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Universidad Autónoma del Estado de Morelos Facultad de Farmacia

MANUAL DE LABORATORIO DE QUÍMICA ANALÍTICA III

Elaborado por: Fecha de elaboración: Última revisión: Fecha de validación

Dra. Yesenia Herrera Salgado

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OBJETIVO GENERAL.
Conocer los métodos analíticos de separación y los métodos espectroscópicos estructurales más utilizados en la elucidación de una molécula.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS.
  Describir la instrumentación básica y sus características más importantes Conocer los fundamentos teóricos y los parámetros básicos utilizados al describir y analizar las separaciones analíticas, así como adquirir habilidad en el cálculo e interpretación de los mismos.  Comprender los alcances y limitaciones de las técnicas analíticas de separación, conocer los criterios básicos para seleccionar una técnica analítica   de separación particular y los procedimientos de implementación y validación de ésta. Conocer las áreas de aplicación, las generalidades del tratamiento de las muestras y la importancia de las técnicas de separación. Identificar las técnicas espectroscópicas de elucidación estructural de uso más frecuente y comprender la variada información que éstas técnicas pueden proporcionar.  Comprender la teoría básica y el funcionamiento de las técnicas espectroscópicas fundamentales de: Infrarrojo y Resonancia Magnética Protónica.

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COMPETENCIAS.
  El estudiante hará uso de los conocimientos e información adquirida en su clase teórica para aplicarla a la parte práctica de la materia. El estudiante aplicará los fundamentos de técnicas más avanzadas de instrumentación analítica como cromatografía liquida de alta resolución, cromatografía de gases, infrarrojo y resonancia magnética nuclear para el análisis y caracterización química de compuestos y mezclas de compuestos.  El estudiante aplicará las técnicas analíticas necesarias en la elucidación estructural de una molécula que ha sido sintetizada o aislada de algún producto natural.  El estudiante analizará, evaluará y sistematizará información de artículos de arbitraje nacional e internacional para conocer las diversas aplicaciones de las técnicas analíticas.  El estudiante expresará y planteará procedimientos o alternativas que den solución a problemas de validación de métodos analíticos.

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II- C O N T E N I D O
PrNo 1 Título de la práctica Espectros de absorción de K2Cr2O7 y KMnO4 Aplicación del Factor de Dilución en el análisis UV-Visible Determinar la concentración de ácido acetil salicílico en una tableta de cafiaspirina. Determinación de fosforo en bebidas de cola. Aplicación de espectroscopia Visible de Muestras Biológicas Identificación espectroscópica compuestos orgánicos UvObjetivo de la Práctica Determinar por el método espectrofotométrico la concentración de los componentes de una mezcla binaria que absorbe luz en la región visible. Determinar la concentración y absorbancia de soluciones de analitos a partir del factor de dilución. El alumno determinará la concentración de ácido acetil salicílico de una pastilla de cafiaspirina mediante una curva de calibración de estándar externo. El alumno determinará la concentración de ácido fosfórico de una bebida de cola mediante una curva de calibración de estándar interno. Determinar la Proteína en leche por el Método de Bradford Identificar los fundamentos y principios básicos de la Instrumentación de Espectroscopia de Infrarrojo. El alumno identificará los parámetros necesarios para CLAR: Resolución cromatográfica, Factor de capacidad, Eficiencia y Selectividad. Aplicar los conocimientos teóricos adquiridos de CLAR para realizar la cuantificación de cafeína en una tableta de cafi-aspirina. Usar la técnica de CLAR para que el alumno se familiarice con los métodos de cuantificación que se usan en la industria para el control de calidad. Fundamentos, principios básicos instrumentación y experimentos bidimensionales. de uni la y Hrs.

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Conceptos Básicos de cromatografía: Tipos de cromatografía e instrumentos (CLAR y GC). Identificación y cuantificación de cafeína en una tableta de cafiaspirina usando CLAR. Identificación y cuantificación de cafeína en bebidas de cola usando CLAR Fundamentos y principios básicos de la Instrumentación de Resonancia Magnética Nuclear Visita al área analítica del Centro de Investigaciones Químicas-UAEM. Determinación de la Antimicrobiana de Extractos Exposición de investigación un actividad

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Realizar una visita para conocer el área analítica y los instrumentos del centro de investigación y ver sus diversas aplicaciones en la elucidación estructural de una molécula. Se realizará una revisión del método en caja de Petri para determinar la actividad antimicrobiana de la cascara de aguacate. Ayudar al alumno a desarrollar sus habilidades de lectura, redacción y comprensión de trabajos arbitrados de investigación de su área profesional.

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LABORATORIO DE QUÍMICA ANALÍTICA III Práctica No. 1 Espectros de absorción de K2Cr2O7 y KMnO4
SEMESTRE 5 Nº 4 Hrs/sem Nº Créditos 10

I.OBJETIVO. Determinar por el método espectrofotométrico la concentración de los
componentes de una mezcla binaria que absorbe luz en la región visible.

II. INTRODUCCIÓN
En esta práctica se darán a conocer las características generales y conceptos relacionados con la espectrofotometría. A continuación y tras la explicación del funcionamiento del espectrofotómetro se harán espectros de absorción con el fin de determinar la longitud de onda donde la muestra presenta la máxima absorción, y tras realizar las correspondientes gráficas se determinarán las absortividades molares a diferentes longitudes de onda. El espectro de absorción es una representación gráfica que indica cantidad de luz absorbida (ε) a diferentes valores de λ. A partir de una solución diluida de un compuesto, cuya absorbancia máxima entra dentro del rango de medida del espectrofotómetro, se verá el valor de absorbancia a diferentes longitudes de onda frente a un blanco que contenga el disolvente de la solución de la muestra a caracterizar. A partir del espectro de absorción se obtendrá el valor de λ al que el compuesto presenta la mayor absorbancia ( λ
max

). Dicho λ se

utilizará a la hora de hacer determinaciones cualitativas y cuantitativas del compuesto. El espectro de absorción de un cromóforo depende fundamentalmente de la estructura química de la molécula. Se prepararan soluciones de KMnO4 y K 2Cr2O7 en medio ácido, lo suficientemente diluidas para obtener un error relativo mínimo en la medición de la absorbancia. Se corren por separado en el espectro las dos soluciones, así como el de una mezcla de ambos de composición desconocida.

