<+- se encontr .ue las c,lulas suplementadas con carotenoides mostraron un decremento en S7s en una incubacin de < !oras# mientras .ue las c,lulas control no lo !icieron% *ste mismo grupo report .ue en un ensayo in vitro basado en la incorporacin de un nucletido eti.uetado en un parc!e de reparacin no mostr una estimulacin detectable por carotenoides% *n en o.ue similar (monitoreado y reenlace de S7s+ ue aplicado por otro grupo de estudio# utili1ando lin ocitos !umanos incubados con B4caroteno o licopeno < AMlos carotenoides ueron capturados por las c,lulas# pero no tuvieron e ecto en la tasa de reenlace%

6n grupo adicional de investigacin monitore el reenlace de S7 y la remocin de bases oxidadas (@4oxoguanina introducida por tratamiento con otosensibili1ador y lu1 visible+ por lineas celulares !umanas CeLa y )aco4<# incubadas con B4criptoxantina% Ambos tipos de reparacin ueron aumentados a concentraciones : AM y D AM# no muc!o m"s altas .ue las encontradas en el plasma !umano% Adicionalmente# encontraron un aumento en la reparacin in vitro en un sustrato de DNA nucleoide conteniendo @4oxoguanina# indicando una mayor actividad de @4oxoguanina DNA glicosilasa (!0GG:+% No !ubo un e ecto detectable en las concentraciones de prote$nas de reparacin (por trans erencia de tipo Eestern 4Eestern blotting+% ),lulas !umanas )aco4< y CepG< as$ como ibroblastos de !"mster c!ino linea F?G ueron preincubados con los lavonoides comunes .uercetina# rutina o miricetina# a HI AM antes de un tratamiento con C<0< para inducir S7- la tasa de reenlace no cambi por ninguno de los lavonoides (HI AM es una alta concentracin y se !a demostrado tanto .ue induce el da'o al DNA como .ue protege contra el .uiebre inducido por C <0<+% *n contraste# otro grupo !a reportado un incremento en la expresin del m/NA de hOGG1 despu,s del tratamiento con C<0<# cuando c,lulas )aco4< ueron preincubadas con .uercetina :II AM% *sta misma l$nea de c,lulas ueron su2eto de estudio por un tercer grupo# con extractos de Salvia sp% y sus principales constituyentes enlicos# "cido rosmar$nico y luteolina# as$ como el triterpenoide "cido urslico% *l grado de reenlace de S7 despu,s del tratamiento con C <0< se increment por preincubacin con extractos de salvia# "cido urslico o luteolina# mientras .ue la reparacin in vitro de @4oxoguanina ue me2orada marginalmente% *n c,lulas CepG<# .uercetina <I AM y sul ora ano :I AM no tuvieron e ecto en la tasa de remocin de aductos causados por &!5& (una amino !eteroc$clica+% Los antioxidantes enlico curcumina (:I4:II AM+ y silimarina (:I4DI AM+ incrementan la actividad de OJ4metilguanina4DNA metiltrans erasa (MGMT+ en lin ocitos !umanos y lineas celulares tumorales# adem"s de elevar el nivel del m/NA de MGMT% La MGMT se conoce como una en1ima 8suicida9 .ue remueve el grupo metilo de OJ4metilguanina# volvi,ndose al.uilada e inactiva en el proceso- previamente se pensaba .ue era producida constitutivamente y no inducible% *l resveratrol (H4KI AM+ in!ibe la reparacin de dobles .uiebres de cadena (DS7# por sus siglas en ingl,s+# tanto la recombinacin !omloga (C/# por sus siglas en ingl,s+ como el enlace o unin de extremos no !omlogos (NC*L# por sus siglas en ingl,s+# v$a las en1imas ATM;AT/ y la ruta de se'ali1acin pHK% Se cree .ue ATM minimi1a la reparacin tendiente a errores y la activacin por resveratrol podr$a por tanto 2ugar un papel en la estabili1acin del genoma y la .uimioprevencin% M"s .ue agregar un ito.u$mico# un grupo de investigacin cultiv c,lulas Ca)aT (.ueratinocitos !umanos inmortali1ados+ en un estado de de iciencia de olato y encontr# adem"s del incremento esperado en la incorporacin errnea de uracilo# una menor capacidad para reparar S7s inducidas por lu1 solar simulada o C <0<% >inalmente# los lavonoides oligom,ricos totales (T0># por sus siglas en ingl,s+# obtenidos por extraccin agua;acetona y precipitacin mediada por cloro ormo# y extractos de solventes org"nicos de la planta medicinal tradicional Acacia salicina (rica en micronutrimentos como taninos# lavonoides y cumarinas+ indu2eron la expresin de genes involucrados en 7*/ y N*/# as$ como rutas de de ensa antioxidante# en c,lulas lin oblastoides !umanas MHJ<% *s importante reconocer .ue muc!os estudios de cultivo celular emplean concentraciones de ito.u$micos .ue son muc!o mayores de lo .ue podr$an alcan1ar in vivo# o al menos en la

