1

Biometría Hemática (BH)
Fórmula roja:
Hemoglobina (Hb):
Hematocrito (Hto):
Concentración media de hemoglobina (CMHb):
Volumen globular medio (VCM):
Hemoglobina globular o corpuscular media (HbCM):
Millones de eritrocitos/mm3:
Fórmula blanca:
Leucocitos/mm3:
% de linfocitos: % de neutrófilos en banda: % de neutrófilos segmentados:
% de monocitos: % de basófilos: % de eosinófilos:
% de blastos:
Plaquetas/mm3:

Biometría Hemática (BH)
Es un examen de laboratorio donde se estudian los elementos formes de la sangre. Estos estudios consisten en: concentración,
cantidad, tamaño y morfología.
HEMOGLOBINA
La hemoglobina (Hb), componente principal de los glóbulos rojos, es una proteína conjugada que sirve de vehículo para el transporte
de oxígeno y de CO2. Cuando la hemoglobina está totalmente saturada, cada gramo contiene alrededor de 1.34 ml de oxígeno. La
masa de los eritrocitos de un adulto contiene 600 g de hemoglobina capaz de transportar 800 ml de oxígeno.
Una molécula de hemoglobina consta de dos pares de cadenas polipeptídicas (globina) y cuatro grupos prostéticos hem que conti enen
cada uno un átomo de hierro ferroso. Cada grupo hem se localiza precisamente en una determinada zona de una de las cadenas de
polipéptidos. Localizado cerca de la superficie de la molécula, el hem se combina de forma reversible con una molécula de oxí geno o
dióxido de carbono. La principal función de la hemoglobina es el transporte del oxígeno de los pulmones, donde la tensión del oxígeno
es elevada, hacia los tejidos, en donde es baja. A una tensión de oxígeno de 100 mm de Hg, en los capilares pulmonares, el 95 al 98%
de la hemoglobina se combina con el oxígeno. En los tejidos, donde la tensión del oxígeno puede descender hasta 20 mm de Hg, el
oxígeno se disocia fácilmente de la hemoglobina; en este caso menos de un 30% puede permanecer combinado con la hemoglobina.
La hemoglobinometría es un método para medir la concentración de hemoglobina en la sangre. La anemia, una disminución de la
concentración de hemoglobina por debajo de lo normal del recuento de eritrocitos o del hematocrito, constituye una alteración muy
2

corriente y una frecuente complicación de otras enfermedades. El diagnóstico clínico de anemia basado en la estimación del color de
la piel y las mucosas visibles es de poca garantía. Para hacer la cosa más complicada, la anemia suele estar enmascarada, en
muchos procesos, por otras manifestaciones. En una extensión limitada pueden aplicarse consideraciones similares a procesos con
valores de hemoglobina anormalmente elevados. Por todas estas razones, la estimación correcta de la hemoglobina es importante y la
hemoglobinometría es una de las pruebas habituales que debe llevarse a cabo prácticamente en todos los pacientes.

Determinación de la concentración de hemoglobina.
El método más empleado es el de la cianometahemoglobina, otros métodos son: el de la oxihemoglobina y el que mide el contenido de
hierro.
Método de la cianometahemoglobina.
Principio: El ferricianuro potásico oxida la hemoglobina a metahemoglobina y el cianuro potásico proporciona los iones cianuro (CN
-
)
para formar cianometahemoglobina que tiene una absorción máxima a 540 nm. La capacidad de absorción de la solución se mide en
un espectrofotómetro a 540 nm y se compara con la de una solución estándar.
Reactivo: El disolvente utilizado es el reactivo de "Drabkin". Esta solución debe ser de un color amarillo claro, pálido y tener un pH de
7 a 7.4.
Método: Se diluye la sangre en una solución de ferricianuro potásico y cianuro potásico: se añaden 20 microlitros de sangre a 5 ml de
disolvente, se mezclan bien y se mantienen a temperatura ambiente durante 10 minutos. Se determina la capacidad de absorción,
frente al blanco reactivo en el espectrofotómetro a 540 nm. Se abre un vial de hemoglobina estándar y se mide la capacidad de
absorción a temperatura ambiente, en el mismo aparato y de una manera similar.
Es conveniente calibrar el espectrofotómetro al utilizarlo para hemoglobinometría, preparando una curva estándar o una tabla que
relaciona la capacidad de absorción a la concentración de hemoglobina en g/dl.