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III.Realizar una gráfica para cada compuesto y de la mezcla binaria. INVESTIGACION PREVIA a) ¿Cómo se puede determinar la absorción máxima de compuestos cromóforos? IV. -3 V. 5.446 x 10-3 M. VI.. 4. Se preparan 10 ml de KMnO4 1. 2. EQUIPO. Se hace un barrido en la región visible (380-750 nm) de cada una de estas soluciones.446 x 10 M. 725 nm). MATERIALES Y REACTIVOS Cantidad 1 1 3 3 Material Espectro Uv-Vis Celda de polietileno Matraces aforado 10 ml Pipetas de 5 ml Cantidad 10 mL 10 mL Reactivos de KMnO4 1. Agua H2SO4 conc. Registrar el máximo de absorción de la solución de KMnO 4. Preparar 10 ml de una mezcla 50:50 de ambas soluciones y realizar un barrido en la región visible (380-750 nm). realizar varias lecturas a diferentes longitudes de onda para encontrar el máximo de absorción ( λ= 380. K2Cr2O7 y de la mezcla. Si el equipo no cuenta con una lámpara que haga el barrido completo de las soluciones. 525.-Registrar las absorbancias de cada una de las lecturas a las diferentes . RESULTADOS.793 x 10-4 M de K2Cr2O7 1. PROCEDIMIENTO 1. 3.793 x 10-4 M y 10 ml de K2Cr2O7 1. 1. 435. Muestra KMnO4 K2Cr2O7 KMnO4 + K2Cr2O7 A380 A435 A525 A630 A725 2. 6 . 630.

435 = A2.2 = a1.435.2 b c2 Nota 1: c1 se refiere a la concentración de KMnO4 en la mezcla. considerando que en la mezcla se tienen las siguientes relaciones: A435.2 b c2 (i) o bien: A435.2/c2 3. en mol/L) o A = abc (c.435. 1. en g/L).525 = A1.-Sabemos que A = εbc (c. ε = a (MM).2 b c1 + a2. 2. 7 . 525. Encontrar la concentración de KMnO4 y de K2Cr2O7. 435. por lo tanto calcular para: KMnO4 ε1. 435.2 b c1 + a2.525. c2 se refiere a la concentración de K2Cr2O7 en la mezcla.2 = a1.435.2/c2 ε2.525 = A2.525. = ε1.2 = ε1.2/c1 K2Cr2O7 ε2.VII. 435.2/c1 A1.2 b c2 A525. CUESTIONARIO.2 b c1 + ε2.-Diga cuál es la región del espectro electromagnético que corresponde a Ultravioleta-Visible. 525. 435.

Determinar la concentración y absorbancia de soluciones de analitos a partir del factor de dilución. III.LABORATORIO DE QUÍMICA ANALÍTICA III Práctica No. INTRODUCCIÓN Cuando se requiere el análisis de muestras concentradas es necesario realizar diluciones.Salisílico 1 g/L Ac.OBJETIVO. INVESTIGACION PREVIA a) ¿Cómo se determina el factor de dilución? b) Ley de Lambert y Beer c) ¿Qué es una solución y una disolución? IV. 2 Aplicación del Factor de Dilución en el análisis UV-Visible SEMESTRE 5 Nº Hrs/sem 4 Nº Créditos 10 I. EQUIPO. ya que concentraciones altas interfieren las mediciones analíticas debido a la saturación de analito. Benzoico 1 g/L 8 . El factor de dilución es necesario considerarlo en estas diluciones para conocer la concentración final de la solución y lo podemos calcular de la siguiente manera: Factor de dilución= Volumen total / volumen de alícuota. MATERIALES Y REACTIVOS Cantidad 1 1 3 Material Espectro Uv-Vis Celda de cuarzo Matraces aforado 25 mL Reactivos Difenilamina 1 g/L Ac. II.

Tomar 2.Repetir el mismo procedimiento para el Ac. Esta dilución etiquetarla como D2.5 ml de D1 y aforarla a 10 ml con agua destilada. CUESTIONARIO.5 ml de Ac.V.Tomar 2. 5.¿Cómo interpretas los resultados obtenidos de acuerdo a la ley de Lamber y Beer? 9 .-Medir la absorbancia de cada una de estas diluciones a 247 nm. a) Anotar los resultados en la siguiente tabla.. de cada dilución a las diferentes . Esta dilución etiquetarla como D3 4.. RESULTADOS.. Esta dilución etiquetarla como D1 2. VII. Benzoico a 240 nm y difenil amina a 280 nm.5 mL de D2 y aforarla a 10 ml con agua destilada.-Tomar 2. VI. Muestra 1 2 3  247 nm 240 nm 280 nm Absorbancia D1 Absorbancia D2 Absorbancia D3 b) Realizar una gráfica para cada compuesto de acuerdo a la ley de Lamber y Beer que incluya la concentración respecto a la absorbancia. PROCEDIMIENTO 1. 3. Salicílico (1 g/L) y aforar a 10 ml con agua destilada.. 1.

El alumno determinará la concentración de ácido acetil salicílico de una pastilla de cafiaspirina mediante una curva de calibración de estándar externo.OBJETIVO. III. Celda de Cuarzo Tubos de ensayo Micropipeta de 25-200l Micropipeta de 200-1000 l Cantidad 10 ml 50 ml 1 1 REACTIVOS Descripción Ac. PROCEDIMIENTO. INTRODUCCIÓN La cuantificación de un principio activo puede determinarse mediante diferentes métodos analíticos. II. INVESTIGACIÓN PREVIA a) Métodos de cuantificación de principios activos mediante la técnica de estándar externo e interno. Salicílico 1g/l Etanol Pastilla de cafi-aspirina Mortero V. IV. 10 . SEMESTRE 5 Nº Hrs/sem 4 Nº Créditos I. 2. Filtrar la solución con un embudo de vidrio a un matraz aforado de 50 ml y aforar con agua. MATERIALES Y REACTIVOS EQUIPO Y MATERIALES Cantidad 1 1 20 1 1 Descripción Espectrofotómetro UV-Vis.LABORATORIO DE QUÍMICA ANALÍTICA III Práctica No. 3 Determinar la concentración de ácido acetil salicílico en una tableta de cafi-aspirina. EQUIPO. 1. entre ellos encontramos el método de estándar externo. Triturar una pastilla de cafiaspirina en un mortero y agregar 5 ml de etanol.

3. extrapolar los valores de absorbancia y determinar la concentración de cada una de las diluciones realizadas. Dilución 20µl 50µl 80µl 100µl 140µl 150µl 200µl Absorbancia Concentración (g/l) Abs Conc. A partir de esta solución preparar varias diluciones para su cuantificación. Acido Salicílico 10µl 20µl 30µl 40µl 50µl 60µl 70µl Volumen Destilada de 1990µl 1980µl 1970µl 1960µl 1950µl 1940µl 1930µl Agua Volumen aforar total al 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2. RESULTADOS Mediante la curva de calibración realizada en la práctica 2.- Una vez agregadas los volúmenes a cada tubo leer en el espectrofotómetro y obtener las absorbancia de cada uno.3.Leer absorbancia a 247nm..(g/L 11 . VI.

.Multiplicar el valor obtenido de las concentraciones por el factor de dilución.VII. 12 . 1.. 2.Calcular las concentraciones teóricas para cada una de las diluciones. CUESTIONARIO.

