You are on page 1of 7

Colinesterasa.

La acetilcolinesterasa: también llamada colinesterasa del glóbulo rojo, colinesterasa eritrocitica,o colinesterasa verdadera, se encuentra principalmente en sangre y sinapsis nerviosa. La butirilcolinesterasa: también conocida como colinesterasa sérica o pseudocolinesterasa, se encuentra principalmente en el hígado, se haya disuelta en el plasma sanguíneo, el corazón, musculo liso, líquido cefalorraquídeo y en los tejidos pancreáticos y nerviosos.

Ambos compuestos catalizan la hidrolisis del neurotransmisor acetilcolina sobrante en el espacio sináptico en colina y ácido acético, reacción necesaria para permitir que la neurona colinérgica retorne a su estado de reposo después de la activación evitando así una transmisión excesiva de acetilcolina, que produciría una sobre estimulación del efector y como consecuencia, debilidad y cansancio. La diferencia entre los dos tipos de colinestersa está en sus respectivas preferencias por sustratos: la primera hidroliza acetilcolina más rápido; la segunda hidroliza butirilcolina colinesterasa más rápido. Cuando los niveles de colinesterasa son bajos por la excesiva inhibición, el sistema nervioso puede funcionar mal, lo cual puede conducir a la muerte. Ciertas familias de pesticidas, como los organofosforados y carbamatos interfieren o inhiben la colinesterasa. Estos productos se utilizan principalmente para controlar plagas de artrópodos. A pesar de que los productos inhibidores de colinesterasa están destinados para control de plagas éstos, en algunas situaciones, pueden ser venenosos o tóxicos para los seres humanos. Las personas pueden entrar en contacto con los químicos inhibidores de colinesterasa a través de la inhalación, ingestión, o contacto por los ojos o piel durante la fabricación, mezcla, o aplicación de estos pesticidas.

INHIBIDORES DE LA COLINESTERASA Dentro de los plaguicidas inhibidores de la colinesterasa se encuentran los organofosforados y carbamatos, que ocasionan el 80% de las intoxicaciones por pesticidas en el mundo. Los organofosforados: Son sustancias clasificadas químicamente como esteres, derivados del ácido fosfórico y ácido fosfonico utilizadas como plaguicidas para el control de insectos; son biodegradables, poco solubles en agua y muy

Carbamatos: Estos compuestos son derivados del ácido carbamico. los receptores muscarinicos de las células efectoras parasimpáticas. traducido clínicamente en un síndrome colinérgico.La acetilcolina es el sustrato natural de la enzima acetil colinesterasa. lo cual limita la duración e intensidad de los estímulos. pues van a formar compuestos carbamilados que pueden potenciar los efectos del inhibidor. También son inhibidores enzimáticos. es básicamente igual a los organofosforados. bronco espasmo. con la salvedad de no utilizar oximas reactivadoras en varios de ellos. miosis.liposolubles. respiratoria u oral a estos plaguicidas. tanto la colinesterasa eritrocitica o verdadera como la plasmática o pseudolinesterasa. Los organofosforados actúan por fosforilizacion enzimática originando una unión muy estable que se considera “irreversible”. disuria. su presentación más frecuente es en forma líquida. En relación al tratamiento. disnea. falla respiratoria. mientras que los carbamatos actúan por carbamilacion de la enzima y esa unión es más débil e inestable. diaforesis. diarrea. broncorrea. sialorrea. El cuadro clínico toxico es similar al estudiado en los organofosforados. Manifestaciones clínicas: Los signos y síntomas de este tipo de intoxicación pueden presentarse dentro de pocos minutos hasta 1 a 2 horas posteriores a la exposición. bradicardia. La transmisión normal de un impulso por la acetilcolina es seguida por una rápida hidrólisis del neurotransmisor (acetilcolina) por parte de la enzima acetilcolinesterasa. lagrimeo. La intoxicación aguda por organofosforados ocurre después de exposición dérmica. Ambos causan perdida de la actividad de la enzima acetilcolinesterasa necesaria en el organismo para la hidrolisis de la acetilcolina. Los síntomas nicotínicos tienden a ser los primeros en aparecer. vomito. nicotínicas o de sistema nervioso central según los receptores colinérgicos correspondientes. . es un transmisor primario neuro-humoral del sistema nervioso. los receptores nicotínicos presentes en la placa neuromuscular y en los ganglios autónomos. permitiendo la acumulación de acetilcolina en la hendidura sináptica y estimulando excesivamente el SNC. lo que la hace reversible.  SíndromeMuscarinico:visión borrosa. Se presenta un deterioro progresivo estableciéndose el cuadro de un síndrome colinérgico agudo cuyas manifestaciones agudas pueden ser de tres tipos: muscarinicas. Mecanismo de acción: Los fosforados orgánicos y carbamatos tienen como acción principal la inhibición de la enzima acetil-colinesterasa. dolor abdominal tipo cólico.

