Análisis de agua: submódulos físicos, químicos y biológicos

TCNICO EN
LABORATORISTA AMBIENTAL
MDULO II
MXICO 2006

1

CARRERA DE TCNICO LABORATORISTA AMBIENTAL
CLAVE: BTMMEB04

GUA DE APRENDIZAJ E

MDULO II
Anlisis de agua
CLAVE: BME317

Enero de 2006

2

Reforma Curricular del Bachillerato Tecnolgico
(Acuerdo 345)

Tcnico Laboratorista Ambiental
CLAVE: BTMMEB04
MDULO II
Paquete didctico

Profesores que elaboraron la estructura y los programas de estudio del segundo mdulo: Leticia
Ortuo Bravo, Mara Andrea Leal Prez y Alfonso Montalvo Arrieta.

Coordinadores de la DGECyTM:
M. en C. Gildardo Rojo Salazar
Ocean. Vctor Manuel Rojas Reynosa
Q. B. P. Francisco Escamilla Rodrguez
Bil. Rodrigo Nava Mora

Edicin:
M. en C. J essica Noemi Montao Vargas
M. en G. Itzia Calixto Albarrn

Primera edicin: 2006.
Subsecretara de Educacin Media Superior, SEP.
Direccin General de Educacin en Ciencia y Tecnologa del Mar.
Direccin Tcnica.

ISBN: (En trmite)

3

DIRECTORIO

Dr. Reyes S. Tamez Guerra
Secretario de Educacin Pblica

Yoloxchitl Bustamente Dez
Subsecretaria de Educacin Media Superior

Bil. Francisco Brizuela Venegas
Director General de Educacin en Ciencia y Tecnologa del Mar

Director Tcnico de la DGECyTM

Ing. Heriberto Nolasco Heredia
Director de Operacin de la DGECyTM

C. P. Mara Elena Colorado lvarez
Coordinadora Administrativa de la DGECyTM

Ocean. Vctor Manuel Rojas Reynosa
J efe del Departamento de Control Escolar de la DGECyTM

Q. B. P. Francisco Escamilla Rodrguez
J efe del Departamento de Planes y Programas de Estudio de la DGECyTM

4
NDICE

Pg.
Objetivo 6
Introduccin 6

Submdulo I. Anlisis fsicos del agua 15
1. Olor 15
2. Temperatura 26
3. Turbidez 30
4. Slidos en todas sus formas 34

Submdulo II. Anlisis qumicos del agua 44
2.1. Oxgeno disuelto 44
2.2. Demanda Bioqumica de Oxgeno 49
2.3. Alcalinidad y acidez 56
2.4. Cloruros 66
2.5. Dureza 71
2.6. Sulfatos 77
2.7. Grasas y aceites 80
2.8. Cloro total 84
2.9. Fsforo total 87
2.10. pH 93

Submdulo III. Anlisis biolgicos del agua 102
3. Anlisis bacteriolgico 102
3.1. Determinacin de coliformes fecales NMP 102
3.2. Determinacin de coliformes Escherichia coli filtracin de membranas 114
3.3. Anlisis del plancton 126
3.3.1. Fitoplancton 126
a) Anlisis cualitativo 126
b) Anlisis cuantitativo 126
3.3.2. Zooplancton 129
a) Anlisis cualitativo 129
b) Anlisis cuantitativo 129
3. Anlisis del necton 160
3.1. Grupos representativos 160
3.2. Peces 160
a) Morfologa bsica general 160
b) Caractersticas morfomtricas tiles en la identificacin 160
c) Uso de claves de identificacin 160

5
Pg.
3.4. Anlisis del Bentos 180
3.4.1. Grupos representados 180
a) Morfologa bsica general 181
3.5. Anlisis del Neuston 188
3.5.1. Anlisis cualitativo 188
a) Grupos biolgicos presentes en la muestra
3.5.2. Anlisis cuantitativo 188
a) Cmaras de sedimentacin (mtodo Utermhl),

b) Cmaras Sedgwick-Rafter, Palmer-Maloney, Haemacitmetro, Petrof-
Hausser, por gotas

3.6. Anlisis de Perifiton 188
3.6.1. Grupos representados 188
Anlisis cualitativo 189
Anlisis cuantitativo 189
a) Morfologa bsica general
b) Caractersticas morfomtricas tiles en la identificacin
c) Uso de claves de identificacin
d) Caractersticas generales

Bibliografa 197

6
OBJETIVO

El objetivo de esta gua es apoyar al estudiante en el aprendizaje del Mdulo II del componente
profesional de la carrera de Tcnico Laboratorista Ambiental. En este documento se encuentra
la informacin sobre los contenidos de los 3 submdulos que lo integran.

El componente profesional desarrolla competencias para el mundo del trabajo, por lo cual se
fundamenta en normas que rigen los procesos, productos y servicios. En este caso el Mdulo
de anlisis de aguas se soporta en la normatividad que existe para los anlisis de aguas en
nuestro pas.

Cabe sealar que sta es slo una herramienta ms para el aprendizaje, de muchas otras que
se pueden utilizar para lograr los objetivos de competencia, sin duda la ltima palabra, ser la
experiencia profesional y didctica del docente facilitador del Mdulo.

INTRODUCCIN

De todas las crisis, ya sean de orden social, econmica o relativas a los recursos naturales con
las que nos enfrentamos los seres humanos, la crisis del agua es la que se encuentra en el
corazn mismo de nuestra supervivencia y la de nuestro planeta.

WATER FOR PEOPLE, WATER FOR LIFE
UNESCO- WWAP 2003 PARIS, FRANCE.

Nuestro medio ambiente y nuestra vida, dependen de un recurso muy conocido, el AGUA.

Mucha gente, piensa que el agua es un recurso inagotable, barato y que por tanto podemos
disponer de l todo lo que nos plazca.

7
Es realmente as? Detengmonos a analizar cunta agua tenemos.

Como sabemos el agua es un compuesto cuya molcula est formada por dos tomos de
hidrogeno y uno de oxgeno.

Molcula del agua H
2
O

Son estos elementos difciles de encontrar en el universo?

La respuesta es no, de hecho los elementos ms abundantes en el universo son, por orden, el
hidrgeno, helio, oxgeno y nen pero como el helio y el nen son gases nobles y no pueden
formar compuestos, nicamente nos quedan el hidrgeno y el oxgeno, que como habamos
visto, juntos forman la famosa molcula de agua, por lo que podemos predecir, y sin duda es
as, que el agua es el compuesto ms abundante en el universo.

(Lagunas de Montebello Chiapas, Mxico)

8
Y ahora que sabemos que existe agua en gran cantidad, cabe preguntarse:

Dnde tenemos toda esa cantidad de agua?

La respuesta es fcil, fundamentalmente dispersa por el universo formando nubes y
concentraciones de agua, tambin contenida en cometas cuando estn a una distancia tan
lejana de las estrellas, que el poco calor que reciben impide que el agua en forma de hielo se
evapore escapando al espacio exterior, y finalmente, en cuerpos de mediano o gran tamao
cuya gravedad permite retenerla como son planetas de un tamao ya considerable como la
Tierra.

Nuestro planeta posee la temperatura ideal para que coexista el agua en sus tres fases slida,
lquida y gaseosa, sin que haya cambios muy bruscos de temperatura, gracias a todo esto
tenemos agua disponible.

Y vaya que si tenemos agua, la superficie de la Tierra est cubierta de unos 205 millones de
kilmetros cuadrados de agua englobados en los ocanos y que representa ms del 71% de la
superficie total del planeta, nicamente el 29% restante es la tierra.

Si tenemos en cuenta el volumen de esta agua considerando una profundidad media de 3,750
metros, estamos hablando de un volumen de agua de 524 millones de kilmetros cbicos, que
expresados en litros seran 524 X10
18
, o lo que es lo mismo: 524 seguido de 18 ceros!
Representa por tanto el agua de los ocanos un 97.2% del agua total del planeta y cada ao se
evaporan del mar unos 128,000 km
3
de agua que posteriormente se precipitan de nuevo en
forma de lluvia o nieve.

Gracias a eso podemos tener unos 320,000 Km
3
de agua bajo la superficie de los continentes y
unos 48,000 Km
3
sobre la misma, en forma de ros y lagos.

Desgraciadamente, no toda esta agua de la que disponemos es apta para el consumo humano,
ya que la que se encuentra en los mares tiene un contenido de sales elevado, principalmente
cloruro de sodio.

El agua es una sustancia qumica que tiene propiedades muy peculiares, una de ellas es su
gran poder de disolver, se le ha llamado "El solvente universal", es por ello que casi nunca
encontramos agua "pura".

Normalmente el agua se clasifica segn su origen y las sustancias que tiene en solucin:

Clasificacin del agua segn su origen:

Agua superficial.
Agua de ro.
Agua de pozo.
Agua de lagos y lagunas.
Agua de mar.
Agua de lluvia.
Agua destilada.
Agua purificada.

9
Cada una de ellas tiene en forma disuelta, suspendida o coloidal, diversas sales minerales y
gases en cantidades variables dependiendo de donde procedan.

El agua se clasifica tambin segn el uso que se le da:

Agua de uso domstico.
Agua para uso industrial.
Agua para anlisis qumicos.
Agua para aplicacines biolgicas (libre de patgenos).
Agua de uso recreativo y esttico.
Agua para uso acucola.
Agua para uso agrcola.

El agua tal como existe, pocas veces se puede usar en su forma natural. Se requiere conocer
sus caractersticas fsicas, qumicas y la naturaleza y cantidad de las sustancias disueltas o
suspendidas que contenga, para acondicionar un agua particular al uso deseado.

El agua es muy valiosa que se requiere cada vez en forma creciente, pero no se encuentra
disponible de forma ilimitada. Su demanda en servicios y en la industria, para agua potable y
agua de uso industrial demuestra una tendencia ascendente. En el campo de la proteccin
ambiental, el nmero de lugares en que la contaminacin del agua o agua residual debe
analizarse, crece tambin sin parar. Virtualmente todos los sectores que hacen uso del agua,
estn obligados a controlar la cantidad y naturaleza de las impurezas del agua dentro de lmites
bien definidos.

Los estudios fsico-qumicos del agua son un instrumento imprescindible para la determinacin
de la calidad del agua, ya que sirven para identificar y cuantificar muchas caractersticas y la
posible aparicin de contaminantes.

Las muestras de aguas que se analizan permiten tener un amplio y completo conocimiento de
los parmetros evaluados y as hacer una correcta interpretacin de los mismos. Los anlisis de
aguas tienen muchos campos de aplicacin como son: La evaluacin, anlisis y control de
aguas superficiales que se destinen a la produccin de agua potable, control de calidad de
abastecimiento de aguas potables de consumo pblico, evaluacin de calidad de aguas
continentales destinadas a vida pisccola, control de calidad de aguas de bebidas envasadas,
trmites de registro, control y evaluacin de aguas residuales y el control de calidad de aguas
de bao y recreo.

Entorno sobre la normalizacin en Mxico

Como se mencion en la introduccin de esta gua, los anlisis de aguas estn regidos por
normas tcnicas que establecen los lineamientos de procedimientos, reactivos, condiciones de
realizacin, etc., los cuales le dan validez y confiabilidad a los resultados tanto para nuestro
pas como en mbito internacional. Por ello incluimos el panorama general de la normalizacin
en Mxico.

10
La Normalizacin es el proceso mediante el cual se regulan las actividades desempeadas por
los sectores tanto privado como pblico, en materia de salud, medio ambiente en general,
seguridad al usuario, informacin comercial, prcticas de comercio, industrial y laboral.

A travs del cual se establecen la terminologa, la clasificacin, las directrices, las
especificaciones, los atributos las caractersticas, los mtodos de prueba o las prescripciones
aplicables a un producto, proceso o servicio.

Los principios bsicos en el proceso de normalizacin son:

Representatividad.
Consenso.
Consulta pblica.
Modificacin.
Actualizacin.

Este proceso se lleva a cabo mediante la elaboracin, expedicin y difusin a nivel nacional, de
las normas que pueden ser de tres tipos principalmente:

Normas Oficiales Mexicanas.
Normas Mexicanas.
Normas de Referencia.

Tipos de Normas:

Norma Oficial Mexicana (abreviada como: NOM, PROY-NOM NOM-EM)

Es la regulacin tcnica de observancia obligatoria expedida por las dependencias
normalizadoras competentes a travs de sus respectivos Comits Consultivos Nacionales de
Normalizacin, de conformidad con las finalidades establecidas en el artculo 40 de la Ley
Federal sobre Metrologa y Normalizacin, establece reglas, especificaciones, atributos,
directrices, caractersticas o prescripciones aplicables a un producto, proceso, instalacin,
sistema, actividad, servicio o mtodo de produccin u operacin, as como aquellas relativas a
terminologa, simbologa, embalaje, marcado o etiquetado y las que se le refieran a su
cumplimiento o aplicacin.

Norma Mexicana (abreviada como: NMX PROY-NMX)

Es la que elabora un organismo nacional de normalizacin, o la Secretara de Economa en
ausencia de ellos, de conformidad con lo dispuesto por el artculo 54 de la LFMN, en los
trminos de la LFMN, que prev para uso comn y repetido reglas, especificaciones, atributos
mtodos de prueba, directrices, caractersticas o prescripciones aplicables a un producto,
proceso, instalacin, sistema, actividad, servicio o mtodo de produccin u operacin, as como
aquellas relativas a terminologa, simbologa, embalaje, marcado o etiquetado. En principio es
de aplicacin voluntaria.

11
Normas de Referencia

Son las que elaboran las entidades de la administracin pblica de conformidad con lo
dispuesto por el artculo 67 de la LFMN, para aplicarlas a los bienes o servicios que adquieren,
arrienden o contratan cuando las normas mexicanas o internacionales no cubran los
requerimientos de las mismas o sus especificaciones resulten obsoletas o inaplicables. En
principio son normas provisionales.

Dentro del proceso de normalizacin, para la elaboracin de las normas nacionales se
consultan las normas o lineamientos internacionales y normas extranjeras, las cuales se definen
a continuacin:

Norma o Lineamiento Internacional

La norma, lineamiento o documento normativo que emite un organismo internacional de
normalizacin u otro organismo internacional relacionado con la materia, reconocido por el
gobierno mexicano en los trminos del derecho internacional.

Norma Extranjera

La norma que emite un organismo o dependencia de normalizacin pblico o privado
reconocido oficialmente por un pas.

Leyes que sustentan la Normalizacin en Mxico

Constitucin Poltica de los Estados Unidos Mexicanos DOF 05 de febrero de 1917
Ley Orgnica de la Administracin Pblica Federal DOF 29 de diciembre de 1976
Ley Federal de Procedimiento Administrativo DOF 04 de agosto de 1994
Ley Aduanera DOF 15 de diciembre de 1995
Ley de Comercio Exterior DOF 27 de julio de 1993
Ley Federal de Competencia Econmica DOF 24 de diciembre de 1992
Ley Federal de Proteccin al Consumidor DOF 24 de diciembre de 1992
General de Salud DOF 07 de febrero de 1984

Marco Legal: Aplicacin soporte y complementariedad

Ley Federal sobre Metrologa y Normalizacin DOF 01 de julio de 1992

Principales tpicos de la Ley Federal sobre Metrologa y Normalizacin

12
Metrologa

Sistema General de Unidades de Medida; Sistema Nacional de Calibracin; Centro Nacional de
Metrologa; Conceptos fundamentales sobre metrologa; Establecer los requisitos para la
fabricacin, importacin, reparacin, venta, verificacin y uso de los instrumentos para medir y
los patrones de medida; establecer la obligatoriedad de la medicin en transacciones
comerciales y de indicar el contenido neto en los productos envasados, etc.

Normalizacin, certificacin, acreditamiento y verificacin

Comisin Nacional de Normalizacin; Sistema Nacional de Acreditamiento de Organismos de
Normalizacin y de Certificacin, Unidades de Verificacin y de Laboratorios de Prueba y de
Calibracin.

Fomentar la transparencia y eficiencia en la elaboracin y observancia de normas
oficiales mexicanas y normas mexicanas.

Establecer un procedimiento uniforme para la elaboracin de normas oficiales
mexicanas por las dependencias de la administracin pblica federal

Promover la concurrencia de los sectores pblico, privado, cientfico y de consumidores
en la elaboracin y observancia de normas oficiales mexicanas y normas mexicanas

Coordinar las actividades de normalizacin, certificacin.

La Secretaria de Economa (SECON) lleva el rol principal a nivel federal en las actividades de
normalizacin; SECON coordinara a las dems secretaras y dependencias segn su mbito de
competencia para la integracin del:

Programa nacional de normalizacin

mbito pblico y mixto:

Comisin Nacional de Normalizacin

Aprueba el Programa Nacional de Normalizacin y coadyuva a las actividades de normalizacin
de las secretaras a travs de los Comits Consultivos Nacionales de Normalizacin

Sistema nacional de acreditamiento (Procedimientos para acreditar a los Organismos
Nacionales de Normalizacin, Organismos de Certificacin, Laboratorios de Prueba,
Laboratorios de Certificacin y UVAs)

Direccin General de Normas de la Secretara de Economa

13
mbito privado

ORGANISMOS NACIONALES DE NORMALIZACIN: Tienen la competencia para elaborar las
normas.

ENTIDADES DE ACREDITACIN: Reconocen la competencia tcnica y confiabilidad de los
Organismos de Certificacin, Laboratorios de prueba, Laboratorios de Certificacin y UVAs.

La Direccin General de Normas y sus atribuciones

La Direccin General de Normas tiene entre sus funciones otorgar la aprobacin de los
organismos de certificacin, unidades de verificacin, laboratorios de calibracin y laboratorios
de pruebas, que coadyuvan en la evaluacin de la conformidad, cuyo objeto es comprobar que
un producto, servicio o proceso cumple con las especificaciones sealadas en las normas
oficiales mexicanas y en su caso las normas mexicanas, expedidas por la Secretara de
Economa.

Personas acreditadas

Organismos de certificacin

Los organismos de certificacin, son instituciones de tercera parte integrados por los sectores:
Productivo, distribuidor, comercializador, prestador de servicios, consumidor, instituciones
educativas y cientficas, que tienen como objeto social realizar actividades de certificacin.
Adems, garantizan dentro de su estructura administrativa y funcional que operan con
imparcialidad, capacidad tcnica, material y humana adecuada a sus funciones. Para sistemas
de calidad y control ambiental y para certificacin de productos.

Personas fsicas o morales

Unidades de verificacin

Las unidades de verificacin, son personas fsicas o morales, de tercera parte que tienen la
organizacin, el personal, la capacidad e integridad para coadyuvar en la evaluacin de la
conformidad, a travs de la constatacin ocular o comprobacin, mediante muestreo, medicin,
pruebas de laboratorio o examen de documentos en un momento o tiempo determinado, con la
confianza de que los servicios que presta son conducidos con competencia tcnica,
imparcialidad y confidencialidad.

Laboratorios de pruebas

Los laboratorios de pruebas, son instituciones de primera, segunda y tercera parte,
pertenecientes a los sectores: Produvtivo, distribuidor, comercializador, prestador de servicios,
consumidor, instituciones educativas y cientficas, que coadyuvan en la evaluacin de la
conformidad a travs de la aplicacin de mtodos de prueba. Los laboratorios de pruebas
garantizan dentro de su estructura administrativa y funcional que operan con imparcialidad,
independencia, integridad, confidencialidad y con capacidad tcnica, material y humana.

14
Servicios tcnicos de medicin

Laboratorios de calibracin

Los laboratorios de calibracin, proporcionan servicios tcnicos de medicin y calibracin por
actividad especfica con trazabilidad a los patrones nacionales o internacionales aprobados por
la Secretara de Economa, o en su defecto a patrones extranjeros o internacionales confiables
a juicio de sta. Los laboratorios de calibracin garantizan dentro de su estructura administrativa
y funcional que operan con integridad, imparcialidad, confidencialidad y competencia tcnica,
material y humana

15
Submdulo I: anlisis fsicos del agua

1. Olor

ANLISIS DE AGUA. DETERMINACIN DE OLOR NMX-AA-083-1982

1.1. Importancia ambiental del anlisis del olor en el agua

La descomposicin de los materiales en el agua genera gases causantes del mal olor: H
2
S,
NH
3
, CH
4
, entre otros.

Compuestos con olores tpicos son las aminas, que producen el olor a pescado, las diaminas,
que huelen a carne putrefacta, el H
2
S con un a huevos podridos, los compuestos rgano
sulfurados, cuyo olor es parecido a las coles podridas, etc.

La deteccin del olor como parmetro analtico, es til para conocer las sustancias que se
emiten al ambiente en los procesos industriales, tratamiento de aguas, para el control y manejo
de residuos slidos en vertederos controlados, en estudios de impacto ambiental, por
mencionar algunos, ya que permite saber si se cumple con las normas oficiales, en las
descargas a cuerpos receptores, o en las emisiones a la atmsfera.

Sin embargo, en la mayora de los pases la deteccin de contaminantes con olor est limitada
a terminantes regulaciones, pues puede ser un peligro para la salud de los analistas cuando
algunos contaminantes peligrosos estn presentes en una muestra.

1.2. Objetivo

1.2.1. La presente Norma NMX-AA-083-1982, establece el mtodo para la determinacin de
olor (que es una propiedad que afecta al sentido del olfato) en agua y un sistema para la
clasificacin de olores.

1.2.2. Los efluentes de aguas contaminadas pueden llevar una gran cantidad de compuestos,
difciles de medir individualmente, lo cual contribuye a crear problemas de olor. Las
combinaciones de los compuestos pueden causar intensidades de olor o desarrollar
caractersticas que no pueden ser previstas por los olores de las sustancias individuales.
1.2.3. Debido a la variacin de las sensibilidades humanas, no es posible lograr una gran
precisin en la determinacin de las intensidades de olor. No siempre habr concordancia en
las caractersticas del olor por diferentes mtodos. El anlisis de olor proporciona una
herramienta para medir la variacin en intensidad de olor en un punto dado del muestreo. El
grado de variacin puede indicar la magnitud o importancia de un problema de olor.

1.3. Campo de aplicacin

1.3.1. El mtodo es aplicable a aguas naturales y residuales para la determinacin de
intensidades de olor en trminos de ndice de intensidad de olor o nmero umbral de olor.

16
1.3.2. Precaucion: Para la aplicacin de esta Norma (NMX-AA-083-1982), es muy importante
especificar a los analistas el tipo de descarga y sus constituyentes para evitar la posible
inhalacin de sustancias txicas.

1.3.3. El olor del agua es una propiedad subjetiva con un efecto significativo en su cualidad.
Este mtodo intenta proporcionar un procedimiento reproducible para determinar intensidades
de olor en aguas para propsitos comparativos o de control.

1.3.4. El mtodo puede usarse en el control de la calidad de aguas naturales o tratadas,
estableciendo la efectividad de los procedimientos de tratamiento, y para determinar fuentes de
contaminacin o fugas en procesos industriales.

1.3.5. Los resultados del mtodo dependen de los analistas, ya que la sensibilidad individual al
olor es muy variable y cambia de un da a otro, por lo que es muy importante la estandarizacin
de las condiciones.

1.4. Resumen del mtodo

Una muestra de agua se diluye con agua libre de olor hasta obtener una dilucin que tenga lo
que se define como un olor mnimo perceptible. El mtodo se hace por dos o ms analistas.
Uno hace diluciones y el otro determina las intensidades de olor. Las muestras son analizadas
generalmente en orden creciente de concentracin del odorante, aunque no en una secuencia
consecutiva de diluciones, hasta que el olor es percibido. El analista hace la prueba
seleccionando la muestra olorosa entre tres matraces, dos de los cuales contienen agua libre de
olor. El olor se mide sin tener en cuenta materia suspendida o materiales inmiscibles en la
muestra. Se toma como un hecho el que no existe un valor absoluto de olor y que la prueba se
usa como comparacin nicamente. La prueba se efecta a 313 K (40 C).

1.5. Recomendaciones

1.5.1. El rea destinada a la determinacin debe estar libre de olores interferentes. Un
laboratorio ideal, debe tener un cuarto separado, equipado con filtros de carbn activado para
controlar el aire y condiciones ambientales de humedad y temperatura constantes. Una
humedad relativa del 50% es lo ideal. Una limpieza inodora es absolutamente necesaria. Todo
el equipo usado en esta prueba debe estar perfectamente limpio y libre de olores y ser
destinado para uso de la determinacin de olor nicamente. Toda persona participante en esta
determinacin debe asearse cara y manos con jabones libres de olor y estar libre de olores de
tabaco, cosmticos o cualquier otro olor interferente. No se debe fumar, mascar tabaco o chicle
o ingerir alimentos de fuerte olor o sabor 30 minutos antes de la determinacin.

1.5.2. La condicin fsica de los participantes es importante, el analista que efecta la
determinacin debe estar libre de cualquier situacin que afecte el sentido del olfato. Un uso
prolongado del sentido del olfato, causa fatiga olfatoria. Repetidas inhalaciones del mismo olor
tienen el mismo efecto, por lo que son necesarias para su recuperacin, frecuentes perodos de
descanso, de preferencia al aire fresco y libre de olores. Bajo circunstancias ordinarias, un
analista no debe trabajar ms de 15 minutos sin un descanso para evitar la fatiga olfatoria. Este
es un tiempo promedio. Los olores muy fuertes pueden afectar la respuesta del olfato en pocos

17
minutos mientras que aguas de buena calidad pueden ser analizadas por perodos ms largos.
Si el personal es limitado, los analistas pueden comprobar sus observaciones despus de dejar
pasar el suficiente tiempo para relajar el sentido del olfato.

1.5.3. No todas las personas son capaces de llevar a cabo este anlisis. Los analistas deben
ser rigurosamente seleccionados para obtener la mejor precisin posible, especialmente cuando
son con fines de investigacin. Si se ejerce el debido cuidado, la mayora de las personas
pueden ser aptas para trabajos de rutina. Es necesario un mnimo de dos personas; una para
hacer la seleccin preliminar y preparar las diluciones y la otra u otras para hacer la
determinacin del olor. Las personas que hacen la determinacin de olor no debern conocer
las diluciones y, en ningn caso, har la determinacin la persona que hizo las diluciones. Las
diluciones se analizarn de un mbito de baja a alta concentracin, pero no debern ser
presentadas en secuencia. Se recomienda introducir blancos o diluciones de baja
concentracin, dentro de los grupos de diluciones.

1.5.4. El color es comnmente impartido por varios tipos de contaminantes en las aguas
residuales. Este color es evidente bajo perceptibles niveles de olor. Un sistema de luz coloreada
se puede usar para eliminar el color y seleccionar las diluciones para el anlisis. Para sto, se
emplea luz fotogrfica con filtros intercambiables.

1.5.5. La turbidez en algunos desechos es perceptible a niveles bajos de olor. El sistema de luz
coloreada descrito en el inciso 6.4 puede no eliminarla. En tal caso, se recomienda pintar los
matraces de tal modo que enmascare la turbidez de la muestra.

1.5.6. Para un mximo control del olor en el laboratorio, ste debe dividirse en dos reas,
separando el rea de preparacin de muestras del rea de deteccin de olores. Esto permite el
aislamiento del analista que hace las diluciones y un mejor control de los olores en el rea de
medicin.

1.6. Aparatos

Bao de temperatura constante, capaz de mantener una temperatura de 313 1
0
K (40 1
0
C).
Recipientes de vidrio con tapn esmerilado para las muestras. Las botellas de la demanda
bioqumica de oxgeno son adecuadas para este propsito.
Matraces Erlenmeyer de 500 cm de entrada ancha con tapn esmerilado o cubierto con
vidrios de reloj.

1.7. Reactivos y materiales

Carbn activado, granular. El carbn debe ser renovado despus del tratamiento, por lo
general 20 litros de agua o ms son necesarios.
Agua libre de olor
Preparar agua libre de olor, pasando agua reactivo a un flujo de menos de 1un litroitros/hora
a travs de una columna de vidrio de 0.9 m de longitud y 51 mm de dimetro, empacada
con carbn activado granular. El agua usada para preparar el agua de dilucin libre de olor,
debe tener un contenido de slidos totales disueltos que no exceda del contenido de slidos
disueltos de la muestra por analizar. Todo el sistema, tubera y conexiones debe ser de

18
vidrio. Las columnas deben ser empacadas primero con lana de vidrio que sirve de soporte
al carbn activado. Hacer la prueba con el efluente de la columna de 313 K (40 C). sto es
necesario, ya que la cantidad y naturaleza de las impurezas en el agua puede afectar la vida
til del carbn. Tambin se ha visto que en columnas usadas con poca frecuencia se
desarrolla un crecimiento biolgico, el cual imparte olor. Para comprobar las condiciones de
la columna despus de un perodo de descanso, como un fin de semana, se recomienda
hacer una prueba. Llenar un tubo de vidrio pequeo con carbn activado fresco y filtrar a
travs de l. El agua as preparada, debe reunir las mismas caractersticas de calidad de
olor que las de la columna. El agua libre de olor no debe guardarse, sta debe ser
preparada el da en que se hace el anlisis. En general, para ahorrar tiempo durante el
anlisis mantener el abastecimiento de agua libre de olor a 313 1 K (40 1 C)

1.8. Muestreo

Colectar la muestra de acuerdo con lo indicado en la NMX-AA-014 "Cuerpos receptores.
Muestreo".
Determinar el olor en muestras por separado y recientemente colectadas. El muestreo es
muy importante. Las botellas de tapn esmerilado para el muestreo debern llenarse por
completo. Si la muestra se encuentra a una temperatura mayor de 313 K (40 C) enfriarla
antes de hacer el anlisis.
El almacenamiento del agua da lugar a errores por la modificacin de las caractersticas y la
intensidad del olor. Las reacciones qumicas, fsicas y biolgicas son factores en esta
degradacin. Si el anlisis no se puede realizar enseguida, refrigerar la muestra a 277 K (4
C) durante su almacenamiento. sto no garantiza que no ocurran cambios en el olor, pero
el efecto se minimiza en la mayora de los casos. Guardar las muestras en frascos con
tapn esmerilado para evitar la contaminacin con los olores del refrigerador. Pre-enfriar la
muestra en un bao de hielo y en una atmsfera libre de olores antes de su refrigeracin.
Anotar la temperatura de las muestras en el momento de su recoleccin. Este dato es til
cuando se relacionan los datos obtenidos en el laboratorio con las condiciones de campo.

1.9. Procedimiento

a) La seleccin de las diluciones para la determinacin de olor depende del orden de magnitud
de intensidad de olor determinado. La persona que determina la intensidad de olor en la prueba
preliminar, deber hacer las diluciones para el otro analista o analistas que harn la
determinacin, pero en ningn caso la har la misma persona. La dilucin primara deber
contener un mnimo de 12.5 cm de muestra. Si son necesarias diluciones mayores agregar
agua libre de olor a la dilucin primaria. Usar stas subsecuentes diluciones en la evaluacin.

b) Las diluciones debern hacerse en tres matraces limpios, libres de olor agregando
aproximadamente la mitad de la cantidad estimada de muestra (prueba preliminar) a uno de los
matraces. Diluir el contenido de cada matraz a un volumen total de 200 cm con agua libre de
olor. Lavar cada matraz y ajustar la temperatura a 313 K (40 C) en el bao de agua. Agitar
vigorosamente los matraces tapados y presentarlos para el anlisis de olor. En la presentacin
de los matraces para la prueba, el matraz que contiene la muestra deber colocarse al azar.
Agitar vigorosamente pero teniendo cuidado de no derramar el contenido. El fondo plano del
matraz ayudar, tapando el matraz o colocando un dedo en la cubierta que se est empleado.

19
Esto imparte un olor cerca de la boca del matraz antes de la prueba. La agitacin disminuye la
sustancia olorosa en el vapor del espacio uniformemente. El analista debe quitar la tapa y
colocar la nariz en la punta del matraz percibiendo el olor con una inhalacin normal. Si no se
percibe ningn olor, se deber disminuir la dilucin (incrementando la concentracin) hasta que
se encuentre una concentracin a la cual el olor sea perceptible, usando el mismo
procedimiento. Anotar la dilucin a que se obtuvieron los resultados. Se dan las muestras para
el anlisis, generalmente incrementando las concentraciones pero no en una secuencia de altas
concentraciones. Introducir blancos, todos conteniendo agua libre de olor o algunas diluciones
de concentraciones muy bajas durante el anlisis para eliminar conjeturas o anticipaciones del
nivel umbral de olor.

Medir el volumen de muestra
Colocar la muestra en un matraz Erlenmeyer
o un frasco Winkler

Ajustar la temperatura a 313 K (40 C)
Agitar vigorosamente el matraz cuando se ha
alcanzado la Temperatura adecuada.

20

Quitar la tapa del matraz

Colocar la boca del matraz en la punta de la nariz percibiendo el olor con una inhalacin normal.

c) Si se tiene alguna percepcin de olor, vaciar los matraces con las diluciones y preparar dos
blancos con agua libre de olor y una dilucin a 200 cm conteniendo la mitad de muestra de la
dilucin donde se percibi el olor y repetir el procedimiento a partir del inciso 1.1.2, hasta que el
analista detecte nuevamente el olor. En este punto las diluciones debern hacerse a
concentraciones mayores hasta encontrar una dilucin con un olor perceptible mnimo. El
analista deber confirmar entonces su primer resultado.

1.10. Clculos

a) Calcular la intensidad de olor como ndice de intensidad de olor con la frmula siguiente:

(200)
Indice de intensidad de olor = 3.3 log
A
+3 D

Donde:

A =Mililitros de muestra o mililitros de alcuota de la dilucin primaria empleadas.
D =Nmero de 25 175 de la dilucin primaria requeridos para alcanzar a determinar la
magnitud de intensidad de olor.

b) La intensidad de olor puede ser calculada como nmero umbral de olor si se desea por el
procedimiento descrito en el anexo 2.

A.1. Sugerencias para la clasificacin de olores

A.1.1. Los tipos de olores presentes en los residuos, varan ampliamente.

21
La tabla 1 auxiliar como una gua en la clasificacin de los tipos de olor. Generalmente, el olor
de la muestra inicial diferir de los olores determinados a varias diluciones. Si se presenta esta
fraccionacin de olores, informar el primer olor caracterstico, as como el intermedio y el final.
Anotar las correspondientes diluciones, as como los grados de dulce, picante, fumoso y podrido
del olor en la dilucin escogida. Si la caracterstica ha sido clasificada como de alta intensidad,
sta deber ser "100", se media intensidad su calificacin ser "50" y siendo de baja intensidad
se calificar como "0". Pueden emplearse mbitos intermedios, pero esto no es muy
recomendable.

A.1.2. El tipo de olor puede ser establecido por comparacin con los niveles de percepcin de
los olores caractersticos mostrados en la Tabla A.2, tal que si un olor es calificado como 100 en
dulce, 50 en picante, 0 en fumoso y 50 en podrido, el olor deber ser descrito como un ster o
un alcohol. Refirindose a los tipos qumicos que producen estos olores podemos guiarnos para
determinar si el olor deber ser reportado como ster o un alcohol.

A.2. Nmero umbral de olor

A.2.1. La intensidad de olor frecuentemente se informa como nmero umbral de olor el cual se
calcula como sigue:

(200)
Nmero umbral de olor =
A
X
8
D

A.2.2. Las relaciones entre las diluciones se presentan en la tabla 1. Cuando se presenten
valores de umbral de olor, dar los valores obtenidos por dos o ms analistas. Los nmeros de
umbral de olor no deben promediarse.

A.2.3. Muchas personas encuentran difcil obtener un valor representativo para olores fuertes.
Por lo que se recomienda emplear el ndice de intensidad de olor, en lugar del umbral de olor.

A.3. Formas sugeridas para informar la intensidad de olor

A.3.1. La tabla A.3, ilustra la secuencia de las diluciones de una muestra y el mtodo para
anotar los resultados para la determinacin de umbral de olor por tres analistas. Al primer
analista se le dieron diluciones de la muestra correspondiente a valores de ndice de intensidad
de olor de 10. 9, 8, y 7 en ese orden. El analista no identific las primeras tres diluciones, pero
s la ltima. Los resultados fueron anotados verticalmente hacia arriba en la primera columna
como -, -, - y +. Entonces se presentarn la dilucin 9, un grupo de blancos y diluciones 8 y 7 en
ese orden. Unicamente la dilucin 7 fue identificada. Los resultados fueron anotados como -, B,
-, y +en la segunda columna vertical en orden ascendente. Se continuaron las pruebas hasta
que se hicieron 4 identificaciones positivas a la dilucin 7. El resultado final de (7), (8) y (7)
respectivamente se anot en la columna para cada uno de los tres analistas. Este modelo de
informe se presenta nicamente como una gua y puede ser modificado.

22
A.4. Niveles de umbral de olor

A.4.un litroos niveles de umbral de olor para 32 compuestos qumicos orgnicos, son
presentados en la tabla A.2. Para algunos de estos compuestos los resultados fueron
calculados de los datos de solubilidad. Donde los datos de solubilidad no estuvieron
disponibles, los resultados se basaron en una solucin acuosa saturada como muestra inicial.
Para todos los otros compuestos el valor del umbral se bas en la sustancia pura.

A.4.2 Los datos de umbral de olor obtenidos con sustancias puras son siempre datos tiles.
Estas sustancias en mezclas pueden producir olores mayores o menores que los esperados del
elemento principal y el efecto notado en mezclas, ya sea sinrgicas o antagnicas, puede ser
muy marcado dependiendo de los compuestos incluidos en ellas.

Tabla 1. Dilucin de muestra e informe de resultados.

Volumen transferido
al matraz prueba
(olor)
Nmero umbral
de olor (factor de
dilucin)
ndice de
intensidad de olor
Muestra original 200 1 0
100 2 1
50 4 2
25 8 3
12.5 16 4
Dilucin A (25 ml de muestra
original diluida a 200 ml)
50 32 5
25 64 6
12.5 128 7
Dilucin B (25 ml de muestra A
diluida a 200 ml)
50 256 8
25 512 9
12.5 1024 10
Dilucin C (25 ml de muestra B
diluida a 200 ml)
50 2050 11
25 4100 12
12.5 8200 13
Dilucin D (25 ml de muestra C
diluida a 200 ml)
50 16400 14
25 32800 15
12.5 65500 16
Dilucin E (25 ml de muestra D
diluida a 200 ml)
50 131000 17
25 262000 18
12.5 524000 19
6.25 1050000 20
* Volumen en el matraz de prueba (olor) contenido 200 cm de agua libre de olor.

