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PRÁCTICA #4: CROMATOGRAFÍA
Bautista H. José Nicolás y García Malpica y A. David
Resumen
Esta práctica se realizó en dos partes: la primera fue sobre la separación de los carotenos con la
técnica de cromatografía en columna y la segunda fue de la separación de licopenos empleando
el mismo método. A este equipo se le asignó la segunda experiencia.
Introducción
*La cromatografía es un método físico de separación de distintas especies, aunque estas sean muy
parecidas, basado en la distribución diferencial de una mezcla entre una fase estacionaria fija y una
fase que se mueve a contracorriente respecto a la primera. De este modo se producen
transferencias repetidas de los componentes de la mezcla muchas veces entre las dos fases, lo cual
conduce a su separación. La fase estacionaria puede ser la superficie de un soporte solido situado
en una columna o un líquido mantenido en un soporte sólido, mientras que la fase que se desplaza
es un líquido o un gas.
Esta técnica de separación se puede realizar en función a las características de las especies
químicas que se deseen separar, ello dependerá de sus cargas, masa, tamaños moleculares,
la polaridad de sus enlaces, sus potenciales redox, entre otros aspectos. Debido a ello existe una
gran variedad de técnicas para llevar a cabo su separación a través de la cromatografía:
Tipo de cromatografía Fase móvil Fase estacionaria
Cromatografía en capa fina Liquido Solido
Cromatografía de gases Gas Sólido o liquido
Cromatografía liquida Líquido (polar) Sólido o liquido (menos polar)
C. liquida de intercambio iónico Líquido (menos polar) Sólido o liquido (polar)
C. liquida de exclusión Liquido (polar) Sólido
C. liquida de absorción Liquido Sólido
C. liquida en fase inversa Liquido Sólido
C. de fluidos supercríticos Liquido Sólido
Cromatografía en papel Liquido Liquido (moléculas de agua contenidas
en celulosa de papel)

La aplicación de la cromatografía radica en la industria y análisis en laboratorios. Por ejemplo en
aspectos de la petroquímica, principalmente en las plantas de gases, donde se obtienen los
productos acabados como son el propano y el butano. La industria farmacéutica hace de esta
técnica uso para la purificación de biomoléculas, péptidos, proteínas, anticuerpos, etc. En la
tecnología de alimentos y productos naturales puede realizarse la caracterización de aceites
esenciales y aromas, los cuales son empleados en la elaboración de saborizantes, aromatizantes,
licores, perfumes, artículos de aseo. En el control ambiental, para determinación de los
contaminantes posibles de ser estudiados, como: los hidrocarburos aromáticos, BTEX, pesticidas
organo-clorados y organo-fosforados en muestras de aguas superficiales, subterráneas, suelos y
lodos. En la determinación y cuantificación de alcohol en sangre, análisis de licores, entre otros.
Además de controlar los procesos de obtención en distintos puntos, es de interés conocer el grado
de pureza de los mismos una vez acabado dicho proceso, para lo cual por medio de la
cromatografía se realiza un análisis cualitativo y cuantitativo de los componentes.


