INSTRUMENTOS EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA EL AUTOCLAVE: es un dispositivo que sirve para esterilizar material médico o de laboratorio, utilizando vapor de agua

a alta presión y temperatura. El autoclave coagula las proteínas de los microorganismos debido a la presión y temperatura, aunque recientemente se ha llegado a saber de algunos microorganismos, así como los priones, que pueden soportar las temperaturas de autoclave. Las autoclaves funcionan permitiendo la entrada o generación de vapor de agua pero restringiendo su salida, hasta obtener una presión interna de 103 kPa, lo cual provoca que el vapor alcance una temperatura de 121 grados centígrados. Un tiempo típico de esterilización a esta temperatura y presión es de 15 minutos. LA CAMPANA DE FLUJO LAMINAR: nos sirve para mantener un área de trabajo estéril, funciona por medio de absorción de aire del medio ambiente el cual es filtrad, para después expulsar el aire limpio sin microorganismos. En la campana también podemos utilizar la luz ultra violeta para mantener el área estéril hay que mantenerla encendida por 30 minutos, por recomendación no hay que acercarse al la luz por que puede causar quemaduras severas. INCUBADORA: nos sirve para mantener un lugar óptimo para el desarrollo y crecimiento de microorganismos, tiene dos divisiones, en el se ponen los microorganismos y se regula a que temperatura se debe mantener por lo general es a una temperatura de 38°, no importa la temperatura del exteriordentro de el ya no existen variaciones JARRA DE ANAEROBIOSIS: este aparato sirve para mantener bacterias anaerobias. Tiene unos tubos en donde se conectan a una maquina que succiona el aire. La tapa tiene un catalizador para facilitar el proceso. MICROSCOPIO: es el instrumento más necesario para un microbiólogo, ya que permite la observación de organismos que no pueden ser apreciados en detalle a simple vista, es decir de los microorganismos. Existe una gran variedad de microscopios que, según la fuente de iluminación utilizada, se agrupan en: Microscopios ópticos: La fuente de iluminación es la luz.
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De campo claro. Permiten la observación de preparaciones, en su color natural o contrastado mediante tinciones, resaltadas sobre un fondo más brillante. De campo oscuro. Permiten la observación de formas celulares que destacan brillantes sobre un fondo oscuro. Este efecto se consigue utilizando diafragmas especiales. De contraste de fases. Gracias a la utilización de diafragmas y objetivos especiales, que consiguen aumentar las diferencias en el índice de refracción de las células y el medio que las rodea, permiten la observación de células vivas, ya que no es necesario realizar ninguna tinción de las mismas. De interferencia. Permiten observar células vivas sin teñir, obteniéndose una imagen en relieve de las mismas.

 De transmisión. Permite obtener imágenes bi y tridimensionales de alta resolución. Observación microscópica Para observar una muestra al microscopio óptico podemos recurrirá a: . • El límite de resolución (LR) se define como la distancia mínima a la que se deben encontrar dos puntos para que puedan observarse separados. En los microscopios que se utilizarán en las prácticas. Alcanzan entre 1. Análisis digital por ordenador. Confocal. Tiene un diafragma especial llamado pinhole que elimina la señal de las regiones que se encuentran fuera de foco. denominadas cortes finos. Se consiguen entre 10. Es un microscopio computerizado que acopla un láser a un microscopio óptico obteniéndose imágenes fluorescentes.000 y 10.000 y 100. Durante las prácticas se empleará el microscopio óptico de campo claro. • El número de aumentos de un microscopio resulta de multiplicar los aumentos que Proporciona cada una de las lentes presentes entre la fuente de iluminación y la lente Ocular.000 aumentos.000 aumentos. De fluorescencia. El microscopio es mejor cuanto menor sea el LR del mismo. Los electrones no son visibles directamente por lo que éstos se envían a una pantalla que emite fluorescencia más o menos intensa según el número de electrones que inciden en ella.  La capacidad de un microscopio para observar diferentes estructuras se refleja en el número de aumentos y en el límite de resolución (LR). sin necesidad de cortes finos. Las estructuras celulares que se tiñan más intensamente impedirán el paso de electrones y por lo tanto no permitirán la emisión de fluorescencia.  Microscopios electrónicos: La fuente de iluminación es un chorro de electrones y las lentes son electroimanes. Si queremos mejorar la capacidad de observación de un microscopio se debe incrementar el número de aumentos y disminuir el límite de resolución (LR). sólo puede utilizarse el aceite de inmersión con el objetivo de 100 Ã-. Permiten la observación de células enteras. de modo que aparecen los relieves originales y las superficies externas. La luz ultravioleta que excita ciertas moléculas presentes en las células (bien de forma natural o añadida a la preparación) que emiten fluorescencia en el espectro visible. Normalmente se utiliza aceite de inmersión. De barrido. Es importante recordar que no todos los objetivos son impermeables al aceite. Permiten la observación de muestras teñidas con sustancias que son resistentes al paso de electrones y cortadas dando lugar a láminas finas. por lo que estas estructuras aparecerán oscuras en un fondo más brillante.

