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SESIÓN 1

UNIDAD: INTRODUCCIÓN AL ESTUDIO DE LA HISTOLOGÍA.

I.- OBJETIVOS DE LA SESIÓN:
Al término de la sesión, los alumnos deberán ser capaces de definir el significado de la
histología y la importancia de su estudio, como ciencia fundamental en el ámbito de la
salud. Deberán también conocer la secuencia de pasos que permiten obtener un
preparado histológico apto para ser estudiado en microscopía de luz.

II.- TEMAS:
• Naturaleza y objeto de la Histología y sus relaciones con otras materias.
• Breve reseña histórica.
• Examen e interpretación de los cortes en microscopía óptica.
• Nociones básicas de técnicas histológicas.
• Concepto de tejido y su clasificación morfofuncional.


III.- LECTURA PREVIA (Control Syllabus):

La histología como disciplina morfológica, investiga las propiedades estructurales de los
tejidos animales y vegetales y su estrecha relación de dependencia con la función que
desempeñan.

Las células que constituyen los tejidos miden entre 5 y más de 100 µm de diámetro,
siendo por lo tanto visibles al ojo humano, sólo mediante el empleo de un instrumento
fundamental, el microscopio.

El microscopio de luz, inventado en el siglo XVII, permitió que Hooke, un investigador
inglés, describiera en un tejido vegetal, la presencia de pequeñas unidades o celdillas que
denominó “células”. Posteriormente Bichat, anatomista francés, en el siglo XVIII, realizó
una clasificación macroscópica de los tejidos humanos, basándose en las diferentes
texturas que ellos presentaban. Más tarde, empleando un microscopio de luz, se confirmó
la presencia de diferentes tejidos en el organismo.

El nacimiento formal de la histología como ciencia, ocurrió en el siglo XIX, con la
formulación de la Teoría celular de Schwan, en la que planteó que todos los seres vivos
se encuentran constituidos por células.

Las células constituyentes de los tejidos, son incoloras, resultando transparentes a la
observación directa. Esto motivo durante el siglo XIX, el desarrollo de técnicas
adecuadas de tinción, que confirieran un suficiente contraste a sus estructuras,
permitiendo la visualización de sus detalles morfológicos y organelos presentes.

Para el estudio histológico de un órgano o tejido, se requiere obtener trozos o muestras
pequeñas de este, para su tratamiento y montaje en un portaobjetos y posterior
visualización en un microscopio.


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Los cortes obtenidos en una estructura, pueden ser transversales, longitudinales u
oblicuos, con relación al eje mayor del órgano. Esta dirección de corte dependerá del
tejido y estructuras que se requiera observar.

Para poder estudiar las características de los distintos tejidos, es necesario someterlos a
una serie de pasos denominados técnicas histológicas, previo a su observación al
microscopio.

Los procedimientos de la TÉCNICA HISTOLÓGICA se resumen en las etapas siguientes:
1.- Obtención de una MUESTRA DEL TEJIDO a estudiar; existen 2 formas:
Necropsia: Examen u obtención de tejido de un organismo muerto.
Biopsia:(del griego bios = vida y oasis = visión) Examen u obtención de tejido de un
organismo vivo.
2.- FIJACIÓN, este proceso se refiere al tratamiento del tejido con sustancias químicas
que tienen varias finalidades:
a. Conservar los tejidos de forma que muestren el mayor parecido posible a su estado
in vivo.
b. Aumentar la dureza del tejido para facilitar la preparación de finas películas de
éste.
c. Destruir bacterias y gérmenes que pudieran encontrarse en ellos.
d. Interrumpir los procesos celulares dinámicos que ocurren con la muerte celular.

Esto se logra al inactivar enzimas celulares, que de otra manera iniciarían la autolisis y
llevarían a la degeneración post mortem.

La fijación mantiene las estructuras al generar la formación de enlaces entre las proteínas
constituyentes del tejido.

Los agentes más usados para Microscopia de Luz son el Formaldehído al 5% y Formol
al 10%.

3.- DESHIDRATACIÓN, después de que la muestra ha sido fijada se elimina el fijador
y se deshidrata.

Debido a que gran parte del tejido está constituida por agua, la muestra se somete a una
serie gradual de soluciones acuosas deshidratantes, en concentración creciente (de
menor a mayor), por ejemplo, Alcohol Etílico. Se inicia con alcohol al 70 %, continuando
luego con soluciones al 80%, 90%, 96% y 100 % para eliminar el agua. Esto permite que
el agua sea removida en forma lenta, sin romper o deformar el tejido.

4.- ACLARAMIENTO O DIAFANIZACIÓN, luego de deshidratar el tejido, se somete a
una sustancia que es miscible, tanto con el alcohol como con el medio de inclusión a
utilizar.


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En la mayoría de los casos se utiliza como medio de inclusión Parafina líquida. La
sustancia comúnmente utilizada para aclarar es el Xilol. El xilol sólo es soluble en alcohol
al 100%. Se llama aclaramiento ya que el tejido se torna transparente o claro, esto se
debe a que cambia su índice de refracción.

NOTA: El alcohol y el xilol disuelven los lípidos de la célula, por lo cual al extraerse
también se extraen las grasas y los lípidos constituyentes de la célula.

5.- INCLUSIÓN O IMPREGNACIÓN, a fin de que se puedan obtener cortes
suficientemente finos para ser observados al microscopio.

Los tejidos tienen que ser incluidos y envueltos por una sustancia de consistencia firme.
Las sustancias usadas para este fin en microscopía óptica son la gelatina y la parafina.