MATERIALES Y REACTIVOS EQUIPO Y MATERIALES Cantidad 1 1 1 1 Descripción Espectrofotómetro UV-Vis. III. un refresco de cola tiene ácido fosfórico. para que el fosforo pueda medirse espectrofotométricamente en esta práctica. 4 Determinación de fosforo en bebidas de cola SEMESTRE 5 Nº Hrs/sem 4 Nº Créditos I. IV. los daños pueden ir más allá.056 g 2 Lt REACTIVOS Descripción Fosfato diácido (KH2PO4) de potasio Molibdato de amonio Ácido ascórbico Agua desionizada 13 . Sin embargo.1915 g 0. INTRODUCCIÓN Se piensa que los refrescos de cola son bebidas relativamente inofensivas y que un excesivo consumo de estos productos no causa más daño que caries dental y aumento de peso debido al alto contenido de azúcar. cafeína y nuez de cola.7800 1. INVESTIGACIÓN PREVIA a) Investigar la reacción que se lleva a cabo entre el fosforo y los ácidos molíbdicos. Además de azúcar. II. El alumno determinará la concentración de ácido fosfórico de una bebida de cola mediante una curva de calibración de estándar interno.OBJETIVO. El fósforo está íntimamente relacionado con el calcio tanto en la nutrición humana como en la absorción de este mineral. EQUIPO.LABORATORIO DE QUÍMICA ANALÍTICA III Práctica No. y estos elementos pueden llegar a causar diferentes trastornos al organismo. Celda de plástico Matraz Aforado de 1 l Micropipeta de 25-200l Cantidad 0.

7800 g de molibdato de amonio en 39 mL de agua. b y c. Mezclar a. Preparación de Soluciones a) Solución stock de P2O5 1.1915 g de KH2PO4 seco. Diluir la solución anterior a una concentración final de 4 ppm de P 2O5 c) Solución reductora 1. Todo el material utilizado fue lavado previamente con agua desionizada. Preparación de la curva de calibración 14 . y aforar a 250 mL con agua desionizada. b) Solución de trabajo 1.056 g de ácido ascórbico en 60 ml de agua. Disolver con agua desionizada y aforar a 1000 ml. c) 11 ml de H2SO4 concentrado en 125 ml de agua. Se compone de tres reactivos: a) 0. 2. PROCEDIMIENTO. Pesar 0. b) 1. Esta solución contiene 100 ppm de P2O5.3 1 1 1 7 1 1 1 5 2 1 1 Vaso de pp de 100 ml Vaso de pp de 250 ml Matraz aforado de 250 ml Micropipeta de 200-1000 l Matraces aforados de 10 ml Horno a 50 C Matraz aforado de 50 ml Matraz aforado de 1 l Pipetas de 5 ml Pipetas de 10 ml Probeta de 50 ml Probeta de 25 ml o 11 mL 1 250 mL 1ml 250 ml H2SO4 Espectrofotómetro a 740 nm Solución Reductora Refresco de desgasificado cola totalmente Solución stock de P2O5 V.

Se graficaron los valores de absorbancia contra concentración (figura 1).Mediante la curva de calibración realizada.8 1.6 y 2 ppm. 4 ml de solución reductora y se aforaron a 10 ml con agua desionizada.4 0. 3. 2.6 2 Absorbancia Concentración (g/l) 15 . Se incubaron durante 45 minutos a 50ºC. De esta solución se tomó 1 ml. 0. Pepsi-Cola y Coca-Cola Light. se añadieron 4 ml de solución reductora y se aforó a 10 ml con agua desionizada. Se tomó 1 ml de refresco desgasificado y se aforó a 50 ml. 4 y5 ml respectivamente de solución de trabajo. Después del tiempo de incubación se leyó la absorbancia a 740 nm frente a un blanco.2. Se trabajaron seis muestras de cada refresco y las determinaciones se realizaron por triplicado. Se calculó el promedio y el coeficiente de variación para evaluar la reproducibilidad del método. VI.8. Se trabajó con refrescos de cola (Coca-Cola. Se prepararon 5 estándares en matraces aforados de 10 ml correspondientes a 0.2 1. 1.1. extrapolar los valores de absorbancia y determinar la concentración de cada una de las diluciones realizadas de las bebidas de cola. Dilución (ppm) 0.4. RESULTADOS 1.. Preparación de la muestra 1. 1. A cada matraz se añadieron 1. Pepsi Light y Pepsi Max) los cuales fueron desgasificados con vacío y agitación constante.

Realizar una gráfica de la curva patrón extrapolando el resultado de la muestra problema. CUESTIONARIO. 16 . Curva de calibración para fósforo. Compare con los demás equipos los resultados obtenidos de las diferentes bebidas de cola y llegue a una conclusión. 1.2. VII.. Calcular cuál es el factor de dilución para cada muestra de la curva estándar y de la muestra problema 2. Figura 1.

INVESTIGACION PREVIA a) ¿Cuál es la reacción que se está llevando a cabo en la prueba? b) ¿Cuáles pueden ser las limitaciones del procedimiento? c) ¿Para qué tipo de padecimiento se pide determinar proteína en orina o sangre? IV. hormonas. Todas las pruebas colorimétricas de análisis clínicos utilizan este equipo para determinar la concentración de biomoléculas importantes en los seres vivos. II. tales como proteínas. INTRODUCCIÓN El rango de aplicaciones de la Espectroscopia Uv-Visible abarca varias ramas de la investigación biomédica básica. MATERIALES Y REACTIVOS EQUIPO Y MATERIALES Cantidad 1 5 3 6 1 1 Descripción Espectrofotómetro Uv-Vis Cubetas de plástico de 1 cc Tubos para centrifuga Tubos de ensayo Vaso de pp 100 ml Vaso de pp 250ml 17 1 1 Agua destilada Agua bidestilada Cantidad REACTIVOS Descripción Suero o Plasma Kit de Colesterol . etc. III.LABORATORIO DE INSTRUMENTACIÓN ANALÍTICA III Práctica No. Determinación de Proteína en leche por el Método de Bradford. ácidos grasos. enzimas. En años pasados se hacía uso de herramientas menos exactas y requería más tiempo del operario y actualmente con esta técnica se disminuyeron los tiempos y se mejoró la exactitud de las pruebas.5 Aplicación de Espectroscopia Uv-Visible de Muestras Biológicas SEMESTRE 5 Nº Hrs/sem 4 Nº Créditos OBJETIVO. EQUIPO.