sangre (alrededor de : AM+% Las concentraciones m"s altas# sin embargo# son relevantes para una posible exposicin de las c,lulas epiteliales del tracto gastrointestinal% )on la prueba de dic!o pa.uete de agentes da'adores del DNA y micronutrimentos# las rutas de reparacin estudiadas# en o.ues y concentraciones pr"cticas# es imposible llegar a conclusiones generales% *s importante estar al tanto de .ue los resultados aparentemente negativos podr$an simplemente re le2ar la incapacidad del compuesto de prueba para entrar en las c,lulas (o permanecer activo dentro de las mismas+% *s por tanto recomendable# de ser posible# con irmar la presencia del compuesto dentro de las c,lulas% Sin embargo# cuando se observan los e ectos# pueden ser de verdad convincentes% Estudios animales sobre el e ecto de los micronutrimentos en la reparacin al DNA Farios grupos !an estudiado el e ecto de la interrupcin del metabolismo de : carbono en la estabilidad del DNA% >olato# colina y metionina interaccionan en esta ruta% Alimentando a ratas con una dieta de iciente en olato o metilos# el metabolismo de : carbono ue interrumpido y se encontr da'o oxidativo en el DNA del cerebro% )omparado con las ratas control# !ubo un incremento en las S7s del DNA y probablemente como una consecuencia# se increment la expresin de los genes de reparacin del DNA# .ue codi ican para A& endonucleasa : (Ape1+ y DNA polimerasa B (!olb+% De orma similar# otro grupo observ .ue la de iciencia de olato en ratas incrementa los niveles de @4oxoguanina en lin ocitos al tiempo .ue aumenta las cantidades de prote$nas 0GG: y MGMT en el !$gado# pero no en el colon% *n un reporte temprano# se demostr .ue una dieta de iciente en metionina y cisteina disminuye signi icativamente los niveles de prote$na MGMT en el !$gado de ratn# pero no en ri'n# pulmn# test$culos y cerebro% *stas observaciones indican .ue distintos te2idos pueden responder de manera di erente a las de iciencias de micronutrimentos o al aumento en el da'o al DNA% )on recuencia# una combinacin de de iciencia de colina y olato con una dieta ba2a en metionina se adopta en estudios animales% *n un papel temprano se encontr un incremento en la actividad de poli4AD&4ribosa polimerasa (&A/&+ en el !$gado de ratas con dic!a dieta% La polimeri1acin de AD&4ribosa es una respuesta temprana al da'o al DNA# aparentemente estabili1ando los S7s y reclutando !acia el sitio otras prote$nas asociadas a la reparacin% Se !a con irmado el incremento en la actividad de &A/& y tambi,n se !a reportado un incremento substancial en la relacin de desoxiuridina tri os ato a desoxigenara tri os ato (d6T&;dTT&+ en la po1a del precursor de DNA# consistente con un blo.ueo en la bios$ntesis de novo# dependiente de olato# de timidilato# lo .ue lleva a la mala incorporacin del uracilo% La uracilo DNA glicosilasa remueve la base mal incorporada# pero un ciclo de reparacin 3til podr$a derivar en la reincorporacin de uracilo# y un subsecuente incremento en los S7s asociados a la reparacin% La poli4AD&4ribosa es sinteti1ada a partir de AD&4ribosa donada por nicotinamida adenina dinucletido (NAD+ y el precursor de NAD es la vitamina 7 K (niacina o nicotinamida+% Se !a encontrado .ue la de iciencia crnica de niacina es di $cil de mantener# con un e ecto variable en la actividad de &A/&% Se !a reportado un decremento en las concentraciones de poli4 AD&4ribosa asociadas con una de iciencia leve de niacina% Sin embargo# despu,s de la exposicin crnica a una dieta ba2a en metionina# olato y colina# combinada con de iciencia de niacina# las ratas mostraron un decremento en la concentracin de NAD y actividad reducida en &A/& en el !$gado# as$ como una alta incidencia de !epatocarcinomas% Se !a estudiado el e ecto de una de iciencia marginal de cinc (com3n en !umanos+#

