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FUNDAMENTOS GENERALES DE

LA INMUNOLOGIA




















Universidad Austral de Chile
Instituto de Inmunologa

Creado por
Instituto de Inmunologa
2011










FUNDAMENTOS GENERALES DE LA
INMUNOLOGIA











Hugo Folch
Patricio Esquivel
Miguel Barra
Vctor Leyn








Edicin ao 2011.




Creado por
Instituto de Inmunologa
2011


Pgina

*

Visin General del Problema..................................................

2
* Antgenos, Inmunogenicidad y Antigenicidad....................... 4
* Estructura y funcin de las Inmunoglobulinas....................... 8
* Organos del Sistema Inmune.................................................. 18
* Inmunogentica: Complejo Mayor de Histocompatibilidad .. 29
* Clulas envueltas en la Respuesta Inmune............................ 36
* Respuesta inmune, Cintica y efectores................................ 41
* Mecanismos Reguladores de la respuesta inmune................. 51
* Sistema del Complemento....................................................... 55
* Mecanismos Inespecficos de Defensa.................................... 62
* Desarrollo de Inmunidad a las infecciones............................. 66
* Inmunoprofilaxis..................................................................... 70
* Mecanismos de dao Inmunolgico (Hipersensibilidad)....... 75
* Tolerancia Inmunolgica........................................................ 79
* Autoinmunidad y enfermedad Autoinmune.......................... 84
* Deficiencias Inmunolgicas.................................................... 89
* Bases Inmunolgicas de Grupos Sanguneos.......................... 92
* Neoplasias e Inmunidad.......................................................... 98
* Relacin Materno-fetal........................................................... 104
* Reaccin Antgeno-Anticuerpo in vitro............................ 107









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VISION GENERAL DEL PROBLEMA


La Inmunologa bsicamente tiene que ver con el estudio de la Inmunidad. Esta se refiere a
los mecanismos que dispone el organismo como proteccin frente a agentes ambientales extraos.
Estos agentes pueden ser microorganismos o sus productos, alimentos, qumicos, polen, etc. Estos
mecanismos defensivos suelen dividirse en innatos y adquiridos.

Mecanismos de defensa innatos.

Estn dados por todos aquellos elementos con los cuales el individuo nace, que estn siempre
presente y que actan inmediatamente frente a los invasores extraos. Entre ellos se incluyen:
piel, membranas mucosas, tos, pH cido (estmago), alcalino (duodeno), etc.

Otros componentes internos son tambin importantes y efectivos, inflamacin, fiebre,
produccin de interfern, lisozima, poliaminas, accin del complemento, etc. Un tercer tipo de
frente est dado por clulas fagocticas como polimorfonucleares y macrfagos que participan en la
destruccin y eliminacin de material extrao que ha vencido las barreras fsicas y qumicas.

La principal caracterstica de estos mecanismos es que actan en forma inespecfica y ejercen
siempre el mismo tipo de accin independiente del agente agresor.


Inmunidad Adquirida.

Es mucho ms especializada, aparece mucho ms tardamente en trminos evolutivos y est
presente slo en vertebrados.

La gran caracterstica es que a travs del sistema inmune elabora productos de alta
especificidad (clulas o molculas) que reaccionan slo con el agente que gener su produccin.
Esta respuesta se llama RESPUESTA INMUNE. Esta respuesta inmune, en realidad, se hace contra
estructuras de los agentes extraos llamados ANTIGENOS, que pueden ser protenas,
glicoprotenas, azcares, etc., molculas que normalmente forman parte estructural de los
microorganismos extraos.

Un individuo nace con una capacidad gentica de montar una respuesta inmune contra
prcticamente todos los elementos extraos. La introduccin de uno de ellos estimula una compleja
serie de eventos de captacin del elemento extrao por macrfagos, procesamiento, entrega de
informacin a linfocitos y elaboracin de dos tipos de respuestas: RESPUESTA INMUNE
HUMORAL cuando el producto es una molcula altamente especializada y especfica llamada
inmunoglobulina o ANTICUERPO, y RESPUESTA INMUNE CELULAR cuando el producto final
es un linfocito especfico.





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Esto da base para establecer una muy eficiente respuesta protectora y que adems recuerda
ese antgeno en un fenmeno llamado MEMORIA INMUNOLOGICA, que ante cualquier futuro
contacto con el mismo agente, desencadena una respuesta inmune que es mucho ms rpida y
eficiente. Dada la caracterstica de expandir la capacidad de dar una respuesta inmune por la
introduccin (inmunizacin) de un antgeno al organismo, este tipo de proteccin se denomina
INMUNIDAD ADQUIRIDA.

As las cosas las principales caractersticas de la respuesta inmune son:

a) Especificidad. Las respuestas inmune son altamente especficas; los productos slo reaccionan
con los antgenos que la generaron.

b) Base gentica. Existe la codificacin para montar respuestas inmunes contra prcticamente todos
los antgenos.

c) Discriminacin de lo propio. Una caracterstica trascendental, es que el sistema inmune es capaz
de discriminar los antgenos propios (estn en todas nuestras clulas y no reacciona contra ellos) de
los extraos, elaborando vigorosas respuestas inmunes.

d) Memoria inmunolgica. Es la capacidad de recordar contactos previos, para acelerar la
respuesta inmune ante ulteriores contactos con el mismo antgeno.

La inmunologa es una ciencia muy compleja, en expansin a ritmo acelerado, pero que en
esencia puede referirse a un gran problema central: la discriminacin del sistema inmune entre lo
propio y lo extrao. Todo lo que Ud. ver, en estos apuntes, es consecuencia de este gran problema
central.

Slo nos resta destacar que estos apuntes slo tienen utilidad completa cuando son un
complemento de la clase, no pueden reemplazarla, por tanto la asistencia y activa participacin es
altamente deseable.

Al final del curso Ud. deber tener las bases para entender cmo funciona el sistema inmune,
pero dada la complejidad de algunas materias lo instamos a acercarse peridicamente a los
profesores que dictan los diferentes captulos para ir aclarando las dudas que, inevitablemente se
irn presentando.

Es usual desear, al comienzo, buena suerte. Nosotros nos permitimos sugerirle que asista a
clases, aclare sus dudas cuando se le presenten, use estos apuntes como apoyo y sobre todo estudie.
Con ello, no necesitar de suerte para aprobar el curso.


Bienvenido al fascinante mundo de la Inmunologa!






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ANTIGENOS. INMUNOGENICIDAD Y ANTIGENICIDAD


ANTIGENO se define como una molcula capaz de inducir una respuesta inmune y
combinarse con el producto de sta (anticuerpos o linfocitos sensibilizados).

Esta definicin involucra bsicamente dos atributos de la molcula de antgeno: inmunogenicidad
que es la propiedad de inducir una respuesta inmune y antigenicidad que es la capacidad de unirse al
producto de la respuesta inmune.

1. Inmunogenicidad. Hay propiedades intrnsecas y extrnsecas que afectan la inmunogenicidad del
antgeno.

a) Similitud a molculas propias. Una de las caractersticas ms extraordinarias del sistema
inmune es que no reacciona contra antgenos propios (establece mecanismos de tolerancia),
sin embargo har una fuerte respuesta inmune contra antgenos reconocidos como extraos.
Por tanto, la inmunogenicidad de una molcula es mayor en la medida que sea muy diferente
a lo propio.
b) Tamao. La inmunogenicidad de un antgeno aumenta a medida que aumenta su peso
molecular. En forma general puede decirse que antgenos con una masa molecular bajo
10.000 dalton son pobres o malos inmungenos, contrastando con antgenos sobre tal peso
que son buenos inductores de inmunidad. Existen molculas muy pequeas, que aunque
tengan los atributos de un antgeno, no pueden generar una respuesta inmune. Son los
llamados HAPTENOS que etimolgicamente significa antgeno incompleto y que son de
muy bajo de peso molecular. Para transformar estas molculas en inmunognicas, deben
unirse a una molcula transportadora (tambin llamada carrier) generando un sistema
llamado carrier-hapteno. Esto es importante de tener presente, ya que en algunas ocasiones
cuerpos qumicos simples, como algunos medicamentos, pueden unirse a molculas o clulas
propias generando una respuesta inmune contra tales componentes propios, en una respuesta
llamada autoinmunidad.
c) Naturaleza qumica. La estructura que da mayor inmunogenicidad es la de las protenas o de
sus combinaciones lipo y glicoprotenas. Situacin inversa se observa con lpidos e hidratos
de carbono que son malos estimuladores del sistema inmune.
d) Dosis. Cantidades muy altas o muy bajas del antgeno no inducen respuesta inmune. En
cambio dosis intermedias generan una muy buena respuesta inmune.
e) Va de inoculacin. En general, la mejor va de inoculacin es la va subcutnea, luego la
intraperitoneal, luego la intravenosa y finalmente la va oral.
f) Forma fsica. En general molculas particuladas aumentan la inmunogenicidad y las formas
solubles la disminuyen.
g) Uso de coadyuvantes. Se aumenta la capacidad de respuesta cuando el antgeno se administra
con coadyuvantes de lenta liberacin o de depsito.
h) Susceptibilidad a degradacin enzimtica. Se ha demostrado que pptidos compuestos de D-
aminocidos, que son resistentes a degradacin enzimtica no son inmunognicos, mientras
que sus ismeros L, susceptibles a enzimas, son buenos inmungenos.




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2. Antigenicidad.

La capacidad de un antgeno de unirse a su respectivo anticuerpo, depende de sitios
especiales en la molcula llamados determinantes antignicos o eptopes. Eptope se define como el
sitio del antgeno en que se une la molcula de anticuerpo.

En una clula, bacteria, virus, etc. podemos encontrar una gran cantidad de molculas de
diferentes caractersticas que corresponden a los antgenos de esas clulas. Los antgenos de un
mismo tipo (molculas iguales) pueden estar repetidos muchas veces en las clulas y los eptopes, a
su vez, pueden ser diferentes en una misma molcula y estar repetidos tambin muchas veces. (Ver
Fig. 1).




















Fig. 1. Representacin de algunas posibles estructuras antignicas.


El sistema inmune reacciona entonces produciendo una respuesta inmune contra eptopes de
todos los antgenos.
Por lo tanto, las respuestas se establecen frente a los determinantes antignicos, ms que a los
antgenos como tales.

Estos determinantes pueden ser de dos tipos:

a) Determinantes antignicos conformacionales. Dependen de la configuracin espacial de una
parte de la molcula del antgeno. Est dado por las estructuras superiores de una protena.
Estos determinantes pueden ser continuos si la forma reconocida est dada por una
secuencia lineal de la protena, o discontinuos si el eptope reconocido est dado por
aminocidos de diferentes partes de la secuencia, que estn prximos por la disposicin
espacial.

Descripcin Ejemplo
Un eptope Haptenos
Polisacridos
homopolmeros
Muchos eptopes de la
misma especificidad
Muchos eptopes de
diferentes especificidades
Protenas
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b) Determinantes antignicos secuenciales. Estn dados por la secuencia de aminocidos, es
decir, por la estructura primaria de la protena.

En resumen, cuando se inmuniza un animal con un antgeno, se produce una amplia
variedad de anticuerpos que son capaces de reaccionar especficamente con los eptopes que
generaron su produccin.

3. Antgenos especiales.

Se analizan brevemente propiedades o caractersticas de algunos antgenos especiales:

1. Antgenos timo-dependientes y timo-independientes.
En general una buena respuesta inmune , y especialmente frente a protenas, requiere de la
cooperacin de linfocitos B y linfocitos T. Esto es vlido para la gran mayora de los
antgenos y por tal razn se denominan antgenos timo-dependientes (la respuesta no se
produce sin el concurso de clulas T).
Sin embargo, existen en la naturaleza algunos antgenos, generalmente de naturaleza no
proteca , que son capaces de activar a los linfocitos B directamente, sin el concurso de
clulas T. Son los llamados antgenos timo-independientes. Entre ellos tenemos a
lipopolisacridos bacterianos o polmeros de azcares como ficol. (Ver Tabla I).




2. Superantgenos.
Corresponden a numerosas protenas bacterianas o virales capaces de estimular
directamente a linfocitos T, lo que hacen en forma policlonal, es decir, extensas poblaciones
de linfocitos T, sin tener en cuenta la especificidad de sus receptores.




Tabla I. Comparacin de antgenos T dependientes y T independientes

T dependientes T independientes

Propiedades estructurales Compleja Simple

Qumica Protenas, conjugados
protena-nucleoprotena
glicoprotenas
lipoprotenas
Polisacrido de neumococo
dextran polivinil pirrolidona
LPS


Anticuerpos inducidos IgG, IgM, IgA (+IgD e IgE) IgM

Memoria Si No

Presente en la mayora de
los microbios patgenos.

Si Si

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3. Autoantgenos.
Corresponde a los antgenos propios del organismo presente en sus clulas y tejidos.
Normalmente no son inmunognicos para el mismo individuo, pero que bajo circunstancias
especiales pueden inducir una respuesta que por estar dirigida contra antgenos propios se
denomina autoinmunidad. Esta respuesta, puede producir dao tisular generando una
enfermedad autoinmune.










































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ESTRUCTURA Y FUNCION DE LAS INMUNOGLOBULINAS


Los anticuerpos o inmunoglobulinas (Ig) son glicoprotenas correspondientes a la
fraccin globulina del suero, formadas en respuesta a un antgeno con el cual se unen
especficamente. Son producidas por las clulas B y su descendencia, las clulas plasmticas y
constituyen el producto final de la respuesta inmune humoral. Estn constituidas por 4 cadenas
peptdicas; 2 cadenas cortas o cadenas L (light) y 2 cadenas largas o cadenas H (heavy). Estas
cadenas estn unidas mediante puentes disulfuro. Hay un puente entre las cadenas livianas y las
pesadas y uno o ms puentes entre las pesadas. En una molcula de inmunoglobulina siempre las
dos cadenas L son iguales entre si y las dos cadenas H son iguales entre si.














Fig. 1. Cadenas peptdicas de las inmunoglobulinas


En los mamferos las cadenas L pueden ser de dos tipos Kappa () o lamda (). Las
cadenas H se designan con la letra griega correspondiente a la clase de la inmunoglobulina. Hay 5
clases de inmunoglobulinas, cada una con distintas cadenas pesadas: IgG (cadenas gama), IgM
(cadenas mu), IgA (cadenas alfa), IgD (cadenas delta) e IgE (cadenas epsilon). Las cadenas pesadas
dan las propiedades biolgicas que le son propias a cada clase de inmunoglobulina.

ESTRUCTURA GENERAL.

El anlisis de la estructura de la inmunoglobulina ha permitido determinar que
adems de los puentes disulfuro intercadena existen puentes disulfuro intra cadena determinando
lazadas o loops que corresponden a los dominios de la inmunoglobulina, lugar donde se realiza
una determinada funcin.

El estudio de la secuencia de aminocidos tanto de las cadenas livianas como de las
pesadas indica que existe una regin variable en el extremo NH
2
terminal, seguida de una regin
constante propia de cada cadena. Es posible observar que la cadena liviana presenta un dominio
variable (VL) y un dominio constante (CL); la cadena pesada tiene un dominio variable (VH) y tres
dominios constantes CH1, CH2, CH3 en el caso de IgG, IgA e IgD y un cuarto dominio constante
(CH4) en IgM e IgE.
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Los dominios variables VL y VH constituyen, el sitio de unin al antgeno y esta
regin da la especificidad de la inmunoglobulina. Cada molcula de inmunoglobulina tiene dos
sitios de unin al antgeno iguales entre si. Entre los dominios CH1 y CH2 existe una regin
llamada bisagra que permite cierto desplazamiento de los sitios de unin al antgeno.
















Fig. 2. Esquema de inmunoglobulina.


REGIONES VARIABLES E HIPERVARIABLES.

Dentro de la regin variable de cadenas livianas y pesadas existen zonas de mayor
variabilidad designadas regiones hipervariables. Estas regiones son las que se ponen en contacto
con el determinante antignico en el sitio de unin al antgeno y se denominan CDR (regiones que
determinan complementariedad). Tanto en la regin variable de la cadena liviana como en la pesada
hay CDR1, CDR2 y CDR3, numerados a partir del NH2 terminal.














Fig. 3. Regiones hipervariables presentes en la regin variable.

Fig. 3. Regiones que determinan complementariedad (CDR) presentes en la regin variable.

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Fig. 4. Variabilidad de aminocidos en cada posicin de la regin variable de cadenas L y H de la
inmunoglobulina.


El clculo de la variabilidad permite determinar la posicin de las regiones hipervariables.

Nmero de a.a. diferentes en una posicin.
______________________________________
Variabilidad =
Frecuencia del a.a. ms comn en esta posicin

As por ejemplo si en una posicin determinada se encuentra siempre el mismo
aminocido, esta posicin es invariable, el numerador y denominador dara 1, el valor ms bajo
posible. Si se encuentran 20 aminocidos en una posicin el numerador sera 20 y si todos estn en
igual frecuencia el denominador sera 1/20 o 0.05 y la variabilidad sera 20/0.05 =400, que
corresponde al valor ms alto.



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Fig. 5. Esquema del sitio de unin al antgeno en la molcula de Ig.


Durante la respuesta inmune se induce la formacin de distintas clases de
inmunoglobulinas manteniendo la especificidad para el antgeno ya que no cambia el sitio de unin,
sino solamente la regin constante de la cadena pesada propia de cada clase (switch de la
inmunoglobulina).

DIGESTION ENZIMATICA.

Los estudios estructura-funcin de las inmunoglobulinas han progresado gracias al
tratamiento con enzimas proteolticas. Un estudio clsico permiti determinar que la digestin de
IgG con papana corta la molcula antes del puente disulfuro intercadena pesada obtenindose dos
fragmentos de unin al antgeno (Fab) iguales y un fragmento cristalizable (Fc). El Fab presenta en
su extremo NH2 el sitio de unin al antgeno y el Fc tiene la funcin efectora propia de la clase de
Ig. La digestin con pepsina corta la molcula dejando los Fab unidos por puente disulfuro
resultando F(ab)
2
y pptidos adems del fragmento p Fc correspondiente al dominio CH
3
del Fc.









DOMINIO VH
Determinante
antignico
DOMINIO VL

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Fig. 6. Digestin enzimtica de IgG.


MARCADORES ANTIGENICOS DE LAS INMUNOGLOBULINAS.

Las inmunoglobulinas pueden actuar como antgeno identificndose 3 tipos de
marcadores antignicos correspondientes al isotipo, alotipo e idiotipo.


















Fig. 7. Variaciones en estructura de Igs.

Isotipos: Son determinantes antignicos presentes en las clases y subclases de las inmunoglobulinas
de una especie. Se identifican mediante anticuerpos anti isotipo obtenidos por inmunizacin de una
especie con las inmunoglobulinas de otra.

Alotipos: Son determinantes antignicos presentes en la regin constante de las cadenas livianas y
pesadas de las inmunoglobulinas de una especie, se expresan como variaciones de uno o ms
aminocidos en determinadas posiciones de la regin constante. Corresponden a variantes allicas

Pptidos
D
ig
e
s
ti

n
P
e
p
s
i
n
a
D
i
g
e
s
t
i

n
P
a
p
a
i
n
a
Isotipo

Alotipo Idiotipo
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de un gen estructural. Se identifican por anticuerpos antialotipo obtenidos por inmunizacin entre
individuos de una misma especie.

Idiotipos: Son determinantes antignicos presentes en la regin variable de las cadenas livianas y
pesadas de las Igs de un mismo individuo. Permiten identificar un determinado dominio V
diferencindolo del otro. Anticuerpos antiidiotipo son formados por el mismo individuo.

En el caso de la especie humana los isotipos corresponderan a IgG
1
IgG
2
, IgG
3
, IgG
4
,
IgM, IgA
1
, IgA
2
, IgD e IgE con sus respectivas cadenas kappa y lamda; los alotipos seran
variaciones en estas clases o subclases entre distintos individuos independientes de su especificidad;
el idiotipo correspondera a la gran diversidad que presenta cada individuo en su regin variable. A
modo de ejemplo se ilustra en la figura 8, un esquema del ganado vacuno.


PROPIEDADES DE CLASES Y SUB CLASES. (Ver Tabla).

IgG: es monomrica, su cadena pesada es la gama, que lleva tres dominios constantes. Es la Ig que
alcanza mayor concentracin en el suero, puede activar la cascada del complemento y su Fc tiene la
capacidad de unirse a los macrfagos y a algunas clulas linfoides con receptores para Fc en su
membrana.

En el hombre se presentan 4 subclases que difieren principalmente en los puentes disulfuro de la
regin bisagra (Fig. 7), lo cual lleva a variaciones en sus propiedades como la activacin de
complemento que no la realiza IgG4.



















Fig. 9. Subclases de IgG humana.



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IgM: es pentamrica, su cadena pesada es la mu que lleva cuatro dominios constantes. Esta
inmunoglobulina posee una cadena peptdica adicional llamada cadena J cuya funcin es unir las
cinco sub-unidades que la componen. Es la Ig que primero aparece en la escala filogentica, es la
primera que es capaz de sintetizar el feto, y es la que primero aparece en la respuesta inmune. Es la
Ig mas eficiente para activar la cascada del complemento.

























Fig. 10. Inmunoglobulinas polimricas.




IgA: se encuentra en el plasma y en las superficies mucosas . En el plasma puede circular como
monmero o como dmero, en este ltimo caso lleva al igual que la IgM una cadena J. La IgA que
se encuentra en las secreciones, es siempre un dmero que debe pasar por el citoplasma de una clula
epitelial, esta accin adems de llevarla al exterior le adiciona el componente secretor, que la
protege y le da estabilidad frente a enzimas digestivas y otras que pudieran existir en el ambiente
exterior. La cadena pesada es alfa, sta posee slo tres dominios constantes, NO activa el
complemento por la va clsica, su rol defensivo fundamental est a nivel de las mucosas. En el
hombre se presentan dos subclases IgA1 e IgA2.