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Discusión

El equipo número 5 se encargó de efectuar la experiencia 2 de la práctica, la cual
fue sobre la separación de licopenos de una fase homogénea, para ello se
empleó la cromatografía en columna. En este método se pueden usar un amplio
espectro de adsorbentes sólidos, como la sílice, la alúmina y la sílice gelatinosa.
Después de montar el equipo se colocó en el interior de la columna de vidrio una
porción de algodón, acomodándola con la piceta, se agregó hexano para
comprobar el paso correcto (cantidad y velocidad) de las sustancias a través de
la columna, a continuación se introducen la silica gel y el eluyente (hexano) en la
columna (existe una llave de seguridad para controlar el paso de sustancias al
exterior de la columna), se abre la llave de seguridad y se deja salir al eluyente
dejando una pequeña cantidad en parte superior de la silica. Esta es la fase
estacionaria utilizada, es decir, el absorbente (que permite la retención y reparto
de una especie química en los sitios activos de la superficie de un sólido).
Seguidamente se introdujo la mezcla orgánica que se necesitaba separar, la
depositamos por la parte superior de la fase estacionaria con mucho cuidado,
bañando solamente las paredes con nuestra sustancia orgánica evitando tener un
contacto directo con la silica gel puesto que si la su distribución no será la
adecuada, se introduce más eluyente y se abre la llave de seguridad para dejarlo
pasar, si la concentración de la sustancia no es la suficiente se prueba el mismo
procedimiento con distintas concentraciones de eluyente:
 Hexano 100%
 Hexano-Acetato de etilo (19:1)
 Hexano Acetato de etilo (9.1)
 Hexano-Acetato de etilo (17:3)
 Hexano – Acetato de etilo (8:2)
 Hexano – Acetato de etilo(7:3)
 Hexano – Acetato de etilo (1:1)
 Metanol 100%
Así la fase móvil podrá ir atravesando el sistema. En este caso nuestra
concentración en la que empezó a gotear el líquido colorido fue Hexano: Acetato
de etilo (8:2), en tubos de ensaye empezamos a obtener las fracciones coloridas
que arrastraba la fase fluida. Después de 5 fracciones recolectadas en tubos de
ensayo obtenidos el color iba siendo más tenue. Al final la columna se fraccionó y
comenzó a salir líquido incoloro nuevamente.
Para la cromatografía en capa fina obtuvimos los siguientes resultados





Revelador: Revelador: Revelador Revelador
Molibdeno Permanganato Luz UV
1.5 = 0.3604 2.75 = 0.6395 1.9 = 0.4418 1.6 = 0.3720
4.3 4.3 4.3 4.3

4.3 cm 1.5 cm 4.3 cm 2.75 cm 4.3 cm 1.9 cm
4.3 cm
1.6 cm

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Conclusiones
Se identificaron los fundamentos teóricos y prácticos de la técnica de cromatografía: este se trata
de un proceso de separación, para el análisis de sustancias, mediante el desplazamiento
diferenciando a través de un medio poroso, arrastrados por un disolvente en movimiento. Depende
de la polaridad de las sustancias.
Bibliografía
1. *J. M. Costa. Diccionario de Química Física. 2 ed. España. Ed Díaz de Santos. Pág. 110, 2005








TERMINOLOGÍA EN CROMATOGRAFÍA
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Absorción:
es la retención de una especie química por parte de una masa ydepende de la tendencia que tiene ésta a formar
mezcla o a reaccionar químicamente con la misma.


5
"

Adsorbente:
fase estacionaria en la C. de adsorción y de reparto.

"

Adsorción:
Es la retención de una especie química en los sitios activos de lasuperficie de un sólido, quedando limitado el fenómeno
a la superficie que separalas fases o superficie interfacial, esta retención superficial puede ser física oquímica.

"

C. en fase inversa:
C. con una fase estacionaria no polar y una fase móvil polar.

"

C. en fase normal:
C. con una fase estacionaria polar y una fase móvil no polar.

"

Disolvente o revelador:
Cualquier fase móvil.

"

Elución:
Proceso de extraer un soluto de la fase estacionaria.

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"

Eluyente:
La fase móvil una vez que se extrae de la columna.

"

Fase estacionaria:
Material que permanece dentro de la columna cromatográficadurante la cromatografía y que
retiene algún componente de la muestra, posee unagran área superficial y puede ser un sólido o un líquido
dispuesto sobre un sólidoque actúa como soporte.

"

Fase móvil:
Es un fluido que puede ser líquido, gas o fluido supercrítico que seusa como portador de la mezcla y que se hace pasar a
través de la columnacromatográfica y la fase estacionaria.

"

Origen:
Lugar físico donde se coloca la muestra al principio.

"

Revelado:
Proceso de separar un soluto de la muestra por medio de cromatografía.

"

Soporte:
El material sólido inerte que en la C. de reparto sirve para sostener lafase estacionaria líquida en su sitio.

"

Sorbente:
Cualquier fase estacionaria