encontr"ndose .ue la de iciencia severa o marginal de cinc en ratas increment el estr,s oxidativo# aument los S7 del DNA en los leucocitos as$ como los niveles de prote$na 0GG:% Sorprendentemente# aun.ue la prote$na &A/& tiene dos dedos de cinc# su concentracin no ue a ectada% *n un estudio subsecuente# tanto los niveles de m/NA como de prote$na &A/& se incrementaron en la prstata de ratas sometidas a una de iciencia marginal de cinc# y en combinacin con el e2ercicio crnico !ubo un incremento en la oxidacin del DNA% Las actividades de &A/& as$ como de la DNA polimerasa B y de la DNA ligasa# tres en1imas inducidas en el !$gado de rata por tratamiento con a latoxina 7: ueron m"s m"s altas en las ratas de iciencias en vitamina A o cobre y disminuyeron cuando recibieron suplementacin% )ambiando de las dietas de icientes en micronutrimentos a suplementacin de una dieta normal# en una serie de experimentos un grupo de ratas recibi suplementacin por varias semanas con una me1cla de nicotinamida# cinc y carotenoides# sometidas a irradiacin ioni1ante de cuerpo completo y K !oras despu,s# el DNA del esplenocito ue anali1ado para determinar el da'o residual al DNA (S7 sencillos o dobles+ utili1ando elucin alcalina y neutral- la reparacin tanto de los S7 sencillos como dobles ue aumentada# en comparacin con los animales control% 0tro grupo encontr .ue en ratas suplementadas con el lavonoide glicsido rutina# el rendimiento de los .uiebres de DNA inducidos por a latoxina 7: o N4 nitrosodimetilamina en el !$gado !ab$an disminuido y los incrementos en las actividades de &A/&# DNA polimerasa B y DNA ligasa inducidos por el carcingeno ueron revertidos# una indicacin temprana del e ecto de los micronutrimentos no esenciales en los niveles de da'o al DNA# aun.ue no .ueda claro si esto involucra un e ecto directo en la reparacin% M"s recientemente# se !a dado ,n asis en el e ecto de la suplementacin con micronutrimentos en la expresin de genes .ue codi ican prote$nas asociadas a la reparacin% *n un estudio# los ratones ueron alimentados con una dieta .ue conten$a "cido el"gico (un poli enol encontrado en muc!as bayas+ o moras# resas o rambuesas des!idratadas% *l "cido el"gico y la rambuesa tuvieron e ectos particularmente uertes# incrementando los niveles de "pa# Ercc# y Dnl$ (DNA ligasa 555+ de K @ veces% Las proantocianidinas de semillas de uva administradas a ratones incrementaron la expresin de "pa# "pc# Ddb% y &pa1 (genes para prote$nas involucradas en N*/+% Los ratones )H?7:;JL alimentados con una dieta con @N de extracto de dura1no o nectarina (rico en vitaminas ) y A# niacina# potasio y compuestos poli enlicos+ por :D semanas mostraron un incremento signi icativo en la actividad de incisin de 0GG: en extractos nucleares de !$gado# comparados con los ratones control# mientras .ue el extracto mitocondrial de !$gado mostr un incremento signi icativo en la actividad de incisin solamente despu,s de la suplementacin con extracto de nectarina% *n el mismo estudio# la suplementacin con extracto de nectarina y dura1no result en una disminucin signi icativa de la expresin de "pa y Td'# mientras .ue Nthl1# el gen responsable de la remocin de aductos de ormamidopirimidina (>A&O# por sus siglas en ingl,s+ del DNA ue estimulado en el !$gado del ratn% Se !a medido la actividad de N*/ con el ensayo in vitro basado en el ensayo cometa# en extractos de te2ido colnico de lec!ones% *l e ecto de una dieta materna rica en antioxidantes y otros micronutrimentos (taurina# carnitina# acetato de toco erol y lavonoides+ en la respuesta de los lec!ones a una inyeccin de !ierro inductora de estr,s oxidativo ue sometido a prueba% Los animales estresados mostraron un decremento en la actividad N*/# comparados con los controles# y esto ue parcialmente revertido por la suplementacin con micronutrimentos% 0bservaciones m"s recientes# utili1ando el mismo modelo animal pero observando el !ipocampo# mostraron .ue la suplementacin protegi a los lec!ones contra

los e ectos del estr,s oxidativo severo causado al nacer% Los niveles de @4oxoguanina ueron signi icativamente m"s ba2os y la actividad 7*/ inicial ue mayor en los animales suplementados# en comparacin con los controles% *n con2unto# la modulacin experimental de la reparacin del DNA en animales parece ser bastante in ormativa% Las dietas de icientes generalmente tienden a incrementar el da'o al DNA y posiblemente como resultado deriven en un incremento en la actividad de reparacin del DNA% Sin embargo# en ocasiones se !a visto una disminucin en la actividad de reparacin# lo .ue podr$a entonces ser la causa m"s .ue la consecuencia del incremento en el da'o al DNA% Las dietas suplementadas principalmente me2oran la reparacin del DNA y resultan en una disminucin en los niveles del da'o al DNA% La belle1a de los estudios animales es .ue las dietas son simplemente alteradas o suplementadas con micronutrimentos# de manera .ue los animales absorben los micronutrimentos de manera natural# incrementando el valor de las observaciones in vivo% Adicionalmente# la venta2a de un modelo animal es .ue los rganos de inter,s pueden se estudiados en gran detalle# m"s .ue teniendo acceso solamente a c,lulas sangu$neas o a un te2ido sustituto% No obstante# !ay puntos importantes cuando se extrapolan los datos de animales a !umanos- aun.ue los genes de reparacin del DNA est"n altamente conservados entre los eucariotas# existen claras di erencias en ls organi1acin y regulacin de la reparacin entre las especies# y por supuesto# existen tambi,n di erencias substanciales en la absorcin y el metabolismo de xenobiticos# incluyendo micronutrimentos# entre los mam$ eros% Evidencia de pruebas de intervencin en humanos sobre la in luencia de los micronutrimentos en la reparacin del DNA *xisten m3ltiples reportes sobre la reparacin del DNA en !umanos# estudiada a trav,s de pruebas de intervencin con micronutrimentos individuales# suplementos con una ruta o verdura o con dietas completas# y con dosis 3nicas o periodos de suplementacin de una a varias semanas% Se toman muestras de sangre (se a$slan los lin ocitos+ antes y despu,s de la suplementacin y se reali1an ensayos de reparacin ex vivo% )on recuencia la prueba incluye un grupo paralelo de control .ue no recibe suplemento (o recibe un placebo+- un dise'o alternativo es la prueba cru1ada# en la cual todos los su2etos reciben los mismos suplementos# dosis y;o placebo# pre eriblemente en orden di erente# lo .ue minimi1a la oportunidad de lo .ue se conoce como =e ectos de periodo=# .ue son cambios con el tiempo .ue no est"n relacionados con la intervencin sino a otro actor no controlado# y !ace .ue cada su2eto act3e como su propio control% La orma m"s simple de reparacin del DNA medida en estas pruebas es el reenlace de S7s inducidos por C<0<% Generalmente se encuentra .ue esto es muy lento# tomando !asta <D !oras para completarse# comparada con el r"pido reenlace visto en la mayor$a de las c,lulas cultivadas% La suplementacin con vitamina )# B4caroteno# licopeno (pero no luteina+ o 1ana!orias aparentemente aceleraron el proceso de reenlace% Sin embargo# la interpretacin de estos resultados es complicada por el !ec!o de .ue los lin ocitos aislados rescos su ren estr,s oxidativo y el subsecuente da'o al DNA# por la s3bita exposicin al ox$geno atmos ,rico% Se !a reportado un incremento en los S7s en lin ocitos# sin tratamiento con C<0<# durando algunas !oras despu,s del aislamiento- y este incremento transitorio ue menos pronunciado en lin ocitos tomados despu,s de la suplementacin con carotenoides% &arece ser .ue el lento reenlace aparente de los S7s inducidos por C <0< podr$a ser una con luencia de la reparacin del da'o inducido y la introduccin de da'o adicional por exposicin al ox$geno# y el e ecto aparente de los carotenoides podr$a ser# de !ec!o#

simplemente una proteccin antioxidante contra el da'o adicional m"s .ue una me2ora en la reparacin% La 7*/ !a sido estudiada in vitro con un sustrato de DNA conteniendo @4oxoguanina en varias pruebas con !umanos# con resultados variados% Se reportaron incrementos en la actividad de 0GG: despu,s de administrar coen1ima P:I# vitamina ) de liberacin prolongada (pero no con las c"psulas convencionales de vitamina )+# 1ana!orias (pero no con carotenos# vitamina ) o mandarinas+# QiRi y una dieta alta en rutas y verduras% No se registro e ecto por brcoli o un cctel de selenio# retinol# B4caroteno# vitamina ) y vitamina *% Despu,s de una suplementacin con olato# se observ una disminucin pero solamente en individuos .ue eran relativamente de icientes en olato% La N*/ es muc!o menos medida .ue la 7*/% Al suplementar con moras y 2ugo de man1ana# no se !a reportado e ecto en la N*/ (con un sustrato conteniendo aductos voluminosos+# excepto .ue los individuos .ue portan : o m"s alelos de ba2a actividad para "!(4MGKGP y;o &AD%$)4A<DGF mostraron un incremento por la intervencin% Al medir N*/ en un sustrato da'ado por 6F se encontr un decremento en los su2etos .ue tomaban una dieta rica en rutas y verduras o un suplemento de QiRi% *n varios estudios se !a estudiado la expresin de una variedad de genes asociados a la reparacin del DNA% 6n grupo reporta una tendencia general para un incremento de expresin despu,s de una dieta rica en lavonoides# y los 2uegos de genes de reparacin del DNA ueron estimulados despu,s de una dieta rica en rutas y verduras o suplementacin con QiRi# mientras .ue otros grupos no encontraron un e ecto en la expresin de !0GG: y otros genes de reparacin% 6n grupo adicional de investigadores estudi las concentraciones de prote$nas y encontr# en pacientes de c"ncer de mama .ue recib$an tamoxi eno# un incremento en la cantidad de &A/& despu,s de la suplementacin con coen1ima P :I# ribo lavina y niacina% Sin embargo# vale la pena se'alar .ue la medicin de los niveles del m/NA o la prote$na no es necesariamente una buena gu$a de la actividad en1im"tica% 6n alto nivel de m/NA no implica siempre m"s produccin de prote$na# y m"s prote$na no siempre resulta en mayor actividad en1im"tica# dado .ue modi icaciones post4traduccionales (entre otros modi icadores de la estructura prote$nica+ podr$an a ectar la actividad en1im"tica% De !ec!o# en un estudio cuidadoso se midi tanto la expresin del gen hOOG1 como la actividad en1im"tica en un grupo de su2etos !umanos y se encontr solamente una correlacin pobre entre ellas% Casta !ace poco tiempo !ab$a un inter,s muy limitado en la regulacin de la reparacin del DNA !umano por actores exgenos y se asum$a generalmente .ue era poco probable .ue unciones tan importantes como la reparacin del DNA ueran "cilmente a ectadas por la nutricin% Sin embargo# los varios modos de reparacin muestran una variacin interindividual bastante extensa y es poco probable .ue esto se debe solamente a polimor ismos gen,ticos% Los di erentes niveles de exposicin a agentes da'adores del DNA en el ambiente podr$an ser responsables por alguna parte de la variacin# si las en1imas de reparacin del DNA son inducidas por sus substratos# pero es un !ec!o .ue las di erencias en la nutricin individual podr$an contribuir tambi,n% Mientras ciertos estudios muestran observaciones similares en animales y !umanos# otros muestran datos contrastantes o e ectos .ue se observan solamente en ciertas subpoblaciones con un ondo gen,tico espec$ ico% Adicionalmente# mientras los animales de laboratorio son generalmente consangu$neos# los !umanos son surtidos diversos de varios millones de polimor ismos gen,ticos# lo .ue contribuye a la di icultad de discernir posibles e ectos de los micronutrimentos en la reparacin del DNA%