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IgD: es un monmero cuya cadena pesada es delta, esta cadena pesada tiene tres dominios
constantes, no tiene un rol importante conocido como Ig srica, su funcin fundamental la cumple
como receptor de membrana en la clula B.

IgE: es monomrica, su cadena pesada es epsilon, con cuatro dominios constantes. Es la Ig de
menor concentracin en el plasma, NO fija complemento, y se une fuertemente a las clulas cebadas
y a los basfilos. J uega un rol fundamental en los fenmenos alrgicos.





ANTICUERPOS Y SUS USOS.

Los anticuerpos pueden ser utilizados de diferentes maneras: si son administrados
"in vivo", sirven como elementos terapeticos o profilcticos. El uso in vitro de los anticuerpos
puede sealar si un individuo sufre o sufri determinada enfermedad, adicionalmente su nivel indica
el grado de inmunidad que un determinado individuo o grupo de individuos, presenta frente a un
agente infeccioso. En el laboratorio los anticuerpos usados como reactivos, permiten elaborar
variadas tcnicas, que abren la posibilidad de detectar y cuantificar tanto antgenos como
anticuerpos.
A continuacin se indican brevemente algunas preparaciones de anticuerpos que
podran ser usados en el laboratorio como reactivos diagnsticos o como elementos terapeticos en
clnica para ser administrados a individuos en diferentes circunstancias:

1. Suero hiper-inmune: suero proveniente de un animal inmunizado, generalmente injectado varias
veces con el antgeno. Contiene todos los componentes del suero, un 98% de anticuerpos
irrelevantes con slo un 2% de anticuerpos policlonales especficos contra el antgeno que
interesa.
2. Fraccin IgG de suero hiper-inmune: a partir del suero anterior se precipitan las IgG que
posteriormente libres de los componentes no globulnicos del suero pueden ser usados en el
laboratorio o como elementos terapeticos, logrando mayor limpieza en las tcnicas de
diagnstico o resultados adversos menos frecuentes cuando son inyectados.
3.- Anticuerpos purificados por afinidad: El mismo suero hiperinmune se hace pasar por una
columna de afinidad conteniendo el antgeno. Los anticuerpos con la especificidad
correspondiente al antgeno de la columna se unen y los otros componentes del suero, includos
los anticuerpos irrelevantes son eliminados. Luego se desprenden los anticuerpos unidos al
antgeno de la columna y estos pueden ser usados en el laboratorio como reactivo o elemento
terapetico.
4.- Anticuerpos monoclonales: Son anticuerpos obtenidos por manipulacin en el laboratorio, para
ello se inmuniza un animal, generalmente ratn, se sacrifica y obtiene el bazo, se prepara a
partir de este rgano una suspensin celular y estos linfocitos se fucionan con una lnea
celular de plasmocitoma. De esta manera se forman hbridos que luego deben ser
seleccionados y expandidos. Estas clulas hbridas conforman los hibridomas , que han recibido
la caracterstica de inmortalidad del plasmocitoma y la especificidad para el antgeno que
interesa de los linfocitos esplnicos del ratn inmunizado. Los anticuerpos monoclonales estn
dirigidos contra un solo determinante antignico del inmungeno que interesa, lo que contrasta
con los anticuerpos policlonales, que reconocen mltiples eptopes. Los anticuerpos
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monoclonales, en general reaccionan con menor eficiencia que los policlonales pero tienen a su
favor su exquisita especificidad, su homogeneidad, y el hecho que puedan prepararse en
cantidades ilimitadas. Los hibridomas productores de estos anticuerpos provienen generalmente
de ratn, pero tambin los hay de rata y hamster. Los intentos por hacer hibridomas con otras
especies han fracasado ya que en este caso resultan hbridos inestables que a poco andar,
pierden cromosomas y dejan de secretar anticuerpos.
5. Anticuerpos recombinantes: La imposibilidad de tener buenos anticuerpos monoclonales
humanos, para ser usados con fines teraputicos, ha impulsado los esfuerzos hacia la obtencin
por ingeniera gentica de anticuerpos o fracciones de anticuerpos recombinantes. Hoy da es
posible la produccin de Fab con determinada especificidad, o de cadenas L o H enteras, en
fagos, bacterias, clulas de plantas y clulas de origen animal tanto "in vitro" como "in vivo",
tecnologa que abre posibilidades casi ilimitadas para el futuro uso de los anticuerpos tanto en el
diagnstico como en la teraputica.


































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PROPIEDADES DE LAS DISTINTAS CLASES DE INMUNOGLOBULINAS
IgG IgA IgM IgD IgE
Peso Molecular 150.000 160.000 900.000 180.000 200.000
para monmero
Subunidades adicionales - J y S J - -
Concentracin aproximada en suero
(mg/ml)
12 1.8 1 0 0.04 0.00002
Porcentage del total de
Inmunoglobulina
80 13 6 0.2 0.002
Distribucin Igual: intra y
extravascular
Intravascular y
secreciones
Principalmente
intravascular
Presente en superficie de
linfocitos
Sobre basfilos
y mastocitos.
Vida media (das) 23 5.5 5 2.8 2.0
Paso a travs de placenta ++ - - - -
Presencia en secreciones - ++ - - -
Presencia en leche + + 0 a trazas - -
Activacin de complemento va
clsica
+ - +++ - -
Unin a receptores Fc sobre
macrfagos, polimorfonucleares y
clulas NK.
++ - - - -
Actividad antiviral +++ +++ + - -
Actividad antibacteriana (Gram-) +++ ++ +++ - -
Actividad anti toxina +++ - - - -
Actividad alrgica - - - - ++
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ORGANOS DEL SISTEMA INMUNE


Se les puede dividir en rganos linfoides centrales y perifricos, los
primeros encargados de producir los componentes celulares que componen el sistema
linfoide y los segundos involucrados directamente en la respuesta inmune.

ORGANOS LINFOIDES CENTRALES.
1) Mdula sea.
2) Timo.
3) Bursa de Fabricio (slo en aves).

MEDULA OSEA: Existen dos tipos, la mdula sea amarilla infiltrada de lpidos y
afuncional y la mdula sea roja o hematopoytica, encargada de contener a las
clulas madres o troncales, que como vimos antes son pluripotenciales, capaces de dar
origen a toda la serie hematopoytica.
La mdula sea roja ocupa en todos los animales los intersticios del tejido seo
esponjoso del centro de los huesos planos, cortos y epifisis de los huesos largos. El
canal medular de los huesos largos, tambin contiene mdula sea hematopoytica en
todos los animales recin nacidos y en los adultos menos evolucionados, ubicados al
nivel de los roedores o bajo stos en la escala zoolgica. En los mamferos superiores la
mdula sea roja del canal medular de los huesos largos se transforma en amarilla en la
medida que el animal crece. Como puede verse en la figura siguiente en un lueso largo
cortado transversalmente permite visualizar la arteriola central (en este caso 2) y el
complejo venoso con los capilares que conforman la mayor extensin del territorio
vascular, dejando el territorio hematopoytico.



















Fig. 1. Corte transversal de un hueso largo a nivel de la difisis mostrando la estructura
de la mdula sea hematopoytica en el canal medular.



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Por lo tanto se pueden distinguir dos regiones o espacios en la mdula
sea hematopoytica, el espacio intravascular y el espacio extravascular o
hematopoytico. El espacio hematopoytico, como su nombre lo indica est ocupado
por clulas hematopoyticas en diferente estado de diferenciacin: Troncales o stem
cells, que dan origen a la serie roja (eritrocitos) y a la serie blanca (lnea monoctica,
granuloctica, linfoctica y a los megacariocitos). Enla figura que sigue se puede
visualizar el territorio venoso o espacio extravascular con sus capilares (S), estos
capilares se encuentran reforzados por las clulas adventiciales, que al transformarse la
mdula sea roja en amarilla se llenan de lpidos eliminando por desplazamiento el
tejido hematopoytico.

























Fig. 2. Esquema que muestra la estructura que adopta la mdula sea roja (a la derecha)
y la compara con la mdula sea amarilla.


EL TIMO. Se le puede definir como el rgano linfoide destinado a la maduracin y la
seleccin de los linfocitos T. Contiene dos tipos de clulas fundamentales: las clulas
retculo-epiteliales y los linfocitos. Las primeras constituyen la estructura del rgano,
los linfocitos en cambio son clulas de paso, en proceso de expansin y maduracin.

Las clulas retculo-epiteliales tienen su origen embriolgico en el epitelio
de la tercera y cuarta bolsa farngea, el cual muy temprano en el desarrollo embrionario
produce una yemacin o acmulo celular constituido por clulas epiteliales unidas por
desmosomas, esto hace que posteriormente, cuando los linfocitos pre-T, migran al
rgano, estas clulas originalmente cuboidales, puede ser desplazada por los
linfocitos, adoptan una morfologa estrellada, unidas por sus prolongaciones mediante
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desmosomas con las clulas vecinas, esto da al conjunto la caracterstica de red
tridimensional destinada a acoger a los linfocitos en su interior. Las clulas
retculo-epiteliales producen las hormonas tmicas, llamadas tambin factores tmicos,
involucrados en la proliferacin y maduracin de los linfocitos T. Estas clulas cuando
degeneran forman en algunas especies los corpsculos de Hassal en la zona medular del
rgano. En la figura siguiente un esquema del primordio tmico constituido por clulas
epiteliales solamente, que posteriormente es invadido por linfocitos.




























Fig. 3. Esquema que muestra primero el primordio tmico constituido slo por clulas
epiteliales y que en la parte inferior muestra esta misma estructura invadida por
linfocitos pre-tmicos provenientes de la mdula sea.


Las clulas linfocitarias o timocitos que encontramos en el timo, estn
constituidas por las clulas pre-T que vienen de la mdula sea o por sus descendientes.
Encontramos en este rgano timocitos con diferente grado de diferenciacin y
maduracin. En general podemos decir que estas clulas se dividen rpidamente y estn
en proceso de seleccin como veremos ms adelante.
El timo es un rgano generalmente bi-lobulado, de esto hace excepcin
especies inferiores pertenecientes a aves, y anfibios, en las cuales es poli-lobulado. La
unidad histolgica fundamental de cada lbulo es el lobulillo tmico. Cada lobulillo est
parcialmente separado de sus vecinos por tabiques de tejido conectivo derivados de la
cpsula de tejido conectivo que se introducen hacia el centro del rgano, al corte
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histolgico se pueden distinguir claramente dos zonas diferentes: en la periferia la zona
cortical, densamente poblada por linfocitos recin llegados de la mdula sea o en las
primeras etapas de proliferacin, son clulas inmaduras y muy sensibles a la cortisona.
Las clulas retculo-epiteliales son apenas visibles para un ojo experimentado. En el
centro de los lobulillos se encuentra la zona medular con menor cantidad de clulas
linfoides, caracterizadas por tener un avanzado estado de madurez y clulas retculo-
epiteliales claramente visibles con tinciones especiales. En la siguiente figura puede
verse la estructura antes descrita.
La principal funcin del timo es la produccin de linfocitos T, lo que
involucra la multiplicacin y seleccin de los linfocitos tmicos. El proceso de
seleccin requiere que estos linfocitos reconozcan e interactuen con los antgenos de
histocompatibilidad de las clulas retculo-epiteliales con afinidad moderada, slo as
consiguen obtener de stas, las seales positivas para proseguir el proceso de
proliferacin y maduracin. Los timocitos que reaccionan con elevada afinidad con los
antgenos de histocompatibilidad propios, al igual que los que reconocen otros antgenos
propios, se mueren por exceso de estmulo. Igualmente los timocitos que no son capaces
de interactuar con los antgenos de histocompatibilidad propios, tambin mueren. La
muerte de estas clulas ocurre por apoptosis, proceso que se caracteriza por no dejar
cicatriz en el tejido.


























Fig. 4. Esquema de la estructura tmica, en la cual puede verse una cpsula y una
travcula tmica. La parte externa del rgano est constituida por la corteza
tmica y la zona central por mdula sea.


Cpsula tmica
Travcula
Clula epitelio reticular
Vnula
Linfocitos
Clulas epitelio-reticulares
Corpsculos de Hassall
Corteza
Mdula
Clulas retculo
epitelial
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Fig. 5. Esquema de la Bursa de Fabricio, ubicada en el techo de la ltima porcin del
recto.

LA BURSA DE FABRICIO. Es un rgano linfo-epitelial distintivo de las aves, que se
ubica en el techo de la ltima parte de la cloaca. Es una estructura ovoide que , al igual
que el timo se origina muy temprano en el desarrollo embrionario, su estructura
corresponde un divertculo epitelial que se ramifica varias veces permitiendo el
alojamiento de gran cantidad de linfocitos pre-B en la parte interna de estos pliegues.
Los linfocitos se organizan en estructuras foliculares, que conforman unidades en las
que al microscopio se puede diferenciar una zona medular que contiene relativamente
pocas clulas linfoides y una zona cortical densamente poblada por linfocitos, que
puede estar ausente en la zona que el folculo est en contacto con el epitelio.
La funcin de la bursa, tal como dijramos es permitir la maduracin y
la seleccin de los linfocitos B, el mecanismo de este ltimo proceso, no est an bien
entendido. Cuando las aves entran en la pubertad, el rgano involuciona. Si al embrin
o al recin nacido se le administra testosterona o estrgenos, la bursa desaparece y el
ave queda sin clulas B de por vida.









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ORGANOS LINFOIDES SECUNDARIOS:
1. Bazo
2. Ndulo linftico.
3. Tejido linfoide asociado a mucosas:
a) Placas de Peyer.
b) Apndice.
c) Tonsilas.
d) Saculus rotundus.
e) Acumulos linfoides.



EL BAZO. Como debemos saberlo de nuestros cursos de anatoma e histologa, es el
rgano linfoide encargado de filtrar la sangre, removiendo de la circulacin los
antgenos y montando una respuesta inmune contra ellos, adems tiene como funcin
anexa remover los glbulos rojos viejos o deteriorados.
La remocin fsica tanto de los antgenos particulados (bacterias, hongos,
parsitos o virus) como de los glbulos rojos viejos es funcin de macrfagos
reticulares que como veremos ms adelante se ubican en los cordones celulares de la
pulpa roja, la respuesta inmune en cambio corre por cuenta de los linfocitos, en su
mayora localizados en la pulpa blanca.
El bazo se encuentra rodeado por una cpsula constituida de tejido
conectivo y msculo liso en cantidades variables segn sea la especie de que se trate
(los carnvoros por ejemplo tienen un componente muscular marcadamente importante).
Esta cpsula enva trabculas de tejido conectivo al interior del rgano. En el bazo
podemos distinguir dos zonas claramente diferenciables: la pulpa blanca y la pulpa roja,
ambas zonas se pueden observar al microscopio distribuidas a travs de todo el rgano.
Si este rgano est destinado a filtrar los antgenos que viene va
sangunea, analizaremos su organizacin desde esta perspectiva: la o las arterias
esplnicas penetran al rgano por hilio, desde aqu transcurren por el tejido capsular en
donde se ramifican y por medio de las trabculas conectivas, arteria menores penetran al
rgano. Ya en el interior, las arteriolas abandonan la trabcula conectiva continuando
sola su trayecto, en este momento se rodea de un mango de linfocitos densamente
apretados que se llama VAINA PERIARTERIOLAR, pasando a llamarse la arteria
ARTERIOLA CENTRAL, la que da ramas que despus de subdividirse se abren en
un SENO VENOSO DISCONTINUO que rodea la vaina periarteriolar como un
extenso lago sanguneo. Hacia afuera encontramos una zona con clulas heterogneas
en su origen y tamao llamada ZONA MARGINAL. En el espesor de la vaina
periarteriolar se encuentran los folculos linfoides, que pueden ser SECUNDARIOS o
PRIMARIOS, segn tengan o n un centro germinal. Toda esta estructura descrita
constituye la PULPA BLANCA. Por lo tanto, lo que resta del rgano, ocupando los
espacios dejados por la pulpa blanca est la PULPA ROJA que al microscopio aparece
rica en glbulos rojos y est constituida por cordones de fibras reticulares y celulares
(CORDONES de BILRROTH) que dejan espacios entre ellos constituyendo los senos
venosos.
Dentro de esta construccin arquitectnica, sus habitantes, las clulas del
sistema linfoide, se ubican en lugares especficos para all madurar y a veces dividirse.
Las reas ms importantes son las AREAS T y las AREAS B, en las que se alojan las
clulas T y B respectivamente.

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As tenemos que:

La vaina periarteriolar es rea T.
Los folculos linfoides son reas B.
La zona marginal tiene gran cantidad de macrfagos, linfocitos T y linfocitos B.
Los cordones de Bilrroth, en la pulpa roja estn constituidos por gran cantidad de
macrfagos, linfocitos T y B, clulas plasmticas y glbulos rojos adheridos.


























Fig. 6. Esquema de la estructura del bazo en la que se pueden ver los diferentes
componentes de la pulpa blanca y pulpa roja.

Veamos ahora como llegan y circulan los antgenos que deben ser filtrados en
el bazo y contra los que este rgano va a montar una Respuesta Inmune: Los elementos
extraos penetran al rgano por la o las arterias esplnicas, se distribuyen por sus
ramificaciones en la cpsula y luego penetran por los vasos que van acompaando a las
trabculas, prosigue luego por la arteriola central y por sus ramas va a dar al seno
venoso discontinuo que rodea la vaina periarteriolar, de aqu el antgeno difunde hacia
la zona marginal impactando a las clulas Macrofgicas, linfocitos B y T de la zona de
este lugar que es el primero en responder al antgeno, luego los microorganismos y
molculas extraas difunden hacia el interior de la vaina periarteriolar (impactando a
linfocitos T) y alcanza a los folculos linfoides (impactando a las clulas B). El
antgeno restante (la mayor parte)
va a dar a la pulpa roja despus de pasar por la zona marginal, ac al pasar por la tupida
malla de cordones celulares ricos en macrfagos, el antgeno es retenido y eliminado
despus de ser fagocitado por stos.
Vaina periarteriolar
Seno venoso discontinuo
Arteriola central
Centro germinal Folculo linfoide
Zona marginal
Pulpa roja
Travcula

Cpsul

Arteria travecular
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EL NODULO LINFATICO. El ndulo linftico, llamado tambin, aunque
impropiamente ganglio linftico, es una estructura ovoide encapsulada por tejido
conectivo destinado a filtrar la linfa que llega hasta l por los vasos linfticos aferentes
(que llegan) y que luego de este proceso sale por el o los vasos linfticos eferentes (que
salen) para ser recogida por vasos mayores hasta llegar al conducto linftico que vaca
su contenido en el torrente sanguneo. La linfa se origina en los especios intersticiales
de todo el organismo , es en el comienzo el lquido intersticial que al ser recogido y
colectado por pequeos capilares linfticos da origen a la linfa contenida en los vasos
que la recolectan. La linfa proveniente de una regin del organismo determinada es de
esta forma conducida y filtrada en el ndulo regional.

El ndulo linftico, como hemos dicho, se encuentra rodeado por una
cpsula de tejido conectivo denso, bajo sta tenemos el tejido linfoide propiamente tal
quedando entre estos dos componentes un espacio virtual o SENO SUB-
CAPSULAR que no es ms que tejido conectivo laxo, que como veremos ms adelante
permite que el ganglio sea inundado por la linfa que llega de la regin. El tejido
linfoide propiamente tal presenta al corte una ZONA CORTICAL SUPERFICIAL,
que aloja folculos linfoides primarios y secundarios (Area B dependiente), una ZONA
CORTICAL PROFUNDA que aloja a los linfocitos T (Area T dependiente) y una
ZONA MEDULAR compuesta por cordones celulares y senos linfticos. Estos
cordones, al igual que en la pulpa roja del bazo, estn constituidos por macrfagos,
clulas plasmticas y linfocitos T (Fig. 7).

Veamos ahora como el antgeno localizado en el intersticio celular es
conducido, penetra e impacta al ndulo linftico: pequeos vasos linfticos fenestrados
recogen el lquido extracelular y los antgenos que en l se encuentran y lo conducen al
ganglio regional, los vasos linfticos en general tienen paredes delgadas y se
caracterizan por tener en su lumen vlvulas que permiten el avance de la linfa en un solo
sentido. Este avance se produce como efecto secundario al movimiento muscular de la
regin.

Los vasos aferentes que entregan la linfa al ganglio ndulo penetran al
rgano por su parte mas convexa, la linfa que trae los antgenos se extiende bajo la
cpsula por el seno subcapsular y luego comienza a penetrar por entre los folculos
linfoides de la zona cortical superficial y pronto alcanza la cortical profunda, a su paso
impacta a clulas B y T, llegando luego a la mdula donde los macrfagos de los
cordones celulares retienen el antgeno que pudiera haber pasado a travs de la corteza.

El antgeno al impactar el ndulo linftico produce una serie de cambios
espectaculares: hay aumento de las divisiones celulares de los linfocitos T y B, se
origina atrapamiento de linfocitos que pasan por el rgano (llegados por va linftica
con el antgeno o por va sangunea), cambios que aumentan el volumen del rgano y el
nmero de las clulas, estos cambios, especialmente el aumento de volumen, lo hemos
experimentado todos: una infeccin oral, amigdalitis o faringitis hace palpables los
ndulos linfticos regionales.





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Fig. 7. Esquema de la estructura de un ndulo linftico mostrando los componentes de
la corteza superficial, corteza profunda y mdula



TEJIDO LINFOIDE ASOCIADO A MUCOSAS. Especial mencin merecen las
estructuras linfoides asociadas a las mucosas del sistema gastrointestinal por su
importancia en la defensa inmunolgicamente mediada de estas superficies. Ac
encontramos las PLACAS DE PEYER , el
APENDICE, TONSILAS y SACULUS ROTUNDUS, segn la especie de animal
que se trate.