Pueden utilizarse uno o más colorantes. Se coloca una suspensión homogénea de microorganismos en una gota de agua sobre el portaobjetos y se fija (mediante calor o agentes químicos). de modo que se tiñen selectivamente con ciertos colorantes. Se basan en el hecho de que las células tienen una composición química diferente a la de su entorno. con los lípidos celulares y los tiñen. Selectivas. lo que permite clasificar los microorganismos en diferentes grupos. de paredes celulares. Preparación fijada. según su capacidad de tinción. Diferenciales. Se mezclan Ejemplo: negro sudán. Con carga negativa. Se observa directamente. con objetivos de inmersión. nigrosina.Preparación húmeda. y por lo tanto reaccionan de forma diferente frente a una tinción. tinción de esporas. Ejemplos: eosina. Los colorantes pueden ser de distintos tipos:   Catiónicos. Liposolubles. Estas tinciones utilizan más de un colorante. Aniónicos. Se basan en el hecho de que distintas estructuras celulares tienen distinta composición química. Se basan en el hecho de que distintos tipos de células tienen distinta composición química. El colorante tiñe las células (azul de metileno. No penetran en el interior celular. Tinciones Son técnicas que permiten observar microorganismos en función de la capacidad de los mismos para retener o no determinadas sustancias colorantes. habitualmente. safranina. de los materiales que van a esterilizarse deben colocarse sin apretarse. En este apartado están dos tinciones de importancia taxonómica y médica: la tinción de Gram y la de ácidoalcohol resistencia (de Ziehl-Neelsen). Una buena esterilización por autoclave depende de la eliminación de todo el aire de la cámara y la carga. Después se tiñen mediante diferentes técnicas. de corpúsculos metacromáticos. lo que depende de la carga de la célula y del colorante. Autoclave. Ej. safranina) o no (nigrosina).  Las tinciones pueden ser: Simples. Son sustancias que tienen carga positiva. Utilizan un solo colorante. pero el material contaminado debe estar en un recipiente de fondo sólido en una altura . de flagelos. cristal violeta. Penetran en el interior de las células y las tiñen. Se realiza colocando una gota de la suspensión de microorganismos entre un porta y un cubreobjetos. de modo que ambos se comportan de forma diferente frente a un colorante. Ejemplos: azul de metileno. Los artículos limpios pueden ponerse en cestillos de alambre. En este caso se habla de tinción negativa. de modo que no tiñen las células. sino el entorno. Estas preparaciones se observan sin cubreobjetos y.

