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NDICE

Pg.

NDICE...
1. OBJETIVOS......

2. FUNDAMENTO TERICO

3. DIAGRAMA DE FLUJO......................

4. DATOS EXPERIMENTALES ..............(materiales, equipos, reactivos)

5. PROCEDIMIENTO.

6. CLCULOS Y RESULTADOS ...................

7. DISCUSIONES...................

8. CONCLUSIONES

9. RECOMENDACIONES Y SUGERENCIAS...

10. CUESTIONARIO..

11. REFERENCIAS BIBLIOGRAFAS.....







1. OBJETIVOS:

Obtener el espectro de absorcin de una sustancia.
Preparar una curva de calibracin para una sustancia o muestra problema.
Determinar la concentracin de una muestra problema.

2. FUNDAMENTO TERICO:

Las tcnicas colorimtricas se basan en la medida de la absorcin de radiacin
en la zona visible por sustancias coloreadas. En algunas ocasiones, la muestra
que deseamos determinar no posee color por s misma; en tal caso, es preciso
llevar a cabo un desarrollo de color empleando reactivos que den lugar a
sustancias coloreadas con la muestra que interesa estudiar.

Utilizando trminos quizs excesivamente simplistas puede definirse la
espectrofotometra de absorcin, como la medida de la atenuacin que el
material a estudiar (muestra) efecta sobre una radiacin incidente sobre el
mismo con un espectro definido. En general, las medidas se realizan dentro del
espectro comprendido entre 220 y 800 nm, y este espectro, a su vez, puede
dividirse en dos amplias zonas: la zona de la radiacin visible, situada por
encima de 380 nm, y la zona de la radiacin ultravioleta situada por debajo de
estos 380 nm. La regin del infrarrojo se sita por encima de los 800 nm.

Leyes de la absorcin de energa radiante
Se refieren a las relaciones existentes entre la cantidad de absorbente y el
grado con el que es absorbida la energa radiante. En trminos generales,
puede decirse que hay dos variables capaces de afectar al grado de absorcin:
la concentracin del absorbente y la longitud del trayecto que el rayo luminoso
recorre a travs de la solucin. La relacin entre ambas se expresa con la
frmula denominada Ley de Beer:
P = Po 10-abc
P = potencia radiante transmitida
Po = potencia radiante incidente una cantidad proporcional a la misma,
medida colocando en la cubeta el solvente puro.
a = absortividad, constante caracterstica del absorbente y de la longitud
de onda de la radiacin incidente.
b = longitud del paso de la luz a travs de la solucin del absorbente,
expresada generalmente en cm.
c = concentracin del absorbente
Algunos autores prefieren utilizar trminos de I
0
e I, expresando entonces
intensidad en lugar de potencia.
En la prctica lo que tiene importancia es la proporcin P / Po denominada
transmitancia (T) o cuando se multiplica por 100, porcentaje de tramitacin
(%T). La ley de Beer tambin puede escribirse de la siguiente forma:
Log (Po / P) = abc

El trmino log (Po / P) se define como la Absorbancia. Cuando las medidas se
efectan utilizando siempre la misma cubeta (o bien un grupo de cubetas
estandarizadas que posean un paso de luz constante) y los efectos pticos
debidos a la cubeta son reproducibles, el trmino b de la expresin de la
absorbancia se hace constante. Dado que a es tambin constante para un
determinado absorbente y una concreta longitud de onda, resulta entonces que
la absorbancia es directamente proporcional a la concentracin: A = kc (k = ab).
La ventaja fundamental que ofrece el empleo de la Absorbancia en lugar de la
transmitancia es que la relacin existente entre la concentracin y la
absorbancia es lineal, cosa que no sucede con el %T. Dado que la Absorbancia
es proporcional a la concentracin, tendremos que:
A
1
C
1
= A
2
V
2

A
1
= Absorbancia del problema
A
2
= Absorbancia de un estndar de concentracin conocida
C
1
= Concentracin del problema
C
2
= Concentracin del estndar


ESPECTROFOTMETRO
Las mediciones de absorbancia se realizan en un espectrofotmetro, que
bsicamente consta de una fuente de luz, un monocromador para seleccionar
la longitud de onda, una cubeta transparente para contener la muestra, un
detector de intensidad luminosa y un sistema de registro (Fig. 1).