Hemoglobinas normales
El grupo hem es idéntico en todas las hemoglobinas humanas. La parte proteica de la molécula (globina) consta de cuatro cadenas de
polipéptidos. En los individuos normales se encuentran por lo menos tres tipos distintos de hemoglobinas y se ha determinado la
estructura de cada uno de ellos.
Hb A (alfa2, beta2). La hemoglobina A es la más importante de las hemoglobinas del adulto normal. Las cadenas de polipéptidos de la
parte globínica de las moléculas son de dos tipos: tipo alfa (dos cadenas idénticas) con 141 aminoácidos y tipo beta (dos cadenas,
también idénticas) con 146 aminoácidos. Cada cadena está ligada a un grupo hem. La molécula es elipsoidal, con los cuatro grupos
hem en su superficie que funcionan combinándose reversiblemente con oxígeno.
Hb F (alfa2, gama2). Es la hemoglobina principal del feto y del recién nacido. La afinidad aumentada para el oxígeno de la sangre fetal
con respecto a la sangre adulta no se debe a la hemoglobina en sí, sino probablemente al medio ambiente de los hematíes. Las dos
cadenas alfa son idénticas a las de la Hb A, y las dos cadenas gama, con 146 aminoácidos residuales, difieren de las cadenas beta.
En individuos normales, la Hb F posee dos tipos de cadena gama diferenciados por un aminoácido, que puede ser alanina o glicina, en
la posición 136.
3

Hb A2 (alfa2, delta2). La Hb A2 constituye del 1.5 al 3.5% de la hemoglobina del adulto normal. Sus dos cadenas alfa son iguales que
en la Hb A y en la Hb F; sus dos cadenas delta difieren de las cadenas beta en sólo 8 de sus 146 aminoácidos.
La síntesis de cada cadena delta se inicia tarde en la vida fetal y se produce sólo en normoblastos (no reticulocitos). El ni vel de Hb A2
aumenta de forma gradual durante el primer año de vida, período en que se consigue el nivel de adulto. La Hb A2 está aumentada en
algunas talasemias beta. La deficiencia de hierro causa una reducción en la síntesis de Hb A.

HEMATOCRITO

El hematocrito de una muestra de sangre es la relación del volumen de eritrocitos con el de sangre total. Se expresa como un
porcentaje o, preferiblemente, una fracción decimal. El hematocrito venoso coincide exactamente con el obtenido por punción cutánea;
ambos son mayores que el hematocrito corporal total. La heparina seca, el oxalato equilibrado o el E.D.T.A. resultan satisfactorios
como anticoagulantes. El hematocrito se puede medir directamente por centrifugación con macrométodos o micrométodos, o, de forma
indirecta, como el producto de V.C.M. X recuento de hematíes en aparatos automáticos.

Macrométodo de Wintrobe

Equipo. El tubo de hematocrito de Wintrobe es de cristal con un orificio interno uniforme y un fondo aplanado. Está grabado en
milímetros de 0 a 105 y tiene un tapón de goma para evitar la evaporación durante el largo período de centrifugación. De los distintos
métodos de llenado de las pipetas disponibles, la pipeta capilar (Pasteur) con una pera de goma es la más adecuada.

Método. Después de mezclar adecuadamente la muestra para asegurar su distribución y la oxigenación de los eritrocitos, use la
pipeta Pasteur para llenar el tubo de hematocrito. Introduzca la punta de la pipeta en el fondo del tubo. A medida que se va llenando el
tubo, eleve la punta de la pipeta, pero manténgala por debajo del menisco de sangre con el objeto de evitar la formación de espuma.
Observe el nivel de la sangre, tape los tubos para evitar la evaporación durante la centrifugación requerida por 30 minutos a 2.500 g.

