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MTODOS CROMATOGRFICOS

Aula 3 Cromatografia em Camada Delgada


Profa. Daniele Ado
CROMATOGRAFIA EM CAMADA
DELGADA
A CCD consiste na separao dos componentes de uma mistura
atravs da migrao diferencial sobre uma camada delgada de
adsorventes retido sobre uma superfcie plana.

Tcnica indispensvel para anlise de substncias orgnicas e
organometlicas.

Vantagens: fcil compreenso e execuo, separaes em breve
espao de tempo, versatilidade, grande reprodutibilidade e baixo
custo.
CROMATOGRAFIA EM CAMADA
DELGADA
Os termos e relaes deduzidas para a CC e CP podem ser aplicadas
para CCD.

O fator de reteno para um soluto dado por

Rf = dr
dm
onde dr e dm so as distncias lineares medidas a partir da linha de
origem.

Os valores de Rf podem variar de 1 at um valor que se aproxime
de zero.
CROMATOGRAFIA EM CAMADA
DELGADA
MANCHAS ASSIMTRICAS: para calcular o Rf a medida da dR
baseada na posio do mximo de intensidade da mancha.


PROCESSO DE SEPARAO: fundamentado no fenmeno de
adsoro. Caso a FE seja tratada tambm podem ocorrer por partio
ou troca inica.

ADSORVENTES:
Slica (SiO
2
)
x
(Uso 70%);
Alumina (Al
2
SiO
3
)
x
(Uso 20%);
Outros.
TIPOS DE ADSORVENTES


Adsorvente Caracterstica Aplicao
Slica gel Carter fracamente cido. Separao de compostos de
diferentes classes.
Alumina Carter alcalino Separao de HC
aromticos,alcalides, HC clorados e
esterides
Celulose Celuloses modificadas so
usadas como adsorventes
de troca inica
Separao de compostos hidroflicos
Terra
diatomcea
Adsorvente neutro Separao de compostos
fortemente polares
SLICA
Slica (SiO
2
) - cido slica amorfo altamente poroso (Fase Polar).












Quanto mais polar a substncia, mais tempo ficar adsorvida na slica.
TCNICA GERAL DA CCD
PREPARAO POR ESPALHAMENTO: limpeza da placa de vidro
eliminar toda gordura da superfcie.

Preparo da placa de vidro:
Suspenso do adsorvente: Uso de aplicadores - 20 cm de
comprimento e largura varivel. Repousar a placa em
superfcie plana e deixar secar. Dificuldade em obter
superfcies uniformes.
Imerso da placa: duas placas sobrepostas so imersas na
suspenso de adsorvente. As placas so separadas e secas.
Obtm superfcies mais delgadas e uniformes.
TCNICA GERAL DA CCD
Placas pr-fabricadas:
So mais uniformes e homogneas, porm o custo bem
mais elevado.
Melhora a separao e torna os valores de R mais
reprodutveis.


CUIDADOS: traar uma linha de injeo das amostras para que
o Rf no tenha variaes.
TCNICA GERAL DA CCD
ATIVAO DAS PLACAS: Em algumas separaes, deve-se ativar as
placas, para se retirar substancias aderidas ao adsorvente.

A ativao um aquecimento e varia para cada adsorvente.

Slica, alumina e terra diatomcea: 105 110C por 30 a 60
min

Celulose: 105C at no mximo 10 min
TCNICA GERAL DA CCD
SELEO DA FASE MVEL: O Solvente utilizado possui papel
fundamental na separao dos componentes.

Existe uma competio entre as molculas da amostra e da fase
mvel, pela superfcie adsorvente, portanto considera-se a natureza
qumica da amostra e a polaridade da FM.

SELEO DA FASE MVEL
(a) Bom desenvolvimento.
(b) Superdesenvolvimento.
(c) Subdesenvolvimento.
SELEO DA FM
DCM:EtOH:H
2
O 65:35:5
A mistura mais usada a de acetato de etila com ter de
petrleo ou hexano solventes razoavelmente baratos, volteis
e de regular ou baixa toxicidade.
Srie eluotrpica
ter de petrleo
Ciclohexano
Tetracloreto de carbono
Benzeno
Cloreto de metileno
Clorofrmio
ter etlico
Acetato de etila
Piridina
Acetona
lcool n-proplico
Etanol
gua
cido actico

Ordem geral
de eluio

Aumenta
polaridade
TCNICA GERAL DA CCD
APLICAO DAS AMOSTRAS: aplicadas na forma de solues, em
solvente bastante volteis, que possam ser facilmente eliminados
aps a aplicao.

Concentrao da soluo: 0,1% a 1,0% - conforme a
sensibilidade do revelador.

Aplicar 1,5 cm a 2,0 cm acima do bordo inferior, evitando
que fique mergulhada na FM.
TCNICA GERAL DA CCD
REVELAO DOS CROMATOGRAMAS: Pode ser por mtodos fsicos
ou qumicos.

Mtodo fsico: Compostos UV-ativos, que aparecem como
manchas escuras em fundo fluorescente, se a placa for iluminada com
lmapada de luz ultravioleta.

