SUMRIO 1. Introduo, Conceitos e Diviso da Microbiologia.....................02 2. Noes Gerais e Propriedades das Bactrias, Fungos e Vrus..........................04 3.

Mtodos de estudo das bactrias, fungos e vrus...............................................13 4. Principais espcies de cocos patognicos..........................................................16 5. Principais espcies de bacilos patognicos........................................................20 6. Noes de Imunologia............................................................................................26 7. Micoses superficiais e Subcutneas.....................................................................30 8. Micoses profundas e oportunistas........................................................................34 9. Coleta e transporte de amostras microbiolgicas...............................................39 10. Referncias............................................................................................................47
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1. INTRODUO, CONCEITOS E DIVISO DA MICROBIOLOGIA

Os micro-organismos so seres microscpicos, individualmente invisveis a olho nu. So os seres vivos dotados de maior diversidade biolgica conhecida, tanto morfolgica, como fisiolgica e ecolgica. Podem apresentar formas celulares as mais variadas, so metabolicamente capazes de realizar todos os tipos de reaes bioqumicas conhecidas e podem ser encontrados em praticamente todos os ambientes, dos mais simples aos mais extremos. Esto presentes em todos os ambientes terrestres, interagindo com estes e com outros seres vivos. Possuem mltiplos papeis, podendo ser causadores de doenas em animais, plantas e outros organismos vivos, alm de serem agentes de contaminao de guas, alimentos ou medicamentos, acarretando grandes prejuzos sade do homem e ao ambiente. No entanto, os micrbios tambm so grandes amigos do homem, sendo responsveis por diferentes processos que vo desde a produo de alimentos, incluindo vinhos, pes, queijos e iogurtes, at a participao na ciclagem dos elementos qumicos, como o nitrognio, na superfcie do globo terrestre. Podem ainda produzir os mais diversos compostos de interesse mdico, comercial e ambiental. Dentre eles, podemos citar os antibiticos e vrias enzimas de grande aplicao industrial. A partir da descoberta e do incio dos estudos dos micro-organismos, ficou claro que a diviso dos seres vivos em dois reinos, animal e vegetal, eram insuficientes. Assim, o zologo E. H. Haeckel, em 1866, sugeriu a criao de um terceiro reino, denominado Protista, englobando as bactrias, algas, fungos e protozorios. No entanto, estudos mais avanados demonstraram existir duas categorias de clulas: as procariticas e as eucariticas. Nas primeiras, o equivalente nuclear representado por um nico cromossomo e no circundado pela membrana nuclear e, nas eucariticas, o ncleo limitado pela membrana nuclear, apresentando no seu interior vrios cromossomos. Em 1969, R. H. Wittaker props a expanso da classificao at ento existente, baseando-se no s na organizao celular, mas tambm na forma com que os organismos adquirem energia e alimento, ficando estes divididos em: animais, plantas, fungos, Protistas (microalgas e protozorios) e Monera (bactrias e algas cianofceas). Estudando as similaridades e diferenas do RNA ribossmico, C. Woese props, em 1979, uma nova classificao para os seres vivos: supra-reino Arqueobactria (bactrias metanognicas, bactrias termfilas, bactrias acidfilas e bactrias halfilas; supra-reino Eubactria (incluindo as demais bactrias e as cianobactrias) e supra-reino Eucarioto (incluindo plantas, animais, fungos, protozorios e algas).
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Qualquer que seja a classificao adotada, a microbiologia definida como o ramo da biologia que estuda os seres vivos microscpicos nos seus mais variados aspectos como morfologia, estrutura, fisiologia, reproduo, gentica, taxonomia e tambm a interao com outros seres e com o meio ambiente. PRINCIPAIS TIPOS DE MICRO-ORGANISMOS Micro-organismos procariticos

- Bactrias

So seres unicelulares, com dimenses que em geral variam de 0,1 a 2 m de dimetro e 2 a 8 m de comprimento. As espcies pertencentes a este grupo podem apresentar diversas formas, que variam da esfrica, denominadas cocos, a diversos tipos de bastonetes, dentre eles os curtos, os longos, os finos, os espiralados e aqueles em curva (vibrio). Podem apresentar tambm diferentes arranjos, em pares, em ttrades, em cachos e em cadeias. As bactrias podem ser encontradas sobretudo no solo, na gua doce e nos mares, mas tambm no corpo humano, nos animais, nas plantas, nos alimentos, entre outros. Dentre os principais grupos de bactrias existentes podemos citar: bactrias Gram-positivas, Gram-negativas, espiroquetas, riqutsias, clamdias, micoplasmas, micobactrias, actinomicetos, cianobactrias, entre outros. - Arqueas

Constitui um grupo distinto de microrganismos, com caractersticas prprias e incomuns, podendo ser encontradas em ambientes extremos, como solos bastante secos e quentes, e nas profundezas dos mares prximos s fontes hidrotermais e em regies vulcnicas. Tambm so comuns em guas com altas concentraes de sal e em nascentes de guas cidas, ricas em enxofre. Estes organismos, em geral anaerbios, diferenciam-se das bactrias, por no possurem uma parede celular composta de peptidioglicana, e sim de outras macromolculas variadas, embora uma pseudopeptidioglicana possa ser encontrada em algumas espcies. Micro-organismos eucariticos - Fungos

So seres encontrados principalmente no solo, mas tambm em plantas e animai, inclusive no prprio homem, causando as micoses. Apresentam uma organizao celular bem mais complexa que as bactrias. Podem ser divididos em dois grandes grupos, o fungos filamentosos, tambm chamados de bolores, e as leveduras, unicelulares.
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- Algas So seres fotossintticos, que possuem representantes microscpicos (algas unicelulares) ou macroscpicos (algas multicelulares). Habitam principalmente ambientes marinhos e guas doces, mas tambm podem ser encontrados eventualmente no solo. Os liquens correspondem associao de uma alga (ou cianobactria) com um fungo, na qual, em uma relao de mutualismo, cada um dos parceiros beneficiado. So bastante comuns em rvores, telhados e estruturas de cimento. A capacidade fotossinttica destes seres os torna primordiais na cadeia alimentar, j que fixam CO2 na forma de carboidratos que sero consumidos pelos heterotrficos. Micro-organismos sem estrutura celular

- Vrus

So considerados micro-organismos, embora no possuam estrutura celular. So extremamente pequenos, variando de 0,02 a 0,3 m. Basicamente so considerados elementos genticos que contm DNA ou RNA e uma capa proteica. As partculas virais podem ser consideradas de duas formas distintas: agentes de doenas, quando a infeco na clula hospedeira leva sua ruptura e morte, ou agentes de hereditariedade, quando a partcula viral entra na clula, causando apenas modificaes genticas, sem lhe causas nenhum dano.

2. NOES GERAIS E PROPRIEDADES DAS BACTRIAS, FUNGOS E VRUS

Estrutura e reproduo Bactrias As bactrias de interesse mdico podem apresentar formas esfricas, comumente chamadas de cocos, cilndricas ou bacilos e de espiral. Os cocos so redondos, mas podem ser ovais, alongados ou achatados em uma das extremidades.

Podem

ocorrer

aos

pares

(diplococos),

cadeias

(estreptococos)

cachos

(estafilococos). Existem ainda aqueles cocos que se dividem em dois ou trs planos e permanecem unidos em grupos cbicos de oito indivduos (sarcina). Os bacilos foram poucos arranjos ou agrupamentos, podendo ser encontrados aos pares (diplobacilos) e em cadeias (estreptobacilos). Alguns bacilos assemelhamse a lanas, outros tm extremidades arredondadas ou, ento, retas. Alguns bacilos assemelham-se tanto aos cocos que podem ser chamados de cocobacilos. importante saber que a maior parte dos bacilos apresenta-se como bacilos isolados. Bactrias espiraladas podem ter uma ou mais espirais. Quando tm o corpo rgido e so como vrgulas, so chamadas vibries, e espirilos quando tm a forma de saca-rolhas. H ainda um grupo de organismos espiralados, mas de corpo flexvel os espiroquetas.
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Figura 1 - Morfologia das bactrias.

ESTRUTURA DA CLULA BACTERIANA

A clula bacteriana apresenta vrias estruturas, algumas presentes em apenas determinadas espcies, enquanto outras so essenciais, sendo encontradas em todas as bactrias.

Figura 2 - Estrutura da clula bacteriana.

As

bactrias apresentam

uma

organizao

celular

bastante

simples,

compreendendo uma parede celular rgida, formada de peptideoglicano, e uma membrana citoplasmtica, composta basicamente de fosfolipdeos e protenas. O DNA se encontra no citoplasma, formando a regio conhecida como nucleide. Os ribossomos esto dispersos no citoplasma. Algumas espcies apresentam flagelo de locomoo, e outras, ainda, podem possuir fmbrias de adeso e pili, esta ltima responsvel pela transferncia de material gentico no mecanismo de conjugao. A presena de endosporos em algumas espcies fornece a elas um mecanismo de resistncia, principalmente ao calor, mas tambm radiao, falta de nutrientes e falta de umidade. REPRODUO BACTERIANA

- Reproduo assexuada

Diviso binria A forma de reproduo mais comum das bactrias a assexuada, por diviso binria, processo tambm conhecido como bipartio ou cissiparidade. Nesse tipo de reproduo, ocorre a duplicao do DNA bacteriano e uma posterior diviso em duas clulas. As bactrias multiplicam-se por este processo muito rapidamente quando dispem de condies favorveis. A separao do material gentico conta com a participao dos mesossomos, pregas internas da membrana plasmtica nas quais existem tambm as enzimas participantes da maior parte da respirao celular. Esporulao

Algumas espcies de bactrias originam, sob certas condies ambientais, estruturas resistentes denominadas esporos. A clulas que origina o esporo se desidrata, forma uma parede grossa e sua atividade metablica torna-se muito reduzida. Certos esporos so capazes de se manter em estado de dormncia por dezenas de anos. Ao encontrar um ambiente adequado, o esporo se reidrata e origina uma bactria ativa, que passa a se reproduzir por diviso binria. Os esporos so muito resistentes ao calor e, em geral, no morrem quando expostos gua em ebulio. Para eliminao dos esporos, normalmente usado um processo especial, a autoclavagem, para esterilizar lquidos e utenslios. O aparelho onde feita essa esterilizao, a autoclave, utiliza vapor de gua, a temperaturas da ordem de 120C, sob uma presso que o dobro da atmosfrica. Aps 1 hora nessas condies, mesmo os esporos mais resistentes morrem. - Reproduo sexuada
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Para as bactrias, considera-se reproduo sexuada qualquer processo de transferncia de fragmentos de DNA de uma clula para outra. Depois de transferido, o DNA da bactria doadora se recombina com o da receptora, produzindo cromossomos com novas misturas de genes. Esses cromossomos recombinados sero transmitidos s clulas-filhas quando a bactria se dividir. A transferncia de DNA de uma bactria para outra pode ocorrer de trs maneiras: por transformao, transduo ou conjugao. Transformao

A bactria absorve molculas de DNA dispersas no meio, que so incorporados ao seu material gentico. Esse DNA presente no meio pode ser proveniente, por exemplo, de bactrias mortas. Esse processo ocorre

espontaneamente na natureza.