6na limitacin adicional de los estudios !umanos es .ue generalmente solamente est"n disponibles leucocitos para los estudios y .ue el supuesto de .ue este es un substituto con iable para los verdaderos te2idos diana de c"ncer es conveniente pero no bien undamentado% Se re.uieren estudios en donde se midan las tasas de reparacin en los pacientes de c"ncer# observando tanto el tumor como el te2ido normal y en lin ocitos# adem"s de leucocitos% Actualmente se est"n desarrollando ensayos de reparacin in vitro apropiados para su aplicacin en biopsias de te2idos% !apel de la epi'entica en la modulacin de la reparacin del DNA Los estudios epidemiolgicos proporcionan evidencia de .ue la dieta# incluyendo la suplementacin con micronutrimentos# puede tener e ectos pro undos en el nivel de da'o al DNA y su remocin% Aun.ue las rutas celulares y moleculares por las cuales los nutrimentos a ectan la expresin g,nica o la actividad en1im"tica de los genes de reparacin del DNA no se comprenden del todo# los procesos epigen,ticos (cambios en la expresin g,nica y el enotipo sin una alteracin correspondiente en la secuencia del DNA+ !an emergido como un mecanismo plausible% La metilacin del DNA es actualmente la modi icacin epigen,tica m"s ampliamente estudiada# apareciendo principalmente como H4metilcitosina en los dinucletidos )pG% Las secuencias ricas en )pG (islas )pG o )G5# por sus siglas en ingl,s+ se encuentran principalmente en las regiones promotoras de los genes y est"n normalmente no metiladas en los genes expresados% La !ipermetilacin de las )G5 !a estado ligada con el silenciado transcripcional de los genes asociados# mientras .ue generalmente se piensa .ue la !ipometilacin aumenta la expresin g,nica% Mientras algunas marcas epigen,ticas son establecidas durante el desarrollo embrinico y etal y permanecen estables durante la vida adulta# existe evidencia creciente de .ue las exposiciones ambientales (dieta# estilo de vida# contaminacin del aire y metales pesados# entre otros+ pueden cambiar el estatus de metilacin de los promotores g,nicos# modi icando su expresin y inalmente contribuyendo a la dis uncin celular% *xisten pocos estudios de los posibles la1os entre los cambios en los patrones de metilacin del DNA de los genes de reparacin de DNA causados por micronutrimentos y cambios en la expresin g,nica% Se !a reportado .ue el poli enol del t, verde epigalocate.uina4K4galato (*G)G5 revierte la !ipermetilacin del promotor g,nico de MGMT y M*+1 en c,lulas de c"ncer eso "gico !umano# acompa'ada por una reexpresin de dic!os genes% *l mismo grupo report .ue la iso lavona genisteina tiene un e ecto similar% )omo se menciona arriba# estudiar la expresin g,nica no necesariamente da alguna indicacin de la actividad en1im"tica% &or tanto# un grupo de investigadores estudi recientemente los cambios en la metilacin en los genes asociados a 7*/ y su e ecto en la actividad de incisin de 7*/# valorada por un ensayo de reparacin in vitro basado en el ensayo cometa% *ste es el primer reporte de un incremento signi icativo en la metilacin del promotor g,nico O''1 con el enve2ecimiento del cerebro de ratn y# como una posible consecuencia# un decremento signi icativo en la expresin de O''1 en los ratones m"s vie2os# as$ como una actividad 7*/ signi icativamente reducida% Adicionalmente# concerniente al e ecto modulador de los micronutrimentos# se !a observado recientemente .ue la suplementacin materna con antioxidantes modula el e ecto del estr,s oxidativo en la vida temprana en la metilacin y expresin del promotor g,nico A!E1 as$ como en la actividad 7*/ en el !ipocampo de lec!ones% Actualmente# el mismo grupo est" estudiando otros te2idos en paralelo al cerebro# dado .ue la reparacin del DNA podr$a ser a ectada di erentemente en te2idos post4mitticos y mitticos debido al enve2ecimiento as$ como a la