En general estas estructuras no poseen una barrera clara que les separe de la
lmina propia de la mucosa y estn organizadas en unidades repetidas, que varan
ligeramente en su forma segn el rgano de que se trate pero podramos decir en general
que estas unidades estn constituidas por un folculo linfoideo (clulas B) ubicado
inmediatamente bajo el epitelio mucoso flanqueado o rodeado por un anillo de clulas T
que al corte parecieran tener una forma ligeramente trapezoidal y sobre la cual existen
una mucosa que muestra proyecciones hacia el lmen del intestino (vellosidades
intestinales) (Fig. 8).

Los linfocitos ubicados en esta regin pueden migrar hacia el resto del
organismo siguiendo la va de los capilares linfticos ubicados entre las zonas T y B o
introducindose al citoplasma de las clulas cuboidales del epitelio intestinal, dividirse
en su interior y salir hacia el lmen.






Antgeno penetrando por
un vaso aferente
Vasos linfticos aferentes
Cortical profunda
paracortical
Vnula post-capilar
Mdula
Vaso linftico eferente
Cortical
superficial
Cpsula conectiva
Folculos linfoides
secundarios
Folculos linfides
primarios
Seno subcapsular
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Fig. 8. Esquema de la organizacin de una placa de Peyer en la que se ven las reas B y
reas T. Las primeras con su centro germinal respectivo en la parte baja del
folculo linfoide.


Fuera de las estructuras antes mencionadas tenemos incluidas en la lmina
propia de la mucosa acmulos linfoideos sin organizacin especial y sin cpsula que los
separe del conectivo vecino.

En general podemos decir que linfocitos e inmunoglobulinas migran desde estos
rganos hacia el lmen del digestivo y que desde el lmen penetra una gran cantidad de
antgenos (bacterias son fcilmente visibles en el interior de estas estructuras con
tinciones apropiadas).


EL SISTEMA LINFOIDE EN VERTEBRADOS INFERIORES.

Si uno revisa la composicin del sistema linfoide desde los vertebrados
inferiores hacia arriba, puede darse cuenta que en la medida que se sube en la escala
zoolgica, el sistema inmune se hace cada vez ms complejo y claramente separado del
resto de los tejidos. As podemos ver que la lamprea, del Orden Cyclostomata muestra
slo acmulos discretos de linfocitos y puede montar una respuesta inmune poco
efectiva y difcil de medir. Si uno contina subiendo en la escala zoolgica y llega a la
clase de los peces cartilaginosos, nos encontramos con un timo claramente
diferenciable, bazo con actividad hematopoytica y un pronefros o rin anterior capaz
de ejercer funciones hematopoyticas y dar origen a clulas formadoras de anticuerpos.
Continuando con nuestro ascenso en la escala zoolgica encontramos a los peces de
esqueleto seo (salmondeos y otros) ac el timo tiene una corteza y una mdula
definidos, el bazo con la pulpa blanca y roja distinguibles y el rin anterior, son
claramente identificables como los rganos ms importantes del sistema linfoide. Las
clulas plasmticas productoras de anticuerpos, pueden verse en gran cantidad en el
pronefros pero tambin en el bazo y el timo. Este nivel de la escala filogentica es de
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gran importancia, ya que en ella se encuentran las especies que son explotadas en
salmonicultura, un rubro de incuestionable importancia econmica.

En los anfibios aparecen el hgado como rgano hematopoytico de
importancia, adicionalmente el timo y el bazo cumplen su funcin diferenciando
linfocitos, multiplicndolos y produciendo anticuerpos.

En las aves (recordemos que son los primeros homotermos) encontramos un
timo polilobulado distribuido a lo largo del cuello, un bazo bien configurado semejante
al de los mamferos, la bolsa de Fabricio ya descrita en detalle como rgano linfoide
central. Las aves presentan mdula sea hematopoytica en huesos largos y un rgano
linfoide caracterstico, la glndula de Harden que es un acmul o linfoide ubicado
sobre el globo ocular. En las aves comienzan a insinuarse dilataciones de vasos
linfticos con acmulos linfocitarios en su interior que claramente son ganglios o
ndulos linfticos primitivos. En este punto de la escala zoolgica podemos advertir
por primera vez una clara diferenciacin de clulas encargadas de la funcin b
(madurados en la Bursa) y las encargadas de la funcin B (maduradas en el Timo).

































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INMUNOGENETICA: COMPLEJO MAYOR DE
HISTOCOMPATIBILIDAD (CMH).


El CMH corresponde a un set de genes presente en todas las especies de
vertebrados. Se habla de complejo porque los genes estn estrechamente ligados y
son heredados como unidad. Existen una gran cantidad de genes en el CMH, que
codifican un producto llamado antgenos de histocompatibilidad, que son llamados as
porque inducen una respuesta inmune muy vigorosa en caso de transplantes no
compatibles.

La funcin de las molculas HLA es unir pptidos seleccionados, generados dentro de la
clula durante el procesamiento de los antgenos proteicos. El complejo formado entre
una molcula CMH y el pptido se mueve hacia la superficie celular, donde la molcula
del CMH queda inserta en la membrana de la clula con el pptido hacia el exterior.
As, el complejo pptido-molcula CMH puede ser reconocido por una clula T que
posea el receptor apropiado.

Nomenclatura. El CMH est presente en todos los vertebrados y se ubica en distintos
cromosomas de acuerdo a la especie. El nombre del CMH en cada especie obedece, en
general, a indicar la abreviacin de la especie, seguido de la partcula La (lymphocyte
antigen). Hace excepcin a esto el ratn.

Ejemplos:
CMH de Bovino : BoLA
CMH de Equino : ELA
CMH de Porcino: SLA
CMH de Ovino : OLA
CMH de Canino: DLA
CMH de Ratn : H-2
CMH de Hombre: HLA (Human Lymphocyte Antigen).

Organizacin cromosmica del CMH del hombre.

Esto se refiere a la posicin de los genes en el cromosoma. El sistema HLA
est ubicado en el brazo corto del cromosoma 6 y veremos la organizacin de los genes
de acuerdo a su producto: molculas clase I, clase II y clase III (ver Fig. 1). Las
molculas ms importantes son las clase I y II por su rol vital en la presentacin de
antgeno e interaccin celular que lleva a la respuesta inmune.










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Fig. 1. Mapa gentico del sistema HLA.


Estructura y funcin de molculas o antgenos clase I.

a) Estructura.
En el hombre hay 3 loci independientes (A,B,C). Cada locus de clase I
codifica una molcula de transmembrana formada por una cadena alfa de 45 kDa,
asociada no covalentemente con una molcula de beta-2-microglobulina (12 kDa).
La cadena alfa tiene 3 dominios llamados alfa 1, alfa 2 y alfa 3, siendo los
dos primeros variables y alfa 3 constante (Fig. 2). Entre los dominios alfa 1 y alfa 2 se
estructura un bolsillo que presenta un plegamiento beta en el fondo y una disposicin
en alfa hlice en los flancos. Es en este sitio que se acomoda el pptido que ser
presentado a la clula T. La alta variabilidad observada en estos dominios permite
presentar una inmensa cantidad de pptidos antignicos diferentes y como
consecuencia, estructurar una respuesta inmune contra ellos.
















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Fig. 2. Estructura molcula histocompatibilidad de clase I.

Estas molculas se expresan en prcticamente todas las clulas nucleadas
del organismo y lo hacen los tres tipos (A,B y C) simultneamente. Como estos
antgenos se expresan en forma codominante, en cada clula de cada individuo podemos
tener 6 clases diferentes de molculas clase I: HLA-A, HLA-B y HLA-C codificadas
por el cromosoma paterno y HLA-A, HLA-B y HLA-C codificadas por el cromosoma
materno. Algunos tejidos presentan mayor concentracin (tejido linfoide), otros menor
cantidad (tejido nervioso) y no se describe en los glbulos rojos.

b) Funcin.
Las clulas que presentan el antgeno a la clula T acomodan el pptido
antignico en el bolsillo correspondiente y que por estar cerrado en ambos extremos
slo puede acomodar pptidos de 8-9 aminocidos. Este pptido deriva
predominantemente de protenas procesadas en el citoplasma y retculo
endoplsmico de la clula. Clulas infectadas con bacterias y virus generan pptidos
por esta va endgena de procesamiento del antgeno. As, el linfocito T con
marcador CD-8 reconoce el pptido por las regiones variables V alfa y V beta de su
receptor de membrana y la molcula de CD8 se une al dominio constante alfa 3


Estructura y funcin de molculas o antgenos clase II.

a) Estructura En el hombre, la regin que codifica molculas de clase II contiene 3 sets
de genes: DP, DQ, DR que codifican una glicoprotena de superficie de doble
cadena. DP, DQ y DR contienen genes alfa y genes beta que codifican cadenas alfa
y beta de la molcula (Fig. 1).


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Esta molcula de transmembrana est formada por una cadena alfa de 35 kDa
y una beta de 28 k-Da, unidas no covalentemente. Ambas cadenas tienen un dominio
variable alfa 1 y beta 1 y uno constante, alfa 2 y beta 2 (Fig. 3).

Entre los dominios alfa 1 y beta 1 se estructura el bolsillo que acomoda al
pptido antignico con una disposicin beta en el piso y alfa hlice en los costados.

Fig. 3. Estructura molcula histocompatibilidad de clase II.


Las molculas clase II tienen una distribucin ms restringida en el
organismo, ya que constitutivamente se expresan en linfocitos B, clulas dendrticas y
macrfagos.

b) Funcin.
La presentacin del antgeno a la clula T, tambin se hace ubicando el
pptido en el bolsillo. Sin embargo, dado que ste es abierto en los extremos, permite
unir pptidos de 12-25 aminocidos. Este pptido deriva, predominantemente, de
protenas procesadas en los compartimentos cidos de la clula (endosomas y
lisosomas). Los pptidos se generan en este compartimento despus de la captacin de
antgenos desde el exterior de la clula (va exgena de procesamiento del antgeno).






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Polimorfismo.

El sistema HLA es el sistema gnico ms altamente polimrfico en el
organismo y se observa multialelismo tanto en molculas de clase I como en clase II.
As, se conocen los siguientes alelos:

A =372 DR =3 DQ=62
B = 661 DR =418 DP =23
C =190 DQ =28 DP =118

Este polimorfismo es de gran importancia en el reconocimiento del antgeno por
las clulas T. Una clula T reconoce el antgeno como un pptido unido a una particula
variante allica de una molcula del CMH y no reconoce el mismo pptido unido a otra
molcula CMH. Este fenmeno es llamado restriccin gentica. La mayora de los
alelos MHC difieren por mltiples sustituciones de aminocidos y estas diferencias
estn focalizadas en el sitio de unin al pptido que hace contacto directo con el
receptor de la clula T. Al menos tres propiedades de las molculas CMH son afectadas
por el polimorfismo: 1. El rango de pptidos unidos. 2. La conformacin del pptido
unido. 3. La interaccin de la molcula con el receptor de la clula T.

En otras palabras, el polimorfismo gentico es la estrategia para generar
diversidad en las molculas del CMH, lo que abre la posibilidad de establecer respuestas
inmunes contra cientos o miles de antgenos. Esto se traduce en un eficiente mecanismo
de supervivencia de la especie humana, ya que al mirar la poblacin en su totalidad se
ve como improbable que exista algn antgeno frente al cual no se haga una respuesta
inmune (un nuevo patgeno por ejemplo).

Por otra parte este fenmeno tambin se traduce en la prcticamente
imposibilidad de encontrar dos individuos gentica y antignicamente iguales (excepto
gemelos univitelinos) lo que dificulta enormemente la tecnologa del transplante de
rganos.

Molculas de clase III.

Como se muestra en la Fig. 1 la regin clase III contiene genes que codifican
protenas del complemento (C2, C4 y factor B). La regin entre genes que codifican
molculas clase I y II contiene adems otros genes: citoquinas y etc.

La verdad es que no est muy bien entendido por qu estos genes estn ubicados
en este complejo sistema, cuyo rol crucial es la presentacin de antgenos a la clula T y
permitir la interaccin de clulas que conduce a una respuesta inmune.


Asociacion CMH y enfermedad.

Hasta ahora hemos visto la ventaja que significa para la especie humana el
polimorfismo del HLA en relacin a patgenos ambientales. En contraste, se ha
encontrado que la presencia de ciertos alelos representa para el individuo un mayor
riesgo de contraer ciertas enfermedades, especialmente aquellas de naturaleza
autoinmune (Tabla 1).
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Tabla I. Asociacin HLA y enfermedad.

Enfermedad Alelo HLA Factor riesgo relativo
Tiroiditis de Hashimoto DR5 3
Artritis reumatoidea DR4, B8. 6
Esclerosis Mltiple DR2. 5
Espondilitis anquilosante B27 90
Diabetes Mellitus dep.
insulina
DQ8, DR3,4 20
Psoriasis C6 13
Miastenia Gravis B8 4
Es el riesgo de contraer la enfermedad de un individuo que posee ese alelo comparado
al riesgo de un individuo que no lo tiene.


Parece claro que la presencia de los alelos por si mismos, no son capaces de
desarrollar la enfermedad, sino que actan como factor predisponente, indicando la
necesidad de otros factores tales como ambientales o infeccin. Sin saber exactamente
el mecanismo, se han propuesto algunas hiptesis respecto a esta asociacin:

1. Molculas HLA sirven de receptores para la unin y entrada de patgenos a la
clula. As, individuos con un cierto haplotipo HLA pueden ser mas susceptibles a
una infeccin por un virus en particular, que usa esa molcula HLA como un
receptor.
2. Semejanza entre eptopes del patgeno y molculas HLA del husped, que puede
prevenir una respuesta inmune porque el patgeno es visto como propio; sin
embargo, si se llega a producir una respuesta al patgeno, dada la similitud
antignica, esos anticuerpos tambin reaccionarn con el antgeno propio, generando
dao.
3. Es posible que un alelo en el HLA mismo no sea responsable de la enfermedad, sino
ms bien que otros loci estrechamente ligados causen la enfermedad.

Similitudes y diferencias entre molculas HLA clase I y clase II.

Similitudes:
a) Funcin: Ambas son vitales molculas de interaccin celular por su capacidad de
unin y presentar pptidos en la superficie de clulas presentadoras a clulas T.
Ambas, tambin son antgenos de transplante fuertes, por lo tanto consideradas
como molculas marcadoras de lo propio.
b) Estructura: Ambas son (i) protenas de doble cadena; (ii) tienen un sitio de unin
al pptido que es propio de ese alelo en particular; y (iii) tienen una regin
polimrfica y una no polimrfica.
c) Expresin: Ambas se expresan en forma codominante.
d) Diversidad: Ambas muestran polimorfismo gentico, con mltiples alelos en la
poblacin.

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Diferencias:
a) Las clulas que expresan molculas HLA clase I +el pptido interactan con
linfocitos T CD8+. Clulas que expresan HLA clase II +el pptido lo hacen con
clulas T CD4+.
b) Molculas clase I unen pptidos de 8-9 aminocidos; molculas clase II unen
pptidos de 12-25 a.
c) La expresin de molculas clase I es constitutiva en todas las clulas nucleadas;
clase II es ms restringida.










































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CELULAS ENVUELTAS EN LA RESPUESTA INMUNE

1) Los linfocitos
2) Los macrfagos
3) Otras clulas relacionadas como los neutrfilos, eosinfilos y basfilos.


LOS LINFOCITOS: Son los principales protagonistas de la respuesta inmune. Desde
un punto de vista morfolgico, su estructura parece no tener relacin con su funcin,
son clulas redondas, con un ncleo generalmente redondo y de cromatina condensada,
rodeado por una delgada capa de citoplasma a menudo imperceptible cuando se observa
en el microscopio a bajo aumento. El tamao de los linfocitos va desde 8 a 15 micras y
este depende de su estado de activacin.

Las clulas linfoides se originan en la mdula sea hematopoytica, como
producto de la diferenciacin de la progenie de la clula madre, clula troncal o
stem cell, que como sabemos de nuestro curso de histologa, tambin da origen a
glbulos rojos, granulocitos, macrfagos y megacariocitos (los que a su vez dan origen
a las plaquetas).

Los linfocitos se dividen en dos grandes subpoblaciones: los linfocitos o
clulas T, que han pasado por el timo y tienen a su cargo la respuesta inmune celular y
los linfocitos o clulas B que maduran en la mdula sea en el caso de los mamferos, y
en la Bursa de Fabricio en las aves. Estas clulas estn destinadas a la produccin de
anticuerpos, son por lo tanto responsables de la respuesta inmune humoral. Una
subpoblacin celular menor la componen las clulas natural killer o linfocitos no T,
no B.

Los linfocitos B tienen como principal caracterstica llevar
inmunoglobulinas de membranas en su superficie, las que sirven en esta clula para
entrar en contacto con el antgeno o inmungeno extrao. Las inmunoglobulinas de
membrana reconocen eptopes conformacionales, por lo tanto estarn reconociendo
estructuras derivadas de la conformacin secundaria o terciaria de la protena
antignica, en otras palabras reconoce el antgeno nativo tal como est en la
naturaleza. La especificidad de los receptores para el antgeno de la clula B es siempre
una, an cuando pueda una misma clula llevar en su membrana diferentes clases o
isotipos de inmunoglobulina (IgG, IgM, IgA). Esta especificidad se transmite a la
descendencia y a las clulas plasmticas que de ellas se forman. Las inmunoglobulinas
de membrana o receptores de la clula B se acompaan siempre por dos cadenas
polipeptdicas llamadas Ig e Igque faciliten la transducci n de la seal del receptor
(la molcula de inmunoglobulina) hacia el interior de la clula (Fig. 1).









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Fig. 1. Inmunoglobulina de membrana (mIg) con las cadenas Ig e Iglas que
permiten transmitir la seal desde la inmunoglobulina (cuando esta se contacta
con el antgeno) al citoplasma de las clulas B.


Las clulas plasmticas son las encargadas de producir grandes cantidades de
inmunoglobulinas o anticuerpos, su forma es tpica: clulas grandes, con un
ergastoplasma muy desarrollado, con vacuolas que contienen los anticuerpos y lo que es
caracterstico un ncleo excntrico con la cromatina dispuesta en rueda de carreta.

Los linfocitos T reconocen el antgeno extrao mediante la molcula de
membrana llamada receptor de la celula T o T cell receptor (TCR). Este est
constituido por dos cadenas polipeptidicas unidas por puentes disulfuro, que como en el
caso de las inmunoglobulinas tienen una parte constante y una parte variable que entra
en contacto con el determinante antignico. Existen dos tipos de TCR: los alfa-beta
(-) y los gama-delta (-). que se encuentran siempre en diferentes clulas T.

















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Fig. 2. Receptores de la clula T: Molculas compuestas por cadenas
unidas por puentes disulfuro insertas en la membrana celular.


El receptor T clsico y del que ms se conoce el - , que est en ms del 95%
de los linfocitos T del hombre y el ratn, siendo en estas especies el receptor una
minora. Sin embargo, en rumiantes y equinos los linfocitos T pueden llegar a
constituir un 60% de las clulas T circulantes en los recin nacidos, porcentaje que
disminuye con la edad. El rol de los linfocitos T con receptor no es conocido en
su totalidad, se sabe sin embargo, que tienen un rol citotxico y que frente a una
infeccin como tuberculosis aumentan en circulacin.

En ambos casos, TCR va acompaado por un complejo molecular llamado CD-
3, compuesto por mas de 5 molculas diferentes, que tiene por misin transmitir la seal
desde el TCR al interior de la clula. El complejo CD-3 es por otra parte el principal
marcador de las clulas T.

Como puede verse en la Fig.3, las molculas que integran CD-3 poseen al igual
que en el caso de las cadenas Ig e Ig que acompaan a la molcula de Ig de
membrana, una larga cola intracitoplasmtica, lo cual permite la transmisin de la
informacin desde el TCR al interior de la clula T y el inicio de los mecanismos de
activacin celular. Es importante que tanto la molcula de Ig en la clula B como el
TCR tienen una cola intracitoplasmtica muy corta, que no puede, en caso de estar sola
iniciar los eventos de activacin celular.











TCR TCR
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Fig. 3. Complejo TCR/CD-3 mostrando el TCR con cadenas - y las cadenas del
complejo CD-3: , , , y


Las clulas T, reconocen al antgeno solo procesado por una clula
"presentadora" que lo dispone convertido en pptidos sobre las molculas de
histocompatibilidad de su membrana.

Los linfocitos T que se generan en la respuesta inmune con un rol efector
pueden dividirse en dos categoras segn el tipo de funcin que desempeen:


- Linfocitos T efectores : T citotxicas
T de hipersensibilidad retardada.

Los linfocitos T de hipersensibilidad retardada, adems de ser como todos los
linfocitos T, CD-3 positivos, tienen en su membrana la molcula CD-4 que los
caracteriza y les permite interactuar con el antgeno de histocompatibilidad clase 2 que
est presentando el antgeno a la clula T.

Los linfocitos T y los citotxicos, son en cambio, CD-3 positivos, CD-8
positivos. Esta ltima molcula tambin juega un rol en la activacin de la clula ya que
reconoce el antgeno de histocompatibilidad clase 1 durante la presentacin antignica.