22 a 0. agua (µl) 280 Bradford (ml) A 25 275 2. leche (µl) 20 V. total 2. PROCEDIMIENTO 1) Preparar la curva patrón de albumina en un rango de 0.22 0.5 ml V.044 ug/ml 2) Realizar la curva de calibración leer al espectrofotómetro a 595 nm 3) Realizar diferentes diluciones de acuerdo a la siguiente tabla. a continuación realizar las diferentes diluciones de acuerdo con la siguiente tabla: Leche diluida V.044 60 µl 40 µl 20 µl 40 µl 60 µl 80 µl 100 µl 100 µl 100 µl 2.5 ml 2.5 B 30 270V.176 Volumen tomado de la 1ra concentración (0.088 0.132 0.5 ml 2.5 300 300 300 C 1) Preparar tres diluciones de la curva estándar y leer al espectrofotómetro a 595 nm.5 ml 0. 18 .5 2.22 µg/ ml) 0 µl 80 µl Volumen agregado de agua desionizada 0 µl 20 µl Volumen final de proteína problema 100 µl 100 µl volumen agregado de Bradford 2.5 ml 2. 4) Preparación de tres diluciones de la muestra problema: Hacer una dilución 1:20 de la leche comercial.1 Piseta CONCENTRACION (µg/ ml) 0.

pendiente y ordenada a la origen. Dar el resultado en gramos de proteína por 100 ml de leche. Alternativamente. interpolar la absorbancia obtenidas sobre la recta representada para saber la cantidad de proteínas presentes en cada una de ellas. haga el cálculo mediante la pendiente de la recta. y concentración en eje X de cada uno de los tubos que contenían las soluciones de albúmina bovina frente a la cantidad de proteínas correspondiente. determine la ec. calcúlese la concentración de proteínas en la muestra analizada. con el error o desviación estándar (r2) b) Para las tres diluciones del problema. 19 . De la recta. c) Teniendo en cuenta los volúmenes de muestra usados en cada caso y teniendo en cuenta la dilución realizada.RESULTADOS a) Elaboración de la recta patrón. Para ello hacer una gráfica de dispersión con absorbancia en eje de las Y.

Si esta banda se observa.PROCEDIMIENTO Para interpretar un espectro de IR. que significa por debajo del rojo. proviene de la observación por primera vez al dividir la luz solar en diferentes colores por medio de un prisma que separaba la luz en su espectro de manera que a ambos extremos aparecen visibles los componentes del rojo al violeta (en ambos extremos). Si una banda C::O está presente. IV. En este momento. 20 .LABORATORIO DE INSTRUMENTACIÓN ANALÍTICA III Práctica 6 Identificación espectroscópica de compuestos orgánicos SEMESTRE 5 Nº Hrs/sem 4 Nº Créditos I. III. se necesita consultar la tabla al final en la sección VI de esta práctica. un éster.OBJETIVO. tú puedes no ser capaz de distinguir un aldehído de la cetona y no se te pedirá que lo hagas. INTRODUCCIÓN El nombre de infrarrojo. checa para grupos alcoholes y ve al paso 3. INVESTIGACIÓN PREVIA a) Instrumentación y tipos de infrarrojo b) Como interpretar un espectro de IR. es más fácil si sigues los siguientes pasos: 1. un aldehído o cetona. Fundamentos y principios básicos de la Instrumentación de Espectroscopia de Infrarrojo. busca otras asociadas con grupos funcionales que contienen un carbonilo y ve al paso 2. II. Esta banda es usualmente la absorción mas intensa en el espectro y debe tener una anchura media. Si no hay una banda C::O presente. se debe determinar si es parte de un ácido. 2. Observa primero si hay una banda intensa para el grupo carbonilo C::O en 1820-1660 cm -1.

ESTER ALDEHYDO CETONA 3. C :: C. No habrá banda O-H. Las bandas débiles de absorción de CH de aldehído van a estar ausentes. 5. Busca la banda de carbonilo cerca de 1725-1700 cm-1. es posible que tenga un alcano. Busca la banda de carbonilo -1 alrededor de 1740-1720 cm . Esta banda puede traslaparse con la banda C-H de estiramiento. ALCANO La absorción principal debe ser un estiramiento C-H cerca a 3000 cm-1. ALCOHOL Busca una banda ancha para OH cerca de 3600-3300 cm-1 y una banda de absorción de CO cerca de 1300-1000 cm-1. Si no se encuentran bandas de carbonilo. También habrá una banda de enlace sencillo CO alrededor de 1100-1300 cm-1. checar si hay dobles enlaces. dobles enlaces que aparecen como absorciones media a fuertes en la región de 1650-1450 cm-1. Busca las bandas de absorción de tipo aldehído C-H. con una absorción a la derecha de 667 cm- 21 . ni bandas de OH en el espectro. Busca una banda de mediana intensidad para la absorción de CO cerca de 1300-1000 cm-1. La banda de estiramiento CH es mucho más débil que en los alquenos. Si el espectro todavía no puede ser asignado es posible que tenga un bromuro de alquilo. Debe haber una banda de estiramiento CH cerca de 3000 cm-1. Estas son dos absorciones débiles a la derecha del estiramiento CH cerca de 2850 cm-1 y 2750 cm-1 y son causadas por el enlace CH.ACIDO Mira las indicaciones para cuando un O-H está presente. Si no aparecen en el espectro bandas de carbonilo. busca bandas para el grupo alcohol O-H. 6. AROMÁTICO Busca para el benceno. Busca una absorción débil cerca de 1650 cm -1 para un doble ALQUENO enlace. Busca la banda de CO carbonilo alrededor de 1725-1705 cm-1.El espectro debe ser simple con otra banda cercana a 1450 cm-1. En general tiene una absorción cercana a 3300-2500 cm-1. 4. Si ninguno de los grupos anteriores se puede identificar. BROMURO DE ALQUILO Busca el estiramiento CH y un espectro relativamente simple. que forma parte del grupo funcional aldehído CHO. C :: C. de un aromático o un alqueno.

Se sabe que uno de los compuestos es metanol CH3OH. A B 22 . C6H12 y el tercero es octanol C8H16O. Justifica tus respuestas mencionando qué banda fue usada para verificar las identidades. B y C usando el espectro de IR. qué grupo funcional produce la banda y si la banda es de estiramiento o angular en el grupo funcional. B y C. 1. Se han dado una serie de muestras orgánicas A.PROBLEMAS Por equipo analiza los siguientes problemas y posteriormente elige a un representante para explicar la resolución del que te indique el profesor de la asignatura.V. Necesitas identificar A. otro es ciclohexano.

La escena del crimen estaba muy contaminada con una mezcla de hidrocarburos. Analiza el espectro IR y contesta las siguientes preguntas: a) ¿Está la ropa del acusado contaminada con un hidrocarburo? b) ¿Podría esta evidencia espectral poner al sospechoso en la escena del crimen? Justifica tus respuestas usando la información del espectro IR 23 . ácidos o alcoholes presentes. aldehídos. Se tiene el espectro IR de un líquido orgánico que se encontró en las ropas de un criminal. pero no hubo cetonas.C 2.