23
Tabla A.1.Clasificacin de olores para compuestos qumicos.

CARACTERSTICAS DE OLOR
DULCE PICANTE FUMOSO PODRIDO
CLASE
DE OLOR
COMPUESTOS
QUMICOS
EJ EMPLOS
100 50 0 a 50 50 Ester
Esteres, eteres,
bajas cetonas
Laca, disolventes, la mayor
parte de las frutas y muchas
flores.
100 50-100 0 a 100 50 Alcohol
Fenoles y cresoles,
alcoholes e
hidrocarburos.
Alquitrn, humos, alcohol,
licor, rosas, flores aromticas,
hierbas y especias.
50 50 0 a 50 50 Carbonilo
Aldehdos, altas
cetonas.
Grasa rancia, mantequilla,
huesos de frutas y nueces,
violetas, csped, pastos y
vegetales.
50 100 0 a 50 50 cido
Anhdridos cidos,
cidos orgnicos,
bixido de azufre.
Vinagre, sudor, aceites
rancios, resinas, desperdicios.
50 50 100 100 Azufre
Compuesto de
selenio,
arsenicales,
mercapranos,
sulfuros.
Zorrillos, osos, zorros,
pescado y carne, col, cebolla,
alcantarillado.
100 50-100 50 a 100 0 100 Haluros
Quinonas, xidos y
ozono, haluros,
compuestos de
nitrgeno.
Insecticidas, maleza, olor a
moho y humus, cscars,
olores medicinales, tierra,
pantano.
100 50 50 100 Insaturado
Derivador de
acetileno,
butadieno,
isopreno.
Pinturas, thinner, keroseno,
aceites esenciales, pepino.
100 50 0 a 50 100 Base
Monmeros de
vinilo, aminas,
alcaloides,
amonaco.
Olores fecales, estircol,
pescados y mariscos, ciertas
flores como las lilas, lirio,
jazmn y madreselva.
* El grado caracterstico de olor percibido se designa como sigue:

100 Indica niveles altos de percepcin.
50 Indica nivel medio de percepcin, y 0 Indica un nivel bajo de percepcin.

24
Tabla A.2. Concentraciones de umbral de olor para varios compuestos qumicos
1
.

NIVEL UMBRAL DE OLOR
2
, EN PPM COMPUESTOS
QUMICOS
NMERO DE
ANALISTAS
NMERO DE
OBSERVACIONES
PROMEDIO MBITO
cido actico 9 9 24.3 5.07 a 81.2
Acetona 12 17 40.9 1.29 a 330
Acetofenona 17 154 0.17 0.0039 a 200
Acrilonitrilo 16 104 18.6 0.0031 a 50.4
Cloruro de alilo
3
10 10 14700 36.60 a 29300
n- Acetato de amilo 18 139 0.08 0.0017 a 0.16
Anilina
3
8 8 70.1 2.0 a 128
Benceno
4
13 18 31.3 0.84 a 53.6
n- Butanol 32 167 2.5 0.012 a 25.3
p- Clorofenol 16 24 1.24 0.02 a 20.4
o- Cresol 13 21 0.065 0.016 a 4.1
m Cresol 29 147 0.68 0.016 a 4.0
Eter
dicloroisoproplico
8 8 0.32 0.0178 a 1.1
2-4 Diclorofenol 10 94 0.21 0.02 a 1.35
Dimetilamina 12 29 23.2 0.01 a 42.5
Etilacrilato 9 9 0.0067 0.0018 a 0.014
Formaldehdo 10 11 49.9 0.8 a 102
2 Mercaptoetanol 9 9 0.064 0.07 a 1.1
Meskileno 13 19 0.027 0.00024 a 0.06
Metilamina 10 10 3.33 0.65 a 523
Metil etil piridina 16 20 0.05 0.017 a 0.225
Metil vinil piridina 8 8 0.04 0.015 a 0.12
B- naftol
4
14 20 1.29 0.01 a 11.4
Alcohol 10 10 0.13 0.0087 a 0.56
Fenol 12 20 5.9 0.016 a 16.7
Piridina 13 130 0.82 0.007 a 7.7
Quinolena 11 17 0.71 0.016 a 4.3
Estireno
4
16 23 0.73 0.02 a 2.6
Tiofenol
3
10 10 13.5 2.05 a 32.8
Trimetilamina 10 10 1.7 0.04 a 5.17
Xileno
4
16 21 2.21 0.26 a 4.13
n- Butil mercaptano 8 94 0.006 0.001 a 0.06
1
impreso con autorizacin de la revista AWWA, Volumen 55, J ulio de 1963, pgina 916.
2
Valores de umbral de olor en base a sustancias puras
3
Unbral de soluciones acuosas saturadas. No es necesario el dato de solubilidad.
4
Partiendo de diluciones consolaciones acuosas saturadas a temperatura ambiente; dato de solubilidad obtenido de
la literatura y correcciones para sustancias puras.

25
Tabla A.3. Modelo de informe para la intensidad de olor

Muestra No. 17462
Fuente muestreada: Efluente de la plana ABC.
Fecha: 7 de julio
Hora: 10:00 am
Condiciones de la prueba: Temperatura 294 K (21 C), humedad relativa 55%
Analistas
Diluciones Volumen 011
RAB FLJ MML
Muestra original 200 0
100 1
50 2
25 3
12.5 4

Dilucin A
25 ml de muestra
original/ ml
50 5
25 6
12.5 7 ++++(7) ++++(7)
B* BB

Dilucin B
25 ml de muestra
A / ml
50 8 ------ ++++(8) +-----
B B
25 9 ------ ------ ------
12.5 10 - ------ --

Dilucin C
25 ml de muestra
B / ml
50 11
25 12
12.5 13

*J uego de Blancos libres de olor.

26
2. Temperatura

NMX-AA-007-SCFI-2000. ANLISIS DE AGUA - DETERMINACIN DE LA TEMPERATURA
EN AGUAS NATURALES, RESIDUALES Y RESIDUALES TRATADAS - MTODO DE
PRUEBA (CANCELA A LA NMX-AA-007-1980)

2.0. Importancia ambiental del anlisis de la temperatura en el agua

La temperatura del agua es un parmetro muy importante debido a sus efectos directos sobre
las reacciones qumicas y biolgicas de la vida acutica as como sobre otras propiedades
fsicas de los cuerpos de agua. La temperatura del agua influye en la cantidad de oxgeno que
se puede disolver en la misma. Del mismo modo, puede actuar directamente sobre el
metabolismo de los animales acuticos, ya que el aumento de temperatura incrementa las
velocidades de reaccin biolgicas y la solubilidad de algunos compuestos. En general la
velocidad de las reacciones qumicas aumenta con la temperatura; Van Hoff estableci que el
aumento de 10 C en la temperatura del agua, duplica las velocidades de las reacciones que
ocurren.

El valor de temperatura es un criterio de calidad del agua para la proteccin de la vida acutica
y para las fuentes de abastecimiento de agua potable, es tambin un parmetro establecido
como lmite mximo permitido en las descargas de aguas residuales, imprescindible para la
operacin de plantas de tratamiento biolgico y una especificacin de importancia en los
clculos de balance de energa y de calor de los procesos industriales. Adems como ya se
mencion la temperatura tiene efecto directo en la solubilidad de los gases en el agua como el
oxgeno.

La temperatura termodinmica, tambin denominada temperatura absoluta, es una de las
magnitudes fundamentales que definen el Sistema Internacional de Unidades (SI) y cuya unidad
es el grado kelvin simbolizado como K. Esta unidad se utiliza tanto para expresar valores de
temperatura termodinmica como intervalos de temperatura.

Por acuerdo del Comit Internacional de Pesas y Medidas en 1989, la Escala Internacional de
Temperatura (ITS-90) se define operacionalmente en trminos de tcnicas de medicin por
termometra de presin de vapor, termometra de gas, termometra con resistencia de platino y
pirometra ptica. Es usual expresar la temperatura con base en la escala Celsius (C), definida
con relacin a la temperatura termodinmica por:

T (Celsius) =T (Kelvin) 273.15 K

El grado Celsius es una unidad de temperatura de magnitud idntica al grado Kelvin. Sobre la
escala Celsius, la temperatura de fusin del agua pura a la presin de 101,325 kPa, es igual a
cero grados centgrados y la ebullicin del agua a la misma presin, es igual a 100 C.

El mtodo de prueba normado establece el procedimiento para realizar la medicin en el sitio
donde se encuentra el agua, y el resultado se expresa en grados centgrados (C).

27
Las temperaturas elevadas en el agua son indicadores de actividad biolgica, qumica y fsica.
Lo anterior tiene influencia en los tratamientos y abastecimientos para el agua, as como en la
evaluacin limnolgica de un cuerpo de agua, por lo que es necesario medir la temperatura
como un indicador de la presencia de compuestos y contaminantes en el agua, a travs del
mtodo de prueba que se establece en la presente Norma Mexicana.

2.1. Objetivo y campo de aplicacin

Esta norma mexicana establece el mtodo de prueba para la determinacin de la temperatura,
cuando se usan instrumentos de medicin directa o instrumentos que indican expansiones o
fuerzas proporcionales en los cambios de temperatura, en aguas naturales superficiales o de
poca profundidad, en aguas residuales y residuales tratadas, con incertidumbre estimada en
0.2 C en el intervalo comprendido entre cero y 80 C; tambin es aplicable a la determinacin
de la temperatura de soluciones en las operaciones generales del laboratorio de anlisis de
aguas en el intervalo de cero a 100 C y para efectuar el control de calibracin del material
volumtrico. El mtodo no es aplicable a la determinacin de la temperatura en aguas
profundas ni tampoco a aguas industriales sobrecalentadas o sometidas a altas presiones.

2.2. Principio

El principio se basa en las propiedades de la materia de dilatarse o contraerse con los cambios
de temperatura a propiedades elctricas y fsicas de los materiales con los que se realizar la
medicin; estas propiedades son siempre las mismas para una temperatura dada lo que permite
graduar los instrumentos de medicin. La temperatura se mide con un instrumento debidamente
calibrado y debe efectuarse en el lugar de muestreo.

2.3. Reactivos y patrones

Agua: Debe entenderse agua que cumpla con las siguientes caractersticas: a)
Resistividad, megohm-cm a 25 C: 0.2 mnimo; b) Conductividad, S/cm a 25 C: 5.0
mximo y c) pH: 5.0 a 8.0.
Hielo picado preparado a partir de agua destilada, mantenido a una temperatura poco
menor que cero grados centgrados.

2.4. Materiales y equipo

Termmetro o juego de termmetros de mercurio en vidrio, con graduaciones de 0.1 C,
en un intervalo de temperatura que abarque por lo menos desde 1hasta 101 C,
Termmetro o juego de termmetros de uso general, de mercurio en vidrio, de
preferencia de inmersin parcial, con graduaciones mnimas en 0.1 C, en un intervalo
de temperatura que incluya la de los diferentes tipos de aguas por examinar
Estuches metlicos de proteccin para los termmetros de uso en campo.
Envases de polietileno o de vidrio limpios, de 500 ml de capacidad.
Vasos trmicos de doble pared tipo Dewar, uno de capacidad aproximada de un litro,
provistos de su respectiva tapa de espuma de poliestireno.

28
Bao termosttico con control de temperatura ajustable por lo menos entre 10 y 90 C
con variaciones no mayores que 0.05 C, con lquido termosttico apropiado y
dispositivo de agitacin o equipo comercial especial para la calibracin de termmetros.
Refrigerador con compartimento congelador.

2.5. Recoleccin, preservacin y alamacenamiento de muestras

2.5.1. Para esta determinacin no se requiere preparacin ni conservacin de las muestras.

2.5.2. Para aguas residuales o naturales, el muestreo debe realizarse de acuerdo con lo
indicado en las normas mexicanas NMX-AA-003 o NMX-AA-014 respectivamente. Las
determinacines de temperatura deben efectuarse de inmediato en el lugar de muestreo.

2.5.3. Cuando sea posible, se efecta la determinacin de temperatura directamente, sin extraer
muestra, sumergiendo el termmetro en el cuerpo de agua por examinar. Cuando sea preciso
extraer una muestra, se toma un volumen mnimo de un litro para inmersin parcial en un
envase de polietileno o de vidrio limpio y 500 ml para Termopar u otro instrumento, en un
envase de polietileno o de vidrio limpio, se determina la temperatura de inmediato.

2.5.4. Si la temperatura del cuerpo de agua o de la descarga es apreciablemente mayor o
menor que la del ambiente (diferencia de temperatura superior a 5 C), se recomienda extraer la
muestra mediante un recipiente de doble pared, de tipo vaso Dewar, colocar la tapa de espuma
de polietileno perforada en su centro para permitir la introduccin del termmetro y determinar
de inmediato la temperatura. An con el uso de este tipo de recipiente, si la temperatura del
lquido difiere en ms de 20 C de la del ambiente, la incertidumbre sobre la temperatura en el
punto muestreado puede rebasar los 0.2 C, debido a prdidas trmicas en el intervalo de
tiempo que separa la toma de la muestra y la lectura de la temperatura.

2.6. Procedimiento

Siempre que sea posible se debe realizar la medicin directamente en el cuerpo de agua, se
debe tomar en un volumen suficiente de muestra tal que el instrumento quede debidamente
inmerso, esperar el tiempo suficiente para obtener mediciones constantes.

Enjuagar con agua destilada el instrumento de medicin. Las lecturas se obtienen directamente
de la escala del aparato medidor de temperatura, y se informan en grados centgrados (C), con
aproximacin a la dcima de grado (0.1 C).

En el caso de aguas residuales, todas las lecturas deben hacerse en las descargas. En caso de
que no sea posible, sta puede determinarse en un punto accesible del conducto ms prximo
a la descarga. En el caso de tuberas curvadas, se recomienda la insercin del vstago del
termmetro en posicin a lo largo del eje del tubo y de frente a la corriente aguas arriba. En
tuberas de pequeo dimetro, esta posicin es obligatoria.

En aquellos casos en que el fluido no se encuentre bien mezclado, debe usarse un dispositivo
que produzca turbulencia aguas arriba del punto de medicin.

29
2.6.1. Determinacin de la temperatura en aguas superficiales o poco profundas cuando
se requiere tomar muestra

2.6.1.1. Introducir el recipiente para muestreo, moverlo de manera circular durante un
minutopara que se equilibre su temperatura con la del agua y retirar el recipiente con la
muestra.

2.6.1.2. Sumergir el termmetro de mercurio para uso rutinario, en posicin centrada en el
recipiente, hasta la marca de inmersin parcial o hasta una graduacin apropiada si el
termmetro es de inmersin total. Imprimir ligeros movimientos circulares por lo menos durante
1 minuto hasta que la lectura del termmetro se estabilice. Si la temperatura de la muestra
difiere en ms de 5 C de la del ambiente, repetir el muestreo a partir de 2.6.1.1, utilizando el
vaso de doble pared. Si el termmetro es de sensor, ste debe sumergirse en el volumen
mnimo de muestra y a la profundidad que recomienda el fabricante y las lecturas deben
efectuarse despus del tiempo de equilibrio recomendado en el manual del usuario.

2.6.1.3. Registrar la lectura y la altura de la columna emergente si el termmetro utilizado es de
inmersin total.

2.6.1.4. Realizar por triplicado las operaciones 2.6.1.1 a 2.6.1.3.

2.6.2. Determinacin de la temperatura en aguas residuales cuando se requiere tomar
muestra

2.6.2.1. La temperatura debe determinarse en el punto de la descarga o en un punto accesible
del conducto ms prximo al de la descarga. El recipiente para toma de muestra debe dejarse
en contacto con el fluido durante un tiempo suficiente para que equilibre su temperatura con la
del fluido y se procede como se indica en el inciso 2.6.1.2.

2.7. Clculos

2.7.1. Las lecturas de temperatura obtenidas con el termmetro de uso rutinario deben
corregirse por los valores de error obtenidos de la calibracin y, si el termmetro es de mercurio
para inmersin total, deben efectuarse adems las correcciones por efecto de columna
emergente si la magnitud de la correccin calculada rebasa media graduacin del termmetro.

2.7.2. Calcular el promedio de las tres lecturas despus de efectuadas las correcciones
pertinentes.

2.7.3. Los resultados obtenidos se expresan en grados Celsius (C), por redondeo del valor
promedio obtenido en 11.2, con aproximacin al dcimo de grado Celsius.

2.8. Informe de la prueba

En el informe de la prueba se debe incluir los siguientes datos:

Identificacin completa de la muestra.

30
Referencia de este mtodo.
La lectura de temperatura obtenida en C, ambiental y de la muestra.
Fecha del anlisis.
Nombre y apellidos del responsable del anlisis.

3. Turbidez

NMX-AA-038-SCFI-2001. ANLISIS DE AGUA - DETERMINACIN DE TURBIEDAD EN
AGUAS NATURALES, RESIDUALES Y RESIDUALES TRATADAS - MTODO DE PRUEBA
(CANCELA A LA NMX-AA-038-1981)

3.0. Importancia ambiental de la determinacin de turbidez

La turbidez es la expresin de la propiedad ptica de la muestra que causa que los rayos de luz
sean dispersados y absorbidos en lugar de ser transmitidos en lnea recta a travs de la
muestra.

La turbidez en el agua puede ser causada por la presencia de partculas suspendidas y
disueltas de gases, lquidos y slidos tanto orgnicos como inorgnicos, con un mbito de
tamaos desde el coloidal hasta partculas macroscpicas, dependiendo del grado de
turbulencia. Es causada por materia en suspensin como arcilla, cieno o materia orgnica e
inorgnica finamente dividida, as como compuestos solubles coloridos, plancton y diversos
microorganismos.

La transparencia del agua es muy importante cuando est destinada al consumo del ser
humano, a la elaboracin de productos destinados al mismo y a otros procesos de manufactura
que requieren el empleo de agua con caractersticas especficas, razn por la cual, la
determinacin de la turbidez es muy til como indicador de la calidad del agua, y juega un papel
muy importante en el desempeo de las plantas de tratamiento de agua, formando como parte
del control de los procesos para conocer cmo y cundo el agua debe ser tratada.

La medicin de la turbidez, en una manera rpida que nos sirve para saber cuando, como y
hasta que punto debemos tratar el agua para que cumpla con la especificacin requerida.

La unidad de turbidez, fue definida "como la obstruccin ptica de la luz, causada por una
parte por milln de slice en agua destilada".

1 unidad nefelomtrica de turbidez (NTU) =7.5 ppm de Si0
2

Actualmente, la unidad utilizada es la NTU, Unidad Nefelomtrica de Turbidez y que equivale a;

1 unidad nefelomtrica de turbidez (NTU) =1 ppm de formazina estndar

31
Los valores de turbidez pueden variar desde cero hasta varios miles de unidades en aguas
altamente turbias, consecuentemente no hay un mtodo de determinacines que abarque tan
amplio intervalo. Existen tres mtodos comnmente empleados:

a) Mtodo del Turbidmetro Hellige.
b) Mtodo del Nefelmetro Fotoelctrico.
c) Mtodo Turbidimtrico de Buja de J ackson.

La unidad utilizada normalmente es la NTU (Unidades Nefelomtricas de Turbidez), otras
unidades que an se usan se pueden trasformar utilizando la siguiente tabla:

Unidad JTU NTU SiO
2
mg/l
JTU 1.0 19 2.5
NTU 0.053 1 0.3
SiO
2
mg/l 0.4 7.5 1

El lmite mximo permisible en el agua potable es de 5 NTU (unidades de turbidez
nefelomtricas) segn la NOM-127-SSA1-1994.

3.1. Objetivo y campo de aplicacin

Esta norma mexicana establece el procedimiento para la determinacin en campo y en el
laboratorio de la turbidez en muestras de agua residual, residual tratada y natural, en un
intervalo de trabajo de 0.01 a 40 UNT, pudiendo incrementar este intervalo, realizando
diluciones de muestras con concentraciones mayores de 40 UNT.

3.2. Principio del mtodo

Este mtodo se basa en la comparacin entre la intensidad de la luz dispersada por la muestra
bajo condiciones definidas y la intensidad de luz dispersada por una suspensin de referencia
bajo las mismas condiciones; a mayor dispersin de luz corresponde una mayor turbidez. Las
lecturas son realizadas empleando un turbidmetro calibrado con una suspensin de referencia
de formacina preparada bajo condiciones especficas. El polmero de formacina ha sido elegido
como referencia debido a que es fcil de preparar y en cuanto a sus propiedades de dispersin
de luz es ms reproducible que otros como arcilla o agua turbia natural. La turbidez de una
suspensin de concentracin especfica de formacina se define como el equivalente a 40 UNT,
esta suspensin tiene una turbidez aproximada de 40 unidades J ackson si se determina en el
turbidmetro de buja, por lo tanto las unidades nefelomtricas basadas en el empleo de
formacina se aproximarn a las unidades del turbidmetro de buja pero no sern idnticas. El
aparato empleado en esta determinacin consiste en un nefelmetro con una fuente de luz para
iluminar la muestra y uno o varios detectores fotoelctricos con un dispositivo de lectura exterior
para indicar la intensidad de la luz dispersada a 90 de la direccin del haz de luz incidente.

32
3.3. Equipo y materiales

Turbidmetro. La sensibilidad del instrumento debe de permitir la deteccin de diferencias de
turbidez de 0.02 o menos unidades y debe de cubrir un intervalo de 0 a 40 unidades. Las
diferencias en el diseo de los turbidmetros puede causar diferencias significativas sobre los
resultados obtenidos, para evitar esto el equipo debe de cumplir con las siguientes
caractersticas:

Fuente de luz: Lmpara de tungsteno.
Distancia recorrida por la luz incidente y dispersada dentro del tubo. No debe exceder 10
cm.
ngulo de aceptacin del haz de luz por el receptor. Centrado a 90

del haz de luz incidente
y sin exceder a 30

a partir del detector. Detector y sistema de filtro debe tener una
respuesta pico entre 400 nm y 600 nm.
Celdas de vidrio de cristal incoloro y transparente, deben de mantenerse cuidadosamente
limpias por dentro y por fuera y evitar que se rayen o estrellen.
Balanza analtica con precisin de 0.1 mg.

3.4. Reactivos y patrones

Agua: Debe entenderse agua que cumpla con las siguientes caractersticas: a) Resistividad,
megohm-cm a 0.2 min; b) Conductividad, S/cm a 25 C: 5.0 Mx., y c) pH: 5.0 a 8.0.
Sulfato de hidracina (NH
2
)
2
H
2
SO
4
.
Hexametilentetramina (CH
2
)
6
N
4
.
Suspensin patrn de formacina de 400 UNT.
Disolucin I. Pesar aproximadamente y con precisin 1.000 g de sulfato de hidracina,
disolver en agua y aforar a 100 ml.
Disolucin II. Pesar aproximadamente y con precisin 10 g de Hexametilentetramina
disolver en agua y aforar a 100 ml.

Mezclar en un matraz volumtrico de 100 ml, 5 ml de la disolucin I y 5 ml de la disolucin II,
dejar en reposo 24 horas. Aforar con agua (esta disolucin posee una turbidez de 400 UNT).

Nota:

1.- Las disoluciones y suspensiones deben ser preparadas cada mes.

2.- Se sugiere al menos preparar un volumen de 10 ml de las disoluciones I y II conservando
la concentracin de cada reactivo.

3.- Se permite el uso de estndares de formacina de 4 000 UNT.

33
3.5. Recoleccin, preservacin y almacenamiento de muestras

La determinacin puede realizarse en el sitio de muestreo empleando un turbidmetro
porttil.
La muestra debe de ser colectada en frascos de vidrio o polietileno de boca ancha, cierre
hermtico y tapa inerte. Debe contener un volumen mnimo de 100 ml.
La muestra no debe ser preservada.
Las muestras deben de mantenerse en refrigeracin durante el transporte al laboratorio.
Las muestras deben de analizarse lo antes posible y en un periodo no mayor de 24 horas,
mientras permanezcan en el laboratorio deben conservarse en refrigeracin a 4 C.

3.6. Procedimiento

Preparacin y acondicionamiento de la muestra: Analizar la muestra en un periodo no mayor de
24 horas. Si la muestra se encuentra en refrigeracin, sacarla y permitir que alcance la
temperatura ambiente antes de que se realice el anlisis.

Anlisis de muestras con turbidez menor a 40 UNT.

Encender el equipo y dejar estabilizando de acuerdo al manual de operacin del equipo.
Revisar la calibracin del equipo con uno de los estndares dentro del intervalo de trabajo.
Enjuagar la celda dos veces con muestra para evitar errores por dilucin. Llenar la celda.
Cuando la determinacin se realice en campo las celdas deben de estar perfectamente
secas para poder determinar la turbidez de la muestra que se tome.

Nota: La muestra debe homogeneizarse perfectamente antes de realizar la lectura.

Reemplazar la celda conteniendo la disolucin patrn, por la celda que contiene la muestra
por analizar y cerrar el compartimento de la celda.
Leer la turbidez de la muestra, homogeneizando la muestra contenida en la celda entre
cada lectura. Se recomienda tomar varias lecturas homogeneizando entre cada una de
ellas.
Verificar la calibracin del turbidmetro cada vez que se cambie de intervalo de trabajo.

Anlisis de muestras con turbidez mayor a 40 UNT.

De ser posible y de acuerdo con los intervalos de lectura del equipo, realizar una prelectura
para calcular la dilucin a realizar.
Hacer una dilucin de la muestra empleando agua destilada.

34
3.7. Clculos

a) Calcular la turbidez de la muestra original en base a la dilucin realizada.

A * B
UNT =
C

Donde:

A =Son las UNT encontradas en la muestra.
B =Es el volumen final ml de la dilucin realizada.
C =Es el volumen ml de muestra tomada para la dilucin.

b) Reportar los resultados de la siguiente forma con la precisin correspondiente:

Margen de turbidez UNT
Informe de cifra UNT
ms prxima
0 1.0 0.05
1 - 10 0.1
10 -40 1
40 - 100 5
100 - 400 10
400 - 1 000 50
>1 000 100

4. Slidos en todas sus formas

4.0. Importancia ambiental del anlisis de los slidos en el agua

Las aguas naturales, residuales o residuales con altos contenidos de slidos, requieren ser
tratadas o adecuadas antes de ser usadas por las industrias, las plantas potabilizadoras o
cualquier otro uso al que se destinen debido a que estos pueden causar problemas en su
aspecto, su olor, altos costos en su tratamiento entre otros. De ello se deriva el inters por
determinar en forma cuantitativa este parmetro en todas sus formas.

En un lecho acutico se pueden encontrar diferentes tipos de slidos:

Slidos flotantes (SF): Son los slidos que flotan en la superficie del agua.

Slidos sedimentables (SS): Son los slidos que tienen suficiente peso para ir al fondo por
efecto de la gravedad al estar colocados en un ambiente de reposo.

35

Sales disueltos totales (SDT): Substancias orgnicas e inorgnicas solubles en agua y que no
son retenidas en el material filtrante.

Slidos suspendidos totales (SST): Slidos constituidos por slidos sedimentables, slidos y
materia orgnica en suspensin y/o coloidal, que son retenidas en el elemento filtrante.

Slidos totales (ST): Suma de los slidos suspendidos totales, sales disueltas y materia
orgnica.

Slidos totales voltiles (SVT): Cantidad de materia orgnica (incluidos aquellos inorgnicos)
capaz de volatilizarse por el efecto de la calcinacin a 550 C 50 C en un tiempo de 15 a 20
min.

4.1. Anlisis de slidos sedimentables

NMX-AA-004-SCFI-2000. ANLISIS DE AGUA - DETERMINACIN DE SLIDOS
SEDIMENTABLES EN AGUAS NATURALES, RESIDUALES Y RESIDUALES TRATADAS -
MTODO DE PRUEBA (CANCELA A LA NMX-AA-004-1977)

4.1.0. Introduccin. Las aguas naturales, residuales o residuales tratadas con altos contenidos
de slidos sedimentables no pueden ser utilizadas en forma directa por las industrias o las
plantas potabilizadoras. De ello se deriva el inters por determinar en forma cuantitativa este
parmetro.

4.1. 1. Objetivo y campo de aplicacin. Esta norma mexicana establece el mtodo de prueba
para la determinacin de slidos sedimentables en aguas naturales, residuales y residuales
tratadas.

4.1.2. Principio. La materia sedimentable se define como la cantidad de slidos que en un
tiempo determinado se depositan en el fondo de un recipiente en condiciones estticas. El
mtodo propuesto es volumtrico.

4.1.3. Materiales

Frasco de polietileno o vidrio con un mnimo de capacidad de un litroitro, con tapa
Cono de sedimentacin tipo Imhoff de vidrio o plstico
Bases para Conos Imhoof
Agitador largo de vidrio y Reloj.

36
4.1.4. Recoleccin, preservacin y almacenamiento de muestras

Colectar un volumen de muestra homogneo y representativo superior a un litro en un
frasco de polietileno o vidrio con tapa de boca ancha, teniendo siempre en cuenta que el
material en suspensin no debe adherirse a las paredes del recipiente.
No se recomienda la adicin de agentes preservadores. Transportar la muestra y
mantenerla a 4 C hasta realizar el anlisis. Las muestras deben estar a temperatura
ambiente al momento del anlisis.
El tiempo mximo de almacenamiento previo al anlisis es de 7 das. Sin embargo, se
recomienda realizar el anlisis dentro de las 24 horas posteriores a su colecta. Las muestras
deben estar a temperatura ambiente al momento del anlisis.

4.1.5. Procedimiento de analisis de slidos sedimentables

a) Mezclar la muestra original a fin de
asegurar una distribucin homognea
de slidos suspendidos a travs de
todo el cuerpo del lquido.

b) Colocar la muestra bien mezclada en un
cono Imhoff hasta la marca de un
litroitro.

37
c) Dejar sedimentar 45 minutos.

d) Una vez transcurrido este tiempo agitar
suavemente los lados del cono con un
agitador o mediante rotacin,

e) Mantener en reposo 15 minutos ms,
hasta completar una hora.

38
f) Leer el volumen de slidos
sedimentados directamente en la
escala del cono Imhoff y registrar este
resultado como ml/l. Si la materia
sedimentable contiene bolsas de
lquido y/o burbujas de aire entre
partculas gruesas, evaluar el volumen
de aquellas y restar del volumen de
slidos sedimentados.

NOTA: En caso de producirse una separacin de materiales sedimentables y flotables, no
deben valorarse estos ltimos como material sedimentable.

4.1.6. Clculos

a) Tomar directamente la lectura de slidos sedimentables del cono Imhoff.
c) Reportar la lectura obtenida en ml/l.

4.2. Slidos y sales disueltas (slidos totales, slidos voltiles)

NMX-AA-034-SCFI-2001. ANLISIS DE AGUA - DETERMINACIN DE SLIDOS Y SALES
DISUELTAS EN AGUAS NATURALES, RESIDUALES Y RESIDUALES TRATADAS -
MTODO DE PRUEBA (CANCELA A LAS NMX-AA-020-1980 Y NMX-AA-034-1981)

4.2.0. Introduccin

Las aguas naturales o residuales con altos contenidos de slidos suspendidos o sales disueltas
no pueden ser utilizadas en forma directa por las industrias o por las plantas potabilizadoras. De
ello se deriva el inters por determinar en forma cuantitativa estos parmetros.

4.2.1. Objetivo y campo de aplicacin

Esta norma mexicana establece el mtodo de anlisis para la determinacin de slidos y sales
disueltas en aguas naturales, residuales y residuales tratadas.

4.2.2. Principio del mtodo

El principio de este mtodo se basa en la medicin cuantitativa de los slidos y sales disueltas
as como la cantidad de materia orgnica contenidos en aguas naturales y residuales, mediante
la evaporacin y calcinacin de la muestra filtrada o no, en su caso, a temperaturas especficas,
en donde los residuos son pesados y sirven de base para el clculo del contenido de stos.

39
4.2.3. Equipo y materiales

Slo se mencionan los equipos y materiales que son de relevancia para el presente mtodo.

Equipo

Bomba de vaco.
Estufa elctrica, para operar de 103 a 105 C.
Mufla elctrica para operar a 500 50 C.

Materiales

Cpsulas de evaporacin adecuadas al volumen de la muestra.
Desecador, provisto con un desecante que contenga un indicador colorido de humedad.
Crisol Gooch de poro fino con adaptador de hule para el equipo de filtracin.
Matraz Kitazato de uno a dos litros de capacidad.
Filtro de fibra de vidrio de tamao adecuado al crisol Gooch utilizado con una porosidad de
2 mm o menor.
Pinzas para crisol.
Guantes para proteccin al calor.
Careta para proteccin al calor.

4.2.4. Reactivos y patrones

Todos los productos qumicos usados en este mtodo deben ser grado reactivo, a menos que
se indique otro grado.

Agua: Debe entenderse agua que cumpla con las siguientes caractersticas: a) Resistividad:
megohm-cm a 25 C: 0.2 min; b) Conductividad: S/cm a 25 C: 5.0 Mx.; c) pH: 5.0 a 8.0.
Cloruro de sodio (NaCl).
Carbonato de calcio (CaCO
3
).
Almidn en polvo.
Disolucin estndar para muestras de control. Agregar la cantidad necesaria de almidn,
cloruro de sodio y carbonato de calcio de acuerdo con la concentracin deseada de slidos
en las muestras de control y diluir a un litro. Este patrn debe prepararse cada vez que se
realice el mtodo.


Deben tomarse un mnimo de 500 ml de muestra en envases de polietileno y taparse
inmediatamente despus de la colecta. Pueden utilizarse muestras compuestas o simples.
No se requiere de ningn tratamiento especfico en campo.
Debe preservarse la muestra a 4 C hasta su anlisis.

40
El tiempo mximo de almacenamiento previo al anlisis es de 7 das. Sin embargo, se
recomienda realizar el anlisis dentro de las 24 horas posteriores a su colecta. Las muestras
deben estar a temperatura ambiente al momento del anlisis.

4.2.6. Procedimiento

4.2.6.1. Preparacin de cpsulas de porcelana

Las cpsulas se introducen a la mufla a una temperatura de 550 50 C, durante 20
minutos como mnimo. Despus de este tiempo transferirlas a la estufa a 103 2 C
aproximadamente 20 min.
Sacar y enfriar a temperatura ambiente dentro de un desecador.
Pesar las cpsulas y registrar los datos.
Repetir el ciclo hasta alcanzar el peso constante, el cual se obtendr hasta que no haya una
variacin en el peso mayor a 0.5 mg. Registrar como G.

4.2.6.2. Preparacin de crisoles Gooch

Introducir el filtro de fibra de vidrio en el crisol con la cara rugosa hacia arriba, mojar el filtro
con agua para asegurar que se adhiera al fondo del crisol.
Los crisoles se introducen a la mufla a una temperatura de 550 50 C, durante 20 minutos
como mnimo. Despus de este tiempo transferirlos a la estufa a 103 2 C
aproximadamente 20 min.
Sacar y enfriar a temperatura ambiente dentro de un desecador.
Pesar los crisoles y repetir el ciclo hasta alcanzar el peso constante, el cual se obtiene hasta
que no haya una variacin en el peso mayor a 0.5 mg. Registrar como G3.

4.2.6.3. Preparacin de la muestra

Sacar las muestras del sistema de refrigeracin y permitir que alcancen la temperatura
ambiente. Agitar las muestras para asegurar la homogeneizacin de la muestra.

4.2.6.4. Medicin para slidos totales (ST) y slidos totales voltiles (SVT)

Determinacin para slidos totales (ST)

En funcin de la cantidad de slidos probables tomar una cantidad de muestra que
contenga como mnimo 25 mg/l de slidos totales, generalmente 100 ml de muestra es un
volumen adecuado.
Transferir la muestra a la cpsula de porcelana que previamente ha sido puesta a peso
constante.
Llevar a sequedad la muestra en la estufa a 103 2 C.
Enfriar en desecador hasta temperatura ambiente y determinar su peso hasta alcanzar peso
constante. Registrar como peso G1.

41
Determinacin para slidos totales voltiles (SVT)

Introducir la cpsula conteniendo el residuo a la mufla a 550 50 C, de 15 20 min, transferir la
cpsula a la estufa a 103 2 C aproximadamente 20 min, sacar la cpsula, enfriar a
temperatura ambiente en desecador y determinar su peso hasta alcanzar peso constante.
Registrar como peso G2.

4.2.6.5. Medicin de Slidos suspendidos totales (SST) y slidos suspendidos totales
(SST)

Determinacin de los slidos suspendidos totales (SST)

Medir con una probeta, un volumen adecuado de la cantidad seleccionada de muestra
previamente homogeneizada la cual depende de la concentracin esperada de slidos
suspendidos.
Filtrar la muestra a travs del crisol Gooch preparado anteriormente aplicando vaco, lavar el
disco tres veces con 10 ml de agua, dejando que el agua drene totalmente en cada lavado.
Suspender el vaco y secar el crisol en la estufa a una temperatura de 103 2 C durante
una hora aproximadamente. Sacar el crisol, dejar enfriar en un desecador a temperatura
ambiente y determinar su peso hasta alcanzar peso constante registrar como peso G4.

Determinacin de slidos suspendidos totales voltiles (SST):

Introducir el crisol que contiene el residuo y el disco a la mufla, a una temperatura de 550 50
C, de 15 a 20 min. Sacar el crisol, de la mufla e introducirlo a la estufa a una temperatura de
103 C - 105 C durante 20 minutos aproximadamente. Sacar y enfriar a temperatura ambiente
en desecador y determinar su peso hasta alcanzar peso constante. Registrar como peso G5.

Crisoles con papel filtro y muestras en la Mufla

42
4.2.6.6. Medicin de Sales disueltas totales (SDT)

La determinacin de las sales disueltas totales es por diferencia entre los slidos totales menos
slidos suspendidos totales.

4.2.7. Clculos

a) Calcular el contenido de slidos totales de las muestras como sigue:

ST = (G1 - G) * 1 000 / V
Donde:

ST=Son los slidos totales, en mg/l.
G1=Es el peso de la cpsula con el residuo, despus de la evaporacin, en mg.
G =Es el peso de la cpsula vaca, en mg a peso constante.
V =Es el volumen de muestra, en ml.

b) Calcular el contenido de slidos totales voltiles de las muestras como sigue:

SVT = (G1 - G2) * 1 000 / V

Donde:

SVT=Es la materia orgnica total, en mg/l.
G2 =Es el peso de la cpsula con el residuo, despus de la calcinacin, en mg.

c) Calcular el contenido de slidos suspendidos totales de las muestras como sigue:

SST = (G4 - G3) * 1 000 / V

Donde:

SST=Son los slidos suspendidos totales, en mg/l.
G3 =Es el peso del crisol con el disco a peso constante, en mg.
G4 =Es el peso del crisol con el disco y el residuo seco, en mg.

d) Calcular el contenido de slidos suspendidos totales voltiles de las muestras como
sigue:
SST = (G4 - G5) * 1 000 / V
Donde:

G5 =Es el peso del crisol con el residuo, despus de la calcinacin, en mg.

43
e) Calcular el contenido de sales disueltas totales de las muestras como sigue:

SDT = ST - SST
Donde:

SDT=Son las sales disueltas totales, en mg/l.
ST =Son los slidos totales, en mg/l.

44
Submdulo II. Anlisis qumicos del agua

2.1. Oxgeno disuelto

NMX-AA-012-SCFI-2001. ANLISIS DE AGUA - DETERMINACIN DE OXGENO DISUELTO
PRUEBA (CANCELA A LA NMX-AA-012-1980).

2.1.0. Importancia ambiental de la determinacin de oxgeno en agua

Los niveles de oxgeno disuelto (OD) en aguas naturales, residuales y residuales tratadas
dependen de las actividades qumicas, fsicas y bioqumicas en los cuerpos de aguas.

El (DO), es el oxgeno que esta disuelto en el agua. Esto se logra por difusin del aire del
entorno, la aireacin del agua que ha caido sobre saltos o rpidos; y como un producto de
desecho de la fotosntesis, la frmula de simplificada de la fotosntesis esta dada debajo:

Fotosntesis (en presencia de luz y clorofila):

Dixido de carbono + Agua --------> Oxgeno + nutriente rico en carbono
CO
2
H
2
O O
2
C
6
H
12
O
6

La cantidad de oxgeno disuelto en el agua que necesita un organismo depende de la especie
de ste, su estado fsico, la temperatura del agua, los contaminantes presentes y de otros
factores ms. Estudios cientficos sugieren que de 4 a 5 partes por milln (ppm) de oxgeno
disuelto, es la mnima cantidad que soportara una gran y diversa poblacin de peces. El nivel de
oxgeno disuelto en las buenas aguas de pesca generalmente tiene una media de 9 ppm.


