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Cuantificacin de cido ascrbico por cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC)

Gutirrez, Gustavo A. Moncaleano, Juan S.


Espacio de laboratorio de Anlisis Instrumental
Departamento de Ciencias Qumicas
Facultad de Ciencias Naturales
Universidad Icesi

1. Introduccin

El cido ascrbico, nombre comn por el cual se
denomina el compuesto nombrado por la Unin
internacional de qumica pura y aplicada:
IUPAC, como; 5-((s)-1,2-dihidroxietil)-3,4-
dihidroxifuran-2(5H)-ona (Ver estructura en
figura 1) es una vitamina biosintetizada por la
inmensa mayora de los seres vivos
[1]
: Plantas,
protistas, bacterias y mamferos entre los
cuales una notable
excepcin son los
humanos, cuyo gen
que codifica para la
ltima enzima de la
ruta biosinttica la L-
gulonolactona oxidasa
es defectuoso en los mismos. El cido ascrbico
es fundamental, su deficiencia puede conllevar
a una condicin mdica conocida como
escorbuto, donde la ausencia de dicho
compuesto cofactor enzimtico requerido en dos
pasos importantes en la sntesis de colgeno,
producindose as versiones defectuosas del
mismo
[2]
.

Por su importancia metablica la cuantificacin
de cido ascrbico de diversas matrices como lo
son comestibles y productos farmacuticos es
de vital importancia tanto en investigacin
como en la industria, por eso se han
desarrollado varias tcnicas rutinarias para tal
fin, entre stas la cromatografa lquida de alta
resolucin. En el presente informe se describe
la elaboracin de una curva de calibracin en el
rango de 1 a 10 ppm y la comparacin de la


Concentracin calculada a partir de la
regresin lineal y la estimada en una solucin
de muestra preparada a partir de tabletas
comerciales de Vitamina C.

2. Resultados

Se prepar una solucin stock de 49 ppm a
partir de un patrn de cido ascrbico en una
solucin 0.05N de fosfato monobsico de sodio,
a partir de sta se prepararon cuatro
soluciones para la curva de calibracin de
concentraciones 1, 2, 4 y 10 ppm donde una
alcuota de la solucin stock fue disuelta en
fase mvil; fosfato monobsico de sodio 1%, con
pH ajustado a 2,7. Se ajust el flujo a

y la longitud de onda del detector UV-


Vis a 265nm.

Tabla 1. Resultados obtenidos en cromatografa,
correlacin: concentracin rea bajo la curva.

Concentracin
(ppm)
rea
41471
2 51573
4 122676
10 297393

Se prepar una solucin de muestra a partir de
tabletas comerciales de vitamina C el rea bajo
la curva de la muestra obtenida con idnticos
parmetros cromatogrficas a los usados en el
anlisis de las soluciones de elaboracin de la
curva de calibracin fue 126602.
Figura 1. Estructura del c.
Ascrbico.
3. Anlisis de resultados

Para el desarrollo de ste estudio de
cuantificacin de vitamina C, se utiliz un
cromatografo HPLC ________________
empleando una columna 25 cm de longitud, 4
mm de dimetro, Hypersil C18 (producida por
Thermo Scientific corp.) cuenta con un relleno
de partculas esfricas de slica de ncleo
slido, sometidas a un proceso de seleccin por
tamao y uniformidad que aseguran una
distribucin totalmente uniforme, mejorando
notablemente parmetros como la
reproducibilidad, velocidad de separacin y
resolucin. stas partculas estn recubiertas
con un grupo C18, una cadena de grupos alquilo
que representa una carga de carbono del 10%
se encuentra en un rango intermedio por lo que
es aplicable en un amplio rango de situaciones
[3]
.

Se us una longitud de onda de 265nm en el
detector para registrar el analto lo cual es
acertado dado que de acuerdo a clculos
tericos el mx del cido ascrbico se encuentra
a 258,65nm. Puede observarse el espectro UV-
Visible calculado usando el mtodo semi-
emprico de qumica computacional ZIndo
ampliamente usado en el clculo de estados
excitados
[4]
para la estructura de geometra
optimizada a travs del mtodo ab initio
Hartree-Fock Restringido con una base 6-31G
usando el paquete de qumica computacional
Gaussian 03.


Figura 2. Espectro UV-Vis para el cido ascrbico
Si se someten los datos obtenidos para la curva
de calibracin a un tratamiento de regresin
lineal se obtiene la siguiente grfica y
respectiva ecuacin asociada.
0 4 8 12
0
100000
200000
300000
A
r
e
a

(
u
^
2
)
Cocentracion (ppm)

Figura 3. Dispersin: rea Vs. Concentracin en ppm
Si se despeja la variable concentracin se
obtiene



Donde, A= rea bajo la curva
C=Concentracin

Reemplazando el valor de rea de la muestra,
se obtiene una concentracin de 4,193 ppm.
Asumiendo la concentracin calculada de la
muestra como valor terico esto genera un
porcentaje de error del 00,00%

4. Bibliografa

1. Crawford, T. C. (1978). U.S. Patent No. 4,111,958. Washington, DC: U.S.
Patent and Trademark Office.

2. Fain, O. (2004). [Vitamin C deficiency]. La Revue de medecine
interne/fondee... par la Societe nationale francaise de medecine interne,
25(12), 872-880.

3.http://www.thermoscientific.com/en/product/hypersil-ods-c18-hplc-
columns-5-m-particle-size.html

4. Leiva, L. C., Romero, J. M., Jorge, N. L., Gmez Vara, M. E., & Castro, E.
A. Anlisis de espectroscopa UV e IR del 1, 2, 3, 4-Tetroxano. Un estudio
terico y experimental.

rea=29303(cocentracin)+3741