-Predice la estructura del compuesto que presenta el siguiente espectro de IR.3. 24 . 4. Predice la estructura del compuesto que presenta el siguiente espectro de IR.

5. 25 . Predice la estructura del compuesto que presenta el siguiente espectro de IR.

usualmente fuerte O-H (H-enlazado).) 26 Débil N-H (1°-aminas). usualmente marcado C-O 600-700 Fuerte C-H deformación 690-900 Fuer-med C-H ángulo & anillo en bote 1600 1500 Alcoholes & Fenoles & Meddébil Variable 3580-3650 3200-3550 970-1250 1330-1430 650-770 Mediana Var-débil Fuerte O-H ángulo (en el plano) O-H ángulo (fuera del plano) Fuerte Aminas 3400-3500 (dil. soln.) 3300-3400 (dil.VI. Tabla de frecuencias de absorción en el Infrarrojo. reduce la intensidad) C=C alargamiento asimétrico 880-995 780-850 675-730 Mediana Alquinos 3300 Fuerte 2100-2250 Arenos 3030 Variable Variable C-H (usualmente marcado) C≡C (simetría. reduce la intensidad) C-H (pueden ser algunas bandas) C=C (en anillo) (2 bandas) (3 si es conjugado) O-H (libre). Información detallada acerca de las absorciones en IR se pueden observar en la siguiente tabla: Vibraciones de Alargamiento Grupos Funcionales Alcanos Rango (cm 1 ) 2850-3000 - Vibraciones de Angulo Rango(cm ) 1350-1470 1370-1390 720-725 -1 Intensid ad Fuerte Asignación CH3. CH2 & CH 2 o 3 bandas Intensida d Mediana Mediana Débil Fuerte Mediana Asignación CH2 & CH3 deformaci ón CH3 deformaci ón CH2 rocking =C-H & =CH2 (ángulo fuera del plano) cis-RCH=CHR Alquenos 3020-3100 1630-1680 Mediana Variable 1900-2000 Fuerte =C-H & =CH2 (usualmente marcado) C=C (simetría. soln. 2 bandas N-H (2°-aminas) C-N 1550-1650 660-900 Med-Fuer Variable NH2 tijera (1°aminas) NH2 & N-H wagging (desplazamien to H- Débil .

I sotiocianato s.1000-1250 Aldehídos & Cetonas 26902840(2 bandas) 1720-1740 1710-1720 16 90 16 75 17 45 17 80 Ácidos Carboxílicos & Derivados 2500-3300 (ácidos) traslape CH 1705-1720 (ácidos) 1210-1320 (ácidos) 1785-1815 ( haluros de acilo) 1750 & 1820 (anhídridos ) 1040-1100 1735-1750 (esteres) 1000-1300 16301695(amid es) Nitrilos Isocianatos. β-insaturada ciclopentanona ciclobutanona 1350-1360 1400-1450 1100 Fuerte Fuerte Mediana enlazado) α-CH3angular α-CH2 angular C-C-C angular Fuerte Fuerte Fuerte Fuerte Fuerte Fuerte O-H (muy ancha) C=O (H-enlazado) O-C (algunas veces 2-picos) C=O 1395-1440 1590-1650 Mediana Mediana Fuerte Medfuerte C-O-H angular N-H (1°amida) II banda N-H (2°-banda amida) II 1500-1560 Mediana Fuerte Fuerte Fuerte Fuerte Fuerte Fuerte C=O (2-bandas) O-C C=O O-C (2-bandas) C=O (amida I banda) Mediana Mediana C≡N (fuerte) -N=C=O. Azidas & cetenas 2240-2260 2100-2270 Mediana Mediana Fuerte C-H (aldehído C-H) C=O (aldehído saturado) C=O (cetona saturada) aril cetona α. -N=C=S -N=C=N-. C=C=O 27 . -N3. Diimidas.

Posteriormente se organizarán los equipos de trabajo de cada sesión para resolver los problemas de la sección V. 28 . e) Eficiencia. b) Platos teóricos. Esta separación se logra utilizando un sistema bifásico: fase estacionaria donde se retienen los compuestos a separar y fase móvil que desplaza de forma diferencial los compuestos a través de la fase estacionara.LABORATORIO DE INSTRUMENTACIÓN ANALÍTICA III Práctica 7 Conceptos Básicos de cromatografía: Tipos de cromatografía e instrumentos (CLAR y GC). c) Tipos de soportes para fase estacionaria y disolventes para fase móvil. El alumno conocerá los parámetros necesarios para CLAR: Resolución cromatográfica.OBJETIVO. III. f) Tiempo de retención. e) Volumen muerto. IV. g) Selectividad. d) Factor de Capacidad. II. asignados por el profesor. Eficiencia y Selectividad. Factor de capacidad. INTRODUCCIÓN La cromatografía es una técnica que permite separar los componentes de una mezcla. PROCEDIMIENTO Se explicará al alumno las partes de un cromatógrafo de líquidos y gases y los parámetros que se pueden obtener a partir de un cromatograma. INVESTIGACIÓN PREVIA a) Resolución cromatográfica. SEMESTRE 5 Nº Hrs/sem 4 Nº Créditos I.

3.8 4. ¿Cuál de las siguientes columnas de 15 cm tienen esta especificación? T´r (min) 9.8 min y un T0 de 0. 29 .4 0. 1. 6 puntos 4.5 min.V. ¿Cuáles son los componentes básicos de un equipo de HPLC y un cromatógrafo de gases? Puedes realizar un diagrama de flujo para la respuesta. Predice el orden de elusión del primero al último de los siguientes esteroides separados en una columna de fase reversa ODS con una fase móvil metanol: agua 60:40. Realiza una tabla con los tipos de detectores que puedes encontrar para un cromatógrafo de gases y líquidos.6 y 6.2 5. la actividad en línea que realizaste y a la información dada por el profesor en esta sesión. De acuerdo a la investigación previa.5 W1/2 (min) 0. 2. analiza los siguientes problemas y propón una solución. PROBLEMAS. Un procedimiento de operación estándar dice que una columna debe tener una eficiencia >30000 platos teóricos/m. Calcular el factor de capacidad y la selectividad del analito A y B cuyos T`r son 5.

señala si la separación fue adecuada o no. justifica tu respuesta con base a los parámetros que se toman en cuenta en HPLC. del siguiente cromatograma.6. De acuerdo a los conocimientos adquiridos. 30 .

