Crecimiento nutriente Dual limitada: modelos, observaciones experimentales y

aplicaciones

abstracto
Crecimiento limitado de doble nutriente, el control de la tasa de crecimiento celular
(aspecto cinética) o la restricción de la cantidad de biomasa (aspecto estequiométrica)
por dos nutrientes al mismo tiempo, es una capacidad relativamente desconocida de
los microorganismos y, por consiguiente, aún no se menciona en textos hasta la fecha.
Sin embargo, nutrientes múltiple crecimiento limitado o controlado se ha informado
de diferentes sistemas, e. g. Ecosistemas, lotes, lote alimentado, y cultivos quimiostato.
Generalmente , el crecimiento limitado de doble nutriente se ha observado cuando el
microorganismo de interés : ( a) mostró una variación de la composición celular , ( b )
era capaz de acumular un compuesto de almacenamiento , ( c ) cambiar el
metabolismo de la célula , o (d ) excreta intermediarios metabólicos . En consecuencia,
se han desarrollado modelos estequiométricas para estimar las condiciones de
crecimiento que conducen a un crecimiento limitado de doble nutriente. Un problema
general del aspecto cinético es las mediciones precisas de control del crecimiento
nutrientes en el caldo de cultivo ( μ.gl - 1range ) , como los valles pueden consumir
nutrientes residuales durante el muestreo . Sin embargo, la mayoría de los modelos de
acuerdo de un crecimiento limitado dual con el aspecto cinético aunque los
experimentos de control son difíciles de llevar a cabo. El objetivo de esta encuesta es
introducir esta característica especial de crecimiento con respecto a los modelos
básicos, los datos experimentales y aplicaciones potenciales en bioprocesos.




1 . INTRODUCCIÓN

El principio básico de la nutrición biológica, la "ley del mínimo “, fue formulada por el
químico alemán Justus von Liebig (1840). Dijo que siempre un nutriente en
particular limita el crecimiento de la biomasa que puede ser






La figura 1. La teoría del libro de texto de la limitación de nutrientes. Panel A:
limitación del crecimiento estequiométrica. La cantidad de biomasa que puede ser
producido en un sistema en el limitado por sólo un nutriente (ley del mínimo, (von
Liebig 1840)). Cuando se aumenta la concentración del nutriente limitante, los
aumentos de biomasa hasta un segundo nutriente se hace limitante, y en consecuencia,
la biomasa no aumenta más. Panel b: limitación adulto cinética. La tasa de crecimiento
de la biomasa en un sistema es controlada por la concentración real del nutriente "
limitación”. Varios modelos, por ejemplo, Blackman (1905) y Monod (1942), describen
la tasa de crecimiento en función de la concentración s.X concentración real de la
biomasa de nutrientes; S01, S02 concentración de entrada de los nutrientes de 1; s1, s2
concentraciones residuales de los nutrientes 1 y 2; μ tasa de crecimiento específico ; s la
concentración de nutrientes en el caldo de cultivo.
Producido en un sistema biológico. Este concepto ha influido en el pensamiento de los
microbiólogos desde hace muchos años (van niel y Hahn- Hägerdal, 1999).
Consecuencia, medios sintéticos para el cultivo de microorganismos se diseñan
generalmente de tal manera que un nutriente específico limita la cantidad de biomasa
que se puede formar. Por lo tanto, la biomasa que teóricamente se puede producir en
un sistema de este tipo es una función de la concentración inicial y el coeficiente de
rendimiento de biomasa para este nutriente en particular (gottschal, 1993) (Fig. 1a)
Un enfoque diferente se centra en el aspecto cinética de crecimiento de la biomasa. El
trabajo de Blackman (1905) y Monod (1942) abrió el camino para la descripción del
crecimiento mediante modelos cinéticos. En estos modelos es como resumió que la
concentración de un sustrato y la afinidad de la célula hacia este sustrato determinar
la tasa de aumento de la biomasa (fig. 1b)

