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NOMBRE

:
Bustamante Guzmán Aldy Khey
Cabrera Rivas Bianca Esmeralda
Pérez Pino Eunice Elena
Rafael Martínez Natanael

SUBMODULO 3: Cuantifica Microorganismos Con Base
a Normas

GRADO Y GRUPO: 4ºBLM

EQUIPO:
#9

ESPECIALIDAD:
Laboratorista Químico

TEMA:
‘’Práctica #7: Recuento indirecto de microorganismos
viables por el método del número más probable
(NMP)’’

PROFESOR:
Q. F. B. Ornelas Mijangos Jesús Melesio

CBTIS Nº 85

Fecha de entrega:
Miércoles 14 de Mayo Del 2014

Introducción
El método del número más probable (NMP) consiste en determinar el número de
microorganismos viables sembrados en diluciones seriadas de la muestra de 3 a 5 tubos. El
crecimiento positivo de microorganismos en los tubos se aprecia por la presencia de una
turbidez, un precipitado, un velo, gas en un pequeño tubo (Campana de durham) volteado
dentro del caldo nutritivo y por el cambio de color del púrpura de bromocresol a amarillo,
debida a la fermentación de la lactosa que producen las bacterias coliformes (de la familia
escherichia coli) origen fecal. Se encuentran los tubos de cada dilución y se comparan en una
tabla de probabilidades o de Mc Crady para encontrar el número más probable (NMP) de
microorganismos, el cual se multiplica por la dilución menos la muestra concentrada en la que
hay tubos son positivos.
La muestra puede ser un liquido o un semisólido, como por ejemplo un alimento o el suelo
(tierra), que debe ser diluido (o mejor dicho, suspendido) antes de iniciar el método.
Objetivo
El estudiante cuantificará los microorganismos viables de una muestra por el método del
número más probable (NMP)
Material y Equipo
25 tubos de cultivo
2gradillas
2 jeringas o pipetas estériles de 5ml
5 jeringas o pipetas estériles de 0.5 ml
Autoclave
Estufa de cultivo
Procedimiento
1. Preparar 5 juegos de diluciones 1:10, 1:100, 1:1000 y 1:100,000 de la muestra a
analizar con solución salina isotónica estéril de tal manera que al final resulten 5
tubos de cada dilución
2. Dejar en cada tubo sólo un mililitro de la dilución correspondiente y agregar 5 ml de
caldo lactosado con púrpura de bromocresol. Mezclar e incubar en la estufa de cultivo
a 37ºC durante 24 horas.
3. Observar los 5 tubos de cada dilución para determinar cuántos resultan positivos al
cambiar el caldo lactosado a color amarillo y anotar el número de tubos positivos por
cada dilución
4. Obtener una cifra de 3 dígitos dónde el primer número es el número d tubos positivos
de la dilución menos concentrada de las 3 últimas diluciones donde hay tubos
positivos.
5. Para saber el número más probable de microorganismos que le corresponde a esta
cifra de 3 digitos se busca en la tabla de probabilidades o de Mc Crady.
6. Calcular y reportar los microorganismos por mililitro con la siguiente formula:
Moo/ml = NMP xd
Procedimiento
Dejamos en cada uno de los 25 tubos sólo un mililitro de la disolución correspondiente

Agregamos 5 ml de caldo lactosado con púrpura de bromocresol a cada uno de los tubos y
mezclamos.

Se incubo en la estufa de cultivo a 37ºC durante 24 hrs





Resultados
Observar los 5 tubos de cada dilución para determinar cuántos resultan positivos al
cambiar el caldo lactosado a color amarillo y anotar el número de tubos positivos por
cada dilución




Dilución 1
Color de Caldo Lactosado: Amarillo
Número de tubos positivos: 5
Dilución 2
Color de Caldo Lactosado: Amarillo
Número de tubos positivos: 5
Dilución 3
Color de Caldo Lactosado: Amarillo
Número de tubos positivos: 5
Dilución 4
Color de Caldo Lactosado: Amarillo
Número de tubos positivos: 5
Dilución 5
Color de Caldo Lactosado: Amarillo
Número de tubos positivos: 5



Calculos
Caldo Nutritivo
8g _____1000ml
x ______ 600ml
x= 4.8g
Lactosa
5g _____1000ml
x ______600 ml
x= 3g
Púrpura de bromocresol
0.01 g ____100ml
x ________600ml
x= 0.06

0.04 %P/U =
0.04 g ___ 100ml
0.01 ___x
x=25
25___100 ml
x___ 600ml
x=15ml
NMP de acuerdo a la tabla de Mc Crady:

Cifra : 555
NMP: 180.0

Moo/ml = NMP x d
Moo/ml = (180.0) (100,000)

18,000,000 Moo/ml

Observaciones

Obtuvimos un crecimiento positivo de microorganismos en los tubos
Pudimos observar que la dilución de cada tubo (Caldo nutritivo), lucía un poco turbia
Pudimos observar que en cada uno de los 25 tubos había un pequeño precipitado de color
amarillo claro.
Notamos después de las 24 horas de la incubación en la estufa de cultivo a 37ºC que el caldo
nutritivo tuvo un notable cambio de color del púrpura de bromocresol a amarillo


El crecimiento positivo de microorganismos en los tubos se aprecia por la presencia de una
turbidez, un precipitado, un velo, gas en un pequeño tubo (Campana de durham) volteado
dentro del caldo nutritivo y por el cambio de color del púrpura de bromocresol a amarillo,
debida a la fermentación de la lactosa que producen las bacterias coliformes (de la familia
escherichia coli) origen fecal. Se encuentran los tubos de cada dilución y se comparan en una
tabla de probabilidades o de Mc Crady para encontrar el número más probable (NMP) de
microorganismos, el cual se multiplica por la dilución menos la muestra concentrada en la que
hay tubos son positivos.
La muestra puede ser un liquido o un semisólido, como por ejemplo un alimento o el suelo
(tierra), que debe ser diluido (o mejor dicho, suspendido) antes de iniciar el método.


Conclusiones

Aprendimos a cuantificar los microorganismos viables de una muestra por el método del
número más probable (NMP), la cifra resultante que obtuvimos con los 25 tubos de diluciones
fue: 555 y el NMP encontrado fue: 180.0 de acuerdo con la tabla de Mc Crady. Obteniendo así
un resultado de 18, 000, 000 Moo/ml