Transduo

Molculas de DNA so transferidas de uma bactria outra, usando vrus como vetores.

Estes, ao se alojarem dentro das bactrias, podem eventualmente incluir pedaos de DNA da bactria que lhes serviu de hospedeira. Ao infectar outra bactria, o vrus que leva o DNA bacteriano o transfere junto com o seu. Se a bactria sobreviver infeco viral, pode passar a incluir os genes de outra bactria em seu genoma.
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Conjugao

Nesse processo, pedaos de DNA passam diretamente de uma bactria doadora, o macho, para uma receptora, a fmea. Isso acontece atravs de microscpicos tubos proteicos, chamados pili, que as bactrias macho possuem em sua superfcie. O fragmento de DNA transferido se recombina com o cromossomo da bactria fmea, produzindo novas misturas genticas, que sero transmitidas s clulas-filhas na prxima diviso celular. Fungos

Durante muito tempo, os fungos foram considerados como vegetais e, somente a partir de 1969, passaram a ser classificados em um reino parte denominado Fungi. Tais organismos apresentam um conjunto de caractersticas que permitem sua diferenciao das plantas: no sintetizam clorofila; no tm celulose na parede celular, exceto alguns fungo aquticos e no armazenam amido como substncia de reserva. Os fungos so ubquos, encontrando-se em vegetais, na gua, em animais, no homem, em detritos e em abundncia no solo, participando ativamente do ciclo dos elementos na natureza. Sua disperso feita por diversas vias: animais, homem, insetos, gua e, principalmente, pelo ar atmosfrico, atravs dos ventos. So seres vivos eucariticos, podendo ser unicelulares, como as leveduras, ou multicelulares, como os fungos filamentosos (bolores e cogumelos), que so fungos macroscpicos. As colnias leveduriformes, em geral, so pastosas ou cremosas. As colnias filamentosas podem ser algodonosas, aveludadas, pulverulentas, com os mais variados tipos de pigmentao. Esses organismos so constitudos fundamentalmente por elementos multicelulares em forma de tubos as hifas que podem ser contnuas no septadas (cenocticas) ou septadas. Ao conjunto de hifas dse o nome de miclio.

Figura 3: Morfologia de leveduras (esquerda) e fungos filamentosos (direita).

ESTRUTURA DA CLULA FNGICA - Parede: uma membrana rgida que protege a clula de choques osmticos, composta, de modo geral, por glucanas, mananas e, em menor quantidade, por quitina, protenas e lipdeos. - Membrana citoplasmtica: atua como uma barreira semipermevel, no transporte ativo e passivo dos materiais, para dentro e para fora da clula. A membrana constituda de uma poro hidrofbica e de uma poro hidroflica, sendo tal estrutura formada basicamente de lipdeos e protenas. - Ncleo: contm o genoma fngico que est agrupado em cromossomos lineares, compostos de dupla fita de DNA arrumados em hlice, e tambm as histonas, protenas bsicas, associadas ao DNA cromossomal. Dentro do ncleo encontra-se o nuclolo, um corpsculo esfrico contendo DNA, RNA e protenas. Este corpsculo o stio de produo do RNA ribossomal.

- Ribossomos: so os stios da sntese proteica, compostos de RNA e protena e ocorrem dentro do citoplasma da clula. - Mitocndria: stio da fosforilao oxidativa, composta de membranas de fosfolipdeos. Possui membrana interna achatada (crista) e contm seu DNA e ribossomos prprios. - Retculo endoplasmtico: uma membrana em forma de rede que se encontra distribuda por toda a clula fngica. - Aparelho de Golgi: uma agregao interna de membranas envolvida no armazenamento de substncias que sero desprezadas pela clula fngica. Os vacolos esto relacionados com o armazenamento de substncias de reserva para a clula, tais como glicognio e lipdeos. - Cpsula: alguns fungos, como Cryptococcus neoformans, apresentam uma cpsula de natureza mucopolissacardica, importante na patogenia desse fungo por dificultar a fagocitose. REPRODUO DOS FUNGOS
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- Reproduo assexuada Brotamento: A clula parental forma um broto na sua superfcie externa. medida que o broto se desenvolve, o ncleo da clula parental se divide e um dos ncleos migra para o broto. O material da parede celular ento sintetizado entre o broto e a clula parental, separando-os. Algumas leveduras produzem brotos que no se separam e formam uma pequena cadeia de clulas chamada de pseudo-hifa ou pseudo-miclio. Fragmentao da hifa: As hifas crescem por alongamento das extremidades. Um fragmento quebrado pode se alongar para formar uma nova hifa. Esporos assexuais: Formados pelas hifas, quando germinam tornam-se clones do indivduo parental.

- Reproduo sexuada Espcies so heterotlicas quando os indivduos apresentam gametas de clulas doadoras (+) e de clulas receptoras (-) localizadas em talos separados ou quando apresentam ambos os sexos, mas estes so auto-incompatveis. Espcies homotlicas ou hermafroditas so representadas por indivduos que produzem gametas (+) e (-) autocompatveis no mesmo talo.

O tecido denominado dicaritico quando existem dois ncleos compatveis na mesma hifa e heterocaritico quando existem mais de dois tipos de ncleo na mesma hifa. Vrus Os vrus so conhecidos agentes infecciosos, causadores de doenas em humanos, animais ou plantas. Em humanos, so responsveis por uma srie de infeces benignas, como gripes e verrugas, assim como podem ser causa de doenas graves, como poliomielite, cncer e AIDS. Entretanto, alm de causarem problemas aos seres humanos os vrus tm servido como ferramentas fundamentais em pesquisas cientficas. Seu genoma, em geral pequeno, possibilita um fcil manuseio e, pelo fato de utilizar a maquinaria celular para sua reproduo, grandes descobertas de metabolismo celular foram obtidas por estudos com vrus. Mais recentemente, os vrus esto sendo empregados como vetores para introduo de genes em organismos, abrindo as fronteiras da terapia gnica. Os vrus so parasitas intracelulares e podem ser encontrados em duas formas, uma dentro das clulas e outra fora destas. Na forma extracelular, o vrus uma partcula sub-microscpica, conhecida como virion ou partcula viral. Esta apresenta, para cada tipo de vrus, algumas caractersticas especiais, entre elas diferentes tamanhos e formas. Quando o vrus penetra na clula hospedeira, inicia-se o estado intracelular, ocorrendo a replicao viral. ESTRUTURA VIRAL
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Vrus no possuem uma organizao to complexa quanto a de clulas, tendo de fato uma estrutura bastante simples. Consistem basicamente de um cido nucleico, DNA ou RNA, envolto por uma capa proteica, denominada capsdeo ou cpside e, em alguns casos, de uma membrana lipoproteica, denominada envelope ou envoltrio. Devido a essa simplicidade, os vrus no possuem capacidade de crescimento independente em meio artificial, podendo replicar somente em clulas animais, vegetais ou micro-organismos.

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Figura 4: Morfologia do Herpesvrus

REPRODUO DOS VRUS

O ciclo de vida de um vrus composto por quatro etapas:

1. Entrada do vrus na clula, ocorrendo a absoro e fixao do vrus da superfcie celular e em seguida, a penetrao atravs da membrana da clula hospedeira. 2. Eclipse: aps a penetrao, o vrus fica adormecido e no mostra sinais de sua presena ou atividade. 3. Ocorre a replicao do cido nucleico e a sntese das protenas do

capsdeo. Os cidos nucleicos e as novas protenas sintetizadas produzem novas partculas virais. 4. As novas partculas de vrus so liberadas para infectar clulas sadias. Os vrus possuem dois tipos de ciclos reprodutivos, o ciclo ltico e o ciclo lisognico. No ciclo ltico, a clula infectada e os vrus comandam todo o processo reprodutivo em seu interior, deixando a clula totalmente inativa. Assim, o vrus assume o metabolismo da clula e provoca lise celular, liberando os vrus produzidos, que atacam outras clulas e recomeam o ciclo. No ciclo lisognico, o cido nucleico do vrus entra no ncleo da clula e se incorpora ao cido nucleico celular. O vrus participa das divises celulares e, medida que a clula sofre mitoses, a carga viral repassada s clulas-filhas.

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Figura 5: Representao esquemtica dos ciclos reprodutivos dos vrus

3. MTODOS DE ESTUDO DAS BACTRIAS, FUNGOS E VRUS Diagnstico bacteriolgico Diversos procedimentos podem ser empregados para o diagnstico das infeces bacterianas. O diagnstico preciso realizado pelo isolamento e identificao do agente bacteriano a partir de materiais clnicos colhidos

adequadamente do local da infeco, procedimento conhecido como exame bacteriolgico ou cultura. Outros mtodos podem ser utilizados para o diagnstico: demonstrao das bactrias por tcnicas de colorao, provas bioqumicas, demonstrao de antgenos por mtodos imunolgicos, pesquisa de genes especficos do agente microbiano, pesquisa de anticorpos e resposta imunolgica celular. - Obteno da amostra para cultura Aps a realizao da colheita do material para cultura, devem-se efetuar trs etapas. Primeiro, a amostra deve ser enviada o mais rpido possvel ao laboratrio, devido ao fato de muitos micro-organismos morrerem com a exposio prolongada ao ar, por ressecamento. Deve-se especificar, por escrito na folha de pedido, a origem do material para cultura. Esses dados informam ao laboratrio quais micro-organismos da flora normal so esperados, alm de fornecer uma informao sobre que patgenos devem ser procurados. E, se houver suspeita de um micro-organismo especfico, essa informao deve ser notificada, para que sejam utilizadas as tcnicas especficas. - Isolamento Para o isolamento das bactrias envolvidas em infeces na rotina laboratorial, so utilizados os meios de cultura. Os meios de cultura so uma associao de nutrientes, preparados em laboratrio, que se destinam ao cultivo artificial dos microorganismos.

A partir do procedimento de coleta da amostra clnica, deve ser feita a seleo do meio de cultura a ser empregado e escolhida a temperatura e atmosfera de incubao. Geralmente e temperatura de incubao utilizada para a maioria dos microorganismos patognicos ao homem gira em torno de 35C a 37C. Quanto atmosfera, as bactrias podem ser aerbias, microaerfilas, anaerbias estritas, ou mesmo crescerem independente da presena ou ausncia de oxignio. Assim, fundamental o conhecimento dos micro-organismos que
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provavelmente podero estar presentes numa amostra clnica. Algumas espcies so bastante sensveis a variaes de temperatura e atmosfera, como Neisseria gonorrhoeae. Temperaturas em torno de 4C podem favorecer o crescimento de Listeria monocitogenes e Yersinia enterocolitica. Bactrias termoflicas, como Campylobacter jejuni, presente nas fezes, devem ser incubadas em temperaturas em torno de 42C, diferenciando-as de outras espcies de Campylobacter que no so termoflicas. Em geral, necessita-se de um prazo de pelo menos 48 horas ou mais para estabelecer o diagnstico definitivo: um dia para a cultura do micro-organismo e um dia para identific-lo. Algumas vezes, quando se tem uma cultura mista, necessrio mais um dia para o isolamento microbiano. Sabe-se que alguns micro-organismos so habitantes normais de certas regies do corpo, mas patgenos de outras reas. Tal informao tambm importante para o diagnstico correto de infeces bacterianas.