Efectúe las lecturas sin alterar la muestra. Calcule el resultado con la siguiente fórmula:

Hematocrito = L1
L2

En donde L1 es la columna de eritrocitos en milímetros y L2 es la altura de la muestra total de sangre (eritrocitos y plasma). La capa
blanco-grisácea, de leucocitos y plaquetas por encima de los eritrocitos, no está incluída en L1.
4




















Micrométodo
Equipo. Se recomienda un tubo de hematocrito capilar de 7 cm de longitud con un orificio uniforme de alrededor de 1 milímetro de
diámetro. Para una muestra de sangre tomada directamente de una punción cutánea, se llenan los tubos capilares con una diluci ón de
heparina de 1:1000, secada a 56 ó 37 °C y almacenada. Se dispone de centrífugas especiales que producen campos centrífugos que
oscilan entre 10,000 y 13,000 g.
Método. El tubo de microhematocrito (capilar) se llena por atracción capilar, a partir del punto de punción o de una muestra de sangre
venosa bien mezclada. Los tubos capilares deben llenarse por lo menos 5cm. El extremo vacío se sella con plástico moldeable. Los
tubos llenos se colocan en los canales o surcos radiales del aparato de centrifugación con el extremo cerrado dirigido hacia afuera.
Se coloca el fondo del tubo contra el relleno de goma para evitar roturas. La centrifugación durante 5 min a 10,000–12,000 g es
satisfactoria, a menos que el hematocrito exceda del 50%, en este caso se centrifuga durante 5 min adicionales, con objeto de
asegurar que se ha reducido al mínimo la cantidad de plasma atrapado.
Los tubos capilares no están graduados. La longitud de toda la columna, que incluye el plasma, y de la columna de eritrocitos solo
debe medirse en cada caso con una regla milimetrada y una lupa o con aparatos automáticos o semiautomáticos disponibles
comercialmente.





5

Interpretación de los resultados.
Valores normales:
De 41 a 51 en varones
De 36 a 45 en mujeres
Un valor por debajo de lo normal en un individuo significa anemia, y un valor más alto, policitemia. El hematocrito refleja la
concentración de eritrocitos, no su masa total. Es bajo en la hidremia del embarazo, pero la cifra total de eritrocitos circulantes no está
reducida. El hematocrito puede ser normal o incluso elevado en el shock acompañado por hemoconcentración, aunque la masa total
de eritrocitos puede estar considerablemente disminuida debido a la pérdida de sangre. No es fiable como estimación de anemia
inmediatamente después de una pérdida de sangre, aunque sea moderada, o de una transfusión.


Indices eritrocitarios:

Concentración corpuscular media de hemoglobina (CMCH). Es la concentración media de hemoglobina en un volumen
determinado de concentrado de eritrocitos. Cálculos:

100 *
Hto
Hb
CMHb 
V.N. (32 a 36%)
Volumen Globular Medio (VGM): (Ht. x 10 / Eri), Es el tamaño eritrocítico expresado en femtolitros y se comporta de la siguiente
forma:
Valores de referencia: VCM: de 80 a 100 fentolitros
Valor aumentado: Se presenta en anemia macrocítica en la que la interferencia en la síntesis del ADN causa inhibición de la
división celular y la resultante es la aparición de eritrocitos de gran tamaño (como ocurre en los casos de deficiencia de vitamina B12 y
ácido fólico). También aumenta transitoriamente en los casos de reticulocitosis (anemia regenerativa).
Valor disminuido: Se presenta en casos de deficiencia de hierro
Cálculos:
VCM = (Hto./ Millones de eritocitos) X 10
Desarrollar los cálculos de la práctica en el laboratorio:

6


Hemoglobina Globular Media (HbGM) o Hemoglobina corpuscular media (HCM): (Hb. x 10 / Eri.), Se refiere a la cantidad de
hemoglobina depositada en el eritrocito expresada en picogramos.
Valor aumentado: En los casos de hemolisis tanto in vivo como in vitro; la hemoglobina extracelular también está implícita, aunque el
índice asume que toda la hemoglobina es intracelular por lo que se debe interpretar con reservas. Valor disminuido: En los casos de
deficiencia de hierro.
Valores de referencia: HCM: de 27 a 31 picogramos/célula

Cálculos:
HbCM = (Hb/ Millones de eritocitos) X 10
Desarrollar los cálculos de la práctica en el laboratorio:












RECUENTO DE GLOBULOS ROJOS
Este examen es poco común que se realice en los laboratorios. Nos sirve para determinar el número total de eritrocitos o hematíes que
se encuentran en 1 mm
3
de sangre. Es un análisis importante para valorar anemia o policitemia.


