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DETERMINACIN DE CALCIO EN LECHE

Principio
El calcio es el quinto elemento, en abundancia, en la corteza terrestre (3.6 % en peso). No se encuentra en
forma metlica sino formando diversas sales minerales, alguna de ellas bastante insolubles como el
carbonato, el sulfato o el oxalato... El calcio es un elemento esencial para la vida humana; tal es as
que en una persona adulta entre un1.5 y un 2 % de su peso es calcio. El calcio corporal se
concuentra casi en un 90 % en huesos y dientes. Adems, en el organismo humano el calcio participa en
numerosos procesos como la coagulacin sangunea, la permeabilidad de las membranas,
como regulador nervioso y neuromuscular, modulando la contraccin muscular (incluida la frecuencia
cardiaca), la absorcin y secrecin intestinal y la liberacin de hormonas. Se puede encontrar calcio en una
gran variedad de alimentos. Los productos lcteos, los frutos secos y semillas (almendras, semillas
de ssamo), las sardinas y las anchoas, los vegetales de hoja verde (espinaca, acelga, brcoli) son
buenas fuentes de calcio. La mayora de las harinas estn fortificadas con carbonato de calcio, de modo que
los productos de panadera pueden ser una buena fuente de calcio. Finalmente, el agua dura tambin aporta
calcio. La leche es la fuente principal de calcio en la dieta (un vaso aporta unos 250 mg) siendo, adems,
la materia prima principal para la elaboracin de diversos derivados lcteos ricos en calcio como el queso o
el yogur. Con un contenido aproximado de un 87 % de agua, la leche es una mezcla homognea de
diferentes sustancias, unas en emulsin, como las grasas, y , otras, en disolucin como la
lactosa, las vitaminas hidrosolubles, protenas, sales, etc.

Se entiende por contenido en calcio de la leche la cantidad total de calcio expresada en porcentaje en peso,
determinada por el procedimiento expuesto a continuacin, que corresponde a la norma FIL-36: 1966 de la
Federacin Internacional de Lechera. Este mtodo se aplica a todas las leches lquidas normales, as como a
las leches reconstituidas por dilucin o disolucin de leches concentradas. No de leches
desecadas. En esta prctica el contenido de calcio en una muestra de leche se determina por una volumetra
redox, para lo que ser necesario eliminar previamente la materia proteica de la muestra con cido tricloro
actico. Despus, el calcio contenido en el filtrado es precipitado en forma de oxalato que se separa
por centrifugacin y tras su redisolucin a cido oxlico se valorar usando permanganato
potsico. De esta forma, la determinacin de calcio en la leche se lleva a cabo de manera indirecta a
partir de precipitado de oxalato producido a partir del mismo.


MATERIAL Y APARATOS
Balanza analtica.
Matraz aforado de 50 ml.
Pipeta para leche de 20 ml.
Papel filtro sin cenizas para filtracin lenta.
Centrfuga
Bao de agua, a temperatura de ebullicin.
Tubos de centrfuga cilndricos con fondo redondo de 30 ml, aproximadamente, marcados a 20 ml.
Pipetas de 2 y 5 ml.
Pipeta Pasteur.
Bureta graduada.

Reactivos
cido actico glacial solucin al 20 % v/v, preprese a partir del cido actico comercial
cido tricloro actico solucin 20 % v/v, preprese a partir del cido tricloro actico comercial que es un
slido del 99.25% de pureza.
cido tricloro actico solucin del 12% v/v por dilucin del de 20 %
cido sulfrico solucin acuosa, preprese disolviendo 20 ml de cido sulfrico del 96% y diluirlo hasta
100 ml con agua destilada.
Solucin acuosa saturada de Oxalato de amonio monohidratado
Rojo de metilo, solucin al 0.05% p/v en etanol al 96%
Solucin de hidrxido de amonio, solucin acuosa obtenida mezclando volmenes iguales de amoniaco al
25% y de agua destilada.
Permanganato de potasio al 0.004M
Procedimiento
a) En un matraz aforado de 50 ml pesar exactamente alrededor de 20 g de leche. Aadir poco a poco
mientras se agita una solucin acuosa de cido Tricloroactico 20% p/v y completar
hasta 50 ml con este reactivo.
b) Agitar fuertemente durante algunos segundos.
c) Dejar reposar 15 minutos.
d) Filtrar sobre papel filtro.

Precipitacin del calcio en forma de Oxalato y separacin del Oxalato
e) En un tubo de centrfuga cilndrica de fondo redondo, introducir 5 ml del filtrado lmpido; despus 5
ml de cido Tricloroactico al 12%, 2 ml de una solucin acuosa saturada de Amonio Oxalato,
dos gotas de solucin alcohlica de Rojo de Metilo y 2 ml de cido Actico al 20%. Mezclar
mediante agitacin circular y aadir poco a poco solucin de hidrxido de amonio hasta coloracin
amarillo plido; despus, algunas gotas de cido actico al 20% hasta coloracin rosa. Dejar reposar por 20
minutos a la temperatura ambiente.
f) Diluir hasta 20 ml con Agua destilada y centrifugar 10 minutos a 1.400 g (g
=aceleracin de la gravedad).
g) Mediante una pipeta Pasteur, decantar el lquido lmpido que sobrenada. Lavar las
paredes del tubo (sin remover el depsito de calcio oxalato) con 5 ml de solucin de
hidrxido amnico.
h) Centrifugar 5 minutos a 1.400 g.
i) Decantar el lquido que sobrenada con pipeta Pasteur

Valoracion del Oxalato
j) Aadir 2 ml de solucin acuosa de cido Sulfrico y 5 ml de Agua sobre el precipitado de
calcio oxalato.
k) Poner el tubo en bao de agua hirviendo, y cuando el oxalato est completamente
disuelto, valorar con solucin de Potasio Permanganato 0,004M, hasta coloracin rosa
persistente. La temperatura debe permanecer superior a los 60C durante la valoracin.

Determinacin de Calcio en el Alimento.
La evaluacin de calcio en la dieta reviste una gran importancia ya que un desbalance con
el fsforo u otros minerales generar un bajo crecimiento.
Reactivos
Acido clorhdrico (1 3 %)
Acido ntrico 70%
Hidrxido de amonio (1:1 v/v)
Indicador de rojo de metilo (1 g en 200 ml de etanol)
Solucin de oxalato de amonio 4.2 %
Acido sulfrico 98 %
Solucin estndar de permanganato de potasio 0.05N
Materiales y Equipo
crisoles de porcelana
matraces volumtricos de 250 ml
vasos de precipitado de 250 ml
Papel filtro para anlisis cuantitativos libre de cenizas
Procedimiento
Calcine en crisol de porcelana 2.5g de muestra finamente molida. Adicione 40ml de HCI y
unas gotas de HNO
3
al residuo, caliente el crisol hasta ebullicin, enfre y transfiera a un
matraz volumtrico de 250ml, afore y mezcle. Pase a un vaso de precipitado 100ml de
solucin para cereales o alimentos con cereales 25ml para alimentos con minerales.
Diluya a 100ml y adicione 2 gotas de rojo de metilo. Adicione NH
4
OH gota a gota hasta
que vire a pardo anaranjado, luego adicione 2 gotas de HCl para dar un color rosa. Diluya
con 50ml de agua, hierva y adicione con agitacin 10ml de sol 4.2% de oxalato de amonio.
Ajuste el pH con cido para regresar al color rosa si es necesario.
Deje reposar, filtre y lave el precipitado con la solucin de NH
4
OH (1.5%). Coloque el
papel filtro con el precipitado en un vaso, adicione una mezcla de 125ml de agua y 5ml de
H
2
SO
4
, caliente a 70C y titule con la solucin de permanganato y calcule:
Ca (%)= 0.1((ml Sol. Permanganato/Peso de la Muestra) (Alcuota usada en ml/250)