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QUÍ MI CA ANALÍ TI CA I I I

CROMATOGRAFIA
GASEOSA
Desarrollo del tema
 Introducción
 Las muestras para cromatografía de gases
 Principios básicos
 Esquema de un cromatógrafo de gases
 Fase móvil
 Sistema de inyección
 Columnas y Fases estacionarias
 Detectores
 Aplicaciones analíticas
 Bibliografía

Introducción: Desarrollo histórico
 M. TSWEET (1903): Separación de mezclas de
pigmentos vegetales en columnas rellenas con
adsorbentes sólidos y solventes varios.

éter de
petróleo
CaCO
3
mezcla de pigmentos
pigmentos
separados
1940
1950
1960
“ CGS” rudimentaria
CGL propuesta por Martin y Synge)
Separación de ácidos orgáni-
cos por CGL: primer cro-
matógrafo (Martin y James)
Primer equipo comercial
(Griffin & George)
Detector por Densidad de
Gases (Martin y James)
Detector de Ionización de
llama (McWillian y Dewar)
Detector por Captura de
Eletrones (Lovelock y Lipsky)
Columnas Capilares (Golay)
Introducción:
Desarrollo
histórico
Modalidades y Clasificación
FM = Líquido
Cromatografia
Líquida
FM = Gas
Cromatografia
Gaseosa (CG)
En CG la FE
puede ser:
Sólida
Líquida
Cromatografía
Gas-Sólido (CGS)
Cromatografía
Gas-Líquido (CGL)
Las muestras
para CG
Qué mezclas pueden
ser separadas por
CG ?
Mezclas cuyos constituyentes sean
VOLÁTILES
Para que una sustancia pueda ser
“arrastrada” por um flujo de gas, debe poder
disolverse al menos parcialmente en dicho
gas
DE FORMA GENERAL:
La CG es aplicable para la separación y el
análisis de mezclas cuyos componentes
tengan PUNTOS DE EBULLICIÓN de hasta
300
o
C y que sean térmicamente estables
Principios Básicos
Separación de
mezclas por
interacción
diferencial de
sus
componentes
entre una FASE
ESTACIONARIA
(líquido o
sólido) y una
FASE MÓVIL
(líquido o gas).

Instrumentación: el
cromatógrafo de gases
1 – Depósito de
gases y contro-
ladores de presión
y caudal.
2 - Inyector.
3 - Columna
Cromatográfica y
horno.
4 - Detector.
5 – Amplificador
de la señal.
6 - Registrador.
1
2
3
4
6
5
INFLUENCIA DE LA COMPRESIBILIDAD DE
LA FASE MÓVIL
 Fluj o volumétr i co

 Debe exi sti r una caí da de pr esi ón a lo lar go de la
columna par a que la fase móvi l fluya


 El fluj o mási co (gr amos de gas por uni dad de
ti empo) es constante, por lo tanto


 El caudal volumétr i co a lo lar go de la columna
cr ece
min) /
3
F(cm
o
p
i
p >
o
V
i
V <
o
F
i
F <
 Se i ntroduce el “factor de correcci ón de
compresi bi li dad de J ames y Marti n“



 j se puede relaci onar con parámetros
aerodi námi cos de la columna
INFLUENCIA DE LA COMPRESIBILIDAD DE
LA FASE MÓVIL
=
3
2
(

⁄ )
2
−1
(

⁄ )
3
−1

̅ =

� =


=

VOLÚMENES DE RETENCIÓN EN
CROMATOGRAFÍA GASEOSA
 Volumen de retenci ón

 Volumen de retenci ón aj ustado


 Volumen de retenci ón corregi do

 Volumen de retenci ón neto

=

´

=

(

)
=

´

´

=

=

=

(

)
=

(

)

Volumen de r etenci ón especí fi co
c
T
273
S
ρ
D
K
=
c
T
273
S
w
S
V
D
K
=
c
T
273
S
w
N
V
=
g
V
w
S
= masa de fase estaci onar i a
r
S
= densi dad de la fase estaci onar i a
T
c
= temper atur a de la columna
Fase Móvil: Gas Portador
Requisitos
INERTE No debe reaccionar com la muestra, la fase estacionaria ni
las superficies del instrumento.
PURO Debe estar exento de impurezas que puedan degradar la fase
estacionaria
I mpurezas tí pi cas de los gases y sus efectos:
Oxida/hidroliza algunas FE
Son incompatibles com un DCE
H
2
O, O
2
hidrocarburos

Ruido en la señal de un FID
La Fase Móvil en CG NO interactúa con la muestra
Sólo la lleva a través de la columna
Se la denomina GAS PORTADOR
Gas Portador
COMPATIBLE CON EL DETECTOR Cada detector demanda
un gas portador específico para su mejor funcionamiento
Selecci ón de Gases en Funci ón del Detector :
He , H
2

DCT

FID

N
2
, H
2

DCE

N
2
, Ar + 5% CH
4

1 - Cilindro de Gas
2 - Regulador de Presión
3 - “Trampa” para eliminar impurezas
4 - Regulador de Línea
5 - Regulador de Caudal
6 - Medidor de Caudal
Componentes
de una línea
de gas
controladores
de presión y
caudal
dispositivos
para
purificación
(“trampas”)
1
2
3
4
5
6
Sistemas para introducción de la muestra
Los dispositivos para
inyección
(INYECTORES o
VAPORIZADORES)
deben permitir la
introducción
I NSTANTÁNEA de
la muestra en la
columna
cromatográfica
I nyecci ón i nstantánea
I nyecci ón lenta
t = 0
t = x
t = 0
t = x
Inyector “on-column”
Convencional
1 - Septum
(silicona)
2 - Entrada de
gas portador
3 – Bloque
metálico
calefaccionado
4 - Punta de la
columna
cromatográfica
1
2
3
4
Parámetros de inyección
TEMPERATURA DEL INYECTOR
Debe ser suficientemente elevada como para que la
muestra se vaporice inmediatamente, pero sin
descomponerse
Regla General
T
iny
= 50
o
C por encima de la temperatura de
ebullición del componente menos volátil
VOLUMEN INYECTADO
Depende del tipo de columna y del estado físico de
la muestra
COLUMNA
Muestras
Gaseosas
Muestras
Lí qui das
empaquetada
∅ = 3,2 mm (
1
/
4
”)
0,1 ml ... 50 mL 0,2 µL ... 20 µL
capilar
∅ = 0,25 mm
0,001 ml ... 0,1 mL 0,01 µL ... 3 µL
Sóli dos:
comúnmente se di suelven en un
solvente adecuado y se i nyectan en
soluci ón
Parámetros de inyección
Inyección manual de muestras

COLUMNAS
RELLENAS
la fase estacionaria
líquida está
retenida en un
sólido inerte
(soporte)
CAPILARES
la fase estacionaria
se fija sobre las
paredes interiores
del capilar

COLUMNAS

COLUMNAS RELLENAS
Diámetro interior entre 2 y 4 mm
Longitud de hasta 2 á 3 m
Eficiencia de 1000 á 2000 platos teóricos/m
Para muestras poco complejas, 10 componentes.
La columna está rellena de un material sólido (soporte), finamente
dividido y homogéneo, recubierto por una capa de F. E. líquida.
Enrollada en forma helicoidal, para poder ser instalada en el horno
termostatizado.
COLUMNAS CAPILARES
Diámetro interior < 1 mm
Longitud de 5 á 50 m.
Eficiencia hasta 4.000 platos teóricos/m
Para muestras complejas.
La fase estacionaria se depositada sobre las paredes
interiores del capilar
FASES ESTACIONARIAS
Conceptos Generales
FE
líquida
SUPORTE
Sólido
inerte
poroso
Tubo capilar
de material
inerte
Para minimizar la pérdida de FE líquida por
volatilización, se puede:
Entrecruzada: las
cadenas
poliméricas son
químicamente
ligadas entre sí
Químicamente
ligadas: las cadenas
poliméricas se hacen
reaccionar sobre el
soporte
FASE ESTACIONARIA
Baja volatilidad.
Punto de ebullición debe de ser por lo menos 100ºC
mayor que la temperatura máxima de la columna.
Estabilidad térmica.
Inercia química.
Los valores de factor de capacidad ( k´ ) y factor de
selectividad (α) de los analitos deben estar dentro
de los intervalos aconsejados.
FASE ESTACIONARIA
La separación se debe a los diferentes
k´del analito entre la fase móvil y la
fase estacionaria.
Tiene que haber un cierto grado de
solubilidad de los compuestos con la
fase estacionaria.
Por ello, una característica muy
importante de la fase estacionaria es la
POLARIDAD.
Los solutos se retienen más en las
fases líquidas de polaridad parecida.
Cuatro grandes grupos estructurales:
PARAFINAS No polares; alta inercia química; son las menos
usadas. Principales: escualano (C
30
H
62
), Apiezon (grasas
para vacío).
POLIÉSTERES Ésteres de dialcoholes con diácidos. Polares;
altamente sensibles a la humedad y la oxidación.
Principales: DEGS, EGA, EGS.
ÉSTERES METÍLICOS DE ÁCIDOS
GRASOS
Columna:5%DEGS-PS s/ Supelcoport
100/120 mesh; 6’ x 1/8”
T
COL
: 200
o
C (isotérmico)
Gas Portador: N
2
@ 20 ml.min
-1
Detector: FID
Muestra: 0,5 μL de solución en cloroformo
conteniendo 0,5 μg de cada éster
Familias de FE Líquidas
SILICONAS (polisiloxanos) Las FE más empleadas en CG. Cubren un amplio
rango de polaridades y tienen propriedades químicas diversas.
Si
CH
3
H
3
C
CH
3
O Si
R
1
R
2
O Si
CH
3
CH
3
CH
3
n
R
1
, R
2
= cualquier
radical orgánico
- Enlaces Si -O altamente estables = elevada estabi li dad térmi ca y quí mi ca
de las FE.
- Si li conas se fabri can en gran escala para di versas apli caci ones =
mi ni mi zaci ón del costo del producto + tecnologí a de producci ón y
puri fi caci ón bi en estudi ada y conoci da.
- Prácti camente cualqui er radi cal orgáni co o i norgáni co puede li garse
a la cadena poli méri ca = FE “aj ustables” a separaci ones especí fi cas +
faci li dad de i nmovi li zaci ón por entrecruzami ento y li gazón quí mi ca a
soportes
Familias de FE Líquidas
FE deri vadas de poli di meti lsi loxano (PDMS) por susti tuci ón de
CH
3
por radi cales orgáni cos, en orden creci ente de polari dad:
Diferencias entre FE de composición similar provenientes
de proveedores diferentes: pureza, viscosidad
Familias de FE Líquidas
Sustituyentes Nombres comerciales Observaciones
------ ----- SE-30, OV-1, OV-101, SP-
2100
Las más apolares de la
serie. Poco selectivas
Carboranos ----- Dexsil 300GC Similares PDMS. Estables
hasta > 400°C
Fenil 5% ----- SE-52, OV-5, OV-73 Poco polar
Cianopropil
7%
Fenil 7% OV-1701, SPB-7, CP-Sil Moderadamente polar
Cianopropil
50%
Fenil 50% OV-255, SP-2300, CP Polar. Retiene dadores de
electrones.
Separaci ón de pi ri di nas FE = 100 % ci anopropi lsi li cona
1 - piridina
2 - 2-metilpiridina
3 - 2,6-dimetilpiridina
4 - 2-etilpiridina
5 - 3-metilpiridina
6 - 4-metilpiridina
3 min
Columna: CP-Sil 43CB (10 m x 0,10
mm x 0,2 μm)
T
COL
:110
o
C (isotérmico)
Gas Portador: N
2
@ 16 cm.min
-1

Detector: FID
Muestra: 0,1μL de solución 1-2% de
las piridinas en 3-metilpiridina
Familias de FE Líquidas
Separaci ón de fenoles - FE = feni lmeti lsi li conas
50% Ph
50% Me
5% Ph
95% Me
Familias de FE Líquidas
FASE ESTACIONARIA: ORDEN DE
ELUCIÓN
En una fase
líquida
cualquiera, una
serie homóloga
eluye según
orden creciente
de NÚMERO DE
ÁTOMOS DE
CARBONO.
Si la fase es NO
POLAR, los solutos no
polares eluyen según
orden creciente de
punto de ebullición.
En una fase
POLAR se
retendrán más
los solutos
polares que
los no polares
a igualdad de
puntos de
ebullición.

SOPORTE SÓLIDO
Carácterísticas
Elevada
superficie
específica
(m2/g)
Superficie
homogénea
Estabilidad
térmica
Tipos de
soporte
Silíceo
(tierras de
diatomeas)
Sintéticos
(vidrio,
teflón).
Ladrillo
refractario
SOPORTE SÓLIDO: Tierra de diatomeas
Esqueletos fósiles
de algas
microscópicas
(SiO
2
+ óxidos
metálicos)
Chromosorb
Anachrom
Supelcoport
...
Fusión com
NaOH
Lavado ácido
secado
calcinación
silanización
Etapas del análisis cromatográfico
1. Elección de la columna y fase estacionaria
2. Ajuste las temperaturas.
3. Ajuste del caudal de gas portador.
4. Se inyecta la muestra (1 μl cuando son líquidas y 1
ml si son gaseosas).
5. Se vaporizan y son arrastradas hasta la columna.
6. Los componentes se fijan al inicio de la columna.
7. Se desplazan por la columna a velocidad diferente
8. Los solutos que salen de la columna, pasan al
detector y se obtiene el CROMATOGRAMA .
Parámetros
Tipo de gas
portador y
caudal
Columna y
dimensiones
Fase
estacionaria
Tipo de
detector
Temperaturas
Bloque de
inyección
Columna Detector
TEMPERATURA DE LA COLUMNA
En muestras de puntos de ebullición parecidos la
temperatura óptima es ligeramente superior al punto de
ebullición medio de los componentes de la muestra.
Con puntos de ebullición muy diferentes se emplea una
programación de temperatura, que aumenta según
avanza la separación.
El aumento de la temperatura reduce los tiempos de
retención.
Los componentes más
volátiles son separados
Los componentes menos
volátiles tardan en
eluir, saliendo como
picos mal definidos
Los componentes más
volátiles no son
separados.
Los componentes menos
volátiles eluyen más
rápidamente
TEMPERATURA DE LA COLUMNA
Programación de temperatura
 T
FIN
Temperatura Final
 t
INI
Tiempo Isotérmico Inicial
 t
FIN
Tiempo Final del
Programa
 R Velocidad de calentamiento
 Se consiguen buenas
separaciones de los
componentes de la
muestra en menor
tiempo


DETECTOR
Mide la variación
de alguna
propiedad física
del gas portador
originada por la
elución de los
compuestos.
Su temperatura
ha de ser mayor o
igual que la de
columna para
evitar la
condensación de
algún compuesto.
Conectado a un
registro gráfico
de la señal.
Detectores
CARACTERÍSTICAS
Alta sensibilidad
(relación entre
respuesta del
detector y la
magnitud física
detectada)
Buena
estabilidad.
Respuesta
continua y
reproducible a
los cambios de
concentración
del compuesto
Respuesta
adecuada al
mayor número
posible de
muestras
Tiempo de
respuesta corto
Reactividad nula
DETECTORES:
Definiciones Generales
Di sposi ti vos
que generan
una señal
eléctri ca
proporci onal
a la canti dad
de anali to
eluí do
4 utilizados en la mayor parte de las
aplicaciones
TCD
Detector de
Condutividad
Térmica
FID
Detector de
Ionización
en Llama
ECD
Detector de
Captura
Electrónica
MS
Detector Es-
pectrométrico
de Masas
DETECTORES: Clasificación
UNIVERSALES
Generan señal para
cualquier sustancia
eluida
SELECTIVOS
Detectan
solamente
sustancias con
determinada
propiedad
fisicoquímica
ESPECÍFICOS
Detectan sustancias que
poseen determinado
elemento o grupo
funcional en sus
estructuras
DE TECTOR DE CONDUCTIVIDAD TÉRMICA
(TCD)
Se basa en los cambios en la conductividad térmica de la
corriente de gas portador debido a la presencia de moléculas
del analito.
Responde a la concentración del soluto en el gas portador
No es destructivo.
La conductividad térmica del gas portador ha de ser elevada
(He, H2) 6 a 10 veces mayor que la mayoría de los compuestos
orgánicos.
Sencillez
Amplio rango lineal
Respuesta a todo tipo de compuestos
No destructivo
Baja sensibilidad (10 10
-8
g soluto/ml) que impide su empleo con
columnas capilares, debido al pequeño tamaño de las muestras.

DE TECTOR DE CONDUCTIVIDAD TÉRMICA
(TCD)
PRINCIPIO
Variación de la conductividad térmica del gas
cuando eluye un analito

DE TECTOR DE CONDUCTIVIDAD TÉRMICA
(TCD)
La canti dad de tr ansfer enci a de calor
entr e un cuer po cali ente y un cuer po fr i o
depende de la conduti vi dad tér mi ca del
gas en el espaci o que separ a los cuer pos
Si la conduti vi dad tér mi ca del gas
di smi nuye, la canti dad de calor
tr ansfer i do tambi én di smi nuye y el
cuer po cali ente se enfr í a.
DE TECTOR DE CONDUCTIVIDAD TÉRMICA
(TCD)
Celda del TCD:
1
2
3
5
4
i
1 Bloque metálico (acero)
2 Entrada de gas portador
3 Salida de gas portador
4 Filamento metálico (aleación W-Re)
calefaccionado
5 Alimentación de corriente eléctrica
para calentar el filamento
DE TECTOR DE CONDUCTIVIDAD TÉRMICA
(TCD)
Los filamentos del TCD están montados sobre un puente de
Wheatstone que transforma la diferencia de resistencia
cuando la elución de la muestra produce una diferencia de
voltaje

TCD: Aplicaciones
Separaci ón y cuanti fi caci ón de compuestos que no generan
señal em otros detectores (gases nobles, gases fi j os)
Columna: CP Sil 5CB (50 m x 0.32 m
x 5 µm)
Gas Portador: He @ 3 ml.min
-1
T
COL
: 40°C
1 N
2
2 CH
4
3 CO
2
4 n-C
2

5 NH
3
6 n-C
3
7 i-C
4
8 n-C
4

Separación de Gases Fijos e
Hidrocarburos

DETECTOR DE IONIZACIÓN DE LLAMA
(FID)
Es uno de los más empleados.
Forma una llama que quema y ioniza los
compuestos separados en la columna.
Insensible a grupos funcionales como C=O, OH,
NH que originan en la llama pocos iones.
Elevada sensibilidad (10
-13
g soluto/mL)
Destructivo
FI D: PRI NCI PI O DE FUNCI ONAMI ENTO
Formaci ón de i ones cuando un compuesto se
quema en una llama de hi drógeno y oxí geno
El efluente de la columna se
mezcla con H2 y O2 y se
quema. Como en una llama
de H2+ O2 no exi sten i ones,
no ci rcula corri ente
eléctri ca.
Cuando un compuesto
orgáni co eluye, él tambi én
se quema. Como en su
combusti ón se forman
i ones, la llama pasa a
conduci r la corri ente
eléctri ca
FI D: SELECTI VI DAD
SELECTI VO
• Para sustanci as
que conti enen
uni ones C-H en
su estructura
quí mi ca.
UNIVERSAL
• Virtualmente
todas las
sustancias
analizables por
CG son orgánicas
Compuestos que
NO producen
respuesta
• Gases nobles, H
2
,
O
2
, N
2
, CO, CO
2
,
CS
2
, CCl
4
,
perhalogenados,
NH
3
, H
2
O,
HCOOH, HCHO

DETECTOR DE CAPTURA ELECTRÓNICA
(ECD)
Se basa en la captura de los electrones libres
procedentes de la ionización del gas portador,
disminuyendo la intensidad de corriente.
El más sensible (10
-14
g soluto/mL).
No destructivo.
Su aplicación principal es para compuestos
organoclorados (pesticidas, herbicidas)
herbicidas)
ECD: PRINCIPIO DE FUNCIONAMIENTO
 Supresión de un flujo de electrones lentos causada
por la absorción de éstos por especies electrofílicas
Un flujo continuo de
electrones lentos se establece
entre un ánodo (fuente
radioactiva β -emisora) y un
cátodo
Al pasar una sustancia
electrofílica algunos
electrones son absorbidos,
disminuyendo la corriente
eléctrica.
APLICACIONES DEL ECD
PESTICIDAS
1 tetracloro-m-xileno
2 α - BHC
3 Lindano
4 Heptachlor
5 Endosulfan
6 Dieldrin
7 Endrin
8 DDD
9 DDT
10 Metoxychlor
10 decaclorobifenilo
~250 fg de cada
anali to
EL DCE ES EL DETECTOR DE ELECCIÓN PARA ANÁLISIS DE
TRAZAS DE ORGANOHALOGENADOS Y SIMILARES


ACOPLAMIENTO CON OTRAS TÉCNICAS
Proporciona una herramienta muy potente en la
identificación de los componentes de una mezcla
compleja
La tendencia actual es utilizar como detectores
selectivos, técnicas instrumentales como
Espectrometría de Masas y Espectroscopía Infrarroja
Todo ello ayudado de una computadora para el
almacenamiento de los datos espectrales, y posterior
presentación como espectros y cromatogramas
ANÁLISIS CUALITATIVO

Conceptos Generales
Identificación individual de las especies
presentes en la muestra
Determinación de la identidad de la
muestra como un todo
Apli caci ones
Cuali tati vas de
la
cromatografí a
Fuentes de I nformaci ones Cuali tati vas
RETENCIÓN Uso de datos de retención de un analito para su
identificación
DETECCIÓN Empleo de detectores que proveen información
estructural sobre las sustancias eluidas
ANÁLISIS CUALITATIVO
Datos de Retención
 Naturaleza de la fase estacionaria y su %
en el relleno
 Longitud de la columna
 Naturaleza del gas portador y su caudal
 Temperatura de la columna
 Tamaño de la muestra
El tiempo de
retención, tR es
función de:
A condi ci ones experi mentales constantes,
el t
R
y el V
R
son caracterí sti cos de cada
sustanci a
ANÁLISIS CUALITATIVO
Tiempos de Retención
t’
R
= f
I nteracci ones anali to/ FE
Presi ón de vapor del anali to
Condi ci ones de operaci ón (T
COL
, F
C
...)
Una vez fi j adas las condi ci ones operatori as, el ti empo de
retenci ón aj ustado de un anali to es una constante
La i denti fi caci ón por t’
R
es muy poco confi able, debi do a:
Dependencia con F
C
y T
COL
Variaciones en estas condiciones
afectan sensiblemente los t’
R

VARIACIÓN DE ±
1% EN t’
R

ΔT
COL
= ± 0,1%
Δ F
C
= ± 1%
Sobrecarga de la columna Un aumento excesivo en la masa de
material eluido deforma el pico cromatográfico y altera su t’
R

 Se comparan datos sobre la misma columna
 Se miden datos de “ retención relativa”


D(std)
K
D(i)
K
=
R(std)

R(i)

=
std i,
r
i= sustancia incógnita
std= sustancia standard
 r
i,std
sólo depende de la temperatura de la columna y de la fase
estacionaria
 Recopilación de datos de retención relativa “ Compilation of Gas
Chromatographic Data” , ASTM Data Series Publication
ANÁLISIS CUALITATIVO
Datos de Retención Relativa
MUESTRA
PATRÓN
Comparación de
los
cromatogramas de
la muestra y de
una solución
patrón del analito
supuesto
 Los datos de t
R
son adecuados para identificaciones simples, por ejemplo,
controles de calidad
 En ese caso, ya se sabe qué componentes tiene la mezcla y generalmente
hay pocos componentes presentes
ANÁLISIS CUALITATIVO
Tiempos de Retención
Comparación de t
R
usando dopaje de la muestra con el analito
supuesto: aumenta la confiabilidad de identificación.
En una muestra compleja la
incerteza en la medida de los tR
puede llevar a una identificación
errónea
La comparación con el
cromatograma de la muestra
dopada permite una
identificación más confiable de
la sustancia desconocida
OTRAS APROXIMACIONES AL ANÁLISIS
CUALITATIVO
 Las series homólogas presentan características retentivas que
facilitan la identificación de las sustancias
 Graficando log t´
R
vs. número de átomos de C (sobre una dada
columna y a una temperatura dada) se obtiene una recta
 La ubi caci ón sobre una recta dada, permi te determi nar a qué
fami li a pertenece
 La ubi caci ón sobre la recta permi te deci di r qué componente de la
seri e es

0
1
2
3
4
5
6
7
4 5 6 7 8 9 10
N° átomos de C
l
o
g

t
´
R
OTRAS APROXIMACIONES AL ANÁLISIS
CUALITATIVO: Gráficos de Retención
FUNDAMENTO Los t’
R
(en condi ci ones i sotér mi cas) par a una ser i e homóloga de
compuestos dependen logar í tmi camente del númer o de átomos de car bono de la
cadena.
Separación isotérmica de
una mezcla de n-alcanos (n-
C
4
, n-C
5
, ... n-C
16
)
Gráfico de log(t’
R
) en función
del número de átomos de
carbono del analito n
C
es
LINEAL
ANÁLISIS CUALITATIVO
Índice de Retención de Kováts
El í ndi ce de retenci ón de Kováts I para un anali to vi ene defi ni do por:
t’
R
(A) Tiempo de retención ajustado del
analito A
t’
R
(N) Tiempo de retención ajustado del
n-alcano con N carbonos
t’
R
(n) Tiempo de retención ajustado del
n-alcano con n carbonos (n = N + 1)
Ej .: un anali to con I = 874 tendr á un ti empo de r etenci ón aj ustado
equi valente al de un n-alcano hi potéti co con 8,74 átomos de car bono
Puede calcularse con
la siguiente expresión

ANÁLISIS CUALITATIVO
Índice de Retención de Kováts
= 100 +100 �
log ´
()
−log ´
()
log ´
()
− log ´
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ANÁLISIS CUALITATIVO
Índice de Retención de Kováts
 Para las n-parafi nas, I es 100 veces el número de átomos de C en
cualqui er columna y a cualqui er temperatura
t
R,
columna 1
t
R,
columna 2
h
e
p
t
a
n
o

t
o
l
u
e
n
o

h
e
x
a
n
o

p
e
n
t
a
n
o

Fi j ando 2 fases se pueden establecer i ncrementos i ndi vi duales
correspondi entes a ci ertos grupos funci onales (Kováts)
Rohrschnei der : ΔI consta de contri buci ones de 2 ti pos:
Dependi ente del soluto y que
no varí a al cambi ar de FE
Especí fi co de la FE y que
puede calcularse a parti r
de un grupo bi en
selecci onado de solutos
McReynolds: cambi ó las sustanci as de prueba que empleaba
Rohrschnei der
Variación del índice al pasar de una fase
estacionaria no polar a una polar
Exper i mentalmente se encuentr a que ΔI puede
expr esar se como:
donde:
j = fase estaci onari a
i = soluto
SQ = escualano (C
30
H
62
), fase estaci onari a no polar, en base
a la cual se construye la escala
a
i
, b
i
, c
i
, d
i
, e
i
= parámetros caracterí sti cos del soluto i ,
i ndependi entes de la fase estaci onari a
x
j
, y
j
,z
j
, u
j
, s
j
= parámetros caracterí sti cos de la fase
estaci onari a j
j
s
i
e +
j
u
i
d +
j
z
i
c +
j
y
i
b +
j
x
i
=a
SQ
i
I
j
i
I =
j
i
ΔI
Variación del índice al pasar de una fase
estacionaria no polar a una polar
Sobr e la fase estaci onar i a j y sobr e escualano se mi den
los í ndi ces de estos solutos
Grupo Sustancia Símbolo
Aromáticos,
olefínicos
benceno x
Alcoholes,
fenoles, ácidos
1-butanol y
Cetonas, éteres,
ésteres,
aldehídos
Metil-n-propilcetona


z
Nitrocompuestos,
nitrilos
nitropropano u
Bases,
heterociclos
aromáticos
piridina s

ANÁLISIS CUALITATIVO
Índices de McReynolds
 Se definen las siguientes relaciones:
ANÁLISIS CUALITATIVO
Índices de McReynolds
 Se usa par a car acter i zar fases estaci onar i as
 Muy úti l con el fi n de deci di r si dos fases
estaci onar i as tendr án un compor tami ento separ ati vo
equi valente o cuál ser á la mej or fase par a un
deter mi nado gr upo funci onal
ANÁLISIS CUALITATIVO
Índices de McReynolds
Fase
estacionaria
Tmáxima x y z u s
Escualano 150 0 0 0 0 0
SE-30 350 15 53 44 64 41
OV-7 350 69 113 111 171 128
Carbowax
20M
250 322 536 368 572 59

Métodos de detecci ón que proveen i nformaci ones cuali tati vas
sobre los anali tos eluí dos:
Cromatografía Gaseosa con Detección Espectrométrica por Absorción
Infra-Rojo (CG-IR)
Cromatografía Gaseosa con Detección Espectrométrica de Masas (CG-
EM)
Cromatografía Gaseosa con Detección Espectrométrica por Emisión
Atómica (CG-EA)
ANÁLISIS CUALITATIVO
Métodos de Detección Cualitativos
Combinación de métodos cromatográficos y espectroscópicos



Técni cas acopladas
ANÁLISIS CUALITATIVO
Métodos de Detección Cualitativos
El cromatógrafo separa la muestra
en sus componentes

El método espectrocópico brinda
información cualitativa de cada uno
de los componentes
La combinación de los datos en tres dimensiones
brinda información cuali-cuantitativa
ANÁLISIS CUALITATIVO
Métodos de Detección Cualitativos
r
e
s
p
u
e
s
t
a

tiempo
PRINCIPIO La muestra es fragmentada y i oni zada según un
patrón caracterí sti co de la especi e quí mi ca.
1 Moléculas de la muestra
son bombardeadas por
electrones (electron i mpact
= EI) o iones (chemi cal
i oni zati on = CI):
ABCDE + e
-
→ ABCDE
.
+
+ 2 e
-
2 El ión formado se fragmenta:
ABCDE
.
+
→ AB
.
+ CDE
+
ABCDE
.
+
→ AB
+
+ CDE
.
ABCDE
.
+
→ A
+
+ BCDE
.
ANÁLISIS CUALITATIVO
Espectrometría de Masas
3 Los fragmentos iónicos formados son separados magnéticamente de
acuerdo con sus masas moleculares y contados:
A
B
U
N
D
A
N
C
I
A

MASA / CARGA
El gr áfi co del númer o de
i ones for mados en funci ón
de la r elaci ón Masa / Car ga
de los i ones es el
ESPECTRO DE MASAS del
anali to
ANÁLISIS CUALITATIVO
Espectrometría de Masas
ANÁLISIS CUALITATIVO
Espectro de Masas
20
40
60 80
100
120
0
m / Z
I nterfase cromatógrafo - espectrómetro:
CG EM
Vacío
Separador Molecular
El gas portador liviano (He)
difunde más rápidamente
que el analito y tiende a ser
drenado por el vacío.
Cámara
de Ionización
Columna
Capilar
Interfase Capilar Directa
Con columnas capilares la
baja cantidad de gas portador
puede ser drenada por el
sistema de vacío.
ACOPLAMIENTO GC-EM
1
2
3
4
1 Cámara de Ionización Los electrones generados por un filamento
bombardean la muestra. Los fragmentos ionizados (carga +1) son repelidos por
el electrodo positivo y conducidos al separador magnético.
2 Salida de Vacío Todo el interior del EM debe estar con alto vacío (natm).
3 Separador Magnético Por acción del campo magnético sólo algunos
iones con determinada relación Masa/Carga pueden atravesar esta zona del
equipo.
4 Detector Una válvula fotomultiplicadora o un fotodiodo genera una señal
eléctrica proporcional al número de iones que inciden sobre este elemento.
ANÁLISIS CUALITATIVO
Espectrómetro de Masas
Los espectros de masas completos son colectados y
archivados a intervalos regulares de tiempo
La generaci ón del cromatograma a parti r de los espectros
puede hacerse según:
CROMATOGRAMA DE IONES TOTALES (TIC = Total Ion
Chromatogram)
Para cada espectro, el número total de i ones detectados en el rango
de masas barri do es sumado y grafi cado en funci ón del ti empo,
generando el cromatograma.
MONITOREO DE UN ION SELECCIONADO (SIM = Single
Ion Monitoring)
Se selecci ona un fragmento resultante de la especi e de i nterés. Se
genera el cromatograma grafi cando el número de i ones con la masa
de ese fragmento detectados en funci ón del ti empo.
TIC
Universal

SIM
Selectivo
Mayor Sensibilidad
CG-EM: GENERACIÓN DEL
CROMATOGRAMA
Ej emplo de una muestra anali zada por CG-EM
TIC
Aparecen los picos
correspondientes a todas
las sustancias eluídas
SIM (m/z = 149)
Cromatograma construído a
partir de los mismos datos
anteriores, pero usando sólo
fragmentos con masa = 149
CG-EM: GENERACIÓN DEL
CROMATOGRAMA
TIEMPO
C
U
E
N
T
A
S

MASA / CARGA
C
U
E
N
T
A
S

1 Se regi stra el espectro de masa que corresponde a un anali to
(usualmente se selecci ona el máxi mo).
2 I nterpretaci ón manual del espectro y/ o comparaci ón
automáti ca con la bi bli oteca de espectros del equi po.
ANÁLISIS CUALITATIVO
Identificación de Analitos
Búsqueda automáti ca en la bi bli oteca de espectros: comparaci ón
estadí sti ca ( Probability Based Matching )
BIBLIOTECA DE
ESPECTROS
ESPECTRO
DESCONOCIDO
PBM
Lista com posibles
candidatos + porcentaje
de confiabilidad
PBM de un anali to
“desconoci do” (1-
dodeceno)
ANÁLISIS CUALITATIVO
Identificación de Analitos
# NOMBRE FÓRM. %
1 1-dodeceno C
12
H
24
99
2 1-dodecanol C
12
H
26
O 91
3 ciclododecano C
12
H
24
91
4 2-dodeceno C
12
H
24
66
5 1-undeceno C
11
H
22
35
6 8-metil-3-undeceno C
12
H
24
32

LIMITACIONES:
La identificación es poco confiable en el caso de
espectros muy simples
Está limitada por el tamaño de la base de datos
(NIST = 66.000 espectros)
Existen diferencias entre los espectros generados por
diversos EM
ANÁLISIS CUALITATIVO
Identificación de Analitos