ESCUELA POLITÉCNICA DEL EJÉRCITO

CARRERA INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA
INFORME FINAL DEL PROYECTO INTEGRADOR II-B Nivel: 6to “Determinación de los efectos del aceite vegetal de higuerilla (Ricinuscomunis) sobre cocos gram positivos y bacilos gram negativos” GRUPO DEL PROYECTO ANDRANGO CARLA ONOFRE EMILY
QUITO- 2012-07-11

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Título del proyecto
Determinación de los efectos del aceite vegetal de higuerilla (Ricinuscomunis) sobre cocos gram positivos y bacilos gram negativos.

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JUSTIFICACIÓN

La alelopatía se define como la influencia directa de un compuesto químico (metabolito secundario) liberado por una especie, sobre el crecimiento y desarrollo de otra. Paulatinamente la alelopatía ha ido adquiriendo importancia en el campo de la investigación, agraria, especialmente, para poder eliminar pestes como plagas, enfermedades y malas hierbas de forma natural sin afectar el medio ambiente ni al ser humano. Debido a ello queremos enfocar nuestro estudio en determinar mediante un protocolo adecuado los efectos de una sustancia de carácter anti fúngico elaborada por la planta de higuerilla sobre microorganismos patógenos de los cultivos en el suelo; tales como Fusarium oxysporum. Obteniendo así una forma alternativa y natural de proporcionar a las especies vegetales mecanismos de defensa no sintéticos que les ayuden a luchar contra agentes nocivos para sí mismas. 3 Objeto de estudio Estudiar a la planta de higuerilla, y al hongo para poder realizar la extracción del aceite de ricino y observar su actividad sobre el hongo mencionado. 4 Campo de actuación El aceite extraído se puede aplicar a nivel industrial para mejorar los cultivos erradicando el hongo fácilmente 5

Objetivos ● General
Determinar el efecto que producen los metabolitos secundarios de higuerilla (Ricinus comunis) cuyo compuesto principal es el casbeno del ricino, sustancia con características anti fúngicas, sobre gram positivos y bacilos gram negativos ● Específicos Aislar u obtener la cepa del hongo en el laboratorio de Microbiología. Preparar cultivos de gram positivos y bacilos gram negativos

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Obtener aceite de ricino de la higuerilla (Ricinus comunis) mediante extracción por solventes. Aplicar el aceite de ricino sobre los hongos a diferentes concentraciones. Monitorear la reacción de los hongos, principalmente el porcentaje de mortalidad.

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Hipótesis

HO: Las propiedades anti fúngicas del aceite de ricino promueven la inhibición del crecimiento del cocos gram positivos y bacilos gram negativos  Variable independiente: propiedades anti fúngicas del aceite de ricino.

 

Variable dependiente: inhibición del crecimiento del cocos gram positivos y bacilos gram negativos Variable interviniente: Contaminación.

7 Metodología Extracción de aceite de ricino Extracción por solventes Metodología según Valdez, 2003. Materiales: – Semillas de higuerilla – Hielo – Hexano o éter de petróleo – Matraz – Dedal – Lixiviador – Soxlet – Vaso de precipitación Procedimiento: a) Introducir la muestra de almendra pura o con cáscara. Para evitar que se derramare la muestra, sellar el dedal con grapas y se colocarlo en el lixiviador. b) Introducir el solvente, hexano o éter de petróleo, en el matraz y en el lixiviador manteniendo una relación de 2:1 aproximadamente, 200 ml en el matraz y 100 ml en el lixiviador. c) Al momento de terminar de armar el Soxhlet se hace recircular agua helada (para esto se utiliza el hielo) debido a que la temperatura que alcanza el solvente al momento de evaporarse es mayor a 60 ºC y el agua a temperatura ambiente no alcanza a condensar todo el solvente por lo que habrían pérdidas considerables de solvente. d) Dejar recircular hasta que se extrajera el máximo aceite posible en la mínima cantidad de tiempo posible. e) Retirar el dedal con la muestra y obtener la mayor cantidad de solvente para reutilizarlo. f) Una vez el solvente evaporado de los matraces se procede a juntarlo en un vaso de precipitado. Aislamiento del hongo 8

Marco teórico

Generalidades de la higuerilla Clasificación Taxonómica: Según Cronquist (1981), la clasificación taxonómica de la higuerilla es la siguiente: Reino:Plantae División:Magnoliophyta Clase:Magnoliopsida Orden:Euphorbiales Familia:Euphorbiaceae Género:Ricinus L. Especie:Ricinuscommunis L.