Mtodo qumico: Quase todas as classes de substncias orgnicas
(exceto alcanos e haletos alifticos) reagem com iodo formando
complexos. A formao desses complexos reversvel.
TCNICA GERAL DA CCD
Revelao sob luz ultravioleta (254 nm): indicado para substncias com
cromforos (sistemas conjugados), pois absorvem radiao UV e tornam-se
fluorescentes.

Revelao com vapores de iodo: revelador universal para qualquer
substncia orgnica. Forma manchas marrons.

Mtodos qumicos (destrutivo): a soluo do revelador borrifada com ar
comprimido. Aps aquecimento ocorre a reao da substncia com o
revelador formando manchas coloridas. Ex. CeSO
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(Universal)

Mtodos biolgicos: quando h procura por uma substncia com atividade
biolgica. Revelador uma suspenso de fungos.


TCNICA GERAL DA CCD
VANTAGEM DA CCD SOBRE A CP: permite utilizar reveladores
enrgicos ou que necessitam de aquecimento posterior a borrifao.


As placas podem ser borrifadas com os reveladores: cido
sulfrico/metanol, vanilina sulfrica, tricloreto de antimnio,
permanganato de potssio/cido sulfrico, entre outros.


Os adsorventes inorgnicos podem ser aquecidos a 100-120 C para
ocorrer a reao cromognica.

FORMAS DE DESENVOLVIMENTO NA CCD
Unidimensional Bidimensional
FM 1 FM 2
ANLISE QUALITATIVA E QUANTITATIVA
ANLISE QUALITATIVA: A anlise qualitativa com CCD, consiste na
determinao do Rf e sua comparao com Rf de padres.

Variveis que influenciam Rf: espessura da FE, umidade da FM e
da FE, temperatura, grau de saturao da cuba e tamanho da
amostra.
comum utilizar um fator de reteno relativo Rx em vez do Rf


Rx = distncia percorrida pelo analito
distncia percorrida pelo padro

ANLISE QUALITATIVA E QUANTITATIVA

ANLISE QUANTITATIVA: Retira-se da cromatoplaca a rea que
contenha a substncia desejada que extrada e quantificada.
Frequentemente utiliza-se a densiometria, medidas de fluorescncia e
radioatividade.
CROMATOGRAFIA EM CAMADA DELGADA DE
ALTA EFICINCIA (CCDAE)
uma tcnica moderna, instrumental e de alta performance, onde a
avaliao feita atravs de equipamentos e software
CROMATOGRAFIA EM CAMADA DELGADA DE
ALTA EFICINCIA (CCDAE)
ATS 4 AUTOMATIC TLC SAMPLER 4: Aplicao totalmente
automtica em placas TLC/HPTLC, garantindo preciso e
Reprodutibilidade em anlises quali e quantitativas.
CROMATOGRAFIA EM CAMADA DELGADA DE
ALTA EFICINCIA (CCDAE)
TLC Scanner 3: Todas as funes so controladas pelo computador. A
nica operao manual a insero do objeto a ser escaneado
CROMATOGRAFIA EM CAMADA DELGADA DE
ALTA EFICINCIA (CCDAE)
CAMAG TLC-MS Interface: Extrai os compostos da TLC/HPTLC e
alimenta o espectrometro de massa para identificar ou elucidar a
estrutura da substncia.
CROMATOGRAFIA EM COLUNA
Os suportes e solventes usados em uma coluna cromatogrfica, so
normalmente, os mesmos utilizados em CCD. Portanto devem ser
escolhidos mediante um exame prvio da amostra por cromatografia
em camada delgada.

A quantidade de adsorvente utilizada depende da quantidade
de amostra a ser separada e do tipo de adsorvente. Misturas pouco
complexas, tendo slica gel como suporte requer, no mnimo, a relao
1:50 amostra/slica.

As colunas de vidro utilizadas na tcnica tm a configurao que
lembra uma bureta. Suas dimenses, obviamente, dependem da
quantidade da amostra a ser processada.
CROMATOGRAFIA EM COLUNA
Dois mtodos so comumente usados para a introduo do suporte
na coluna empacotamento):


No primeiro mtodo
a FE introduzido seco.

No segundo a FE
introduzida em suspenso
no solvente.
Nunca deixe a superfcie da FE livre de
solvente.
CROMATOGRAFIA EM COLUNA
EXERCCIO: Um dos tratamentos da mucosite inclui a administrao de
anestsicos locais ou suspenses comerciais base de, por exemplo,
sorbitol. O sorbitol pode ser encontrado naturalmente em
frutos como pras, maas, morangos e pssegos. No entanto, o sorbitol
tambm pode ser obtido em laboratrio a partir da glicose, como
apresentado a seguir:









Se for realizada uma cromatografia em camada delgada de slica (CCD) com
uma mistura do reagente e do produto, qual deles deve apresentar o maior
Rf? Justifique sua resposta.

EXERCCIO: Sabendo que o eluente era gua, e que a amostra continha os 3
compostos abaixo, relacione o nmero da mancha com a estrutura dos
compostos abaixo:
EXERCCIO: Para uma separao de fase normal, determine qual a ordem de
eluio de:

a)n-hexano, n-hexanol, benzeno






a)Acetato de etila, ter dietlico, nitrobutano
EXERCCIO: Para uma separao de fase reversa, determine qual a ordem
de eluio de:

a)n-hexano, n-hexanol, benzeno






a)Acetato de etila, ter dietlico, nitrobutano