Se utiliza la técnica cuantitativa de Michel & Aldrige para la determinación de la actividad de la acetilcolinesterasa en glóbulos rojos y plasma. Síndrome Nicotínico:Midriasis inicial. La lectura del pH puede hacerse fácilmente en un tiempo de un minuto por cada muestra. ataxia. La cantidad de ácido es medida en términos de cambio de pH producido por la actividad enzimática en una solución tampón estándar en un período de tiempo definido. debidas a la acción nicotínica. ocasionada por una liberación de adrenalina endógena. convulsiones. Dentro de las ventajas de este método se encuentra su simplicidad de ejecución. Método espectrofotométrico enzimático de Harlyn y Ross. Determinación de la enzima acetilcolinesterasa en sangre humana Método potenciometrico: Se realiza la determinación de la actividad de la colinesterasa como biomarcador de efecto. . llegando a generalizarse y persistir aun después de la muerte durante unos minutos debido a la acumulación de acetilcolina en las placas neuromusculares.    Método potenciometrico de Michel.  Síndrome Neurológico: ansiedad. músculos faciales y de los dedos. o en la fase final de la intoxicación por acción nicotínica o parálisis muscular la cual es premonitoria de muerte.Las fasciculaciones musculares. el requerimiento de equipo es mínimo y la posibilidad de realizar un número grande de determinaciones en un tiempo relativamente corto. Método de Ellman.La visión borrosa se presenta en el paciente con inhibición paulatina de las colinesterasas. confusión mental. mialgias. depresión cardio-respiratoria central. Esta técnica se basa en la medida del ácido acético producido por la acción de la acetilcolinesterasa sobre la acetilcolina. Por lo tanto es posible hacer una serie grande de determinaciones en pocas horas agregando el substrato a las muestras en intervalos de un minuto. coma. ocasionada por contactos continuados con el toxico. fasciculaciones musculares.La miosis es un signo característico en intoxicaciones por organofosforados o carbamatos. calambres. Métodos para la determinación de colinesterasa. colapso. se evidencian con frecuencia en los grupos musculares de la región palpebral. pero puede presentarse inicialmente midriasis en la fase primaria de la intoxicación.

proveniente de una persona sana. Patrón de organofosforados Estándar trazable de algún compuesto organofosforado. b) Control positivo: Adicione a una alícuota de la sangre negativa un volumen prudencial de patrón de organofosforado y homogenice.Reactivos Solución buffer pH 8 Disuelva 1. Ajuste a pH 8 utilizando una solución acuosa de HCl 1M y midiendo con el potenciómetro. Debe ser pesada rápidamente y envasada en un recipiente ámbar inmediatamente después de su preparación. debe ser manipulada con mascarilla apropiada y protección para los ojos y piel. puede ser un producto comercial. 2 y 3 respectivamente) .5 g% Disuelva 1. La acetilcolina es altamente higroscópica y fotolábil. por triplicado. Muestra de sangre problema Sangre total en tubo con heparina o EDTA. por triplicado.136 g de fosfato monobásico de potasio y 17. (1. en matraz volumétrico. La saponina es una sustancia hemolítica. Procedimiento Rotular: a) 3 tubos de ensayo como blanco.5 g de cloruro de acetilcolina en suficiente agua destilada y desionizada para completar 100 ml en un matraz volumétrico.237 g de barbital sódico. Muestra de sangre control a) Control negativo: Sangre total en tubo con heparina o EDTA.54 g de cloruro de sodio en suficiente agua recién destilada y desionizada para completar 1000 ml en un matraz volumétrico. 0. Solución de saponina 0. 2 y 3 respectivamente) b) 3 tubos de ensayo como control negativo. no expuesta a inhibidores de las ChEs. (1.02 g de saponina en suficiente agua destilada y desionizada para 100 ml. También puede utilizarse una mezcla de dos productos para obtener un efecto aditivo.02 g% Disuelva 0. Solución de acetilcolina 1.