nutricin% No obstante# se !a demostrado .ue las exposiciones ambientales# incluyendo la suplementacin con micronutrimentos# cambian el estatus de metilacin de los genes .ue codi ican las en1imas de reparacin del DNA# alterando su expresin y modulando la capacidad de reparacin del DNA y la susceptibilidad al da'o oxidativo al DNA% ,n luencias en la capacidad de reparacin del DNA &arece ser .ue un individuo tiene una capacidad de reparacin intr$nseca caracter$stica# al menos como lo indica la correlacin observada entre las mediciones reali1adas con varias semanas de separacin% Desconocemos el grado de variacin intraindividual a una escala de largo pla1o% &arte de la variacin interindividual puede ser determinada gen,ticamente% 6n valor de la raccin de recombinacin &< de I%D podr$a implicar .ue el DIN de la variacin de persona a persona se explica por una capacidad de reparacin intr$nseca (una tasa de reparacin caracter$stica en cada persona# representando una predisposicin gen,tica# 2unto con otras in luencias tales como estilo de vida+% La variacin remanente es debida a la variacin diaria en la exposicin ambiental# salud general# dieta y e2ercicio# adem"s de la variacin experimental potencialmente medible% *xiste evidencia creciente# a partir de cultivos celulares# estudios en animales y en !umanos# .ue la reparacin del DNA puede en e ecto estar modulada por actores nutricionales# espec$ icamente los micronutrimentos% Las di erencias individuales en la capacidad de reparacin intr$nseca se conocen como indicadores probables de susceptibilidad al c"ncer# dado .ue a.uellos con una mayor capacidad de reparacin deber$an reparar el da'o m"s r"pidamente y por tanto disminuir la oportunidad de .ue el da'o sin reparar est, presente al momento .ue la c,lula replica su DNA# resultando en una posible mutacin% &ero es posible# por otro lado# .ue una alta capacidad de reparacin re le2e un alto nivel de exposicin a agentes da'adores del DNA# si la reparacin del DNA es inducible por su sustrato% La evidencia de esto es inconsistente: la exposicin ocupacional y;o de estilo de vida a genotoxinas est" algunas veces asociada con un incremento en la capacidad de reparacin# algunas veces con una disminucin y en otras no !ay e ecto% Generalmente# en los reportes publicados# si se observa un cambio en la actividad de reparacin# es un incremento- pero este no es invariablemente el caso% *n resumen# en el momento actual podemos decir .ue un incremento observado en la actividad de reparacin# ya sea como una respuesta inducida a la presencia del da'o al DNA o como una consecuencia de la estimulacin por micronutrimentos# por e2emplo# es posiblemente ben, ica para el organismo% Sin embargo# todav$a es dudoso si la capacidad de reparacin del DNA puede identi icarse como un marcador de riesgo individual al c"ncer% *s posible .ue di erentes rutas de reparacin tengan di erentes modos de regulacin% 7*/ es esencial para tratar con la inevitable presencia de da'o por oxidacin causado por /0S en el cuerpo y se asume .ue las en1imas son constitutivas% *n contraste# N*/ trata con el da'o causado por agentes .ue no est"n invariablemente presentes# tales como 6F en la lu1 solar o los mut"genos alimentarios# por lo .ue es actible .ue sea un proceso inducible ( acultativo+% *videncia circunstancial de esto proviene de la aparentemente muc!o mayor variabilidad interindividual en N*/ del da'o 6F (unas a? veces m"s alta y m"s ba2a+ comparada con 7*/ de @4oxoguanina (unas K veces+# medida en lin ocitos con el ensayo de reparacin in vitro cometa% &odr$a permitirse una explicacin de los e ectos contrastantes de la dieta alta en rutas y verduras en 7*/ y N*/# como se !a encontrado en la &rueba de Antioxidantes en 0slo (0AT# por sus siglas en ingl,s+- podemos especular .ue esta dieta podr$a disminuir la exposicin a .u$micos aductores a tal grado (por aceleracin de su metabolismo y excrecin# por e2emplo+ .ue la ruta N*/ es in!ibida%