MEDICIN DE LA ABSORBANCIA

1) Si tenemos una solucin coloreada de concentracin desconocida, la
denominamos tubo problema. Podemos conocer su concentracin
midiendo la absorbancia en el fotocolormetro o espectrofotmetro a una
longitud de onda apropiada.

2) Previamente a la lectura, el aparato es llevado a cero de absorbancia
con un tubo que contiene solvente sin la sustancia problema y se
denomina blanco. Este tubo puede contener varias sustancias, adems
de disolvente, a la misma concentracin en que se encuentra en el tubo
problema, excepto la sustancia que se desea cuantificar. La finalidad de
usar el tubo blanco es descontar la absorcin de sustancias que no sean
especficamente la sustancia problema y as poder medir la absorbancia
propia de la sustancia en estudio.

3) Un tercer tubo que denominamos testigo corresponde a una solucin
de concentracin conocida de la sustancia en estudio. Se prepara
disolviendo una cantidad conocida de soluto en un volumen conocido de
solvente conteniendo las mismas sustancias que la solucin problema.

4) Lo descripto en los puntos anteriores es vlido para medir la
concentracin de sustancias incoloras siempre que estas sustancias
sean capaces de reaccionar con otras, dando productos de reaccin
coloreados y que el color finalmente obtenido sea proporcional a la
concentracin de la sustancia en estudio.

Ley de Beer -Lambert

La ley de Beer-Lambert relaciona la intensidad de luz entrante en un medio con
la intensidad saliente despus de que en dicho medio se produzca absorcin.
La relacin entre ambas intensidades puede expresarse a travs la siguiente
relacin:










Donde:

I
1,
I
0
, son las intensidades saliente y entrante respectivamente.
A=lc, es la absorbancia, que puede calcularse tambin A= -

como:
l, es la longitud atravesada por la luz en el medio,
c, es la concentracin del absorbente en el medio.

, es el coeficiente de absorcin:
, es la longitud de onda de la luz absorbida.
, es el coeficiente de extincin.

La ley explica que hay una relacin exponencial entre la transmisin de luz a
travs de una sustancia y la concentracin de la sustancia, as como tambin
entre la transmisin y la longitud del cuerpo que la luz atraviesa. Si
conocemos l y , la concentracin de la sustancia puede ser deducida a partir
de la cantidad de luz transmitida.

El valor del coeficiente de absorcin vara segn los materiales absorbentes y
con la longitud de onda para cada material en particular. Se suele determinar
experimentalmente. La ley tiende a no ser vlida para concentraciones muy
elevadas, especialmente si el material dispersa mucho la luz. La relacin de la
ley entre concentracin y absorcin de luz est basada en el uso
de espectroscopia para identificar sustancias.


Grficos de concentracin y absorbancia
(Parte de los resultados)
y = 4,0125x - 0,0625
0
2
4
6
8
10
12
0 0.1 0.2 0.3 0.4
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i

n

Absorbancia = D.O
Concentracin CuSO4
Linear (Concentracin CuSO4)









y = 4,0125x - 0,0625
0
0.02
0.04
0.06
0.08
0.1
0.12
0 0.1 0.2 0.3 0.4
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i

n

Absorbancia = D.O
Concentracin K2CrO2
Linear (Concentracin
K2CrO2)
y = 4,0125x - 0,0625
0
0.002
0.004
0.006
0.008
0.01
0.012
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i

n

Absorbancia = D.O
Concentracin KMnO4
Linear (Concentracin
KMnO4)