De esto podemos deducir que las molculas del complejo CD-3 son el marcador que
permite reconocer en TODOS los linfocitos T, la molcula CD-4 es caracterstica de las
Complejo TCR / CD3

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poblaciones de clulas de hipersensibilidad retardada y la molcula CD-8 marcadora
para las clulas T citotxicas. Adicionalmente los linfocitos T tienen un rol
determinante en la generacin de la respuesta inmune, stos son las clulas T helper
que son linfocitos CD-3+, CD-4+y los linfocitos T reguladores (Treg) que constituye
una poblacin celular heterognea compuesta por subpoblaciones CD-4+y CD-8+. Los
linfocitos T helper reconocen al antgeno de la misma forma que las clulas T de
hipersensibilidad retardada y su funcin es dar seales positivas para la respuesta
inmune, las clulas T reguladoras en cambio tienen como funcin, inhibir la respuesta
inmune excesiva, reconocen el antgeno segn sean CD-4+o CD-8+unido a antgenos
de histocompatibilidad clase II o clase I respectivamente.
Las clulas Natural Killer, una porcin minoritaria del total de linfocitos (10%
- 15%), son clulas grandes con citoplasma evidente en el que se pueden ver grnulos
recibiendo por esto el nombre en ingls de Large Granular Lymphocytes o LGL.
De estas clulas sabemos menos que de los linfocitos T y B, parecen ser
linfocitos primitivos sin receptores especficos para el antgeno extao, su rol sera la
defensa no inmune o defensa innata de la que nos ocuparemos ms adelante. Su rol en
la defensa contra tumores e infecciones intracelulares es determinante. Se les puede
reconocer por tener en su membrana CD-56.

LOS MACROFAGOS: Es una denominacin genrica que engloba a clulas de
variada morfologa y que reciben diferentes nombres segn sea el lugar en que se
encuentren y la funcin que en determinado momento esten desempeando, por
ejemplo, los monocitos estan en la sangre, los histiocitos en el tejido conectivo, las
clulas de Kupfer en el hgado, las clulas de Langerhans en la piel y las clulas
reticulares en los rganos linfoides perifricos.

Los macrfagos desempean tres funciones fundamentales:

a) Funcin fagoctica, destinada a la limpieza y la eliminacin de los cuerpos extraos
que puedan haber penetrado al organismo, o podramos decir menos elegantemente,
funcion de filtro o basurero, esta labor aparece muy abajo en la escala zoolgica
y es uno de los mecanismos innatos de defensa ms importantes con que cuentan
los seres vivos.
b) Produccin de citoquinas (llamadas tambin monoquinas por su origen) que
inducen inflamacin y ayudan a la activacin de los linfocitos y por ende a la
respuesta inmune.
c) Funcin de presentacin antignica, destinada a fagocitar el antgeno extrao,
digerirlo transformndolo en pequeos pptidos, seleccionar algunos de ellos,
unirlos a antgenos de histocompatibilidad propios y expresarlos en la
membrana celular, para que de esta manera sean reconocidos por las celulas T
helper e iniciar as la respuesta inmune.

OTRAS CELULAS INVOLUCRADAS EN LA RESPUESTA INMUNE: An
cuando de menor importancia, los granulocitos (neutrfilos, eosinfilos y basfilos)
tambin juegan diferentes papeles en la respuesta inmune como producir citoquinas
capaces de modular la accin de los linfocitos y servir de clulas efectoras de
mecanismos inespecficos de defensa que los productos de la respuesta inmune ponen
en accin. En menor grado involucradas encontramos adems a clulas endoteliales,
fibroblastos y queratinocitos, que producen citoquinas con influencia en la modulacin
de la respuesta inmune.
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RESPUESTA INMUNE, CINETICA Y EFECTORES


Como ya sabemos, la respuesta inmune puede ser de dos tipos:

*respuesta inmune humoral
*respuesta inmune celular

La respuesta inmune humoral depende de las clulas B, las cuales pueden
ellas mismas producir las inmunoglobulinas o transformarse en clula plasmtica y esta
a su vez producir las inmunoglobulinas o anticuerpos que son las molculas efectoras de
la respuesta inmune humoral.

La respuesta inmune celular, como su nombre lo indica, depende de las
clulas T, algunas de cuyas subpoblaciones se transforman en clulas T efectoras: estas
son los linfocitos T citotxicos y los linfocitos T de la hipersensibilidad retardada.

La respuesta inmune tanto celular como humoral, cuando se produce por
primera vez (primer encuentro con el antgeno), se llama respuesta inmune primaria,
si el inmungeno entra al organismo por segunda vez se llama respuesta inmune
secundaria con caractersticas distintas de la respuesta inmune primaria.

Por ser la respuesta humoral mas fcil de medir en forma repetida en el
tiempo, analizaremos la produccin de anticuerpos tanto en respuesta primaria como
secundaria. Como puede verse en la figura siguiente, en la respuesta inmune primaria se
pueden distinguir 4 fases diferentes: Fase de latencia, Fase de crecimiento exponencial
o fase logartmica, Fase estable o de plateau y Fase de decaimiento.

La respuesta inmune secundaria en cambio, no presenta fase de latencia,
la fase de crecimiento exponencial alcanza valores mas altos y su pendiente es
mayor, la fase estable en este caso es mas corta que en la primaria y la fase de
decaimiento se caracteriza por ser muy lenta.

Como puede verse en la siguiente figura, en la primera parte de la respuesta
inmune primaria es esperable que se produzca solo IgM, para luego cambiar la clase o
isotipo de inmunoglobulina a IgG y eventualmente producir cantidades variables de
IgA o IgE.













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Fig. 1. Respuesta inmune primaria y Respuesta inmune secundaria mostrando la
diferente cintica de los isotipos IgM e IgG, adems en la Respuesta primaria
se establecen las diferentes fases de sta.

En estas condiciones existe memoria inmunolgica por tanto, si el organismo
se ve enfrentado de nuevo al mismo antgeno originar una respuesta secundaria con
una baja cantidad de IgM, elevada cantidad de IgG. Estas inmunoglobulinas se
producirn muy rpidamente por lo tanto ac en respuesta inmune secundaria no existe
la fase de latencia, el ttulo de anticuerpos es mucho mayor, el perodo estable es corto y
el descenso de los anticuerpos es muy lento.

Para estudiar cmo las clulas linfoides llegan a producir la respuesta inmune
trataremos el tema dividido en 3 partes:

1) Repertorio de los receptores para el antgeno
2) Activacin de clulas B y T
3) Eventos celulares que llevan a la respuesta inmune celular
y humoral.


1.- Repertorio de especificidades de los linfocitos.
Los linfocitos tanto T como B presentan entre 109 y 1011 especificidades
diferentes. En otras palabras los linfocitos T pueden reconocer ese nmero de
determinantes secuenciales y los B hacer lo propio con esa magnitud de determinantes
conformacionales.

Cada una de estas subpoblaciones, tal como ya lo hemos visto reconoce el antgeno en
forma diferente y con receptores diferentes, slo con el fin de simplificar el problema
trabajaremos con un antgeno imaginario y de este tomaremos en cuenta slo un
determinante antignico supuestamente reconocido tanto por las Igs de membrana de la
clula B como por el receptor de la clula T (TCR) de los linfocitos T.


Resp.
Primaria
Fase
Logartmica
Fase de
Latencia
Fase de
Decaimiento
Resp.
Secundaria
Fase
Estable
Ag
.
Tiempo Ag.
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El antgeno entra al organismo, puede expandirse dentro de l, llegando a
todos los "rincones" del sistema linfoideo o circunscribir su accin a determinada
regin, en ambos casos, realiza un "scanning" localizando las clulas
inmunocompetentes cuyos receptores pueda "calzar". Las clulas cuyo receptor es
capaz de unirse al antgeno, se comienzan a dividir dando origen a una familia o clon
de clulas con la misma especificidad de la celula que las origin. Estas clulas tanto
en el caso de las T como B son las responsables de lo que conocemos como respuesta
inmune primaria. Es fcil comprender, que a esta altura el sistema linfoide, adems
de haber producido los efectores de la respuesta primaria (anticuerpos y clulas T
efectoras), contiene un nmero de clulas mucho mayor para responder a un segundo
encuentro con el antgeno, y ms an estas clulas, producto de la expansin clonal
inducida por el antgeno son mas fcilmente estimulables por haber estado en contacto
con el antgeno. Estos dos elementos son la base que explica la memoria
inmunolgica que da origen a la respuesta inmune secundaria, que como ya
dijimos, se caracteriza por ser mayor y ms rpida que la respuesta primaria.

2) Activacin de las clulas inmunocompetentes.
Tanto las celulas B como los lifocitos T para ser activados requieren 2
tipos de seales diferentes: a) la informacin de que el receptor para el antgeno se
ha unido a un determinante antignico (primera seal), y b) una "segunda seal "
que proviene de otras clulas del sistema inmune, que aportan las citoquinas
necesarias para la activacin de clulas B y T. Estas citoquinas se unen a receptores
especficos en las clulas que van a responder, y al igual que el TCR o la Ig de
membrana unidos al antgeno, envan seales al citoplasma de la clula en donde se
desencadenan diferentes vas de activacin. En general podemos decir que este
proceso de activacin se inicia activando una fosfolipasa C, que actuando sobre el
fosfatidil-inositol-difosfato de la membrana, genera inositol-trifosfato (IP3) y diacyl-
gliserol (DAG). El IP3 induce aumento del calcio citoplasmtico y el DAG induce la
activacin de protein-kinasa C. A esto sigue la sntesis de RNA, protena y duplicacin
de DNA.

Estas actividades traen a la clula cambios morfolgicos y bioqumicos
espectaculares : desde el punto de vista morfolgico la clula aumenta su tamao , la
cromatina del ncleo se ve menos condensada, el citoplasma mas abundante y mas
bsico. En general el linfocito adopta un aspecto de clula mas inmadura e
indiferenciada (lo que es un contrasentido ya que ocurre exactamente lo contrario).
Desde un punto de vista bioqumico, hay cambios como aumento de la fluidez y
expresin de nuevos y mas abundantes receptores en la membrana, aumento de
calcio intracelular y cambio de pH citoplasmtico. Adicionalmente aparecen un
elevado nmero de moleculas regulatorias intracelulares, todo lo cual en su conjunto,
permite a la clula sintetizar las protenas involucradas en la respuesta inmune e
iniciar la divisin celular, lo que a su vez, lleva a la expansin clonal.








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Fig. 2. Esquema de una clula en que las flechas indican la va de la activacin
intracelular que dar origen a la sntesis proteica y a la divisin celular.


3.- Interrelaciones celulares que deben tener lugar para que se produzca la respuesta
inmune.
En primer lugar, veamos los requerimientos particulares de activacin de
las clulas inmunocompetentes.


Para que un linfocito T se active se requiere:

a) Que el TCR reconozca al pptido antignico extrao ubicado sobre un antgeno
de histocompatibilidad y reconozca al mismo tiempo el antgeno de
histocompatibilidad.

b) Que las molculas CD-4 o CD-8 de su membrana, reconozcan la molcula de
histocompatibilidad sobre la que est el antgeno (Ver Fig. 3).

c) Que otras glicoprotenas de membrana pertenecientes tanto al linfocito como a la
clula presentadora de antgeno, llamadas moleculas de adhesin, tomen contacto
entre si, haciendo mas estable el contacto TCR-antgeno.

d) Que sea impactado por citoquinas como interleuquin-1 (Il-1), interleuquin 2 (Il-2)








TCR
CD-3 Fosfoli pasa C
Fosfatidil-inocitol
difosfato
IP3 = Ca
DAG = PKC
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Fig. 3. Presentacin del antgeno unido a molculas de histocompatibilidad clase I
y clase II a linfocitos T CD-8+y CD-4+respectivamente.








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Fig.4. Activacin de un linfocito T CD-4+que reconoce el pptido extrao y al
antgeno de Histocompatibilidad clase II, CD-4 reconoce al antgeno de
histocompatibilidad, las molculas de adhesin se unen (ICAM/con LFA-i y
LFA-3 con CD-2) y IL-1 producido por el macrfago impacta a la clula T e IL-
2 producido por la clula T la activa en forma autocrina.








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Para que una clula B se active se requiere:

a) Que las Inmunoglobulinas de membrana reconozcan el antgeno.

b) Que citoquinas como los interleuquinas 4, 5, 6, 10 y 13 (IL-4, IL-5, IL-6, IL-10 e
IL-13) las impacten, es claro que en la activacin IL-4 juega un papel preponderante,
en la proliferacin IL-5 es muy importante y en la diferenciacin IL-6 es crucial.







































Fig. 5: Rol de las diferentes interleuquinas en la activacin , proliferacin y
diferenciacin de la clula B.

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Para que exista una respuesta inmune, no es suficiente que celulas B y T se
activen cada una por su lado. En realidad el antgeno debe activar de distinta forma a las
diferentes clulas que toman parte en la respuesta inmune ; y ms an, el proceso
requiere mltiples seales y cada una producida en el momento preciso para que el
conjunto , en forma armoniosa, termine produciendo los efectores de la respuesta
inmune en su cantidad justa. (es como una orquesta sinfnica, cuyo resultado depende
de lo bien y afiatado que toquen cada uno de sus integrantes).
Cuando un antgeno entra al organismo ocurren diversos eventos, todos
ellos interrelacionados entre si y que se muestra esquemticamente en la figura siguiente
(Fig. 6.).
a.- El antgeno se combina con las Inmunoglobulinas de membrana de las celulas B
capaces de unirse a los determinantes antignicos extraos (se produce la primera seal
para las clulas B). En forma simultnea el antgeno es fagocitado por los macrofagos,
degradado en sus endosomas , este se une a vesiculas del Golgi, donde los pptidos
antignicos tienen la oportunidad de unirse a las molculas de histocompatibilidad clase
2 del citoplasma, las que luego se expresan en la superficie externa de la membrana
celular; (todo este proceso se llama procesamiento del antgeno), que de este modo est
listo para ser presentado a los linfocitos T.

b.- Los linfocitos T helper (CD-3, CD-4 positivos) con receptores capaces de reconocer
los pptidos ubicados sobre el antgeno de histocompatibilidad clase 2 se unen a este, y
simultneamente la molcula CD-4 se une al antgeno de histocompatibilidad que
presenta el pptido extrao. Adicionalmente las molculas de adhesin de la clula
presentadora y el linfocito al entrar en contacto, hacen mas estrecha y firme la unin de
las dos clulas(la clula T ha recibido la primera seal). Al mismo tiempo el macrfago
produce Interleuquin-1 (Il-1) (segunda seal), todo lo cual en su conjunto hace posible
la activacin de la celula T.

c.- Los linfocitos T helper activados producen receptores de membrana para
interleuquin -2 ( Il-2R ) e interleuquin-2 (Il-2), lo cual ayuda a la expansin clonal de
estas celulas T helper.

d.- Los clones T helper producen seales positivas para las clulas B cuyos receptores
se han unido con el antgeno previamente (segunda seal). Estas seales estan mediadas
por los interleuquines 4, 5, 6, 10 y 13 ( Il-4, Il-5, Il-6, Il-10 y 13).

e.- Los clones T helper producen seales positivas para las clulas T efectoras que se
estan activando en ese instante, consistente en Il-2, Factor de necrosis tumoral (TNF) e
interferon gama (IFN-).

f.- Las clulas B que recibieron la primera y segunda seal se activan, proliferan y
comienzan a producir Igs con la misma especificidad de su receptor, algunas de ellas
terminan transformadas en clulas plasmticas y otras se quedan como clulas B de
memoria (respuesta inmune humoral ).

g.- En forma simultnea a todos estos procesos, los linfocitos T efectores de la
respuesta inmune celular reconocen el antgeno: las clulas pre-citotxicas (CD-3, CD-
8) unido amolculas de histocompatibilidad clase 1 y las clulas de hipersensibilidad
retardada (CD-3, CD-4) que reconocen al antgeno igual que las clulas helper unido
a antgeno de histocompatibilidad clase 2.
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Como el antgeno de histocompatibilidad clase 1, se encuentra en
prcticamente todas las clulas del organismo, todas ellas pueden presentar antgeno
extrao a las clulas pre-citotxicas, y posteriormente las clulas citotxicas derivadas
de ellas pueden interactuar con cualquiera de estas clulas presentadoras para ejercer
su funcin efectora. En ambos casos, el TCR reconoce al pptido antignico ms el
antgeno de histocompatibilidad y la molecula CD-8 que tambin se une al antgeno de
histocompatibilidad clase 1, la clula T en este caso completa los requisitos de
activacin y replicacin con las seales positivas que vienen de las clulas T helper.

En el caso de las clulas T de hipersensibilidad retardada reconocen al
antgeno por medio de su TCR y la molecula CD-4 se une a molculas de
histocompatibilidad clase 2 , cumplido este requisito bsico para la activacin , debe
recibir las seales positivas que vienen de la clula T helper (para las clulas de
hipersensibilidad retardada estas seales son mucho menos importantes que para las
clulas T precitotxicas y citotxicas).1







Fig. 6. Eventos celulares que dan origen a la respuesta inmune humoral y a la respuesta
celular.



Respuesta Inmune Celular de
Hipersensibilidad Retardada
linfocitos
TH-2

IL-

APC
IL-

W
.
Linfocitos T
Hipersens.
retardada
.
CD-

T CD-

(THo

W
AP

IL-

Antgen

) ) )
Respuesta humoral
Respuesta Celular
T
Precitotxic

CD-

.
CD

IL-4
IL-5
IL-6
IL-10
IL 13
IL-2
IFN-


IL-

B
Clula

+
+
Cel. T

linfocitos
TH-1
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EFECTORES DE LA RESPUESTA INMUNE.

Los elementos efectores de la respuesta inmune tanto celular como
humoral, cambian en calidad y cantidad a medida que transcurre el tiempo de la
respuesta. Estos cambios son mas claros en la respuesta inmune humoral que en la
celular. Veamos los cambios que se producen en la respuesta humoral:
En la respuesta inmune primaria aparece primero la IgM y luego la IgG,
acompaada esta ltima de IgE e IgA en cantidades pequeas y siempre variables, en
la respuesta inmune secundaria, que como ya vimos anteriormente no tiene perodo de
latencia, siempre se produce IgM, pero la gran masa de anticuerpos esta dada por la
IgG que dependiendo de los mecanismos de regulacin va a estar acompaada, como
en el caso de la respuesta primaria de cantidades variables de IgE e IgA.
Adicionalmente podemos decir que a medida que transcurre la respuesta
inmune los anticuerpos mejoran su afinidad por el antgeno.

Por otro lado, si aceptamos que toda respuesta inmune tiene produccin de
efectores celulares y humorales en diferentes proporciones, puede darse el caso que
una respuesta que empez siendo predominantemente humoral, termine siendo
humoral o vice-versa (esto depende de las seales positivas enviadas por la clula T
helper).

Los anticuerpos defienden al organismo de dos maneras: una forma directa
y una forma indirecta. Cuando acta en forma directa, el anticuerpo trabaja
neutralizando al antgeno (en el caso de una toxina cuyo sitio activo puede ser
"tapado" por el anticuerpo correspondiente, ocurre tambin en microorganismos como
virus o bacterias que para penetrar a las clulas del husped requieren adherirse a su
membrana celular por medio de molculas especializadas, si estas molculas son
neutralizadas por el anticuerpo, el proceso de invasin se dificulta). Cuando el
anticuerpo acta en forma indirecta lo hace desencadenando sobre el antgeno
mecanismos de defensa inespecficos como aumento de la fagocitosis y la activacin
del sistema del complemento (el aumento de la fagocitosis se obtiene cuando los
anticuerpos se unen al antgeno y lo opsonizan , el complemento activado por un lado
induce poros en la clula extraa y por otro genera fracciones, que como lo veremos
mas tarde en detalle, inducen inflamacin.

La respuesta inmune celular, es mas difcil de cuantificar, pero tambin en
ella se puede observar una respuesta primaria y una secundaria, dicho de otra forma,
deja "memoria". Como hemos dicho anteriormente, los efectores de la respuesta
inmune celular, son las clulas de hipersensibilidad retardada (CD-3,CD-4) y las
clulas citotxicas (CD-3, CD-8), las clulas de hipersensibilidad retardada defienden
al organismo, tambin en forma indirecta, esto lo hacen, despus de ser activadas por
el antgeno liberando linfoquinas que atraen otras clulas linfoides y macrofgicas las
que promueven inflamacin destinada a eliminar al antgeno. Las clulas citotxicas
en cambio realizan su trabajo defensivo, eliminando a las clulas propias que se
encuentran infectadas. Para lograr esto, stas deben reconocer elementos antignicos
extraos presentados por la clula infectada en contexto de los antgenos de
histocompatibilidad clase 1, efectuado este reconocimiento, la clula citotxica
elimina a la clula infectada formando "poros" en su membrana o induciendo en ella el
fenmeno de apoptosis que termina con la desintegracin del DNA nuclear.

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MECANISMOS REGULADORES DE LA RESPUESTA INMUNE.

Es importante que la respuesta sea regulada a un cierto nivel?. La
respuesta a esta pregunta es SI. Veamos: tericamente una respuesta puede ser
normal, aumentada en forma patolgica o tan pequea que sea incapaz de eliminar el
antgeno (en el caso del ataque de microorganismos es especialmente importante).



















Cuando la respuesta es excesiva se genera dao tisular, aqu se engloban
las patologas que caen en la esfera de las hipersensibilidades.

Cuando la respuesta es muy pequea, esta no es capaz de eliminar el
antgeno, es especialmente grave cuando el antgeno es un microorganismo capaz de
replicarse y est causando una infeccin.

Por lo tanto slo una respuesta inmune dimensionada al estmulo antignico
es favorable y ptima para el organismo.

Cmo se regula la respuesta inmune?: La complejidad del problema hace
que cualquier respuesta sea incompleta pero si tratamos de simplificar el problema, este
depende por una parte del ANTIGENO como elemento regulador y del HUESPED
RESPONDEDOR con sus mecanismos de regulacin en accin.


EL ANTIGENO COMO REGULADOR DE LA RESPUESTA INMUNE.

La respuesta inmune variar segn se trate de si el inmungeno es:
a) Vivo o muerto: Cuando el antgeno es un microorganismo vivo, este se reproduce en
el interior del organismo y puede liberar productos metablicos que a su vez
multiplican por muchas veces la cantidad de antgeno que penetr al organismo, si es
el antgeno es un microorganismo muerto o una molcula inerte, esto no ocurrir.
Respuesta exagerada
Respuesta normal
Respuesta insuficiente
Tiempo
R
e
s
p
.

I
n
m
u
n
e
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b) Particulado o soluble: en el caso del antgeno particulado, este ser ms fcilmente
fagocitado y procesado por las clulas macrofgicas y la respuesta es generalmente
mejor que en el caso del antgeno soluble.
c) Solo o acompaado de substancias coadyuvantes: en este ltimo caso, cuando el
antgeno se acompaa con algn adyuvante (sustancia que aumenta la respuesta
inmune) la respuesta esperada es mucho mayor.
d) Cantidad del antgeno: dosis subptimas pueden producir tolerancia inmunolgica,
dosis muy elevadas parlisis inmunolgica, en ambos casos extremos tendremos una
respuesta pobre o no tendremos respuesta.
e) Ruta de inyeccin del antgeno: el rgano linfoide que sea primero impactado tiene
importancia en el monto y calidad de la respuesta inmune. La va endovenosa, en que
el antgeno impacta primero al bazo no es tan buena como la subcutnea que va a
impactar a los ganglios linfticos regionales, o la intracutnea en que el antgeno ser
procesado por las clulas de Langerhans y estas lo llevan a los ganglios regionales.
f) Estructura qumica del antgeno: protenas como hemos visto inducen una mejor
respuesta que hidratos de carbono.
g) Similitud con estructuras propias: es probable que un caballo responda mejor a la
albmina de conejo comparada con la respuesta que pueda producir contra albmina
de la cebra.


MECANISMOS REGULADORES DEL HUESPED RESPONDEDOR.

Los podemos dividir en:
Regulacin Humoral
Regulacin Celular
Regulacin Gentica
Regulacin Neuroendocrina

a) Regulacin Humoral: Se refiere a las molculas que podemos encontrar en el plasma
y a sus interacciones:
* Los anticuerpos son reguladores de por s, especialmente fragmentos derivados de
la porcin Fc de estas molculas. Ha podido ser demostrado que la IgG o mejor
dicho fragmentos de su Fc suprimen la produccin de nuevas molculas de
anticuerpo, mientras la IgM tiene una funcin totalmente opuesta aumentando la
respuesta inmune.


* En circulacin existen adems un sinnmero de otras molculas con actividad
regulatoria muchas de ellas provenientes de las clulas T y producto de otras
respuestas inmunes anteriores.


* La red Idiotipo-antiidiotipo juega un papel importante en la regulacin, para
entenderlo primero definamos IDIOTIPO: Idiotipo es la antigenicidad de la parte
variable de las inmunoglobulinas. Esto se explica porque si bien cada individuo es
tolerante a sus protenas, includas las Igs, no lo es para la parte variable de estas
molculas, ya que estn solo como receptor en algunas clulas B. Cuando se
produce una respuesta inmune y los anticuerpos dirigidos a un determinado eptope
aumentan miles de millones de veces, el sistema linfoide percibe esta secuencia
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variable que haba pasado desapecibida tanto de las cadenas pesadas (H) como
livianas (L) y produce anticuerpos contra ellos: Los anticuerpos anti-idiotipo.

Los anticuerpos antiidiotipo estn destinados a eliminar a los anticuerpos
sobrantes despus que estos ya hayan eliminado el antgeno. Si inyectamos el antgeno
X se producen anticuerpos anti-X (Ac 1), los anticuerpos anti X sobrantes inducen la
formacin de anticuerpos anti-idiotipo (Ac 2), si despus de eliminar al primer Ac,
sobran los anticuerpos anti-idiotipo la parte variable de estos ltimos inducen la
formacin de anticuerpos anti-anti idiotipo (Ac 3) y as puede seguir originando
anticuerpos anti-anti-anti idiotipo (Ac 4) y as sucesivamente hasta que la cadena de
respuestas muere enrrollada en si misma.

b) Regulacin celular de la respuesta inmune: Est dada por el balance de dos sistemas
celulares T:
Clulas T helper Vs Clulas T supresoras.
Clulas helper TH-1 Vs Clulas helper TH-2.

Las clulas helper como su nombre lo indica son las ayudadoras del
sistema (recordemos que son las clulas T reguladoras CD-4 positivas), productoras de
linfoquinas que tienden, cuando son producidas en concentraciones adecuadas a
aumentar la respuesta tanto celular (TH-1) como humoral (TH-2). La contraparte a
estas clulas helper son las clulas supresoras (clulas T reguladoras CD-8 positivas)
que tienden a suprimir la respuesta inmune y a las clulas helper. Del balance de estas
dos poblaciones se origina una respuesta inmune armnica.
Las clulas T helper pueden favorecer a la respuesta inmune celular (Th-1) o
a la respuesta inmune humoral (TH-2). Estos dos tipos de clulas ejercen su accin
secretando diferentes tipos de linfoquinas (Tipo TH-1: IFN-, IL-2, TNF o tipo TH-2:
IL-4, IL-5, IL-6, IL-10 e IL-13). El grupo TH-1 antagoniza y trata de suprimir la
secrecin y accin del grupo TH-2 y vice versa. Del tipo de clula helper que
predomine en una determinada respuesta tendremos una respuesta inmune celular (TH-
1) o humoral (TH-2).

c) Regulacin gentica de la respuesta inmune: La posibilidad de que las clulas T
respondan frente a un antgeno, depende de dos factores genticos:

Que el antgeno pueda ser presentado por los macrfagos.
Que la clula T tenga receptores que reconozcan el pptido.

En el primer caso pudiera ser que la estructura del bolsillo o mejor los
bolsillos del antgeno de histocompatibilidad clase II de un determinado individuo sea
incapaz de aceptar el pptido extrao y presentarlo a la clula T helper, en este caso no
habr respuesta. Tambin puede ocurrir lo contrario, que el antgeno de
histocompatibilidad tenga gran afinidad por un determinado pptido, entonces
tendremos una respuesta inmune elevada genticamente condicionada, porque el
individuo es un presentador muy eficiente de ese antgeno.

La otra posibilidad es que existan individuos o familias de individuos
malos respondedores por tener pocos receptores en sus clulas T para ese antgeno en
particular (esta ltima posibilidad no tiene tantos adeptos como la primera). Ac se
habla de hoyos en el repertorio.
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d) Regulacin neuroendocrina de la respuesta inmune.
Es cada da ms evidente que existe una importante interdependencia entre
el sistema nervioso y el sistema inmunolgico. Esto, en la prctica es muy fcil de
comprobar: los hombres o animales sometidos a stress son fcil presa de enfermedades
infecciosas y su causa no es otra que una baja en las defensas inmunolgicas, ejemplos
hay muchos: la respuesta inmune deficiente de los atletas en las olimpiadas, de alumnos
dando exmenes, de personas que cuidan parientes en estado terminal o en los animales
la fiebre de embarque que se produce durante el transporte de ganado y el aumento de
infecciones en las jaulas de salmones cuando se ven estresados por depredadores o por
el manejo inadecuado del hombre, etc.

Este fenmeno se explica porque productos del sistema neuro-endocrino
tiene influencia directa sobre los componentes linfoides: Los corticoides endgenos
cuya secrecin es inducida por el stress deprime la respuesta inmune, igual cosa ocurre
con las hormonas masculinas, en cambio las hormonas de la tiroides y pncreas tienden
a elevarla. Los neuropptidos de origen estrictamente nervioso tambin se ha visto que
influyen en el comportamiento de los linfocitos en el momento de responder a un
antgeno. Por otro lado, productos del sistema inmune pueden afectar al sistema neuro-
endocrino o inducir en l secrecin de algunos productos, el ejemplo ms claro es el del
IL-1 que induce fiebre mediante la alteacin del centro que controla la temperatura
corporal y la secrecin de corticosterona que a su vez deprime como ya dijimos al
sistema inmune.

La base de esta interdependencia est dada por la existencia en los linfocitos
de receptores para casi todos los neuropptidos y hormonas estudiados adems de su
capacidad para secretarlas en pequeas cantidades. En el sistema nervioso central por
otro lado se secretan substancias que hace poco se crea que slo podan ser producidas
por linfocitos, ms an, se ha demostrado la existencia de receptores en la membrana de
las clulas nerviosas para estas linfoquinas.





















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SISTEMA DEL COMPLEMENTO


El sistema del Complemento es un sistema efector altamente eficiente y que
cumple una funcin defensiva del organismo en presencia o ausencia de anticuerpos.

Para ello, se establecen mecanismos de activacin que tienen por finalidad
generar tres grupos de protenas encargadas de cumplir tres funciones fundamentales:
lisis celular, inflamacin y opsonizacin.

Este sistema est integrado por protenas que estn normalmente en la
sangre y por lo tanto ampliamente distribuidas en el organismo. Estas protenas reciben
el nombre genrico de fracciones.

Las fracciones del complemento son producidas bsicamente en el hgado,
pero tambin en macrfagos, monocitos, polimorfonucleares y otras clulas.

Una caracterstica fundamental de este sistema es que algunas de sus
fracciones pueden adquirir un carcter enzimtico. Normalmente circulan en un estado
inactivo o de pro-enzima y que para poder actuar necesitan activarse. Al activarse
adquieren el carcter de una enzima cuyo sustrato es otra fraccin del complemento.
As progresa el proceso de activacin hasta llegar a sus etapas finales.

I. PROCESO DE LISIS CELULAR.

Las formas de activacin pueden resumirse en 3 vas:
A. Va clsica.
B. Va de las lectinas
C. Va alterna.


A. VA CLSICA.

Est integrada por 9 fracciones que se denominan por una letra C seguida de
un nmero de orden: C1, C2, C3....C9.

C1. La fraccin C1 es un complejo de 3 subfracciones llamadas C1q, C1r y
C1s. Esta es llamada la unidad de reconocimiento de la va clsica.

La subfraccin C1q est formada de 3 unidades en forma de Y, en que se
destaca una porcin fibrilar donde existe unin covalente de las unidades y una porcin
globular que contiene el sitio de unin al anticuerpo (C1q tiene 6).

Para que C1 se active es necesario que exista una reaccin antgeno-
anticuerpo en que participe IgG o IgM. Esta reaccin hace que el anticuerpo cambie
espacialmente y exponga a nivel de CH2 (IgG) o CH3 (IgM) los sitios de combinacin a
C1q. Al menos dos porciones globulares de C1q deben unirse a Fc prximos para
poder activarse. La estructura de C1q permite flexibilidad para acomodarse a las
distancias que pueden tener los fragmentos Fc. En este sentido, IgM es un ms eficiente
activador del C; al ser pentmero ya existen ms de dos Fc en una sola molcula.
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La activacin de C1q (gatillada por la unin al Fc) trae como consecuencia
la activacin de C1r y luego de C1s se traduce en que esta fraccin adquiere carcter
enzimtico, siendo C1s la porcin con carcter de proteasa.

El siguiente paso es que C1s acta sobre C4 y C2 secuencialmente. La
accin sobre C4 se traduce en una fragmentacin de la molcula en un pptido pequeo
llamado C4a que se libera al medio y una porcin mayor que se llama C4b. C4b tiene la
propiedad de unirse a diferentes sitios de la membrana celular y como C1s tiene la
propiedad de actuar sobre muchas molculas de C4, muchas fracciones C4b pueden
unirse a la membrana.

Por otra parte, C1s tambin tiene como sustrato a C2, generando por esa
accin catablica un pptido pequeo llamado C2a y una porcin ms grande llamada
C2b. C2b es capaz de unirse a la molcula de C4b que ya estaba unida a mltiples
receptores de membrana, en los alrededores de C1 que inici el proceso.

Se forma as un complejo C4b2b que tiene accin cataltica sobre C3,
denominndose por ello C3 convertasa de la va clsica. La porcin cataltica de
C4b2b, reside en C2b, que acta sobre C3 generando una fragmentacin de la molcula
en C3a, pptido que se libera al medio y C3b que tiene varias posibilidades de accin.

a) Puede unirse al complejo C4b,2b generando C4b,2b,3b lo que se denomina C5
convertasa de la va clsica ya que el sustrato de ella es la fraccin C5.
b) Puede unirse a otros puntos en la membrana generando un fuerte estmulo a la
fagocitosis (opsonizacin).
c) Puede unirse a receptores de membrana de otras clulas vecinas, generando posibles
puntos de ataque a la membrana o favoreciendo la fagocitosis.
d) Puede aportar molculas de C3b que participan en la va alterna (ver ms adelante).

Cuando se genera C4b,2b,3b tenemos la posibilidad de actuar sobre C5. La
porcin cataltica de la C5 convertasa es C2b y genera C5a y C5b al igual que con las
fracciones anteriores. C5b tiene la propiedad de unirse a la membrana y esa unin
posibilita que C6 y C7 se unan a ella generando en la membrana el complejo C5b,6,7.
A continuacin se agrega la molcula C8 que se introduce profundamente en la
membrana generando ya un dao evidente. Sin embargo, la adicin de n molculas
de C9 (12-15) genera un poro que se inserta profundamente en la membrana
produciendo un desequilibrio hidro-electroltico (salida de K, entrada de Na) que
termina con la destruccin o lisis de las clulas.

Esta actividad final C5b,6,7,8,9 corresponde al complejo de ataque de
membrana (CAM) siendo en ella C8 y C9 las unidades verdaderamente lticas. Cabe
destacar adems que a partir de C5b, ya no hay accin enzimtica en el proceso de
formacin del CAM (Ver Fig. 2.).







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Fig. 1. Visin esquemtica del proceso de activacin del C por la va clsica. La
generacin de anafilotoxinas posibilita una potente accin inflamatoria; la
incorporacin de C3b a la superficie celular opsoniza fuertemente a una
clula y la generacin del CAM genera lisis celular.

Es interesante destacar, adems, que en este proceso se produce una
amplificacin notable y que se deriva de la accin de C1 sobre n C4 y C2 y de C2b
que acta sobre n molculas de C3 y C5. De esta manera a partir de un solo punto de
activacin se pueden lograr miles de fracciones unidas a la membrana y que representan
potenciales puntos de ataque a ella. Cabe destacar que los puntos de amplificacin
corresponden a aquellos donde hay accin enzimtica y que sta reside slo en C1s y
C2b en la va clsica.

B. VA DE LAS LECTINAS.

Esta es una forma de activacin en que no es necesaria la presencia de
anticuerpos. En su esencia, es muy similar a la va clsica y slo se diferencia en el
origen del proceso de activacin.
El ingreso de bacterias al organismo, induce un proceso de fagocitosis por
parte de los macrfagos. Como resultado, el macrfago produce IL-1, IL-6, TNFa que
impactan al hgado, rgano que produce protenas de fase aguda. Entre ellas tenemos
Protena ligante de manosa (MBP).

Las molculas de MBP se unen entonces a residuos de manosa ubicados en
la superficie de las bacterias. Esta unin hace posible que un complejo pro-enzimtico
(dos molculas) llamado MASP
2
(Serine proteasa ligado a MBP) se una al complejo
manosa-MBP generando entonces MBP-MASP
2
. Esta ltima, estructural y
funcionalmente es muy similar a C1 en que MBP es el equivalente a C1q y MASP
2
a
C1r y C1s.
Complejo Ag-Ac
Bacteria
IgG - IgM
C1q, r
2
, s
2
C4a


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En estas condiciones el complejo adquiere carcter enzimtico, va MASP
2
,
ejerciendo su accin proteoltica sobre C4 y C2 en forma similar a la accin de C1s.
Esta accin genera C4a-C4b y C2a-C2b progresando desde aqu el proceso de
activacin y secuencia en forma exactamente igual a los visto para la va clsica (Fig.
2).

Fig.2. Va de las lectinas de activacin del Complemento.


C. VA ALTERNA.

Una tercera forma de activacin, en la cual tampoco se requiere la presencia
de anticuerpos, est representada por esta va que, por sus caractersticas, es una forma
ms primitiva de defensa.

Esta va se inicia con la unin de C3 activado a la superficie de bacterias,
por ejemplo. Este, puede provenir bsicamente de dos fuentes: C3b de la va clsica o
C3(H2O), que se produce cuando el enlace interno tiolester sufre hidrlisis espontnea
generndose un enlace altamente reactivo sin produccin de C3a. La molcula de
C3(H2O) al encontrar una superficie bacteriana se une a los radicales correspondientes
por el enlace tiolster. De no ocurrir esto, es rpidamente inactivado. Habra as un
mecanismo de on off, que mantiene un alerta permanente. As, se hace posible que
C3b o C3(H2O) pueda unirse a la superficie de la bacteria (ambos son funcionalmente
similares) y abre la posibilidad que otra protena llamada factor B pueda unirse
formando el complejo C3(H2O)B. Esta unin genera un cambio estrico en el factor B
hacindolo susceptible a la accin enzimtica de una proteasa llamada Factor D. Esta
fraccin del C, circula en muy baja concentracin y se acepta que est permanentemente
activada.
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La accin proteoltica de D fracciona la molcula en un pptido pequeo
llamado Ba que es liberado al medio y Bb que permanece unido a C3(H2O). Este
complejo es inestable y la incorporacin de properdina le da la estabilidad necesaria. Se
genera as el complejo C3(H2O)Bb que tiene como sustrato a C3, llamndose por ello
C3 convertasa de la va alterna. Este complejo tiene en Bb su sitio cataltico que acta
sobre C3 generando C3a y C3b. C3b se une al complejo sobre la membrana, generando
C3(H2O)Bb3b llamado C5 convertasa de la va alterna por tener como sustrato a C5.
La accin enzimtica es ejercida por Bb y genera C5a y C5b. C5b tiene capacidad de
unirse a membranas y a partir de este punto el sistema progresa igual que en la va
clsica.































Fig. 3. Activacin del complemento por la va alterna. Ba, 3a y 5a son potentes agentes
inflamatorios. C3b opsoniza y el CAM produce lisis.




Bacteria (Ag)
C3 (H2O)
C3b
Bacteria - C3 (H2O)
Factor B
C3 (H2O) B
Factor D
Ba
C3(H20)Bb
Properdina
C3 (H2O)Bb C3 Convertasa Complejo estabilizado
C3
C3a
C5Convertasa C3(H20)Bb, 3b
C5 C5a
C5b,6,7,8,9 Complejo de Ataque de Membrana
Lisis
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II. PROCESO INFLAMATORIO.

Los pptidos pequeos que derivan de la accin proteoltica sobre algunas
fracciones (llamadas a) son colectivamente denominadas anafilotoxinas. De stas, la
ms potente es C5a, en realidad es algunas miles de veces ms activa.

Uno de los roles es actuar como quimiotctico para polimorfonucleares y
tambin como factor promotor de liberacin desde la mdula sea. Adems inducen
molculas de adhesin en endotelio que permite saber a los neutrfilos donde tienen
que abandonar el torrente sanguneo mediante diapedesis, previo proceso de
marginacin.

Por otra parte C5a es capaz de degranular clulas cebadas que liberan
aminas vasoactivas que tiene accin en aumentar la permeabilidad vascular y contraer la
musculatura lisa.

Se genera as un proceso en que se aumenta la permeabilidad vascular en el
sitio de activacin del C, que permite mayor salida de PMN, macrfagos, anticuerpos y
complemento. Por otra parte C5a acta como un activador directo de la actividad de
PMN, lo que aumenta su eficacia fagoctica.

Esto corresponde a un segundo frente de batalla, que tiende a aislar y atacar
directamente al elemento agresor, lo que se agrega a la secuencia de acciones que
conduce a la lisis o destruccin de las bacterias extraas.


III. PROCESO DE OPSONIZACION.

La opsonizacin es el proceso por el cual un antgeno es recubierto con
anticuerpos o complemento (con este propsito se llaman opsoninas) lo que hace al
antgeno ms fcilmente fagocitado. La unin de anticuerpos IgG al antgeno lo hace
susceptible a clulas que tienen receptores para la porcin Fc de IgG (CD 16):
neutrfilos y macrfagos. Sin embargo, este proceso es relativamente ineficiente, pero
que se hace altamente eficiente al agregar C3b, ya que lo hace, adems, susceptible a
unirse por el receptor CD35 de macrfagos y neutrfilos.


REGULACIN.

En un sistema como el descrito es extremadamente importante contar con un
eficiente sistema de control, sobre todo considerando que se generan mediadores de
dao que pueden afectar al resto del organismo. Existen tres mecanismos para este fin:

a) Una gran cantidad de los componentes activados son inestables. Si el sustrato
siguiente no est inmediatamente disponible la fraccin activa pierde actividad muy
rpidamente.
b) Existe un nmero de inactivadores especficos para algunas fracciones.
c) Existen en las clulas del organismo protenas de membrana que aceleran
notablemente el catabolismo de los componentes activos del complemento.

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Estos mecanismos aseguran que los efectos potencialmente dainos de la
activacin del complemento queden confinados al antgeno (clula o bacteria) que inici
el proceso, sin daar otras clulas.















































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MECANISMOS INESPECIFICOS DE DEFENSA


Todas las especies animales son resistentes a muchos de los agentes
patgenos que se encuentran en el medio ambiente en ausencia de respuesta inmune
especfica. Por otra parte, dentro de una misma especie la susceptibilidad o resistencia a
determinados agentes patgenos puede variar de modo considerable de un individuo a
otro.