MATERIALES Y REACTIVOS EQUIPO Y MATERIALES Cantidad 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 Descripción Cromatografo líquidos Columna reversa) Sonicador Detector Ultravioleta Equipo Millipore Mortero Matraz aforado de 50 ml Embudo de vidrio Papel filtro Probeta de 100 ml 31 REACTIVOS Cantidad de 1 l (fase 250 ml 5 mg/10 ml 1 Descripción Agua grado HPLC Metanol grado HPLC Std. INTRODUCCIÓN La CLAR es una técnica que podemos usar para cuantificar y validar la cuantificación de principios activos de manera certera. INVESTIGACIÓN PREVIA a) Cuantificación de principios activos por CLAR. Aplicar los conocimientos teóricos adquiridos de CLAR para realizar la cuantificación de cafeína en una tableta de cafi-aspirina. EQUIPO. IV.OBJETIVO. III. cafeína Pastilla de cafiaspirina C18 . II.LABORATORIO DE INSTRUMENTACIÓN ANALÍTICA III Práctica 8 Identificación y cuantificación de cafeína en una tableta de cafiaspirina usando CLAR SEMESTRE 5 Nº Hrs/sem 4 Nº Créditos I.

7.1 Pipeta de 5 ml V. 6..La preparación de la muestra problema se va a realizar de la siguiente manera: a) Triturar la tableta de cafiaspirina y agregar 5 ml de Metanol grado HPLC.-Una vez estabilizado el equipo.. 8.60 y 100 ppm). Posteriormente se realizan las inyecciones en el cromatógrafo por triplicado de 20 µL (de menor a mayor concentración). 10.Primero se realiza la preparación de la curva estándar con 5 concentraciones. preparar al menos dos diluciones para inyectar 20 µL en el cromatógrafo de líquidos y poder cuantificar la cafeína con la curva estándar que se preparó en el paso 5. al igual que la muestra.A partir de la solución A que se preparó en el paso 7.Purgar las bombas peristálticas y estabilizar el equipo. 1. editar el método con el flujo de 1 ml/min. 32 .. b) Filtrar la solución con la ayuda de un embudo de vidrio papel filtro a un matraz aforado de 50 ml. PROCEDIMIENTO. c) Aforar con agua grado HPLC y etiquetar como solución A. longitud de onda de 272 nm. fase móvil de 80:20 Agua: Metanol para proceder con la inyección de la muestra.. 5. 2. a partir de una solución stock de cafeína de 0.Una vez filtrados los disolventes se procede a colocarlos en los reservorios y se enciende el cromatógrafo... 3. 4.Previo al funcionamiento del equipo se necesita preparar la fase móvil filtrándola y desgasificándola. 20.5 mg/ml (6.

y la concentración de cafeína en el eje de las X.. Área (Y) total Factor de Dilución Concentración (FD) (X) Muestra D1 D2 2.-En la siguiente tabla anota los datos de las muestras problema analizadas por CLAR. como se describe en el ejemplo de abajo. RESULTADOS. en donde se graficará el área total del pico de la cafeína en el eje Y. 1. 33 . Posteriormente de determinará la ecuación de la recta para sustituir el valor de Y de la muestra problema y así determinar su concentración (X).Solución A 60µl (D1) 70µl (D2) Volumen de Agua Destilada 1940µl 1930µl Volumen total al aforar 2ml 2ml VII.Se determinará la concentración de cafeína mediante el análisis de una curva estándar de cafeína.

¿Qué parte de la técnica podrías modificar para obtener el resultado esperado? 3.-Compara los resultados con el de los otros equipos de trabajo y emite una conclusión de la técnica empleada para la cuantificación de cafeína usando la CLAR.CUESTIONARIO 1. 34 .-En caso de que el resultado no haya sido el que reporta el fabricante.¿La concentración encontrada en la dilución analizada corresponde a los mg de la tableta que indica la caja? 2..VIII.

35 .

9 Identificación y cuantificación de cafeína en bebidas de cola usando CLAR SEMESTRE 5 Nº Hrs/sem 4 Nº Créditos I. OBJETIVO. MATERIALES Y REACTIVOS EQUIPO Y MATERIALES Cantidad 1 1 1 1 1 1 36 REACTIVOS Cantidad de (fase 1l 250 ml 5 mg/10 ml 1 Descripción Agua grado HPLC Metanol grado HPLC Std. y aleja la pesadez y la fatiga. Como se mencionó en la práctica 4 la cafeína es un alcaloide que estimula la corteza cerebral. INTRODUCCIÓN Las llamadas bebidas ligeras que tienen sabor de cola contienen cafeína puesto que están elaboradas con las semillas del árbol cola acuminata. III. II. INVESTIGACIÓN PREVIA a) Investiga el porcentaje de cafeína presente en las semillas del árbol cola acuminata. produce un pensamiento rápido y claro. sin embargo también causa algunos daños asociados principalmente con la descalcificación de los huesos. Usar la técnica de CLAR para que el alumno se familiarice con los métodos de cuantificación que se usan en la industria para el control de calidad.LABORATORIO DE INSTRUMENTACIÓN ANALÍTICA III Práctica No. EQUIPO. IV. cafeína Pastilla de cafiaspirina Descripción Cromatógrafo líquidos Columna reversa) Sonicador Detector Ultravioleta Equipo Millipore Mortero C18 .

20. 5. Posteriormente se realizan las inyecciones en el cromatógrafo por triplicado de 20 µL (de menor a mayor concentración). 37 . b) El filtrado obtenido se inyecta directamente en el cromatógrafo en donde se instaló una columna de fase inversa octadecilsilano de 150 X 4. 1. longitud de onda de 272 nm. 60 y 100 ppm).-Una vez estabilizado el equipo.Purgar las bombas peristálticas y estabilizar el equipo 4. 2. fase móvil de 80:20 Agua: Metanol para proceder con la inyección de la muestra. PROCEDIMIENTO.6 mm y con un tamaño de partícula de 5 mm.45 mm de diámetro..1 1 1 1 1 Matraz aforado de 50 ml Embudo de vidrio Papel filtro Probeta de 100 ml Pipeta de 5 ml V.Una vez filtrados los disolventes se procede a colocarlos en los reservorios y se enciende el cromatógrafo.. 7..Primero se realiza la preparación de la curva estándar con 5 concentraciones. al igual que la muestra. editar el método con el flujo de 1 mL/min. 6. 3.5 mg/ml (6...La preparación de la muestra problema se va a realizar de la siguiente manera: a) La bebida de cola tiene que ser desgasificada previamente y filtrada con el kit para muestras con un filtro millipore de 0. a partir de una solución stock de cafeína de 0. 10.Previo al funcionamiento del equipo se necesita preparar la fase móvil filtrándola y desgasificándola.

Poster. RESULTADOS. tamaño de la diapositiva.VI. De la práctica que realizaste elabora un poster que incluya lo siguiente: a) En Powerpoint puedes usar la opción diseño de página.-Se determinará la concentración de cafeína mediante el análisis de una curva estándar de cafeína. configurar página. Posteriormente de determinará la ecuación de la recta para sustituir el valor de Y de la muestra problema y así determinar su concentración (X). VII.-Determinar la cantidad de cafeína presente en diferentes bebidas de cola y discutir las diferencias entre las light y las normales. personalizado y seleccionar 100 cm de ancho X 120 cm de alto. 1. como se describe en el ejemplo de abajo. Área (Y) total Factor (FD) de Dilución Concentración (X) Muestra 2. y la concentración de cafeína en el eje de las X. 38 . en donde se graficará el área total del pico de la cafeína en el eje Y.

introducción. resultados que puedes agrupar en una tabla con la curva de calibración. conclusiones y bibliografía. material y reactivos.b) El poster debe incluir el nombre de la práctica. 39 . objetivo. procedimiento que incluya fotos.