Una de las especies vegetales más conocidas pero quizás no tan aprovechada en el Ecuador es la higuerilla (Ricinuscommunis), miembro de la familia de las Euphorbiaceae y originaria de la India y Etiopía; sus semillas son la fuente de la cual se extrae el famoso aceite de ricino. En forma silvestre se la encuentra como un árbol de varios metros de altura siempre y cuando se halle en condiciones favorables como alto grado de humedad y calor adecuado, en cultivo se la observa como un arbusto de hasta 4m de altura. (N.H César) También conocida como palma cristi, castor, higuera infernal, tertago, higuereta, o ricino, la higuerilla tiene gran capacidad de adaptación y hoy en día es cultivada prácticamente en todas las regiones tropicales y subtropicales, aunque sea típica de regiones semiáridas. (Arango, M)

Descripción Botánica Según Garcés se describe a la planta de la siguiente manera: Tallo: Engrosado, ramificado, segmentado y con nectarios extra florales. Hojas: Diámetro de 10 a 60 cm, peltada, profundamente palmatilobada, con 5 a 9 lóbulos, borde irregularmente dentado-glanduloso; pecíolo largo. Flores: Las flores están dispuestas en grandes inflorescencias, erguidas, que rematan los tallos; en la parte inferior de las mismas están las flores masculinas, con un cáliz, con cinco piezas de 6 a 12 mm de largo, lanceoladas y múltiples estambres soldados, con forma de columna, ramificadas en forma de coliflor. Las flores femeninas de 4 a 8 mm de largo, se encuentran en la parte superior de la panícula, formado por tres hojas carpelares. Florece casi todo el año Frutos y semillas: El fruto es una cápsula trilocular que contiene una semilla por lóbulo de 1.5 a 2.5 cm de largo, exteriormente está recubierto por espinas o púas no punzantes, cortas y gruesas; tiene tendencia a la dehiscencia. La semilla es oval, de tamaño variable entre 5 y 20 mm según variedades. El tegumento es coriáceo, liso, lustroso, marmoreado, tóxico por la presencia de ricina y ricinina. Porcentaje de aceite: 46%. Raíz: pivotante que puede alcanzar hasta 3 m de profundidad constituyéndose el anclaje principal de la planta. Presenta raíces secundarias numerosas y oblicuas, situadas a poca profundidad. Composición de la semilla de higuerilla El producto activo es la ricenina que es altamente tóxica para el hombre y los animales, debiendo tener cuidado con los residuos de este compuesto en la extracción del aceite. (Ramirez M.A)

Toxicidad La semilla contiene una fitotoxina proteica (la ricina) que actúa previniendo la síntesis proteica en los ribosomas. Esta es considerada una de las toxinas vegetales más potentes, pudiendo causar la

muerte a dosis muy bajas. De hecho, la dosis mínima letal para muchos mamíferos por vía intravenosa es de 0.0001 mg/kg; sin embargo, por vía oral es menos tóxica, ya que no se absorbe bien. Por tanto, la toxicidad dependerá en gran medida de que la semilla haya sido masticada o simplemente tragada. (Villar, 2006) Además de presentar esta toxina contiene alcaloides dañinos para nuestro organismo como son la ricidina y la ricinina, con alto efecto tóxico que puede desencadenar desde potentes reacciones alérgicas hasta la muerte. Posee además un potente efecto bloqueador de la síntesis de proteínas en nuestro cuerpo, sobretodo a nivel intestinal, resultando un poderoso veneno. (Talamoni, 2004)