RECOMENDACIONES Y SUGERENCIAS:

Para hallar el valor adecuado de longitud de onda base para medir la
absorcin de muestra problema usaremos el valor de absorcin menor a
la unidad y seguida a esta en los datos.
Al dibujar la curva de calibracin, en teora esta recta debe pasar por
todos los puntos que relacionan a las absorbancias con las
concentraciones, incluyendo el origen. Esto generalmente no sucede, lo
que se hace en estos casos es dibujar la recta que tome a ms puntos.
Puede ser que uno o varios factores de calibracin estn alejados de las
cifras que se aproximan, lo que se hace en este caso es no tomar en
cuenta.
Puede ser que uno o varios factores de calibracin estn alejados de las
cifras que se aproximan, lo que se hace en este caso es no tomar en
cuenta

CUESTIONARIO:
1. Cul crees que es el mtodo ms exacto para obtener la
concentracin de una muestra, el grfico o el analtico? por qu?
El mtodo ms exacto es el grfico, porque se puede acertar por debajo de
0,1 mm de concentracin cosa que el analtico no puede.
2. Qu factores alteran la ley de lamber y beer?
La ley de Beer-Lambert solo se cumple para concentraciones bajas, a partir
de una concentracin 0,01M empieza a verse desviaciones de linearidad.
Adems si la radiacin utilizada no es monocrmica, tambin puede haber
errores.
La existencia de otros equilibrios qumicos en disolucin como acido-base,
de que puedan modificar la concentracin de la sustancia que estamos
midiendo, y puede producir un error en el resultado pasa a travs de un
medio.
3. Existe otro mtodo de ajuste de curvas?
Los mtodos para la bsqueda de estas funciones de ajuste, se pueden
clasificar en:
Mtodos grficos:
Se basan en la descripcin de la grfica que muestre valores de una
variable dependiente en funcin de los valores de una variable
independiente, por ejemplo, las tasas o probabilidades (variable
dependiente) en funcin de la edad, la fecha, etc. (variable independiente).
Estas grficas, permiten una fcil comparacin entre diferentes estudios,
sobre un mismo fenmeno, en distintas situaciones (pases, pocas, etc.).
Este mtodo permite decidir si se hace un experimento y un anlisis ms
cuidadoso.

Mtodos paramtricos:
Los valores de la variable dependiente, como tasas o probabilidades, se
especifican mediante una funcin, con un nmero de parmetros finito, que
depende de la variable independiente, como la edad, fecha, etc..
El ajuste de dicha funcin a los datos, se suele realizar utilizando los
mtodos clsicos, si se desea que la funcin pase por unos puntos dados,
o mtodos de ajuste, si se desea aproximar una determinada funcin a una
serie de puntos, que nos permiten, en ambos casos, estimar los
parmetros.
Son mtodos alternativos a los mtodos de interpolacin. Distinguiremos
entre los mtodos de regresin(por el mtodo de los mnimos
cuadrados), en los que se tratar de adaptar una funcin a una masa de
datos empricos (nube de puntos) y los mtodos de ajuste, en los que se
adaptar una funcin a un conjunto limitado de puntos empricos
observados o bien procedentes de funciones
biomtricas: , obligando a que la funcin
represente suficientemente los datos, suavizando los puntos. Es decir, se
tratar de describir la evolucin de los datos con ciertas funciones, que
utilicen hiptesis referentes al comportamiento de los datos.

Mtodos no-paramtricos:
Limitaciones Ventajas:
Es subjetivo, depende de la persona
que grafica y de su criterio.
Proporciona intervalos grandes y
una estimacin pesimista.
No es reproducible, cada
experimentador proporciona
diferentes aproximaciones para
datos iguales.
Es buen estimador cuando se tiene
pocos resultados (menos de diez).
Nos permite decidir si vale la pena
efectuar un experimento ms
preciso.
En caso de no contar con una
calculadora o computadora, este
mtodo nos permite efectuar una
estimacin vlida.
No proponen ningn modelo de funcin para describir el comportamiento
de los datos. Las tasas o probabilidades se obtienen mediante mtodos de
suavizado recurrentes, que utilizan los datos conocidos en edades
adyacentes.