7

Técnica
Tomar la muestra, colocarla en un tubo con EDTA y mezclar perfectamente.
Llenar la pipeta para glóbulos rojos hasta la marca de 0.5
Llenar la pipeta para glóbulos rojos (gowen) con el diluyente o con solución salina hasta la marca de 101 de la pipeta, evitando formar
burbujas y pasar de la marca de 101.
Se quita la boquilla y se tapa la pipeta por los dos extremos mezclándola por lo menos 90 segundos.
Desechar las primeras 5 gotas.
La sexta gota se vacía en la cámara de Neubauer y se observa en el microscopio con el objetivo de 10X en el espacio para glóbulos
rojos.
Nota:
Poiquilocitosis: Diferentes formas de glóbulos rojos.
Anisocitosis: Diferentes tamaños de glógulos rojos.

Actividad: Dibujar y describir lós diferentes tipos de glóbulos rojos. Escribir el concepto de anemia y los diferentes tipos de anemias
vistos en clase.














8













FÓRMULA BLANCA:
Leucocitos/mm3:
% de linfocitos: % de neutrófilos en banda: % de neutrófilos segmentados:
% de monocitos: % de basófilos: % de eosinófilos:
% de blastos:
Plaquetas/mm3:

RECUENTO DE LEUCOCITOS

En el recuento de leucocitos totales no existe distinción entre los seis tipos de células normales (neutrófilos y bandas, linfocitos,
monocitos, eosinófilos y basófilos). Cada tipo de célula tiene su función particular en la defensa del organismo contra las amenazas
exógenas; aquí nos referimos tan sólo a la concentración total de leucocitos en la sangre. Los límites normales para adultos están
situados entre 4.5 y 11 x 10
9
/l.

Muestra: Tomar una muestra de sangre venosa, aproximadamente 3 ml, utilizando principalmente EDTA como anticoagulante ya que
la heparina es poco satisfactoria.

9

Método del hemocitómetro: Este método se utiliza comúnmente en el recuento leucocitario en caso de que no existan métodos
electrónicos: 1) como comprobación de la validez de los métodos electrónicos con el objeto de intentar su calibración; 2) como método
de comprobación de la validez de recuento electrolito en caso de leucopenia profunda o leucemia, y 3) como método de apoyo.

Cámara de recuento: El hemocitómetro es un grueso portaobjetos de cristal en cuyo tercio medio están fijadas tres plataformas
paralelas que se extienden a lo largo de su superficie. La plataforma central está subdividida por una ranura transversal en dos
mitades, cada una mas ancha que las dos plataformas laterales y separadas de ellas y entre sí por fosos. Las plataformas centrales o
piezas de fondo están exactamente 0.1 mm más bajas que las plataformas laterales, y tiene una regla de Neubauer mejorada que
tiene 3 x 3 mm (9 mm
2
) y está subdividida en nueve cuadros secundarios de 1 x 1 mm cada uno (1 mm
2
). Los cuatro cuadrados de las
esquinas denominados A, B, C y D en esta figura, se utilizan para el recuento de leucocitos y están subdivididos en 16 cuadrados
terciarios.
El cuadrado central milimetrado está dividido en 25 cuadrados terciarios, cada uno de los cuales mide 0.2 x 0.2 mm. Cada uno de
éstos se divide de nuevo en 16 cuadrados más pequeños.
EXAMEN DE LA SANGRE TEÑIDA

Preparación y tinción de las extensiones de sangre.

El examen de la extensión de sangre es una parte importante de la evaluación hematológica. La fiabilidad de la información obtenida
depende en gran parte de lo bien hechas y bien teñidas que estén las extensiones, las cuales son sistemáticamente examinadas.
Se utilizan tres métodos de preparación de las extensiones: de doble portaobjetos o en cuña, del cubreobjetos y del spriner (método de
centrifugación). A continuación se describe el método de cuña, que es el más utilizado.

Método de cuña. Colocar una gota de sangre de 2 a 3 mm de diámetro aproximadamente a 1 cm del extremo de un portaobjetos
limpio y sin polvo, situado sobre una mesa o superficie plana. Con el pulgar e índice de la mano derecha sostener un segundo
portaobjetos (extensor) contra la superficie del primero a un ángulo de 30 a 45° y deslizarlo en retroceso contra la gota de sangre
hasta que se establece contacto. Permitir que la sangre se difunda y cubra el ángulo entre los dos portaobjetos. Empujar el
portaobjetos extensor hacia delante con rapidez moderada hasta que toda la sangre se haya extendido en una película de mediano
espesor. El portaobjetos extensor debe ser algo más estrecho que el primero para examinar fácilmente los bordes con el microscopio.
Los portaobjetos se deben secar rápidamente al aire por agitación o con un ventilador. El portaobjetos puede etiquetarse escribiendo
los datos de identificación con un lápiz directamente sobre el extremo más espeso de la película de sangre.

Tinciones de la sangre. Los colorantes de anilina, ampliamente usados en los estudios de la sangre, son de dos tipos en general: los
básicos, como el azul de metileno, y los ácidos como la eosina. Los núcleos y algunas otras estructuras de la sangre se tiñen con los
colorantes básicos, por lo que se denominan basófilos, ciertas estructuras sólo toman los colorantes ácidos y se llaman acidófilas o
eosinófilas. Otras estructuras se tiñen con una combinación de ambos y se denominan neutrófilas.

Tinción de Wright. Se trata de una solución de eosina y una mezcla compleja de tiacinas, que incluyen el azul de metileno
normalmente del 50 al 75%, azur B (10 a 25%) y otros derivados. Este colorante es expendido por el comercio.
En ésta tinción se utiliza también una solución buffer o tampón (pH 6.4) que contiene fosfato diácido de potasio (KH2PO4), fosfato
monoácido de sodio (Na2HPO4) y agua destilada.
10

Procedimiento:
Las extensiones de sangre se deben teñir pocas horas tras la preparación; si tienen que mantenerse sin teñir, habrán de ser fijadas.
La fijación y la tinción se pueden hacer por inmersión de las preparaciones en recipientes llenos de reactivo o cubriéndolas con los
reactivos en posición horizontal. En este último se cubre la extensión con abundante colorante, se evitará la evaporación, la cual da
lugar a precipitación.
1.- La fijación se realiza durante 1 a 2 minutos con metanol absoluto. La preparación se expone a continuación a una solución no
diluída de tinción durante 4 min. Luego, sin quitar la tinción de la preparación horizontal se añade con cuidado una cantidad
igual de buffer y se mezcla soplando suavemente con una pipeta. Esta mezcla se deja por 10 min.
2.- Se limpia con abundante agua el colorante de la preparación horizontal. El lavado durante más de 30 seg reduce la coloración
azul. La parte posterior de la preparación se limpia con una gasa.
3.- Se deja secar al aire la preparación en posición inclinada.
4.- Se observa la preparación en el microscopio con el objetivo 40X y posteriormente con el 100X.

Eritrocitos
En la sangre de una persona sana, los eritrocitos se presentan, cuando no están aglomerados, como discos circulares homogéneos de
tamaño uniforme entre seis y ocho micras de diámetro. En los casos de enfermedad varían los eritrocitos en cuanto al contenido de
hemoglobina, tamaño, forma, propiedades de tinción y estructura.
Color. Contenido en hemoglobina. La intensidad de la tinción indica la cantidad de hemoglobina en los eritrocitos y se emplean los
siguientes términos para describir ésta característica:
Normocromo: se refiere a una intensidad de coloración o tinción normales.
Hipocromía: la parte central de eritrocito se hace mayor y más clara e indica que la hemoglobina está disminuída.
Hipercromía: los eritrocitos son mayores y más espesos, se tiñen más profundamente y tienen menor palidez central, porque tienen un
mayor contenido de hemoglobina.
Tamaño. Los eritrocitos pueden ser anormalmente pequeños o microcitos, anormalmente grandes o macrocitos y/o mostrar
variaciones anormales en el tamaño (anisocitosis).
Forma. La variación en la forma se llama poiquilocitosis. En algunos casos de alteración podemos observar eritrocitos anormales
como: eliptocitos, esferocitos, células diana, esquistocitos o acantocitos.

Leucocitos
Leucocitos presentes normalmente en la sangre.
Neutrófilos (leucocitos neutrófilos polimorfonucleares o granulocitos neutrófilos).Tienen un diámetro de 12 micras y son más
pequeños que los monocitos y eosinófilos y ligeramente mayores que los basófilos. El núcleo se tiñe intensamente, es irregular y
muchas veces asume formas comparables a letras como E, Z y S. Normalmente, los que parecen núcleos separados son segmentos
de material nuclear conectados por delicados filamentos. Este tipo de neutrófilos se les denomina segmentados.
V.N. (45 – 65%) V.N. = Valores normales
Un neutrófilo segmentado tiene por lo menos dos de sus lóbulos separados por este tipo de filamento. Un neutrófilo en banda t iene
una banda de material nuclear más gruesa que un filamento que conecta los lóbulos o presenta un núcleo en forma de U de espesor
uniforme.
V.N. (0 – 7%)
11














Eosinófilos (granulocitos eosinófilos). Los eosinófilos tienen un diámetro de 13 micras. La estructura de estas células se parece a
la de los neutrófilos polimorfonucleares, pero con la singular diferencia con los granulocitos neutrófilos que su citoplasma contiene
gránulos más grandes , redondos u ovalados y con gran afinidad por los colorantes ácidos. Se identifican fácilmente por el tamaño y
color de estos gránulos que se tiñen de rojo brillante con un colorante que contenga eosina.
V.N. (0 – 4%)









Basófilos (granulocitos basófilos). Se parecen a los neutrófilos polimorfonucleares, pero su núcleo es menos irregular y los gránulos
son mayores y con gran afinidad por los colorantes básicos. La característica principal es que al observarlos en el microscopio, sus
gránulos son de color púrpura intenso, mientras que el núcleo se ve más pálido y está parcial o totalmente ocupado por los gránulos.
V.N. (0 – 1%)








12

Monocitos. El monocito es la célula de mayor tamaño de la sangre normal (14-20 micras). Contiene un nucleo único parcialmente
lobulado y fuertemente indentado o en forma de herradura. Ocasionalmente el núcleo de un monocito puede presentar un aspecto
ovalado o redondeado.
El citoplasma es abundante. La cromatina nuclear muestra a menudo un aspecto de hileras finas, paralelas y separadas por
paracromatina agudamente definida. El núcleo se tiñe con menor densidad que el de otros leucocitos. El citoplasma tiene un color azul
gris y un aspecto de vidrio esmerilado y muchas veces contiene gránulos finos color entre rojo y púrpura, menos diferenciados y
pequeños que los gránulos de los leucocitos neutrófilos. Ocasionalmente pueden detectarse gránulos de color azul.
V.N. (4 – 9%)









Linfocitos. Son células mononucleadas que carecen de gránulos citoplasmáticos específicos. Miden de 6-10 micras y presentan un
núcleo único bien definido que contiene bloques pesados de cromatina. La cromatina se tiñe de un color azul obscuro con el colorante
de Wright. EL núcleo es redondo, pero a veces presenta indentaciones en un lado. El citoplasma se tiñe de un color azul claro y se
observa en forma de media luna.
V.N. (24 – 38%)















13

Actividad 1.
A. Defina los siguientes términos:
Neutrofilia, Neutropenia, Eosinofilia, Eosinopenia, Basofilia, Basopenia, Linfocitosis, Linfopenia, Monocitosis y Monocitopenia.

B. Enuncie los trastornos no neoplásicos que producen alteraciones de leucocitos como:
Neutrofilia, Neutropenia, Eosinofilia, Eosinopenia, Basofilia, Basopenia, Linfocitosis, Linfopenia, Monocitosis y Monocitopenia.

Actividad 2: Escriba el conteo diferencial realizado en el laboratorio. Un grueso cubreobjetos, que forma un plano perfecto, acompaña
la cámara de recuento. Por lo general, la cubierta de cristal tiene superficies irregulares y no debe utilizarse. Cuando el cubreobjetos
está situado sobre la plataforma de la cámara de recuento, hay un espacio exacto de 0.1 mm de espesor entre aquél y la plataforma
rayada; por consiguiente, cada milímetro cuadrado del rayado forma la base de un espacio que mide 0.1mm3.
Las cámaras de recuento y las cubiertas deben lavarse inmediatamente después de su utilización con agua templada; se frotan con un
paño limpio sin hilos y se dejan secar al aire. Las superficies no se deben tocar con gasa o trapo de lino, debido a que estos tejidos
pueden arañar las áreas rayadas, y un arañazo en la cámara o en el cubreobjetos no se deben tocar, pues las huellas de los dedos
son difíciles de quitar y pueden originar errores. Antes de su utilización, las superficies deben estar absolutamente limpias, secas y sin
hilos ni marcas de agua. Después de limpiarse nos se deben tocar excepto por los bordes.