El objeto de la inclusión es:
• Distinguir entre sí las células y la matriz extracelular, superpuestas en un tejido.
• Tener un objeto lo suficientemente duro para su manejo y corte.
La inclusión se logra al infiltrar la parafina liquida o cualquier medio de inclusión en estado
líquido al tejido, que disuelve el medio de aclaramiento y penetra en el tejido. Por lo
general se coloca la muestra de tejido en un recipiente y se le agrega la parafina fundida a
60-64º C, colocando la muestra en una estufa.

Debido al calor, el xilol se evapora y los espacios anteriormente ocupados por el, son
ahora ocupados por la parafina. Después se coloca la muestra y un poco de parafina
fundida en un molde de metal de forma cuadrada o rectangular y se deja solidificar a
temperatura ambiente, formándose un bloque sólido de parafina con el trozo de tejido
incluido, a este bloque se le denomina Taco.

Los medios de inclusión para Microscopia Electrónica comúnmente utilizados son resinas
polimerizadas o epoxi como: Epon, Mikropa y Araldit.

6.- CORTE o SECCIÓN, el taco ahora se puede cortar en láminas lo suficientemente
delgadas como para permitir el paso de la luz a través de él.

La mayor parte de los preparados para microscopia óptica tienen un grosor entre 3 a 10
micrómetros (habitualmente 5 µm). Para realizar estos cortes se utiliza un aparato
llamado MICROTOMO.

Para Microscopía Electrónica se requieren cortes más delgados (denominados ultra finos)
de aproximadamente 25 a 100 nm. de espesor y de 0.5 mm. de lado medio. Para esto se
utiliza un MICROTOMO CON HOJA DE VIDRIO O DIAMANTE. Una vez preparados, se
montan sobre rejillas de cobre con un diámetro de 3mm.


7.- DESPARAFINADO E HIDRATACIÓN, los cortes todavía no son aptos para su
examen con el microscopio, puesto que los tejidos se hallan infiltrados en parafina.

Los cortes se colocan sobre un portaobjetos a los que se les ha agregado una pequeña
cantidad de Albúmina, la cual actúa como adhesivo.

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La parafina se elimina en un solvente orgánico, como xilol, en el cual la parafina es
miscible, para luego rehidratar la muestra, haciéndola pasar por una serie de
graduaciones decrecientes de alcohol etílico.

8.- TINCIÓN, los cortes todavía no son aptos para su examen con el microscopio,
puesto que los tejidos son transparentes.

Una vez rehidratado, se procede a teñir el tejido. Los colorantes más utilizados son la
HEMATOXILINA y la EOSINA.

FUNDAMENTOS QUÍMICOS DE LA COLORACIÓN
La EOSINA es un colorante ácido y sus propiedades tintoriales pueden ser explicadas
sobre la base de lo que se sabe de la acción de las anilinas ácidas. La HEMATOXILINA
aunque no es un colorante básico típico, posee propiedades muy semejantes a las
anilinas básicas.
Un colorante ácido es una sal cuya base es incolora y su ácido es coloreado (eosina o
eosinato de sodio). La molécula de anilina presente en este tipo de colorante, tiene una o
más cargas negativas positivas en su porción coloreada.
Los colorantes ácidos reaccionan con los GRUPOS CATIÓNICOS de los componentes
celulares, por ejemplo, los grupos CARBOXILO de las proteínas.
Esto confiere una tinción acidófila (afín con lo ácido) a estructuras como el citoplasma de
las células, las fibras musculares, algunos conectivos, etc. La reacción de estos grupos
varía según el pH.
Un colorante básico es una sal cuya base es coloreada y el ácido es incoloro
(hematoxilina, azul de metileno o clorhidrato de azul de metileno). En este caso, las
moléculas de anilina tienen una o más cargas positivas en su porción coloreada.
Los colorantes básicos reaccionan con los grupos ANIÓNICOS de los componentes
celulares, por ejemplo los grupos fosfato de los ácidos nucléicos (ADN y ARN).
Esto confiere una tinción basófila (afín con los colorantes básicos) a estructuras como el
núcleo celular y los ribosomas presentes en el REr.
Para que la muestra pueda mantenerse de modo permanente, se coloca un cubreobjeto,
con un medio adecuado para el MONTAJE (por ejemplo una gota de Bálsamo de Canadá
o similar).

9.- OBSERVACIÓN AL MICROSCOPIO ÓPTICO, una vez seco el preparado, este se
encuentra en condiciones de ser observado al microscopio. Es importante verificar que el
cubreobjetos este ubicado hacia arriba en la platina del equipo.

En el microscopio óptico (M.O.) consta de un sistema estativo, un sistema óptico y un
sistema de iluminación.

El sistema estativo consiste en una columna eje, que en su extremo superior lleva un
soporte para el sistema óptico y en su extremo inferior posee una base o pie donde va
colocada la platina, las pinzas y el revolver que contiene a las lentes de objetivos.

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El sistema óptico posee 2 tipos de lentes:

1) Lente de aumento del ocular con un aumento de 10x.
2) Lente de aumento de objetivos, con aumento de 4x, 10x, 40x y 100x.

Al observar con lente objetivo 4x, la muestra estará aumentada 40 veces (10 x 4)

El sistema de iluminación del M.O. consiste en una fuente de luz, que puede iluminar
desde arriba (luz incidente) o desde bajo la platina (luz transmitida).

El microscopio electrónico (M.E.) utiliza un haz de electrones de ubicación superior. El
poder de resolución, es decir la capacidad de ver separadas dos estructuras contiguas, es
mucho mayor que la resolución del microscopio óptico.


IV.- ACTIVIDAD PREVIA COMPLEMENTARIA:
No hay por ser la primera clase.

V.- METOLOGÍA DE LA SESIÓN:
Teórica: Clases expositivas con apoyo de material audiovisual.
Práctica: Empleo y manejo de microscopio óptico – Técnica histológica.

VI.- LECTURA POST SESIÓN: