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Código: I-CIRB-AADC-03

F-CIPLADE-CC-39/REV:00

Fecha de emisión:
1-Octubre -2012

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Instructivo para la Citometría
Hemática


1.- OBJETIVO
Establecer los procedimientos necesarios para realizar correctamente la Citometría Hemática
Completa que ayude a una buena orientación diagnóstica.

2.- ALCANCE
Aplica para la prueba de Citometria Hematica Completa de la muestra de los pacientes que acudan al
AADC.

3.- DESCRIPCIÓN DE LA OPERACIÓN

PROCEDIMIENTO DE LA CITOMETRIA HEMATICA COMPLETA
1.-Realizar la lectura automatizada.
2.-Realizar el frotis sanguíneo.
3.-Realizar la tinción de reticulocitos.
4.-Conteo plaquetario en caso de requerirse.

A).-METODO AUTOMATIZADO

*ENCENDIDO DEL EQUIPO
1.-Encender el equipo presionando el botón: Encendido/apagado.
2.-Aspirar los 3 controles (alto, bajo y normal)
3.-Verificar los parámetros de cada control
4.-Mezclar bien la muestra que se va aspirar.
5.-Pasar las muestra por el analizador (Sysmex KX21).
6.-Transferir el reporte automatizado en la bitácora de CH.
7.-Poner en Sleep el equipo cuando no hay más muestras que pasar.
8.-Presionar el botón verde para despertar el equipo si se desea seguir analizando muestras.

*APAGADO DIARIO:
1.-Presionar el botón Shudown
2.-Aspirar la solución de lavado (cloro puro) como si fuera una muestra.
3.-Esperar que complete todo el ciclo de limpieza
4.-Apagar el equipo.

B).-TINCIÓN DE WRIGHT (método de cubre objetos)
Es una tinción modificada del método de Romanosky, los colorantes ácidos se unen a los
componentes básicos de las células afines al citoplasma e inversamente los colorantes básicos son
atraídos por los componentes no ácidos, ósea al núcleo, es decir que esta tinción es la mezcla de un
colorante ácido que es la eosina y uno básico que es el azul de metileno, también llamados colorantes
policromatófilos o neutros.
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Ácidos- Eosina
Básico- Azul de metileno
Modo de preparación de la tinción de Wright.
Pesar 1.5gr de Wright (colorante) y diluirlo para 500ml de metanol (frasco ámbar) alejarlo de la
luz, se le añade pocas cantidades (al tanteo) de glicerina o al momento de prepararlo, mezclar
continuamente tratando de disolver el colorante.
1. Una vez practicado el frotis, ya sea de sangre periférica o medula ósea (M.O) se dejan
secar.
2. Se coloca los frotis en forma horizontal sobre varillas de vidrio
3. Se fijan con metanol y se deja escurrir
4. Se cubre con colorante de Wright:
a. Para Sangre periférica: 1 min con Wright se le añade agua desionizada hasta la
aparición de la capa metálica, se espera 4 minutos aproximadamente.
b. Para M.O: 1 minutos del colorante, se añade agua desionizada hasta que
aparece la capa metálica y activar cronometro por 7 minutos.
5. Posteriormente se lava con agua corriente de la llave, limpiándose la parte posterior del
frotis, se dejan secar al aire libre y se observa al microscopio (100x)
6. Estos frotis así teñidos pueden permanecer por tiempo indefinido si se cubren con
cubreobjetos o se protegen.
Interpretación
El recuento diferencial es de mucha utilidad, para evaluar la infección o la inflamación,
determinar los efectos de una posible intoxicación por agentes químicos o fármacos, controlar los
trastornos sanguíneos (leucemias o anemias) y los efectos de la quimioterapia, o para detectar
reacciones alérgicas e infecciones parasitarias.
C).-TINCIÓN DE RETICULOCITOS
Introducción
La velocidad de la eritropoyesis se determina por el recuento de reticulocitos. Normalmente,
algo menos del 1% de los glóbulos rojos (GR) mas viejos son sustituidos por reticulocitos recién
formados cada día. Posteriormente el reticulocito tarda uno o dos días en transformarse en GR maduro
(1 día en medula ósea y 1 día en sangre periférica). Por consiguiente, los reticulocitos constituyen el
0.5%-1.5% de todos los GR de una muestra de sangre. Un recuento reticulocitario bajo en una
persona que padece anemia podría ser indicativo de una cierta incapacidad de la médula ósea para
responder, quizá debido a un déficit nutricional, un déficit de factor intrínseco o una leucemia. Un
recuento reticulocitico elevado podría indicar una buena respuesta medular a una perdida previa de
sangre o un tratamiento con hierro en una persona que presenta un déficit de hierro.

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Material biológico
Aproximadamente 2ml de sangre con EDTA
Reactivos
• Colorante para reticulocitos
• 1gr de Azul de Cresil brillante
• 100ml de sol. Salina c.b.p (NaCl 0.9%)
Modo de preparación del reactivo Azul de Cresil brillante
Se pesa 1gr de Azul de Cresil brillante, luego lo disolvemos con solución salina y mezclar, una vez
disuelto, lo filtramos en un matraz de 100ml, luego de filtrarlo completamos el volumen sobre el
embudo que tiene el mismo papel filtro ajustar a 100ml.
Método de la prueba
1. Diluir partes iguales del colorante y sangre: 1 gota de sangre mas 1 gota del reactivo.
2. Esperar 15 segundos a 37°C (incubar) o 30 segundos a temperatura ambiente.
3. Realizar un extendido de sangre en un portaobjetos.
4. Contar 1000 células y de esta cuenta (GR) sacar la proporción de reticulocitos.

Índice Reticulocitario
IR=(Hto. Real/Hto. Ideal) x % Retis / 1 +Fc


D).- CONTEO MANUAL DE PLAQUETAS
Principio
La sangre se diluye con el Oxalato de Amonio al 1%, el cual hemoliza completamente los
hematíes, posteriormente se cuentan las plaquetas mediante la cámara de Newbauer y al microscopio
de contraste de fase u objetivo de 40x, se verifica el resultado obtenido efectuando un segundo contaje
observamos la laminilla (frotis sanguíneo) teñido con colorante de Wright.

Técnica de conteo manual de plaquetas
1. Se mezcla la sangre (tomada con EDTA) con suavidad durante 2 min. aprox.
2. Con la micropipeta de (GR) se aspira la sangre hasta la marca de 1.0, se diluye hasta la
marca de 101 con el Oxalato de Amonio (dilución 1:100)
3. Se coloca la pipeta en un agitador de 10 a 15 minutos, de esta forma la mezcla de la
sangre y la hemolisis de los hematíes serán completados.
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4. Se llena la cámara de Newbauer con el contenido de las pipetas debidamente
mezclado, desechando las 3 primeras gotas de la micropipeta y la siguiente gota se
pone en la cámara, por un lado o en el canal.
5. Se deja reposar por 15 min. Y en una cámara húmeda (caja de Petri con algodón
húmedo) con esto se facilita la sedimentación de las plaquetas o al tiempo que la
humedad de la cámara húmeda evita la evaporación del líquido de la cámara de
Newbauer.
6. Con ayuda del microscopio de contraste de fase se cuentan las plaquetas en la
cuadricula central destinada a la cuenta de GR (25 cuadros), calculando la cifra de
plaquetas como sigue:
a. Plaquetas/mm³=#de plaquetas contadas por factor de dilución por factor de
volumen
#De plaquetas contadas x 100


E).-VELOCIDAD DE SEDIMENTACIÓN GLOBULAR (V.S.G)
Introducción
Cuando se dispone de un tubo de sangre con anticoagulante y se deja en reposo, se observa
que después de un cierto tiempo las células sedimentan formándose 3 zonas: la inferior, constituida
por los hematíes. Una media, de poco espesor constituida por los leucocitos, otra superior que es el
plasma. A Este proceso se denomina velocidad de sedimentación globular y el interés de su estudio
reside en el hecho de que la velocidad a que se realiza o velocidad de sedimentación globular (V.S.G)
puede variar en diversas situaciones patológicas.
En la practica, la existencia de hematíes de pequeño tamaño (VCM ↓) o un numero muy escaso
(anemia intensa) y el marcado aumento de la concentración plasmática de ciertas proteínas, como el
fibrinógeno o las globulinas (haptoglobulinas, ß-glicoproteína acida, α1 anti-tripsina, proteína c-reactiva
e inmunoglobulinas), son las principales causas de un aumento de la V.S.G.

La sedimentación globular se realiza en 3 etapas.
1. Hemaglutinación o tendencia de los hematíes a formar agregados en forma de “pilas de
monedas´´
2. Sedimentación o desplazamiento de los hematíes hacia el fondo del recipiente a
velocidad constante.
3. Acúmulos de los hematíes en el fondo del recipiente.


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De estas etapas la más importante es la primera o hemaglutinación, ya que de ella dependerá
la velocidad de todo el proceso. Así, cuanto mas pequeños sean los agregados, mas lentamente se
producirá la sedimentación y viceversa.
Técnica
1. Se mezcla bien la sangre.
2. Se llena un tubo de Wintrobe con la sangre del paciente hasta la marca 10.
3. Se pone en una superficie plana y totalmente vertical y se deja reposar 1 hora.
4. Al término de la hora se lee la fila opuesta donde se lee el hematocrito o sea la fila de la
izquierda.

Valor de referencia:
• Hombres: hasta 15 mm/h.
• Mujeres: hasta 20 mm/h.
• Niños: hasta 10 mm/h.
• Recién nacidos: 0-2 mm/h.


Código
(cuando aplique)
Nombre del documento Lugar de almacenami ento
N/A Manual de Operación Sixmex KX21 Laboratorio de AADC
N/A Capitulo de Citometría Hemática. Libro Arguelles Laboratorio de AADC
L-CIRB-AADC-02
Lineamiento para el manejo de Residuos Peligrosos
Biologicos Infecciosos (RPBI).
Laboratorio de AADC
P-CIRB-AADC-03 Procedimiento de muestras y entrega de resultados Sherpoint



Identificación
(código)
Nombre del
registro
Lugar de
almacenami ento
Responsabl e de
su protección
Tiempo de
retención
Disposición de
los regi stros
F-CIRB-
AADC-05
Bitácora de
Citometría hemática
Laboratorio de
AADC
Química 1 año Archivo muerto







4.- DOCUMENTOS DE REFERENCIA
5.- CONTROL DE REGISTROS
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Hemática


6.- GLOSARIO

6.1 .- SIGLAS
AADC.-Area de apoyo al diagnóstico clinico.
CH.-Citometria hematica
6.2 .- DEFINICIONES
CITOMETRIA HEMATICA.- Medición de células sanguíneas.


Nota: La sección 7 será utilizada a partir de la primera modifi cación a este documento. La revisión 00, se
mantendrá en blanco.







Las firmas avalan la responsabilidad de l as personas que: elaboran el documento, revisan su adecuación
y aprueban para su implementación dentro del Sistema de Gestión de la Calidad de la Universi dad
Autónoma de Yucatán.
7.- CONTROL DE REVISIONES

NIVEL DE
REVISIÓN
SECCIÓN
Y/O PÁGINA
DESCRIPCIÓN DE LA MODIFICACIÓN Y MEJORA
FECHA DE
MODIFICACIÓN

00
Todo el
documento

Sección 1
Se cambió el formato


Se modificó la redacción del objetivo.

18 de Enero 2013
Elaboró

QFB. Gabriela Alonzo Salomón
Técnico Académico

Revisó

Dr. Pedro González Martínez
Responsable del AADC

Aprobó

DR. J orge Zavala Castro
Director del CIR