Líquido disolvente:
El líquido disolvente lisa los eritrocitos conservando los leucocitos. El líquido disolvente más sencillo y utilizado es una solución al 2%
de ácido acético; pero el siguiente es más satisfactorio:
Acido acético glacial 2 ml
Solución acuosa al 1% de violeta de genciana 1 ml
Agua destilada 100 ml
Técnica:
La sangre correctamente mezclada se diluye en razón de 1:20 en líquido disolvente y la pipeta de Thoma con la mezcla se hace girar
en un mezclador mecánico durante 5 min. Con el cubreobjetos colocado en la cámara de recuento, el extremo de la pipeta que
contiene la mezcla es llevado hasta la ranura en el borde del cubreobjetos. El líquido se desliza bajo el cubreobjetos por atracción
capilar y penetra en la cámara de forma controlada. Hay que tener cuidado de que el líquido llene exactamente el espacio situado
debajo del cubreobjetos, sin que rebose o se formen burbujas.


14

Las células deben asentarse en la cámara durante varios minutos, examinando con el objetivo de bajo aumento (10X) el área rot ulada
para ver si están distribuídas regularmente.
Se realiza el recuento. Se cierra parcialmente el diafragma condensador del microscopio para hacer que los leucocitos resalten con
nitidez utilizando los lentes de bajo aumento (10x). Se cuentan los leucocitos en cada uno de los cuadros grandes de las esquinas (1
mm
3
) (A, B, C y D). Se cuentan los 4 cuadrados grandes de los dos lados de la cámara.
Cada cuadrado grande incluye un volumen de 1/10 mm
3
y las diluciones son de 1:20. Por consiguiente, en el volumen de la cámara
situado sobre un cuadrado grande se cuenta el número de leucocitos y se multiplica por 100. Esto significa que el recuento de
leucocitos es el promedio del número de células en cada uno de los cuadrados grandes.

Causas de error: Existen numerosas posibilidades de error en todos los recuentos celulares que utilizan el hemocitómetro. Los
errores se pueden deber a la naturaleza de la muestra, a la técnica del que realiza el examen y a la utilización del instrumental
inadecuado. Los errores que son inherentes a la distribución de las células en el volumen de recuento se denominan errores de campo
y se pueden reducir al máximo con sólo contar más células.

Valores normales:
Los limites normales para los adultos en la concentración de leucocitos es de 5000 – 10,000 leuc./mm
3
. Los recién nacidos presentan
cifras hasta de 25,000 y en los lactantes se presentan cifras hasta de 12,000 a 14,000. Hay leucocitosis fisiológicas pasajeras al final
del embarazo, después del ejercicio muscular intenso, por miedo y emociones intensas.
RECUENTO DE PLAQUETAS
Las plaquetas son los elementos formes más pequeños de la sangre, de ordinario de 2 a 4 m de diámetro en extensiones teñidas.
Actúan en la hemostasia y en el mantenimiento de la integridad vascular, además de participar en el proceso de la coagulación
sanguínea.
En sangre-EDTA, el volumen de la plaqueta aumenta durante la primera hora, es relativamente estable entre 1 y 3 horas y luego
aumenta de nuevo. El cambio de una forma discoidea a otra esférica se produce por este aumento en el volumen aparente en EDTA
en comparación al citrato. Para conseguir resultados reproducibles, las determinaciones del volumen plaquetario, se deben hacer entre
1 y 3 horas después de la extracción de la sangre.
Los valores normales son:
De 150,000 a 450,000 por mm
3
.
Las plaquetas son difíciles de contar debido a que son pequeñas y deben distinguirse de los restos y desperdicios celulares. Otra
fuente de dificultad reside en su tendencia a adherirse al cristal, a cualquier cuerpo extraño y en particular unas a otras. A menudo es
posible reconocer una reducción considerable en el número de plaquetas mediante una cuidadosa inspección de las extensiones
teñidas. Con la sangre capilar, las extensiones deben ser uniformes y llevarse a cabo con gran rapidez después de obtener la sangre,
con objeto de evitar aglomeración de plaquetas y minimizar la disminución debida a su adherencia a los bordes de los vasos
lesionados. Es posible un cálculo mejor examinando las extensiones teñidas procedentes de sangre venosa mezclada con EDTA, en
la cual las plaquetas se distribuyen uniformemente y la aglomeración y pérdida debidas al proceso hemostático no tiene lugar.
15

El método visual de elección emplea el microscopio con contraste de fase.