- Exame direto ao microscpio Pode ser feito de dois modos: a fresco ou aps colorao. O exame a fresco consiste em examinar ao microscpio a preparao obtida, colocando-se sobre a lmina uma gota do material, que se recobre com lamnula. O exame aps colorao utiliza diferentes corantes para a visualizao das bactrias. No mtodo de colorao simples, utilizado um nico corante, sendo o azul de metileno o mais empregado. A colorao diferencial (ou dupla) utiliza dois corantes e os mtodos mais utilizados em laboratrio clnico so a colorao de Gram e a colorao de Ziehl-Neelsen. Na colorao de Gram, so utilizados os corantes cristal violeta e fucsina e as bactrias so divididas em dois grandes grupos: as Gram-positivas, que so coradas em violeta, e as Gram-negativas, que se coram em vermelho. A colorao de Ziehl-Neelsen, empregada para visualizao das micobactrias, bacilos causadores da tuberculose e da hansenase, utiliza os corantes fucsina e azul de metileno. Aps a colorao, as micobactrias adquirem a cor vermelha da fucsina, enquanto outros micro-organismos e clulas coram-se em azul. - Identificao bioqumica

Os testes bioqumicos so amplamente utilizados em associao com os resultados obtidos atravs da colorao e cultivos, servindo como prova definitiva na identificao das bactrias isoladas. As provas bioqumicas esto fundamentadas, principalmente, em: pesquisa de enzimas estruturais, importantes no metabolismo do micro-organismo; pesquisa de produtos metablicos e catablicos e na sensibilidade a diferentes compostos. Diagnstico das micoses O diagnstico das infeces micticas pode ser realizado de diversas maneiras: - Montagem mida realizada atravs de materiais como raspado, exsudato, esfregao de swab recente ou outro material como, por exemplo, escarro. Em geral, feita uma montagem em lmina com hidrxido de sdio a 10%. As vantagens da tcnica so a rapidez e, em alguns casos, o estabelecimento de um diagnstico razoavelmente preciso. A desvantagem so os frequentes resultados falso-positivos e falso-negativos, devido a falhas nas tcnicas de coleta. - Esfregao corado de uma amostra clnica Podem ser utilizadas as coloraes pelo mtodo de Gram ou de Papanicolaou. As vantagens so a rapidez e a obteno de uma preparao permanente, cuja interpretao pode ser mais fcil do que a da montagem mida. As desvantagens so as mesmas da montagem mida. - Amostra de bipsia com demonstrao de micro-organismo por corantes especiais necessria a utilizao de corantes adequados, de um bom nmero de micro-organismos presentes na amostra, alm de uma suspeita do fungo causador da infeco, para que se tenha sucesso no mtodo. - Cultura de uma leso Permite o isolamento definitivo do micro-organismo e a identificao da espcie. Para resultados precisos, necessria a obteno de uma amostra apropriada, da manuteno da viabilidade microbiana durante o transporte da amostra ao laboratrio, da utilizao de meios de cultura apropriados e da experincia dos tcnicos. Em geral, so necessrios vrios dias para o crescimento dos fungos. - Provas sorolgicas So necessrias duas amostras e um perodo prolongado para a realizao do teste, sendo a segunda amostra obtida uma a duas semanas aps a primeira. Isso
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significa que um teste demorado, uma vez que as amostras devem ser encaminhadas a um laboratrio especializado. - Provas cutneas So testes que proporcionam um rpido resultado. No entanto, tm como desvantagens o perodo de tempo necessrio para o desenvolvimento de anticorpos pelo organismo e a dificuldade em distinguir um resultado positivo, proveniente de infeco antiga, de um resultado positivo decorrente de infeco recente ou ativa. Diagnstico das viroses
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As infeces causadas por vrus podem ser identificadas de duas formas: o isolamento direto atravs de culturas e a demonstrao de anticorpos no soro do paciente, dirigidos contra micro-organismos especficos. Quando possvel, as duas tcnicas deveriam ser realizadas simultaneamente, de forma que uma complemente a outra. No entanto, devido ao elevado custo dos mtodos de cultura, as provas sorolgicas so mais amplamente utilizadas. Obtm-se uma amostra de soro no incio da doena e uma segunda amostra depois de duas a trs semanas. O tipo de amostra necessrio para cultura viral depende do tipo de doena. Na meningite, por exemplo, preciso obter uma amostra do LCR e tambm efetuar uma cultura de fezes para vrus, pois os enterovrus so uma causa frequente de meningite. Nesse tipo de infeco, a cultura de fezes mais eficaz do que a cultura do LCR. Toda amostra de vrus deve ser acompanhada de uma histria clnica adequada, contendo achados fsicos e laboratoriais do paciente. A amostra deve ser acompanhada da data de incio da doena clnica, da data de colheita da amostra e do diagnstico clnico. necessrio ainda indicar o micro-organismo mais provvel, o que ajuda o laboratrio a decidir os mtodos a serem utilizados. Com as informaes corretas, pode-se ganhar tempo e ainda conseguir uma interpretao significativa dos resultados.

4. PRINCIPAIS ESPCIES DE COCOS PATOGNICOS Staphylococcus aureus

um coco Gram positivo, geralmente agrupado em cachos. um patgeno oportunista, frequentemente encontrado na pele como parte da microbiota normal. As infeces causadas por S. aureus so frequentemente chamadas infeces estafiloccicas. a principal causa de infeces da pele, dos tecidos moles, do trato

respiratrio, dos ossos, das articulaes, endovasculares e de feridas. Espinhas, furnculos, carbnculos e teris tambm so causadas por essa espcie microbiana. causa frequente de infeces nosocomiais, causando infeces de feridas pscirrgicas. Com menos frequncia, causa pneumonia e infeces do trato urinrio. So produtoras de inmeras toxinas, que levam a doenas como a sndrome do choque txico e a intoxicao alimentar. S. aureus ainda a causa mais comum de endocardite bacteriana aguda. O ser humano infectado o principal reservatrio e pessoas que possuem leses com secreo purulenta constituem as fontes mais comuns de disseminao epidmica. A transmisso tambm pode ocorrer atravs de um portador assintomtico. Em hospitais, a disseminao pode acontecer atravs das mos dos profissionais de sade. Staphylococcus epidermidis
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encontrado em maior abundncia do que S. aureus, fazendo parte da microbiota normal da pele. Apesar de ser bem menos virulenta que S. aureus, pode tambm ser patognica. Em 2% a 3% dos casos, representa o agente causal da endocardite infecciosa, mais frequentemente em indivduos portadores de vlvula cardaca artificial. importante agente causador de infeco hospitalar, sendo um risco para pacientes imunocomprometidos e para usurios de drogas intravenosas, podendo causar, alm da endocardite, infeces generalizadas no-piognicas. Pode ainda causar peritonite, ventriculite e infeces em locais com prteses. Staphylococcus saprophyticus

uma bactria que faz parte da microbiota normal da pele e do trato genito urinrio. Tem sido implicado como causa frequente de infeces do trato urinrio, sendo mais comum em mulheres e podendo chegar a causar cistite, uretrite, pielonefrite e, em casos mais extremos, bacteremia. mais em mulheres na faixa nos 20 aos 40 anos de idade e no homem sua presena torna-se mais evidente a partir dos 50 anos de idade. Streptococcus pneumoniae Tambm conhecido como pneumococo, um coco Gram positivo, geralmente agrupado aos pares. encontrado como microbiota endgena do trato respiratrio

superior e pode ser classificado como um patgeno oportunista. Essa bactria a causa mais comum de pneumonia bacteriana no mundo, doena que pode ser conhecida como pneumonia pneumoccica. Causa tambm meningite, especialmente em idosos. So ainda responsveis por numerosos casos de infeco do ouvido mdio em crianas.
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Streptococcus pyogenes

um coco Gram positivo, geralmente agrupado em cadeia, que pode ser encontrado como microbiota endgena do trato respiratrio superior, agindo como patgeno oportunista. Causa faringite estreptoccica, infeces de ferida e infeces cutneas, como impetigo e erisipela. A faringite estreptoccica uma infeco bacteriana aguda da orofaringe, que tem como sintomas dor de garganta, calafrios, febre, cefaleia. Quando no tratada, pode levar a complicaes como escarlatina, febre reumtica e glomerulonefrite. A bactria pode ser transmitida de pessoa a pessoa atravs de gotculas respiratrias, ou por contato direto com mos e secrees nasais de pacientes e portadores, ou ainda atravs de poeira, lenos e curativos contaminados. Streptococcus agalactiae

Representa uma das causas mais comuns de septicemia e meningite neonatais. A infeco pode ocorrer de duas formas clnicas: incio precoce (antes de 7 dias de vida, geralmente dentro de 48 horas aps o nascimento) e incio tardio (dentro de 7 dias de vida). Os recm-nascidos spticos podem apresentar angstia respiratria. A fonte de infeco estreptoccica provm do trato genital materno. Adultos tambm podem ser infectados, sendo os tipos mais comuns representados por endometrite ps-parto, infeco aps operao do trato urinrio ou ginecolgicas, pneumonia e infeces dos tecidos moles. Neisseria gonorrhoeae

So cocos Gram negativos, conhecidos como gonococos, causadores de uretrite gonorreica, ou gonorreia. Apresentam-se como diplococos intracelulares em forma de feijo. Esta espcie penetra nas superfcies de clulas epiteliais do hospedeiro, por meio de uma estrutura chamada pili (ou pelo), presente na superfcie da parede bacteriana.

A gonorreia uma doena sexualmente transmissvel (DST), assintomtica em 75% a 80% das mulheres infectadas e em 5% a 15% dos homens infectados. A descrio do agente etiolgico foi feita por Albert Neisser em 1879. A transmisso se d por contato sexual ou de forma vertical (da me para o feto), causando a oftalmia gonoccica do recm-nascido. Nos homens e em cerca de 20% das mulheres, os sintomas surgem cerca de 2 a 8 dias aps o contgio. A gonorreia no homem, quando no tratada, evolui para complicaes do tipo epididimite, prostatite e outras, podendo levar esterilidade. Na mulher, as complicaes so mais severas, evoluindo para Doena Inflamatria Plvica (DIP) e esterilidade, chegando, em alguns casos, a bito. Neisseria meningitidis
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So cocos Gram negativos, conhecidos como meningococos, sendo a causa mais comum de meningite, apesar de a incidncia variar com a faixa etria. Faz parte da flora normal da garganta. Os seres humanos so os nicos portadores naturais de N. meningitidis. Os principais sintomas da meningite meningoccica so: mal-estar, febre, estado mental alterado, cefaleia, vmito, fotofobia, rigidez na nuca. A infeco tem incio com a colonizao da mucosa da nasofaringe, atravessa seu epitlio e invade a corrente circulatria, adaptando-se s condies do hospedeiro. Porm, na sua forma mais grave, a bactria atinge as meninges. A bactria pode ser adquirida a partir de indivduos doentes ou de portadores assintomticos, atravs do contato direto com a secreo da nasofaringe. Haemophillus influenza

So bactrias Gram negativas, na forma de bastonetes muito pequenos, conhecidos como cocobacilos. a causa mais comum de meningite entre 2 meses e 5 anos de idade, sendo bem menos comum em adultos. considerada como flora normal da nasofaringe e tambm do escarro, que adquire os micro-organismos ao passar pela orofaringe. A transmisso da meningite causada por H. influenza ocorre por contato direto pessoa a pessoa, doente ou portadora, atravs da via respiratria. A maioria dos casos de meningite por esta espcie bacteriana devida a cepas encapsuladas de H. influenza tipo B, sendo esse micro-organismo responsvel por cerca de 3% a 6% dos bitos. A colonizao bacteriana ocorre, inicialmente, nas vias areas superiores, sendo frequente tambm a presena prvia de otite mdia. Cerca de 15% das otites

mdias causadas por este agente evoluem para a meningite secundria. Adultos e crianas maiores de 6 anos, podem se tornar portadores sos do agente, quando em contato ntimo com crianas doentes. Bordetella pertussis
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um cocobacilo Gram negativo pequeno, geralmente disposto como clulas nicas ou aos pares. o agente etiolgico da coqueluche, mais bem isolada de culturas da nasofaringe. A coqueluche uma infeco bacteriana aguda, altamente contagiosa, que geralmente ocorre na infncia. O primeiro estgio da doena envolve sintomas brandos, semelhantes a um resfriado. O segundo estgio caracterizado por acessos graves e incontrolveis de tosse, que podem causar ruptura dos pulmes, hemorragia ocular e cerebral e fratura de costelas. O ser humano o nico reservatrio e a transmisso ocorre por gotculas produzidas durante a tosse e transmitidas pelo ar.