Crecimiento limitado dual de nutrientes: nomenclatura y la teoría con respecto a la
fisiología, la cinética, y la estequiometría (modificado de Bader, 1978 Baltzis y
Fredrickson, 1988, Tilman, 1980.). La parte superior: el área de llenado (rayada)
representa el (total) necesidad nutricional de una célula, mientras las áreas circulares
representan los nutrientes 1 y 2. media e inferior: líneas representan isolíneas de la
misma tasa de crecimiento específica µ (aspecto cinético) o la misma concentración de
biomasa X (aspecto estequiométrica). s: concentración de nutrientes real en el caldo de
cultivo, S0: concentración total de nutrientes que puede ser metabolizado teóricamente.
Las flechas indican los valores cada vez mayor para µi y Xi, respectivamente
Técnicas de cultivo más sofisticados , tales como la invención de la quimiostato (
Monod 1950 : norvick y Szilard , 1950 ) , permite la investigación de la
estequiometría ( Herbet , 1961 ) y la cinética de crecimiento de las células ( Koch ,
1982 ; Powell , 1967 ; Senn y cols . . , 1994 ) de una manera más controlada estudios
cuantitativo reveló que la tasa de crecimiento específico y la naturaleza del nutriente
limitante tienen influencias decisivas en la composición de células ( Goldman y
Dennett , 2000 ; . Heldal et al , 1996 ; . Herbert et al , 1971 ) , mientras que la
cinética se centraron en la afinidad de los sistemas de captación celular hacia los
nutrientes y la tasa de crecimiento específica observada ( Botón , 1985,1991 ;
Kovarova - Kovar y Egli , 1998 ; Roels , 1983 ) .
Sin embargo, en contraste con lo que en forma escrita en los libros de texto de mayor ,
la ley del mínimo es una descripción bastante simplista de las condiciones de
crecimiento biológico . Hay muchos informes que muestran que el crecimiento de la
biomasa y la concentración de biomasa en un sistema microbiano no están limitados
por un nutriente sólo, sino más bien por dos o más nutrientes simultáneamente (de
limitación de doble o múltiple de nutrientes).
Recientemente, los botánicos revisado críticamente la nutrición de las plantas y han
encontrado desviaciones a la ley del mínimo. Además, se ha sugerido la adaptación
evolutiva de las poblaciones microbianas, las comunidades y los ecosistemas es una
respuesta directa o indirecta de recursos limitación.
A medida que nos concentramos aquí en crecimiento limitado doble de nutrientes, las
definiciones siguientes y sus sinónimos se describen de forma explícita para el caso en
que dos o más nutrientes interactúan. En general , los nutrientes pueden ser
agrupados de acuerdo a su función
Fisiológica (fig. 2)
2 . CLASES DE CRECIMIENTO LIMITADO DE DOBLE NUTRIENTE
Nutrientes homólogos que realizan la misma función fisiológica durante el
crecimiento (Harder y Dijkhuizen , 1976 ) . Por ejemplo, para un microorganismo
heterotrófica dos compuestos orgánicos de carbono pueden ser homóloga, debido a
que logran la misma función fisiológica. Otros autores utilizan los sinónimos
"sustratos perfectamente sustituibles entre sí" (León y Tompson , 1975 ;
Ramakrisbna et al , 1997 . ) , o “sustratos mixtos" .
Nutrientes heterólogos se utilizan para satisfacer diferentes requisitos fisiológicos
(Egly , 1995 ) . Por ejemplo, el nitrógeno (amonio) y la fuente de carbono (glucosa)
son nutrientes heterólogos porque uno no puede ser sustituido por otro (al menos
cuando no contienen C o N, respectivamente). Los sinónimos utilizados también son "
interactivos" , "nutrientes complementarios" , o " los sustratos esenciales" ( Tilman ,
1980 ) .
Según baltzis y Frederickson (1988), dos (Funcional) combinaciones adicionales de
nutrientes se pueden distinguir / definida cuando un nutriente puede tener dos
funciones al mismo tiempo. Por ejemplo, un sustrato, mientras que el segundo
sustrato (por ejemplo, la glucosamina y metilamina para un organismo metilotrófica).
Un sinónimo correspondiente es parcialmente sustituible y parcialmente
complementario
Bader (1978) divide los nutrientes de acuerdo a su función fisiológica en "
moninteractive " ( heteróloga ) y nutrientes " interactivo " (parcialmente y totalmente
homólogas homóloga , parcialmente homóloga y heteróloga , y ) .
En lo que sigue vamos a utilizar los términos homóloga, heteróloga , parcialmente
homóloga y completamente homóloga, y parcialmente homóloga y heteróloga
parcialmente y parcialmente homóloga y heteróloga parcialmente para pares de
nutrientes.
3. MODELOS DE LIMITACIÓN DE NUTRIENTES DOBLE
Basado en la historia de la descripción de la limitación del crecimiento, la cinética y los
aspectos estequiométricas llevaron a modelos distintos a describir " crecimiento
limitado de doble nutriente”. Los dos aspectos no se pueden vincular en la práctica,
debido a la cinética frente a la tasa de crecimiento como una función de la
concentración de nutrientes en el caldo de cultivo (“limitación de tasa de crecimiento "
), mientras que el aspecto estequiométrica especifica la relación entre la
concentración de biomasa y los nutrientes, por lo tanto consumidos (“ cuantía de
limitación biomasa "). Por lo tanto, diferenciar estos dos aspectos en esta revisión,
también: para el dual (cinética) restricciones, el doble de nutrientes expresión
crecimiento controlado será utilizado, mientras que el término doble limitación se
utilizará para el aspecto estequiométrica.
3.1 MODELOS DE ASPECTO CINÉTICO
En general, el crecimiento controlado de doble nutriente puede ser definido por la
única condición de que la tasa de crecimiento aumenta con la concentración de
cualquiera de sustrato a una concentración constante del otro sustrato.
El primer modelo de control doble de nutrientes sólo apareció en los años setenta
(Megee et al, 1992). Su enfoque cinética se basó en la observación de que en cultivos
mixtos los nutrientes se utilizan a menudo por completo (Veldkamp y Jannasch,
1972). Bader et al. , 1975 (Bader, 1978) propuso que incluso un monocultivo puede
mostrar un crecimiento limitado de doble nutriente dependiendo de la clase de los
nutrientes disponibles para el crecimiento. Para nutrientes heterólogas la tasa de
crecimiento del organismo está limitada por sólo un nutriente a la vez. Por lo tanto, se
propusieron las tasas de crecimiento de seguir las ecuaciones subsiguientes:






Donde μ es la tasa de crecimiento específico, "μmax" la tasa máxima de crecimiento
específico, "Sn" la concentración de sustrato residual de sustratos 1 (S1) y (S2), y Ks1
y KS2 son las constantes de Monod para sustratos S1 y S2, respectivamente. Sin
embargo, tiene que ser mencionado que el modelo se basa en el razonamiento
puramente teórico y no en datos experimentales disponibles.
Donde μ es la tasa de crecimiento específico, "μmax" la tasa máxima de crecimiento
específico, "Sn" la concentración de sustrato residual de sustratos 1 (S1) y (S2), y Ks1
y KS2 son las constantes de Monod para sustratos S1 y S2, respectivamente. Sin
embargo, tiene que ser mencionado que el modelo se basa en el razonamiento
puramente teórico y no en datos experimentales disponibles.
Nutrientes interactivos son los que afectan a la tasa de crecimiento del organismo de
forma simultánea. Esto se observa cuando ambos nutrientes están presentes en
menos de concentraciones de saturación. La mayoría de los modelos cinéticos y
experimentos que se ocupan de esta combinación de nutrientes (Bae y Ritmann
1996b;. Lee et al, 1984;.. Mankad y Nauman 1992;. Narang et al, 1997) se han
centrado en el crecimiento por lotes. Un enfoque a menudo se aplica para describir la
tasa de crecimiento resultante es la de Megee et al. (1972), que extendió la ecuación
de Monod con el nutriente limitante segundo:




El factor crítico que determina si se produce un crecimiento controlado de doble
nutriente es de acuerdo con el modelo de la concentración residual de los nutrientes
S1 y S2. La extensión de la ecuación de Monod por idéntico plazo no parece ser
correcto, cuando más de los nutrientes de remolque son limitantes del crecimiento.
Esto significa que la tasa de crecimiento específico μ se reduce aun cuando se supone
que las concentraciones de los sustratos individuales (S1, S2,... Sn) a permanecer
constante, que no es probable que tenga lugar. Hasta la fecha, no hay ninguna prueba
experimental del modelo de Megee et al. (1972).
Un interesante informe de Rutgers et al. (1990) analizaron los datos experimentales
de los cultivo en quimiostato de Klebsiella pneumoniae en la que la relación C / N en el
alimento (Cf / NF) se ha cambiado (sistema heterólogo). Ellos basan su modelo en la
teoría de control metabólico de Kacser y Burns (1973). En esta teoría el coeficiente
de flujo de un sustrato se define por la ecuación:




Donde " Cu / s" es el coeficiente de control de flujo para la tasa de crecimiento
específico ( μ ) por el " sustrato " efector ( S , la concentración de sustrato residual ) , y
donde SS denota constante - estado . Rutgers et al. Encontró que un " coeficiente de
control de flujo positivo para un nutriente determina la condición para el crecimiento
de nutrientes controlada. A la tasa de crecimiento máximo todos los sustratos están
presentes en concentraciones de saturación y los coeficientes de control se convierten
en cero. Sin embargo, tan pronto como dos nutrientes tienen un coeficiente de control
positivo, la cultura se convierte en doble nutriente controlada. Además, mostraron
que en cultivo continuo bajo condiciones de estado estacionario la concentración de
sustrato residual es una función de la tasa de crecimiento y las concentraciones
relativas de los sustratos. El enfoque teórico es interesante porque representa una
nueva alternativa al modelo de cinética de Monod. Sin embargo, la determinación
exacta del sustrato de estado estacionario (residual) sigue siendo un reto
experimental y, por lo tanto, una evaluación estadística del modelo es difícil.
Bell, 1980; Bley y Babel (1992), y Egli et al. (Kovarova-Kovar y Egli, 1998;
Lendenmann yEgli, 1998;. Lendenmann et al, 1996) (sólo para los nutrientes
homólogas) han ampliado aún más estos modelos cinéticos para la descripción de
quimiostato cultivos.
El modelo de Lendenmann y Egli (1998) es capaz de describir las concentraciones
residuales de fuentes de carbono homólogas virtud de la limitación de carbono. La
ecuación principio (Ec. (5)) indica claramente que se propone la tasa de crecimiento
específico de la célula a ser la suma de las tasas de crecimiento en azúcares
individuales:





Cuando μmax es el más alto de la μmax individuo, i valores, Ki es la constante de
saturación Monod de azúcar i, y Si es la concentración de sustrato de estado
estacionario de azúcar i durante la utilización del sustrato mixto. La ecuación describe
con precisión la tasa de crecimiento de una secuencia de quimiostatos de Escherichia
coli ML30 crecido a dos tasas de dilución (D = 0,3 y 0,6 h ^ (-1)) basados únicamente
en la concentración residual de hasta seis azúcares. Este enfoque tiene una gran
ventaja sobre las ecuaciones Monod extendidas, ya que no se limita a un sistema de
dos nutrientes homólogas.
Varios autores han desarrollado modelos cibernéticos que se centran en el
metabolismo celular (Alexander y Ramakrishna, 1991; Baloo y Ramkrishna,
1991a; Baloo y Ramakrishna, 1991b; Recto y Ramakrishna, 1994). Este enfoque
matemático requiere una descripción completa de las actividades de las enzimas y la
síntesis, y las concentraciones de nutrientes intermedios, lo cual es difícil de obtener
experimentalmente. Como resultado, estos modelos no puede ser verificada en detalle
debido a la insuficiente calidad de los datos experimentales.
3.2. Modelos del aspecto estequiométrica
Dual (estequiométrica) crecimiento limitado se puede definir como la condición para
que los cambios en el rendimiento de la biomasa con la concentración de entrada de
cualquiera de sustrato a una concentración constante del otro sustrato.
Los estudios con quimiostato culturas han proporcionado información sobre los
cambios fisiológicos en el régimen de crecimiento limitado doble (Al-Awadhi et al,
1990;.. Dumer et al, 2000,2001; Egli, 1995, Egli y Quayle, 1986; Gratzer-Lampart
y col ., 1986; Minkevich et al, 1988)..
Un enfoque estequiométrica para predecir el crecimiento limitado dual de nutrientes
para cultivos quimiostato ha sido desarrollado por Egli y Quayle (1986); Sugerencia
similar fue hecha por Thingstad (1987) Ellos encontraron que las fronteras del
régimen de crecimiento limitado a una tasa de crecimiento particular pueden ser
predicha a partir de la composición celular (o los factores de rendimiento de
crecimiento sustrato) usando dos ecuaciones simples, se dan a continuación para el
caso de carbono y nitrógeno como limitantes (heterólogos) nutrientes:








Cuando Cf y Nf son las concentraciones de alimentación del medio de carbono y
nitrógeno, respectivamente, y Y_ (X / C) y Y_ (x / n) son los rendimientos de
crecimiento respectivos basados en carbono y nitrógeno medidos bajo ya sea C sólo (C
Lim...) o N única (lim N.) las condiciones de crecimiento limitado. Eq. (6) calcula el
límite inferior (Fig. 3, (Cf / NF) inferior) entre el carbono y la doble C, N) limitación
(mientras que la ec. (7) da el valor que corresponde a la frontera entre dual (C, N) la
limitación y el régimen de crecimiento limitado de nitrógeno ((Cf / NF) superior).
Las mediciones de los cultivos quimiostato de Hyphomicrobium ZV620 (Gratzer-
Lampart et al., 1986) y Pseudomonas putida GPO 1 (Durner et al., 2000) (Fig.
0.3) mostraron que el crecimiento limitado predicho y la doble medida (C, N)
regímenes eran casi idénticos.
Por otra parte, Egli (1991) predijo que el régimen de crecimiento limitada de doble
nutriente es una función de la tasa de crecimiento específico y la relación Cf / NF, y lo
llamó de doble nutriente zona de crecimiento limitado, lo que indica que este régimen
de crecimiento se puede representar gráficamente en un D. frente Cf / Nf diagrama
(Fig. 3) la zona cuenta con un ''plátano'' 'forma: el régimen de crecimiento limitado
dual de nutrientes es más amplia en las tasas más bajas de crecimiento, se hace más
estrecho en las tasas de crecimiento más altas y no es detectable en el crecimiento
máximo tasa. La explicación del autor es que los rendimientos de crecimiento no
difieren mucho entre C y N limitación a altas tasas de crecimiento, ya que las células
no tienen la plasticidad para adaptarse a la limitación de nutrientes, como es el caso
en bajas tasas de crecimiento. La ubicación y la forma del ''plátano’ son determinadas
por el tipo de limitación de sustrato y por los propios sustratos. Por ejemplo, la zona
para una (C, N) limitación de doble con el metano no es tan amplio.
M.Zinn e al. /revista de Biotecnología 113 (2004) 263-279
El grado de dilución (h ^ (-1))
Cf / Nf (mol 〖〗 mol ^ (-1))
Crecimiento limitado de carbono.
Crecimiento limitado de nutrientes Dual
Medido a partir de nitrógeno residual
Calculado a partir de nitrógeno residual.
Calculado a partir de coeficientes de rendimiento.
Medido desde octanoato residual.






Fig.3.Extension de la zona de crecimiento limitada de doble (carbono / nitrógeno) de
nutrientes para el cultivo de P.oleovorans con octanoato y de amonio como una función
de la tasa de dilución y la relación Cf / NF de los límites alimentación del medio.
Measured medio se obtenido a partir de las pendientes de cualquiera de nitrógeno
residual (límite inferior) o octanoato (límite superior) vs.the Cf / Nf ratio en la
alimentación del medio. los límites de coeficientes de rendimiento de carbono y
nitrógeno, se calcula de acuerdo con Egli (1991) (Figura adaptada de Durner et al.,
2000).
Al igual que con formiato. Además, la zona se desplaza hacia relaciones más altas Cf /
NF en el caso de formiato. La explicación para esta observación es que el metano es
menos oxidado que el formiato, de modo que menos de metano de formiato se utiliza
para producir una cantidad dada de energía (Fig. 4).
La interacción de los dos nutrientes se puede mostrar con respecto a su influencia en
la cinética y la estequiometría de los microorganismos como se muestra en Fig.2.It
tiene que tener en cuenta que los diagramas de estequiométricas aspecto diferente
para cada tasa de crecimiento, como la influencia del grado de dilución.
Relación de carbono a nitrógeno en el medio de alimentación
El metano.
El glicerol.
Citrato.
Formiato.
Fig.4.The estado redox del sustrato de carbono determina la forma y posición de la (C, N)
zona de crecimiento limitado dual (adaptado y cambiado de Egli, 1991).
El mantenimiento de las células y la viabilidad son una función de la tasa de crecimiento.