INTRODUCCION La espectroscopia de resonancia magnética nuclear es una técnica empleada principalmente en la elucidación de estructuras moleculares. Preparación de la muestra Para preparar una muestra para espectroscopia de RMN. Esta técnica se basa en el fenómeno físico de resonancia magnética nuclear (RMN). 1. II. III. Los instrumentos de FT-NMR requieren que las muestras se hagan en un disolvente que contiene deuterio ya que el instrumento 40 . OBJETIVO. aunque también se puede emplear con fines cuantitativos. La resonancia magnética nuclear hace uso de las propiedades de resonancia aplicando radiofrecuencias a los átomos o dipolos entre los campos alineados de la muestra y permite estudiar la información estructural o química de una muestra. b) Cómo interpretar un espectro de RMN 1H y RMN13C. INVESTIGACION PREVIA a) Instrumentación y tipos de equipo de RMN. principios básicos de la instrumentación y experimentos uni y bidimensionales. así como los parámetros que se pueden obtener a partir de un espectro uni y bidimensional. IV. c) Qué tipos de átomos pueden presentar Resonancia. se disuelven 10-50 mg de la muestra en aproximadamente un ml de un disolvente deuterado.LABORATORIO DE INSTRUMENTACION ANALÍTICA III Práctica 10 Fundamentos y principios básicos de la Instrumentación de Resonancia Magnética Nuclear SEMESTRE 5 Nº Hrs/sem 4 Nº Créditos I. generalmente CDCl3. Fundamentos. PROCEDIMIENTO Se explicará al alumno desde la preparación de la muestra hasta las partes de equipo de resonancia nuclear.

podría ser un carbonilo. Los disolventes deuterados deben ser extremadamente puros. Comprueba que tiene el número apropiado total de átomos de carbono.26 ppm. Este pico se utiliza para calibrar el espectro durante el proceso de diagnóstico diferencial. Por ejemplo. átomos de hidrógeno (y otros). Una muestra con CDCl3 siempre mostrará un pico a 7. si hay 4 dobles enlaces. 2. porque deuterocloroformo nunca es 100% puro. Paso 1: Calcular el grado de instauración para limitar el número de posibles estructuras.requiere la resonancia del deuterio para lograr la estabilización de la frecuencia de campo. si no hay doble enlace y un oxígeno. átomos de oxígeno. será ya sea un éter o un alcohol. el CDCl3 es el menos caro (ya que sólo tiene un átomo de deuterio). hay una pequeña cantidad de cloroformo residual ordinaria. Partículas suspendidas o sólidas pueden causar la ampliación de los picos de absorción en el espectro. Paso 2: Mira el espectro IR. especialmente la región de números de onda mayores que 1500. si hay un doble enlace y un oxígeno. La muestra se disuelve y luego se transfiere a un tubo de RMN. uno o más dobles enlaces. medir la profundidad del líquido en el tubo de RMN. que trabaja en conjunción con el grado de insaturación resultado de la Etapa 1 y con la fórmula molecular. así como el más versátil. El grado de insaturación indica si el compuesto tiene o no. Después de preparar la muestra. Paso 3: Observa el espectro de la resonancia magnética nuclear para determinar la conectividad del compuesto. podría haber una anillo aromático (y así sucesivamente). Busca probables grupos funcionales. Interpretación de Espectros. consistente con la fórmula 41 . Paso 4: Dibujar una estructura consistente con la insaturación y los datos de RMN. esta debe ser de 6 cm: ajustar el volumen de su tubo de la muestra si es necesario. Dibuja los grupos funcionales propuestos en el paso 2 y analiza cómo puede encajar para ser consistente con el espectro de RMN dado.

a) b) c) 42 . la actividad en línea que realizaste y a la información dada por el profesor en esta sesión.molecular. reúnete con el equipo de trabajo de cada sesión para resolver los problemas asignados por el profesor y propón una solución. PROBLEMAS. Si no es así. dibuja otra estructura posible y comprueba de nuevo. Comprobar que la estructura que has dibujado "encaja" con la RMN. V. De acuerdo a la investigación previa. Comprueba que dispone de 4 enlaces en cada uno de los carbonos.

d) VI. RESULTADOS. Realiza una bitácora de las soluciones de los problemas vistos en el taller e incluye una reflexión acerca de lo siguiente:    ¿Qué competencias y habilidades has logrado desarrollar en la materia? ¿Cuáles te quedaron pendientes? ¿Cómo se puede mejorar la situación actual en la que te encuentras? 43 .

LABORATORIO DE INSTRUMENTACIÓN ANALÍTICA III Práctica 11 Visita al área analítica del Centro de Investigaciones Químicas-UAEM. De acuerdo a la visita que se realizo al área analítica del CIQ-UAEM. SEMESTRE 5 Nº Hrs/sem 4 Nº Créditos I.OBJETIVO. III. PROCEDIMIENTO Se organizarán dos o tres equipos de 10-12 personas para realizar una ronda por el Centro para conocer el funcionamiento de tres instrumentos analíticos que comprende el plan de estudios de la materia (Cromatografo de gases. b) Fotos de los equipos. 44 . REPORTE DE VISITA 1. II. Los investigadores como los estudiantes de posgrado adscritos a este Centro tienen acceso directo a los equipos garantizando un avance rápido en sus proyectos de investigación. para la elaboración de un diaporama o video que incluya lo siguiente: a) La descripción y fundamentos de las técnicas de los equipos conocidos en la visita. Infrarrojo y Espectrómetro de resonancia magnética nuclear) de Química Analítica III. IV.INTRODUCCION El Centro de Investigaciones Químicas cuenta con 24 laboratorios de Investigación y con infraestructura especializada para la realización de estudios analíticos requeridos para investigación química. se realizará un trabajo en equipo (el mismo que formaron desde la primera sesión de trabajo). También ofrece servicios técnicos al exterior. Realizar una visita para conocer el área analítica y los instrumentos del Centro de Investigación y ver sus diversas aplicaciones en la elucidación estructural de una molécula.

El video lo puedes editar en Windows Movie Maker.microsoft. 45 . que puedes descargar gratis en http://windows. separación y/o cuantificación de moléculas problema. 2. 3.com/es-ES/windows-live/movie-maker-getstarted y puedes ver cómo funciona en esta dirección http://www.youtube.c) Las aplicaciones que puede tener para resolver problemas en la identificación.com/watch?v=jqX_20v4Y-I. El diaporama lo puedes editar en Microsoft Office PowerPoint.