5. PRINCIPAIS ESPCIES DE BACILOS PATOGNICOS

Corynebacterium diphteriae

Tambm conhecida como bacilo diftrico, um bacilo Gram positivo em forma de clava, que tende a formar arranjos que lembram letras chinesas. o agente transmissor da difteria, doena bastante controlada nos pases que praticam regularmente a vacinao antidiftrica. A forma clnica mais comum da difteria a farngea e, para que ocorra, necessrio que o bacilo penetre e colonize a mucosa da faringe. A transmisso ocorre pela inalao de aerossis provenientes de doentes ou de portadores normais do bacilo diftrico. Pode tambm causar infeco na pele, na laringe e nos rgos genitais. O homem o nico reservatrio natural do bacilo diftrico. A taxa de portadores na populao geral varia entre 1% e 3% e nos contatos familiares entre 8% e 14%. A difteria mais frequente em crianas com idade inferior a 10 anos e o maior nmero de casos e bitos tende a ocorrer na faixa de 1 a 4 anos. No Brasil, a doena endmica, embora raramente tenham sido registrados surtos epidmicos. Tais surtos ocorrem mais frequentemente nas reas mais pobres, com atendimento mdico precrio e falhas na vacinao.

Clostridium tetani

 um bacilo Gram negativo esporulado, agente etiolgico do ttano. Possui aspecto de raquete, podendo ser encontrado no solo de todas as partes do mundo. O ttano pode ser localizado ou generalizado. O ttano generalizado reconhecido, inicialmente, pelo trismo (espasmo do masseter) e pelo riso sardnico (espasmos dos msculos bucais e faciais). O paciente permanece consciente. O ttano localizado resulta de espasmos dolorosos nos msculos adjacentes ao stio da leso e pode preceder ao ttano generalizado. Pode ocorrer ainda o ttano neonatal, manifestandose aps 3 a 12 dias do nascimento de bebs de mes no vacinadas. A doena acomete pessoas em todo o mundo, sendo considerada endmica em muitos pases, associada contaminao atravs de objetos contendo esporos. Tem sido relatado em usurios de drogas e de piercings, devido contaminao com os instrumentos utilizados. A preveno obtida atravs da vacina trplice, administrada em 3 doses, nos 3 primeiros meses de vida, com reforo no quinto ano de vida e depois de 10 em 10 anos.
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Listeria monocytogenes

um bacilo Gram positivo, importante patgeno oportunista humano, podendo causar diversas infeces graves em indivduos imunocomprometidos, recmnascidos e mulheres grvidas. Causa a listeriose, que pode ser adquiria aps a ingesto de alimentos contaminados e manifesta-se como gastroenterite, meningite, encefalite, infeco materno-fetal e septicemia, resultado em uma taxa de mortalidade que ultrapassa 20%. Por ser uma das principais bactrias patognicas transmitidas atravs dos alimentos, tem despertado grande interesse da Microbiologia. Essa espcie bacteriana pode causar doenas como: - Infeco na gestao: durante as primeiras semanas da gestao, principalmente devido baixa imunidade celular, as mulheres grvidas podem desenvolver bacteremia causada por Listeria. As manifestaes clnicas so doena aguda febril, mialgias, artralgias, dor de cabea e dores nas costas. Cerca de 20% das infeces perinatais resultam em natimorto ou morte neonatal. - Infeco neonatal: pode se manifestar de duas formas. Na septicemia de incio precoce, a bactria pode infectar conjuntiva, ouvido externo, nariz, garganta, fluido amnitico, placenta e sangue. Pode ocorrer ainda, cerca de duas semanas aps o parto, meningite de incio tardio. - Bacteremia: a manifestao mais comum da infeco por Listeria e sua manifestao clnica inclui febre e mialgias, embora possam ocorrer diarreia e nusea.

- Meningites: Listeria uma das trs principais causas de meningite neonatal, estando em segundo lugar entre as meningites que ocorrem em adultos com mais de 50 anos de idade. L. monocytogenes pode ainda causar abscessos cerebrais, endocardites e infeces localizadas no fgado, pulmo, intestino, articulaes e ossos.
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Shigella sp.

um bacilo Gram negativo, pertencente famlia Enterobacteriaceae e que infecta principalmente o homem e, excepcionalmente, outros primatas como macacos e chimpanzs, causando a shigelose ou disenteria bacilar. Todas as espcies so patognicas a possuem capacidade de invadir o epitlio do intestino grosso, causando intensa reao inflamatria. Como consequncia, o paciente geralmente apresenta leuccitos, muco e sangue nas fezes. Raramente a bactria invade a circulao do paciente. A infeco pode se manifestar de forma assintomtica e subclnica, como episdios benignos de diarreia aquosa ou de formas graves e txicas, conhecidas como disenteria bacilar clssica. Esta forma, causada por S. dysenteriae, caracterizada por diarreia aquosa, febre, clicas abdominais e tenesmo, assim como pela emisso permanente de fezes mucopurulentas e sanguinolentas. Alm da febre alta, pode ocorrer anorexia, nuseas, vmito, cefaleia, calafrios e convulses. Em crianas hospitalizadas com quadro de infeco por Shigella, a causa mais frequente de morte a septicemia, ocorrendo principalmente em crianas mal nutridas e com hipoglicemia. Nos pases em desenvolvimento, onde podem ocorrer superpopulao e condies de saneamento inadequadas, a shigelose frequentemente transmitida atravs do contato pessoa a pessoa, a partir de excretas de indivduos infectados. Em pases desenvolvidos, podem ocorrer surtos espordicos transmitidos por alimentos mal cozidos ou gua contaminada. No Brasil, as espcies mais frequentemente isoladas so S. flexneri e S. sonnei. Salmonella sp.

O gnero Salmonella pertence famlia Enterobacteriaceae e composto por bacilos Gram negativos. Tais bactrias infectam o homem e praticamente todos os animais domsticos e selvagens, incluindo pssaros, rpteis e insetos. As fezes de indivduos doentes ou portadores podem contaminar gua potvel e alimentos. No

homem, causam vrios tipos de infeco, sendo as mais comuns a gastroenterite e a febre tifoide. - Gastroenterite: uma infeco aguda da mucosa intestinal, causada por S. typhimurium. Em adultos sos, frequentemente chamada de intoxicao alimentar, quando ocorre a transmisso das bactrias por alimentos de origem animal, ovos, frango e carnes mal passadas. Aps o trmino da gastroenterite, as clulas bacterianas ainda so encontradas nas fezes por 4 a 5 semanas. Em pacientes imunodeprimidos, pode ocorrer bacteremia aps a enterocolite. As infeces mais graves acontecem em idosos e recm-nascidos, mais suscetveis doena. - Febre tifoide: causada principalmente pela S. typhi e trata-se de uma infeco sistmica que tem incio na mucosa intestinal e dissemina-se atravs do sangue, atingindo fgado, bao e medula ssea. A doena mais comum em crianas apresentando-se geralmente como uma febre prolongada, dor de cabea, desconforto abdominal e letargia generalizada. A transmisso da Salmonella para o homem geralmente ocorre pelo consumo de alimentos contaminados, podendo ocorrer tambm transmisso pessoa a pessoa em hospitais, ou ainda atravs do contato com animais infectados. Os produtos alimentcios de origem animal, como carne, leite e ovos so mais comumente responsveis pela transmisso desses micro-organismos ao homem. Outro
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mecanismo de transmisso consiste na contaminao do homem pelo contato com animais de estimao exticos, como lagartos, cobras, iguanas, entre outros.

Klebsiella pneumoniae

Esse gnero bacteriano pertence famlia Enterobacteriaceae, sendo frequentemente isolado de materiais biolgicos humanos. K. Pneumoniae encontrada nas fezes de 30% dos indivduos normais e, em menor frequncia, na nasofaringe. uma importante causa de pneumonia, bacteremias e de infeces em outros rgos, como o trato urinrio. As infeces podem levar bacteremia grave, com altas taxas de morbidade e mortalidade. Sendo um patgeno oportunista, causa infeces em pacientes imunocomprometidos e um importante agente de infeces hospitalares. Assim, recm-nascidos, pacientes cirrgicos e portadores de neoplasias e diabetes possuem maior risco de desenvolver infeco. A meningite pode ser observada em neonatos e em pacientes com procedimentos neurocirrgicos de grande porte. K. pneumoniae pode ainda causar endocardite, infeces de feridas cutneas e enterite.

No ambiente hospitalar, so relatadas altas taxas de colonizao por K. Pneumoniae, principalmente nas fezes, mos e orofaringe. Alguns procedimentos invasivos, como utilizao de cateter vesical e/ou intubao para ventilao mecnica apresentam-se como fatores de risco para a colonizao por este micro-organismo. Surtos hospitalares provocados por organismos multirresistentes a antibiticos tm sido relatados em diversos pases nos ltimos anos.
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Escherichia coli

um bacilo Gram negativo, de enorme diversidade ecolgica, e compreende pelo menos cinco categorias de amostras que causam infeco intestinal por diferentes mecanismos e vrias outras associadas com infeces urinrias, meningites e outras infeces extra-intestinais. Apesar de fazer parte da microbiota intestinal normal do homem, estando presente nas fezes de todos os indivduos normais, E. Coli tambm um patgeno importante. Sua estreita associao com as fezes do homem e dos animais representa a base do teste para verificao de contaminantes fecais na gua e nos alimentos. Os dois tipos gerais de E. coli so a enterro-hemorrgica e a enterotoxignica. - E. coli Entero-hemorrgica (EHEC): causa diarreia hemorrgica, aquosa, clicas abdominais, em geral sem febre. A transmisso ocorre pela via fecal-oral, atravs de carne contaminada com fezes e inadequadamente cozida, leite no pasteurizado, pessoa a pessoa, gua contaminada com fezes. - E. coli Enterotoxignica (ETEC): causa a diarreia do viajante, com fezes aquosas com ou sem muco ou sangue, podendo ocorrer vmito, clicas abdominais, desidratao e febre baixa. As cepas enterotoxignicas de E. coli so causa frequente de diarreia em crianas de pouca idade, nos pases em desenvolvimento. A transmisso ocorre por via fecal-oral, atravs da ingesto de gua ou alimentos contaminados com fezes.