con la siguiente ecuación: ([pH1 – pH2]/t) *100 Donde: pH1: pH inicial. t: período de incubación expresada en horas. (1. pH2: pH final. 3. Preparación de los Controles y muestras: 1. Asegure que las soluciones buffer de referencia y las muestras se encuentren a la misma temperatura Preparación de los Blancos: 1. Adicionar 100 μL de control/muestra y agitar. Repetir lo anterior con los otros tubos de ensayo restantes Espere aproximadamente un minuto entre la lectura de una muestra y la preparación de la siguiente. por triplicado. 2. Medir el pH inicial de la solución y registre. Repetir lo anterior con los otros 2 tubos de ensayo restantes. Adicionar al primer tubo de ensayo 5 ml de solución buffer. Segunda lectura de pH: Medir el pH de cada blanco/muestra/control después de 60 minutos de la primera lectura. Cálculo: Calcule la actividad de la actividad de la colinesterasa en sangre. 4. Medir el pH inicial de la solución y registre. 2. Adicionar al tubo de ensayo respectivo 5 ml de solución buffer y 5 ml de saponina. expresada como pH/hora. . 2 y 3 respectivamente) Calibrar el potenciómetro utilizando soluciones de referencia pH 4 y pH 7.c) 3 tubos de ensayo como control positivo. 5 ml de saponina y 1 ml de cloruro de acetilcolina y agitar.

En casos de intoxicación por carbamatos. Los valores menores a 91 unidades de pH/hora indican una inhibición de las AChEs. La acetilcolina o butirilcolina es hidrolizada por la AchE o PchE respectivamente produciendo ácido carboxílico y tiocolina que reaccionan con el reactivo de Ellam (DTNB. La Colinesterasa eritrocitaria se regenera a una tasa del 1% por día. En casos de intoxicación leve los niveles de la acetilcolinesterasa se ven generalmente disminuidos entre un 20% y 50% de los niveles normales. . en una intoxicación moderada la depresión resulta del 10% al 20% de lo normal. Método de Ellam: Consiste en una determinación colorimétrica sencilla y rápida utiliza acetil colina como sustrato y valora la tiocolina liberada por la intensidad del color amarillo aparecido al reaccionar esta sustancia con la ditiobinitrobenzoato. La tasa de formación de color es proporcional a la cantidad de acetilcolinesterasa o butirilcolinesterasa. pero cuando se trata de intoxicaciones por organofosforados la inhabilitación de la enzima es definitiva. La Colinesterasa plasmática regenera a una tasa del 25% entre 7 y 10 días y vuelve a la línea de base en 4 a 6 semanas. En la exposición industrial. los trabajadores no deben regresar al lugar de trabajo cuando los valores de colinesterasa se observan reducidos al menos en un 75% de lo normal. mientras que el efecto de una intoxicación severa es una depresión a un nivel menor del 10% de lo normal.Interpretación de resultados:    El valor de referencia es entre 91 pH/hora y 164 pH/hora. ácido ditionitrobenzoico) para formar una coloración amarilla que es medido espectrofotométricamente a 450nm. el efecto inhibitorio es reversible. se forma 5tionitrobenzoato que presenta un fuerte máximo de absorción a 412nm.

Pérez. Fac.B. 8th edition.. Blanca Elvira Cajigas De Acosta. ColombiaL . Rodríguez Restrepo. M. (2009) “A Manual of Laboratory and Diagnostic Tests”. Blanca Elvira. Lippincott Williams & Wilkins. D. T. Salud Pública 2000. Andrés Fernando.S.Bibliografía      Salcedo Alejandra. Noviembre Fonseca Jaime.C. C. U. Palacio Betancourt Diego. (2006) “Curso Taller Toxicología Analítica. Laborde Calderón. Bogotá. Nac. Facultad de Medicina. Palacio Chaverra. Sede Bogotá. Rosa María y Correa Serna. Carlos Jorge. Bogotá. Henao Samuel. González Jaime Fernando y Rodríguez Adriana (2007) Plaguicidas En El Río Bogotá: Efecto En El Pez Captán Y En La Población Que Lo Consume. T. Garcés Rocio (2000) Valores de referencia de actividad colinesterásica sanguínea en población laboral activa no expuesta a plaguicidas inhibidores de colinesterasa. et al. Publicado en la Rev. Bogotá. Dunning..A. 18(2): 55-72 Fischbach. Guía de Laboratorio de Urgencias Toxicológicas” Departamento de Toxicología. Luis Fernando (2008) GUÍAS PARA EL MANEJO DE URGENCIAS TOXICOLÓGICAS MINISTERIO DE LA PROTECCIÓN SOCIA. y Patiño N. Universidad Nacional de Colombia. Colombia.. F. D.. Varona Marcela.