4. Cul es el objetivo de utilizar el mtodo de los mnimos cuadrados?
El mtodo de los mnimos cuadrados nos permite encontrar la ecuacin de
una recta a partir de los datos experimentales.
Es decir, utilizando solamente las mediciones experimentales se obtendr la
pendiente y la ordenada al origen de la recta que mejor se ajuste a tales
mediciones.
Es un mtodo objetivo que proporciona errores pequeos y es una
estimacin probabilista. Se requiere de al menos diez mediciones bajo las
mismas circunstancias experimentales y distribucin de probabilidad
conocida.
Este mtodo subsana las limitaciones del mtodo grafico. Se necesita algn
aparato para calcularlo.


Ventajas adicionales Restricciones:
Es objetivo, solo depende de los
resultados experimentales.
Es reproducible, proporciona la
misma ecuacin no importa quin
realice el anlisis.
Proporciona una estimacin
probabilstica de la ecuacin que
representa a unos datos
experimentales.
Proporciona intervalos pequeos de
error.
Solo sirve para ajustar modelos
lineales.
Requiere tener al menos, diez
mediciones bajo las mismas
circunstancias experimentales.
Se requiere de algn equipo de
clculo, de lo contrario, es muy
engorroso.



5. Mencione aplicaciones de la prctica en el campo de su especialidad.
La carrera de ingeniera agroindustrial forma profesionales con competencias
para responder a los desafos que el sector agroindustrial debe abordar frente a
los nuevos escenarios. Se puede desempear en forma dependiente en
instituciones pblicas y empresas privadas; en forma independiente como
consultor o como empresario en agro-negocios y en labores acadmicas y de
investigacin.
La fotocolorimetria es un mtodo es un mtodo ptico de anlisis, utilizado en
la ingeniera que consiste en medir la absocin de luz que produce una
determinada sustancia al paso de un color determinado.
Para ello, se utiliza un aparato llamado fotocolormetro que consiste en:
1.- una fuente de luz que pueda emitir distintos rangos de colores
2.- una fotoclula que pueda medir la intensidad de
luz absorbida por una sustancia coloreada
3.- una celda donde se coloca el lquido muestra
Como cualquier otro mtodo espectroscpico, se basa en la medida de la
intensidad, y la longitud de onda de la radiacin electromagntica que ha
atravesado la materia o que esta emite. Es importante decir que un espectro
de Absorbancia, se absorben diferentes longitudes de onda en distintos grados,
es decir, la absortividad vara segn la longitud de onda.
Primero se calibra el aparato con muestras de concentraciones conocidas, se
miden las correspondientes absorbancias y se confecciona un grfico donde se
vuelcan los valores de concentraciones en las abscisas y los valores de las
absorbancias en las ordenadas. En general los puntos se alinean en una recta
aunque a veces se alinean en una parbola.
Finalmente se mide la absorbancia de la muestra incgnita y con el valor de
absorbancia obtenido se busca en el grfico la concentracin correspondiente.
En el anlisis espectrofotomtrico, es necesario conocer el espectro de absorci
n de la muestra problema, midiendo la Absorbancia a distintas longitudes de
onda para establecerla frecuencia de mxima absorcin de la especie a
determinar, con el propsito de obtener una mejor sensibilidad en su
cuantificacin. El clculo de Absorbancia obtenido para la albumina es posible
gracias a la medida de la Absorbancia realizada inicialmente al biuret tomado
como tubo de control, esta Absorbancia se toma a las mismas longitudes de
onda medidas para el complejo biuret-albumina, luego se le resta la
Absorbancia del tubo control al complejo para obtener a si los resultados de
Absorbancia para la albumina a diferentes longitudes de onda.