Pseudomonas aeruginosa o mais frequente bacilo Gram negativo isolado nos laboratrios de Microbiologia Clnica. um dos principais agentes e infeco em indivduos com defesas diminudas. Sendo um patgeno oportunista, dificilmente causa infeco em um indivduo normal. Alteraes nas defesas do hospedeiro que facilitam a colonizao por essa bactria so: interrupo das barreiras cutneas ou mucosas (traumas, cirurgias, queimaduras), imunodepresso fisiolgica (prematuros, neonatos,

idosos), imunodepresso teraputica (corticoides, radiao) e imunossupresso clnica (diabetes, neoplasia, imunodeficincia). Tal bactria o patgeno mais devastador para pacientes queimados e representa um dos principais agentes de infeco hospitalar em casos de pneumonia, infeco urinria, infeco de feridas cirrgicas e bacteremias. As fontes de infeco podem ser extremamente diversificadas e incluem flores, verduras, equipamentos respiratrios, torneiras, chuveiros, prteses etc.
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Mycobacterium tuberculosis

tuberculose

humana

uma

doena

infectocontagiosa,

causada

principalmente por M. tuberculosis. A transmisso ocorre principalmente atravs de partculas infectantes. Em pacientes com a doena na forma ativa, a inflamao pulmonar crnica caracterizada por tosse, sendo este o principal mecanismo de disseminao do micro-organismo para novos hospedeiros. Atualmente, a tuberculose responsvel pelo maior ndice de mortalidade humana causada por um nico agente infeccioso, representando 7% de todas as mortes no mundo. A doena conhecida desde os tempos de Hipcrates, como tsica. No Brasil, acredita-se que a tuberculose tenha sido introduzida com a vinda dos portugueses e missionrios jesutas, em 1500. Associa-se o seu ressurgimento a fatores como o aumento na incidncia de resistncia a drogas, o surgimento da epidemia de AIDS no incio da dcada de 1980.

Mycobacterium leprae

A lepra possui origem geogrfica incerta, existindo poucas evidncias histricas da doena. Em 1400 a.C., j era referida em escrituras sagradas indianas e foi descrita tanto no Velho como no Novo Testamento. Cidados com sintomas da doena passaram a ser isolados da sociedade e encaminhados a leprosrios, onde se acumulavam e eram tratados como se j estivessem mortos. Em 1873, quando ainda se acreditava que a lepra fosse uma punio divina, o cientista noruegus Gerhard Hansen associou o micro-organismo M. leprae doena humana, a partir de bipsias de leses cutneas. A lepra, doena de Hansen, ou hansenase uma doena infecto-contagiosa, a nica conhecida por invadir o sistema nervoso perifrico. Afeta principalmente a pele, as vias areas superiores, o sistema nervoso perifrico e os olhos. A doena pode ainda causar sequelas graves, como cegueira, a partir de complicaes oculares

resultantes da danificao crnica dos nervos simpatticos. O M. leprae possui baixa patogenicidade, uma vez que somente algumas das pessoas infectadas desenvolvem a doena. Atinge principalmente indivduos com idade variando entre 10 e 20 anos, sendo mais comum no sexo masculino. O bacilo causador da lepra apresenta temperatura tima de crescimento de aproximadamente 30C, e por isso infecta preferencialmente reas mais frias do corpo humano, como a mucosa nasal e extremidades dos nervos perifricos (cotovelos, pulsos, joelhos e tornozelos). A transmisso do M. leprae ocorre atravs das vias areas superiores, onde a mucosa nasal possui um papel central. A doena transmitida entre pessoas atravs do convvio de suscetveis e doentes. Existe ainda a possibilidade de envolvimento da pele na transmisso da doena, j que a manifestao do patgeno evidente neste tecido, no entanto, no h evidncias consistentes a respeito dessa possibilidade. A possibilidade de infeco depende do nvel de exposio e da intensidade da fonte infecciosa. Atualmente, a hansenase est limitada a alguns pases em
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desenvolvimento, manifestando-se de forma endmica em regies tropicais e subtropicais, estando relacionada com a pobreza. mais prevalente em reas rurais que em centros urbanos. 6. NOES DE IMUNOLOGIA

Imunologia a cincia que estuda o sistema imunolgico e suas respostas, que envolvem interaes complexas entre vrios tipos de clulas e secrees celulares do corpo. Indivduos sadios se protegem contra micro-organismos invasores atravs de diferentes mecanismos, que podem ser barreiras fsicas, clulas presentes no sangue e tecidos e diversas molculas originrias do sangue, todos participantes na defesa do indivduo. A imunidade inata ou natural compreende os mecanismos de defesa que esto presentes antes da exposio a agentes infecciosos ou a outras molculas estranhas. Tais mecanismos so inespecficos e no so aumentados por tais exposies. A imunidade adquirida constituda por mecanismos de defesa induzidos ou estimulados pela exposio a substncias estranhas, so especficos e aumentam a cada exposio sucessiva ao agente estranho. Imunidade inata

A imunidade inata compreende amplos mecanismos de defesa do hospedeiro, que servem para proteger o organismo contra muitas substncias nocivas. So mecanismos inespecficos e congnitos, constitudos por pele e mucosas, microbiota

endgena e algumas respostas celulares e qumicas como febre, produo de interferons, ativao do sistema complemento, inflamao, quimiotaxia e fagocitose. -Pele e mucosas A pele que reveste os nossos corpos representa um desses mecanismos inespecficos de defesa do hospedeiro, servindo como uma barreira fsica ou mecnica contra os patgenos. A maioria dos micro-organismos incapaz de penetrar na pele intacta, s conseguindo penetrar no organismo quando esta barreira sofre alguma leso, como cortes e queimaduras ou quando so inoculados atravs de vetores, como o artrpodes. As mucosas tambm servem como barreira fsica ou mecnica contra os patgenos, sendo o muco produzido por elas uma forma de capturar os invasores. A secura da maioria das partes da pele, assim como a acidez (pH de aproximadamente 5,0) e a temperatura ( 37C) inibem a colonizao por muitos patgenos. O sebo produzido pelas glndulas sebceas da pele contm cidos graxos, que so txicos para alguns patgenos. A transpirao tambm serve como um mecanismo inespecfico de defesa, retirando micro-organismos dos poros e da superfcie da pele. A lisozima e outras enzimas presentes nas secrees nasais, saliva e lgrimas tm a capacidade destruir as bactrias invasoras. - Microbiota endgena A microbiota endgena da pele, cavidade oral, trato respiratrio superior, clon e outros rgos, tm funo importante na defesa inespecfica do hospedeiro, uma vez que impede que patgenos colonizem estes locais. - Febre A febre caracterizada por temperaturas corpreas maiores que 37,8C. As substncias que estimulam a produo de febre so chamadas de pirognios. A febre aumenta as defesas do corpo atravs da estimulao da multiplicao dos leuccitos que iro destruir os invasores; reduzindo a quantidade de ferro livre no plasma e assim limitando o crescimento dos micro-organismos ou induzindo a produo de interleucina, um pirognio que estimula a proliferao e ativao de linfcitos durante a resposta imunolgica. Temperaturas elevadas ainda reduzem a taxa de crescimento de alguns patgenos e podem at mesmo lev-los morte. - Interferons Os interferons so pequenas protenas antivirais, produzidas por clulas infectadas por vrus. Possuem esse nome porque interferem na replicao viral. So induzidos por diferentes estmulos, incluindo vrus, tumores, bactrias e outras clulas estranhas. Os diferentes interferons so produzidos por diferentes tipos de clulas. Alm do seu aspecto benfico, os interferons que so produzidos em resposta a certas
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infeces virais causam sintomas semelhantes gripe, como indisposio, mialgia, calafrios e febre, associados a muitas infeces virais. - Sistema complemento O sistema complemento um grupo de aproximadamente 30 protenas diferentes, encontradas no plasma sanguneo normal, que complementam a ao do sistema imunolgico. Essas protenas interagem umas com as outras de forma encadeada, conhecida como cascata do complemento. A ativao desse sistema auxilia na destruio de muitos patgenos diferentes, atravs de mecanismos, como: incio e amplificao da inflamao, atrao de fagcitos para o local da infeco, ativao de leuccitos, lise de bactrias e outras clulas estranhas, aumento da fagocitose pelas clulas fagocticas. - Inflamao uma srie complexa de eventos, cujos principais mecanismos so: aumento do dimetro dos capilares, com consequente aumento do fluxo sanguneo para o local; permeabilidade aumentada dos capilares, permitindo o escape de plasma e protenas; sada de leuccitos dos capilares e seu acmulo no local da leso. A inflamao tem como objetivos localizar a infeco, impedindo a disperso dos micro-organismos invasores, neutralizar qualquer toxina que esteja sendo produzida no local e ajudar no reparo do tecido danificado. Os sinais e sintomas da inflamao so vermelhido, calor, inchao e dor. Frequentemente, h formao de pus e, algumas vezes, perda de funo da rea afetada. - Fagocitose o processo pelo qual os fagcitos englobam e ingerem materiais estranhos. Os dois grupos mais importantes de fagcitos do corpo humano so os macrfagos e os neutrfilos. Estas clulas so responsveis por livrar o organismo de substncias indesejveis, como clulas mortas, restos celulares e micro-organismos. As etapas da fagocitose so: 1. QUIMIOTAXIA: os fagcitos so atrados pelos agentes quimiotticos ao local da infeco; 2. ADESO: o fagcito adere a um objeto; 3. INGESTO: os pseudpodes circundam o objeto, levando-o ao interior da clula; 4. DIGESTO: o objeto degradado e dissolvido por enzimas digestivas e por outros mecanismos. Imunidade adquirida
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Resulta de uma produo ativa ou do recebimento de anticorpos durante um perodo da vida. Se os anticorpos so produzidos no interior do organismo da pessoa, a imunidade chamada imunidade ativa, sendo tal proteo geralmente duradoura. adquirida em resposta entrada de um patgeno vivo no organismo ou em resposta a vacinas. Quando a pessoa recebe anticorpos produzidos por um indivduo especificamente imunizado, tal proteo chamada imunidade passiva e normalmente apenas temporria. Pode ser adquirida pelo feto, quando recebe anticorpos maternos ou pelo lactente, ao receber anticorpos maternos contidos no colostro. A resposta imune adquirida pode ser dividida em dois ramos principais: a imunidade humoral e a imunidade mediada por clulas. Na imunidade humoral, molculas chamadas anticorpos so produzidas por linfcitos com o objetivo de inativar e destruir micro-organismos especficos. Na imunidade mediada por clulas, esto envolvidos vrios tipos celulares, atuando de diferentes formas na proteo do organismo contra agentes infecciosos. - Imunidade humoral mediada por molculas do sangue, chamadas anticorpos, que so produzidas pelos linfcitos B. Os anticorpos reconhecem de forma especfica os antgenos microbianos, neutralizando a infecciosidade desses agentes. o principal mecanismo de defesa contra micro-organismos extracelulares e suas toxinas. ANTICORPOS: so glicoprotenas produzidas pelos linfcitos em resposta presena de um antgeno. Normalmente, um anticorpo considerado especfico, pois ir reconhecer e se ligar apenas ao determinante antignico que estimulou sua produo. Todos os anticorpos pertencem a uma classe de protenas chamada imunoglobulinas, que so encontradas no sangue, na linfa, na lgrima, na saliva e no colostro. ANTGENOS: pode ser qualquer substncia orgnica estranha, capaz de estimular a produo de anticorpos. Os antgenos podem ser protenas, grandes polissacardeos ou molculas de DNA ou RNA, ou ainda qualquer combinao de molculas biolgicas que so componentes celulares de micro-organismos e de macro-organismos, como os helmintos. - Imunidade celular A imunidade mediada por clulas tem como funo controlar infeces crnicas causadas por patgenos intracelulares, uma vez que os anticorpos so incapazes de entrar nas clulas. Dessa forma, promove a destruio dos micro-organismos intracelulares, como vrus e algumas bactrias. Ocorre por ao direta de clulas denominadas linfcitos T, que so altamente especficas para cada patgeno, resultando em reaes dirigidas contra as caractersticas de cada agente agressor.
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Pode ocorrer a destruio da clula microbiana presente no interior do fagcito ou a lise de clulas infectadas. 7. MICOSES SUPERFICIAIS E SUBCUTNEAS