La mayor$a# aun.ue no todas las pruebas de suplementacin en !umanos descritas arriba ueron reali1adas en indivudos sanos% Farias en ermedades est"n asociadas con in lamacin y estr,s oxidativo y# en consecuencia# muestran niveles elevados de da'o oxidativo al DNA% *xiste evidencia reciente de .ue un estado de en ermedad puede a ectar la capacidad para reparar el DNA# y es posible .ue la respuesta a actores nutricionales pudiera alterarse% 5ndudablemente# es m"s simple estudiar individuos sanos# evitando el nivel extra de comple2idad .ue representa la en ermedad- pero el conocimiento a nivel individual de la reparacin del DNA y sensibilidad a actores nutricionales podr$a bien 2ugar un papel importante en la de inicin de un r,gimen de tratamiento# particularmente# por supuesto# en el caso de radioterapia y .uimioterapia del c"ncer# en donde el da'o al DNA de las c,lulas cancerosas es el principal modo de accin% Aun.ue no son necesariamente no saludables# podr$a esperarse .ue los individuos con un estatus antioxidante ba2o (niveles relativamente ba2os de antioxidantes dietarios en plasma# como resultado de una dieta pobre en rutas y verduras+respondan m"s uertemente a los suplementos antioxidantes# ya sea .ue el punto inal examinado sea el da'o oxidativo de biomol,culas como el DNA o procesos inducibles incluyendo la reparacin del DNA% La idea de estudiar su2etos .ue su ren de estr,s oxidativo a in de maximi1ar el e ecto de la suplementacin ya se !a discutido# pero no se !a examinado rigurosamente% *n estudios animales o !umanos# es inusual encontrar intentos de establecer si existen relaciones dosis4e ecto% *sto es ligeramente m"s com3n en cultivo celular% Cay unos cuantos reportes .ue muestran una clara respuesta a la dosis con di erentes puntos inales experimentales# y en dosis cercanas a las alcan1ables in vivo% &or otro lado# di erentes dosis de QiRi !an mostrado un e ecto claro en 7*/# pero sin signo de una relacin dosis4respuesta% La alta de correspondencia entre la expresin g,nica de reparacin del DNA y la actividad en1im"tica no es sorprendente y no es 3nica del campo de reparacin del DNA% La cantidad de una prote$na particular presente en una c,lula depende no solamente de la tasa de transcripcin y traduccin# sino tambi,n de la tasa de renovacin (acrecin y degradacin+# y la actividad de una en1ima no est" simplemente relacionada a la cantidad de prote$na sino .ue es a ectada por la presencia de varios co actores% La medicin de los niveles de m/NA puede por supuesto dar valiosa in ormacin# pero para comparar enotipos# no !ay substituto para la medicin directa de las actividades en1im"ticas% *n conclusin y teniendo en cuenta un posible sesgo contra la publicacin de e ectos nulos# existen su icientes estudios .ue muestran e ectos positivos o negativos de los micronutrimentos (o rutas;verduras+ en la reparacin del DNA para tener con ian1a en .ue la modulacin nutricional de este proceso es real y de signi icado biolgico% Aun.ue no comprendemos del todo las implicaciones de# por e2emplo# los e ectos opuestos en 7*/ y N*/ en las mismas muestras de lin ocitos# es ra1onable especular .ue la regulacin de la reparacin puede adicionarse a la lista de procesos biolgicos .ue son in luenciados por lo .ue comemos y# espec$ icamente# .ue esto podr$a ormar parte de la explicacin de los e ectos preventivos del c"ncer por muc!os alimentos de origen vegetal% Las investigaciones uturas en este campo podr$an en ocarse en elucidar los mecanismos subyacentes de la modulacin nutricional de la reparacin del DNA# estudiando la regulacin redox as$ como la epigen,tica de las rutas de reparacin del DNA# en adicin a los cambios en la expresin g,nica%

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