y según la tonalidad de dicha cinta. El de desplazamiento por la gravedad. Deben dejarse grandes espacios de aire alrededor de cada recipiente y ninguno debe estar cerrado. Nunca se debe dejar enfriar el autoclave por mucho tiempo. generalmente 1. fluirá el vapor por la espita de descarga. se matan las bacterias vegetativas. El agua del fondo del autoclave se calienta mediante mecheros de gas exteriores. se sabe si fue un buena o mala esterilización. la cual se coloca en los materiales. dando lugar a formas vegetativas que serán muertas durante la segunda y tercera vaporizaciones. Estos medio se vaporizan durante 30-45 minutos al día durante tres días consecutivos. los operarios deben llevar viseras protectoras de toda la cara del tipo que recubra la piel de la barbilla y de la garganta. Cuando la carga ha alcanzado la temperatura requerida se mantiene la presión de 15 a 20 minuto. un calentador eléctrico de inmersión o un serpentín de vapor. Se utiliza este método para esterilizar medios de cultivo que pueden alterarse por exposición a temperaturas más elevadas. Tyndallización: Utilizará un vaporizador de Koch. Tiene una cámara vertical de metal provista de una tapa metálica fuerte que se aprieta y cierra herméticamente mediante un aro de goma. un indicador de presión y una válvula de seguridad. Se carga el autoclave y se aprieta la tapa manteniendo la espita de descarga abierta.no mayor a 8 cm. Cuando se haya alcanzado esta fase. Cuando el agua hierva. ya si no se abre se forma un vacío. cuando los autoclaves se descargan. Instrucciones de funcionamiento. se alcanza y fluye vapor por la válvula de seguridad. Existen dos tipos de autoclave:   El tipo olla de presión. El tipo olla de presión es el más común. el cual puede romper el material estéril. Se ajusta seguidamente la válvula de seguridad a la temperatura requerida y se conecta ala fuente de calor. Bennet ha elaborado una cinta indicador. que es una caja metálica en el fondo de la cual hierve el agua mediante un mechero de gas o un serpentín de vapor. Se deja que salgan libremente el aire y el vapor hasta que se haya eliminado todo el aire. arrastrando con él el aire caliente existente en la cámara. es un aparato para agua hirviendo a presión . Se abre la espita de descarga muy lentamente una vez que el indicador ha llegado a cero. La primera vez.054 kg/cm2. se deja que el material se enfríe hasta que tenga una temperatura a la cual pueda cogerse con las manos. se apaga el calentador y se deja que el autoclave se enfríe. Se disponen en la tapa una espita para la salida del aire y el vapor. También deben usar guantes de protección térmica. Al termino del periodo de esterilización. Además. Por razones practicas sólo trataremos el tipo olla de presión ya que es el que tenemos en el laboratorio. La presión del vapor se eleva en la cámara hasta que la presión deseada. cualquier espora que sobreviva germinará en el medio nutritivo durante toda la noche. . se cierra la espita de descarga aire-vapor. Debe haber agua suficiente dentro de la cámara.

. un foco piloto indicador de intensidad equipada con 2 resistencias tipo moño de 25 x 50 de 750 watts cada una. El calor medio transcurrido el DSL. visible. El Sistema de de cerrado en cerrado bronce pulido con y cromado. cuando vea que sale vapor. manejo: del nivel. ciérrela y esperea que el manómetro llegue a 20 libras o a la presión o temperatura que haya solicitado. manómetro o termómetro según se solicite. Deje abierta la válvula de desalojo para que salga todo el aire. Alimentación Conexión Nivel Instrucciones Abra la puerta y llene de cable eléctrica uso de de agua hasta la marca rudo de 2 x 127 14 agua volts con clavija monofásica. El forro y la canastilla en acero inoxidable calibre 22 tipo 304 pulido con vinil. y la de 30 x 60 de 900 watts cada una. Sistema Cuenta con válvula de alivio y seguridad calibrada a 20 libras. mariposa. tiempo de esterilización. y 30 X 60 cm Características Generales: DE LABORATORIO CALORES) La cámara está construida en acero inoxidable calibre 12 tipo 304. abra la finalmente y mínimo los puede utilizar según sus necesidades de trabajo. deje enfriar el autoclave para que así se pierda la presión y no se derramen sus líquidos.AUTOCLAVES VERTICALES V-3C (TRES MEDIDAS: 25 X 50. espere a que salga toda la presión. ponga el apagador en la posición de válvula de desalojo. comience a contar el tiempo de esterilización. blindada. Meta el material a esterilizar y cierre bien la puerta. si metió líquidos. conecte el autoclave y ponga el apagador en máximo para calentamiento. Control de operaciones con un apagador de 3 calores. Este será el que usted decida. abra la puerta y saque su material. O bien.