As micoses so doenas infecciosas representativas e constituem o principal objeto de estudo da Micologia Mdica. O reservatrio habitual dos fungos que infectam o homem pode ser o prprio homem, os animais ou um stio na natureza, onde o fungo se desenvolve como saprfita. As micoses superficiais compreendem as infeces fngicas que atingem pele, plo, unhas e mucosas. As micoses superficiais estritas localizam-se nas camadas superficiais da pele ou do plo. As dermatofitoses atingem pele, plo ou unhas e so causadas por fungos queratinoflicos, os dermatfitos. As dermatofitoses podem ser transmitidas de homem a homem, de animal ao homem ou do solo ao homem. Micoses superficiais estritas Caracterizam-se por leses nodulares nos plos ou manchas na pele, produzindo alterao mais superficial do estrato crneo e, na maioria das vezes, no induzem resposta inflamatria do hospedeiro. Essas infeces so consideradas mais pelo aspecto antiesttico da leso.
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PTIRASE VERSICOLOR micose superficial, geralmente assintomtica, caracterizada por leses do tipo hipo ou hipersegmentadas, da seu nome de versicolor, localizadas no trax, abdome, pescoo, face e, com menos freqncia, nos membros, axilas, virilhas e coxas. Espcies do gnero Malassezia, fungos lipoflicos, so os agentes da pitirase versicolor. A pitirase versicolor prevalente em zonas tropicais e subtropicais, ocorrendo principalmente em adolescentes e adultos. conhecida tambm como micose de praia, pois quando o indivduo se expe ao sol, as manchas preexistentes do reveladas. As espcies do gnero Malassezia parecem fazer parte da microbiota normal da pele, na sua fase leveduriforme e, por mecanismos ainda desconhecidos, passariam forma filamentosa, tornando-se patognicas. O couro cabeludo e outras reas cobertas de plo seriam o reservatrio do fungo, o que explicaria as freqentes recidivas da micose. As espcies de Malassezia sp. tm sido relacionadas tambm com dermatite seborrica, onicomicose e foliculite.

TINEA NIGRA (TINHA NEGRA) infeco assintomtica de localizao preferencial nas palmas das mos ou nas plantas dos ps. Pode tambm ocorrer em outras reas da pele. Clinicamente, manifesta-se pelo aparecimento de mancha escura, marrom ou negra, de aspecto fuliginoso. Dos agentes da tinha negra, Phaeoannellomyces werneckii a nica espcie encontrada no Brasil.
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PIEDRAS So infeces fngicas que se caracterizam pela presena de ndulos irregulares, aderentes ao plo e, geralmente, visveis a olho nu. A piedra branca, produzidas por leveduras do gnero Trichosporon, caracterizada pela presena de ndulos claros, pouco aderentes ao plo. As colnias so de desenvolvimento rpido, de cor creme. Para o diagnstico, em geral, suficiente a observao microscpica dos plos parasitados. A piedra negra causada por Piedraia hortae, encontrada principalmente em regies tropicais e subtropicais, e endmica na Amaznia, onde denominada tirana. Os ndulos so de cor escura, muito duros, aderentes aos plos e localizam-se somente nos cabelos.

Dermatofitoses As dermatofitoses so produzidas por um grupo de fungos altamente especializados, denominados dermatfitos, que tm uma habilidade de degradar a queratina e transform-la em material nutritivo para seu crescimento. Por essa razo, em hospedeiros imunocompetentes, permanecem restritos ao estrato crneo da pele e seus anexos, pelos e unhas, no invadindo os tecidos mais profundos. O gnero Trichophyton apresenta colnias de desenvolvimento rpido, aspecto algodonoso, branco, com reverso de cores variadas. Microscopicamente, so verificados macrocondeos cilndricos, multisseptados, de paredes lisas e finas, e, em maior quantidade, microcondeos redondos, ovais ou piriformes. Os fungos do gnero Microsporum tm crescimento rpido, com colnias algodonosas ou pulverulentas de pigmentao variada no reverso, do amarelo-ouro ao marrom, de acordo com a espcie. Os macrocondeos so fusiformes, multisseptados, de paredes rugosas e espessas e apresentam poucos microcondios. As colnias do gnero Epidermophyton tm desenvolvimento mais lento, so aveludadas, com sulcos radiados e de cor amarelo-esverdeado. Microscopicamente,

apresentam macrocondios piriformes, multisseptados, de paredes lisas, espessas, com duas a quatro clulas, isolados ou em pequenos cachos. Segundo o gnero dos dermatfitos, as leses podem localizar-se na pele, nos pelos e/ou nas unhas e as dermatofitoses so denominadas ainda de acordo com o local afetado: tinea capitis (couro cabeludo), tinea barbae (regio da barba), tinea corporis (pele), tinea pedis (ps), tinea manuum (mos), tinea unguium (unhas). No pelo, os dermatfitos atacam a camada superficial, avanando at o folculo piloso. O pelo perde o brilho, torna-se quebradio e cai. O parasitismo no pelo pode ser externo ou interno, podendo, eventualmente apresentar-se das duas formas. Na pele, os dermatfitos causam leses com propagao radial, circulares, bem delimitadas, geralmente com centro descamativo e bordos eritematosos. Na unha, a infeco inicia-se pela borda livre, podendo atingir a superfcie e a rea subungueal. As unhas tornam-se branco-amareladas, porosas e quebradias. Os dermatfitos so classificados como antropoflicos, geoflicos e zooflicos. Os dermatfitos antropoflicos esto adaptados ao parasitismo humano e mantm seu ciclo na natureza atravs da passagem de homem a homem. Dermatfitos geoflicos so os que tm seu habitat no solo e geralmente esto associados a tecidos queratinizados em processo de decomposio, no solo. As espcies de dermatfitos zooflicos tm os animais como hospedeiros preferenciais, infectando usualmente o homem. Os dermatfitos podem ser transmitidos de homem a homem, do animal ao homem, ou vice-versa, de animal a animal e do solo ao homem e animal, pelo contato direto, ou atravs de escamas epidrmicas e pelos infectados. Os mecanismos de transmisso dos dermatfitos no esto ainda completamente esclarecidos. Dados epidemiolgicos sugerem que a transmisso dos antropoflicos feita pelo contato do indivduo com ambientes contaminados por propgulos do fungo, como piso de salas de banho, saunas, borda de piscinas, ou por meio de objetos de uso pessoa, como pentes, escovas, toalhas. Do ponto de vista epidemiolgico, importante considerar o portador assintomtico de dermatfitos. Vrias pesquisas tm demonstrado a presena de dermatfitos em humanos e outros animais, sem leso clnica aparente. Micoses subcutneas
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As micoses subcutneas so causadas por fungos saprfitas, presentes no solo, nos vegetais e nos animais de vida livre. Tais fungos so parasitas acidentais do homem e dos animais, que adquirem a infeco atravs de traumatismos na pele,

causados por material contaminado. A micose localiza-se na pele, com tendncia a envolver a camadas mais profundas da derme, tecido subcutneo e osso, raramente ocorrendo sua disseminao. Os agentes causais das micoses subcutneas so geralmente considerados com potencial patognico baixo e a exposio frequentemente ocupacional ou relacionada a passatempos como jardinagem, trabalho com madeira etc.
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ESPOROTRICOSE O fungo causador dessa micose Sporothrix schenckii, espcies presente principalmente em solos e vegetais. A forma clnica mais comum a linfocutnea, que compromete pele, tecido subcutneo e gnglios linfticos. No local de penetrao do fungo, forma-se uma leso ulcerada e geralmente, ao longo do trajeto de um linftico aparecem ndulos que amolecem, rompem-se e eliminam pus. A esporotricose mais comum em regies de clima quente. Surtos de infeco geralmente esto relacionados ao trabalho em floresta, minerao e jardinagem. Os animais infectados tambm atuam como transmissores e a doena tem ido observada em caadores de tatus.

CROMOBLASTOMICOSE A cromoblastomicose, tambm chamada de cromomicose ou dermatite verrucosa, uma infeco fngica crnica que afeta a pele e os tecidos subcutneos. Caracteriza-se pelo desenvolvimento de ndulos ou placas verrucosas de crescimento lento. A doena mais comum em regies quentes e midas e os fungos mais comumente relacionados com essa micose so dos gneros: Fonsecaea,

Cladosporium, Exophiala, Cladophialophora, Rhinocladiella e Phialophora. Os fungos causadores da blastomicose crescem em plantas silvestres e no solo e geralmente afetam pessoas que trabalham em reas rurais. A maioria das infeces ocorre em homens, acometendo pernas e braos, provavelmente devido exposio ocupacional. A infeco caracteriza-se pela presena de pequenas ppulas verrucosas que, em geral, crescem lentamente. Nos estgios mais avanados, as leses apresentam-se com mltiplas verrugas grandes, semelhantes a uma couveflor, geralmente agrupadas dentro da mesma regio.

EUMICETOMAS Um micetoma definido clinicamente como um processo infeccioso localizado, crnico e granulomatoso, que envolve os tecidos cutneos e subcutneos. Os eumicetomas so micetomas causados por fungos. Como outras micoses, a maioria

dos eumicetomas tambm acontece em regies de clima tropical. Dentre os gneros de fungos que causam eumicetomas esto: Curvularia, Fusarium, Exophiala, Leptosphaeria, entre outros. So caracterizados pela formao de mltiplos granulomas e abscessos que contm grnulos, muitas vezes eliminados atravs da pele. O processo infeccioso pode ser extenso e deformativo, levando destruio do msculo, tecido conjuntivo e ossos. Os homens so mais afetados que as mulheres e as infeces ocorrem mais frequentemente nos ps e nas mos. Os micetomas no so contagiosos.
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FEO-HIFOMICOSE Feo-hifomicose um termo utilizado para descrever um conjunto de infeces fngicas causadas por fungos pigmentados dos gneros: Phialophora, Cladosporium e Exophiala. Tais fungos existem na natureza como saprfitas do solo, da madeira e de vegetao. Penetram no organismo atravs de traumatismo e, em geral, apresentam baixa patogenicidade. Comumente, a infeco apresenta-se como um cisto inflamatrio solitrio. As leses ocorrem geralmente nos ps e nas pernas, embora outros locais do corpo possam ser envolvidos. As leses aumentam lentamente e se expandem em meses ou anos, sendo geralmente indolores. Quando localizadas prximo a uma articulao, as leses podem ser confundidas com um cisto sinovial, podendo tornar-se grandes o suficiente para interferirem com os movimentos.

LOBOMICOSE uma micose tambm conhecida como blastomicose de Jorge Lobo e tem como agente etiolgico o fungo Lacazia loboi. A doena caracterizada pela presena de leses isoladas ou disseminadas na pele e nos tecidos subcutneos. O fungo penetra na pele atravs de traumatismos em diferentes reas do corpo. Ocorre principalmente em reas de florestas densas, de clima quente e mido, acometendo frequentemente seringueiros, garimpeiros e lavradores. No se conhece a transmisso entre humanos. 8. MICOSES PROFUNDAS E OPORTUNISTAS

As micoses profundas possuem algumas caractersticas em comum, tais como: so causadas por fungos com virulncia individual e inerentes a cada espcie; esses fungos so dimrficos e necessitam, para o seu isolamento, de laboratrios com as condies tcnicas de segurana mnimas e profissionais bem treinados. Esses

fungos geralmente so autctones de regies de clima quente e mido, tendo sua distribuio relativamente limitada s zonas tropicais. Tais fungos vivem

saprofiticamente no solo, na forma filamentosa e, em condies especiais, so capazes de liberar estruturas de reproduo assexuada (condios) que, ao serem inaladas por homens e animais, vo ocasionar uma primoinfeco, que pode ser em geral discreta ou mesmo no aparente. Essas infeces apresentam ainda, como caracterstica comum, a ausncia de contgio ao contato com uma pessoa infectada. Entretanto, populaes que vivem em reas conhecidas como zonas endmicas, onde podem ser encontrados esses fungos em fase filamentosa no solo, mesmo que sejam imunocompetentes, so passveis de desenvolver esse tipo de infeco. Paracoccidioidomicose uma micose profunda, causada pelo Paracoccidioides brasiliensis, de incio pulmonar, com manifestaes observadas preferencialmente na pele, mucosas, gnglios e rvore respiratria, mas que podem ser observadas em outros rgos. uma micose estritamente localizada na Amrica Latina. Apresenta maior incidncia, sobretudo no Brasil e em particular na regio Sudeste, principalmente em So Paulo. Estudos mostram que esse fungo mais frequentemente encontrado em regies de floresta, com elevada umidade relativa do ar e temperatura
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moderadamente quente. O fato de esse fungo, na forma filamentosa, sobreviver muito bem em gua evoca rios e lagos como possveis habitats naturais. A aquisio da infeco se faz, sobretudo por via respiratria, com a inalao de condios da forma filamentosa de P. brasiliensis, e que as leses de pele e mucosa nada mais so do que as manifestaes cutneas secundrias da disseminao da doena. O homem parece ser a nica espcie animal a desenvolver casos de paracoccidioidomicose, no tendo sido, at o presente, observada a doena em outras espcies animais. A forma assintomtica da doena a mais comum e tem sido mais diagnosticada em zonas endmicas; na maioria dos casos, no se observa nenhuma alterao clnica nem radiolgica. A forma aguda/subaguda (tipo juvenil) responsvel por 3 a 5% dos casos da doena, predominando em crianas e adolescentes, mas podendo acometer indivduos at os 35 anos de idade. Em ordem de frequncia, podemos destacar a presena de linfadenomegalia, manifestaes digestivas, hepatoeplenomegalia, envolvimento steo-articular e leses cutneas como as principais formas de apresentao desta forma da micose. A forma crnica (tipo adulto) responde por mais de 90% dos pacientes, e apresenta-se principalmente em adultos entre os 30 e 60 anos, predominantemente do sexo masculino. A doena progride lentamente, de forma silenciosa, podendo levar anos at que seja

diagnosticada. As manifestaes pulmonares esto presentes em 90% dos pacientes. Os pulmes podem ser o nico rgo afetado em at 25% dos casos. Geralmente, a doena envolve mais de um rgo simultaneamente (apresentao multifocal), sendo pulmes, mucosas e pele os stios mais acometidos pela infeco. Histoplasmose uma infeco que tem como porta de entrada e manifestaes primrias o pulmo, podendo o microrganismo disseminar-se por via hematognica ou linftica. O agente causador dessa doena um fungo dimrfico denominado Histoplasma capsulatum, que pode causar doena em seres humanos e em diversas espcies animais temperados. Esse fungo tem uma preferncia por solos fofos, com PH levemente cido e enriquecido por matria orgnica, como fezes de aves e morcegos. A aquisio da infeco se faz geralmente por inalao dos condios, ao limpar ou demolir galinheiros, viveiros de pssaros, ou ainda, ao penetrar em cavernas habitadas por morcegos.

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A histoplasmose tem distribuio quase cosmopolita, tendo sido descrita em mais de 50 pases e diagnosticada, praticamente, em todas as regies de clima tropical e temperado. O homem e numerosas outras espcies animais, tais como ces, roedores silvestres e domsticos, so suscetveis a desenvolver a histoplasmose; os prprios morcegos, que voam a grandes distanciam e vivem em grupo, podem desenvolver a doena, facilitando assim a disseminao do fungo. A doena pode se manifestar de forma assintomtica, na qual os indivduos entram em contato com o fungo, mas no desenvolvem a doena. Algumas vezes podem aparecer sintomas que se assemelham a um resfriado. Quando no ocorre a cura espontnea, evolui para a forma generalizada, que ocorre por disseminao pulmonar e apresenta sintomas de acordo com o rgo afetado, principalmente fgado, bao e linfonodos.

Coccidioidomicose uma micose endmica, causada por duas espcies fngicas indistinguveis: Coccidioides immitis e Coccidioides posadasii. A doena transmitida pela inalao de artrocondios, que so fragmentos de hifas do fungo. Na maioria das pessoas a infeco assintomtica, mas pode ocorrer de forma progressiva levando morte. O fungo encontrado no solo e nas fezes de morcegos e roedores. C. immitis provavelmente o mais virulento de todos os patgenos fngicos que afetam o homem. A coccidioidomicose primria pode se manifestar na forma de

doena pulmonar assintomtica ou uma doena semelhante ao resfriado com febre, tosse, dor torcica e perda de peso. Em pacientes que apresentam sintomas por 6 semanas ou mais, a doena progride para a coccidioidomicose secundria, que pode incluir ndulos, doena cavitria ou doena pulmonar progressiva.

MICOSES OPORTUNISTAS

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Os fungos oportunistas s causam doena quando a resistncia do hospedeiro encontra-se diminuda. Os pacientes que correm alto risco de infeces por fungos oportunistas incluem indivduos com processos malignos, transplantes de medula ssea ou de rgos, AIDS, queimaduras, traumatismo ou doenas que necessitam de uso prolongado de cateteres intravenosos ou intra-arteriais. Alem disso, so observadas infeces fngicas em pacientes que receberam terapia antibacteriana de amplo espectro e cuja flora bacteriana intestinal normal foi acentuadamente reduzida. Nesses casos, fungos como Candida albicans proliferam desenfreadamente, podendo substituir as bactrias da flora normal. Candidase

A Candida encontrada na faringe posterior e no intestino de muitos indivduos sadios. O fungo parece exibir tropismo particular para os rins, podendo disseminar-se atravs do sangue para vrios rgos diferentes. Em geral, a infeco sistmica precedida por outras infeces superficiais, como aquelas que acometem a boca, a faringe, o esfago ou outras partes do trato gastrintestinal ou a vagina. Nos pacientes idosos debilitados, recm-nascidos, prematuros e desnutridos, a ocorrncia da candidase alta, em suas variadas formas clnicas. Um dos principais fatores para a instalao da candidase a umidade.

Aspergilose

O Aspergillus fumigatus pertence ao grupo dos fungos filamentosos e so to ubquos que podem facilmente crescer em culturas a partir do ar, do solo ou de vegetao com bolor. No fazem parte da flora normal dos seres humanos e no crescem em tecidos normais. Esses fungos s provocam doena invasiva em indivduos profundamente imunocomprometidos, sobretudo aqueles com neutropenia. Os pulmes ou os seios paranasais constituem habitualmente o local inicial de invaso. Os pacientes com essas infeces invasivas tambm apresentam abscessos

intracerebrais, lceras necrticas da pele e leses do osso, do fgado e das mamas. O Aspergillus tambm pode causar doena no-infecciosa, como alergia ou asma aps inalao e crescimento do fungo na rvore brnquica. Criptococose
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A criptococose est habitualmente includa entre as infeces fngicas oportunistas, embora ocorra tambm em indivduos imunocompetentes. Nesses litmos anos, a infeco criptoccica, em particular a meningite, tem sido observada mais frequentemente em pacientes com AIDS. O agente etiolgico da que criptococose uma nos levedura encapsulada, de aves,

Cryptococcus

neoformans,

encontrada

excrementos

particularmente de pombos. O microrganismo tambm encontrado em frutas e vegetal podre. O fungo inalado nos pulmes, onde pode causar pneumonia,

entretanto, a manifestao clnica mais frequente a meningite. 9. COLETA E TRANSPORTE DE AMOSTRAS MICROBIOLGICAS

1. Introduo

O fator fundamental na qualidade do trabalho que se realiza no setor de Microbiologia constitui em uma avaliao adequada da coleta e transporte das amostras a serem avaliadas. A coleta, a conservao e o transporte de material ou amostra clnica constituem a base do trabalho microbiolgico, que leva identificao do agente infeccioso e do perfil de sensibilidade aos antimicrobianos. 2. Pedido de exame

O pedido de exame microbiolgico deve informar: - Nome, data de nascimento e registro do paciente; - Clnica, enfermaria, setor; - Dados clnicos, hiptese diagnstica e o uso de antimicrobianos; - Material (precisar o tipo e o local da coleta); - Especificar os exames: microscopia direta (a fresco, campo escuro), com colorao (Gram, pesquisa de BAAR), cultura e antibiograma para bactrias, cultura e pesquisas especiais (anaerbio, fungo, micobactria); - Data da solicitao, assinatura e nome legvel do requisitante;

- Data, horrio da coleta e nome do responsvel pela coleta.

3. Coleta de material A coleta deve ser realizada, sempre que possvel, antes do incio ou da modificao da terapia antimicrobiana. O material colhido deve ser representativo do processo infeccioso investigado, devendo ser eleito o melhor stio da leso. Por exemplo, as crostas das feridas devem ser removidas, uma vez que a melhor amostra localiza-se abaixo dessa crosta. A coleta deve ser feita dentro da tcnica assptica, utilizando recipientes de boca larga e materiais estreis e evitando ou diminuindo ao mximo a contaminao com a microbiota no representativa do processo infeccioso. Conforme as normas de biossegurana, todo material ser colhido, acondicionado, transportado, processado e descartado como potencialmente
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infectante, independentemente do diagnstico do paciente. Para evitar a exposio de risco biolgico, observar as rotinas de cada procedimento e usar os EPI (luvas, mscara, culos de proteo, avental) indicados. 4. Acondicionamento, conservao e transporte de material

Todo material deve ser enviado ao laboratrio em recipiente apropriado para o tipo de exame e material e devidamente acondicionado para evitar extravasamento do material durante o transporte. Aps a coleta, o material deve ser transportado ao laboratrio no menor tempo possvel. Quanto mais cedo iniciar o processamento da amostra, maior a chance de recuperar o agente infeccioso e de beneficiar o paciente. OBSERVAES: - Meio de transporte serve para manter a viabilidade das bactrias, porm sem permitir a multiplicao. Ex.: Stuart, Cary Blair. - Material colhido com swab deve ser processado imediatamente ou imerso em meio de transporte e mantido em temperatura ambiente, por no mximo 8 horas. - Material em que h suspeita de presena de Neisseria e Haemophilus, bactrias que no resistem a baixas temperaturas, no devem ficar em geladeira. - Material naturalmente rico em flora microbiana (fezes e escarro) ou obtido de stios de difcil descontaminao (urina, secrees de orofaringe, leses superficiais) deve ser transportado com os cuidados necessrios manuteno da proporo da flora original. Se o material for mantido temperatura ambiente por perodo superior a 30 minutos, pode ocorrer multiplicao bacteriana (microbiota endgena) e, consequentemente, prejudicar o isolamento do agente infeccioso.

- Material clnico proveniente de stios estreis (sangue, lquor, lquido sinovial etc) deve ser colhido e semeado diretamente em meios de cultura, transportado temperatura ambiente e colocado em estufa entre 35C e 37C. Na impossibilidade deste procedimento, coletar o material em frasco esterilizado e conserv-lo temperatura ambiente, at o momento do processamento. Tabela 1 - Acondicionamento e tempo mximo para recepo da amostra. Amostra Respiratria Hemocultura Fezes Fezes em meio Tempo 30 min. 30 min.. (no refrigerar) 30 min de 12 horas Acondicionamento Frasco seco estril Frascos com meio de cultura Frasco seco estril Meio Cary Blair
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transporte Urina Urina refrigerada (4C) Swab em meio 30 min. 4 horas de Imediatamente Frasco seco estril Frasco seco estril -

transporte Swab sem meio de Imediatamente -

transporte Cateter (segmento) Lquor Imediatamente refrigerar) Lquido pleural e outros Imediatamente lquidos estreis Fragmento de tecido Imediatamente Frasco seco estril de cavidades refrigerar) (no Frasco seco estril ou frascos com meio de cultura (no Frasco seco estril vascular Imediatamente -

5. Coleta de material especfico

5.1. Hemocultura Coletar antes do incio do tratamento com antimicrobiano ou, se j estiver em uso de antimicrobiano, imediatamente antes da prxima dose. O nmero de amostras e o intervalo entre as amostras so relacionados ao diagnstico e condio clnica do paciente.

5.2. Urocultura

A urina na bexiga estril, porm, com exceo da coleta suprapbica, todos os mtodos propiciam contaminao da urina com a microbiota uretral. A coleta de urina do jato mdio o mtodo mais utilizado, por no ser invasivo e pela relativa confiabilidade, quando realizada dentro da tcnica adequada. A presena de piria e de bactrias ao exame microscpico da urina no centrifugada corada pelo Gram devem ser correlacionados.
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5.3. Secreo de orofaringe O principal objetivo a recuperao de Streptococcus pyogenes, orientando o paciente a realizar higiene oral sem utilizar anti-sptico ou pasta dental. Colher dois swabs e enviar imediatamente ao laboratrio para evitar a excessiva secagem.

5.4. Fezes Devem ser coletadas no incio ou fase aguda da doena, quanto os patgenos esto usualmente presentes em maior nmero. Preferir as pores mucosas e sanguinolentas do material. COLETAS EM MICOLOGIA Amostras de micoses superficiais e cutneas - Amostras de pele A prvia desinfeco da leso com algodo embebido em lcool a 70% diminui a biota bacteriana, aumentando a sensibilidade do exame micolgico. Raspar a leso com bisturi, cureta esterilizada ou com lminas de vidro previamente flambadas. Nas leses sugestivas de dermatofitose, a coleta deve ser feita nas bordas da leso, j que este o stio ativo da infeco. Quando o raspado da leso no pode ser realizado, pode-se optar por mtodos tais como o de Porto (s para pitirase versicolor) que consiste em utilizar uma fita adesiva transparente (Durex) que pressionada sobre a leso, removida e fixada sobre uma lmina.

- Amostras de unha A leso pode se localizar na regio subungueal distal, proximal ou lmina superficial da unha. A coleta da amostra depender do tipo da leso. Deve-se remover a presena de esmalte antes da coleta. Na onicomicose superficial branca, raspa-se as reas esbranquiadas da parte superficial com o auxlio de bisturi estril. No acometimento sub-ungueal, deve-se raspar profundamente a rea infectada desde a poro distal proximal.

Os primeiros detritos coletados da poro distal devero ser eliminados, pois so ricos em contaminantes. As escamas obtidas da poro profunda da leso podero ser usadas para o exame micolgico. Quando as unhas so distrficas, podese auxiliar a coleta com tesouras limpas e desinfetadas.

- Amostras de cabelo e pelo Nos casos de piedras, cortam-se com tesouras os cabelos ou pelos apresentando ndulos fngicos (observados com auxlio de lupa). Nas tinhas do couro cabeludo e da barba, as amostras podem incluir escamas da pele e os pelos ou cabelos alterados. Os cabelos opacos e engrossados so facilmente arrancados, a partir das bordas das placas alopcicas com ajuda de uma pina limpa e flambada. Os pelos, escamas de pele ou de unhas, podem ser colhidos e transportados entre duas lminas de vidro limpas, secas e flambadas, embrulhadas em papel, ou em placas esterilizadas, sempre com a identificao da amostra.

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- Amostras oculares Material de conjuntiva colhido da mucosa, desde a poro proximal em direo borda, com swab estril, embebido em soluo salina. O swab pode ser colocado num tubo estril, contendo meio semi-slido de transporte ou 0,5mL de soluo salina. Material ocular (crnea) deve ser colhido apenas por oftalmologistas, raspando as reas necrticas, ulceradas e supurativas da leso com esptula esterilizada. Esta amostra ser processada em lmina (exame microscpico direto) e semeada imediatamente nos meios de cultivos apropriados ou tubo estril contendo soluo salina.

- Amostras de ouvido Geralmente, o material biolgico obtido a partir do conduto auditivo externo, com swab esterilizado umedecido previamente em soluo salina.

MUCOSAS

- Mucosa oral As amostras devem ser obtidas por raspado da superfcie epitelial acometida, empregando esptula ou bisturi rombo esterilizado. Na candidase oral em que se verificam placas esbranquiadas, o material pode ser colhido com swab estril, ou ala de platina, e levado a um tubo esterilizado, contendo soluo salina.

- Mucosa nasal O material nasal pode ser colhido com esptula, bisturi, ala ou swab.

- Mucosa vaginal As amostras de fluxo vaginal so coletadas com swab, sem asseio prvio da paciente e transportadas para um tubo com soluo salina esterilizada.
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- Mucosa genital masculina A amostra pode ser colhida com swab, da rea da glande que apresenta pontos esbranquiados ou pseudomembranas, ou do prepcio, onde podem ser encontradas vesculas.

AMOSTRAS DE MICOSES SISTMICAS

- Escarro Amostras de escarro so coletadas aps prvia lavagem bucal,

preferencialmente em jejum. O material dever conter escarro profundo, livre de saliva e ser colhido em frasco de boca larga, estril. No caso de pacientes que no expectoram facilmente, podem ser usadas nebulizao, com soluo salina hipertnica.

- Lavado brnquico Procedimento realizado pelo mdico com broncoscpio. O material clnico colocado em frasco estril e enviado ao laboratrio.. O material biolgico centrifugado a 2500rpm durante 10 minutos. A preparao microscpica realizada a partir do sedimento.

- Bipsia Devem ser obtidas amostras representativas da patologia suspeita. O material deve ser dividido em dois frascos estreis diferentes, um contendo formol a 0,4% e outro contendo soluo salina, destinados ao exame histopatolgico e micolgico, respectivamente.

- Mdula ssea

 um procedimento mdico que exige rigorosa assepsia. Podem ser obtidas 23 mL do material com seringa com heparina, que deve ser transportado imediatamente ao laboratrio micolgico.

- Lquido cefalorraquidiano (LCR) Para o estudo micolgico devem ser colhidos 5 a 10 mL de LCR, obtido por puno lombar, em condies de rigorosa assepsia. O LCR normalmente livre de microrganismos. Qualquer agente observado deve ser considerado como um patgeno potencial.
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- Sangue Realizar assepsia do stio escolhido para puncionar com lcool 70%, esperar 5 segundos e aplicar soluo de Iogo-povidine a 10%, coletar de 8 a 10 mL de sangue venoso (adultos) e de 1 a 3 mL (crianas), para cada frasco coletado. Terminada a puno, retirar a agulha trocando-a por uma nova, inocular o sangue no frasco, enviando-o de imediato ao laboratrio. Nmero e intervalo das amostras: -Suspeita de septicemia: colher duas amostras com intervalo de uma hora. -Febre de origem desconhecida: colher duas amostras com intervalo de uma hora. Se forem negativos, aps 24 a 36h, colher as outras duas amostras com intervalo de 1 hora.

- Urina A assepsia com gua e sabo da regio genital deve ser rigorosa. Coletar 10 mL de urina do segunda jato urinrio em frasco esterilizado. Crianas: Fazer assepsia rigorosa dos genitais e regio perianal com gua e sabo, colocar o coletor urinrio adequado, segundo o sexo. Uma vez obtida a amostra, mandar o coletor fechado ao laboratrio (o coletor dever ser trocado a cada 30-40 minutos caso a criana no tenha urinado). Paciente com sonda vesical de permanncia: fazer a prvia assepsia com lcool 70%, coletar 10mL da amostra puncionando no lugar do dispositivo para coleta de urina, e depositar em tubo esterilizado adequadamente fechado e transportar ao laboratrio. No caso da sonda urinria no apresentar dispositivo para coleta de urina, recomendvel desligar a sonda vesical do sistema de drenagem e obter a amostra de urina gota a gota, diretamente no frasco estril. Todo o procedimento dever ser realizado respeitando as normas de assepsia.

CAUSAS PARA REJEIO DE AMOSTRAS BIOLGICAS:

- Amostras no rotuladas e sem identificao - Divergncia na identificao do paciente com a amostra - Demora prolongada no envio da amostra ao laboratrio - Amostra com ruptura do frasco ou com derramamento - Frasco inapropriado ou meio de transporte imprprio - Falta de indicao de tipo de amostra, procedncia e tipo de exame - Um nico swab com mltiplas ordens
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7. REFERNCIAS

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