Estos mecanismos de resistencia se conocen con el nombre de barreras
inespecficas de defensa (inmunidad natural) y dependen en gran medida de la
condicin gentica del individuo como son por ejemplo: la Inmunidad de especie y la
Inmunidad racial. En estos casos, existe una serie de factores controlados
genticamente que predisponen a las especies animales y a ciertos grupos raciales a
sufrir determinadas infecciones, con mayor frecuencia o en grados de mayor gravedad.


BARRERAS FISICOQUIMICAS

Piel: La piel normal es la barrera mecnica ms importante contra los agentes
patgenos. Son varios los factores responsables de esta capacidad de proteccin Ej. El
ph cido (5-6) la descamacin y los cidos grasos

Mucosas: De acuerdo al segmento anatmico corresponden a clulas altamente
especializadas productoras de mucus.

Mucosa del rbol respiratorio: En la traquea, el epitelio cilndrico ciliado
seudoestratificado con clulas caliciformes es una importante barrera de defensa.
Adems, en las secreciones la lisozima que tiene capacidad bactericida refuerza el
poder protector de la mucosa.

Mucosa del tracto gastrointestinal: El pH cido del estomago, el peristaltismo y la
flora (microbiota) comensal del intestino.

Mucosa del tracto gnito urinario: El principal mecanismo de defensa del tracto
urinario es la accin mecnica de la orina. Por otra parte, la secrecin de glucgeno
de la vagina es transformada por la microbiota en cido lctico disminuyendo el pH
del medio.

BARRERAS CELULARES
Estn dadas bsicamente por la accin de los neutrfilos, macrfagos y
clulas NK

Neutrfilos: Constituye la primera barrera de defensa celular en el proceso de
inflamacin aguda. La principal funcin del neutrfilo es la captura y destruccin del
material extrao a travs de la fagocitosis. Aunque este es un proceso continuo, se
puede dividir en cuatro etapas: quimiotaxis, adherencia, ingestin y digestin o
destruccin (figura 1).


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Figura 1. Etapas del proceso de fagocitosis


El mecanismo de accin para destruir los grmenes se lleva a cabo de dos
maneras:

Dependiente del oxgeno: Es debido al estallido respiratorio que lleva a la
formacin de radicales libres producto del metabolismo del oxgeno (anin
superxido, perxido de hidrogeno, radical hidroxilo, cido hipocloroso)

No dependiente del oxgeno: Enzimas lisosomales tales como: lisozima,
colagenasa lactoferrina en grnulos secundarios y lisozima, protenas catinicas,
hidrolasas cidas y neutras en grnulos primarios.


Macrfagos: Estas clulas conforman el llamado Sistema fagoctico mononuclear
el que estcompuesto de:

Macrfagos de las serosas
Macrfagos Alveolares en el pulmn
Clulas de Kffer en el hgado
Macrfagos Mesangiales en el rin
Clulas de microglia en el cerebro
Macrfagos del bazo
Macrfagos de los ndulos linfticos

El mecanismo de accin mediante la fagocitosis es similar al del neutrfilo,
sin embargo, el estallido respiratorio es menos intenso y en su interior contienen
catalaza en vez de mieloperoxidasa.

Quimiotaxi

Adherencia
Ingestin
Digestin
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Los macrfagos para ejercer su accin necesitan ser activados (estimulo
inflamatorio, interferones y productos bacterianos) esto lleva a un incremento de:
Tamao
Enzimas lisosomales
Receptores de membrana
Fagocitosis
Actividad bactericida
Expresin de molculas clase II del CMH

Clulas Natural Killer (NK): Son clulas linfoides asesinas naturales (no
T, no B) cuyo marcador caracterstico es el CD56 presentando tambin el CD16. Son
clulas citotxicas y su accin la llevan a cabo mediante grnulos con perforinas, que
son pequeos pptidos que se insertan en la membrana de la clula blanco paras
producir poros y lisis. Por otra parte, la clula NK puede producir muerte de la clula
blanco por fragmentacin nuclear (Apptosis) inducida por ATP ionizado el cual
produce un imbalance inico

Estas clulas son capaces de matar clulas tumorales y clulas infectadas
por virus.

FACTORES HUMORALES DE DEFENSA

Complemento: Complejo sistema de enzimas ligadas y protenas aglutinantes que se
activan por diversos factores. La va alterna y la va de las lectinas son activadas en
ausencia de una reaccin antgeno anticuerpo, su activacin produce variadas
consecuencias biolgicas como lisis de membranas y opsonizacin.

Protenas de fase aguda: Son protenas sintetizadas por el hgado cuya concentracin
srica se eleva rpidamente en respuesta a inflamacin aguda y dao tisular. Entre ellas
se encuentra el amiloide srico A y la protena C reactiva, esta ltima favorece la
fagocitosis. Otras proteinas de fase aguda son: el fibrinogeno, la ceruloplasmina y la
haptoglobina.

Protenas que activan complemento: entre ellas estn la Protena que fijan manosa
(la manosa se encuentra unida a microorganismos) . En la especie bovina se describe la
Conglutinina la cual corresponde a una lectina que fija manosa y que tambin puede
unirse a C3b.

Interfern: Son una familia de glucoprotenas que se clasifican en interfern alfa, beta
y gama. En general la accin de los interferones es:

Aumentar la expresin de molculas clase I y Clase II lo que facilita el
reconocimiento de los antgenos virales por parte del sistema inmune.
Activacin de clulas NK y macrfagos.
Impedir la replicacin viral.
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Interacciones entre los mecanismos inespecificos de defensa y la inmunidad
especifica

Las barreras fsicas constituidas por tegumentos son reforzadas por los anticuerpos
(IgA en las mucosas, IgG en los tejidos).
El sistema de complemento es activado por la IgG y la IgM.
Las protenas de fase aguda activan el complemento.
Las inmunoglobulinas (IgG) se unen al antgeno extrao opsonizndolo que al
unirse a receptores para el Fc de macrfagos optimizan la fagocitosis.
La activacin del complemento por la va clsica genera C3b que opsoniza el
complejo favoreciendo la fagocitosis.
La IgE unida por su Fc a clulas cebadas y basfilos puede contribuir a la
degranulacin de ellas.

Las linfoquinas liberadas por las clulas T de hipersensibilidad retardada
atraen, inmovilizan y activan macrfagos.


































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DESARROLLO DE INMUNIDAD A LAS INFECCIONES


Los agentes infecciosos (virus, bacterias, hongos y parsitos) poseen una
gran complejidad antignica y son capaces de ejercer diversas interacciones con los
hospedadores que infectan, sin embargo, existen ciertas caractersticas de la respuesta
defensiva que son comunes a cualquier agente infeccioso:
La respuesta siempre est mediada por los mecanismos inespecficos de defensa y
por la respuesta especifica (Respuesta inmune).
La respuesta est mediada por distintos mecanismos efectores de inmunidad
especifica (Celular y Humoral).
Los agentes infecciosos en su evolucin han desarrollado una variedad de
mecanismos de evasin de la respuesta inmune.
El dao final al husped puede ser ocasionado por el poder patgeno del agente
infeccioso, como por la respuesta inmune del hospedero (Hipersensibilidad)


MECANISMOS DE DEFENSA CONTRA LA INFECCIN VIRAL

Los virus son microorganismos constituidas por cido nucleico y protenas,
algunos poseen adems una envoltura o membrana lipdica. Entran a la clula unindose
a receptores celulares, son internalizados por fagocitosis o fusin de membranas y
liberan su cubierta proteica permitiendo que el genoma viral se replique y exprese
utilizando la maquinaria bioqumica de la clula husped.

La infeccin viral puede llevar a lisis y muerte celular o bien quedar en
estado de latencia.

La inmunidad contra virus opera en dos etapas:
Antes de la entrada a la clula (extracelular)
Despus de la penetracin (intracelular)

Defensas antivirales inespecficas. Estn desarrolladas por clulas y mecanismos que
no necesitan de la respuesta inmune para ejercer su accin:

Produccin de interfern alfa y beta
Este tipo de interfern acta impidiendo la replicacin viral

Clulas NK
Las clulas infectadas por virus son reconocidas y destruidas por la accin citotxica de
las clulas NK

Activacin de complemento y fagocitosis
La va alterna lleva a lisis o a la opsonizacin por C3b favoreciendo la fagocitosis






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Inmunidad especifica a los virus

Est dada por una combinacin de la respuesta humoral y celular lo cual
depende del estado de la infeccin:
En la respuesta humoral, los anticuerpos
Neutralizan los virus
Opsonizan los virus favoreciendo la fagocitosis
Activan complemento pudiendo provocar la lisis de virus con membranas
lipdicas o lisis de clula infectada con virus.

La respuesta celular est dada por respuesta inmune celular por clulas T
citotxicas (CD8) que reconocen la clula infectada por el virus como una clula
extraa.

Mecanismos de evasin de la respuesta inmune
Persistencia intra celular
Variacin antignica
Interferencia con la presentacin antignica
Inmunosupresin


RESPUESTA INMUNE A BACTERIAS

Las bacterias son organismos procariontes unicelulares que se multiplican
por divisin binaria. Del punto de vista inmunolgico la efectividad de la respuesta
depende de los componentes de la pared bacteriana.

Se pueden definir cuatro tipos bsicos de pared bacteriana
1. Gram (+) : Tienen membrana y pared celular.
2. Gram (-) : tienen membrana, pared celular y bicapa lipdica externa con LPS.
3. Micobacterias : Poseen una pared muy resistente con cidos miclicos y arabino
galactano.
4. Espiroquetas: Poseen una pared con filamentos axiales que le otorgan movilidad.

Adems, en algunas especies la superficie externa de la bacteria puede contener
fimbrias y flagelos o estar cubierta por una cpsula, todas estas estructura son de
importancia antignica.


Inmunidad frente a bacterias extracelulares.

Pueden ser Gram (+) o Gram (-) y la enfermedad la pueden causar por
destruccin tisular o por produccin de toxinas (endo o exotoxinas).







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En general la defensa contra las bacterias esta dada por:
Anticuerpos que neutralizan enzimas y toxinas
Anticuerpos opsonizantes que favorecen la fagocitosis especialmente de bacterias
Gram positivas.
Anticuerpos activadores de complemento. En este caso, bacterias Gram (+)
pueden ser opsonizadas por C3b y fagocitadas y las bacterias Gram (-) pueden ser
lisadas por el Complejo de Ataque a la Membrana del complemento.

Inmunidad frente a bacterias intracelulares

Son bacterias que tienen la capacidad de infectar clulas y tienen una pared
celular muy resistente a la fagocitosis. Por otra parte, por el hecho de encontrarse en el
interior de la clula las hacen inasequible a los mecanismos de inmunidad mediados por
los anticuerpos.

La principal respuesta inmune protectora contra las bacterias intracelulares
es la respuesta inmune celular mediada por clulas T de hipersensibilidad retardada,
pero la funcin efectora es mediada por macrfagos que son estimulados por citoquinas
liberadas por la clula T (IF gama, TNF, IL-2, y citoquinas que atraen inmovilizan y
activan macrfagos) la progresin de esta reaccin puede llevar a la formacin de
granulomas.

Mecanismos de evasin de la respuesta inmune
Variacin antignica
Cpsulas
Localizacin intracelular


RESPUESTA INMUNE A LOS PARSITOS

A diferencia de las bacterias y virus los parsitos comprenden a una amplia
gama de agentes infecciosos, desde microorganismos unicelulares (protozoos),
helmintos (tenias, nemtodos y tremtodos) algunas tnias llegan a medir 10 metros, y
ectoparsitos (caros de la sarna).

La mayora de los parsitos poseen un ciclo de viva muy complejo, parte de
el lo realizan dentro del husped definitivo (humano u otro vertebrado) y la otra dentro
del husped intermediario.

El espectro antignico de los parsitos es muy complejo y bsicamente sus
antgenos se clasifican en:
Antgenos somticos, estructurales o endoantigenos
Antgenos metablicos o exoantgenos

La mayora de las infecciones parasitarias son crnicas debido a una
adaptacin evolutiva y a efectivos mecanismos de evasin de la respuesta inmune. Por
lo tanto, la respuesta inmune del husped a los parsitos varia con las caractersticas
antignicas y el ciclo de los parsitos y solo tendrn carcter protector las reacciones
que:

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Destruyen el parsito Ej. Complemento y fagocitosis
Alteran su fisiologa Ej. neutralizacin de enzimas por anticuerpos
Alteran su reproduccin
Causan alteracin del hbitat tisular del parsito (alergia)

Rara vez la respuesta es tan efectiva para eliminar el parsito, en la mayora
de los casos slo reduce en nmero evitando signos clnicos. Este remanente de
parsitos mantiene el estmulo antignico para una adecuada respuesta inmune.

La respuesta inmune a los antgenos parasitarios esta dada por:
Respuesta inmune celular citotxica (Clulas CD8): slo en algunos parsitos
intracelulares
Respuesta inmune celular de hipersensibilidad retardada: mediante linfocitos CD4,
linfoquinas y macrfagos que en algunos casos lleva a la formacin de granulomas.
Respuesta inmune humoral: mediada por IgA, IgG, IgM, e IgE. La reaccin antgeno
anticuerpo mediada por IgG e IgM puede ser amplificada por la activacin del
complemento y la fagocitosis.

La produccin de IgE tiene especial importancia en la eliminacin de
algunos parsitos ya que desarrolla reacciones alrgicas locales. Por potra parte, existe
interaccin de la IgE unida al parsito con los receptores Fc para IgE de los eosinfilos
de esta manera los eosinfilos degranulan depositando la Protena Bsica Mayor que
lisa la cutcula del parsito.


Mecanismos de evasin de la respuesta inmune
Localizacin en sitios privilegiados
Variacin antignica
Imitacin de antgenos del husped
Disminucin de la actividad metablica
Inmunosupresin.



















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INMUNOPROFILAXIS


La prevencin de enfermedades, es a no dudarlo, el mayor logro de las
ciencias biomdicas. Como ejemplo pensemos en la viruela, enfermedad
infectocontagiosa que en una poblacin no inmunizada causa un 30% de mortalidad
dejando el 70% restante con graves secuelas: fue eliminada mediante la vacunacin
masiva. Hoy da la poliomielitis est en proceso de erradicacin global. Para que esto
ocurra debe poderse inmunizar a gran parte de la poblacin del globo terrqueo y no
deben existir reservorios naturales de la enfermedad (el caso de las zoonosis que afectan
a otras especies animales).

Gracias a la vacunacin introducida como mtodo prctico por J enner en
1792 y hecha popular por los descubrimientos de Pasteur un siglo despus, la
humanidad cuenta con una maniobra profilctica que permite luchar en forma efectiva
contra las enfermedades infecciosas de la especie humana y de los animales con los que
comparte su hbitat.

Las enfermedades infecciosas son en si terribles, sin embargo, hoy en da,
este temor se ve potenciado por la amenaza del bioterrerismo que podra terminar con
un alto porcentaje de la humanidad en cosa de meses.

En este captulo estudiaremos las diferentes formas que existen para
aumentar la capacidad de respuesta de los individuos, de una poblacin frente a un
determinado microorganismo o toxina bacteriana.

La inmunidad adquirida podemos clasificarla como sigue:

















La inmunidad Pasiva: Es aquella que adquiere el individuo sin que su
sistema linfoide haya tomado contacto con el antgeno y respondido frente a l. En este
caso los elementos efectores de la respuesta inmune el son entregados preformados.



Inmunidad Adquirida
Pasiva
Activa
Natural
Artificial Natural Artificial
Igs. Transplacentarias o
calostrales de origen materno
Igs. Transfundidas
homlogas o heterlogas
Infeccin Vacunacin
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La inmunidad pasiva natural es la que confiere la madre a su descendencia,
en los mamferos se da mediante la transmisin de Igs a travs de la placenta o por el
calostro. En las aves sta la adquiere el embrin desde el huevo, cosa semejante parece
ocurrir en salmondeos. En este ltimo caso su existencia y su rol en la defensa de los
salmondeos se discute.

Inmunidad pasiva artificial: Es la que se adquiere mediante la administracin de Igs
preformadas o sus fracciones Fab o (Fab)2. Los anticuerpos administrados pueden ser
HOMOLOGOS (de la misma especie) o HETEROLOGOS (de especies diferentes).
Los primeros tienen una vida media mucho mayor y pueden usarse repetidamente sin
que produzcan reacciones adversas, los segundos (heterlogos) por ser protenas
extraas inducen una fuerte respuesta inmune y son eliminados rpidamente, si se
usan ms de una vez o en cantidades muy grandes provocan la llamada Enfermedad del
Suero con formacin de depsitos de complejos inmunes que producen DAO
TISULAR.

En el caso de los anticuerpos monoclonales estos son casi siempre
heterlogos, ya que como lo dijeramos antes hoy slo existen en forma comercial los de
ratn, rata y hamster, si finalmente se logran hibridomas estables de las especies
domsticas y el hombre, seguramente la transferencia pasiva de inmunidad especfica
adquirir notable importancia tanto desde el punto de vista profilctico como
teraputico. Una alternativa usada hoy en algunos casos para tratar pacientes humanos
son los anticuerpos monoclonales humanizados, en que se reemplaza, mediante
tcnicas de ingeniera gentica toda la parte constante de la molcula de un anticuerpo
monoclonal de ratn por los dominios constantes de la inmunoglobulina humana,
conservando la regin variable murina.

Inmunidad Activa: Es aquella que adquiere el individuo como consecuencia de la
entrada del antgeno y activacin de su sistema linfoide. An cuando tarda ms en
aparecer, comparada con la pasiva, su duracin es mayor y tiene las ventajas que
aportan todos los elementos efectores de la respuesta inmune.

Inmunidad activa natural: Es la que aparece despus de un episodio infeccioso despus
del cual quedan elementos efectores preformados (Igs y clulas T) que se encargan de
vigilar el organismo y queda memoria inmunolgica.

Inmunidad activa artificial: Es la que aparece despus de la vacunacin, maniobra
que no es otra cosa que la exposicin voluntaria de un individuo o poblacin de
individuos a antgeno o antgenos de un microorganismo determinado, dejando para
ste, elementos efectores de la respuesta inmune preformados y memoria inmunolgica.

Las vacunas pueden ser basadas en administracin de:

a) Organismos vivos.
b) Organismos muertos o inactivados.
c) Productos metablicos.
d) Antgenos recombinantes.
e) Pptidos sintticos.
f) Anticuerpos antiidiotpicos.
g) Inyeccin de DNA desnudo de microorganismos.
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Veamos rpidamente en que consiste cada uno de ellos:

a) Organismos vivos: Tienen la ventaja de producir muy buena inmunidad y su costo
es relativamente bajo. La condicin primordial para su uso es que no produzcan la
enfermedad. Pueden ser de dos tipos:

Microorganismos heterlogos: Normalmente patgenos para otra especie e
inocuos para la especie que queremos defender: es el caso de la vacuna contra
viruela obtenida por J enner de pstulas de vacas infectadas con viruela bovina. El
de los virus causantes del sarampin humano que protegen contra el distemper
canino Esto se explica porque en los dos casos mencionados los microorganismos
usados para vacunar tienen similitud antignica con los patgenos contra los que se
quiere inmunizar.

Microorganismos atenuados: Son los mismos microorganismos patgenos a los
que se ha hecho perder su virulencia. Esto se puede conseguir tratndolos con dosis
de qumicos o calor que sin matarlos les impida replicarse en forma efectiva. La
forma ms comn de hacerlo, es cultivarlo en condiciones diferentes a las naturales
por largo tiempo en condiciones desfavorables: medios pobres en nutriente, alta
concentracin de CO
2
(si son aerfilos) o bien por pasajes mltiples en una especie
heterloga: lo ms usado es pasaje en huevos o conejo (en este ltimo caso se habla
de virus lapinizado).

Microorganismos genticamente modificados. Podramos decir una forma ms
cientfica de atenuacin: en este caso se elimina del virus o bacteria un
determinado gen que codifica para algn razgo de virulencia: es el caso de la vacuna
contra el virus herpes que causa seudo-rabia en porcinos. Ac al eliminar el gen que
codifica para la enzima timidina-kinasa le hace imposible replicarse en las neuronas.

Microorganismos recombinantes: Son microorganismos inocuos a los que se
les ha insertado un gen que codifica para un antgeno importante del patgeno contra
el cual queremos inmunizar, por ejemplo virus vaccinia (virus viruela bovina) que se
le ha insertado un gen que codifica para una protena del virus rabia, el virus vaccina
lo expresa y con l se logra produccin de anticuerpos neutralizantes para el virus
rabia.

b) Microorganismos muertos: Los microorganimos muertos o inactivados son
inmungenos pobres comparados con las vacunas vivas, sin embargo estas vacunas
son ms seguras ya que no tienen posibilidades de revertir a microorganismos
virulentos como las vacunas atenuadas y su manejo es ms sencillo ya que su vida
til es ms larga y las condiciones de almacenamiento son menos exigentes.

c) Productos de Metabolismo Microbiano: Cuando se quiere tener anticuerpos
neutralizantes frente a toxinas (Toxina tetnica, toxina de clostridium) se le
transforma en Toxoide por tratamiento con formaldehido quitndole la toxicidad
pero preservando la inmunogenicidad.