Esta norma mexicana establece dos mtodos de prueba para la determinacin de oxgeno
disuelto en aguas naturales y residuales utilizando las tcnicas de azida modificada y la
electromtrica. Es aplicable para el anlisis de aguas naturales, residuales y residuales
tratadas.

2.1.2. Principio del mtodo (Mtodo yodomtrico)

En este mtodo de la azida de sodio se adiciona una disolucin de manganeso divalente y una
disolucin alcalina yoduro-azida de sodio a una muestra de agua contenida en un frasco de
vidrio que debe permanecer cerrado. El oxgeno disuelto, OD, oxida al hidrxido de manganeso
disuelto, en cantidad equivalente, para producir un precipitado de manganeso con valencia ms
alta. Se acidifica la muestra y los iones yoduro reducen al manganeso a su estado divalente
producindose yodo equivalente al contenido de OD original. El yodo se titula con una
disolucin normalizada de tiosulfato de sodio. El punto final de la valoracin se detecta
visualmente con un indicador de almidn.

45


Agua: Debe entenderse agua que cumpla con las siguientes caractersticas: Resistividad:
megohm-cm a 25 C: 0.2 min; Conductividad: S/cm a 25 C, 5.0 mx., y pH: 5.0 a 8.0.
Sulfato manganoso (MnSO
4
.
4H
2
O MnSO
4
.
2H
2
O MnSO
4
.
H
2
O).
Hidrxido de potasio (KOH).
Yoduro de potasio (KI) o yoduro de sodio (NaI).
Azida de sodio (NaN
3
).
Almidn soluble.
Tiosulfato de sodio pentahidratado (Na
2
S
2
O
3
.
5H
2
O).
cido sulfrico concentrado (H
2
SO
4
).
Dicromato de potasio (K
2
Cr
2
O
7
).
Biyodato de potasio (KH (IO
3
)
2
).
Hidrxido de sodio (NaOH) hidrxido de potasio (KOH).
cido saliclico (C
6
H
4
(OH) COOH).

2.1.3.1. Soluciones

Disolucin de sulfato manganoso. Disolver en agua 480 g de sulfato manganoso, filtrar y
diluir a un litro. Esta disolucin debe usarse siempre y cuando no de color al adicionarle una
disolucin cida de yoduro de potasio en presencia de almidn.
Disolucin alcalina de yoduro-azida de sodio. Disolver en agua 500 g de hidrxido de sodio,
700 g de hidrxido de potasio y 150 g de yoduro de potasio, diluir a un litro con agua
destilada. A esta disolucin agregar 10 g de azida de sodio disueltos en 40 ml de agua. Esta
disolucin no debe dar color con la disolucin de almidn cuando se diluya y acidifique.
Disolucin indicadora de almidn. Disolver en un litro de agua destilada caliente, 20 g de
almidn soluble y 2 g de cido saliclico como conservador. Mantener en refrigeracin
siempre que no est en uso.
Disolucin estndar de tiosulfato de sodio (aprox. 0.025M). Pesar aproximadamente 6.205 g
de tiosulfato de sodio y disolver en agua destilada y diluir a un litro; agregar un gramo de
hidrxido de sodio en lentejas. Se debe calcular la concentracin de esta disolucin con una
disolucin de biyodato de potasio 0.002 M con una disolucin de dicromato de potasio
0.025 N, usando la disolucin de almidn como indicador (1 ml de la disolucin valorada de
tiosulfato 0.025 M es equivalente a 1 mg de oxgeno disuelto).
Disolucin de biyodato de potasio (0.002 M). Pesar aproximadamente y con precisin 812.4
mg de biyodato de potasio y aforar a un litro con agua destilada.
Disolucin de dicromato de potasio (0.025 N). Pesar aproximadamente y con precisin
1.226 g de dicromato de potasio previamente secado a 105 C durante 2 horas y aforar a un
litro con agua destilada.

46
Valoracin de la disolucin de tiosulfato de sodio. En un matraz Erlenmeyer, disolver 1 g de
yoduro de potasio exento de yodato en 60 ml de agua. Agregar 0.5 ml de cido sulfrico
concentrado y 10 ml de la disolucin de dicromato de potasio o biyodato de potasio, diluir a
100 ml con agua y valorar el yodo con la disolucin de tiosulfato, agregar el almidn hasta el
final de la determinacin, cuando se alcance un color amarillo plido.

N de tiosulfato=V (KH(IO
3
)
2
) X N (KH(IO
3
)
2
)/ ml gastados de tiosulfato

Donde:

N=Es la normalidad del tiosulfato de sodio.
V=Es el volumen de titulante.

Disolucin de cido sulfrico 0.10 N. Lentamente y mientras se agita, agregar 2.8 ml de
cido sulfrico concentrado a un volumen aproximado de 500 ml de agua destilada, mezclar
bien y diluir a un litro de agua destilada.
Disolucin de hidrxido de sodio 0.10 N. Pesar aproximadamente y con precisin 4 g de
lentejas de hidrxido de sodio y diluir a un litro.


Equipo


Materiales

Todo el material volumtrico utilizado en este procedimiento debe ser clase A con certificado o
en su caso debe estar calibrado.

Matraces volumtricos de 500 ml y 1 000 ml.
Matraces Erlenmeyer de 250 ml y 1 000 ml.
Bureta de 25 ml con soporte.


Se debe evitar que la muestra se agite o entre en contacto con el aire.
El anlisis de la muestra debe realizarse inmediatamente despus de su recoleccin, por lo
cual no es necesario adicionar ningn conservador.
Si la muestra tiene que ser transportada, se debe mantener a 4 C aproximadamente y no
se debe almacenar por ms de 8 horas
Si se va a utilizar el mtodo yodomtrico en laboratorio se recomienda fijar el OD en campo.

47
2.1.6. Procedimiento del analisis de oxgeno disuelto

a) Para fijar el oxgeno, adicionar a la botella
tipo Winkler que contiene la muestra (300 ml),
2 ml de sulfato manganoso.
b) Agregar 2 ml de la disolucin alcalina de
yoduro-azida

c) Tapar la botella tipo Winkler, agitar
vigorosamente.
d) Dejar sedimentar el precipitado.

e) Aadir 2 ml de cido sulfrico
concentrado
f) Volver a tapar y mezclar por inversin
hasta completa disolucin del precipitado.

48

g) Medir 100 ml de la muestra. h) Titular 100 ml de la muestra con la
disolucin estndar de tiosulfato de sodio
0.025 M hasta que se alcance un color
amarillo plido.

i) Agregando despus el indicador de
almidn.
j) Continuar la titulacin hasta la primera
desaparicin del color azul.

2.1.7. Clculos

OD mg/l= (M X ml de Tiosulfato X 8 x 1 000) / 98,7

Donde:

M =Es la molaridad de tiosulfato 8 =Los gramos / equivalente de oxgeno.
98.7=Es el volumen corregido por el desplazamiento de los reactivos agregados a la botella
tipo Winkler.

Reportar los resultados en mg/l de OD con la precisin correspondiente.

49
2.2. Demanda bioqumica de oxgeno

NMX-AA-028-SCFI-2001.ANLISIS DE AGUA - DETERMINACIN DE LA DEMANDA
BIOQUMICA DE OXGENO EN AGUAS NATURALES, RESIDUALES (DBO
5
) Y
RESIDUALES TRATADAS - MTODO DE PRUEBA (CANCELA A LA NMX-AA-028-1981)

2.2.0. Importancia ambiental de la determinacin de la DBO en agua

Demanda bioqumica de oxgeno (DBO
5
): Es una estimacin de la cantidad de oxgeno que
requiere una poblacin microbiana heterognea para oxidar la materia orgnica de una muestra
de agua en un periodo de 5 das. El mtodo se basa en medir el oxgeno consumido por una
poblacin microbiana en condiciones en las que se ha inhibido los procesos fotosintticos de
produccin de oxgeno en condiciones que favorecen el desarrollo de los microorganismos.


Esta norma mexicana establece el mtodo de anlisis para la determinacin de la demanda
bioqumica de oxgeno (DBO
5
) en aguas naturales, residuales y residuales tratadas.

Nota: Se determina la cantidad de oxgeno utilizada por una poblacin microbiana heterognea
para transformar la materia orgnica, en un periodo de incubacin de 5 das a 20 C.


El mtodo se basa en medir la cantidad de oxgeno que requieren los microorganismos para
efectuar la oxidacin de la materia orgnica presente en aguas naturales y residuales y se
determina por la diferencia entre el oxgeno disuelto inicial y el oxgeno disuelto al cabo de cinco
das de incubacin a 20 C.


Agua: Debe entenderse agua que cumpla con las siguientes caractersticas:a) Resistividad,
megohm-cm a 25 C: 0.2 min.; b) Conductividad, S/cm a 25 C: 5.0 mx., y c) pH: 5.0 a
8.0.
Fosfato monobsico de potasio (KH
2
PO
4
).
Fosfato dibsico de potasio (K
2
HPO
4
).
Fosfato dibsico de sodio heptahidratado (Na
2
HPO
4
7H
2
O).
Cloruro de amonio (NH
4
Cl).
Sulfato de magnesio heptahidratado (MgSO
4
7H
2
O).
Cloruro de calcio anhidro (CaCl
2
).
Cloruro frrico hexahidratado (FeCl
3
6H
2
O).
2
SO
4
).
Hidrxido de sodio (NaOH).
Sulfito de sodio (Na
2
SO
3
).
2-cloro-6 (triclorometil) piridina.
Glucosa grado patrn primario (C
6
H
12
O
6
).

50
cido glutmico grado patrn primario (C
5
H
9
NO
4
).
cido clorhdrico (HCl).
cido ntrico (HNO
3
).

2.2.3.1. Disoluciones

a) Disolucin amortiguadora de fosfato. Pesar aproximadamente 8.5 g de fosfato monobsico
de potasio, 21.75 g de fosfato dibsico de potasio, 33.4 g de Fosfato dibsico de sodio
heptahidratado y 1.7 g de cloruro de amonio, disolver en 500 ml de agua y aforar a un litro.
El pH de la disolucin debe ser de 7.2. Desechar el reactivo (o cualquiera de los siguientes
reactivos) si hay algn signo de crecimiento biolgico en el frasco de almacenamiento.
b) Disolucin de sulfato de magnesio. Pesar aproximadamente 22.5 g de sulfato de magnesio
heptahidratado, disolver en agua y diluir a un litro.
c) Disolucin de cloruro de calcio. Pesar aproximadamente 27.5 g de cloruro de calcio anhdro,
disolver en agua y diluir a un litro.
d) Disolucin de cloruro frrico. Pesar aproximadamente 0.25 g de cloruro frrico
hexahidratado, disolver en agua y diluir a un litro.
e) Disolucin de cido sulfrico (0.1 N). Agregar aproximadamente 2.8 ml de cido sulfrico
concentrado a 500 ml de agua, mezclar bien y diluir hasta un litro.
f) Disolucin de hidrxido de sodio (0.1 N). Pesar aproximadamente 4 g de hidrxido de sodio,
disolver en agua y diluir a un litro.
g) Disolucin de sulfito de sodio. Pesar aproximadamente 1.575 g de sulfito de sodio, disolver
en agua y diluir a un litro. Esta disolucin no es estable; por lo que debe prepararse
diariamente.
h) Disolucin patrn de glucosa-cido glutmico. Secar glucosa y cido glutmico a 103 C
durante una hora. Pesar aproximadamente y con precisin 150 mg de glucosa y 150 mg de
cido glutmico, diluir en agua y aforar a un litro. Preparar inmediatamente antes de usarla.
Esta disolucin tiene una DBO
5
de 198 mg/l.
i) Disolucin de cloruro de amonio. Pesar aproximadamente 1.15 g de cloruro de amonio y
disolver en 500 ml de agua, ajustar el pH a 7.2 con disolucin de hidrxido de sodio y aforar
a un litro. La disolucin contiene 0.3 mg N/ml.


2.2.4.1. Equipo

Equipo de aireacin con difusor.
Incubador: Controlado por termostato a 20 1 C. Eliminar toda la luz para evitar la
posibilidad de produccin fotosinttica de oxgeno disuelto.
Medidor de oxgeno disuelto.

51
Materiales

Botellas Winkler de vidrio para incubacin con capacidad de 300 ml de aforo total y con boca
estrecha, reborde y tapn de vidrio esmerilado, de forma cnica.

Contratapa de politetrafloroetileno u otro material plstico para botella Winkler.
Bureta.

a) Limpieza del material

Todo el material usado en la determinacin debe ser exclusivo para este procedimiento. Para el
lavado del material remojar durante una hora en una disolucin de cido sulfrico al 10 % y
enjuagar con agua. Los detergentes con base de amonaco no deben usarse para la limpieza
del material.

Los contenedores de las muestras deben lavarse con disolucin de detergente no inico, libre
de metales, enjuagarse con agua, remojarse en cido toda la noche y volver a enjuagarse con
agua libre de metales.

Para el material de cuarzo, politetrafloroetileno o material de vidrio debe dejarse remojando de
12 a 24 hrs con HNO
3
(1:1), HCl (1:1) o con agua regia (3 partes de HCl concentrado +1 parte
de HNO
3
concentrado) a 70 C slo en los casos que presente material adherido, despus debe
ser enjuagado con agua libre de metales. En los casos de que el material presente grasas,
enjuagar con acetona y/o hexano.


a) En el caso de aguas naturales debe tomarse un mnimo de un litro de muestra en un envase
de polietileno o vidrio. En el caso de aguas residuales (DBO
5
mayores a 50 mg/l) deben
tomarse mnimo 100 ml. Pueden utilizarse muestras simples o compuestas.
b) No se debe agregar ningn preservador a las muestras. Solo deben conservarse a 4 C
hasta su anlisis.
c) El tiempo mximo de almacenamiento previo al anlisis es de 24 hrs.


a) Preparacin de agua para dilucin

Colocar el volumen requerido de agua en un frasco y aadir por cada litro de agua 1 ml de cada
una de las siguientes disoluciones: disolucin de sulfato de magnesio, disolucin de cloruro de
calcio, disolucin de cloruro frrico y disolucin amortiguadora de fosfatos. Preparar el agua de
dilucin diariamente.

Analizar y almacenar el agua de dilucin como se describe en los incisos correspondientes, de
tal forma que siempre tenga a mano agua de calidad garantizada. Antes de usar el agua de
dilucin debe ponerse a una temperatura aproximada de 20 C. Saturar con oxgeno aireando
con aire filtrado, libre de materia orgnica durante una hora por lo menos.

52
Si la muestra presenta alto contenido de biocidas como cloro o se sabe de su bajo contenido de
materia orgnica, es necesario inocular la muestra.

b) Inculo

Fuente de la siembra

Es necesario contar con una poblacin de microorganismos capaces de oxidar la materia
orgnica biodegradable de la muestra. El agua residual domstica, los efluentes no clorados o
sin desinfeccin, los efluentes de las plantas de tratamiento de desechos biolgicos y las aguas
superficiales que reciben las descargas de aguas residuales que contienen poblaciones
microbianas satisfactorias. Algunas muestras no contienen una poblacin microbiana suficiente
(por ejemplo, algunos residuos industriales no tratados, residuos desinfectados, residuos de alta
temperatura o con valores de pH extremos).

Para tales residuos, sembrar el agua de dilucin aadiendo una poblacin de microorganismos.
La mejor siembra es la que proviene del efluente de un sistema de tratamiento biolgico de
aguas residuales. Cuando se usa como siembra el efluente de tratamiento biolgico de sistema
de aguas residuales se recomienda la inhibicin de la nitrificacin. Cuando no se disponga de
sta, utilizar el sobrenadante del agua residual domstica despus de dejarlo reposar a
temperatura ambiente durante al menos una hora, pero no ms de 36 hrs. Determinar si la
poblacin existente es satisfactoria haciendo la prueba de la siembra en una muestra para
DBO
5
. El incremento del valor de la DBO
5
indica una siembra exitosa.

Control del inculo

Determinar la DBO
5
del material de siembra como para cualquier otra muestra. sto es una
siembra control. A partir de este valor y de uno conocido de la dilucin del material de siembra
(en el agua de dilucin) determinar el consumo de OD de la siembra. Lo ideal es hacer
disoluciones tales de la siembra que la mayor cantidad de los resultados presenten una
disminucin de al menos el 50 % del OD. La representacin de la disminucin del OD (mg/l) con
respecto a los mililitros de siembra, tiene que ser una lnea recta cuya pendiente corresponde a
la disminucin de OD por mililitro del inculo. La interseccin del eje de las abscisas (OD)
representa el consumo del oxgeno causado por el agua de dilucin y debe ser inferior a 0.1
mg/l (ver inciso 10.8). Para determinar el consumo de OD de una muestra, se resta el consumo
de OD de la siembra, del consumo de OD total. La captacin de OD total del agua de dilucin
sembrada debe oscilar entre 0.6 mg/l y 1 mg/l.

c) Pretratamiento de la muestra

Muestras con pH cidos o bsicos

Neutralizar las muestras a un pH entre 6.5 y 7.5 con cido sulfrico o hidrxido de sodio de
concentracin tal que la cantidad de reactivo no diluya la muestra en ms del 0.5 %. El pH del
agua de dilucin sembrada no debe verse afectado por la dilucin de la muestra.

53
Muestras que contienen cloro residual

Si es posible, evitar las muestras que contengan cloro residual, tomndolas antes del proceso
de cloracin. Si la muestra ha sido clorada pero no hay residuo detectable de cloro, sembrar el
agua de dilucin. Si hay cloro residual, eliminar el cloro de la muestra y sembrar con inculo. No
se deben analizar las muestras cloradas sin sembrar el agua de dilucin. En algunas muestras,
el cloro desaparece en el lapso de una a dos horas despus de su exposicin a la luz. Esto
suele ocurrir durante el transporte o la manipulacin de la muestra. Para las muestras en las
que el residuo de cloro no se disipe en un tiempo razonablemente corto, eliminar el cloro
residual aadiendo disolucin de sulfito de sodio.

Determinar el volumen requerido de disolucin de sulfito de sodio cuantificando el cloro residual
total. Aadir a la muestra neutralizada el volumen relativo de la disolucin de sulfito de sodio
determinada por la prueba anterior, mezclar y despus de 10 a 20 min, comprobar el cloro
residual de la muestra.

La determinacin de cloro residual se realiza de acuerdo a lo establecido en la norma mexicana
NMX-AA-100.

Muestras sobresaturadas con OD

En aguas fras o en aguas donde se produce la fotosntesis (aguas de embalses), es posible
encontrar muestras que contienen ms de 9 mg OD/L a 20 C. Para evitar la prdida de
oxgeno durante la incubacin de tales muestras, reducir el OD por saturacin, calentando la
muestra aproximadamente a 20 C en frascos parcialmente llenos mientras se agitan con fuerza
o se airean con aire limpio, filtrado y comprimido.

Ajustar la temperatura de la muestra a 20 1 C antes de hacer diluciones.

Inhibicin de la nitrificacin

Si se requiere inhibir la nitrificacin adicionar 3 mg de 2-cloro-6 (triclorometil) piridina a cada uno
de los frascos antes de recolectar o bien adicionar la cantidad suficiente de agua para tener una
concentracin de 10 mg/l aproximadamente.

Entre las muestras que requieren inhibicin de la nitrificacin se incluyen, los efluentes tratados
biolgicamente, las muestras sembradas con efluentes tratados biolgicamente y las aguas
superficiales entre otras. Debe hacerse la observacin del uso de inhibicin del nitrgeno
cuando se presente el informe de los resultados.

d) Tcnica de dilucin

Las diluciones que dan lugar a un OD residual mayor de 1 mg/l y una captacin de OD de al
menos 2 mg/l despus de 5 das de incubacin, producen los resultados ms confiables. Hacer
varias diluciones (al menos 3) por duplicado de la muestra preparada para obtener una
captacin de OD en dicho intervalo. La experimentacin con una muestra concreta permite el
uso de un nmero menor de diluciones.

54
Un anlisis ms rpido tal como la DQO, presenta una correlacin aproximada con la DBO
5
y
sirve como una gua para seleccionar las diluciones. En ausencia de datos previos, utilizar las
siguientes diluciones: De cero a 1 % para los residuos industriales fuertes, de 1 a 5 % para las
aguas residuales sedimentadas y crudas, del 5 al 25 % para el efluente tratado biolgicamente
y del 25 al 100 % para las aguas superficiales contaminadas.

Diluciones preparadas directamente en frascos tipo Winkler. Utilizando una pipeta volumtrica,
aadir el volumen de muestra deseado a frascos Winkler individuales de 300 ml. Aadir
cantidades adecuadas del material de siembra a los frascos tipo Winkler o al agua de dilucin.
Llenar los frascos con suficiente agua de dilucin, sembrada si es necesario, de forma que la
insercin del tapn desplace todo el aire, sin dejar burbujas. No realizar diluciones mayores de
1:300 (1 ml de la muestra en un frasco). Determinar el OD inicial en uno de los frascos de cada
una de las diferentes diluciones. En los frascos de los duplicados de cada una de las diluciones,
Ajustar hermticamente el tapn, poner un sello hidrulico y la contratapa e incubar durante 5
das a 20 C.

e) Determinacin del OD inicial

Mtodo yodomtrico

La determinacin del OD inicial se realiza por medio del mtodo yodomtrico de azida
modificado, de acuerdo a lo establecido en la norma mexicana NMX-AA-012-SCFI

Mtodo electromtrico

La determinacin del OD inicial se realiza por
medio del mtodo electromtrico con electrodo
de membrana, de acuerdo a lo establecido en
la norma mexicana NMX-AA-012-SCFI. Los
aceites, grasas o cualquier sustancia que se
adhiera a la membrana puede ser causa de
baja respuesta en el electrodo.

Muestras para DBO en frascos Winkler

f) Blanco del agua de dilucin

Emplear un blanco del agua de dilucin como un control aproximado de la calidad del agua de
dilucin no sembrada y de la limpieza de los frascos de incubacin. J unto con cada lote de
muestras, incubar un frasco de agua de dilucin no sembrada. Determinar el OD inicial y final.
El consumo de OD no debe ser mayor de 0.2 mg/l y preferentemente no menor a 0.1 mg/l.

55
g) Incubacin

Incubar a 20 1C las botellas de DBO
5
que contengan las muestras con las diluciones
deseadas, los controles de siembra, los blancos de agua de dilucin y el control de glucosa-
cido glutmico. En caso de no contar con contratapas, diariamente se debe verificar que el
sello hidrulico est intacto en cada botella incubada, agregar agua si es necesario.

Introduccin de la muestra a la incubadora. Temperatura de incubacin de muestras para
DBO 20C 1 C.

h) Determinacin del OD final

Despus de 5 das de incubacin determinar el OD en las diluciones de la muestra, en los
controles y en los blancos. La medicin del OD debe ser realizada inmediatamente despus de
destapar la botella de Winkler, para evitar la absorcin de oxgeno del aire por la muestra.

2.2.7. Clculos

2.2.7.1 Calcular la DBO
5

a) Cuando no se utilice inculo ni diluciones:

DBO
5
(mg/l) =OD
i
mg/l - OD
5
mg/l

Donde:

ODi mg/l=Es el oxgeno disuelto inicial.
OD
5
mg/l=Es el oxgeno disuelto al quinto da.

56
b) Cuando se emplea una dilucin

ODi mg/l - OD
5
mg/l
DBO
5
(mg/l) =
% de dilucin expresado en decimales

c) Cuando se utiliza inculo

Sin dilucin

C
1
(B
1
- B
2
) (V
t
)
DBO
5
(m/l)= (OD
i
mg/l - OD
5
mg/ L) -
C
2
(V
m
)

Con dilucin:

C
1
(B
1
- B
2
) (V
t
)]
DBO
5
(m/l)= [ (OD
i
mg/l - OD
5
mg/ L) -
C
2
(V
m
)
]

Donde:

B
1
=Es el OD del inculo antes de la incubacin en mg/l.
B
2
=Es el OD del inculo despus de la incubacin en mg/l.
C
1
=Es el volumen de inculo en la muestra C
2
es el volumen de inculo en el inculo control.
V
t
=Es el volumen total del frasco Winkler y V
m
es el volumen de muestra sembrada.

d) Expresar los resultados como CDBO
5
s se inhibe la nitrificacin.

e) Reportar los resultados en mg/l de DBO
5
con dos cifras significativas con la precisin
(media, desviacin estndar) correspondiente.

2.3. Alcalinidad y acidez

NMX-AA-036-SCFI-2001. ANLISIS DE AGUA - DETERMINACIN DE ACIDEZ Y
ALCALINIDAD EN AGUAS NATURALES, RESIDUALES Y RESIDUALES TRATADAS -

2.3.0. Importancia ambiental de la determinacin de acidez y alcalinidad en agua

La acidez se refiere a la presencia de sustancias disociables en agua y que como producto de
disociacin generan el in hidronio (H
3
O
+
), como son los cidos fuertes, cidos dbiles y de
fuerza media; tambin la presencia de ciertos cationes metlicos como el Fe (III) y el Al (III)
contribuyen a la acidez del medio.

La alcalinidad se refiere a la presencia de sustancias hidrolizables en agua y que como
producto de hidrlisis generan el in hidroxilo (OH
-
), como son las bases fuertes, y los
hidrxidos de los metales alcalinotrreos; contribuyen tambin en forma importante a la

57
alcalinidad los carbonatos y fosfatos. La presencia de boratos y silicatos en concentraciones
altas tambin contribuyen a la alcalinidad del medio.

Una medida de la acidez total del medio es la cantidad de base fuerte que es necesario aadir a
una muestra para llevar el pH a un valor predeterminado coincidente con el vire de la
fenolftalena. Una medida de la alcalinidad total del medio es la cantidad de cido fuerte que es
necesario aadir a una muestra para llevar el pH a un valor predeterminado coincidente con el
vire del naranja de metilo.


Esta norma mexicana establece el mtodo de prueba para la determinacin de acidez y
alcalinidad en aguas naturales, residuales y residuales tratadas.


Este mtodo est basado en la medicin de la acidez o alcalinidad en el agua por medio de una
valoracin de la muestra empleando como disolucin valorante un lcali o un cido segn sea el
caso.


Equipo

Estufa.

Materiales

Bureta con certificado o en su caso debe estar calibrada.

Limpieza del material: Las botellas de polietileno para las muestras, deben lavarse con
detergente libre de fosfatos, enjuagarse con agua y secarse a temperatura ambiente.


Los reactivos que requiere el mtodo deben ser grado reactivo a menos que se indique otro
grado.

Preparar todas las disoluciones con agua destilada o desionizada, que ha sido hervida
recientemente durante 15 minutos y enfriar a temperatura ambiente. Al final el pH del agua debe
ser 6 y su conductividad <2 S/cm.

Debe entenderse agua que cumpla con las siguientes caractersticas: Resistividad,
megohm-cm a 25 C: 0.2 min; Conductividad, S/cm a 25 C: 5.0 mx, y pH: 5.0 a 8.0.
Agua libre de CO
2.

58
Biftalato de potasio (KHC
8
H
4
O
4
).
Carbonato de sodio anhidro (Na
2
CO
3
) patrn primario.
2
SO
4
), o cido clorhdrico concentrado (HCl).
Naranja de metilo.
Fenolftalena.
Perxido de hidrgeno al 30 % v/v (H
2
O
2
).
Tiosulfato de sodio pentahidratado (Na
2
S
2
O
3
5H
2
O).
Etanol.
Cloroformo.
Disolucin de cido sulfrico o cido clorhdrico (0.1 N). Diluir 8,3 ml de cido clorhdrico
concentrado 2,8 ml de cido sulfrico concentrado en un litro con agua libre de CO
2
.
Disolucin de cido sulfrico o clorhdrico (0.02 N). Diluir 200 ml de cido clorhdrico o cido
sulfrico 0.1 N a un litro de agua.
Disolucin de hidrxido de sodio (0.1 N). Pesar aproximadamente y con precisin 4 g de
hidrxido de sodio disolver y diluir a un litro con agua.
Disolucin de hidrxido de sodio (0.02 N). Transferir 200 ml de la solucin de NaOH 0.1 N a
un matraz volumtrico de un litro. Diluir a un litro con agua.
Disolucin de tiosulfato de sodio pentahidratado (0.1 M). Pesar aproximadamente y con
precisin 25 g de tiosulfato de sodio y diluir a un litro con agua (agregar 5 ml de cloroformo
como preservador.
Disolucin indicadora de naranja de metilo. Pesar aproximadamente y con precisin 0.5 g
del colorante naranja de metilo y aforar a un litro con agua. Filtrar la disolucin fra para
remover cualquier precipitado que se forme. O bien, pesar aproximadamente y con precisin
0.5 g de la sal de sodio y diluir a un litro con agua, si es necesario filtrar cuando est fra la
disolucin.
Disolucin indicadora de fenolftalena. Pesar aproximadamente y con precisin 5 g de
fenolftalena y disolver en 500 ml de etanol, aadir 500 ml de agua con agitacin constante.
Filtrar si hay formacin de precipitado.


Recolectar por lo menos 500 ml de muestra en frascos de vidrio, polietileno o polipropileno.
Siempre debe enjuagarse el frasco con una porcin de la muestra.
Llenar las botellas completamente y tapar hermticamente, ya que las muestras de aguas
residuales pueden estar sujetas a la accin microbiana y a prdidas o ganancias de CO
2
u
otros gases cuando se exponen al aire. Evitar la agitacin de la muestra y su exposicin
prolongada al aire.
Conservar a una temperatura de 0 C a 4 C hasta su anlisis.
El tiempo mximo de almacenamiento previo al anlisis es de 24 hrs.


2.3.6.1. Valoracin de las disoluciones

59
a) Valoracin del cido sulfrico o cido clorhdrico (0.02 N). Pesar aproximadamente y con
precisin 0.026 5 g del patrn primario de carbonato de sodio, secado 105 C, aadir unos
25 ml de agua y unas gotas de la disolucin de naranja de metilo, valorar con el cido hasta
el vire del indicador (de canela a amarillo). Calcular la normalidad del cido con la siguiente
frmula:

A
N =
B x 53
x 1 000

Donde:

N=Es la normalidad del cido usado, equivalentes/l.
A=Son los gramos de carbonato de sodio.
B=Son los ml de cido utilizados.
53=Son los gramos por equivalente de carbonato de sodio.

b) Valoracin del hidrxido de sodio (0.02 N). Pesar aproximadamente y con precisin 0.102 g
de biftalato de potasio secado a 105 C (ver inciso 5.2), aadir unos 25 ml de agua y unas
gotas de la disolucin de fenolftalena, titular con la disolucin de hidrxido de sodio hasta el
vire del indicador (de incoloro a rosa). Calcular la normalidad del hidrxido con la siguiente
frmula:

A
N =
B x 204.2
x 1 000

Donde:

N=Es la normalidad del hidrxido de sodio, equivalentes/l.
A=Son los gramos de biftalato de potasio.
B=Son los ml de hidrxido de sodio utilizados.
204.2=Son los gramos por equivalente de biftalato de potasio.

2.3.6.2. Acidez

a) Pretratamiento de la muestra

En caso de detectarse la presencia de cloro residual, eliminar la interferencia aadiendo 0.1 ml
de la disolucin de tiosulfato de sodio 0.1 M.

a) Si la muestra se encuentra libre de iones metlicos hidrolizables y cationes polivalentes en su
forma reducida, proceder como se indica a partir del inciso b). Las muestras de desechos
industriales y drenajes que contengan concentraciones mayores a 1 mg/l de iones metlicos,
tales como hierro, aluminio, manganeso, deben tratarse con perxido de hidrgeno caliente.
Este tratamiento con perxido caliente consiste en pasar 100 ml de muestra a un matraz
Erlenmeyer de 250 ml. Medir el pH, si el pH est alrededor de 4 adicionar alcuotas de 5 ml de
cido sulfrico (0.02 N) valorada hasta reducir el pH a menos de 4. Adicionar 5 gotas de
perxido de hidrgeno al 30 % y hervir la muestra de 2 a 5 min. Registrar el volumen total de

60
cido sulfrico (0.02 N) agregado. Enfriar a temperatura ambiente y titular de acuerdo al
procedimiento descrito en el inciso b).

b) Transferir 100 ml de muestra en un matraz Erlenmeyer de 250 ml. Adicionar 2 gotas de
disolucin indicadora de fenolftalena e introducir la barra magntica. Titular con disolucin de
hidrxido de sodio valorada hasta el vire del indicador (de incoloro a rosa), registrar el
volumen empleado en la titulacin (acidez total).

c) Transferir 100 ml de muestra en un matraz Erlenmeyer de 250 ml. Adicionar 2 gotas de
disolucin indicadora de naranja de metilo e introducir la barra magntica. Iniciar la agitacin y
titular con disolucin de hidrxido de sodio valorada hasta el vire del indicador, registrar el
volumen empleado en la titulacin. Calcular la acidez, tomando en cuanta el vire del indicador
(de amarillo a canela, acidez al anaranjado de metilo).

61
Procedimento de determinacin de acidez total

a) Transferir 100 ml de muestra en un
matraz Erlenmeyer de 250 ml. Adicionar
2 gotas de disolucin indicadora de
fenolftalena e introducir la barra
magntica.

b) Titular con disolucin de hidrxido de
sodio valorada hasta el vire del indicador
(de incoloro a rosa), registrar el volumen
empleado en la titulacin (acidez total).

c) Vire del indicador (de incoloro a rosa).

62
Procedimeinto para acidez al anaranjado de metilo

a) Transferir 100 ml de muestra en un
matraz Erlenmeyer de 250 ml. Adicionar
2 gotas de disolucin indicadora de
naranja de metilo e introducir la barra
magntica.

b) Iniciar la agitacin y titular con disolucin
de hidrxido de sodio valorada hasta el
vire del indicador, registrar el volumen
empleado en la titulacin.

c) Calcular la acidez, tomando en cuanta el
vire del indicador (de amarillo a canela,
acidez al anaranjado de metilo).

63
2.3.6.3. Alcalinidad

a) Transferir 100 ml de muestra en un matraz Erlenmeyer de 250 ml.
b) Adicionar 2 gotas de disolucin indicadora de fenolftalena.
c) Titular con la disolucin valorada de cido (0.02 N) hasta el vire de la fenolftalena (de rosa
a incoloro), registrar los mililitros gastados (alcalinidad a la fenolftalena). Adicionar 2 gotas
de la disolucin indicadora de naranja de metilo.
d) Continuar con la titulacin hasta alcanzar el vire del naranja de metilo (de canela a amarillo),
alcalinidad total.
e) Registrar los volmenes para ambos puntos finales.
f) Calcular la alcalinidad, tomando en cuenta el vire de los indicadores.

Procedimiento de analisis de alcalinidad a la fenolftalena

a) Transferir 100 ml de muestra en un matraz
Erlenmeyer de 250 ml. Adicionar 2 gotas
de disolucin indicadora de fenolftalena.

b) Titular con la disolucin valorada de cido
(0.02 N) hasta el vire de la fenolftalena
(de rosa a incoloro), registrar los mililitros
gastados (alcalinidad a la fenolftalena).

64
c) Adicionar 2 gotas de la disolucin
indicadora de naranja de metilo

d) Continuar con la titulacin hasta alcanzar el
vire del naranja de metilo (de canela a
amarillo).

e) Vire del naranja de metilo (de canela a
amarillo), alcalinidad total.

65
2.3.7. Clculos

Calcular la acidez total como CaCO
3
en mg/l mediante la siguiente frmula:

Ecuacin 1:

(A x B) - (C x D)] (50) (1 000)
Acidez total como CaCO
3
en mg /l = [
100
]

Donde:

100=Es el volumen de la muestra en ml.
A=Es el volumen de NaOH utilizado al vire de la fenolftalena.
B=Es la normalidad de la disolucin de NaOH.
C=Son los ml de H
2
SO
4
utilizados en el tratamiento con perxido.
D=Es la normalidad del H
2
SO
4
utilizado.
50=Es el factor para convertir eq/L a mg CaCO
3
/l.
1,000=Es el factor para convertir ml a litros.

Calcular la alcalinidad total como CaCO
3
en mg/l, mediante la siguiente frmula:

AXN (50)(1 000)
Alcalinidad total como CaCO
3
en mg /l = [
100
]

Donde:

A=Es el volumen total gastado de cido en la titulacin al vire del anaranjado de metilo en ml.
N=Es la normalidad de la disolucin de cido.
100=Es el volumen de la muestra en ml.
50=Es el factor para convertir eq/L a mg CaCO
3
/l.
1 000=Es el factor para convertir ml a litros.

66
2.4. Cloruros

NMX-AA-073-SCFI-2001

ANLISIS DE AGUA - DETERMINACIN DE CLORUROS TOTALES EN AGUAS
NATURALES, RESIDUALES Y RESIDUALES TRATADAS - MTODO DE PRUEBA

2.4.1. Importancia ambiental de la determinacin de cloruros

El in cloruro es uno de los iones inorgnicos que se encuentran en mayor cantidad en aguas
naturales, residuales y residuales tratadas, su presencia es necesaria en aguas potables. En
agua potable, el sabor salado producido por la concentracin de cloruros es variable. En
algunas aguas conteniendo 25 mg Cl
-
/L se puede detectar el sabor salado si el catin es sodio.
Por otra parte, ste puede estar ausente en aguas conteniendo hasta 1g Cl
-
/L cuando los
cationes que predominan son calcio y magnesio.

Un alto contenido de cloruros puede daar estructuras metlicas y evitar el crecimiento de
plantas. Las altas concentraciones de cloruro en aguas residuales, cuando stas son utilizadas
para el riego en campos agrcolas deteriora, en forma importante la calidad del suelo.

Es entonces importante el poder determinar la concentracin de cloruros en aguas naturales,
residuales y residuales tratadas en un amplio intervalo de concentraciones.

El cloruro es esencial en la dieta y pasa a travs del sistema digestivo, inalterado. Un alto
contenido de cloruros en el agua para uso industrial, puede causar corrosin en las tuberas
metlicas y en las estructuras.

La mxima concentracin permisible de cloruros en el agua potable es de 250 ppm, este valor
se estableci ms por razones de sabor, que por razones sanitarias.


Esta norma mexicana establece el mtodo de anlisis para la determinacin de cloruros totales
en aguas naturales, residuales y residuales tratadas.


La determinacin de cloruros por este mtodo se basa en una valoracin con nitrato de plata
utilizando como indicador cromato de potasio. La plata reacciona con los cloruros para formar
un precipitado de cloruro de plata de color blanco. En las inmediaciones del punto de
equivalencia al agotarse el in cloruro, empieza la precipitacin del cromato. La formacin de
cromato de plata puede identificarse por el cambio de color de la disolucin a anaranjado-rojizo
as como en la forma del precipitado. En este momento se da por terminada la valoracin.

67

Equipo

Potencimetro para medicin de pH.

Materiales

Todo el material volumtrico utilizado en este mtodo debe ser de clase A con certificado, o en
su caso debe estar calibrado.

Frascos para muestreo de polietileno, polipropileno o vidrio de boca ancha de 500 ml de
capacidad.
Bureta con certificado o en su caso debe estar calibrada.


se especifique otra cosa.

megohm-cm a 25 C: 0.2 min; b) Conductividad, S/cm a 25 C: 5.0 Mx. y c) pH: 5.0 a 8.0.
Nitrato de plata (AgNO
3
).
Cromato de potasio (K
2
CrO
4
).
2
SO
4
).
Sulfato de aluminio y potasio dodecahidratado [AlK(SO
4
)
2
.12H
2
O].
Amonaco concentrado (NH
3
).
Disolucin indicadora de cromato de potasio. Pesar aproximadamente y con precisin 50 g
de cromato de potasio y disolver en 500 ml de agua y aadir disolucin patrn de nitrato de
plata hasta que se produzca un precipitado rojo claro. Proteger la disolucin de la luz y dejar
estabilizar durante 24 horas despus de la adicin de la disolucin de nitrato de plata. Filtrar
la disolucin para remover el precipitado y aforar a un litro con agua.
Disolucin estndar de nitrato de plata (0.014N). Moler aproximadamente 5 g de cristales de
nitrato de plata y secar a 100 C durante 2 hrs. Pesar aproximadamente y con precisin 2,4
g de los cristales pulverizados de nitrato de plata disolverlos en aproximadamente un litro.
Valorar contra la disolucin patrn de cloruro de sodio 0.014N.
Disolucin patrn de cloruro de sodio (0.014N). Secar aproximadamente 3 g de cloruro de
sodio a 140 C. Pesar aproximadamente y con precisin 824,1 mg de la sal seca disolver en
agua y aforar a un litro en un matraz volumtrico. Se acepta el uso de patrn certificado.
Disolucin de hidrxido de sodio (0.1N). Pesar aproximadamente y con precisin 4 g de
hidrxido de sodio disolver en un litro de agua.

68
Disolucin de cido sulfrico (0.1N). Tomar cuidadosamente 3 ml de cido sulfrico
concentrado y llevar a un litro.
Suspensin de hidrxido de aluminio. Pesar aproximadamente y con precisin 125 g de
sulfato de aluminio y potasio o sulfato de aluminio y amonio, y llevar a un litro con agua.
Calentar a 60 C y aadir 55 ml de amonaco lentamente y agitando. Permitir reposar la
disolucin durante unas horas, decantar el agua sobrenadante y lavar el precipitado por
adiciones sucesivas de agua, mezclando bien y decantando. Repetir el procedimiento
anterior hasta eliminar el olor a amonaco. Cuando est recin preparada, la suspensin
ocupa un volumen aproximado de un litro.


Se deben tomar las muestras en envases limpios de polietileno o de vidrio. Pueden
utilizarse muestras compuestas o simples. Tomar un volumen de 500 ml.
Se debe preservar la muestra a 4 C hasta su anlisis.
El tiempo mximo de almacenamiento previo al anlisis es de una semana.


a) Acondicionamiento de la muestra

Utilizar un volumen de muestra de 100 ml. Ajustar el pH entre 7 y 10 utilizando las
disoluciones de hidrxido de sodio (0.1N) y/o cido sulfrico (0.1N).
Si la muestra tiene mucho color, aadir de 3 ml a 5 ml de la suspensin de hidrxido de
aluminio antes de acondicionar. Mezclar, dejar sedimentar y filtrar con papel filtro cualitativo.

b) Valoracin

A 100 ml de muestra acondicionada, adicionar 1 ml de disolucin indicadora de cromato
de potasio. Valorar con la disolucin patrn de nitrato de plata hasta el vire de amarillo a
naranja rojizo, manteniendo un criterio constante en el punto final.
Titular un blanco con las muestras.

Procedimiento del analisis de cloruros

Acondicionamiento de la muestra

Utilizar un volumen de muestra de 100 ml.

69
Ajustar el pH entre 7 y 10 utilizando las
disoluciones de hidrxido de sodio (0.1N)
y/o cido sulfrico (0.1N).

Valoracin

A 100 ml de muestra acondicionada,
adicionar 1 ml de disolucin indicadora de
cromato de potasio.

Valorar con la disolucin patrn de nitrato
de plata hasta el vire de amarillo a naranja
rojizo, manteniendo un criterio constante
en el punto final.

70
Vire de amarillo a naranja rojizo.

2.4.8. Clculos

a) Calcular la concentracin de iones cloruro en la muestra original en mg/l, como sigue:

[(A - B)x N x 35,450]
Cl- mg /L =
ml de muestra

Donde:

A=Son los ml de disolucin de nitrato de plata gastados en la valoracin de la muestra.
B=Son los ml de disolucin de nitrato de plata gastados en la valoracin del blanco.
N =Es la normalidad del nitrato de plata.

b) Todos los valores obtenidos de control de calidad deben ser reportados junto con los
resultados del anlisis.

c) Reportar los resultados en Cl mg/l, con la precisin correspondiente.

2.4.9. Interferencias

Los iones bromuro, yoduro y cianuro se registran como concentraciones equivalentes de
cloruro.
Los iones sulfuro, tiosulfato y sulfito interfieren.
El ortofosfato en concentraciones mayores de 25 mg/l interfiere ya que precipita como
fosfato de plata.
El hierro con concentraciones arriba de 10 mg/l interfiere porque enmascara el punto final de
la valoracin.

71
2.5. Dureza

NMX-AA-072-SCFI-2001.ANLISIS DE AGUA - DETERMINACIN DE DUREZA TOTAL EN
AGUAS NATURALES, RESIDUALES Y RESIDUALES TRATADAS - MTODO DE PRUEBA

2.5.0. Importancia ambiental de la medicin de la dureza

Este mtodo especifica el procedimiento para determinacin de dureza en agua por titulacin.
La dureza se entiende como la capacidad de un agua para precipitar al jabn y esto est
basado en la presencia de sales de los iones calcio y magnesio. La dureza es la responsable de
la formacin de incrustaciones en recipientes y tuberas lo que genera fallas y prdidas de
eficiencia en diferentes procesos industriales como las unidades de transferencia de calor. El
trmino dureza se aplic en principio por representar al agua en la que era difcil (duro) de lavar
y se refiere al consumo de jabn para lavado, en la mayora de las aguas alcalinas esta
necesidad de consumo de jabn est directamente relacionada con el contenido de calcio y
magnesio.

La dureza es una caracterstica qumica del agua, que est determinada por el contenido de
carbonatos, bicarbonatos, cloruros, sulfatos y ocasionalmente nitratos de calcio y magnesio. La
dureza es indeseable en algunos procesos, tales como el lavado domstico e industrial,
provocando que se consuma ms jabn, al producirse sales insolubles. En calderas y sistemas
enfriados por agua, se producen incrustaciones en las tuberas y una prdida en la eficiencia de
la transferencia de calor. Por otro lado, le da un sabor indeseable al agua potable.

Grandes cantidades de dureza son indeseables por razones antes expuestas y debe ser
removida antes de que el agua tenga uso apropiado para las industrias de bebidas, lavanderas,
acabados metlicos, teido y textiles.

La mayora de los suministros de agua potable tienen un promedio de 250 mg/l de dureza.
Niveles superiores a 500 mg/l, son indeseables para uso domstico.

Existen dos tipos de dureza:

Dureza Temporal: Esta determinada por el contenido de carbonatos y bicarbonatos de calcio y
magnesio. Puede ser eliminada por ebullicin del agua y posterior eliminacin de precipitados
formados por filtracin, tambin se le conoce como "Dureza de carbonatos".

Dureza Permanente: Est determinada por todas las sales de calcio y magnesio excepto
carbonatos y bicarbonatos. No puede ser eliminada por ebullicin del agua y tambin se le
conoce como "Dureza de no carbonatos".

72
Interpretacin de la Dureza:

Dureza como CaCO
3
Interpretacin
0-75 agua suave
75-150 agua poco dura
150-300 agua dura
>300 agua muy dura

En agua potable El lmite mximo permisible es de 300 mg/l de dureza.

En agua para calderas, el lmite es de cero mg/l de dureza.


Esta norma mexicana establece el mtodo de anlisis para la determinacin de dureza total en
aguas naturales, residuales y residuales tratadas.


El mtodo se basa en la formacin de complejos por la sal disdica del cido
etilendiaminotetraactico con los iones calcio y magnesio. El mtodo consiste en una valoracin
empleando un indicador visual de punto final, el negro de eriocromo T, que es de color rojo en la
presencia de calcio y magnesio y vira a azul cuando stos se encuentran acomplejados o
ausentes. El complejo del EDTA con el calcio y el magnesio es ms fuerte que el que estos
iones forman con el negro de eriocromo T, de manera que la competencia por los iones se
desplaza hacia la formacin de los complejos con EDTA desapareciendo el color rojo de la
disolucin y tornndose azul.


Bureta de 25 ml 50 ml.



Cloruro de amonio (NH
4
Cl).
Cloruro de magnesio hexahidratado (MgCl
2.
6H
2
O).
Amonaco concentrado (NH
3
).

73
Sal disdica de cido etilendiaminotetraactico dihidratado (EDTA).
Sal de Magnesio de EDTA.
Sulfato de magnesio heptahidratado (MgSO
4
7H
2
O).
Indicador de negro de eriocromo T.
2-Aminoetanol (libre de aluminio y metales pesados).
Rojo de metilo.
Carbonato de calcio anhidro (CaCo
3
).
cido clorhdrico concentrado (HCl).
cido ntrico (HNO
3
).
cido sulfrico (H
2
SO
4
).
cido perclrico (HCl
2
O
7
).
Disolucin amortiguadora. Pesar aproximadamente y con precisin 16,9 g de cloruro de
amonio (disolver en 143 ml de amonaco concentrado. Aadir aproximadamente 1.25 g de
sal de magnesio de EDTA y diluir hasta 250 ml con agua.
Si no se dispone de sal de magnesio de EDTA, mezclar, aproximadamente 1.179 g de sal
disdica de cido etilendiaminotetraactico dihidratado y 0.780 g de sulfato de magnesio
heptahidratado o 0.644 g de cloruro de magnesio hexahidratado, diluir a 50 ml con agua.

Conservar la disolucin amortiguadora en un recipiente plstico o de vidrio; se debe desechar la
disolucin cuando haya transcurrido ms de un mes de su fecha de preparacin o cuando al
aadirse 1 2 ml a la muestra, sta no pueda producir un pH de 10 0.1. Tapar
hermticamente para evitar prdidas de amonaco o adsorcin de dixido de carbono (CO
2
).

Tambin pueden adquirirse en el mercado disoluciones amortiguadoras inodoras, las cuales
constituyen una alternativa satisfactoria. Contienen sal de magnesio de EDTA y tienen la
ventaja de ser relativamente inodoras y ms estables que las amortiguadoras de NH
4
+/NH
3
.

Por lo general, las disoluciones amortiguadoras inodoras no proporcionan un punto final tan
favorable como los de NH
4
+/NH
3
a causa de su reaccin ms lenta y pueden resultar intiles
cuando el mtodo est automatizado. Preparar una de las disoluciones amortiguadoras
mezclando 55 ml de cido clorhdrico concentrado con 400 ml de agua destilada y a
continuacin aadir lentamente y agitando, 300 ml de 2-Aminoetanol (libre de aluminio y
metales pesados). Agregar aproximadamente 5 g de sal de magnesio de EDTA y diluir hasta un
litro con agua destilada.

Indicador negro de eriocromo T

Pesar aproximadamente y con precisin 0.5 g de indicador negro de eriocromo T y agregar
100 g de cloruro de sodio y triturar en el mortero hasta formar un mezcla homognea.
Guardar en un frasco color mbar. Esta mezcla se conserva en buenas condiciones para su
uso durante un ao.

74
Indicador Rojo de Metilo

Pesar aproximadamente y con precisin 0.1 g de la sal de sodio del rojo de metilo y aforar a
100 ml con agua.

Disolucin de EDTA (aproximadamente 0.01 M)

Pesar aproximadamente y con precisin 3,723 g de sal disdica del cido
etilendiaminotetraactico dihidratada; disolver en agua y diluir a un litro. Valorar con una
disolucin de carbonato de calcio.

Disolucin de carbonato de calcio (1 mg/ml)

Pesar aproximadamente y con precisin 1 g de carbonato de calcio anhidro (patrn primario
o reactivo especial bajo en metales pesados, lcalis y magnesio) en un matraz Erlenmeyer
de 500 ml. Colocar un embudo en el cuello del matraz y aadir poco a poco el cido
clorhdrico (1:1) hasta la disolucin total del carbonato de calcio. Aadir 200 ml de agua y
llevar a ebullicin durante unos minutos para eliminar el CO
2
. Enfriar, aadir unas gotas de
indicador rojo de metilo y ajustar al color naranja intermedio por adicin de amonaco 3N o
cido clorhdrico (1:1), segn se requiera. Transferir a un matraz y aforar a un litro con agua
(1 ml =1 mg de CaCO
3
).

Disolucin de hidrxido de sodio (NaOH) (aproximadamente 0.1 N)

Pesar aproximadamente 4 g de hidrxido de sodio y diluir a un litro.

Disolucin de cido clorhdrico (1:1)

Tomar 100 ml de cido clorhdrico y diluya en 100 ml de agua


Recolectar un volumen de muestra, homogneo y representativo de aproximadamente 400
ml, en un frasco de polietileno o vidrio de borosilicato. Pueden utilizarse muestras simples
y/o compuestas.
Acidificar la muestra con cido ntrico hasta pH 2 o menor inmediatamente despus de la
recoleccin. Normalmente 2 ml/l son suficientes.
Mantener la muestra en refrigeracin a 4 C hasta el momento del anlisis. El tiempo
mximo de almacenamiento previo al anlisis recomendado es de seis meses.

75

a) Tratamiento previo de muestras de aguas contaminadas y residuales:

Si la muestra contiene partculas o materia orgnica requiere un tratamiento previo al anlisis.
Se recomienda llevar a cabo una digestin con cido ntrico - cido sulfrico cido ntrico -
cido perclrico y ajustar posteriormente el pH de la disolucin a un valor de 9, utilizando
disolucin de amonaco.

b) Titulacin de muestras:

Colocar 50 ml de muestra en un matraz Erlenmeyer de 250 ml.
Aadir 1 ml 2 ml de disolucin amortiguadora. Generalmente un ml es suficiente para
alcanzar un pH de 10 1.
Aadir una cantidad adecuada (0.2 g) del indicador eriocromo negro T. La muestra debe
tomar un color vino rojizo.
Titular con la disolucin de EDTA 0.01 M, agitando continuamente hasta que desaparezcan
los ltimos matices rojizos. Aadir las ltimas gotas con intervalos de 3 a 5 segundos. En el
punto final la muestra cambia de color rojizo a azul.

Procedimiento de analisis de la dureza

a) Colocar 50 ml de muestra en un
matraz Erlenmeyer de 250 ml.
Aadir 1 ml 2 ml de disolucin
amortiguadora. Generalmente 1
ml es suficiente para alcanzar
un pH de 10 a 10.1.

76
b) Aadir 1 ml 2 ml de disolucin
amortiguadora. Generalmente
un ml es suficiente para
alcanzar un pH de 10 a 10.1.

c) Aadir una cantidad adecuada
(0.2 g) del indicador eriocromo
negro T. La muestra debe
tomar un color vino rojizo.

d) Titular con la disolucin de
EDTA 0.01 M agitando
continuamente hasta que
desaparezcan los ltimos
matices rojizos. Aadir las
ltimas gotas con intervalos de
3 5 segundos. En el punto final
la muestra cambia de color
rojizo a azul.

77
2.5.7. Clculos

a) Calcular la dureza total como se indica en la siguiente ecuacin:

(A-B)X C X 1,000
Dureza total expresada como CaCO
3
(mg/l) =
D

Donde:

A=Son los ml de EDTA gastados en la titulacin en la muestra.
B=Son los ml de EDTA gastados en la titulacin en el blanco (si fue utilizado).
C=Son los mg de CaCO
3
equivalentes a 1 ml de EDTA.
D=Son los ml de muestra.

b) Expresar la dureza total como mg/l CaCO
3
con la precisin correspondiente.

2.6. Sulfatos

NMX-AA-074-1981. " ANLISIS DE AGUA. DETERMINACIN DEL IN SULFATO, MTODO
GRAVIMTRICO

2.6.0. Introduccin

Los sulfatos se encuentran en las aguas naturales en un amplio intervalo de concentraciones,
los estndares para agua potable del servicio de salud pblica tienen un lmite mximo de 250
ppm de sulfatos, ya que a valores superiores tiene una accin "purgante.

Los lmites de concentracin, arriba de los cuales se percibe un sabor amargo en el agua son:

Sulfato de magnesio: 400 a 600 ppm

Sulfato de calcio: 250 a 400 ppm.

2.6.2. Campo de aplicacin

Este mtodo es aplicable para la determinacin del ion sulfato en aguas naturales y residuales
con un mbito de aplicacin de 10 a 100 mg/l para el mtodo gravimtrico, en este mtodo
puede ampliarse el mbito, ajustando la cantidad de la muestra, y de 10 a 60 mg/l (expresado
como SO
4
=
).

2.6.3. Principio o fundamento

El ion sulfato se precipita y se pesa como sulfato de bario despus de eliminar la slice y materia
insoluble.

78

Errores positivos

Los sulfitos y sulfuros pueden oxidarse a sulfatos y precipitarse, la materia en suspensin,
slice, cloruro de bario, nitratos y agua, frecuentemente quedan ocludos en el precipitado. Los
silicatos solubles pueden insolubilizarse durante el desarrollo del mtodo.

Errores negativos

Los sulfatos cidos de metales alcalinos pueden no precipitar totalmente como sulfato de bario,
debido a que quedan ocluidos en el precipitado como tales, y por lo tanto con un peso molecular
menor.

Nota: El cromo y el hierro interfieren en la completa precipitacin, una alta acidez solubiliza al
sulfato de bario, en cambio una baja acidez facilita la precipitacin de fosfato y carbonato.

2.6.5. Reactivos y soluciones

cido fluorhdrico concentrado.
Solucin indicadora de rojo de metilo.- Disolver 100 mg de sal sdica de rojo de metilo en
agua y diluir a 100 cm.
Solucin de cido clorhdrico 1:1.
Solucin de cloruro de bario: Disolver 100 g de cloruro de bario dihidratado en un litro de
agua, filtrar a travs de un filtro de membrana o un filtro de papel antes de usar, 1 cm de
esta solucin es capaz de precipitar aproximadamente 40 mg de sulfato.
Reactivo de nitrato de plata - cido ntrico: Disolver 8.5 g de nitrato de plata y 0.5 cm de
cido ntrico concentrado en 500 cm de agua.
Papel filtro de poro fino con contenido de cenizas conocido.

2.6.6. Aparatos y materiales

Bao de vapor.
Horno de secado, equipado con control de temperatura.
Mufla con indicador de temperatura.
Desecador.
Balanza analtica con sensibilidad de 0.1 mg.
Cpsula de platino.


a) Eliminacin de slice.

Si la concentracin de slice excede de 25 mg/l evaporar la muestra a sequedad en una
cpsula de platino en un bao de vapor.

79
Agregar 1 cm de cido fluorhdrico concentrado (ver Nota 1), e inclinar la cpsula y rotar
hasta que el cido est en contacto con el residuo.

Nota: Esta operacin debe efectuarse bajo campana y con el equipo de proteccin adecuado.

Continuar con la evaporacin a sequedad, completar el secado en un horno a 453 K
(180 C) y si est presente la materia orgnica, carbonizarla a la flama de un mechero.
Dejar enfriar y humedecer el residuo con 2 cm de agua y 1 cm de cido fluorhdrico,
evaporar a sequedad en un bao de vapor.
Aadir 2 cm de cido fluorhdrico y llevar el residuo soluble en agua caliente y filtrar.
Lavar la slice insoluble con porciones pequeas de agua caliente, Continuar los filtrados
y lavar.

b) En caso de que la muestra tuviera una concentracin menor de 25 mg/l de slice, efectuar el
procedimiento anterior sin la adicin de cido fluorhdrico. Pasarla directamente de la flama
del mechero a una mufla a 1073 K (800 C) durante una hora.

c) Transferir con pipeta volumtrica a un vaso de precipitados, un volumen de muestra
clarificada que contenga no ms de 50 mg de ion sulfato y ajustar a un volumen de 250 cm.

d) Llevar a un pH de 4.5 - 5 con la solucin de cido clorhdrico 1:1, usando un potencimetro
o solucin indicadora de rojo de metilo.

e) Adicionar de 1 a 2 cm de la solucin de cido clorhdrico 1:1, calentar la solucin a
ebullicin y agitar lentamente, agregar lentamente solucin de cloruro de bario caliente
hasta que la precipitacin sea completa. Aadir aproximadamente 2 cm en exceso de la
solucin de cloruro de bario. Si la cantidad de precipitado es pequea, agregar un total de 5
cm de solucin de cloruro de bario.

f) Digerir el precipitado a 358 5 K (85 5 C) durante 11 1 hora y no menos de 2 horas.

g) Mezclar una pequea cantidad de la pulpa del papel filtro de cenizas conocidas con el
precipitado de sulfato de bario y filtrar a temperatura ambiente. La filtracin de la pulpa
facilita y reduce la tendencia del precipitado a separarse.

h) Lavar el precipitado con porciones pequeas de agua caliente, para que los lavados estn
libres de cloruros y hasta que 10 cm de las aguas de lavado no produzcan turbidez al
adicionarles 1 cm del reactivo de nitrato de plata cido ntrico.

i) Secar el papel filtro y precipitado en estufa, pasar a un mechero evitando que el papel filtro
se inflame y posteriormente llevar a una mufla a 1073 K (800 C) durante una hora.

j) Enfriar en desecador y pesar.

80
2.6.8. Clculos

El contenido del ion sulfato en mg/l se conoce aplicando la frmula siguiente:

1 mg de BaSO
4
=0.4115 mg de SO
4
=

A x O.4115 x 1000
mg de SO
4
=
/l=
B

Donde:

A =Peso del sulfato de bario, en mg.
B =Volumen de la muestra original en cm.
El mtodo gravimtrico tiene una precisin del 1 %.

2.7. Grasas y aceites

NMX-AA-005-SCFI-2000. ANLISIS DE AGUA - DETERMINACIN DE GRASAS Y ACEITES
RECUPERABLES EN AGUAS NATURALES, RESIDUALES Y RESIDUALES TRATADAS -

2.7.0. Introduccin

Este mtodo permite una estimacin del contenido de grasas y aceites en aguas naturales,
aguas residuales y aguas residuales tratadas al determinar gravimtricamente las sustancias
que son extradas con hexano de una muestra acuosa acidificada. La determinacin de grasas
y aceites es indicativa del grado de contaminacin del agua por usos industriales y humanos.

En la determinacin de grasas y aceites no se mide una sustancia especfica sino un grupo de
sustancias con unas mismas caractersticas fisicoqumicas (solubilidad). Entonces la
determinacin de grasas y aceites incluye cidos grasos, jabones, grasas, ceras, hidrocarburos,
aceites y cualquier otra sustancia susceptible de ser extrada con hexano.


Esta norma mexicana establece un mtodo de anlisis para la determinacin de grasas y
aceites recuperables en aguas naturales, residuales y residuales tratadas.

2.7.2. Principio

Este mtodo se basa en la adsorcin de grasas y aceites en tierra de diatomeas, los cuales son
extrados en un Soxhlet empleando hexano como disolvente. Una vez terminada la extraccin
se evapora el hexano y se pesa el residuo que ha quedado en el recipiente; siendo este valor el
contenido de grasas y aceites.

81


se indique otro grado. Cuando se indique agua debe entenderse agua que cumpla con las
siguientes caractersticas: a) Resistividad, megohm-cm a 25 C: 0.2 mnimo; b) Conductividad,
S/cm a 25 C: 5.0 mximo y c) pH: 5.0 a 8.0.

Hexano (C
6
H
14
).
2
SO
4
).
Suspensin de tierra de diatomeas-slice o tierra de slice de aproximadamente 10 g/l de
agua.
cido clorhdrico (1:1): Mezclar volmenes iguales de cido clorhdrico concentrado y agua.
cido sulfrico (1:1): Mezclar volmenes iguales de cido sulfrico concentrado y agua.
Aceite de referencia: Pesar aproximadamente y con precisin la cantidad requerida de una
mezcla de aceite de referencia (mezcla de mineral SAE20 y vegetal mixto) acorde a la
cantidad esperada de grasas y aceites en la muestra y agregar la mezcla a un litro de agua.

2.7.4. Materiales

Cartuchos de extraccin de celulosa para Soxhlet.
Papel filtro con tamao de poro fino.
Embudo Bchner.
Desecador.

2.7.5. Equipo

Equipo de extraccin Soxhlet.
Bomba de vaco u otra fuente de vaco.
Estufa elctrica capaz de mantener 103 C.
Estufa elctrica de vaco capaz de mantener 80 C.
Equipo de filtracin a vaco.


De la superficie del cuerpo de agua colectar un volumen de aproximadamente 1 litro de muestra
en un frasco de vidrio de boca ancha y tapa de cubierta de politetrafluoroetileno, poliamida, PVC
polietileno o metlica. Ya que pueden ocurrir prdidas de grasas y aceites por el equipo de
muestreo, no se permite la colecta de una muestra compuesta. Dado que la muestra entera se
ocupa en esta prueba, no se pueden tomar alcuotas de la muestra para realizar otro tipo de
anlisis.

82
En caso de existir la presencia de aceites emulsionados en el agua a muestrear, la muestra se
toma de 20 a 30 cm de profundidad, cuando no haya mucha turbulencia para asegurar una
mayor representatividad.

La muestra debe preservarse por acidificacin con cido clorhdrico 1:1, a un valor de pH menor
a 2 y refrigerarlas a 4 C. El tiempo mximo de almacenamiento previo al anlisis, es de 28
das.


b) Medir el pH de las muestras el cual debe ser menor de 2, si no tiene este valor acidifique
con cido clorhdrico 1:1 cido sulfrico 1:1.

c) Para muestras con un pH menor de 8 unidades generalmente es suficiente con adicionar 5
ml de cido clorhdrico 1:1 2 ml de cido sulfrico 1:1.

d) Preparar los matraces de extraccin introducindolos a la estufa a una temperatura de 103
C - 105 C, enfriar en desecador y pesarlos, repetir el procedimiento hasta obtener el peso
constante de cada uno de los matraces.

e) Preparar el material filtrante colocando un papel filtro en el embudo Bchner, colocar el
embudo en un matraz Kitazato y agregar 100 ml de la suspensin de tierra de diatomeas-
slice sobre el filtro, aplicar vaco y lavar con 100 ml de agua.

f) Transferir el total de la muestra acidificada al embudo Bchner preparado aplicando vaco
hasta que cese el paso de agua. Medir el volumen de la muestra.

g) Con ayuda de unas pinzas, transferir el material filtrante a un cartucho de extraccin.
Limpiar las paredes internas del embudo y el frasco contenedor de la muestra, as como la
parte interna de la tapa del frasco con trozos de papel filtro previamente impregnados de
disolvente (hexano) tener cuidado en remover la pelcula de grasa y los slidos
impregnados sobre las paredes; colocar los trozos de papel en el mismo cartucho.

h) Secar el cartucho en una estufa a 104 1 C, por un perodo de 30 min. Transcurrido este
perodo colocar en el equipo Soxhlet.

i) Adicionar el volumen adecuado de hexano al matraz de extraccin previamente puesto a
peso constante y preparar el equipo Soxhlet. Evitar tocar con las manos el cartucho y el
matraz de extraccin, para ello utilizar pinzas guantes de ltex.

j) Colocar el equipo de extraccin sobre la parrilla de calentamiento, controlar la temperatura
del reflujo y extraer a una velocidad de 20 ciclos/hora durante un perodo de 4 hrs.

k) Una vez terminada la extraccin retirar el matraz del equipo Soxhlet, y evaporar el
disolvente.

83
l) El matraz de extraccin libre de disolvente se coloca en el desecador hasta que alcance la
temperatura ambiente.

m) Pesar el matraz de extraccin y determinar la concentracin de grasas y aceites
recuperables.

n) Analizar un blanco de reactivo bajo las mismas condiciones de la muestra.

2.7.8. Clculos

a) Calcular las grasas y aceites recuperables (G y A) en la muestra usando la siguiente
ecuacin:

(A - B)
G y A (mg/l)=
V

Donde:

A=Es el peso final del matraz de extraccin (mg).
B=Es el peso inicial del matraz de extraccin (mg).
V=Es el volumen de la muestra, en litros.

b) Restar al resultado obtenido de la muestra el valor del blanco de reactivo.

c) Reportar los resultados del anlisis en mg/l.


Los hexanos tienen la facilidad de disolver no solamente las grasas y aceites minerales y
vegetales, sino tambin otras sustancias como azufre elemental, tintes y otros compuestos
orgnicos.

Existen prdidas importantes de hidrocarburos de cadena corta y aromticos simples con
puntos de ebullicin menores a 150 C.

Puede obtenerse interferencia positiva durante el secado del residuo debido a la adsorcin de
humedad si no se utiliza un desecador.

84
2.8. Cloro total

NMX-AA-100-1987. CALIDAD DEL AGUA- DETERMINACIN DE CLORO TOTAL - METODO
IODOMTRICO

2.8.0. Importancia ambiental de la determinacin del cloro total

El tratamiento por cloracin del agua sirve principalmente para destruir los microorganismos que
pueden ocasionar daos a la salud. El cloro acta oxidando la materia orgnica. Un beneficio
secundario es mejorar la calidad del agua, como resultado de la reaccin del cloro con
amonaco, fierro, manganeso, sulfuro y algunos compuestos orgnicos.

El cloro puede producir efectos adversos como el de intensificar el sabor y olor caractersticos
de fenoles y otros compuestos orgnicos, la formacin de compuestos organoclorados que son
potencialmente carcingenos y la formacin de cloraminas que producen efectos nocivos a la
vida acutica, entre otros.


Esta Norma Mexicana establece un
mtodo iodomtrico para la
determinacin de cloro total en agua
potable, cruda y tratada. El mtodo es
aplicable a concentraciones de cloro de
0.7 a 15 mg/l.

Albercas uso del cloro

2.8.2. Principio

El cloro en solucin cida, oxida el in ioduro a iodo, el cual se titula con una solucin patrn de
tiosulfato de sodio empleando como indicador almidn. La titulacin se lleva a cabo a un pH
menor de 4, porque la reaccin no es estequiomtrica a pH neutro debido a la oxidacin parcial
del tiosulfato a sulfato.


Causan interferencias positivas las formas oxidadas de manganeso, agentes oxidantes y
agentes reductores como sulfuros orgnicos.
La titulacin a pH neutro minimiza el efecto interferente de iones frricos y nitritos pero la
titulacin cida es preferible, ya que algunas formas de cloro combinado no reaccionan a pH
7. Se emplea cido actico en la titulacin; el cido sulfrico incrementa las interferencias y
nunca debe emplearse cido clorhdrico.

85
2.8.4. Material

Material comn de laboratorio.

2.8.5. Reactivos

Agua destilada exenta de cloro.
cido actico concentrado (glacial).
Ioduro de potasio (KI).
Solucin indicadora de almidn: Disolver 0.5 g de almidn agregndolo lentamente y con
agitacin en 100 ml de agua hirviendo. Preservar con 125 mg de cido saliclico, 400 mg de
cloruro de zinc o una combinacin de 400 mg de propionato de sodio y 200 mg de azida de
sodio.
Solucin patrn de tiosulfato de sodio 0.1N: Disolver 25 g de tiosulfato de sodio (Na
2
S
2
O
3
.
5H
2
O) y aforar a 1000 ml con agua hervida fra y estandarizar con una solucin de
dicromato de Potasio (K
2
Cr
2
O
7
) despus de 2 semanas de almacenamiento. Este
almacenamiento es necesario para permitir la oxidacin de cualquier Ion bisulfito presente.
Adicionar 1 ml de cloroformo (CHCl
3
) con el fin de minimizar la accin bacteriana.

Valorar el tiosulfato de sodio 0.1N, mediante el Mtodo de dicromato.

Solucin patrn de dicromato de potasio 0.l00N: Disolver 4.904 g de K
2
Cr
2
O
7
anhidro
calidad patrn primario en agua y aforar a 1000 ml. Almacenar en frasco de vidrio mbar
con tapn esmerilado.

A 80 ml de agua aadir, agitando constantemente, 1 ml de cido sulfrico concentrado
(resbalndolo por las paredes del matraz), 10 ml de K
2
Cr
2
O
7
0.l00N y 1 gramo de KI. Mantener
durante 6 minutos en la oscuridad y titular con Na
2
S
2
O
3
(0.1N) hasta un color amarillo paja.
Aadir 1 ml de solucin indicadora de almidn y continuar la titulacin hasta el vire del color azul
a verde tenue.

1
Normalidad Na
2
S
2
O
3
=
ml

Na
2
S
2
O
3
consumidos

Solucin patrn de tiosulfato de sodio 0.01 N o 0.025 N: De la solucin patrn de tiosulfato
de sodio 0.0lN, tomar 100 ml y aforar a 1000 ml con agua. Titular la solucin por el mtodo
mencionado en 6.4 usando dicromato de potasio 0.010 N 0.025 N. Esta solucin debe ser
valorada diariamente.

Nota: Soluciones patrn 0.010 N y 0.025 N, son equivalentes respectivamente a 354.5 g y
886.3 g de C1 como Cl
2
en 1 ml.

Solucin de iodo 0.1 N: Disolver 40 g de KI en 25 ml de agua; aadir 13 g de iodo
resublimado y agitar hasta disolver. Transferir a un matraz volumtrico de un litro y aforar.
Estandarizar la solucin como sigue:

86
Transferir exactamente de 40 a 50 ml de solucin patrn de tiosulfato 0.1 N a un matraz y
titular con solucin de iodo 0.1 N utilizando solucin de almidn como indicador.

Alternativamente, preparar directamente la solucin patrn de iodo 0.10 N, pesando 12.69 g
de estndar primario de iodo resublimado. Debido a que pueden ocurrir prdidas por la
volatilidad tanto del slido como de la solucin, transferir inmediatamente el slido a la
disolucin de KI como se especifica anteriormente. No dejar nunca la solucin en
recipientes abiertos durante perodos prolongados.

Solucin patrn de iodo 0.282 N: Disolver en un matraz volumtrico de un litro 25 g de KI
con un poco de agua y aadir la cantidad suficiente de solucin de iodo 0.1 N estandarizada
para obtener una solucin 0.0282 N y aforar a un litro con agua. Para un trabajo preciso, es
conveniente estandarizar diariamente de acuerdo con lo indicado en el inciso 6.6, utilizando
de 5 a 10 ml de Na
2
S
2
O
3
. Almacenar en frascos mbar o en la oscuridad; proteger la
solucin de la luz directa en todo momento y evitar todo contacto con hule.

2.8.6. Muestreo y almacenamiento

El cloro en solucin acuosa es inestable y el contenido de cloro de la muestra decrece
rpidamente. La exposicin de las muestras a la luz o la agitacin fuerte, disminuyen la cantidad
de cloro. Las muestras pueden almacenarse por un perodo mximo de 2 hrs. En relacin a la
cantidad de muestra, seleccionar un volumen de muestra de tal manera que gaste entre 0.2 y
20 ml de tiosulfato 0.01 N. Se recomienda usar 100 ml de muestra.


a) Preparacin de la muestra: En un matraz Erlenmeyer poner el volumen de muestra
seleccionado. Agregar 3 ml

de cido actico para obtener un pH menor de 4; agregar
aproximadamente 1 ml de KI al 10%; agitar la muestra y ponerla en la oscuridad por un
perodo de 5 min.

b) Titulacin: Titular directamente con Na
2
S
2
O
3
0.025 N 0.01 N a un color amarillo paja. Aadir
en ese momento 1 ml de solucin indicadora de almidn y titular hasta que el color azul
formado desaparezca.

c) Titulacin del blanco: Para correccin de resultados por impurezas, agentes oxidantes o
reductores, tomar un volumen de agua igual al de la muestra y seguir el mismo
procedimiento de 8.1 a 8.3. Titular como se indica en 8.4.1 u 8.4.2 de acuerdo al color
desarrollado.

Si se desarrolla un color azul, titular con Na
2
S
2
O
3
0.01 N 0.025 N hasta la desaparicin del
color.

Si no hay desarrollo del color azul, titular con una solucin de iodo 0.0282 N hasta que el color
azul aparezca y continuar la titulacin con Na
2
S
2
O
3
0.01 N 0.025 N, anotando la diferencia.

87
2.8.8. Clculos

a) Para soluciones patrn de cloro:

(A -B) x N x 35.45
mg C1 como Cl
2
/ml =
ml de muestra

b) Para determinacin de cloro total en muestras de agua:

(A -B) x N x 35450
mg C1 como Cl
2
/L =
ml de muestra

Donde:

A =Volumen de Na
2
S
2
O
3
gastado en la muestra (ml).
B =Valor absoluto del volumen de Na
2
S
2
O
3
gastado en el blanco (ml).
N =Normalidad del Na
2
S
2
O
3
.

2.9. Fsforo total

NMX-AA-029-SCFI-2001. ANLISIS DE AGUAS - DETERMINACIN DE FSFORO TOTAL

2.9.0. Introduccin

El fsforo generalmente se encuentra en aguas naturales, residuales y residuales tratadas
como fosfatos. stos se clasifican como ortofosfatos, fosfatos condensados y compuestos
rgano fosfatados. Estas formas de fosfatos provienen de una gran cantidad de fuentes, tales
como productos de limpieza, fertilizantes, procesos biolgicos, etc.

El fsforo es un nutriente esencial para el crecimiento de organismos, por lo que la descarga de
fosfatos en cuerpos de aguas puede estimular el crecimiento de macro y microorganismos
fotosintticos en cantidades nocivas.


Esta norma mexicana establece dos mtodos de anlisis para la determinacin de fsforo total
en aguas residuales, naturales y residuales tratadas.


Mtodo cloruro estaoso

Este mtodo se basa en la reaccin del fsforo contenido en la muestra como ortofosfato con el
cido molbdico para formar el cido 12-molibdofosfrico segn la reaccin:

88
H
3
PO
4
+12 (NH
4
)
2
MoO
4
+21 H
+
(NH
4
)
3
PO
4
12 MoO
3
+21 NH
4
+
+12 H
2
O

El cido 12-molibdofosfrico es reducido por el cloruro de estao a azul de molibdeno,
compuesto de composicin desconocida que contiene una mezcla de Mo (VI) y Mo (V), que
absorbe a 690 nm. La intensidad del color azul formado depende de la concentracin de
fosfatos adicionados al heteropolicido. El mtodo es aplicable cuando el contenido de fsforo
en las muestras se encuentra entre las concentraciones de 0.01 mg P/L a 6 mg P/L.

Todo el fsforo contenido en la muestra debe estar como in ortofosfato (PO
4
)
3-
, ya que el mtodo
espectrofotomtrico es esencialmente especfico para este in ortofosfato (PO
4
)
3-
. La materia
orgnica de la muestra es destruida por medio de una digestin con persulfato de amonio y cido
sulfrico, rompiendo las ligaduras orgnicas del fsforo (C-P y/o C-O-P), e hidrolizando los
polifosfatos a ortofosfatos.

Mtodo cido vanadomolibdofosfrico

En una solucin diluida de ortofosfatos, el molibdato de amonio reacciona en condiciones
cidas con el vanadato para formar un heteropolicido, cido vanadomolibdofosfrico. En la
presencia de vanadio, se forma cido vanadomolibdofosfrico de color amarillo. La longitud de
onda a la cual la intensidad del color es medida depende de la deteccin requerida. La
intensidad del color amarillo es directamente proporcional a la concentracin de fosfato.


Generales

Agua: Debe entenderse agua que cumpla con las siguientes caractersticas: Resistividad,
megohm-cm a 25 C: 0.2 min.; Conductividad, S/cm a 25 C: 5.0 mx., y pH: 5.0 a 8.0.
Fosfato monobsico de potasio anhidro (KH
2
PO
4
).
Disolucin madre de fosfato. Pesar aproximadamente y con precisin 219,5 mg de fosato
monobsico de potasio anhidro previamente secado a 105 C durante dos horas, aforar con
agua a un litro; 1 ml =50 mg de fsforo como PO
4
3-
.
Fenolftalena.
2
SO
4
).
Persulfato de amonio [(NH
4
)
2
S
2
O
8
] o persulfato de potasio (K
2
S
2
O
8
).
Disolucin de cido fuerte. Cuidadosamente adicionar 300 ml de cido sulfrico concentrado
a aproximadamente 600 ml de agua. Dejar enfriar y agregar 4 ml de cido ntrico
concentrado y aforar a un litro con agua.


cido ntrico concentrado (HNO
3
).
Glicerol (C
3
H
8
O
3
).
Cloruro estaoso dihidratado (SnCl
2
2H
2
O).

89
Heptamolibdato de amonio tetrahidratado [(NH
4
)
6
Mo
7
O
24
4H
2
O].
Disolucin de cido fuerte: Cuidadosamente adicionar 300 ml de cido sulfrico concentrado
a aproximadamente 600 ml de agua. Dejar enfriar y agregar 4 ml de cido ntrico
concentrado y aforar a un litro con agua.
Disolucin de cloruro estaoso: Pesar aproximadamente y con precisin 2,5 g de cloruro
estaoso dihidratado y disolver en 100 ml de glicerol. Calentar en bao de agua y agitar con
una varilla de vidrio. El reactivo es estable y no requiere de la adicin de conservadores o
almacenamiento especial.
Disolucin de heptamolibdato de amonio tetrahidratado: Disolver 25 g de heptamolibdato de
amonio tetrahidratado en 75 ml de agua. Con mucho cuidado agregar 280 ml de cido
sulfrico a 400 ml de agua, enfriar y adicionar al heptamolibdato de amonio tetrahidratado y
diluir a un litro.

Mtodo vanadomolibdofosfrico

Carbn activado libre de fosfatos.
Metavanadato de amonio (NH
4
VO
3
).
cido clorhdrico (1:1). Agregar cuidadosamente 100 ml de cido clorhdrico concentrado a
100 ml de agua, lentamente. La concentracin del cido no es crtica para la determinacin,
pero se recomienda una concentracin final en la muestra de 0.5 N.
Disolucin A. Pesar aproximadamente y con precisin 25 g de heptamolibdato de amonio, y
diluir en 300 ml de agua.
Disolucin B. Pesar aproximadamente y con precisin 1,25 g de metavanadato de amonio y
diluir en 300 ml de agua destilada, calentar hasta ebullicin. Enfriar y aadir 330 ml de cido
clorhdrico concentrado. Dejar enfriar a temperatura ambiente.
Disolucin reactivo vanado-molibdato: Adicionar la disolucin A a la disolucin B, mezclar y
aforar a un litro.
Disolucin de hidrxido de sodio (1 N). Pesar aproximadamente y con precisin 40 g de
hidrxido de sodio y diluir con 500 ml de agua, agitar y dejar enfriar, agregar ms agua y en
cada ocasin agitar y dejar enfriar hasta que el volumen final sea de un litro.


Equipo

Placa de calentamiento: Una superficie de 30 cm X 50 cm es adecuada.
Autoclave: Puede utilizarse una autoclave capaz de alcanzar de 98 kPa a 137 kPa en lugar
de la placa de calentamiento.
Espectrofotmetro: Para utilizarse de 190 nm a 900 nm y equipado con celda de 1 cm de
paso ptico de luz.

90
Materiales

Embudo de filtracin y papel filtro cualitativo Whatman 42 o equivalente.


Tomar un mnimo de 500 ml de muestra en envases de plstico. Pueden utilizarse muestras
compuestas o simples.
Si la muestra solamente es analizada para determinar la forma de fsforo disuelto, filtrar la
muestra inmediatamente despus de la colecta a travs de un papel filtro de poro fino.
Conservar en refrigeracin a 4 C.
El tiempo mximo de almacenamiento previo al anlisis es de 28 das.

2.9.6. Calibracin

Se debe contar con un registro de verificacin de la calibracin de los equipos y materiales
siguientes:

Material volumtrico.
Espectrofotmetro. Para utilizarse de 190 a 900 nm y equipado con celda de 1 cm de paso
ptico de luz.


Curva de calibracin para un intervalo de trabajo de 0.3 a 2 mg/l. Preparar las disoluciones
estndar con un mnimo de 4 puntos en un intervalo entre 0.3 a 2 mg P/L en matraces
volumtricos de 100 ml y desarrollar el color como se indica en el captulo 9 Procedimiento.

Mtodo vanadomolibdofosfrico

Curva de calibracin para un intervalo de trabajo entre 1 mg/l a 20 mg/l: Preparar las
disoluciones estndar un mnimo de 4 puntos en el intervalo de 1 mg/l a 20 mg/l en matraces
volumtricos de 100 ml y desarrollar el color como se indica en el captulo 9 Procedimiento.


Digestin de la muestra

Preparacin de la muestra por medio de la digestin con persulfato:

Usar 50 ml o la porcin adecuada de la muestra bien mezclada. Adicionar una gota de
fenolftalena. Si aparece un color rojo, adicionar gota a gota cido sulfrico concentrado hasta
que desaparezca el color. Posteriormente adicionar 1 ml de disolucin de cido fuerte y 0.4 g de
persulfato de amonio 0.5 g persulfato de potasio.

91
Calentar hasta que rompa la ebullicin y mantenerla sobre la placa de calentamiento, de 30 a
40 minutos hasta que el volumen final alcanzado sea de 10 ml. Los compuestos
organofosforados pueden requerir de 1.5 a 2 horas para su digestin completa. Enfriar, diluir a
30 ml con agua, adicionar una gota de fenolftalena, y neutralizar hasta desvanecer a un color
rosa plido con la disolucin de hidrxido de sodio. Alternativamente, calentar por 30 minutos
en una autoclave u olla de presin de 98 a 137 KPa. Enfriar, aadir una gota de fenolftalena y
neutralizar hasta desvanecer a un color rosa plido con la disolucin de hidrxido de sodio.
Aforar a 100 ml con agua destilada. En algunas muestras puede formarse un precipitado en
esta fase, pero no se debe filtrar. Mezclar bien para cualquier subdivisin de la muestra. El
precipitado (posiblemente de fosfato de calcio) se disuelve bajo condiciones cidas de la prueba
colorimtrica para determinar fsforo.


Ajustar el pH de la muestra. A 100 ml de muestra que contenga no ms de 200 mg P y libre de
color y turbidez adicionar 1 gota de fenolftalena. Si la disolucin tiene un color rosado, adicionar
unas cuantas gotas de disolucin de cido fuerte para neutralizar.

Desarrollo del color en la muestra. Adicionar, agitando fuertemente despus de cada adicin, 4
ml de disolucin de heptamolibdato de amonio tetrahidratado y 0.5 ml (10 gotas) de disolucin
de cloruro estaoso. La intensidad del color depende de la temperatura ambiente de la
disolucin final, incrementndose sta alrededor de 1 % por cada grado centgrado ms de
temperatura ambiente. Por lo que es importante realizar las mediciones a la misma temperatura.

Medicin de color. El tiempo en el cual se realiza la medicin es importante para tener un buen
resultado, la medicin debe de efectuarse despus de 10 minutos de haber desarrollado el
color, pero antes de 12 minutos utilizar el mismo intervalo de tiempo para todas las mediciones,
medir la intensidad de color espectrofotomtricamente a 690 nm y comparar contra la curva de
calibracin, utilizar como blanco agua.

NOTA.- Es necesario tener un blanco de agua y un blanco de reactivos. Debido a que el color
se desarrolla primero de manera progresiva y posteriormente se desvanece, mantener siempre
condiciones iguales de tiempos de desarrollo de color y medicin para muestras y estndares.
Preparar al menos un estndar por cada lote de muestras o una cada da que se realiza la
prueba. La curva de calibracin es lineal en un intervalo de concentraciones de 0.3 mg/l a 2
mg/l.

Mtodo cido vanadomolibdofosfrico

Ajustar el pH de la muestra. Si la muestra tiene un pH mayor a 10, adicionar una gota de
fenolftalena a 50ml de la muestra y despus eliminar el color rosa con una disolucin de cido
clorhdrico (1:1), antes de diluir a 100 ml.

Remocin del color de las muestras. Remover el exceso de color en las muestras por medio de
la adicin de 200 mg de carbn activado a una muestra de 50 ml en un matraz Erlenmeyer y
agitar por 5 min. Posteriormente filtrar para remover el carbn activado. Comprobar los fosfatos
de cada lote de carbn activado.

92

Desarrollo del color en la muestra. Tomar una alcuota que contenga de 0.05 mg a 1 mg de
fsforo, en un matraz volumtrico de 50 ml. Aadir 10 ml de la disolucin reactivo vanado-
molibdato y diluir hasta la marca con agua. Preparar un blanco usando una cantidad de agua
equivalente a la alcuota de la muestra. Despus de 10 minutos ms, medir la absorbancia de
una muestra contra un blanco a una longitud de onda de 400 a 490 nm, dependiendo de la
sensibilidad deseada. El color es estable por das y su intensidad no se ve afectada por las
variaciones de la temperatura ambiente.

Los intervalos de concentracin para diferentes longitudes de onda son:

Intervalo de P (mg/l) Longitud de onda (nm)
1.0. - 50. 400
2.0 10 420
4.0 20 470

2.9.8. Clculos

a) Calcular la concentracin de la muestra por medio de la ecuacin obtenida de la curva de
calibracin y que es representada por la siguiente ecuacin: Y = mX + b

Donde:

M =Es la pendiente.
B =Es la ordenada al origen.
Y =Es la absorbancia.
X =Es la concentracin (mg P/L).

b) En caso de haber dilucin de la muestra a lo largo del desarrollo del mtodo (digestin y
alcuota de muestra), utilizar la siguiente ecuacin:

mg P/L =concentracin x factor de dilucin

c) Reportar los resultados en mg P/L con dos dcimas, con la precisin correspondiente.


Arseniato, fluoruro, torio, bismuto, sulfuro, tiosulfato, tiocianato o excesos de molibdato
interfieren. El hierro en su forma ferrosa produce un color azul, pero no afecta a los resultados,
si su concentracin es menor a 100 mg/l. La interferencia de sulfuro puede eliminarse por
oxidacin con agua de bromo. Los siguientes iones no interfieren en concentraciones superiores
a 1 g/L: Al
3+
, Fe
3+
, Mg
2+
, Ca
2+
, Ba
2+
, Sr
2+
, Li
+
, Na
+
, K
+
, NH
4
+
, Cd
2+
, Mn
2+
, Pb
2+
, Hg
2
2+
, Sn
2+
, Cu
2+
,
Ni
2+
, Ag
+
, U
4+
, Zr
4+
, AsO
3
-
, Br
-
, CO
3
2-
, ClO
4
-
, CN
-
, IO
3
-
, SiO
4
4-
, NO
3
-
, NO
2
-
, SO
4
2-
, SO
3
2-
,
pirofosfato, molibdato, tetraborato, selenato, benzoato, citrato, oxalato, lactato, tartrato, formiato
y salicilato.

93
2. 10. pH

NMX-AA-008-SCFI-2000 ANLISIS DE AGUA - DETERMINACIN DEL pH - MTODO DE

2.10.1. Importancia de la determinacin del pH

En 1909, el qumico dans Sorensen defini el potencial hidrgeno (pH) como el logaritmo
negativo de la concentracin molar de los iones hidrgeno. Esto es: pH =- log [H
+
]. Desde
entonces, el trmino pH ha sido universalmente utilizado por la facilidad de su uso, evitando as
el manejo de cifras largas y complejas.

Por ejemplo, una concentracin de [H
+
] =1x10
-8
M (0.00000001), es simplemente un pH de 8 ya
que: pH=- log [10
-8
]

=8.

La relacin entre pH y concentracin de iones H se puede ver en la siguiente tabla, en la que se
incluyen valores tpicos de algunas sustancias conocidas:

94
El valor de pH de las disoluciones acuosas es de gran importancia en la industria para definir la
calidad de las mismas. Este valor se requiere para calcular el ndice de Langelier que permite
evaluar la agresividad o el poder incrustante del agua.

El valor de pH es un parmetro regulado por lmites mximos permisibles en descargas de
aguas residuales al alcantarillado o a cuerpos receptores, tambin es un parmetro de calidad
del agua para usos y actividades agrcolas, para contacto primario y para el consumo humano.

La determinacin del pH en el agua es una medida de la tendencia de su acidez o de su
alcalinidad. No mide el valor de la acidez o alcalinidad. Un pH menor a 7 indica una tendencia
hacia la acidez, mientras que un valor mayor a 7muestra una tendencia hacia lo alcalino.

La mayora de las aguas naturales tienen un pH entre 4 y 9, aunque muchas de ellas tienen un
pH ligeramente bsico debido a la presencia de carbonatos y bicarbonatos. Un pH muy cido o
muy alcalino, puede ser indicio de una contaminacin industrial.

El valor del pH en el agua, es utilizado tambin cuando nos interesa conocer su tendencia
corrosiva o incrustante, y en las plantas de tratamiento de agua. Este mtodo determina el pH,
midiendo el potencial generado (en milivolts) por un electrodo de vidrio que es sensible a la
actividad del in H
+
, este potencial es comparado contra un electrodo de referencia, que genera
un potencial constante e independiente del pH. El electrodo de referencia que se utiliza es el de
calomel saturado con cloruro de potasio, el cual sirve como puente salino que permite el paso
de los milivolts generados hacia al circuito de medicin.

La cadena electroqumica de este sistema de medicin es:

Hg / Hg2Cl2 - Sol Sat KCl // Vidrio / HCl 0.1N / Ag - AgCl

En el siguiente esquema se muestran los electrodos utilizados:

95

2.10.2. Toma de la muestra

Las muestras para determinar pH, debern ser tomadas en recipientes de polipropileno y
asegurndose que estn bien tapadas, se recomienda analizar el pH lo ms pronto posible y
evitar la exposicin al aire, en especial las muestras de aguas alcalinas, ya que el CO
2
del aire,
tiende a reaccionar con la alcalinidad de la muestra y variar su pH.

Cuando sea posible, se efecta la determinacin de pH directamente en el punto de muestreo
sin extraer muestra, sumergiendo los electrodos en el cuerpo de agua. Cuando sea preciso
extraer una muestra, se toma un volumen mnimo de 100 ml en un envase de polietileno o de
vidrio limpio y se determina pH de inmediato.

Para determinacines de pH en el laboratorio, despus de registrar la temperatura del agua en
el punto de muestreo, se toma un volumen mnimo de 100 ml de muestra en un recipiente de
vidrio borosilicato limpio recubierto externamente con pintura negra para reducir las reacciones
de fotosntesis. El recipiente debe llenarse completamente con la muestra y taparse de forma
que no quede aire en contacto con la muestra. No debe aadirse aditivo alguno. El transporte
de la muestra al laboratorio debe efectuarse de inmediato en condiciones de refrigeracin a 4
C. La determinacin del pH en el laboratorio debe efectuarse de inmediato despus de la
recepcin de la muestra, a la misma temperatura que la del punto de muestreo. El tiempo
transcurrido entre el muestreo y la determinacin no debe exceder de 2 horas y sealarse en el
informe final de laboratorio as como la temperatura a la que se efectu la determinacin.



cido Clorhdrico concentrado (HCl).
Disolucin de cido clorhdrico (1:9): Adicionar un volumen de cido clorhdrico concentrado
(seccin 6.1) a 9 volmenes de agua.
Disoluciones amortiguadoras comerciales de pH nominal cercano a 4, 7 y 10. cuyo valor de
pH se conozca con dos cifras decimales.
Carbonato de Calcio bajo en lcali (CaCO
3
).
Cloruro de Potasio (KCl).
Disolucin comercial de relleno de electrodos de referencia de plata/cloruro, de plata o
calomel.
Timol cristalizado (5-metilo-2-isopropilofenol).
Tetraoxalato de Potasio (KH
3
(C
2
O
4
)
2
.
2H
2
O).
Monohidrgenotartrato de Potasio (KHC
4
H
4
O
6
).
Hidrgenoftalato de Potasio (KHC
8
H
4
O
4
).
Fosfato de Potasio monobsico (KH
2
PO
4
).
Fosfato de Sodio dibsico (Na
2
HPO
4
).

96
Borato de Sodio decahidratado (Na
2
B
4
O
7
.
10H
2
O).
Bicarbonato de Sodio (NaHCO
3
).
Hidrxido de Calcio (Ca (OH)
2
).

Preparacin de disoluciones patrn de pH

Agua para preparar las disoluciones: Hervir agua destilada o desionizada durante 15 minutos y
enfriar hasta alcanzar la temperatura ambiente, tapndola para evitar la redisolucin de CO
2

atmosfrico Cloruro de Potasio, utilizada para rellenar electrodos de referencia. Si el pH de esta
disolucin se encuentra entre 6 y 7, el agua es utilizable para preparar las disoluciones patrn
operacional de pH.

Disolucin de tetraoxalato de potasio (0.0496 M, pH =1.64 a 20 C).

Pesar aproximadamente y con precisin 12.61 g de tetraoxalato de potasio, disolver en agua
preparada y aforar a un litro. La disolucin no debe conservarse ms de dos meses.

Disolucin de monohidrgenotartrato de potasio (0.034 M, pH =3.56 a 20 C).

Pesar aproximadamente 10 g de monohidrgenotartrato de potasio, agregar agua preparada
hasta tener aproximadamente un litro. Agitar vigorosamente durante algunos minutos para
alcanzar la saturacin. Dejar el frasco en un bao de agua a 25 C y agitar ocasionalmente
hasta que la temperatura de la disolucin se equilibre. Separar la disolucin transparente por
decantacin, pero de ser necesario, filtrarla. Para preservar la disolucin, aadir un cristal de
timol por cada 200 ml de disolucin. En estas condiciones la disolucin puede conservarse
aproximadamente 2 meses.

Disolucin de hidrgenoftalato de potasio (0.0496 M, pH =4 a 20 C).

Secar aproximadamente 20 g de hidrgenoftalato de potasio, durante 2 horas a 110 C. Pesar
aproximadamente y con precisin 10.13 g del reactivo seco y disolver en agua preparada aforar
a un litro.

Disolucin de Fosfatos (0.0249 M, pH =6.87 a 20 C).

Secar aproximadamente 5 g de fosfato de potasio monobsico y 5 g de fosfato de sodio
dibsico durante 2 horas a 120 10 C. Pesar aproximadamente y con precisin, 3.388 g de
fosfato de potasio monobsico y 3.534 g de fosfato de sodio dibsico, disolver en agua
preparada y aforar a un litro.

Disolucin de Borato de Sodio (0.00996 M, pH =9.22 a 20 C).

Pesar aproximadamente y con precisin, 3.80 g de borato de sodio, disolver en agua preparada
y aforar a un litro. La disolucin debe protegerse contra la absorcin del dixido de carbono
atmosfrico. La porcin de disolucin utilizada para calibrar el medidor de pH, debe descartarse
despus de 10 minutos de exposicin a la atmsfera.

97
Disolucin de carbonatos (0.024 9 M, pH =10.05 a 20 C).

Pesar aproximadamente y con precisin 2.092 g de bicarbonato de sodio, secar
aproximadamente 10 g de carbonato de sodio (seccin 6.4) durante 2 horas a 275 C, y pesar
aproximadamente y con precisin 2.640 g. Disolver ambos reactivos en agua preparada y aforar
a un litro. La disolucin debe protegerse contra la absorcin del dixido de carbono atmosfrico.
La porcin de disolucin utilizada para calibrar el medidor de pH debe descartarse despus de
10 minutos de exposicin a la atmsfera.

Disolucin de hidrxido de calcio (0.020 25 M a 25 C, pH =12.60 a 20 C).

En una cpsula, calentar lentamente 5 g de carbonato de calcio en polvo, hasta 1,000 C y
mantener a esta temperatura durante una hora. Enfriar en desecador. Vaciar en 250 ml de agua
manteniendo agitacin. Llevar a ebullicin manteniendo agitacin. Enfriar y filtrar el hidrxido de
calcio obtenido, con filtro de vidrio sinterizado de porosidad mediana. Secarlo a 120 10 C,
enfriarlo y molerlo hasta tener un polvo fino. En un frasco de polietileno de alta densidad o de
polipropileno de un litro con tapn de cierre hermtico, aadir aproximadamente 3 g del polvo,
aadir un litro de agua y poner en agitacin a 25 C durante una noche para alcanzar la
saturacin. Para utilizar la disolucin, filtrar la cantidad necesaria con vidrio sinterizado de
porosidad media. Descartar la disolucin si aparece turbidez. La porcin de disolucin utilizada
para calibrar el medidor de pH debe descartarse despus de 10 minutos de exposicin a la
atmsfera.

Nota: Si no se efectan determinacines de pH arriba de 10, no es necesario preparar la
disolucin antes descrita. Pueden prepararse cantidades mayores o menores a las indicadas
tomando las cantidades proporcionales de reactivos, sin embargo, no deben prepararse
volmenes menores que 250 ml. Las disoluciones deben descartarse si se observa la aparicin
de moho o de turbidez.

2.10.4. Materiales


Termmetro que cumpla con las especificaciones establecidas en la norma mexicana NMX-
AA-007-SCFI.
Electrodo comercial de membrana de vidrio o electrodo combinado con compartimiento de
referencia rellenable, para uso general, con intervalo de trabajo de pH comprendido por lo
menos entre 2 y 12, cuya eficiencia electromotriz sea superior al 95%.

Nota: Si se utiliza un electrodo combinado, no se requiere el electrodo de referencia externo. Si
se efectan determinacines de pH en disoluciones muy alcalinas (pH >10), se recomienda
utilizar un electrodo de vidrio, de bajo error por el ion sodio.

98
La temperatura de la disolucin problema debe tomarse en cuenta para seleccionar el electrodo
de vidrio apropiado para las determinacines de pH. Para mediciones de pH a temperatura
apreciablemente mayor que la temperatura ambiente, se recomienda usar un electrodo de vidrio
con elemento de referencia interno de tipo plata-cloruro de plata.

Electrodo de referencia externo: Pueden utilizarse indistintamente un electrodo comercial
(rellenable) de calomel con cloruro de potasio 3.5 M o saturado o uno de plata/cloruro de plata
con disolucin de relleno de KCl de concentracin no menor que 1 M.

Nota: Para limitar errores causados por cambio de temperatura, se recomienda utilizar un
electrodo de referencia externo del mismo tipo que el electrodo de referencia interno del
electrodo de vidrio. Pueden utilizarse electrodos de referencia de otros tipos siempre que se
compruebe el correcto funcionamiento del dispositivo de determinacin del pH. No se
recomienda utilizar un electrodo de referencia de calomel cuando se determina pH en
disoluciones cuya temperatura vara apreciablemente de una a otra.

Barra magntica revestida de PTFE.
Frascos para muestreo, de polietileno de alta densidad de pared gruesa o de vidrio, de boca
ancha, de 100 a 250 ml de capacidad, provistos con tapn de cierre hermtico.
Conservacin de los electrodos: Cuando no se utilizan, los electrodos deben conservarse de
acuerdo a las recomendaciones de los fabricantes, o, en su defecto, los electrodos de vidrio
deben conservarse en una disolucin diluida de cido clorhdrico 0.0001 M (pH cercano a 4)
o en una disolucin preparada por adicin de 1 ml de la disolucin amortiguadora de
hidrgenoftalato de potasio a 100 ml de agua. Los electrodos de referencia deben
conservarse en disoluciones de cloruro de potasio de la misma concentracin que la de su
disolucin de relleno. Los electrodos de vidrio combinados deben conservarse en una
disolucin de cloruro de potasio de concentracin mayor o igual a 3.5 M y con un contenido
de 5% de la disolucin amortiguadora de hidrgenoftalato de potasio.
Dispositivo de medicin de conductividad electroltica de acuerdo a lo establecido en la
norma mexicana NMX-AA-093-SCFI (ver 2 Referencias).

2.10.5. Equipo

Potencimetro para determinacin del pH en el laboratorio con escala de lectura analgica o
digital, con error y resolucin menor o igual a 0.02 unidades de pH, con compensador de
temperatura manual o automtico y correccin de pendiente. Tambin debe permitir lecturas
de diferencia de potencial con resolucin menor o igual a 1 mV. Para determinacines en el
campo, se requiere de un equipo porttil que posea las mismas caractersticas que el
equipo de laboratorio, y
Agitador magntico.

99

Cuando sea posible, se efecta la determinacin de pH directamente en el punto de muestreo
sin extraer muestra, sumergiendo los electrodos en el cuerpo de agua. Cuando sea preciso
extraer una muestra, se toma un volumen mnimo de 100 ml en un envase de polietileno o de
vidrio limpio y se determina pH de inmediato.

Para determinacines de pH en el laboratorio, despus de registrar la temperatura del agua en
el punto de muestreo, se toma un volumen mnimo de 100 ml de muestra en un recipiente de
vidrio borosilicato limpio recubierto externamente con pintura negra para reducir las reacciones
de fotosntesis. El recipiente debe llenarse completamente con la muestra y taparse de forma
que no quede aire en contacto con la muestra. No debe aadirse aditivo alguno. El transporte
de la muestra al laboratorio debe efectuarse de inmediato en condiciones de refrigeracin a 4
C. La determinacin del pH en el laboratorio debe efectuarse de inmediato despus de la
recepcin de la muestra, a la misma temperatura que la del punto de muestreo. El tiempo
transcurrido entre el muestreo y la determinacin no debe exceder de 2 horas y sealarse en el
informe final de laboratorio as como la temperatura a la que se efectu la determinacin.

2.10.7. Calibracin

Calibracin del dispositivo de determinacin del pH

Seleccionar dos disoluciones patrn de pH cuyos valores encierren el valor de pH esperado
para la muestra problema, y que estn a la misma temperatura (2 C) que esta ltima. La
diferencia de pH entre las disoluciones patrn seleccionadas, debe situarse aproximadamente
entre 2 y 3 unidades. De cada disolucin se transfiere una porcin apropiada a un recipiente
limpio.

Nota: Un valor aproximado del pH de la disolucin problema puede obtenerse con papel pH
universal.

Para determinacines en el laboratorio, si la temperatura a la que se debe determinar el pH de
la muestra problema difiere en ms de 2 C de la temperatura ambiente, es preciso llevar las
disoluciones patrn de pH, la disolucin problema, los electrodos y el agua para el enjuague de
los mismos a dicha temperatura.

Se deber registrar la temperatura de las disoluciones patrn de pH y de la disolucin problema.
Posteriomente retirar los electrodos de su disolucin de conservacin. Enjuagarlos completa y
cuidadosamente con agua y secarlos con papel absorbente suave, sin tallar.

Con el dispositivo de determinacin de pH listo para operar de acuerdo con las instrucciones de
los fabricantes de los electrodos y del medidor de pH, sumergir los electrodos en la primera
porcin de disolucin patrn de pH, de ser posible, agitar suavemente la disolucin con el
agitador magntico y la barra magntica, esperar entre 1 y 2 minutos a que se estabilice la
respuesta del dispositivo de determinacin. Ajustar la lectura del aparato de medicin con el
botn de calibracin hasta obtener el valor de pH asignado para la temperatura de la disolucin.

100
Si se utiliza una disolucin patrn operacional de pH, el valor de pH se obtiene directamente en
la tabla 1.

Nota: Las disoluciones patrn de borato de sodio, carbonato e hidrxido de calcio, tienen un
coeficiente de temperatura grande por lo que la temperatura de estos patrones debe registrarse
con precisin de 1 C y obtenerse el pH asignado por interpolacin entre los valores reportados
en la tabla 1 en las tablas proporcionadas por los fabricantes de los patrones comerciales
utilizados.

Se debern retirar los electrodos de la disolucin anterior, enjuagarlos cuidadosamente con
agua y secarlos como se indica en el inciso 10.3. Posteriormente, repetir con la segunda
porcin de disolucin patrn de pH. Ajustar la lectura del aparato de medicin con el botn de
correccin de pendiente hasta obtener el valor de pH asignado.

Repetir lo indicado en los incisos 10.4 a 10.6 para verificar y eventualmente rectificar los valores
de calibracin hasta que las lecturas de pH no difieran en ms de 0.02 unidad al sustituir una
disolucin patrn por la otra.

Nota: Verificar que el valor de pendiente del electrodo no difiere en ms de 5 % del valor ideal.
De ser necesario, investigar la causa del mal funcionamiento y corregir antes de proseguir con
la calibracin.


Se determina la conductividad de la disolucin problema de acuerdo a lo establecido en la
norma mexicana NMX-AA-093-SCFI (ver 2 Referencias). El valor obtenido no debe ser menor
que 0.1 S/cm ni mayor que 15 S/cm a la temperatura ambiente. El dispositivo de
determinacin del pH debe estar calibrado de acuerdo a lo indicado en el inciso 10.1. De ser
necesario, llevar la muestra problema a la temperatura requerida para efectuar la
determinacin. Dicha temperatura no debe diferir en ms de 2 C de la de las disoluciones
patrn de pH utilizadas para la calibracin.

Enjuagar cuidadosamente los electrodos con agua. Transferir una porcin de la disolucin
problema a un recipiente limpio de tamao apropiado.

De acuerdo con las instrucciones del fabricante, sumergir los electrodos en una porcin de la
muestra problema durante 1 minuto para acondicionar el electrodo de vidrio; de ser posible,
agitar suavemente con el agitador y la barra magntica. Retirar los electrodos de la disolucin,
secarlos con papel absorbente, sin enjuagarlos y sin tallar.

Notas:

1. En caso de agitacin mecnica de la disolucin, debe tenerse cuidado para evitar la prdida
o disolucin de gases cidos o alcalinos por intercambios con la atmsfera. Sumergir los
electrodos en una porcin fresca de la muestra problema. De ser posible, agitar suavemente
la disolucin con el agitador magntico. Esperar que la lectura de pH se estabilice (variacin
de lectura menor que 0.02 unidad de pH, en un lapso no mayor de 1 minuto).

101
2. En las disoluciones problema de bajo amortiguamiento y conductividad electroltica, el
tiempo de alcance del equilibrio de lectura de pH puede ser mayor que 1 min; adems es
posible que se observe que las lecturas de pH con agitacin difieren de los valores ledos en
la misma disolucin en reposo. En tal caso, debe tomarse la lectura de pH en la disolucin
en reposo. Si la deriva de lectura por agitacin es mayor que 0.03 unidad de pH, es posible
que el electrodo de referencia no sea el apropiado para efectuar determinacines en
disoluciones de baja conductividad.

Repetir lo indicado en el inciso 11.4 con otra porcin fresca de la muestra problema. Si la
lectura difiere en ms que 0.02 unidad de pH con respecto del valor registrado, se repite con
otra porcin fresca de la muestra problema.

Nota: Una mala repetibilidad en las determinacines puede deberse a que el dispositivo de
determinacin del pH no se encuentra en condiciones ptimas de operacin y debe investigarse
la causa.

En las disoluciones problema de bajo amortiguamiento y conductividad electroltica, puede ser
necesario repetir lo indicado de tres hasta seis veces hasta tener lecturas sucesivas de pH que
difieran en menos de 0.1 unidad.

Registrar los dos valores sucesivos de pH y la temperatura de la muestra.

Si la temperatura de la muestra difiere en ms de 2 C de la de la disolucin amortiguadora,
puede corregirse el pH determinado por ajuste con el compensador automtico o manual del
equipo de medicin de conformidad con las instrucciones del fabricante del equipo medidor. No
se recomienda efectuar correcciones cuando la diferencia de temperatura entre disoluciones
patrn y disolucin problema es mayor que 10 C. En tal caso, debe procurarse equilibrar la
temperatura de las disoluciones patrn de pH con la de la muestra problema.

Despus de las determinacines, si los electrodos se ensuciaron por inmersin en aguas
residuales, stos deben limpiarse de acuerdo a lo indicado en el inciso 13.6. Los electrodos
limpios se regresan a su disolucin respectiva de conservacin. Se descartan, las disoluciones
patrn de pH utilizadas para la calibracin.

2.10.9. Clculos

Registrar las dos lecturas de pH con dos cifras decimales y la temperatura de la muestra,
as como informar el mtodo de calibracin del dispositivo de determinacin del pH,
mediante el "Sistema calibrado con dos patrones operacionales":

pH (patrn 1) = pH (patrn 2) = Valor de la pendiente: Temperatura: C

Informar la temperatura a la que se ha determinado el pH de la disolucin problema con
aproximacin al C ms cercano.
Informar la hora a la que se tom la muestra y a la que se efectu la determinacin.
Anexar el valor de conductividad electroltica y la temperatura de la determinacin.

102
Submdulo III. Anlisis biolgicos del agua

3. Anlisis bacteriolgico

3.1. Determinacin de coliformes fecales (NMP)

NMX-AA-42-1987. CALIDAD DEL AGUA DETERMINACIN DEL NMERO MS PROBABLE
(NMP) DE COLIFORMES TOTALES, COLIFORMES FECALES (TERMOTOLERANTES) Y
Escherichia coli PRESUNTIVA.

3.1.0. Introduccin

La presencia y extensin de contaminacin fecal es un factor importante en la determinacin de
la calidad de un cuerpo de agua. Las heces contienen una variedad de microorganismos y
formas de resistencia de los mismos, involucrando organismos patgenos, los cuales son un
riesgo para la salud publica al estar en contacto con el ser humano. El examen de muestras de
agua para determinar la presencia de microorganismos del grupo coliforme que habitan
normalmente en le intestino humano y de otros animales de sangre caliente, da una indicacin.
Dada la limitada capacidad de algunos miembros del grupo de organismos coliformes para
sobrevivir en agua; sus nmeros tambin pueden emplearse para estimar el grado de
contaminacin fecal.


Esta norma mexicana establece un mtodo para la deteccin y enumeracin en agua de
organismos coliformes totales, organismos coliformes fecales (termotolerantes) y Escherichia
coli presuntiva (E. coli) mediante el cultivo en un medio lquido en tubos mltiples y l clculo de
sus nmeros ms probables (NMP) en la muestra.

Este mtodo es aplicable para todo tipo de agua, incluyendo aquellos que contienen una
cantidad apreciable de materia en suspensin.

La seleccin de las pruebas usadas en la deteccin y confirmacin del grupo de organismos
coliformes, incluyendo E. coli, puede verse como parte de una secuencia continua. El grado de
confirmacin con una muestra en particular depende parcialmente de la naturaleza del agua y
parcialmente de las razones para realizar el examen.

En la prctica, la deteccin de E. coli presuntiva, da usualmente una indicacin satisfactoria de
contaminacin fecal.

3.1.2. Referencias

NMX-Z-1 Sistema Internacional de Unidades (SI).

NMX-BB-14 Clasificacin y tamaos nominales para utensilios de vidrio usados en laboratorios.

103
3.1.3. Definiciones

Para propsitos de esta nrma mexicana, se aplican las siguientes definiciones:

Organismos coliformes: Organismos capaces de crecimiento aerbico ya sea 35 1 C 37
1 C, en un medio de cultivo lquido lactosado con produccin de cido y gas dentro de un
periodo de 48 horas.

Organismos coliformes fecales (termotolerantes): Organismos coliformes que tienen las
mismas propiedades fermentativas a 44 0.5 C.

Escherichia coli presuntiva (E. coli): Organismos coliformes termotolerantes que tambin
producen Indol a partir de tripofano a 44 C.

3.1.4. Principio

El mtodo se basa en la inoculacin de alcuotas de la muestra, diluida o sin diluir, en una serie
de tubos de un medio de cultivo lquido conteniendo lactosa.

Los tubos se examinan a las 24 y 48 horas de incubacin a 36 1 C. Cada uno de los que
muestran turbidez con produccin de gas se resiembra en un medio confirmativo ms selectivo
y, cuando se busca E. coli presuntiva, en un medio en el que se pueda demostrar la produccin
de indel.

Se lleva acabo la incubacin de estos medios confirmativos basta por 48 horas a 36 1 C,
para la deteccin de organismos coliformes y a 44 C para organismos termotolerantes y E. coli.

Mediante tablas estadsticas se lleva acabo el clculo del nmero ms probable (NMP) de
organismos coliformes, organismos coliformes termotolerantes y E. coli que puedan estar
presente en 100 ml de muestra, a partir de los nmeros de los tubos que dan resultados
confirmativos positivos.

3.1.5. Aparatos y equipo

Aparte de los equipos que se suministran estriles, el material de vidrio y el resto del equipo
deben esterilizarse.

Incubadora con rango de temperatura de 35 1 C 37 1 C y 44 0.5 C.
Estufa capaz de mantener una temperatura de 180 a 200 C.
Autoclave u olla de presin o con manmetro.
Potencimetro.
Balanza analtica con sensibilidad de 0.0001 g.
Pipetas serolgicas.
Pipeteros de aluminio o acero inoxidable; se pueden sustituir con papel aluminio o papel
Kraft.

104
Tubos de ensaye de cristal refractario de 15 x 150 mm con tapn de baquelita, aluminio o
algodn.
Frascos muestreadores, de vidrio resistente o cristal refractario de 125 ml, con tapn de
cristal esmerilado.
Tubos de fermentacin (Durham).
Asas de inoculacin.

3.1.6. Reactivos

Los reactivos que a continuacin se mencionan, deben ser grado analtico a menos que se
indique otra cosa. Cuando se especifique el uso de agua, se debe entender agua destilada in
vitro agua desionizada libre de sustancias que pueden inhibir el crecimiento bacteriano en las
condiciones de prueba.

Para la preparacin de los reactivos, las condiciones de esterilizacin deben ser 121 C y
0.098066 Mpa (1 kg/cm
2
) de presin manomtrica durante 15 minutos. Los tubos de
fermentacin (Durham) no deben contener burbujas de aire despus de la esterilizacin.

En caso de utilizar medios deshidratados, seguir las recomendaciones del fabricante para su
preparacin.

a) Utilizar uno de los siguientes medios de cultivo

Caldo lauril triptosa (CLT).
Caldo Mc Conkey.
Caldo lactosa.

b) Utilizar uno o ms de los siguientes medios confirmativos

Medios para la produccin de gas:

Caldo bilis lactosa verde brillante
Medio EC.

Medio para la produccin de indol:

Agua de tristona.
Reactivo de Kovacs para indol.
Reactivo oxidasa para prueba de oxidasa.

105
e) Diluyentes

Diluyente de peptona (0.1%).
Solucin salina de peptona.
Solucin de Ringer.
Solucin amortiguadora de fosfato.

3.1.7. Muestreo

El procedimiento para la recoleccin de las muestras de agua para el anlisis bacteriolgico,
depende del tipo de agua que se desee muestrear.

Las muestras para el anlisis bacteriolgico, se deben tomar en frascos muestreadores que se
hayan lavado con extremo cuidado y esterilizado. En su interior colocar previo a la
esterilizacin, 0.1 ml de solucin de tiosulfato de sodio al 1% con el propsito de inhibir la
accin del cloro que puede contener la muestra, cubriendo adems el tapn del frasco hasta el
cuello con papel aluminio.

Muestreo en cuerpos receptores

1.- Siempre que sea posible, llenar el frasco a
2
/
3
partes de su capacidad; una cantidad menor
sera insuficiente, si fuera mayor disminuira el espacio de aire disponible, necesario para
homogeneizar la muestra. Las muestras deben ser representativas del agua en el estudio y
asimismo no deben contaminarse en forma alguna.

2.- El frasco donde se colecta la muestra no se debe destapar sino hasta el momento en el que
se efecte el muestreo. Al muestrear, se debe evitar que el cuello del frasco se ponga en
contacto con los dedos o cualquier otro material contaminante.

3.- El examen de la muestra colectada debe realizarse lo ms pronto posible, para evitar
proliferacin o muerte de las bacterias. Cuando el examen se practica dos horas despus de
tomar la muestra, los resultados empiezan a ser inciertos.

4.- El volumen de muestra suficiente para efectuar el anlisis bacteriolgico, de preferencia
debe ser de aproximadamente 100 ml. Es importante que todas las muestras estn
acompaadas de datos completos y exactos de identificacin y descripcin.

El mecanismo de muestreo superficial es el siguiente

1.- Quitar el papel aluminio del cuello del frasco; introducir el frasco aproximadamente 30 ml
bajo la superficie del agua.

2.- Destapar el frasco dentro del agua. La boca del envase debe quedar en sentido contrario al
flujo de la corriente. Si no existe corriente, como en los embalses, crearla empujando el
frasco horizontalmente, en direccin opuesta al movimiento de la mano.

106
3.- Una vez que la muestra ocupe el volumen correspondiente del frasco (
2
/
3
partes); tapar sin
sacarlo del agua teniendo cuidado de que el papel aluminio vuelva a cubrir el cuello de la
botella.

4.- Si no es posible la recoleccin de muestras en las condiciones antes anunciadas; fijar un
lastre al frasco, al que se hace descender en el agua.

5.- Para tomar muestras profundas en lagos o embalses; usar aparatos especiales que
permitan destapar y tapar mecnicamente el frasco debajo de la superficie.

Muestreo en pozos y grifos

1.- Si el pozo est provisto de bomba de mano, bombear durante 5 minutos Para que el agua
fluya libremente, antes de tomar la muestra.

2.- Si el pozo est dotado de bomba mecnica, tomar la muestra en una llave previamente
flameada de la descarga, dejando que fluya el agua libremente 5 minutos antes de tomar la
muestra.

3.- A efectuar este muestreo, se deben flamear los bordes del frasco y tapn durante el tiempo
que dura el muestreo. Esto se hace con objeto de mantener el mximo las condiciones de
asepsia.

4.- Si no se cuenta con equipo de bombeo, tomar la muestra directamente del pozo por medio
de un frasco estril con lastre. En este caso se debe evitar la contaminacin de la muestra
por las notas superficiales.

5.- Si se trata de tomar una muestra de un grifo del sistema de servicio, flamear el grifo y abrirlo
completamente, dejando que el agua fluya de 2 a 3 minutos, o el tiempo suficiente para
permitir la purga de la lnea.

6.- En el momento del muestreo, restringir el flujo de la llave para que se pueda llenar el frasco
sin salpicaduras.

3.1.8. Preservacin y almacenamiento

El anlisis bacteriolgico de la muestra debe practicarse inmediatamente despus de su
recoleccin. Es por ello que se recomienda que de no efectuarse as el anlisis, se inicie dentro
de las dos horas prximas a la recoleccin de la muestra y en ningn caso, este lapso debe
exceder de 24 horas para agua potable y de 6 horas para otros tipos de agua para que sea
vlido el resultado del anlisis. Durante el perodo que transcurra del muestreo al anlisis, se
debe conservar la muestra a 4 C, con objeto de inhibir la actividad bacteriana para no obtener
resultados falsos o dudosos.

107

3.1.9.1. Pruebas presuntivas

Preparacin de la muestra e inoculacin del medio

Antes del examen, mezclar perfectamente la muestra agitndola vigorosamente para lograr una
distribucin uniforme de los microorganismos y, dependiendo de la naturaleza del agua y el
contenido bacteriano esperado, hacer las diluciones necesarias en esta etapa. Utilizar series
que constan de por lo menos tres diluciones: 10 ml, 1 ml y 0.1 ml bien 1 ml y 0.01 ml. Por
cada dilucin debe haber 3 5 tubos.

Para diluciones a 10 veces, poner 90 9 ml

del diluyente en matraces o tubos de dilucin
esterilizados. Alternativamente, usar volmenes de diluyente preesterilizado en botellas de
tapn de rosca. Hacer una o ms diluciones a 10 veces transfiriendo un volumen de la muestra
de agua a 9 volmenes de diluyente. Repetir estos pasos cuantas veces sea necesario.
Preparar suficiente cantidad de cada dilucin para todas las pruebas que se vayan a llevar a
cabo con la muestra. Para diluciones diferentes a 10 veces ajustar el volumen de diluyente a la
porcin de prueba. Inocular los tubos conteniendo medios de aislamiento de doble
concentracin con porciones de prueba de un volumen mnimo de 5 ml.

Incubacin de los tubos

Incubar los tubos inoculados ya sea a 35 1 C 37 1 C durante 48 horas.

Examen de los tubos

Examinar los cultivos de los tubos despus de un perodo de incubacin de 18 a 24 horas y
considerar como resultados positivos a aquellos que muestren turbidez debida al crecimiento
bacteriano y formacin de gas en los tubos internos invertidos (Durham) junto con produccin
de cido si el medio de aislamiento contiene un indicador de pH. Reincubar aquellos tubos que
no muestran alguno o todos estos cambios y examinarlos nuevamente para detectar reaccionan
positivas a las 48 horas.

3.1.9.2. Pruebas confirmativas

Inoculacin del medio

Resembrar a partir de cada tubo de medio de aislamiento que muestro un resultado positivo en
uno o ms tubos de medio confirmativo (6.2) para detectar la produccin de gas e indol.

Nota: Si se usa el medio ms inhibitorio de caldo lactosa para aislar, resembrar en alguno de
los dos medios confirmativos ms selectivos, Caldo de bilis lactosa verde brillante Caldo EC
para efectuar la confirmacin.

108
Incubacin y examen

Para confirmar la presencia de organismos coliformes, incubar un tubo de 9.2.1 de Caldo de
bilis lactosa verde brillante Caldo EC a 37 C y examinarlo para ver si hay produccin de gas
dentro de un perodo de 48 horas.

Para confirmar la presencia de organismos coliformes termotolerantes, incubar otro tubo de
9.2.1 de Caldo de bilis lactosa verde brillante Caldo EC a 44 C durante 24 horas para ver si
hay produccin de gas.

Para confirmar la presencia de E. coli. Presuntiva, incubar un tubo de 9.2.1 de agua de triptona
para detectar la formacin de indol a 44 C durante 24 horas. Despus aadir de 0.2 a 0.3 ml de
reactivo de Kovacs (6.3) el tubo de agua de triptona; El desarrollo de un anillo de color rojo
despus de agitar suavemente de note la presencia de indol.

Nota: La deteccin de E. coli presuntiva, se considera una evidencia satisfactoria de
contaminacin fecal. Sin embargo, pueden efectuarse mayores pruebas para la confirmacin de
E. coli si se considera necesario.

Coliformes E. coli

3.1.9.3. Prueba de oxidasa

Algunas bacterias existentes en el agua pueden conformarse a la definicin de organismos
coliformes en muchos aspectos, pero son capaces de producir gas a partir de lactosa solamente
a temperaturas inferiores a 37 C. Por consiguientes dan resultados negativos a las pruebas
confirmativas estndar para organismos coliformes y su presencia en agua usualmente no se
considera significativa. Las especies de Aeromonas, que se encuentran naturalmente en el
agua, tienen una temperatura ptima de crecimiento en el rango 30 a 35 C, pero a pesar de
ello son capaces de producir cido y gas a partir de lactosa a 37 C. Tienen poco significado
para efectos sanitarios y se distinguen del grupo de los coliformes por una reaccin de oxidasa
positiva.

Llevar a cabo la prueba con subcultivos puros de los organismos fermentadores de lactosa,
crecidos en medio nutriente de agar, como sigue:

Colocar de 2 a 3 gotas de reactivo de oxidasa recientemente preparado (6.4) en un papel
filtro en una caja de Petri.

109
Con una barra de vidrio o un asa de alambre de platino (no de nicromel), colocar parte del
cultivo en el papel filtro preparado.
Considerar la aparicin de un color azul marino purpra en un lapso de 10 segundos como
una reaccin positiva.

Nota: En cada ocasin que se use el reactivo de oxidasa, llevar a cabo pruebas de control con
cultivos de organismos que se sepa dan una reaccin positiva (Pseudomonas aeruginosa) y
uno que de una reaccin negativa (E. coli) en 100 ml de la muestra.

3.1. 10. Clculos

A partir del nmero de tubos que dan reacciones positivas en los medios de aislamiento y
confirmativo, calcular por referencia a las tablas estadsticas (ver tabla) el nmero ms probable
de organismos coliformes, organismos coliformes termotolerantes y E. coli presuntiva en 100 ml
de la muestra. Cuando se emplean de dilucin para hacerlo equivalente.

ndice del NMP y lmite confiable de 95 % para varias combinaciones de resultados positivos y
negativos cuando se usan: 5 tubos con porciones de 10 ml

en cada uno, 5 con porciones de 1
ml y con 5 porciones de 0.1 ml.

No. de tubos con
reacciones positivas
Lmite confiable
de 95%
No. de tubos con
Lmite confiable
de 95%

5 tubos
con
10 cm
5 tubos
con
1 ml
5 tubos
con
0.1 ml
ndice
del NMP
por
100 ml
Inferior Superior

5 tubos
con
10 ml
5 tubos
con 1 ml
5 tubos
con
0.1 ml
ndice
del NMP
por
100 ml
Inferior Superior
0 0 0 <2 5 0 0 23 7 70
0 0 1 2 <0.5 7 5 0 1 31 11 89
0 1 0 2 <0.5 7 5 0 2 43 15 110
0 2 0 4 <0.5 11
5 1 0 33 11 93
1 0 0 2 <0.5 7 5 1 1 46 16 120
1 0 1 4 <0.5 11 5 1 2 63 21 150
1 1 0 4 <0.5 11
1 1 1 6 <0.5 15 5 2 0 49 17 130
1 2 0 6 <0.5 15 5 2 1 70 23 170
5 2 2 94 28 220
2 0 0 5 <0.5 13
2 0 1 7 1 17 5 3 0 79 25 190
2 1 0 7 1 17 5 3 1 110 31 250
2 1 1 9 2 21 5 3 2 140 37 340
2 2 0 9 2 21 5 3 3 180 44 500
2 3 0 12 3 28
5 4 0 130 35 300
3 0 0 8 1 19 5 4 1 170 43 490

110
No. de tubos con
Lmite confiable
de 95%
No. de tubos con
Lmite confiable
de 95%

5 tubos
con
10 cm
5 tubos
con
1 ml
5 tubos
con
0.1 ml
ndice
del NMP
por
100 ml
Inferior Superior

5 tubos
con
10 ml
5 tubos
con 1 ml
5 tubos
con
0.1 ml
ndice
del NMP
por
100 ml
Inferior Superior
3 0 1 11 2 25 5 4 2 220 57 700
3 1 0 11 2 25 5 4 3 280 90 850
3 1 1 14 4 34 5 4 4 350 120 1,000
3 2 0 14 4 34
3 2 1 17 5 46 5 5 0 240 68 750
3 3 0 17 5 46 5 5 1 350 120 1,000
5 5 2 540 180 1,400
4 0 0 13 3 31 5 5 3 920 300 3,200
4 0 1 17 5 46 5 5 4 1600 640 5,800
4 1 0 17 5 46 5 5 5 =>2400
4 1 1 21 7 63
4 1 2 26 9 78
4 2 0 22 7 67
4 2 1 26 9 78
4 3 0 27 9 80
4 3 1 33 11 93
4 4 0 34 12 93

111
negativos cuando se usan: Un tubo con porciones de 50 ml 5 tubos con porciones de 10 ml y 5
tubos con porciones de 10 ml.

No. de tubos
con reacciones positivas
Lmite confiable
de 95%
No. de tubos con
Lmite confiable
de 95%

1 tubo
con
50 ml
5 tubos
con
10 ml
5 tubos
con
1 ml
ndice
del NMP
por
100 ml
Inferior Superior

1 tubo
con
50 ml
5 tubos
con
10 ml
5 tubos
con
1 ml
ndice
del NMP
por 100
ml
Inferior Superior
0 0 0 <1
0 0 1 1 <0.5 4 1 2 1 7 1 17
0 0 2 2 <0.5 6 1 2 2 10 3 23
0 1 0 1 <0.5 4 1 2 3 12 3 28
0 1 1 2 <0.5 6 1 3 0 8 2 19
0 1 2 3 <0.5 8 1 3 1 11 3 26

0 2 0 2 <0.5 6 1 3 2 14 4 34
0 2 1 3 <0.5 8 1 3 3 18 5 53
0 2 2 4 <0.5 11 1 3 4 21 6 66
0 3 0 3 <0.5 8 1 4 0 13 4 31
0 3 1 5 <0.5 13 1 4 1 17 5 47
0 4 0 5 <0.5 13
1 4 2 22 7 69
1 0 0 1 <0.5 4 1 4 3 28 9 85
1 0 1 3 <0.5 8 1 4 4 35 12 100
1 0 2 4 <0.5 11 1 4 5 43 15 120
1 0 3 6 <0.5 15 1 5 0 24 8 75
1 1 0 3 <0.5 8
1 5 1 35 12 100
1 1 5 5 <0.5 13 1 5 2 54 18 140
1 1 7 7 1 17 1 5 3 92 27 220
1 1 9 9 2 21 1 5 4 160 39 450
1 2 5 5 <0.5 13 1 5 5 =>240

112
negativos cuando se usan: 5 tubos con porciones de 50 ml, 5 tubos con porciones de 10 ml y 5
tubos con porciones de 1 ml.

No. de tubos
Lmite confiable
de 95%

No. de tubos con
Lmite confiable
de 95%
5 tubo
con
50 ml
5 tubos
con
10 ml
5 tubos
con
1 ml
ndice del
NMP por
100 ml Inferior Superior

5 tubo con
50 ml
5 tubos
con
10 ml
5 tubos
con
1 ml
ndice
del NMP
por 100
ml
Inferior Superior
0 0 0 <1
0 0 1 1 <0.5 2 4 1 1 4 1 9
0 1 0 1 <0.5 2 4 1 2 4 1 9
0 1 1 1 <0.5 2 4 2 0 4 1 9
0 2 0 1 <0.5 2 4 2 1 4 1 9
0 3 0 1 <0.5 2 4 2 2 5 2 12
4 3 0 5 2 12
1 0 0 1 <0.5 2
1 0 1 1 <0.5 2 4 3 1 5 2 12
1 1 0 1 <0.5 2 4 3 2 6 2 14
1 1 1 1 <0.5 2 4 4 0 6 2 14
1 2 0 1 <0.5 2 4 4 1 7 3 17
1 2 1 2 <0.5 4 4 5 0 7 3 17
1 3 0 2 <0.5 4 4 5 1 8 3 19

2 0 0 1 <0.5 2 5 0 0 4 1 9
2 0 1 1 <0.5 2 5 0 1 4 1 9
2 1 0 1 <0.5 2 5 0 2 6 2 14
2 1 1 2 <0.5 4 5 1 0 5 2 12
2 2 0 2 <0.5 4 5 1 1 6 2 14
2 2 1 2 <0.5 4
5 1 2 7 3 17
2 3 0 2 <0.5 4 5 2 0 6 2 14
2 3 1 3 1 7 5 2 1 8 3 19
2 4 0 3 1 7 5 2 2 10 4 23
5 2 3 12 4 28

3 0 0 2 <0.5 4
3 0 1 2 <0.5 4 5 3 0 9 3 21
3 1 0 2 <0.5 4 5 3 1 11 4 26
3 1 1 2 <0.5 4 5 3 2 14 5 34
3 1 2 3 1 7 5 3 3 18 6 53
3 2 0 3 1 7 5 4 0 13 6 31

113
No. de tubos
Lmite confiable
de 95%

No. de tubos con
Lmite confiable
de 95%
5 tubo
con
50 ml
5 tubos
con
10 ml
5 tubos
con
1 ml
ndice del
NMP por
100 ml Inferior Superior

5 tubo con
50 ml
5 tubos
con
10 ml
5 tubos
con
1 ml
ndice
del NMP
por 100
ml
Inferior Superior
3 2 1 3 1 7 5 4 1 17 6 47
3 2 2 4 1 9 5 4 2 22 7 70
3 3 0 3 1 7 5 4 3 28 9 85
3 3 1 4 1 9 5 4 4 35 11 100
3 4 0 4 1 9 5 5 0 24 8 75
3 4 1 4 1 9
5 5 1 35 11 100
4 0 0 2 <0.5 4 5 5 2 54 18 140
4 0 1 3 1 7 5 5 3 92 27 220
4 0 2 3 1 7 5 5 4 160 39 420
4 1 0 3 1 7 5 5 5 =>240

114
negativos cuando se usan: 3 tubos con porciones de 1 ml y 3 con porciones de 0.1 ml
.

No. de tubos con reacciones positivas Lmite confiable de 95%
3 tubos con
10 ml
3 tubos con
1 ml
3 tubos con
0.1 ml
ndice
del NMP por ml
Inferior Superior
0
0
0
1
1
1
1
1
2
2
2
2
2
2
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3

0
0
1
0
0
1
1
2
0
0
1
1
2
2
0
0
0
1
1
1
2
2
2
3
3
3
3
0
1
0
0
1
0
1
0
0
1
0
1
0
1
0
1
2
0
1
2
0
1
2
0
1
2
3
<3
3
3
4
7
7
11
11
9
14
15
20
21
28
23
39
64
43
75
120
93
150
210
240
460
1,100
=> 2,400
<0.5
<0.5
<0.5
1
1
3
3
1
3
3
7
4
10
4
7
15
7
14
30
15
30
35
36
71
150
9
13
20
21
23
36
36
36
37
44
89
47
150
120
130
380
210
230
280
380
440
470
1,300
2,400
4,800

115
3.1.11. Reporte de la prueba

El reporte de la prueba debe hacer referencia a esta norma y dar toda la informacin relevante,
incluyendo:

a) Todos los detalles necesarios para la identificacin completa de la muestra.
b) La tcnica y medio de cultivo empleados.
c) El tiempo, temperatura y condiciones de la incubacin.
d) Los resultados expresados conforme a lo que se describe en el punto 10
e) Cualquier suceso particular observado en el curso del anlisis y cualquier operacin no
especificada en el mtodo o considerada opcional que pueda haber infludo en los
resultados.

3.1.12. Confiabilidad

El procedimiento de fermentacin en tubos mltiples es el mtodo ms usado por su facilidad y
economa. El resultado de esta prueba se expresa por el nmero ms probable (NMP), pero
debe entenderse que este mtodo no es exacto ya que slo nos da la probable densidad de
bacterias coliformes totales o fecales de una muestra determinada.

La confiabilidad est dada por los niveles superiores o inferiores del lmite de confianza a los
95% establecidos en las tablas para cada NMP/100 ml, no obstante, es una indicacin
importante para evaluar la calidad sanitaria del agua.

116
3.2. Determinacin de coliformes Escherichia coli presuntiva por filtracin de membranas

NORMA MEXICANA NMX-AA-102-1987. CALIDAD DE AGUA - DETECCIN
ENUMERACIN DE ORGANISMOS COLIFORMES, ORGANISMOS COLIFORMES
TERMOTOLERANTES Y Escherichia coli PRESUNTIVA- MTODO DE FILTRACIN EN
MEMBRANA.

3.2.0. Introduccin

La presencia y extensin de la contaminacin fecal es un factor importante en la determinacin
de la calidad de un cuerpo de agua. El anlisis de muestras de agua para determinar la
presencia de miembros del grupo coliforme, que habitan normalmente en el intestino del
hombre y otros animales de sangre caliente, da una indicacin sensible de dicho tipo de
contaminacin. Dado que la capacidad de algunos miembros del grupo coliforme para sobrevivir
en agua es limitada, sus nmeros pueden emplearse tambin para estimular el grado de
contaminacin fecal.


Esta norma mexicana describe un mtodo para la deteccin y enumeracin de organismos
coliformes, organismos coliformes termotolerantes y Escherichia coli presuntiva (E. coli) en agua,
despus de una filtracin a travs de una membrana celulsica, su subsecuente cultivo en un medio
diferencial lactosado y el clculo de sus nmeros en la muestra. Este mtodo es aplicable a todo
tipo de agua, exceptuando aguas salinas con altos contenidos de diatomeas o cuando nmeros
grandes de otros organismos puedan interferir con el crecimiento. La seleccin de las pruebas
empleadas en la deteccin y confirmacin de los grupos de organismos coliformes, incluyendo E.
coli puede verse como parte de una secuencia continua. El grado de confirmacin en una muestra
en particular depende parcialmente de la naturaleza del agua y parcialmente de las razones para
llevar a cabo el examen. En la prctica, la deteccin en agua de E. coli presuntiva como se define
en el punto 3.3., de esta norma da usualmente una indicacin satisfactoria de contaminacin fecal.

3.2.2. Referencias

NMX-Z-001 Sistema Internacional de Unidades (SIM).

NMX-BB-014 Clasificacin y tamaos nominales para utensilios de vidrio usados en
laboratorios.

3.2.3. Principio

El mtodo se basa en la filtracin de una alcuota de la muestra a travs de una membrana por
steres de celulosa que retiene los organismos, colocando la membrana compuesta ya sea en
un medio de cultivo selectivo de agar lactosado o en un cojinete absorbente saturado con un
medio lquido lactosado. La membrana se incuba durante 24 horas ya sea a 35 37 C para la
deteccin de organismos coliformes, o bien a 44 C para la presencia de organismos coliformes
termotolerantes.

117
Se lleva a cabo la cuenta directa de las colonias caractersticas desarrolladas sobre la
membrana, y algunas de estas colonias se resiembran para pruebas confirmativas para
produccin de gas e indol. Finalmente se hace el clculo del nmero de organismos coliformes,
organismos coliformes, termotolerantes y Escherichia coli presuntiva que pueden estar
presentes en 100 ml de la muestra.

3.2.3. Aparatos y equipo

Aparte de los equipos que se suministran estriles, el material de vidrio y el resto del equipo
deben esterilizarse.
Horno de aire caliente para esterilizacin con calor seco.
Autoclave.
Incubador o bao de agua, controlado termostticamente a 35 1 C 37 1 C.
Incubador o bao de agua, controlado termostticamente a 44 0.5 C.
Medidor de pH.
Equipo para filtracin con membrana.
Membranas filtrantes estriles de aproximadamente 47 mm de dimetro, con caractersticas
de filtracin equivalentes a un tamao de dimetro nominal de poro de 0.45 mm. Si no
pueden conseguirse estriles, deben esterilizarse de acuerdo con las instrucciones del
fabricante.
Pinzas de punta redondeada, para manejar las membranas.
Frascos para toma de muestras, de vidrio resistente o cristal refractario de 250 ml de boca
ancha, con tapn de cristal esmerilado, o bolsas de plstico estriles de volumen
equivalente.

3.2.4. Medios y reactivos

Medios

Los reactivos que a continuacin se mencionan deben ser grado analtico a menos que se
indique otra cosa. Cuando se especifique el uso de agua se debe entender agua destilada in
vitro o agua desionizada libre de sustancias que pueden inhibir el crecimiento bacteriano en las
condiciones de la prueba. En caso de utilizar medios deshidratados, seguir las
recomendaciones del fabricante para su preparacin.

a) Diluyentes
Diluyente de peptona (0.1%).
Solucin salina de peptona.
Solucin de ringer.
Solucin amortiguadora de fosfato.

118
b) Medios de aislamiento

Utilizar uno ms de los siguientes medios de cultivo ya sea en forma slida como agar o bien
como caldo para saturar cojinetes absorbentes:

Agar Lactosa TTC con Tergitol 7.
Agar Lactosa con Tergitol 7.
Caldo Lauril Sulfato para membrana
Medio Endo para membrana
Agar LES Endo
Medio MFC

c) Medios confirmativos

Utilizar uno o ms de los siguientes:

Medio para la produccin de gas.
Medio para la produccin de indol.
Medio del tubo nico tanto para la produccin de gas como de indol.

Reactivos

Reactivo de Kovacs para indol.
Reactivo de oxidasa para la prueba de oxidasa.

3.2.5. Muestreo

El procedimiento para la recoleccin de las muestras de agua para el anlisis bacteriolgico,
depende del tipo de agua. Las muestras para el anlisis bacteriolgico, se deben tomar en
frascos que se hayan lavado con extremo cuidado y esterilizado. En su interior colocar, previo a
la esterilizacin, 0.1 ml de solucin de tiosulfato de sodio al 10% con el propsito de inhibir la
accin del cloro que pueda contener la muestra, cubriendo adems el tapn del frasco hasta el
cuello con papel aluminio.

Muestreo en cuerpos receptores

1.- Siempre que sea posible, llenar el frasco a
2
/
3
partes de su capacidad; una cantidad menor
sera insuficiente, si fuera mayor, disminuira el espacio de aire disponible, necesario para
homogeneizar la muestra. Las muestras deben ser representativas del agua en estudio y asi
mismo no deben contaminarse en forma alguna.

2.- El frasco donde se colecta la muestran no se debe destapar si no hasta el momento en el
que se efecte el muestreo. Se debe evitar que el cuello del frasco se ponga en contacto
con los dedos o cualquier otro material contaminante.

119
3.- El examen de la muestra colectada debe realizarse lo ms pronto posible, para evitar
proliferacin o muerte de las bacterias. Cuando el examen se practica dos horas despus de
tomar la muestra, los resultados empiezan a ser inciertos.

4.- El volumen de muestra suficiente para efectuar el anlisis bacteriolgico, de preferencia
debe ser aproximadamente 200 ml. Es importante que todas las muestras estn
acompaadas de datos completos y exactos de identificacin y descripcin.

El mecanismo de muestreo superficial es el siguiente

1.- Quitar el papel aluminio del cuello del frasco; introducir el frasco aproximadamente 30 cm
bajo la superficie del agua.

2.- Destapar el frasco dentro del agua. La boca del envase debe quedar en sentido contrario al
flujo de la corriente. Si no existe corriente, como en los embalses, crearla empujando el
frasco horizontalmente, en direccin opuesta al movimiento de la mano.

3.- Una vez que la muestra ocupe el volumen correspondiente del frasco (
2
/
3
partes), tapar sin
sacarlo del agua, teniendo cuidado de que el papel aluminio vuelva a cubrir el cuello de la
botella. Si no es posible la recoleccin de muestras en las condiciones antes enunciadas,
fijar un lastre al frasco, al que se hace descender en el agua.

4.- Para tomar muestras profundas en lagos o embalses, usar aparatos especiales que
permitan destapar y tapar mecnicamente el frasco debajo de la superficie.

Muestreo en pozos y grifos

1.- Si el pozo est provisto de bomba de mano, bombear durante 5 minutos para que el agua
fluya libremente, antes de tomar la muestra.

2.- Si el pozo est dotado de bomba mecnica, tomar la muestra en una llave previamente
flameada de la descarga, dejando que fluya el agua libremente 5 minutos antes de tomar la
muestra.

3.- Al efectuar este muestreo, se debe evitar que el agua escurra fuera del frasco, adems se
deben flamear los bordes del frasco y tapn durante el tiempo que dura la toma de muestra.
Esto se hace con objeto de mantener al mximo las condiciones de asepsia.

4.- Si no se cuenta con equipo de bombeo, tomar la muestra directamente del pozo por medio
de un frasco estril con lastre. En este caso se debe evitar la contaminacin de la muestra
por las natas superficiales.

5.- Si se trata de tomar una muestra de un grifo del sistema de servicio, flamear el grifo y abrirlo
completamente, dejando que el agua fluya de 2 a 3 minutos el tiempo suficiente para
permitir la purga de la lnea.

120
6.- En el momento de tomar la muestra, restringir el flujo de la llave para que se pueda llenar el
frasco sin salpicadura.

El anlisis bacteriolgico de la muestra debe practicarse inmediatamente despus de su
recoleccin. Es por ello que se recomienda que de no efectuarse as el anlisis, se inicie dentro
de las dos horas prximas a la recoleccin de la muestra, y en ningn caso, este lapso debe
exceder de 24 horas para agua potable y de 6 horas para otros tipos de agua para que sea
vlido el resultado del anlisis. Durante el perodo que transcurre del muestreo al anlisis, se
debe conservar la muestra a 4 C, con objeto de inhibir la actividad bacteriana para no obtener
resultados falsos o dudosos.


a) Pretratamiento de la muestra

Para muestras con alto contenido de materia en suspensin, filtrar utilizando un prefiltro de 0.8
a 1 mm.

b) Seleccin del volumen de muestra

El volumen mximo de la porcin de prueba depende de la cantidad de materia orgnica en la
muestra de agua y de las membranas utilizadas. Para ello se debe seleccionar un volumen de
muestra una dilucin del mismo, que d menos de aproximadamente 100 colonias en una
membrana de 47 50 mm de dimetro. Para trabajo rutinario se recomienda una muestra de
200 ml. Cuando se espere un contenido alto de bacterias, puede tomarse una muestra ms
pequea (20 ml); pero se recomienda poner en el embudo previamente 50 ml de agua de
dilucin estril.

c) Filtracin

Colocar las bases en la unidad filtrante y en ambiente estril (mecheros encendidos). Colocar la
membrana estril con ayuda de las pinzas de punta redondeada. La cuadrcula de la membrana
debe quedar visible. Colocar el embudo con cuidado y sujetarlo. Agitar vigorosamente la
muestra, verter 100 ml en el embudo y filtrar con ayuda del vaco. Enjuagar el embudo con la
membrana todava en su lugar, con 3 porciones de 20 a 30 ml de agua de dilucin estril. Filtrar
un volumen similar de la muestra, o una dilucin de ella, a travs de dos membranas
separadas.

d) Transferencia de la membrana

Despus del ltimo enjuague y terminada la filtracin, quitar el embudo y con ayuda de la pinza
de punta redondeada flameada; levantar la membrana y sobreponerla, ya sea en una caja de
Petri con medio de agar en un cojinete absorbente estril saturado previamente con medio de
lquido en una caja de Petri. Para evitar cualquier crecimiento confluente, verter cualquier
exceso de medio antes despus de colocar la membrana en el cojinete en un medio de agar
fundido a 45 C, vertido sobre una base de agar al 1.5% en una caja de Petri.

121
Asegurarse de que no haya burbujas de aire atrapado entre la membrana y el medio. Para
diferentes volmenes de la misma muestra, puede reutilizarse el equipo de filtracin sin
desinfectarlo, siempre y cuando se filtren primero los volmenes ms pequeos. Para filtrar otra
muestra, usar otro equipo de filtracin o bien desinfectar el equipo, por ejemplo, por inmersin
en agua hirviendo durante cuando menos un minuto. As tambin se debern seguir las
instrucciones del fabricante para la desinfeccin.

Durante la filtracin de una serie de muestras, no es necesario desinfectar la base del filtro a
menos que se contamine o que se dae la membrana. No alternar la filtracin de muestras
contaminadas con muestras de agua tratada en el mismo equipo. Primero filtrar todas las
muestras de agua clorada y aquellas de las que se esperan resultados negativos y despus las
muestras contaminadas. Se sugiere que se utilice un equipo de filtracin para todas las
muestras cloradas y otro para las muestras contaminadas.

e) Incubacin

Invertir las cajas de Petri y colocarlas en una incubadora. Las cajas que contienen membranas
en cojinetes absorbentes, deben colocarse siempre en recipientes hermticos para evitar la
desecacin del medio. Incubar una membrana ya sea a 35 0.5 C 37 0.5 C, entre 18 y 24
horas para aislar los organismos coliformes; incubar la otra membrana a 44 0.5 C entre 18 y
24 horas para organismos coliformes termotolerantes. El mismo tipo de medio generalmente
puede usarse para ambas membranas, pero utilizar el medio MFC solamente a 44 C y los
medios Endo y LES Endo a 35 37 C.

Nota: Se recomienda un perodo preliminar de incubacin a menor temperatura, como por ejemplo
a 30 C durante las primeras 4 horas de incubacin para reactivar organismos, especialmente en el
anlisis de agua potable. El cambio puede efectuarse ya sea por transferencia a otra incubadora o
utilizando un aparato, en el que la temperatura cambia automticamente despus de un perodo
dado. Idealmente todas las cajas deben colocarse en la incubadora al mismo tiempo.
Alternativamente, las membranas pueden incubarse durante un perodo limitado (2 a 4 horas) en un
medio de reactivacin y despus transferirse a otro medio, usualmente selectivo, para proseguir la
incubacin.

f) Examen de las membranas

Las cajas o membranas deben examinarse inmediatamente. Si esto no es posible, pueden
almacenarse entre 4 y 5 C durante perodos cortos, siempre y cuando esto no afecte la
apariencia de las colonias.

Para los organismos coniformes, se debern examinar las membranas y contar como
organismos coliformes presuntivos todas las colonias, independientemente del tamao que
muestren, que tengan las siguientes caractersticas despus de su incubacin a 35 37 C:

122
En agar lactosa TTC con tergitol 7 (6.2.1): Un halo central amarillo en el medio bajo la
membrana.
En agar lactosa con tergitol 7 (6.2.2): Una coloracin amarilla, naranja o rojo ladrillo con un
halo central amarillo en el medio bajo la membrana.
En membrana con caldo lauril sulfato (6.2.3): Un color amarillo extendindose hacia la
membrana.
En caldo o agar Endo (6.2.4): Un color rojo obscuro con brillo metlico verde-dorado.
En agar LES Endo (6.2.5): Un color rojo obscuro con brillo metlico verde-dorado.

Considerar como organismos coliformes termotolerantes presuntivos todas las colonias que
muestren, despus de incubacin a 44 C, las mismas caractersticas coloniales que se
describen anteriormente (9.6.1). Si se usa medio MFC (6.2.6), las colonias sern de color azul.

g) Es importante hacer notar que las cuentas de colonias en membranas a 37 y a 44 C,
son solamente resultados de coliformes presuntivos

Dado que no se detecta la produccin de gas, hay tambin un supuesto adicional de que los
organismos que forman las colonias pueden producir gas. Para el anlisis de agua cruda o
parcialmente tratada, esto puede ser suficiente, pero para agua potable y otras circunstancias,
es importante llevar a cabo las pruebas confirmativas.

Resembrado, incubacin y examen

Para confirmar los resultados de la membrana, resembrar cada colonia (9.6.1) un nmero
representativo de ellas (una por tubo) en agua lactosa peptona (6.3.1), e incubar a 35 37 C
durante 48 h. La produccin de gas durante este perodo confirma la presencia de organismos
coliformes. Para organismos coliformes termotolerantes y E. coli presuntiva en membranas, ya
sea que hayan sido incubadas a 44 C 35 37 C, resembrar cada colonia (9.6.2) un
nmero representativo de ellas (una por tubo), en agua lactosa peptona y agua triptona e
incubarlos a 44 C durante 24 h. La produccin de gas en agua lactosa peptona, confirma la
presencia de organismos coliformes termotolerantes,mientras que el desarrollo de un color rojo
en la superficie del cultivo en agua de triptona despus de la adicin de 0.2 a 0.3 ml de reactivo
de Kovacs (6.4.1), confirma la presencia de E. coli presuntiva.

Nota:

1. El uso de caldo de lauril triptosa manitol con triptofano, permite analizar tanto la produccin
de gas como de indol en un solo tubo.

2. La deteccin de E. coli presuntiva se considera una evidencia satisfactoria de contaminacin
fecal. Sin embargo, pueden llevarse a cabo mayores pruebas para la confirmacin de E. coli
si se considera necesario.

123
h) Prueba de oxidasa

Algunas bacterias encontradas en el agua pueden conformarse a la definicin de organismos
coliformes en muchos aspectos, pero pueden producir gas a partir de lactosa solamente a
temperaturas inferiores a 37 C. Por consiguiente, dan resultados negativos en las pruebas
confirmativas estndar para organismos coniformes, y su presencia en agua usualmente no se
considera significativa. Las especies de Aeromonas que se encuentran naturalmente en el
agua, tienen una temperatura ptima de crecimiento en el rango de 32.5 2.5 C, pero a pesar
de ello pueden producir cido y gas a partir de lactosa a 37 C. Tienen poco significado como
indicadores de contaminacin fecal y se distinguen del grupo coliforme por una reaccin de
oxidasa positiva.

Llevar a cabo la prueba de oxidasa con subcultivos puros de organismos fermentadores de
lactosa, crecidos en medio nutriente de agar, como sigue:

Colocar de 2 a 3 gotas de reactivo de oxidasa (6.4.2) recientemente preparado, en un papel
filtro en una caja de Petri.
Con una varilla de vidrio o un asa de inoculacin de platino (no de nicromel), transferir un
poco del crecimiento al papel filtro preparado.
Considerar la aparicin de un color azul oscuro purpreo dentro de un perodo de 10 seg
como una reaccin positiva.

Nota: En cada ocasin en la que se utilice el reactivo de oxidasa, llevar a cabo pruebas de
control con cultivos de organismos que den una reaccin positiva (Pseudomona aeruginosa), y
uno que d una reaccin negativa (E. coli).

3.2.7. Expresion de resultados

A partir del nmero de colonias caractersticas contadas en las membranas y tomando en
cuenta los resultados de las pruebas confirmativas, calcular el nmero de organismos
coliformes, organismos coliformes termotolerantes y Escherichia coli presuntiva presentes en 10
ml de la muestra, expresando el resultado como unidades formadoras de colonias en un
volumen de referencia especificado de la muestra (generalmente 100 ml 1 ml) de acuerdo con
la siguiente frmula:

Colonias coliformes totales Colonias coliformes contadas x vol. de referencia.
Volumen de referencia
=
Volumen filtrado de muestra

Que puede expresarse como:

S Ni
Cs =
(n1V1 F1 ) + (n2 V2 F2 ) +......+ (nn Vn Fn )
Vs

124
Donde:

Cs = Nmero de unidades formadoras de colonias en el volumen de referencia Vs de la
muestra.
S Ni = Suma de las colonias en todas las cajas o membranas contadas filtradas/siembras de
dilucin F1.
n1 = Nmero de cajas contadas para una dilucin particular F1.
V1 = Volumen de dilucin de la muestra F1 en la placa i.
F1 = Dilucin usada para la porcin de muestra V1 (F=1 para una muestra no diluda, F=0.1
para una dilucin a 10 veces, etc).
Vs = Volumen de referencia seleccionado para expresar la concentracin de los
microorganismos en la muestra.

Nota: La cuenta final as obtenida, es el promedio ponderado de las cuentas de cada una de las
placas.

3.2.8. Reporte de la prueba

El reporte de la prueba debe hacer referencia a esta norma y dar toda la informacin relevante,
incluyendo:

a) Todos los detalles necesarios para la identificacin completa de la muestra.
b) La tcnica y medios de cultivo empleados.
c) El tiempo, temperatura y condiciones de incubacin.
d) Los resultados, expresados de acuerdo con lo establecido en el punto 10.
e) Cualquier suceso particular observado durante el curso del anlisis y cualquier operacin no
especfica da en el mtodo o considerada opcional que pueda haber influido en los
resultados.

3. 3. Anlisis del plancton

3.3.1. Fitoplancton

a) Anlisis cualitativo (Cyanophyta, Chlorophyta, Euglenophyta, Pyrrophya, Bacillariophyta
centrales, pennales).

Por sus cortos ciclos vitales, las algas microscpicas responden rpidamente a los cambios
ambientales ocasionados de manera natural o por las actividades humanas, por esto la
composicin de sus especies es un indicador de la calidad del agua en la que se encuentran, y
por tanto es necesario analizar la estructura de las comunidades para caracterizar el ambiente
que los rodea.

En los contextos taxonmico y ecolgico se requiere de la encuesta descriptiva, comparativa o
del estudio de un grupo de algas nacidas en algn intervalo de tiempo y en el mismo lugar, por
lo que se pueden obtener conclusiones de observaciones nicas al comparar los grupos de
algas de dos o ms localidades diferentes como ros, arroyos, lagos, esteros, lagunas y el
medio marino (De la Lanza, 2003).

125
Nace de aqu la importancia de familiarizarse con los grupos taxonmicos ms frecuentes que
se presentan en una muestra de fitoplancton.

Las algas se pueden dividir en 8 subdivisiones que son las siguientes:

Cianfitas: Se trata de organismos unicelulares carentes de un ncleo verdadero y de
plastidios, que se multiplican por divisin transversal. La mayora de estas especies vive en el
agua, aunque algunas de stas tienen la habilidad de vivir en la tierra porque pueden fijar el
nitrgeno atmosfrico a ellas.

Euglenfitas: Son algas de estructura muy sencilla, cuya caracterstica ms distintiva es la
presencia de una mancha de pigmento fotosensible. stas disponen de uno o dos flagelos, lo
cual les permite cambiar su forma, adems se multiplican por divisin longitudinal.

Pirrfitas: Son algas en su mayora unicelulares que tienen dos flagelos de longitud distinta. La
clula se encuentra desnuda o provista de una cubierta ms o menos dura. Al igual que los
Euglenfitos tienen un ocelo, que junto con su forma de vida parasitaria o depredativa (en
algunos casos), posibilita que en el pasado se les tomara como organismos animales. Esta
especie tambin es marina, excepto por algunas que son terrestres (Noctiluca miliaris).

Crisfitas: Conocidas como algas amarillas, son organismos unicelulares o pluricelulares que
se renen en colonias. Su principal caracterstica es la presencia de cromatforos con
pigmentos de color amarillo, que les confiere un aspecto dorado. Son de morfologa variable
con flagelos y sin ellos, y en algunos casos se mueven por rizpodos. Siempre se reproducen
por reproduccin vegetativa.

Clorfitas: Las clorfitas o algas verdes son en su mayora de color verde, pueden ser unicelulares
pluricelulares y de formas muy variables. La mayora de las especies microscpicas son propias
de agua dulce, aunque hay nmerosos grupos marinos que alcanzan cierto tamao, como la
conocida lechuga de mar. Se multiplican por divisin celular, o sexualmente, o por la fusin de dos
gametos de tamaos diferentes. Este grupo de algas se encuentra muy extendido en la naturaleza,
ya que algunas de estas le dan color a los estanques o cubren la capa de los rboles. Esta especie
se mantiene en grupos, como muchas de las especies de la costa marina.

Carfitas: Son algas muy complejas cuya estructura se parece a veces a la de las
fanergamas. De color verde en su mayora, son frecuentes en las orillas de los ros y lagos y
muy pocas especies estn en la vida marina. Estas se reproducen sexualmente o por va
vegetativa.

Nefitas: Son algas que alcanzan mayor tamao (hasta 100 mm). Aunque poseen clorofila los
pigmentos marrones las esconden, por lo que presentan coloracin marrn o parda. Estas algas
son tpicas del agua salada pero muy pocas de ellas viven en agua dulce.

Rodfitas: A estas algas se le conoce como alga roja, comprenden especies tpicas de aguas
marinas de grandes profundidades en zonas donde otras especies no pueden sobrevivir por la
falta de la luz. Son de color rojo, aunque poseen as mismo clorofila. Se reproducen
sexualmente y asexualmente y poseen complicados ciclos de alternancia de generaciones.

126
b).- Anlisis cuantitativo

Es importante considerar el anlisis cuantitativo de las algas microscpicas bioindicadoras,
pues su abundancia es determinante en la generacin de problemas, ya que su florecimiento
ocasiona un efecto de sombreado en la columna de agua, restringiendo la actividad fotosinttica
de otras algas en las aguas subyacentes. Tambin dan color al agua, desde tonalidad pardo-
amarillenta hasta marrn y depende de las especies que la ocasionan, concentracin y efecto
fisiolgico. Por ejemplo, rojo ladrillo (Dinophysis acuminata), rojo opaco a rojo tenue
(Cochlodinium spp.), pardusco (Pyrodinium bahamense var. compressum, Chaetoceros
curvisetus, Skeletonema costatum), rosa claro a pardo (Noctiluca scintillans), verde claro
(Gyrodinium spp.), verde oscuro (Synechococus spp. Chroococcus minutus, C. turgidus). Pero
su mayor efecto se produce cuando los organismos mueren (De la Lanza, 2003).

Fraccionamiento de las muestras de plancton

Cuando una muestra de plancton se encuentra formada por cientos o miles de organismos de
diferente tamao y stos se tienen que contar e identificar, es frecuente el uso de
fraccionadores de muestras, los cuales son bastante tiles cuando existen de por medio
razones de tiempo y costo. Sin embargo suelen producirse errores al extrapolar los resultados
al volumen total de la muestra, por lo que se recomienda usar el separador slo cuando sea
indispensable y tratar de fraccionar al mnimo la muestra.

El submuestreador ms utilizado es el separador Folsom de dos vas, formado por un recipiente
cilndrico giratorio que se encuentra dividido por un intersepto; el cilindro se encuentra montado
sobre dos tabiques delgados, los cuales se colocan sobre una tablilla que puede ser nivelada.
La muestra se coloca en el recipiente giratorio y se homogeniza mediante movimientos de
agitacin; despus se deja caer en los colectores que separan la muestra en partes iguales.
Para el caso del fitoplancton, si la muestra se obtuvo con botella, basta con tomar con una
pipeta volumtrica la cantidad deseada.

Conteo de fitoplancton

1.- Coloque la muestra o submuestra en la cubeta o cmara de sedimentacin.
2.- Deje reposar de 24 a 72 horas, dependiendo de la cantidad de fitoplancton de la muestra.
3.- Coloque la cubeta bajo el microscopio invertido y enfoque los organismos.
4.- El recuento de las clulas debe realizarse en dos etapas:

a). Primero se examina la mitad o todo el fondo de la cmara a poco aumento (10X), para
contar las formas ms grandes, generalmente presentes en nmero reducido.
b). A continuacin se examinan a gran aumento (40X) dos o tres transectos y se cuentan las
formas ms pequeas.

5.- Para calcular el nmero de clulas por unidad de volumen de muestra, es necesario conocer
la longitud de los transectos y el dimetro del campo del microscopio (que depende del
aumento utilizado).

127
Para reducir los errores estadsticos de recuento, es necesario contar un nmero suficiente de
organismos; por lo menos 100 individuos de las especies ms importantes.

Los clculos para obtener el nmero de clulas por volumen de agua se hacen siguiendo la
frmula:

n x l x 1000 mm
3

Clulas /m =
d x t h 1 ml

Donde

n = Nmero de clulas contadas en los transectos.
d = Dimetro del campo, en mm; si se desconoce, se determina mediante un micrmetro ocular.
t = Longitud de los transectos, en mm.
h = Altura de la cmara de sedimentacin, en mm.

Recuento de Sedgwick-Rafter

Es un dispositivo empleado comnmente para el recuento de plancton. El mayor inconveniente
es que no se pueden utilizar objetivos de gran aumento, por lo que la clula no es apropiada
para examinar nanoplancton. Tiene aproximadamente 50 mm de largo por 20 mm de ancho y 1
mm de profundidad. El rea total del fondo son 1000 mm
2
aproximadamente, y el volumen total,
1000 mm
3
o 1 ml.

Para el recuento se coloca el cubreobjetos de vidrio diagonalmente a travs de la clula y se
agrega 1 ml de muestra con una pipeta de 1 ml de luz amplia. Si la muestra es demasiado
densa, deber desecharse y colocar otra diluida.

La clula Sedgwick-Rafter es colocada en el microscopio y se enfoca con el objetivo 10X. Se
realiza el conteo por tiras y el nmero de stas depender de la precisin que se quiera
obtener. Dedzcase el nmero de plancton en la clula a partir de la siguiente ecuacin:

C x 1000 mm
3

No./ml =
L x D x W x S

Donde:

C = Nmero de organismos contados.
L = Longitud de cada tira en mm.
D = Profundidad de una tira en mm.
W = Anchura de una tira en mm.
S = Nmero de tiras contadas.

128
Recuento con cmara Palmer-Maloney (P-M)

Est diseada especficamente de nanoplancton. Tiene una cmara circular de 17.9 mm de
dimetro, 0.4 mm de profundidad y volumen de 0.1 ml. Su poca profundidad permite utilizar
objetivos de 40 a 45X, con suficiente distancia de trabajo. Su principal inconveniente es que
estos aumentos a menudo son insuficientes para identificacin y recuento de nanoplancton.

Introdzcase la muestra con una pipeta en uno de los canales de la cmara de 2 por 5 mm,
con el cubre colocado en su sitio.
Al cabo de un periodo de sedimentacin de 10 minutos, cuntense los elementos del
plancton en campos elegidos al azar, en un nmero dependiente de la densidad y variedad
del plancton y de la precisin estadstica deseada.

En esta cmara o cualquier otra circular, se puede contar por tiras, midiendo el dimetro
efectivo y contando dos tiras perpendiculares que se crucen en el centro. Calclese el nmero
por mililitro como sigue:

C x 1000 mm
3

No./ml =
A x D x F
Donde:

C = Nmero de organismos contados.
A = rea de un campo.
D = Profundidad de un campo en mm.
F = Nmero de campos contados.

Recuento con hematocitmetro

En una placa de recuento, tiene una cuadrcula rayada divisiones de 1 mm
2
la cual se encuentra
acoplada con un cubre de vidrio esmerilado. La cmara tiene 0.1 mm de profundidad.
Introdzcase la muestra con una pipeta y obsrvese con un aumento de 450X. Cuntese todas
las clulas del interior de la cuadrcula. La cmara va acompaada con las instrucciones
detalladas del fabricante con las normas para uso adecuado y para los clculos. Un
inconveniente de estas clulas de recuento, es que la muestra debe tener una densidad de
plancton muy alta para que proporcione datos estadsticamente fiables.

* Para mayor informacin consultar el libro Mtodos Estndar.

Identificacin de grupos taxonmicos

Esta tcnica constituye un mtodo sencillo para obtener la abundancia relativa y diversidad de
los organismos fitoplanctnicos.

1. La muestra obtenida con la red se deja sedimentar 30 minutos.

129
2. Con una pipeta Pasteur se toma una muestra directa del fitoplancton sedimentado,
introducindola muy despacio para evitar la agitacin del medio.

3. Se realizan 10 preparaciones temporales (por cada uno de los ambientes muestreados),
poniendo una gota de la muestra sobre un portaobjetos y colocando un cubreobjetos.

4. Observe al microscopio ptico o invertido, moviendo de derecha a izquierda las
preparaciones, anotando el nmero de organismos presentes e identificando los grupos con
la ayuda de claves taxonmicas y libros especializados.

Con los datos obtenidos de las 10 preparaciones, elabore en papel milimtrico un histograma,
poniendo en el eje de las abscisas los diferentes grupos de organismos y en el eje de las
ordenadas sus porcentajes. Con esto se pueden observar las diferencias existentes en la
diversidad y abundancia de las especies en los diferentes ambientes acuticos.

3.3.2 Anlisis de zooplancton

Coppodos, quetognatos, nauplios, ostrcodos, cladceros, rotferos, larvas pluteus, larvas de
peces, etc.

a). Anlisis cualitativo

La riqueza de grupos zooplanctnicos en una muestra de agua, puede ser indicativo del estado
de salud del ecosistema, de pocas de reproduccin de las especies, de la abundancia de
fitoplancton presente, de perturbaciones antropognicas, de las condiciones hidrolgicas
prevalecientes, de los ritmos, fluctuaciones y sucesiones propias de esta comunidad.

Como una primera etapa el acercarse al reconocimiento de los grupos representativos de una
muestra de zooplancton, a travs de claves de identificacin o lminas especficas, son de vital
importancia.

b).- Anlisis cuantitativo

La distribucin de la abundancia del zooplancton en los ecosistemas acuticos, nos puede
indicar, entre otras cosas, el aporte de materia orgnica presente en stos, que puede ser por
causas naturales, ejemplo aportes de diferentes afluentes al sistema por alteraciones
antropognicas, e inferir as de manera indirecta, el potencial de las pesqueras en ciclos
inmediatos en el ecosistema. El manejo adecuado de los mtodos utilizados en el anlisis
cuantitativo es de primordial importancia, en los estudios de la comunidad zooplanctnica.

Los mtodos ms empleados para la cuantificacin de las muestras de zooplancton, van desde
el examen total de la muestra hasta la observacin de alcuotas de volumen determinado,
pasando por los separadores Folsom. Cada uno de dichos mtodos presenta serios
inconvenientes, ya sea por el tiempo que se emplea en el estudio de las muestras o por la baja
precisin de stas.

130
Fraccionamiento de las muestras de zooplancton

1.- Se lava perfectamente el separador Folsom.
2.- Se coloca en una mesa, en posicin perfectamente horizontal y se nivela.
3.- Se extraen de la muestra los organismos de gran tamao, ya que stos se evaluarn por
separado (medusas, ctenforos, sifonforos, entre otros).
4.- La muestra se coloca en el recipiente cilndrico giratorio.
5.- Se homogeniza la muestra tratando de no seguir el mismo patrn de agitacin, ya que de
esta forma se evita la produccin de corrientes uniformes definidas y la agrupacin de
organismos pequeos en la periferia y de grandes en el centro.
6.- La muestra se coloca en los colectores. En caso de quedar residuos de zooplancton en
cilindro giratorio, se hacen resbalar con ayuda de una pizeta con agua destilada.
7.- Se repite la operacin con alguna de las submuestras, tantas veces como se considere
necesario, hasta obtener un volumen que sea cmodo de contar bajo el microscopio de
diseccin.
8.- Se consideran tamaos de alcuota adecuados cuando los recuentos de las dos ltimas
alcuotas difieren en menos de 5 %.

Conteo y separacin de grupos taxonmicos del zooplancton

1.- Se sacan de la muestra o submuestra todos los organismos de gran tamao.
2.- La muestra se deposita en una caja de petri cuadriculada o en alguna caja de conteo.
3.- La muestra se coloca bajo el microscopio de diseccin y se deja reposar algunos segundos.
4.- Se lleva a cabo el conteo recorriendo lentamente cada uno de los espacios, y se registra el
nmero de individuos por grupo taxonmico.

Nota: Es necesario no mover las mesas ni agitar los microscopios, ya que con ello se
provocara el corrimiento de los organismos a otros espacios, lo que hace necesario empezar
de nuevo el conteo de los organismos.

5.- Con unas pinzas finas (de relojero) se separan de uno a diez organismos de cada grupo,
tomndolos suavemente para evitar mutilarlos o destruirlos. Posteriormente se colocan en
pequeos frascos de vidrio (frascos de Gerber, ampolletas o botellas homeopticas), con
formol al 4 % alcohol al 70 %.

6.- Los organismos se identifican con la ayuda de claves taxonmicas consultadas en libros y
artculos especializados, as como con el apoyo de esquemas de los grupos ms
abundantes.

Otros mtodos alternativos de cuantificacin del zooplancton tambin pueden ser las cmaras
Sedgwick-Rafter, Palmer-Maloney y hematocitmetro.

131
Fitoplancton. Diatomeas centrales (Smith, 1977) (tomado de Snchez Rueda-Ponce
Mrquez, 2003)

Coscinodiscus Coscinodiscus wailesii Coscinodiscus en divisin
celular

Coscinodiscus Arachnoiduscus ehrenbergi Coscinodiscus asteromphatus

Coscinodiscus Coscinodiscus Coscinodiscus

Diatomeas centrales y penales (Newell y Newell, 1979) (tomado de Snchez Rueda-Ponce
Mrquez, 2003)

Streptotheca thamensis Fragilaria oceanica Thalassionema nitzschioides

Pelurosigma sp. Asterionella japonica Licmophora sp.

132
Diatomeas centrales, Biddulphia (Smith, 1977) (tomado de Snchez Rueda-Ponce Mrquez,
2003)

Biddulphia obtusa Biddulphia Biddulphia reticulata

Biddulphia aurita formando esporas Biddulphia aurita

Biddulphia Biddulphia

Biddulphia longicruris Biddulphia longicruris

133
Diatomeas centrales, Chaetoceros (Smith, 1977) (tomado de Snchez Rueda-Ponce
Mrquez, 2003)

Chaetoceros Chaetoceros Chaetoceros

Chaetoceros decipiens Chaetoceros brevis

Chaetoceros diversus Chaetoceros didymus

134
Diatomeas penales, Nitzschia (Smith, 1977) (tomado de Snchez Rueda-Ponce Mrquez,
2003)

Nitzschia seriata Nitzschia paradoxa

Nitzschia

Bacillaria

Licmophora flabellata Licmophora

135
Flagelados (Newell y Newell, 1979) (tomado de Snchez Rueda-Ponce Mrquez, 2003)

Rabdosphaera sp.
Pyramimonas sp.
(criptophyceae)
Silicoflagellate

Prorocentrum micans
Varias formas de
cocolitofridos
Prorocentrum scutellum

Chromulina sp. Isochrysis sp.
Hemiselmis
cryptophyceae
Noctiluca scintillans

136
Dinoflagelados (Newell y Newell, 1979) (tomado de Snchez Rueda-Ponce Mrquez, 2003)

Phalacroma sp. Dinophysis acuta Gynodinium glaucum Exuviella sp.

Goniauolax sp P. depressum P. divergens P. granii

Piridinium
excentricum
P. globulum Diplopsalis lenticula

Ceratium
candelabrum
C. gravidum C. setaceum

137
Dinoflagelados, Ceratium (Newell y Newell, 1979) (tomado de Snchez Rueda-Ponce
Mrquez, 2003)

C. tripos C. macroceras

C. lineatum C. extensus C. longipes

C. furca Ceratium fusas C. arclicum

138
Zooplancton: Tintnidos (Newell y Newell, 1979) (tomado de Snchez Rueda-Ponce
Mrquez, 2003)

Epiplocycloides
reticulata
Flavella ehrenbergii Helicostomalla subulata
Rhabdonella
amor

Dictyocysta dilatata Ptychocylis arctica Dictyocysta alagans
Codonella
amphorella

Condonellopsis
pusilla
Coxiella ampla Codonellopsis acuadata
Acanthostomella
norvegica

139
Foraminferos y acantridos (Newell y Newell, 1979) (tomado de Snchez Rueda-Ponce
Mrquez, 2003)

Globigerina inflata (600 ) Globigerina pachyderme

Globigerina bulloides Acanthochiasma serrulatum

Globigerina quinquelobe Acanthochiasma fusiforme

140
Radiolarios y oligtricos (Newell y Newell, 1979) (tomado de Snchez Rueda-Ponce
Mrquez, 2003)

Strombidium styliferum Strombidium canicum Strombidium gracillime

Strombidium acumination Strombidium strobilus Strombidium marinum

Hexacontinum sp (esqueleto) Thalassicolla sp. Lithomelissa sp. (esqueleto)

141
Antomedusas y traquimedusas (Newell y Newell, 1979) (tomado de Snchez Rueda-Ponce
Mrquez, 2003)

S. Prolifera Eucodonium brownei Sarsia eximia

Cladomena radiatum Bouganvillia ramosa S. tubulosa

Aglantha digitale Hybocodon prolifer Liriope tetraphylla

142
Antomedusas y leptomedusas (Newell y Newell, 1979) (tomado de Snchez Rueda-Ponce
Mrquez, 2003)

Melicertum octocostatum Laodicea undulata

Steenstrupia natans Turritopsis nuticula Phialella quadrata

Obelia sp. Cosmetira pilosella

143
Sifonforos (Newell y Newell, 1979) (tomado de Snchez Rueda-Ponce Mrquez, 2003)

Valella valella Muggiaea kochi Hippopodium hippopus

Dimophyes arctice Physalia physalia Eudoxides spiralis

Lensis conoidea Chakiohyes appendiculata

144
Sifonforos y ctenforos (Newell y Newell, 1979) (tomado de Snchez Rueda-Ponce
Mrquez, 2003)

a)
campana nadadora

Aphysonectia cormidium b) bractea Nanomia cara

Una colonia physonectico

a) campana nadadora
b) campana nadadora vista de
lado
c) Bractea

Bolinopsis infundibutum Beroe cumis Pleurobrachia pilaus

145
Quetognatos, Sagitta (Newell y Newell, 1979) (tomado de Snchez Rueda-Ponce Mrquez,
2003)

Sagitta setosa Sagitta elegans
Sagitta
serratodentata
Sagitta maxima
Sagitta
hexaptera

Krohnitta subsilis Sagitta lyra
Eukrohnia
hamata
Sagitta zetosios
Sagitta
macrocephala

146
Anlidos (poliqueros) (Newell y Newell, 1979) (tomado de Snchez Rueda-Ponce Mrquez,
2003)

Proceraea pica Autolytus edwardsi Proceraea cornuta Travisiopsis
lanceolata

Tomopteris
septendrionalis
Tomopteris
helgolandica
Lopadorhynchus
uncinatus
Lamisca hubrechti

Groefia celox (vista
anterior)
Callizona setosa (vista
anterior)
Proceraea prismatica

147
Crustceos (cladceros y ostrcodos) (Newell y Newell, 1979) (tomado de Snchez Rueda-
Ponce Mrquez, 2003)

148
Crustceos (copepdos: calanoides y ciclopoides) (Smith, 1977) (tomado de Snchez
Rueda-Ponce Mrquez, 2003)

Calanus Epilabidocera longipedata

Calanus Oithona spinorostris Centropages

Olthona Oithona helgolandica

149

Crustceos (cumceos, estomatpodos ispodos) (Smith, 1977) (tomado de Snchez

Tanaid Estomatopodo Munna Idothea

Sphaearoma Larva cyptoniscan

Cumacea

150
Crustceos (decpodos, ispodos y cumceos) (Smith, 1977) (tomado de Snchez Rueda-
Ponce Mrquez, 2003)

Systellaspis debilis
Synisoma
acuminatum
Pasiphaea tarta

Caridion gordoni
Synisoma
lancifar
Plesionika martia

Acanthephyra purpurea
Eurydice
grimaldii
Pasiphaea multidentata

Leptostylis villosa Pseudocuma longicornis

Hemilamprops rosea Diastylis turnida

151
Crustceos (anfpodos, gamridos e hipridos) (Smith, 1977) (tomado de Snchez Rueda-
Ponce Mrquez, 2003)

Hyperidae Hyperidae
Escala en mm

Crustceos (anfpodos: capllidos) (Smith, 1977) (tomado de Snchez Rueda-Ponce
Mrquez, 2003)

Metacaplrella Caprella

Caprella
Escala en mm

152
Crustceos (larvas nauplio) (Smith, 1977) (tomado de Snchez Rueda-Ponce Mrquez,
2003)

Escala en mm

153
Crustceos (larvas megalopas y zoeas) (Newell y Newell, 1979) (tomado de Snchez

Maia squinado
megalopa
Gennadas sp (penaidea)

Corystes cassivelaunus
megalopa
Ebalia tuberosa late
zoea
Nephrops norvegica 1era zoea

Lysmata seticaudata (hippoltidae) (zoea
estadio final)
Athanas sp (Alpheidae)

Spirontocaris spinus (hippolytidae) 1era zoea
Pontophilus norvegicus (crangonidae) zoea
estadio final

154
Pterpodos, prosobranquios y tecosomados (Newell y Newell, 1979) (tomado de Snchez

S. balea Spiratella halicina (apertura) P. reticulata

Carinaria lamarcki S. retroversa Peraclis bispinosa

J. globosa Hydrobia ulvae (adulyto) P. triacantha

Janthina janthina P. moluccensis J. exigua

155
Larvas de gasterpodos (Newell y Newell, 1979) (tomado de Snchez Rueda-Ponce
Mrquez, 2003)

Littorina neritoides

Vista dorsal Veliger en huevo Vista lateral veliger

Littorina littorea

Vista dorsal 0.6 mm Veliger Vista lateral

Albania crassa Trivia monorcha

veliger Concha primera veliger ltima veliger

Natica catena veliger
tardia
N. alderi estadio final
de veliger

Velutina sp.echinospira
larva
Lamellaria
perspicua
echinospira larva

156
Larvas de lamelibranquios (Newell y Newell, 1979) (tomado de Snchez Rueda-Ponce
Mrquez, 2003)

Veneracea valva izquierda V. ovata Venus stiatula

Dosinia sp. Petricola pholadiformis Mactra coralina Spisuta solida

S. elliptica Tellina fabula Mactracea valva derecha con gozne

T. crassa Cultellus pellucidus Tellinacea valva izquierda

Ensis ensis E. siliqua

157
Larvas de equinodermos (Newell y Newell, 1979) (tomado de Snchez Rueda-Ponce
Mrquez, 2003)

Luidia sarsi 1era
bipinnaria
L. farsi bipinnaria vista
lateral
Asterias rubens
bipinnaria
Asteropecten
irregularis

Antedon bifida
Asterias rubens
brachiolaria
Echinocardium cordatum echinopluteus

Echinocyamus pusillus echinoploteus Ophiothrix fragilis ophiopluteus

Ophiocomina nigra Ophiothrix fragilis ophiopluteus

158
Salpas y dolilidos (Newell y Newell, 1979) (tomado de Snchez Rueda-Ponce Mrquez,
2003)

Salpa zonaria forma agregados Salpa zonaria forma solitaria

Salpa fusiformis oozoide de la superficie ventral Salpa fusiformis blastozoide

Salpa asimtrica Forma solitaria Salpa asimtrica Forma agregados

Salpa democratica forma agregados Salpa democratica Forma solitaria

Doliolum gegenbauri var. tritonis
gonozooide de la izquierda
D. nationalis gonozooide
de la superficie dorsal

159
Apendicularias (Newell y Newell, 1979) (tomado de Snchez Rueda-Ponce Mrquez, 2003)

Fritillaria borealis Fritillaria ventusa Fritillaria tenella

Cola de Fritillaria pellucida Clavelina lepadiformis (larva)

Appendicularia sicula Oikopleura dioica

O. fusiformis

O. labradoriensis

160
3.- Analisis del necton

3.1 Grupos representativos

a). Caractersticas generales

3.2 Peces

a) Morfologa bsica general.
b) Caractersticas morfomtricas tiles en la identificacin.
c) Uso de claves de identificacin.

Necton: El necton esta integrado por aquellos animales dotados de medios de locomocin
capaces de contrarrestar los movimientos del agua. Los principales grupos de animales que
forman esta asociacin ecolgica son: crustceos, moluscos, peces, reptiles y mamferos,
dotados todos ellos de adaptaciones especiales para su desplazamiento por medio de la
natacin, as como para la captura de alimento y para la defensa y el ataque de sus presas.
Esto permite aprovechar las caractersticas del medio ambiente.

Los peces son el grupo mejor representado en el necton, por lo que esta gua se enfoca de
manera primordial a esta comunidad, se aportan esquemas de la morfologa externa que
incluye la forma, las medidas (morfometra) y la descripcin y posicin de: aletas y escamas,
regin ceflica, hocico, boca, aberturas branquiales, oprculo, membranas branquiostegas,
preoprculo, narinas, barbillas, ojos y coloracin.

La mayor parte de los peces en estado adulto presenta una forma tpicamente fusiforme que
acutico. Sin embargo, hay muchos peces cuya forma no es tpica.

Formas comprimidas: Ambos lados del cuerpo (en plano sagital) estn comprimidos. Se trata
de cuerpos altos que se presentan en organismos de las familias Carangidae, Stromateidae y
Gerreidae.

Formas deprimidas: Las caras dorsal y ventral estn ms prximas entre s en comparacin
con las dems formas corporales; esta caracterstica es propia de las familias Bothidae,
Cynoglosidae.

Forma truncada: Esta es una de las formas ms irregulares de los peces; se caracteriza por su
tendencia hacia la forma redondeada o globosa, pero con alguno de sus lados truncados, y se
presenta en las familias Ephippidae, Tetraodontidae, Diodontidae, Antennaridae y Molidae.

Formas atenuadas: Las partes ceflica y caudal estn adelgazadas, adems de que los
organismos son ms largos que gruesos; presentan esta forma las familias Belonidae,
Exocetidae y Sygnathidae.

Las medidas lineales de los peces o de alguna de sus estructuras (datos morfomtricos) son de
utilidad para determinar los diferentes niveles taxonmicos.

161
Los datos morfomtricos se obtienen colocando al pez sobre su lado derecho (con el hocico a la
izquierda del observador), el cual se mide con un ictimetro o regla graduada en milmetros.
Para medir estructuras pequeas se utiliza un vernier o un comps de dos puntas; las tallas se
consignaran refirindolas siempre al medio centmetro inferior o superior. Las tallas que
terminen medidas de longitud se registran siempre en milmetros.

Es recomendable obtener los datos morfomtricos de organismos recin capturados, ya que
stos se encuentran relajados. Si se trabaja con ejemplares preservados, los datos obtenidos
son menps precisos debido a la rigidez del material biolgico causada por los fijadores.

A continuacin se especifican las medidas morfomtricas ms empleadas en la
identificacin de los peces.

Regin ceflica: Basndose en la forma general del pez, la regin ceflica se delimita entre el
borde externo del oprculo y el borde de la boca. En esta regin se encuentran: el hocico, la
boca, el oprculo, las membranas branquiostegas, el istmo, el preoprculo, las narinas
(nostrillos), las barbillas y los ojos.

El hocico est delimitado por el margen anterior del ojo y el borde anterior de la mandbula
superior, incluye la boca, definida como el orificio de entrada hacia el aparato digestivo. La boca
esta formada generalmente por tres huesos; premaxilar, maxilar, y mandibular; los dos primeros
se localizan en la parte superior y forman la maxila, mientras que el ltimo se encuentra en la
porcin inferior y constituye la mandibula.

La longitud y la disposicin de los huesos determinan la posicin de la boca. Utilizando como
referencia un eje horizontal imaginario en el cuerpo del pez, los ictiolgos reconocen tres
posiciones bsicas: terminal, superior e inferior.

Boca terminal: Se caracteriza por la posicin del orificio de la cavidad bucal, que coincide con
el eje horizontal del cuerpo del pez. Adems, en este tipo de boca, la mandbula y la maxila
tienen la misma longitud. Casi todos los peces tienen este tipo de boca, la cul es caracterstica
en las familias Serranidae, Stromatidae y Carangidae.

Boca superior (dorsal u oblcua): El orificio bucal se localiza en posicin dorsal, de manera
que al observar al pez por el dorso de la cabeza, puede apreciarse el orificio. La mandibula y la
maxila tienen la misma longitud, pero se encuentran en posicin casi vertical en relacin con el
eje horizontal. Estas caractersticas se presentan en los peces de la familia Uranoscopidae.

Boca inferior: El orificio de la boca se encuentra muy por debajo del eje horizontal del cuerpo,
en posicin ventral, lo cual se debe a una modificacin del maxilar, que crece y se alarga ms
que la mandbula, como en los organismos de la familia Acipenseridae.

Debido a los hbitos alimenticios y a la forma de vida de los peces en su medio ambiente, se
han originado diversos cambios estructurales en la forma del hocico. Se presentan muchas
modificaciones de los huesos mandibular, maxilar y premaxilar; en algunos peces el premaxilar
puede desplazarse hacia delante, y se dice que es protrctil, como en los gurridos, y

162
semiprotrctil (debido a un hueso que no deja de mover totalmente hacia delante el premaxilar),
como en algunos organismos de la familia Carangidae.

En otros casos, la mandbula y el maxilar son largos y fuertes y se proyectan hacia el frente,
como en los organismos de las familias Belonidae y Lepisosteidae.

Otra modificacin se observa en la familia Syngnathidae: la mandbula y el maxilar se fusionan y
alargan, dando como resultado un hocico tubular.

Placa gular: Es una estructura de importancia sistemtica, constituida por un hueso alargado
que se encuentra por debajo del mentn, entre ambos lados de la mandbula inferior. Esta
presente en individuos de la familia Elopidae.

Aberturas branquiales: Casi todos los peces poseen dos aberturas branquiales localizadas a
ambos lados del cuerpo, las cuales varan en los diferentes grupos de peces; en casi todos
estn situadas por delante de las aletas pectorales, mientras que en las familias Ogcocefalidade
y Antenaridae se encuentran por detrs de ellas.

Las branquias pueden estar tambin bordeadas por membranas, como en las familias ,
oprculo, como ocurre en la mayora de los peces.

Istmo: Es la parte ventral anterior del organismo y se observa como un estrechamiento. Las
membranas branquiostegas se extienden hasta esta regin y pueden estar separadas o libres
del istmo; son de gran importancia sistemtica.

Oprculo: Se origina en el arco hioideo; presenta movilidad, la cul es efectuada por las
membranas branquiostegas, que actan como una vlvula que permite la salida del agua pero
no su entrada.

Preoprculo: Generalmente se encuentra unido al hueso opercular, y tiene un margen angular
con un lado vertical y otro inferior horizontal. Ambos lados pueden tener ornamentaciones, que
van desde pequeas espinas (preoprculo aserrado) hasta espinas largas hacia la parte
posterior; el nmero y la disposicin de la espina varan en cada especie o no existe en los
preoprculos lisos.

Narinas: En los peces seos hay estructuras sensitivas que los relacionan con su medio, como
los orificios en ambos lados del hocico, denominados narinas o nostrilos, los cuales
desembocan en un saco ciego y representan los rganos olfatorios; pueden ser de forma oval o
alargados, y su posicin y nmero vara. En la mayora de los telesteos se localiza un par de
nostrilos a cada lado del hocico, en posicin dorsal y con distinta funcin cada uno: entrada
(incurrente) y salida (excurrente).

Barbilla: Se trata de estructuras sensitivas en la regin ceflica; son extensiones o
proyecciones de la piel, en la cual se encuentran receptores tctiles o qumicos. Pueden
presentar diferentes estructuras y ubicacin, y reciben su nombre segn la regin sobre la que
emergen: maxilares, mandibulares, nasales, etc.

163
Similares a las barbillas, pero sin una funcin sensorial, son los cirros o papilas drmicas,
prolongaciones aplanadas de la piel que pueden adornar el borde de los labios u otras partes de
la cabeza.

Ojos: En los peces, la posicin de los rganos de la vista se puede determinar considerando la
ubicacin que tengan en relacin con la longitud ceflica; se observan tres posiciones: media,
anterior y posterior.

Aletas: Las aletas pueden estar constituidas por radios y espinas. Los radios son elementos
segmentados que pueden estar ramificados o no, y normalmente son blandos. Las
segmentaciones se observan con facilidad bajo el microscopio estereoscpico.

Las espinas nunca presentan segmentaciones y suelen ser duras; cuando se observan con el
microscopio estereoscpico, reflejan la luz emitida sobre ellas.

Generalmente son lisas, pero algunos peces presentan espinas aserradas.

Las aletas se clasifican en: aletas medias (dorsal, anal y caudal) y aletas pares (pectorales y
plvicas), y la notacin ms utilizada para designarlas es: D, aleta dorsal; A, aleta anal; C, aleta
caudal; P
1
aleta pectoral; y P
2
aleta plvica.

La aleta caudal es la ms importante para la natacin en la mayora de los peces; ha sufrido
diversas modificaciones en los diferentes grupos, dependiendo de su forma de vida, y puede ser
redondeada, convexa, bicncava, lanceolada, bifurcada y lunada.

Las aletas plvicas son muy importantes para la sistemtica de los peces. Se distinguen tres
posiciones, que se utilizan para separar grandes grupos: aletas torcicas, que estn
implantadas por debajo o alrededor de la base de las pectorales; abdominales, que se insertan
por detrs de la regin de las pectorales; y yugulares, que se encuentran sobre el istmo o
delante de ste.

En las diversas aletas el nmero de radios y espinas, o de ambos, se conoce como frmula
radial y sirve para determinar los diferentes grupos de peces.

Las espinas, siempre y cuando existan, se denotan con nmeros romanos y los radios con
nmeros arbigos. El nmero de espinas se separa de los radios por una coma si pertenecen a
una misma aleta, cuando existen dos aletas se emplea un guin. Ejemplos:

D.12 indica la presencia de una aleta dorsal con 12 radios.

D, III, 12 indica una aleta dorsal con tres espinas y 12 radios.

D, V-II,8 indica la presencia de dos aletas dorsales, la primera formada por cinco radios y la
segunda por dos espinas y ocho radios.

164
Escamas: Son caractersticas de los peces, aunque algunas especies carecen de ellas; derivan
de la dermis y varan de tamao, desde las casi microscpicas hasta las muy grandes y visibles
a distancia. Suelen estar firmemente implantadas en la piel, aunque en ciertos organismos son
caedizas y se consideran deciduas. Generalmente se encuentran imbricadas a manera de tejas,
con el borde libre dirigido hacia la parte posterior del pez.

En los peces seos pueden distinguirse tres tipos estructurales de escamas; ganoideas, que
son rmbicas y caractersticas de los pejelagartos; cicloideas, con forma de disco de borde ms
o menos liso; y ctenoideas, que se caracterizan por tener proyecciones dentadas en su borde
libre.

En la mayor parte de los peces, existe una lnea de escamas con poros o canales
microscpicos que cumplen funciones sensoriales; dicha lnea se ubica a ambos lados del
cuerpo y se conoce como lnea lateral.

Generalmente la lnea lateral es continua y recta; a simple vista se inicia en el margen superior
del oprculo y termina en la base de la aleta caudal, aunque puede continuar ms all de la
placa hiprica.

El nmero de escamas a lo largo de la lnea lateral tiene gran importancia para diferenciar
gneros y especies. El conteo se realiza a partir de la parte posterior del oprculo hasta poco
antes de la placa hiprica (pednculo caudal), donde las escamas comienzan a ser pequeas e
irregulares.

Coloracin Los peces muestran gran variedad de coloraciones, desde las ms simples y
opacas, presentes en casi todos los peces, hasta las ms exticas e inimaginables que se
observan en los peces de arrecifes coralinos. La amplia gama de colores de los peces obedece
a dos causas, una qumica y la otra fsica.

La coloracin qumica esta dada por los cromatforos o biocromos, que contienen grnulos de
pigmento y se localizan en la dermis. Por los colores que poseen, los peces se dividen en
eritrforos (rojo), xantforos (amarillo), melanforos (negros) y leucforos (blanco).

La coloracin fsica es provocada por clulas especializadas llamadas iridocitos o
esquemacromos, que contienen en su superficie una sustancia refringente denominada
guanina. La combinacin entre la coloracin qumica y la fsica produce efectos de interferencia
que dan lugar a una amplia gama de colores.

La coloracin es utilizada por los peces principalmente para comunicarse y puede ser crptica o
de ocultamiento; disruptiva, que se caracteriza por la presencia de bandas longitudinales o
transversales negras y blancas alternadas que rompen la silueta de los peces que la presentan;
aposemtica o de advertencia, que se usa con fines de defensa; y epigmica, que se relaciona
con el sexo y permite al macho y a la hembra atraerse.
Los patrones de coloracin utilizados en la determinacin taxonmica se basan en los colores
que presentan los peces en edad adulta. Se recomienda tener cuidado al emplearlos ya que en
ejemplares preservados es necesario anotar la coloracin en fresco, porque despus sta vara
o desparece a causa de los fijadores usados.

165
Morfologa interna

Son pocas las estructuras internas utilizadas en la identificacin de peces; tradicionalmente slo
se utilizan los dientes, las branquias, las branquiespinas del primer arco branquial, as como la
osteologa en general, los otolitos y la vejiga natatoria.

Dientes: Casi todos los peces presentan dientes en diferentes regiones d su cavidad bucal.
stos reciben su nombre de acuerdo con la estructura sobre la cual estn implantados.
Normalmente se localizan en el premaxilar, en el maxilar y en el mandibular, pero es posible
encontrar dientes sobre los huesos vomer y palatino, as como en la faringe o en la lengua. De
acuerdo con su forma, existen dientes cnicos, incisivos, caninos, molares y viliformes.

Branquias: Se localizan dentro de la cmara branquial, aunque existen organismos que las
presentan externamente, como los peces pulmonados. En las branquias pueden distinguirse
tres partes: el arco branquial, con una funcin de soporte; las lminas branquiales, cuya funcin
se relaciona con la captacin de oxgeno; y las branquiespinas, que tambin tienen una funcin
de soporte, as como de filtracin del material alimenticio, el cul, mezclado con el agua,
atraviesa la cmara branquial.

El nmero de branquias presentes en la cmara branquial tambin es importante en la
identificacin de peces seos. En algunos organismos existe una seudobranquia, constituida
por filamentos branquiales reminiscentes de los espirculos preexistentes.

El primer arco branquial es til para la determinacin de gneros y especies, para lo cual se
requiere contar las branquiespinas y ver la separacin entre ellas, as como su grosor y tamao.

Recuento de branquiespinas

stas se encuentran implantadas sobre los arcos branquiales, en direccin opuesta a los
filamentos branquiales C y D y a lo largo del segmento inferior A y de uno superior B. Las
branquiespinas que se deben contar son siempre las del segmento horizontal o inferior del
primer arco branquial.

Otolitos: A ambos lados de la parte posterior del crneo se localiza un par de cmaras
denominadas cpsulas ticas, que a su vez se dividen en dos compartimientos, el utrculo y el
sculo, y una evaginacin llamada lagena; en estos compartimientos se localizan los otolitos,
que son secreciones calcreas suspendidas en un lquido llamado endolinfa. La funcin de los
otolitos es la percepcin de los sonidos, el mantenimiento del equilibrio y la orientacin de los
peces.

Los otolitos reciben diferente nombre, dependiendo de su ubicacin; el que se localiza en el
utrculo se denomina lapillus; el del sculo, sagita; y el de lagena, asterisco.
Vejiga gaseosa: Es un saco distensible que se localiza sobre la lnea media del cuerpo, entre
la columna vertebral y el intestino, y por detrs del proceso occipital. Su funcin es auxiliar en la
respiracin, en la percepcin y en la emisin del sonido, as como almacenar grasa, y
principalmente como rgano hidrosttico, permitiendo a los peces mantener una determinada
posicin en la columna de agua.

166
En algunos peces la vejiga se comunica con el aparato digestivo mediante el conducto
neumtico, un simple tubo que permite la salida rpida de gases. Los peces que presentan el
conducto neumtico funcional se denominan fisstomos y los que no tienen este conducto se
llaman fisclistos.

Clave de identificacin para las familias ms comunes de larvas de peces de agua dulce
y salobre (Lippson y Moran, 1974). Tomadas de Snchez Rueda-Ponce Mrquez, 2003.

Morfologa y desarrollo de huevos y larvas de un telesteo tpico (Lippson y Moran, 1974)

167
Acipenseridae: Larva de gran tamao;
densmente opaca; mimeros nmerosos.

Lepisosteidae: Disco sector; larva densa y
opaca; gran cantidad de mimeros; cola
heterocerca, posterior a las aletas dorsal y
anal; hocico alongado.

Anguillidae: Leptocfala: baja cantidad de
mimeros (104-111); tamao pequeo (slo
hasta 65 mm). Transformacin a anguila:
pocos mimeros; origen de la aleta dorsal
posterjior al punto medio entre la abertura
branquial y el vientre.

Congridae: Leptocfala: gran nmero de
mimeros (140-149); larva grande (hasta 160
mm); parche en forma creciente debajo del
ojo. Transformacin a anguila: nmerosos
mimeros; origen de la aleta dorsal anterior,
justo posterior a las pectorales.

Opichthidae: Leptocfala: mimeros
nmerosos, larva pequea (cerca de 70 mm),
tercer intestino prominente; hgado en forma
creciente sobre el vientre.
Anguila transparente: gran cantidad de
mimeros, origen de la aleta dorsal a la mitad
entre la apertura branquial y el vientre.

168
Clupeidae: Larva larga y delgada; saco
vitelino ms bien pequeo, anterior: abertura
anal posterior; origen de la aleta anal posterior
a la aleta dorsal.

Engraulidae: Larva larga y delgada; abertura
anal posterior, pero menos que en los
clupeidos; la aleta dorsal sobrepasa el origen
de la aleta anal; el maxilar se extiende ms
all del ojo.

Umbridae: Orificio anal lieramente posterior a
la mitad del cuerpo; vitelo con muchos
glbulos de aceite; urostilo grueso, oscurecido,
que se extiende hasta el margen posterior de
la aleta caudal; larva densamente pigmentada
con melanforos.

Esocidae: Larva con saco vitelino denso,
fuertemente pigmentada; orificio anal cerca de
2/3 atrs del cuerpo; larva alongada con el
hocico prolongado y deprimido; aletas dorsal y
anal posteriores.

Cyprinidae: Vitelo anteriormente esfrico,
posteriormente cilndrico; orificio anal
usualmente ligeramente ms all de la mitad
del cuerpo; una aleta dorsal; vejiga gaseosa,
con dos cmaron con crecimiento y
generalmente pigmentada dorsalmente.
Pigmentacin frecuentemente en hileras:
dorsalmente, mediolateralmente, centralmente
a lo largo de los mimeros y medio
ventralmente sobre el abdomen.

169
Cyprinidontidae: Larva robusta, regordeta;
orificio anal anterior, cerca de 2/5 de distancia
del dorso sobre el cuerpo, inmediatamente
posterior al vitelo; aleta caudal con radios al
eclosionar; boca pequea, superior; una
dorsal.

Poeciliidae: Larva con escamas y radios en
todas las aletas al nacer; boca pequea,
superior; una aleta dorsal corta (7-8 radios; 10
o ms en ciprinodntidos).

Atherinidae: Larva larga y delgada, orificio
anal anterior cerda de del dorso sobre el
cuerpo; pliegue preanal ausente o vestigial;
dos aletas dorsales, primera dorsal pequea;
aleta anal larga.

Gasterosteidae: Larva corta regordeta; orificio
anal a la mitad del cuerpo o ligeramente
posterior; con vasos sanguneos sobre el
vitelo; pocos y pequeos glbulos de aceite.

Syngathidae: Larva nica, con crestas seas
sobre cabeza y cuerpo; boca pequea y al
final el hocico truncado; anillos seos
alrededor del cuerpo.

170
Percichthyidae: Orificio anal ligeramente
posterior a la mitad del cuerpo; una sola gota
de aceite grande en la parte anteior del vitelo;
nmero de mimeros moderado (23-26); larva
tarda con boca y dientes bien desarrollados;
vejiga gaseosa presente, intestino
desarrollado; la primera aleta dorsal se
desarrolla secundariamente y es la ms
pequea, inicialmente separada de la segunda
dorsal.

Serranidae: Larva con saco vitelino pequeo
(1.5-2mm); gotas de aceite en la parte anterior
del vitelo; lava con cabeza grande; cuerpo
fuerte, boca grande con muchos dientes;
orificio anal a la mitad del cuerpo; con espinas
operculares y preoperculares; segunda dorsal
corta (11, 20 o ms en scianidos)

Centrarchidae: Orificio anal ligeramente
anterior a la mitad del cuerpo; una sola gota
de aceite grande en el vitelo; vejiga gaseosa
clara, intestino enrollado con crecimiento,
aletas dorsales espinosas y suaves continuas

Percidae: Orificio anal en la parte media del
cuerpo; una sola gota de aceite grande en la
parte anterior del vitelo; de mimeros
nmerosos (generalmente d 30-40); aleta
dorsal separada en dos.

Pomatomidae: Orificion anal en la larva con
vitelo posterior a la mitad del cuerpo, que llega
a ser anterior con el desarrollo; pliegue dorsal
ancho, extendindose hasta el cerebelo; una
sola gota de aceite grande posterior al vitelo.
24 mimeros; cabeza grande y bulbosa en
apariencia.

171
Scianidae: Orificio anal anterior a la mitad del
cuerpo; cola larga y acintada en la etapa
(vitelina) de saco vitelino; larva con cabeza
grande, boca grande y oblicua con dientes
peuqeos y prominentes; generalmente con
espinas preoperculares prominentes.

Blennidae: Larva con vitelo, corto y regordete,
orificio anal bien anterior en la regin torcica;
pectorales fuertemente pigmentadas; cabeza
grande y redondeada; aleta dorsal espinosa y
suave larga y continua, aleta anal larga;
espinas preoperculares bien definidas.

Gobiidae: Orificio anal a la mitad del cuerpo o
ligeramente posterior; vitelo pequeo y
anterior en la cra; larva con hocico
puntiagudo; vejiga gaseosa prominente
pigmentada dorsalmente; pequeos pigmentos
sobre el cuerpo; la primera dorsal se
desarrolla mucho despus que las otras aletas
verticales.

Stromateidae: Larva corta regordeta, cabeza
grande; orificio anal en la parte media del
cuerpo o ligeramente posterior; mimeros
cerca de 30 (nmero mayor que en los
pomatmidos); boca pequea.

Pleuronectidae: Larva larga delgada; orifico
anal anterior; cerca de 1/3 o menos del dorso
sobre el cuerpo; pliegue de las aletas ancho y
ligeramente pigmentado; aletas dorsal y anal
largas con muchos radios (D.60-76; A. 45-48);
el ojo izquierdo migra al lado derecho.

172
Soleidae: Orificio anal anterior a la mitad del
cuerpo (vara con la edad); pliegue de las
aletas ancho y pigmentado en bandas;
muchos glbulos de aceite pequeos en el
vitelo; larva profunda, plana; cabeza grande;
aletas dorsal y anal grandes (D. 50-56, A. 36-
42); el ojo izquierdo migra al lado derecho.

Tetraodontidae: Larva corta regordeta; orificio
anal ligeramente anterior a la mitad del
cuerpo; vitelo con muchos glbulos de aceite
pequeos; densamente pigmentada; cuerpo
cubierto con finos tubrculos, llega a ser
truncado con el desarrollo; alegtas verticales
posteriores.

Catastomidae: Recientemente capturada, la
larva presenta un vitelo largo y cilndrico; ms
bulbosa anteriormente; orificio anal posterior
2
/
3
- atrs sobre el cuerpo; una sola aleta
dorsal pero con ms radios que los ciprnidos;
tres filas o hileras de pigmento (variable); boca
inferior (etapas tardas); vejiga gaseosa con 2
cmaras con crecimiento.

Ictaluridae: Con barbillas evidentes al
eclosionar, vitelo grande y bulboso; vasos
vitelinos frecuentemente claros sobre el vitelo;
larva parecida al adulto.

Batrachoididae: Larva grande y robusta; su
saco vitelino se une al sustrato; vitelo
fuertemente irrigado; aletas dorsal y anal
largas y carnosas; larva parecida al adulto.

Nota: Estas claves pueden servir de gua, el profesor tiene la libertad de utilizar las que estn a
su disposicin.

173
Formas de cuerpo de los peces seos

174
Principales medidas morfomtrica en peces seos:

(1) escamas arriba de la lnea lateral
(2) escamas de la lnea lateral
(3) altura mxima
(4) espacio interdorsal
(5) escamas abajo

Huesos de la cabeza

175

Vista ventral de un pez

Lnea lateral

176
Tipos de boca

Tipos de aleta

Redondeada Truncada Lunar

Furcada Punteada Punteada lanceolada

177
Radios y espinas en peces seos

Lado Frente Lado Frente Lado Frente

a) Radio blando b) Radio blando espinoso c) Espina

Branquias y branquiespinas

Dientes en la cavidad bucal Branquias y branquiespinas

178
Tipos de escamas

Cicloidea Cicloidea Cilcoidea

Tiburn Rmbica ganoidea

Placa sea

Ctenoidea Ctenoidea

Morfologa de las escamas

Cicloideas
(A: annuli; L: Anillo juvenil)
Ctenoideas
(A: annuli; L: Anillo juvenil)

179
Principales medidas biomtricas en peces seos

Bometra Tipos de aleta caudal
mm % Long. patrn
Homocerca
redondeada

1 Homocerca recta
2 Homocerca bifurcada
3 Heterocerca
4 Dificerca
5 Otro
6
7
8 Frmulas radiales
9 1.aleta dorsal
10 2 aleta dorsal
11 Aleta anal
12 Aletas pectorales
13 Aletas plvicas
Aleta caudal
Nm Escamas Branquiespinas

No. de arcos
branquiales

Branquiespinas 1er
arco

Peso
Tamao
branquiespinas

Muestra de escamas
Tipo Anillos
Media
Dorsal
Ventral

Datos de diseccin
Contenido estomacal Gonadas Sexo
Volumen Peso
1
2

180
3.4.- Anlisis del bentos

La palabra bentos proviene del griego benthos que significa fondo del mar. El bentos est
constituido por aquellos organismos animales y vegetales que, dotados o no de movimiento,
viven en intima relacin con el fondo, ya sea para fijarse en l, para excavarlo, para marchar
sobre su superficie o para nadar en sus lmites sin alejarse de l. Su densidad vara de una
zona a otra del sistema bentnico, decreciendo progresivamente su abundancia con la
profundidad del medio acutico.

3.4.1. Grupos representados

Schyzomicetes o bacterias. Se encuentran principalmente en la capa del sustrato o sobre
otros organismos.

Chrysophyta. Denominadas diatomeas, pueden permanecer libres o sujetas al fondo de
manera individual o formando colonias.

Chlorophyta, Rhodophyta y Phaeophyta. Algas marinas que se distribuyen en el sistema
litoral o fital.

Potamogetonales. Monocotiledneas que se encuentran casi exclusivamente en la zona
infralitoral (Thalassia, Zostera, Posidonia).

Protozoo. Del orden de los foraminferos particularmente, y algunos del orden radiolaria.

Porifera. Todas las clases de esponjas, con excepcin de algunas especies de agua dulce.

Coelenterata. El grupo Anthozoa se puede considerar como exclusivo del bentos, as como un
gran nmero de organismos de la clase Hydrozoa y los Scyphozoa, que solo una parte de su
ciclo de vida pertenecen al bentos.

Turbellaria. Del Phylum Platyhelminthes, son especies propias del sistema litoral.

Nemertea. Grupo abundante en el sistema litoral de mares templados.

Nematodo. De vida libre sobre las rocas o en forma parsita en prcticamente todos los peces
y algunos invertebrados.

Phoronida, Brachiopoda y Echiuroidea. Phylum que tienen todos sus representantes
adaptados a la vida marina bentnica, al igual que la mayora de los Bryozoa, con algunos
representantes en agua dulce.

Mollusca. Con nmerosos representantes de todas sus clases en el bentos, as como la clase
Monoplacophora, que es exclusiva del sistema profundo o afital.

Annelida. Principalmente la clase Polichaeta, que es la que se encuentra en el bentos, y muy
pocos Oligochaeta.

181
Echinodermata. La cual es netamente marina, sus especies tpicas bentnicas se encuentran
en el sistema litoral y profundo.

Arthropoda. Un gran nmero de especies de la clase Crustacea (Cirripedia, Isopoda,
Amphipoda, Decapoda, Hapacticoidea); son tpicamente bentnicas, encontrndose algunas en
las fosas submarinas.

Chordata. En la que se encuentran Tunicata, Cephalocorda, Pisces (especialmente rayas,
anguilas, pejesapos, lenguados) y Mammalia, representada principalmente por los Pinnpedos.

La composicin y densidad de la comunidad bentnica en cuerpos de agua en condiciones
naturales son estables de un ao a otro. Por lo tanto las respuestas de estos organismos a las
perturbaciones ambientales son tiles para evaluar el impacto de residuos municipales y
agrcolas, de la industria del petrleo y otros impactos.

Para evaluar el impacto de una fuente de contaminacin deben compararse primeramente las
comunidades de macroinvertebrados y sus hbitats en los puntos de influencia del
contaminante, con los colectados en lugares no contaminados.

a) Morfologa bsica general

Crustceos. Su cuerpo esta formado por una cabeza (cefalen), seguida de un cuerpo largo
dividido en dos regiones, una anterior trax o perein y una posterior llamada abdomen o plen.
El cuerpo est segmentado y tiene muchos apndices similares: la cabeza tiene cinco
segmentos con apndices pareados en cada uno que son en posicin de anterior a posterior
antnulas, antenas, mandbulas; maxilulas y maxilas. Los apndices que ocupan el trax se
llaman pereipodos y los del abdomen plepodos. Poseen un escudo ceflico o un caparazn.
Las rdenes que lo integran son:

Decpoda. Su caparazn esta bien desarrollado, el cual encierra la cmara branquial; tienen
tres pares de maxilpedos y cinco pares de pereipodos, por eso se les denomina decpodos.
Los ms representativos son langostas, langostinos, cangrejos y camarones.

Tanaidacea. Son subcilndricos o un poco aplanados, su caparazn est fusionado con los
primeros segmentos torcicos por lo que los apndices del trax 1 y 2 son maxilpedos, el
segundo de los cuales presenta quelas. Los lados de caparazn se extienden a lo largo y
forman una cmara branquial; el abdomen es reducido en talla y longitud.

Ispoda. La caracterstica principal que presentan es que son aplanados dorsoventralmente,
pero algunos grupos son cilndricos o vermiformes y otras son parsitas. Carecen de
caparazn; tienen siete pares de pereipodos aunque algunos tienen cinco.

Amphipoda. Los gamridos son organismos aplanados lateralmente con una curvatura en la
superficie dorsal; carecen de caparazn y tienen el primer segmento torcico fusionado con la
cabeza, presentando un par de maxilpedos; el primer y segundo pereipodos modificados
como quelas o subquelas.

182
Moluscos. Son organismos invertebrados, con cuerpos blandos y babosos, los cuales en su
mayora estn protegidos por un exoesqueleto o concha, que puede estar formada por una, dos
u ocho piezas. Se dividen en clases que son:

Gastrpoda. Son organismos que reptan mediante un pie aplanado que se encuentra en la
superficie ventral; tienen, la gran mayora una masa visceral torcida hacia el lado derecho de la
cavidad del manto. Los ms representativos son los caracoles.

Pelecypoda o Lamellibranchia. Son bivalvos, han perdido la porcin ceflica, la masa bucal y
la rdula. En su mayora son filtradores por medio de sistemas ciliares con un desarrollo
extremo de las branquias. El manto tiene dos cubiertas membranosas simtricas y envuelven el
cuerpo completo; estas cubiertas secretan el exoesqueleto formado por dos valvas. Los
organismos ms representativos son las almejas y los ostiones.

Cephalopoda. Su caracterstica principal es que los ojos son prominentes rganos de los
sentidos. Otra caracterstica son sus tentculos prensiles que estn distribuidos alrededor de la
cabeza y la boca se encuentra en el centro de stos. Pueden tener ocho tentculos (octpodos)
y diez (decpodos). Adems cuentan con un sifn muscular ventral que controla el flujo de agua
al salir de la cavidad palial, produciendo un chorro que el animal emplea para desplazarse. Los
organismos representativos son los pulpos y calamares.

Amphineura (quitones) y Scaphopoda (colmillos).

Nemtodos. Son Organismos vermiformes de simetra bilateral y no segmentados; su cuerpo
es redondo en seccin transversal, cubierto por una cutcula en capas y su crecimiento por lo
general es acompaado por una muda. Se dividen en dos clases Adenophoera y Secementea.
Se encuentran en el medio marino desde la costa hasta las zonas abisales y en el medio
dulceacucola. Son abundantes pero no se les da tanta importancia en el bentos.

Nota: Se recomienda consultar claves de identificacin para los diferentes grupos que
constituyen el bentos en bibliografa especializada.

Anlisis de muestras

a) Preparacin de la muestra

1.- Se vaca la muestra en un juego de tamices, separando las rocas, palos u otro sustrato los
cuales son colocados en una charola blanca de poca profundidad.
2.- Una vez lavados los organismos son colocados con ayuda de unas pinzas o pinceles en un
recipiente.
Fijar con formol al 10 % o etanol al 70 % (llenar ms de la mitad del recipiente con el material
seleccionado).

183
b) Separacin e identificacin

1.- La muestra ya tamizada es colocada en una charola o bandeja blanca con poca profundidad
con agua.
2.- Para facilitar la separacin de los organismos se tien con rosa de bengala (200 mg/l) en el
conservador de formol o etanol por un periodo de 24 horas.
3.- Observar la muestra en el microscopio estereoscpico preferentemente en una caja petri y
colocando los organismos por separado.
4.- Se separan los organismos por categoras auxilindose con las claves de identificacin o
lminas disponibles.
5.- Los organismos una vez clasificados deben almacenarse en frascos y agregar formol al 5 %
o etanol al 70 % y colocar etiquetas con los datos correspondientes.

En estudios de impacto ambiental en el sedimento acutico, para la interpretacin de los
resultados se analiza la informacin de los organismos encontrados antes y despus
determinando las especies presentes y ausentes y por medio de una interpretacin de las
respuestas de las distintas especies a los contaminantes concretos, determinar el dao o
cambio significativo.

184
Representantes de la fauna intersticial (Aladro- Lubel et al., 1992)

185
Organismos representativos del sustrato rocoso

186
Discriminacin biomtrica en moluscos y crustceos

Los parmetros morfomtricos son de gran utilidad cuando se desea conocer la relacin que
existe entre un parmetro y otro, con lo cual se pueden caracterizar las especies, la poblacin y
el estado fisiolgico de los organismos. Adems poseen un indiscutible valor taxonmico.

El concepto de parmetro biomtrico est en relacin con las estructuras morfolgicas que son
posibles de cuantificar en un organismo, por ejemplo la longitud, la anchura, la altura y el peso
total y de las partes blandas.

En algunos organismos es posible evaluar estas medidas sobre sus estructuras externas, como
ocurre con algunos moluscos y crustceos. Esta informacin es de gran utilidad cuando se
realizan prospecciones pesqueras sobre las poblaciones de algunas especies en particular.
Debe seleccionarse el parmetro ms representativo del crecimiento del organismo, por
ejemplo la longitud total, a fin de tener una informacin confiable y significativa de la estructura
de las especies en estudio. Adems, es necesario que sea fcilmente determinable y
correlacionable con otros parmetros de probable inters, como el peso, la madurez sexual,
etctera.

Cuando se realiza un estudio
poblacional, es necesario
considerar todos los
parmetros biomtricos al
determinar las regresiones y
correlaciones existentes entre
un parmetro y otro.

Materiales

1 almeja
1 caracol
1 jaiba
1 regla
1 vernier

Parmetros biomtricos en los moluscos

Metodologa

En la presente prctica se consignan algunas de las medidas biomtricas ms usuales en
bivalvos, gasterpodos y crustceos (ver siguientes figuras). Se determinarn por lo menos 10
organismos de la misma especie, y se realizar una regresin y una correlacin entre la longitud
y el ancho de los organismos. En una hoja se debern registrar los datos, los resultados y las
conclusiones de la relacin que existe entre la longitud y el ancho, en estos grupos
taxonmicos.

187
Parmetros del gnero Callinectes

(A S/E) amplitud sin espina lateral
(AT) amplitud total, (L) Longitud
(AL) espinas anterolaterales
(PL) margen postlateral
(DF) dientes frontales
(EE) espina epistomial
(Q) quelpedo

a) vista dorsal

Determinacin morfolgica de sexos (tomado de Williams, 1974)

Hembra madura Hembra inmadura Macho

Medidas Bivalvos Gasteropodos Crustceos
Dientes frontales (DF)
Amplitud sin espina lateral
(AS/E)

Amplitud Total
Longitud (L)
E. anterolaterales (AL)
Margen postlateral (PL)
Espina epistomial (EE)
Quelipedo (Q)

188
3. 5. Anlisis del neuston

Son los organismos que permanecen o nadan en la superficie del agua como los grupos de
hempteros, grridos y vlidos (chinches de agua) y los escarabajos girnidos.

Los insectos del neuston representativo son de las siguientes rdenes:

Hemptera. Se conocen comnmente como chinches. Su color y tamao son variables, el
cuerpo es alargado o redondeado y robusto; las partes bucales estn adaptadas para picar y
succionar en forma de estilete.

Coleoptera. Son conocidos como escarabajos o mayates; tienen alas anteriores modificadas en
forma de estuche y endurecidas; las larvas son de forma alargada, la cabeza desarrollada y sus
partes bucales tipo masticador.

3.5.1. Anlisis cualitativo

Puede realizarse utilizando las cmaras de sedimentacin en el microscopio invertido y tambin
pued erealizarse utilizando el microscopio estereoscpico y compuesto.

3.5.2. Anlisis cuantitativo

Para el anlisis cuantitativo pueden utilizarse cmaras de sedimentacin de diferentes
volmenes en el microscopio invertido, as como las cmaras de Sedgwick-Rafter y Palmer-
Maloney descritas en el apartado de plancton.

3.6 Anlisis de perifiton

3.6.1. Grupos representativos

El perifiton incluye bacterias zoogleales y filamentosas, protozoos y algas fijos. Tambin los
tricpteros (frigneas), efempteros (moscas de mayo, odonatos (liblulas y caballitos del
diablo) y hempteros.

Dentro de los insectos representativos del perifiton se encuentran las rdenes:

Odonata. Su tamao y color es variable; la forma de su cuerpo es alargada con el prementon
modificado como un rgano prensil en forma de pinza y con branquias rectales o caudales. Los
ms conocidos son las liblulas y caballitos del diablo.

Ephemeroptera. Son de color pardo, su cuerpo es de forma alargada y algunas veces
aplanado; posee branquias a los lados del abdomen y con frecuencia con largos cercos
filamentosos caudales.

Trichoptera. Su cuerpo es alargado y cilndrico, frecuentemente presentan branquias
ramificadas sobre el cuerpo. La mayora de estos organismos construye sus refugios en forma
de sacos donde viven las larvas.

189
La abundancia y composicin del perifiton en un punto determinado depende de la calidad del
agua en ese lugar, por tanto las observaciones de su condicin son tiles para evaluar el estado
de las masas acuticas. Tiene la particularidad de presentar respuestas inmediatamente debajo
de las fuentes de contaminacin.

Cuando es utilizado como indicador de contaminacin, el inconveniente que presenta es la falta
de sustratos adecuados en el punto de muestreo.

El perifiton suele colectarse en sustratos naturales (palos, piedras o cualquier otro sustrato
sumergido y en sustratos artificiales (portaobjetos de vidrio, acrlico transparente, o dispositivo
de gradilla flotante).

Anlisis de muestras

Anlisis cualitativo

1.- Se coloca un poco de muestra en un portaobjetos y se coloca el cubreobjetos.

2.- La preparacin es observada en el microscopio primeramente con el objetivo de menor
aumento y los organismos son identificados con ayuda de las claves de identificacin y
bibliografa especializada.

Para interpretar los resultados cualitativos del perifiton se utiliza el sistema de saprobidad
desarrollado de Kolkowitz y Marsson, el cual divide los cursos de agua contaminados en
polisaprbicos, mesasaprbicos y y zonas oligosaprbicos, enumerando las caractersticas
de cada uno

Anlisis cuantitativo

Para el anlisis cuantitativo son utilizados diversos mtodos como el recuento de Sedwgwick-
Rafter, recuento por el mtodo del microscopio invertido, recuento proporcional de especies de
diatomeas, recuento y preparacin de muestras teidas y clorofila y feofitina entre otros.

Recuento de Sedgwick-Rafter

Se retira el perifiton del portaobjetos (que fue expuesto en el punto de muestreo por un periodo
de dos semanas) con ayuda de una navaja de rasurar y varilla de goma, evitando incluir el
perifiton de los bordes del portaobjetos. Las raspaduras son dispersadas en 100 ml de
conservador agitando enrgicamente o con una mezcladora. Se coloca el cubreobjetos
diagonalmente a travs de la clula de Sedgwick-Rafter y se agrega 1 ml de muestra. Si la
muestra es demasiado densa, deber desecharse y colocar otra diluida. La clula Sedgwick-
Rafter es colocada en el microscopio y enfocar con el objetivo 10 X. Se realiza el conteo por
tiras y el nmero de stas depender de la precisin que se quiera obtener.

190
El recuento puede reportarse como clulas o filamentos por ml cuadrado de rea de sustrato.

Recuento real/tira
Clulas de raspaduras suspendidas =
Volumen de 1 tira por ml

Volumen total de
raspaduras
Clulas/mm
2
superficie del porta = Clula/ml raspaduras suspendidas X
rea del portaobjetos
por mm
2

Recuento por el mtodo de microscopio invertido

1.- Se hace un raspado como en el recuento con la clula de Sedgwick-Rafter.

2.- Es colocado un determinado volumen de muestra preparada en una cmara estandarizada
de sedimentacin y dejar sedimentar 1 hora por cada mm de profundidad de la columna.

3.- Se coloca la cmara en el microscopio invertido, seleccionando el objetivo ms adecuado y
es realizado el conteo de los organismos enumerando todos los que se encuentran dentro
de un nmero de tiras o campos aleatorios.

N x A1 x V1
organismos/mm
2
= -
AC x AS x VS

Donde:

N = Nmero de organismos contados
A1 = rea total del fondo de la cmara, mm
2

V1 = Volumen total de suspensin original de muestra, ml
AC = rea contada (tiras o campos), mm
2

VS = Volumen de muestra usada en la cmara, ml
AS = rea del porta o sustrato, mm
2

Para la interpretacin de resultados son utilizados los recuentos celulares por unidad de
superficie del sustrato e ndices numricos de contaminacin o calidad del agua. Son utilizados
tambin los ndices de Shannon-Weaver, Simpson y Pink-Pearson y el sistema de Saprobidad,
que se puede emplear cuando se usen nmeros de cdigos asignados para el valor saprobial, y
se utiliza la abundancia de especies individuales para calcular el ndice saprobial.

191
Moscas de dos alas (Orden Diptera)

Adulto mosca de las cloacas
Psychoda, Psychodidae (2-5
mm)
Larva mosca de las cloacas
Psychoda, Psychodidae (4-6
mm)
Abejn adulto, Syrphidae (10-
15 mm)

Larvas Eristalis,
Syrphidae (15-30 mm)
Tabanus larva,
Tabanidae (30-40
mm)
Larva tipula Tipula,
Tipulidae (30-40 mm)
Larva mosquito
Aedes, Culicidae (10-
15mm)

192
Escarabajos

Escarabajo adulto Stenelmis,
Elmidae (2-5 mm)
Larva Narpus, Elmidae (4-10
mm)
Escarabajo Girino adulto
Dineutus, Gyrinidae (7-15 mm)

Larva Dineutus, Gyrinidae
(10-30 mm)
Larva Cybster, Dytiscidae (10-
25 mm)
Larva Berosus, Hydrophilidae
(5-20 mm)

Larva Enochrus,
Hydrophilidae (10-25)
Escarabajo zambullidor
predador adulto Dytiscus,
Dytiscidae (2-40 mm)
Escarabajo basurero de agua
adulto Hydrophilus,
Hydrophilidae (2-40 mm)

Larva acutica Psephenus,
Phephenidae (3-10 mm)

193
Chinches

Chinche luminosa Lethocerus,
Belostomidae (20-70 mm)
Tejedor Sigara, Corixidae (3-12
mm)

Andador de los pantanos
Hydrometra, Hydrometridae
(8-11 mm)

Tejedor Gerris, Gerridae (2-15
mm)

Notonecta, Notonectidae (5-17
mm)

Familia con branquias

Pomacea, Pilidae (5
cm)
Marisa, Pilidae (15 mm)
Camplemona,
Viviparidad (2 cm)
Bithynia, Amnicolidae
(2 cm)

Tarebia, Thiaridae (15
mm)
Caracol de ro,
Pleurocera, Pleuroceridae
(3 cm)
Valvata, Valvatidae
(1 cm)
Littorina, Littorinidae
(marino, 2 cm)

194
Familias pulmonares

Lymnaea, Lymnaeidae
(15 mm)
Helisoma,
Plasnorbidae (1 cm)
Caracol Nassa,
Nassidae (marino
Lapa Ferrissia,
Ancylidae (2 mm)

Lapa Lanx, Lancidae
(10 mm)
Physa, Physidae
(5mm)

Plecpteros (oden Plecoptera)

Adulto Isoperla,
Isoperlidae (14-23
mm)
Ninfa Isoperla,
Isoperlidae (10-14
mm)
Ninfa Pteronarcys,
Pteronarcidae (10-14
mm)
Ninfa Acroneuria,
Perlidae (20-30 mm)

195
Efmeras (orden Ephemeroptera)

Adulto, Heptageniidae (12-18 mm)

Ninfa Stenonema,
Heptageniidae (10-14
mm)
Ninfa, Baetis,
Baetidae (7-14 mm)
Ninfa, Hexagenia,
Ephemeridae )20-30
mm)
Ninfa, Ephemerella,
Ephemerellidae (8-15
mm)

196
Tipos de pupas de insecto

Larva de coridlido, Corydalis,
orden Megaloptera
Tpula, Antocha, Tipulidae
Moscardn, Tabanus,
Tabinidae

Cnife, Limnophorus,
Anthomydae
Jejn, Chironomus,
Chironomidae
Mosquito, Culex, Culicidae

Escarabajo, Cybister, orden Colcoptera Frgano, Goera, orden Trichoptera

197
BIBLIOGRAFA

ALADRO, LUBEL, MARTINEZ MURILLO, LIRA GALERA ROJAS RUIZ. 1992. Gua de
prcticas de campo protozorios e invertebrados. AGT Editor S.A. Mxico.

APHA-AWWA-WPCF. 1992. Mtodos normalizados para el anlisis de aguas potables y
residuales. DAZ DE SANTOS. Espaa.

AWWA Mtodo-Standard Methods for Examination of Water and Wastewater, American Public
Health Association (APHA), American Water Works Association (AWWA), Water Pollution
Control Federation (WPCF), 19a Ed.

BAQUEIROS, C.E, A. AVILES, J.A. MASSO, MUSIO, ROGERS Y VELEZ. 1992. Manual de
mtodos de muestreo y evaluacin d epoblaciones de moluscos y otros recursos bentnicos.
Secretara de Pesca. Mxico

DE LA LANZA ESPINO GUADALUPE 2003. Manual para la colecta, el manejo y las
observaciones de campo para bioindicadores de calidad del agua. AGT Editor S.A. Mxico.

SANCHEZ RUEDA MARIA PATRICIA. 2000. Estudio y colecta de organismos marinos
estuarino _ lagunares y de agua dulce. Universidad Autnoma Metropolitana.Mxico.

NORMAS MEXICANAS CONSULTADAS:
NMX-AA-003-1980 Aguas residuales - Muestreo. Declaratoria de vigencia publicada en el Diario
Oficial de la Federacin el 25 de marzo de 1980.
NMX-AA-014-1980 Cuerpos receptores.- Muestreo. Declaratoria de vigencia publicada en el
Diario Oficial de la Federacin el 5 de septiembre de 1980.
NMX-AA-089/1-1986 Proteccin al ambiente - Calidad del agua - Vocabulario - Parte 1.
Declaratoria de vigencia publicada en el Diario Oficial de la Federacin el 15 de julio de 1986.
NMX-AA-004..Anlisis de slidos sedimentables.
NMX-AA-005. Anlisis de grasas y aceites
NMX_AA_ 034ANLISIS DE Slidos y sales disueltas
NMX_AA_ 038.Anlisis de Turbiedad
NMX_AA_ 083.Anlisis Olor
NMX_AA- 007..Anlisis de Temperatura
NMX-AA-012..Anlisis de Oxgeno disuelto
NMX-AA-008..Anlisis de PH
NMX-AA-028.Anlisis de DBO
5

NMX-AA-029.Anlisis de Fsforo total
NMX-AA-036.Acidez y Alcalinidad
NMX-AA-0042Anlisis de Coliformes Fecales NMP
NMX-AA-072.Anlisis de Dureza Total
NMX-AA-074.Anlisis de In Sulfato
NMX-AA-100.Anlisis de Cloro Total
NMX-AA-102.Anlisis de Coliformes- E-coli Filtracin de membranas
NOM-001-STPS
NOM-004-STPS

198
NOM-017-STPS
NOM-100-STPS
NOM-001-ECOL-1996 Que establece los lmites mximos permisibles de contaminantes en las
descargas de aguas residuales en aguas y bienes nacionales, publicada en el Diario Oficial
de la Federacin el 6 de enero de 1997.
NOM-008-SCFI-1993 Sistema General de Unidades de Medida, publicada en el Diario Oficial de
la Federacin el 14 de octubre de 1993.
PROY-NMX-AA-115-SCFI-2001 Anlisis de agua - Criterios generales para el control de la
calidad de resultados analticos. Aviso de consulta pblica publicado en el Diario Oficial de
la Federacin el 2 de noviembre de 1999.
PROY-NMX-AA-116-SCFI-2001 Anlisis de agua - Gua de solicitud para la presentacin de
mtodos alternos. Aviso de consulta pblica publicado en el Diario Oficial de la Federacin
el 2 de noviembre de 1999.

Dr. Reyes S. Tamez Guerra
Secretario de Educacin Pblica
Dra. Yoloxchitl Bustamante Dez
Subsecretaria de Educacin Media Superior
M. en C. Daffny Rosado Moreno
Secretario Ejecutivo del COSNET
Bil. Francisco Brizuela Venegas
Director General de Educacin en Ciencia y
Tecnologa del Mar
Director Tcnico
Ing. Heriberto Nolasco Heredia
Director de Operacin
C.P. Mara Elena Colorado lvarez
Coordinadora Administrativa
Primera edicin: 2006.
Ilustracin de portada y portada posterior:
El agua, origen de la vida (detalle), de Diego Rivera, 1951.
SUBSECRETARA DE
EDUCACIN MEDIA SUPERIOR

Análisis de agua: submódulos físicos, químicos y biológicos

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