MATERIALES Y REACTIVOS EQUIPO Y MATERIALES Cantidad 3 Discos de 1 cm 1 3 4 1 Descripción Cajas Petri Papel filtro Incubadora Tubos de ensayo Vidrios de reloj Autoclave Micropipeta 20 µL 1 1 Asa de siembra Mechero Fisher Cantidad 250 ml Cepa cepa 2 ml 1 kg 100 ml 100 ml REACTIVOS Descripción Agar Mueller Hinton S.LABORATORIO DE INSTRUMENTACIÓN ANALÍTICA III Práctica 12 Determinación de la actividad Antimicrobiana de Extractos SEMESTRE 5 Nº Hrs/sem 4 Nº Créditos I. III. IV.INVESTIGACION PREVIA  Investigar en que medios de cultivo se puede sembrar S. Luego de un tiempo adecuado se detiene el crecimiento y se evalúa el mismo por medidas turbidimétricas o por la inhibición del halo.OBJETIVO. Coli. EQUIPO. II. coli Aceite laurel Aguacate Metanol Cloroformo Alcohol Gentamicina cloranfenicol o 46 . Aureus E. Aureus y E. Se realizará una revisión del método en caja de Petri para determinar la actividad antimicrobiana de la cáscara de aguacate.INTRODUCCIÓN Esta técnica se basa en la incubación de un medio de cultivo líquido inoculado con un microorganismo sensible al antibiótico en presencia de una concentración conocida del agente antimicrobiano.

El control positivo fue Cloranfenicol o gentamicina y el control negativo los solventes utilizados. PROCEDIMIENTO 1.1 2 2 Campana laminar de Flujo Matraces 250 ml Matraces 500ml Erlenmeyer IV. Se colocaron 52g de cáscara de aguacate en dos matraces de 250 ml. Posteriormente se incubaron a 37°C por 24 horas para prueba de esterilidad. 2. Posteriormente se evapora el disolvente a sequedad y se determina el rendimiento de cada extracto. Se esterilizó a 121°C durante 15 min. en total por equipo se deben hacer 2 ensayos para E. c) Cada integrante del equipo debe realizar al menos una prueba de un extracto. Preparación del Agar. 3. Se suspendieron 38g del polvo del agar Mueller Hinton en un litro de agua destilada. coli 47 . se mezcló perfectamente y se calentó agitando frecuentemente hasta la disolución. al primero se le agregaron 100 ml de metanol y al segundo 100ml de cloroformo y se dejó reposar por 7 días. Pruebas Antimicrobianas. Para las determinaciones de la efectividad antimicrobiana se utilizó la siguiente metodologia: a) Se cortaron discos de 1 cm de diámetro y se colocaron en las cajas Petri de la siguiente manera: El control positivo cloranfenicol o gentamicina en el centro. en cada uno de los puntos cardinales de la caja un extracto distinto y el control se intercaló entre dos extractos. Se prepararon 16 cajas de Petri con 30 ml de agar y se dejaron reposar hasta que enfriaron. Extracción de metabolitos de la cáscara de aguacate. b) Con una micro-pipeta se inocularon los discos colocando 2 μl del extracto por sensidisco.

Posteriormente se incuban las cajas a 37°C por 24 horas y se leen los halos de inhibición. Difusión en Agar. coli y S. Rendimiento en gramos de los extractos de la cáscara de Persea Americana 2. aureus y E.(extracto metanólico y clorofórmico) y 2 para S. Una vez realizada la inoculación de los discos se siembran las bacterias S. Una vez evaporados los solventes. Rendimiento de los extractos. se incuban a 35 oC durante 24 h y se observa si hay presencia de un halo de inhibición de crecimiento del microorganismo. se raspa el extracto y se calcula el rendimiento. IV. 48 . 4. Las siguientes figuras ilustran cómo puede medirse el halo de inhibición del bioensayo en la caja Petri. RESULTADOS 1. Nombre Extracto metanólico Extracto clorofórmico Rendimiento Tabla 1. Extractos de la cáscara de aguacate. aureus (extracto metanólico y clorofórmico). d) Posteriormente. Aureus. coli por estrías utilizando un asa de siembra. Actividad antimicrobiana de los extractos de la cáscara de aguacate con E.

b) La ausencia del halo significa que el extracto no tiene actividad contra la bacteria en estudio. aureus E. 49 . Considera lo siguiente para llenar la Tabla 2: a) Si se presentó inhibición del crecimiento de la bacteria.Ordena en orden decreciente la actividad antimicrobiana del control positivo y los extractos probados.coli Cloranfenicol o Gentamicina Metanol Tabla 2. se lee el diametro del halo de inhibición del control positivo (cloranfeenicol o gentamicina) representada por una zona clara y luego se continua tomando las lecturas de los extractos. CUESTIONARIO 1. marcar con un circulo el halo..Despues de las 24 horas de incubación. Actividad antimicrobiana de los extractos de Persea americana V. midiendo con una regla los halos de inhibición. marcar en la tabla con un signo negativo Cloroform o Bacteria S. medir el diametro y colocarlo en la tabla.Si no presentó inhibición.

LABORATORIO DE INSTRUMENTACIÓN ANALÍTICA III Práctica 13 Exposición de un protocolo de investigación SEMESTRE 5 Nº Hrs/sem 4 Nº Créditos I. INTRODUCCIÓN El alumno buscará un artículo de arbitraje internacional en donde se involucre alguna de las técnicas vistas en el curso (CLAR.com/wps/find/journaldescription. RMN.elsevier.org/journal/ancham Sociedad Química de México que puedes encontrar en: http://www.org/doaj?func=openurl&genre=journal&issn=0583769 3  Phytomedicine que puedes encontrar en: http://www.OBJETIVO. Ayudar al alumno a desarrollar sus habilidades de lectura.cws_home/701794 /description#description 50 . redacción y comprensión de trabajos arbitrados de investigación de su área profesional.acs.doaj. CG. El artículo debe ser lo mas completo posible en cuanto a la información siguiente:        Resumen Introducción Materiales y Reactivos Metodología Resultados y Discusión Conclusiones Bibliografía Las revistas sugeridas que contienen la información mas apropiada son las siguientes:   Analytical chemistry que puedes encontrar en: http://pubs. IR) para entender las aplicaciones que pueden tener en su área profesional.

PROCEDIMIENTO 1.. IV. 51 .III.Cada equipo contará con media hora para su exposición.. RESULTADOS Los equipos entregarán la presentación de PowerPoint al profesor.Cada integrante del equipo participará en una exposición de los puntos descritos frente al grupo y resolverá dudas que cualquier alumno o el profesor puedan tener acerca del trabajo de investigación. 2.