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d) Antgenos protecos recombinantes: En este caso se prepara un microorganismo
recombinante, generalmente se usa una Escherichia coli a la que se le inserta un gen
que codifica para una protena del microorganimo contra el cual queremos vacunar,
esta protena se purifica luego y se puede usar como inmungeno en forma pura.

e) Vacunas en base a pptidos sintticos: Esta forma de enfrentar el problema se
encuentra slo en fase experimental, ac se identifica una protena importante como
antgeno en la defensa, y en esta se ubican los eptopes ms importantes, estos se
secuencian y luego se sintetizan en forma industrial. Para obtener una respuesta con
estos inmungenos deben ser acoplados a un carrier de alto peso molecular.

f) Vacunas en base a anticuerpos anti-idiotipo: Como recordamos los anticuerpos anti-
idiotipo tienen una secuencia en su zona variable que reacciona con los primeros
anticuerpos ante un antgeno determinado (igual como el antgeno), por lo tanto bajo
ese punto de vista es igual al antgeno y si se le inyecta en alta cantidad puede
producir anticuerpos anti-anti idiotipo que eventualmente reconoceran al antgeno.
Tambin se encuentran en etapa experimental.

g) Vacunas en base al DNA microbiano desnudo o naked. Esta forma de conseguir
aumentar las defensas frente a un microorganismo determinado se obtiene
incorporando DNA del microorganismo a las clulas (musculares) del individuo
vacunado, estas por algn tiempo fabrican protenas del patgeno las exportan al
espacio extracelular y el individuo se inmuniza a si mismo con los antgenos del
patgeno (tambin en etapa experimental).


LA ADMINISTRACIN DE LAS VACUNAS

Las vas subcutnea o intramuscular son ms usadas en vacunacin, pero
tambin pueden ser administradas en forma oral o en los animales por aerosoles que
penetran por va conjuntival y nasal o en el alimento y el agua de bebida, estos ltimos
mtodos generalmente en uso en crianzas intensivas de aves o pequeos animales
criados para la industria peletera. Los peces pueden ser vacunados por inmersin en la
vacuna que penetra por las branquias.

Las vacunas con organismos muertos, las hechas en base a protenas
recombinantes, productos metablicos bacterianos o pptidos sintticos unidos a un
carrier, requieren ir acompaados, unidos o encapsulados por substancias
ADYUVANTES o COADYUVANTES.

Los adyuvantes ms comnmente empleados son las sales de hidrxido de
aluminio, el Coadyuvante Completo de Freund (CCF) y el Coadyuvante Incompleto de
Freund (CIF) que hacen que el antgeno sea entregado lentamente y favorece la
activacin de lo macrfagos que deben procesarlo. Fracciones bacterianas como partes
de Corynebacterium, Bordetella pertusis y lipopolisacridos activan los macrfagos, lo
mismo que algunos carbohidratos como los glucanos.

En la eleccin del adyuvante adecuado se debe tener en cuenta que la
inflamacin que cause sea de fcil resolucin, ya que esta es una reaccin indeseable.

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Vacunas Polivalentes: Son vacunas hechas en base a mezclas de microorganismos
diferentes, con este fin, mediante una inoculacin se pretende proteger contra 3 o 5
enfermedades. Sus resultados son buenos ya que la mezcla antignica ha sido
investigada por las compaas farmaceticas que la producen y la cantidad de cada
microorganismo ajustada de tal manera que no se produzca competencia antignica,
es decir, una respuesta muy fuerte frente a uno de los componentes, capaz de hechar a
andar mecanismos supresores que inhiben la respuesta contra los otros componentes de
la mezcla.


FALLAS EN LA VACUNACION


1. Problemas derivados de la incorrecta administracin.
Dosis insuficiente.
Muerte de la vacuna.

2. Vacuna administrada a individuos que ya estaban infectados.

3. Vacuna hecha en base a microorganismos de otra cepa (diferentes antignicamente
del patgeno infectante).

4. La no respuesta del individuo porque:

a) Ha sido inmunizado pasivamente justo antes de la vacunacin.
b) El individuo est inmunodeprimido o es inmunodeficiente.



CONSECUENCIAS ADVERSAS DE LA VACUNACION

La vacunacin en determinados casos puede producir:

1. La enfermedad por reversin de la patogenicidad de la cepa vaccinal.
2. Virulencia en individuos inmunodeficientes.
3. Toxicidad: Por efecto generalmente de LPS puede haber aumento de temperatura
y llegar al schock.
4. Causar hipersensibilidad: Tipo I (inmediata).
Tipo II (citotxica).
Tipo III (por complejos inmunes).
Tipo V (celularmente mediada).









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MECANISMOS DE DAO INMUNOLOGICO
(Hipersensibilidad)
La respuesta inmune esta concebida como un mecanismo de defensa que
protege al individuo. Sin embargo, hoy est claro que respuestas protectoras pueden
resultar deletreas y en algunos casos llevar a la muerte.
Los diferentes mecanismos inmunolgicos involucrados en la produccin de
dao tisular fueron clasificados por Gell y Coombs en 1963 en 4 tipos bsicos de
hipersensibilidad.

Hipersensibilidad Tipo I : Anafilctica (alergia)
Hipersensibilidad Tipo II : Citotxica mediada por anticuerpos
Hipersensibilidad Tipo III : Mediada por complejos inmunes
Hipersensibilidad Tipo IV : Hipersensibilidad retardada

Hipersensibilidad tipo I

Este tipo de respuesta tambin llamada anafilctica, reagnica o inmediata
est mediada por los anticuerpos IgE, los cuales son inducidos por la exposicin al
antgeno (alrgeno) en individuos atpicos (genticamente predispuestos). En un
segundo contacto con el alergeno, las IgE unidas a receptores Fc de basfilos, clulas
cebadas o mastocitos, generan una transduccin de seales al interior de la clula, que
termina con la exocitosis de grnulos ricos en sustancias vasoactivas y la generacin de
nuevos mediadores.

Los antgenos (alergenos) involucrados en esta reaccin pueden ser
protenas heterologas (antisueros hormonas, enzimas, venenos de himenopteros,
extracto de polen, alimentos) agentes de diagnstico (material yodado de contraste) y
medicamentos (antibiticos y vitaminas).

Las clulas involucradas, basfilos y clulas cebadas tienen receptores
para el Fc de la inmunoglobulina IgE, esta unin determina la sensibilizacin del
individuo (fase de sensibilizacin atpica). El enlace por el alergeno de molculas de
inmunoglobulinas adyacentes, inicia una serie de cambios bioqumicos en que se pierde
el equilibrio intracelular entre el AMPc y el GMPc. La disminucin del AMPc lleva
finalmente a la liberacin de las sustancias vasoactivas.

Las sustancias farmacolgicamente activas comprenden en general dos
grupos:
Las que se encuentran preformadas en los grnulos (histamina, serotonina, heparina,
factores quimiotcticos para eosinfilos, factores quimiotcticos para neutrfilos y
enzimas proteolticas).
Las que se forman producto del metabolismo del cido araquidnico (leucotrienos.
prostaglandinas y tromboxanos)

El resultado de esta reaccin depende de la puerta de entrada del alergeno:
la va respiratoria, digestiva o piel dan signos locales inducidos principalmente por la
accin de la histamina (vasodilatacin, aumento de la permeabilidad (edema, urticaria)
y contraccin del msculo liso (broncocontriccin). Sin embargo, la administracin
parenteral del antgeno puede dar lugar a una anafilaxis generalizada (schock
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analfilactico), que puede afectar conjuntamente los sistemas respiratorio, digestivo,
cardiovascular y piel; el compromiso de estos sistemas vara con la especie animal.

El control natural del fenmeno alrgico es responsabilidad de los
eosinfilos los cuales aportan las sustancias que neutralizan la accin de los mediadores
de la alergia.

Hipersensibilidad tipo II

Son consideradas de manera clsica como de carcter citotxico e involucra
la participacin de los anticuerpos IgG e IgM con los determinantes antignicos propios
o adsorbidos a una membrana celular. Por otra parte, ms recientemente se ha
determinado que el dao puede ser producido por estimulacin o por bloqueo de
funciones biolgicas.

Las secuelas habituales de la adherencia de los anticuerpos circulantes a un
antgeno celular o adsorbido a la membrana son por lo tanto:
La lisis celular mediada por la activacin del complemento
Fagocitosis de la clula blanco con o sin activacin del complemento
Inactivacin celular
Activacin celular

En general, este tipo de mecanismo de dao est involucrado en todas las
enfermedades autoinmunitarias mediadas por autoanticuerpos. El blanco de la reaccin
citotxica puede ser algn elemento de las clulas de la sangre o alguna clula
especifica dentro de un tejido (eritrocitos, plaquetas, membranas basales o piel).
Algunos ejemplos de ellas son:

Eritrocitos
Transfusin con sangre incompatible
Anemia hemoltica autoinmunitaria
Anemia hemoltica inducida por drogas
Enfermedad hemoltica del recin nacido

Plaquetas
Prpura trombocitopnica idioptica
Prpura trombocitopnica inducida por drogas

Rin y pulmn
Sndrome de Good Pasture

Piel
Trastornos penfigoides

Los mecanismos de estimulacin o bloqueo de funciones celulares mediado
por anticuerpo se dan en el caso de Hipertiroidismo (Enfermedad de Graves) generado
por anticuerpos estimuladores de la glndula tiroides y en el caso de la Miastenia gravis
por anticuerpos bloqueadores del estmulo nervioso en la unin neuro muscular.

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Hipersensibilidad tipo III

El dao es consecutivo a la localizacin de complejos inmunes en los tejidos
y la inflamacin constituye la caracterstica principal.
De acuerdo a su patogenia las reacciones se clasifican en:
Reaccin de Arthus
Enfermedad del suero

Reaccin de Arthus
En un individuo sensibilizado a un antgeno, por lo tanto en presencia de
gran concentracin de anticuerpos, la exposicin de nuevo al mismo antgeno forma
complejos en el lugar de inyeccin, con la consecuente activacin del complemento que
libera:
Anafilotoxinas que actan sobre clulas cebadas liberando su contenido.
Factores quimiotcticos para neutrfilos, los que liberan su contenido enzimtico.
Agregacin plaquetaria
La accin propia de estas molculas y clulas lleva a inflamacin y dao tisular.

Los equivalentes clnicos de este tipo de hipersensibilidad es la "neumonitis
por hipersensibilidad" o la "alveolitis alrgica extrnseca" inducida por la aspiracin de
esporas de ciertos hongos.

Enfermedad del suero
La caracterstica de esta reaccin es la formacin de complejos antgeno
anticuerpo en la circulacin y el depsito posterior de ellos en diferentes territorios tales
como: rin, piel, articulaciones y vasos sanguneos, estos lugares se caracterizan por
condiciones hemodinmicas que favorecen el depsito. La consecuente activacin del
complemento induce:
Anafilotoxinas que actan sobre clulas cebadas liberando su contenido.
Factores quimiotcticos para neutrfilos, los que liberan su contenido enzimtico
Agregacin plaquetaria
La accin propia de estas molculas y clulas lleva a inflamacin y dao tisular.

Entre las manifestaciones clnicas de las reacciones por complejos
inmunes circulantes figuran las glomerulopatas por complejos inmunes, las artritis y
vasculitis inmunes.


Hipersensibilidad tipo IV

Esta reaccin es causada por clulas T sensibilizadas (Clulas de
hipersensibilidad retardada) por un contacto antignico previo. Las clulas T INF-gama
de hipersensibilidad retardada reconocen el antgeno y producen linfoquinas: IL 2, IF-
gama, TNF y otras que atraen inmovilizan y activan macrfagos (MIF, MAF ). Los
linfocitos y macrfagos constituyen el infiltrado caracterstico de este tipo de reaccin,
que cuando progresa lleva a la formacin de granulomas, que se caracterizan por
presentar linfocitos, macrfagos, clulas epilteloideas y clulas gigantes (clulas de
Langerhans).

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Este tipo de reaccin se induce por el contacto con metales (nquel) o
sustancias qumicas (dermatitis por contacto) o por infecciones por patgenos
intracelulares (Tuberculosis).

Tambin, las pruebas cutneas de hipersensibilidad retardada son utilizadas
para la evaluacin general de la inmunocompetencia y el diagnstico de enfermedades
infecciosas, como por ejemplo, la prueba de la turberculina para el diagnstico de
Tuberculosis.










































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TOLERANCIA INMUNOLOGICA


Se define tolerancia como un estado de no respuesta del sistema inmune
frente a un antgeno en particular. Es decir, opera especficamente frente a un antgeno
y an ms precisamente frente a determinantes antignicos.

Este fenmeno no debe confundirse con la llamada inmunosupresin que es
un fenmeno de depresin inespecfica del sistema inmune y donde se deprime la
capacidad de responder frente a cualquier antgeno.

La tolerancia se relaciona a uno de los fenmenos ms importantes de la
Inmunologa, cual es el reconocimiento de lo propio. El organismo, pese a tener
antgenos en todas sus clulas, normalmente no reacciona contra ellos y generndose
tolerancia, asegura la integridad fsica y funcional del individuo.

Solo las clulas con receptores especficos para el antgeno pueden ser
tolerizadas (linfocitos) en un proceso que opera toda la vida, en la medida que se
produzca maduracin y diferenciacin de linfocitos.

A. TOLERANCIA EN CELULAS INMADURAS.

La induccin de tolerancia opera en clulas B y clulas T, habiendo en el
perodo fetal un perodo de reconocimiento de lo propio (que implica inducir tolerancia
frente a antgenos propios), de modo que al nacimiento el hombre ya tenga tolerancia
establecida.

Una de las primeras observaciones en este sentido viene de Owen, un
investigador ingls, quin encontr que en gemelos bovinos dicigticos con circulacin
compartida, al nacer, ambos gemelos toleraban los antgenos (tejidos) del otro.

Burnet, pronto propuso su famosa teora de seleccin clonal que establece,
en su esencia, que los linfocitos al madurar expresan receptores de membrana para todos
los antgenos posibles incluido los propios. Cuando contactan, en este perodo, a un
antgeno ese linfocito es destruido o inactivado, ya que tiene reactividad contra
antgenos propios y es de alto riesgo que se desarrolle en el organismo. Se establece as
una tolerancia frente a ese antgeno en particular.

Otro investigador, Medawar, someti a prueba estos conceptos usando el
modelo ratn, que tiene la particularidad de nacer inmunolgicamente inmaduro por 24-
48 hrs., de tal modo que la introduccin de antgenos extraos pudiera generar
tolerancia, ya que el organismo supondra que es propio.

Para probar esa hiptesis, Medawar, inyect clulas de un ratn B a un ratn
A recin nacido, que eran entre si gentica e inmunolgicamente incompatibles. Al
crecer el ratn A y recibir un transplante de piel B, lo acept permanentemente, no
rechazndolo, como si fuera tejido propio. Con ello, se abri un gran campo al
conocimiento de la tolerancia inmunolgica.


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Este proceso de induccin de tolerancia requiere de:
a) Presencia del antgeno.
b) Contacto del antgeno con su respectivo linfocito.
c) Permanencia del antgeno en el organismo. Este punto es importante ya que una
eventual desaparicin del antgeno, genera un rompimiento de la tolerancia con
reactividad contra l.

Con esto se demuestra que este es un fenmeno activo, tanto en su
generacin como mantencin.


B. TOLERANCIA EN EL INDIVIDUO ADULTO.

Una vez que el sistema inmune madura, tambin es posible inducir
tolerancia artificialmente hacia antgenos extraos. El antgeno en este caso se
denomina tolergeno, Este proceso depende de algunos factores:

a) Gentico. Depende de la constitucin gentica del individuo, en relacin a su
capacidad inmune, la facilidad o no de inducir tolerancia. Hay individuos ms
tolerizables que otros.
b) Dosis. La cantidad de antgeno inyectado es crucial. Si se inyecta dosis muy altas o
extremadamente bajas de un antgeno, se induce tolerancia que se denomina,
tolerancia a alta dosis y a baja dosis respectivamente. Por extensin de esta
observacin, se puede suponer que en el caso de hormonas o enzimas, por ejemplo,
opera una tolerancia a baja dosis, por su nivel extremadamente bajo en el organismo
y en el caso de albmina, que tiene una alta concentracin en la sangre, opera la
tolerancia a alta dosis.
c) Forma fsica. Un mismo antgeno puede generar tolerancia o inmunidad
dependiendo de su forma fsica. Es as como antgenos proteicos agregados generan
una fuerte inmunidad; sin embargo las mismas dosis, pero de una forma monomrica
generan una tolerancia permanente.
d) Participacin de linfocitos T y B. En un modelo de induccin de tolerancia en
adulto, usando IgG monomrica como tolergeno, se demuestra que en el proceso
participan tanto linfocitos T como B, pero que lo hacen en forma diferente. En
sntesis se observa lo siguiente:

i) Linfocitos T se hacen tolerantes casi de inmediato, en cambio las clulas B
presentan un perodo de latencia de 10-14 das.
ii) Los linfocitos T se hacen tolerantes en un 100%, los linfocitos B no logran el
100%.
iii) La tolerancia inducida en linfocitos T se mantiene por muy largos perodos; la
inducida en B, en cambio, es transitoria, de corta duracin.
iv) Dosis muy bajas de antgeno inducen tolerancia en linfocitos T solamente,
quedando las B reactivas. Dosis muy altas generan tolerancia en B y T.






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C. MECANISMOS DE TOLERANCIA.

Debido a los procesos de generacin de diversidad (rearreglo de genes V,
insercin de segmentos D y J y unin de cadenas H y L o alfa y beta al azar), se genera
una cantidad inmensa de especificidades a nivel de receptores T o B (se estima en 107 o
108 especificidades). El problema que se debe enfrentar, es neutralizar o eliminar
aquellos linfocitos, que inevitablemente se generarn con capacidad para reaccionar con
antgenos propios. Hay al menos dos niveles donde este proceso opera:

1. Tolerancia a nivel central. El problema se enfrenta a nivel de linfocitos T y B
inmaduros en el timo y mdula sea respectivamente. Linfocitos T inmaduros al
llegar al timo enfrentan en ese ambiente los antgenos propios; estos linfocitos
expresan el receptor T, , as como los marcadores CD4 y CD8. Al contactar los
antgenos propios, las clulas T sufren un proceso de seleccin negativa, que se
traduce en la muerte o delecin de aquellos linfocitos con receptores de alta afinidad
para antgenos propios, especialmente HLA.

A nivel de clulas B, un proceso similar ocurrira en mdula sea, en
linfocitos inmaduros que expresan IgM como receptor (IgM e IgD expresan clulas
B maduras) que unen con alta afinidad o avidez antgenos propios. Seran as
eliminados por delecin o neutralizados o inactivados.

2. Tolerancia perifrica. Los linfocitos que salen del timo o mdula sea (rganos
centrales) a la periferia, corresponden a los que no tienen una alta capacidad de
respuesta contra el yo (HLA). Sin embargo, en la periferia se enfrentan a otros
antgenos (tejidos, rganos, clulas) que no estn representados en el timo, de modo
que antes de completar su maduracin en la periferia deben sufrir otro proceso de
tolerancia.

Los mecanismos que pueden operar a este nivel son:
a) Delecin clonal o muerte clonal.
b) Inactivacin clonal por el antgeno (anergia clonal)
c) Por clulas (supresin).

a) Delecin clonal. Es un proceso que al contacto con el antgeno induce muerte
clonal (apoptosis), o sea, de todos los linfocitos con receptores de alta afinidad para
el antgeno. Es el medio ms eficaz de asegurar una permanente y eficaz mantencin
de un estado de tolerancia al yo.

b) Inactivacin clonal por el antgeno. La tolerancia perifrica adquirida, se supone
que opera cuando existe una presentacin del antgeno al receptor de la clulas T,
pero sin las seales secundarias coestimulatorias. La interaccin de la molcula B7
del macrfago con el receptor CD 28 del linfocito T es un eficiente mecanismo de
estimulacin entre otros. Si la molcula coestimulatoria est ausente o bloqueada o
si la interaccin B7-CD 28 est bloqueada las clulas T permanecen en un estado de
ANERGIA, estado en el cual la clula pierde la capacidad de responder a
subsecuentes estmulos antignicos. Funcionalmente las clulas T anergizadas, por
norma general, no producen IL-2, aunque son capaces de producir otras citoquinas
como IL-3. Sin embargo, en algunas ocasiones las clulas T anrgicas pueden
producir IL-2, pero no son capaces de expresar el receptor para IL-2, por lo tanto son
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incapaces de responder a ella. Esto es porque al no haber la seal coestimulatoria
CD 28-B7 no se estabiliza el mRNA de IL-2, con lo cual la transcripcin en la clula
T se bloquea.

A nivel de clulas B es inducida por la unin de antgenos multivalentes
a clulas inmaduras. Se produce un bloqueo a la reexpresin de receptores de
membrana despus de ser endocitados con el antgeno.

En forma similar a lo visto para clulas T, el linfocito B requiere de
mltiples seales secuenciales para proliferar y llegar a producir anticuerpos. Estas
seales, en su gran mayora vienen desde la clula T en forma de citoquinas. En
ausencia de tales seales de la clula T, la clula B se hace no respondedora, es decir
anrgica.

As, la administracin de antgeno en forma tal que no activa a
clulas T (grandes dosis de antgeno, antgenos solubles) permite su unin al receptor
(Ig) de membrana, que se traduce en tolerancia al no tener seales coestimulatorias.

c) Inactivacin Clonal por Clulas. La produccin de clulas T supresoras, es un
proceso activo que puede tener un rol central en inhibir la respuesta contra antgenos
extraos, as como representar un mecanismo de seguridad contra aquellas clulas
autoreactivas que han escapado a la delecin clonal o anergia clonal. Los posibles
mecanismos de accin pueden ser:

Las clulas supresoras producen citoquinas inhibidoras que actan sobre
otros linfocitos. Un ejemplo es INF que puede prevenir el switch de clulas B
mediado por IL-4. Tambin, las clulas T producen TGF- un poderoso supresor de
la proliferacin de clulas T y B. As, puede ser posible que una poblacin de
clulas T acte temporalmente como clula supresora si produce la citoquina
apropiada. Puede, tambin que no haya una poblacin de clulas T cuya nica
funcin sea suprimir la respuesta inmune.

Clulas CD8+pueden tener actividad citotxica contra otras clulas T o
linfocitos B.