Descripción y caracterización del aceite de ricino El aceite de ricino es un aceite espeso obtenido de la planta del ricino o higuerilla, de coloración desde transparente hasta amarillo o tostado. Es inodoro y presenta un sabor desagradable. Insoluble en agua y soluble en los disolventes orgánicos. El aceite de uso medicinal se prepara a partir de las semillas peladas. El aceite de uso industrial se obtiene de las semillas sin pelar, que rinden del 45% al 55% en peso. Las semillas se prensan, y el compuesto oleaginoso que resulta se purifica decolora. Como medicina, el aceite de ricino es un laxante, pero hoy en día está en desuso porque produce una gran irritación de la mucosa intestinal. En la industria se utiliza como lubricante en determinadas circunstancias (algunos motores de competición), como aditivo para los compuestos de nitrocelulosa, en cosméticos, en productos para aislamiento y en la manufactura de lacas y pinturas resistentes a la humedad. (Palacio, 2001) Debido a sus propiedades antimicóticas es beneficioso para combatir hongos, puesto que el ácido ricinoleico encontrado en el aceite de ricino tiene un alto nivel de propiedades anti-hongos. (Garden, 2008) Características Es un líquido amarillento pálido o casi incoloro, transparente y viscoso, de olor dulce y sabor generalmente nauseabundo; es un aceite no secante; soluble en alcohol, éter, benceno, cloroformo y sulfuro de carbono. La viscosidad del aceite de ricino es de 6,8 cSt a 20°C. La versión oxidada y esterificada se usa como lubricante en la industria de la aviación. (Albarraci, 2008) Composición: El aceite de ricino está compuesto por triglicéridos, específicamente ácido ricinoleico en niveles superiores al 90%, y cantidades inferiores de otros ácidos grasos, como el linoleico (5%), que es poliinsaturado, y los ácidos grasos saturados palmítico y esteárico con valores de un máximo del 2%. Tiene un contenido aceptable de vitamina E, en forma de alfa-tocoferol y una enzima llamada lipasa. (AA. VV, 2000) AcidoRicinoleico AcidoRicinico Acido Oleico Indice De Saponificación Indice De Refracción (25°C) Densidad (15°C) 70% 12% 12% 181% 1,47 0.964

Usos A nivel industrial: Se utiliza en la fabricación de plásticos, pinturas, lubricantes y principalmente se está empezando a usarlo como biocombustible. (Osorno, 1992) A nivel farmacéutico Existen algunos fármacos que son elaborados a base de aceite de ricino y que son aptos para el consumo oral como los destinados a tratar el estreñimiento. No es apto para el consumo

alimentario pues si ingerimos las semillas u otras partes de la planta la toxicidad alta puede ser letal. (Garden, 2008) 9 Resultados esperados Se espera obtener un aceite de ricino viscoso y semi transparente con excelentes propiedades anti micóticas, con la expectativa de un alto porcentaje de mortalidad para el hongo luego de la aplicación del aceite de ricino. 10

Viabilidad ITEM PRESUPUESTARIO Recursos Humanos

CANTIDADES Tiempo 1 año 1 año 1 año

COSTO Costo/hora ---voluntad

Ingenieros (Dra. Alma Koch) Tutores (Ing. Marco Taipe) Estudiantes (Integrantes de grupo)

Materiales Higuerilla Asa Cajas petri Medio de cultivo Fundas Plásticas Incubadora Equipo Soxhlet Vasos de precipitación Matraz Erlenmeyer Tubos de ensayo

Cantidad

Costo

4unidades 30 unidades $ 0,50

50 unidades

$ 1,00

10 unidades 5 unidades

$ 2,00 $ 1,00

SUBTOTAL

59,00

Bibliográficas Internet Viajes

Cantidad 15 (visitas) Numero de días

Costo $ 7,50 Costo

Alimentación

8

$ 15,00

Total de gastos previstos
11 12

$ 115,50

Cronograma Bibliografía

AA. VV. 2000 Gran Enciclopedia de las plantas comestibles y venenosas. Madrid. Servilibro Acurio. R. 2010. Técnicas de prevención y control de Fusarium oxysporumf.sp. dianthi en clavel Dianthuscaryophyllus y su incidencia en la productividad.[En línea] Universidad Técnica De Ambato. Facultad De Ingeniería Agronómica. <http://repo.uta.edu.ec/bitstream/handle/123456789/1868/tesis010%20Gestión%20de%20la%20prod.%20de%20flores%20y%20Frut.....pdf?sequence=1> [Consulta: 10/01/13] AlbarraciAguillon Pedro. 2008. Lubricantes ecologicos , biodegradables y <http://www.ingenierosdelubricacion.com/articulos/lubricantes_ecologicos2.htmh>[Consultado: 03/01/2013] no toxicos.

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