Propiedades Generales de la Tolerancia.
El fenmeno de tolerancia puede resumirse en:

1. La tolerancia es un fenmeno especfico. Por ello solo se hacen tolerantes linfocitos
T y B que tienen receptores en su membrana especficos para el antgeno.
2. La tolerancia se aprende o se adquiere.
3. Los linfocitos inmaduros o en desarrollo son ms susceptibles a la induccin de
tolerancia comparado con clulas maduras.
4. Dado que la mayora de los antgenos son proteinas y por ende T-dependientes, basta
que se establezca tolerancia en una sola clula (T o B) para que el organismo entero
sea tolerante.
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5. Los mecanismos por los cuales se induce tolerancia son: delecin clonal o
inactivacin clonal.
6. Para inducir tolerancia el antgeno debe entrar en contacto con los receptores de
clulas T y B y permanecer en el organismo para mantener el estado de tolerancia.














































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AUTOINMUNIDAD Y ENFERMEDAD AUTOINMUNE.

Autoinmunidad se define como la reactividad del sistema inmune contra
antgenos propios, y an cuando este hecho parece ser muy negativo para el organismo
no siempre es as. En efecto, existe la llamada autoinmunidad positiva, que representa
mecanismos homeostticos vitales para el organismo, entre los que podemos citar, a
modo de ejemplo:

a) Regulacin de la produccin de anticuerpos. La generacin de una red idiotipo-
antiidiotipo, representa un mecanismo normal que opera en el organismo y tiene
como funcin regular el nivel de la respuesta inmune.
b) Eliminacin de detritus celulares. Frente a necrosis de tejidos que puede ocurrir en
el organismo se generan autoanticuerpos cuya finalidad es eliminar los restos
celulares. El envejecimiento de glbulos rojos genera autoanticuerpos que, al
unirse a los antgenos de membrana, posibilitan su eliminacin en el sistema
retculo endotelial.

Sin embargo, hay situaciones en que esta reactividad contra el yo
(antgenos propios) se traduce en dao tisular, generndose entonces una
ENFERMEDAD AUTOINMUNE, un aspecto negativo de la autoinmunidad que, por
supuesto, es absolutamente indeseable.

Cabe destacar, que no siempre que encontremos autoanticuerpos en el suero
de un individuo podemos hablar de una enfermedad autoinmune. Hay mltiples
ocasiones en que tales autoanticuerpos corresponden a efectos secundarios de otra
enfermedad. Por ello, se acepta, que una enfermedad debe reunir 4 requisitos para
poder ser considerada primariamente autoinmune:

1. Siempre deben detectarse autoanticuerpos o linfocitos autoreactivos.
2. La enfermedad debe ser reproducible experimentalmente.
3. La enfermedad inducida experimentalmente debe mostrar lesiones
inmunopatolgicas similares a la enfermedad natural.
4. La enfermedad debe poder transferirse a receptores sanos, mediante linfocitos o
anticuerpos.


CAUSAS.

La ms notable caracterstica de la enfermedad autoinmune es que su causa
es multifactorial, envolviendo influencias de tipo gentico y ambientales. Algunas
causas determinadas son:

1. Liberacin de antgenos secuestrados. Durante el proceso de induccin de
tolerancia hay una serie de antgenos que no entran en contacto con los linfocitos
por estar anatmicamente aislados, y que son llamados antgenos secuestrados, ej.
antgenos del sistema nervioso central, antgenos testiculares, etc. Como frente a
ellos no se establece tolerancia, su eventual paso a la circulacin, por un trauma por
ejemplo, puede dar la base de una autorespuesta.

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2. Formacin de nuevos eptopes. Algunos medicamentos que actan como haptenos
pueden unirse a molculas o clulas propias generando una respuesta inmune contra
el elemento extrao (el hapteno pasa a ser un nuevo eptope desconocido) y de paso
se destruye la clula propia, ej. prpura trombocitopnico en que se destruyen las
plaquetas al acoplarse drogas a su superficie y actuar anticuerpos contra ellas.

3. Cross-reactividad con microorganismos. Eptopes compartidos entre
microorganismos y clulas propias, al presentarse en portadores diferentes
(bacterias) pueden generar una respuesta autoinmune.

4. Disminucin del nivel de clulas supresoras. Las radiaciones en bajas dosis y
algunas drogas son capaces de disminuir el nivel de clulas supresoras con lo cual,
al perder el freno a que estaban sometidas por las clulas supresoras, quedan libres
y pueden actuar contra el yo, si se dan las condiciones adecuadas.

5. Factores neuroendocrinos. Tienen una clara influencia las hormonas sexuales
estrgeno y testosterona. Est claramente demostrado que existe una mayor
incidencia de enfermedades autoinmunes en mujeres que en hombres, ya que al
parecer el estrgeno tendera a producir una baja en el nivel supresor de clulas T y
la testosterona actuara a la inversa.

6. Accin viral. Se ha demostrado, al menos en modelos animales, que retrovirus tipo
C se asocia a la produccin de autoanticuerpos contra glbulos rojos y cidos
nucleicos, por lo que la accin viral es una causal que no puede ser descartada.

7. Background gentico. La presentacin de enfermedades autoinmunes est
directamente relacionada a uno o ms alelos del sistema HLA. Este hecho queda
claramente demostrado al observarse una mayor incidencia de estas enfermedades
en miembros de una familia, que en miembros de familias no relacionadas.

8. Estimulacin Policlonal. Cuando el mecanismo de tolerancia es derivado de la
carencia de seales coestimulatorias, la presencia de lipopolisacridos (LPS),
mitgeno policlonal de clulas B, puede romper el estado de tolerancia en linfocitos
B y generar autoinmunidad.

9. Presentacin ectpica de molculas HLA de clase II. Hay una variedad
importante de clulas que normalmente no expresan molculas HLA de clase II,
como por ejemplo, las clulas epiteliales del tiroides. Sin embargo, por accin de
IFN- u otras citoquinas de clulas T activadas, pueden expresar molculas de clase
II en su superficie junto al antgeno propio (tiroglobulina) y presentarlo a clulas T
apropiadas, pudiendo generar una respuesta autoinmune.


MECANISMOS DE DAO.
Cuando el sistema inmune reacciona contra antgenos propios, perdiendo
por lo tanto la capacidad de reconocer esos antgenos como propios, utiliza todos los
elementos que componen este sistema. Es decir, anticuerpos, linfocitos sensibilizados,
activacin de complemento, inflamacin, etc. y actuar uno o ms de ellos dependiendo
del cuadro de que se trate. En esencia, al desconocer lo propio, se reacciona frente a l,
como si fuera un antgeno extrao.
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CLASIFICACIN.

Las enfermedades autoinmunes pueden clasificarse en:

1. Enfermedades rgano-especficas.
Son aquellas en que el antgeno target est ubicado en un rgano
especfico y el dao que se genera est restringido fundamentalmente al rgano
afectado. El dao tisular y las alteraciones funcionales dependern, por supuesto, del
rgano afectado y de la severidad del ataque contra l. Es posible observar, sin
embargo, superposicin con otras enfermedades rgano especficas.

2. Enfermedades no rgano-especficas.
Corresponde a aquellas en que el dao es generalizado o sistmico. Los
mecanismos de dao generalmente derivan de los efectos de la reaccin antgeno-
anticuerpo y que puede afectar a piel, msculos, rin, articulaciones, etc. Al igual
que en el caso anterior, pueden coexistir con otras enfermedades autoinmunes.

EJEMPLOS DE ENFERMEDADES AUTOINMUNES.

1. A continuacin veremos algunos ejemplos de enfermedades rgano especficas, en
que se destacan los mecanismos inmunolgicos bsicos de la patogenia de cada
enfermedad:

a) Enfermedad de Graves o tirotoxicosis. Se produce un autoanticuerpo de tipo
IgG dirigido contra el receptor a TSH ubicada en la membrana de las clulas
foliculares de la tiroides. As, la clula sufre una permanente estimulacin para
producir las hormonas tiroideas, derivando el dao de este efecto: Aumento de
T3 y T4, aumento del metabolismo basal, aumento en la generacin de calor,
prdida de peso, etc.

b) Miastenia Gravis. Se producen autoanticuerpos contra el receptor a acetil-
colina a nivel de la placa motora (unin neuromuscular), de tal modo que
produce un bloqueo a la accin de la acetil-colina liberada por la estimulacin
nerviosa, lo que bloquea la contraccin muscular, producindose una astenia
progresiva.

c) Anemia perniciosa. Se producen autoanticuerpos contra el factor intrnseco
(FI), que transporta y es mediador de la absorcin de la vit. B12 a nivel de
estmago. Al bloquearse el FI por el anticuerpo, la vit. B12 no puede
absorberse, lo que genera anemia.

d) Infertilidad. En algunas raras ocasiones se producen autoanticuerpos dirigidos
contra antgenos espermticos, lo que genera una infertilidad, por aglutinacin o
inmobilizacin de los espermios.

e) Tiroiditis de Hashimoto. Es una enfermedad que afecta a tiroides que se
presenta con mayor frecuencia en la mujer y que cursa con bocio o
hipotiroidismo. Es un cuadro mediado por anticuerpos y linfocitos T, dirigidos
fundamentalmente contra tiroglobulina (principal producto y antgeno de la
tiroides) y contra antgenos microsomales de las clulas epiteliales del tiroides.
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Las lesiones derivan de una intensa infiltracin celular de linfocitos,
macrfagos, polimorfonucleares y clulas plasmticas. Adems, se encuentran
depsitos de anticuerpos y complemento, lo que genera las bases de la
inflamacin y destruccin de la estructura glandular.

2. Ejemplos de enfermedades sistmicas; al igual que en el caso anterior se indica slo
la base inmunolgica del dao:

a) Lupus eritematoso sistmico. Es una enfermedad que afecta a muchos rganos
causando fiebre, dolores articulares y dao al sistema nervioso central, corazn y
riones. Se producen anticuerpos contra numerosos componentes nucleares,
llamados ANA (anticuerpos antinucleares), destacando los dirigidos contra DNA
nativo de doble hlice. Clnicamente la presencia de estos anticuerpos se
relaciona muy bien con la patologa a nivel renal. Estos anticuerpos se cree que
forman complejos solubles con el DNA que proviene del recambio normal de
tejido, como la piel. Los complejos, as formados, son eliminados de la
circulacin por filtracin a nivel renal, quedando atrapados a nivel de la
membrana basal del glomrulo. Otros complejos tambin pueden quedar
atrapados en las paredes arteriolares y en el espacio sinovial de las articulaciones.
As, se activa complemento con atraccin de polimorfonucleares y otras clulas,
generndose un proceso inflamatorio que se traduce en una glomerulonefritis.
Esto genera un severo dao renal y que puede conducir ultimamente a la muerte.

Tal como se dijo anteriormente, el lupus como enfermedad autoinmune es
unas 10 veces ms frecuente en la mujer que en el hombre, en el perodo
reproductivo, lo que indica una clara influencia hormonal.

b) Artritis reumatoidea. Se caracteriza por una inflamacin crnica de las
sinovias, densamente infiltradas por linfocitos, lo que puede terminar en
destruccin del cartlago y hueso. La membrana sinovial, usualmente muy fina,
se transforma prcticamente en tejido linfoideo, conteniendo vasos sanguneos,
clulas dendrticas, macrfagos, clulas T, clulas B, clulas NK y clulas
plasmticas. La patologa deriva de una mezcla de mecanismos: complejos
antgeno-anticuerpo, complemento, polimorfonucleares, clulas T, macrfagos y
clulas NK. Esto se traduce en la liberacin de una variedad de citoquinas,
enzimas y mediadores que tiene como consecuencia la destruccin de la
integridad del cartlago y acceso de condrocitos al sistema inmune, con lo que se
perpeta el dao.

El proceso inflamatorio se inicia con la produccin de un anticuerpo,
generalmente IgM, llamado factor reumatoideo (FR) que es especfico para la
porcin Fc de la IgG propia. As, se genera un complejo Ag-Ac que se deposita
en la membrana sinovial, donde se activa complemento generndose
inflamacin. Ello se traduce en acumulacin de exudados, tumefaccin e
intenso dolor articular.




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TRATAMIENTO.

Desde el punto de vista inmunolgico es muy difcil establecer un
tratamiento etiolgico, ya que no conocemos la causa de las enfermedades autoinmunes.
Sin embargo, es importante destacar una aproximacin que se relaciona al concepto de
balance clonal. Se supone que normalmente hay un balance entre aquellos factores del
sistema inmune que estimulan la respuesta inmune (+) y otros que la frenan (-). La
presencia de enfermedad autoinmune implica que este balance se perdi, por lo que los
esfuerzos deben dirigirse a reestablecer el equilibrio perdido. Un ejemplo de esta
aproximacin es que las enfermedades autoinmunes mediadas por clulas Th1, pueden
ser claramente atenuadas al desviar la respuesta hacia el tipo Th2. Actualmente, se
investiga intensamente sobre los mtodos ms eficientes para desviar una respuesta Th1
muy negativa a una benfica respuesta Th2 (tratamiento con citoquinas como IL-4 e IL-
10 y terapia con antgeno soluble que induce respuestas Th2 que protege de
autoinmunidad). Desgraciadamente, an no es posible lograr esto en el hombre, pero
hay resultados alentadores a nivel de modelos animales, que indicaran que ese puede
ser un camino correcto.

En resumen:

a) La enfermedad autoinmune se genera por accin del sistema inmune que acta
contra uno o varios antgenos propios.
b) Una enfermedad para ser considerada primariamente autoinmune debe reunir, al
menos, cuatro requisitos.
c) Las causas no son conocidas. Es una enfermedad multifactorial en que participan
factores genticos y ambientales.
d) Existe una clara relacin de autoinmunidad a uno o varios alelos HLA.
e) Muchos tejidos y rganos pueden ser afectados por anticuerpos, complemento,
clulas T y macrfagos.
f) El tratamiento actual es ms bien sintomtico. Un tratamiento etiolgico debiera
orientarse a reestablecer el equilibrio perdido manejando el concepto de balance
clonal.


















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DEFICIENCIAS INMUNOLOGICAS


Las deficiencias inmunolgicas (inmunodeficiencias) comprenden a un
grupo de trastornos que pueden afectar a uno o ms componentes del sistema inmune y
que como consecuencia de ello puede llevar a enfermedad o muerte.

Las inmunodeficiencias de acuerdo a su etiologa se clasifican en dos
grupos:
Inmunodeficiencias primarias o congnitas que corresponden a defectos genticos
que afectan al sistema inmune.
Inmunodeficiencias secundarias o adquiridas cuya causa puede derivar de una
variada gama de condiciones patolgicas.

En general las inmunodeficiencias pueden afectar:
La inmunidad especfica, debido a desarrollo, activacin o funcin anormal de los
linfocitos T, B o ambos.
Las defensas inespecficas, debido a defectos en la fagocitosis o el sistema del
complemento.

Debido al gran avance en la identificacin de las bases moleculares en estas
enfermedades, desde la descripcin de la primera inmunodeficiencia en 1952 a la fecha
se ha descrito un gran nmero de sndromes, los que regularmente son reclasificados y
actualizados por expertos de la Organizacin Mundial de la Salud (OMS).


INMUNODEFICIENCIAS PRIMARIAS

Debido a la gran complejidad de las inmunodeficiencias primarias
clasificadas por la OMS (Primary inmunodeficiency Diseases Clin. Exp. Immunol
109 Suppl 1, 1-28, 1997), que agrupa una amplia gama de trastornos distintos, en este
captulo se consideraran aquellos ms clsicos y que se presentan tanto en el hombre
como en los animales domsticos. Si bien es cierto que algunas deficiencias se
manifiestan asociadas a otras enfermedades, en este captulo sern revisadas desde un
punto de vista estrictamente inmunolgico, para lo cual sern clasificadas en las
siguientes categoras:

1. Deficiencias de la Inmunidad Celular
2. Deficiencias de la Inmunidad Humoral
3. Deficiencias combinadas
4. Deficiencias del sistema fagoctico
5. Deficiencias del sistema del complemento

En la figura 1 se muestra el desarrollo de las clulas linfoides y la
localizacin de las inmunodeficiencias primarias.





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Figura 1. Localizacin de Inmunodeficiencias primarias

1. Deficiencias de clulas T
La deficiencia de clulas T resulta del desarrollo defectuoso durante la
embriognesis de la 3 y 4 bolsa farngea (Sndrome de DiGeorge) provocando una
serie de trastornos: Cardiacos, facie anormal, hipoplasia o aplasia tmica, paladar
hendido e hipocalcemia.

En particular, la falta de desarrollo del Timo lleva inmunodeficiencia por
deficiencia de clulas T.

2. Deficiencias de la inmunidad humoral
Se definen como una reduccin o ausencia de uno o ms isotipos o
subclases de inmunoglobulinas en ausencia de otra patologa, las manifestaciones
ms comunes son:

Agamaglobulinemia ligada al sexo:
Se caracteriza por ausencia de clulas B

Inmunodeficiencia comn variable:
Se caracteriza por una alteracin en la formacin de los anticuerpos, la
concentracin de IgG y generalmente la de IgM e IgA estn reducidas, en este
caso el defecto esta en la activacin de la clula B.

Deficiencia selectiva de isotipos de Inmunoglobulinas
Generalmente la ms comn es la de IgA.





INMUNODEFICIENCIA
COMBINADA
APLASIA TIMICA
Precursor
linfoide
Procesamiento
tmico
Clulas T
Procesamiento
Bursa equivalente
Clulas B Inmunoglobulinas
AGAMAGLOBULINEMIA
DEFICIENCIAS DE ISOTIPOS DE INMUNOGLOBULINAS
Precursor
mieloide
Neutrfilos
DEFECTOS DE
NEUTROFILOS
Clula
madre
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3. Deficiencias combinadas de la inmunidad celular y humoral
Inmunodeficiencia combinada severa
En este caso existe un defecto en el precursor linfoide, por lo tanto no se
expresan clulas T ni clulas B.

4. Deficiencias de la funcin fagoctica.
Pueden existir defectos en el nmero de los neutrfilos (neutropenia) o la
funcin de ellos.

La funcin depende de:
Movimiento en respuesta al estmulo quimiotctico, (depende de la integridad
del citoesqueleto y del sistema contrctil de la clula)
Adherencia, (depende de molculas de adhesin).
Endocitosis (depende de la expresin de ciertos receptores para IgG, C3b y de
la fluidez de la membrana)
Destruccin de las partculas ingeridas.

En general las deficiencias de los neutrfilos son:
Deficiencias de la quimiotaxis
Deficiencias de la adhesin
Deficiencias de la fagocitosis
Deficiencias en la destruccin de las partculas extraas

5. Deficiencias del complemento
Pueden afectar a cualquiera de los componentes del complemento (C1q,
C2,C4, C3,C5, C6,C7,C8,C9) como de los elementos reguladores (Inhibidor de
C1).

INMUNODEFICIENCIAS SECUNDARIAS

Son ms frecuentes que las inmunodeficiencias primarias y son
consecuencias de enfermedades capaces de alterar cualitativamente o cuantitativamente
al sistema inmune. Por otra parte, estn las inmunodeficiencias iatrognicas por el uso
mdico de drogas citostticas e inmunosupresoras.

Entre las patologas asociadas a inmunodeficiencia secundarias estn:
Infecciones virales
Infecciones bacterianas
Infecciones parasitarias
Desnutricin
Deficiencias de oligoelementos y vitaminas
Enfermedades asociadas a perdidas de protenas
Sndrome nefrtico
Enteropatas
Neoplasias


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BASES INMUNOLOGICAS DE GRUPOS SANGUINEOS

El presente captulo pretende entregar las bases inmunolgicas que
permitan entender la estructuracin y funcionamiento de algunos grupos sanguneos.

I. SISTEMA ABO.

El sistema ABO es el ms importante en las transfusiones sanguneas y es
crtico en la tecnologa de transplante de rganos. Fue descrito en 1900 por
Landsteiner, clasificando a las personas en 4 grupos basado en la presencia o
ausencia en los glbulos rojos de dos antgenos: A y B. Estos cuatro grupos son
llamados AB, A, B y O I, II, III y IV respectivamente.

Una caracterstica de este sistema es que las personas de un grupo presentan
anticuerpos dirigidos contra el antgeno que esa persona no tiene. As por ejemplo,
una persona A tiene anticuerpos anti-B, que son capaces de aglutinar fuertemente
glbulos rojos B o AB; el grupo B tiene anticuerpos anti A; el grupo O posee
anticuerpos anti A y anti B en su plasma. (Ver Tabla I).

Tabla I. Sistema ABO.


Antgenos

Eritrocitos

Distribucin (%)



Anticuerpos
en Plasma

Transfusin
compatible con
dador

Genotipo
Fenotipo

Blancos

Negros

Asiticos

Chilenos

AA
AO

A

40

27

28

31

Anti B

A, O.

BB
BO

B

11

20

27

9

Anti A

B, O

AB

AB

4

4

5

2

---

AB, A, B, O

OO

O


45

49

40

58

Anti A y Anti
B

O

1. Antgenos A, B y B.
Eptopes del sistema ABO se encuentran en oligosacridos terminales de
glicoprotenas. Los antgenos A, B y H estn estrechamente relacionados representando
diferentes determinantes de la misma molcula. As fucosa determina la sustancia H,
galactosa al antgeno B y N-acetilgalactosamina al antgeno A.

En aproximadamente el 80% de los hombres, los antgenos A y B tambin
estn presentes como mucopolisacridos en secreciones (saliva, sudor, jugo gstrico).
Estas personas son llamadas secretoras en que la sustancia secretada es qumicamente
diferente, pero inmunolgicamente idntica a la encontrada en los glbulos rojos.
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La secrecin es controlada por alelos Se y se, siendo Se dominante. Solo
los recesivos homocigotos (se/se) son no-secretores (20%).

2. Anticuerpos de grupo.
Son llamados isohemaglutininas que se presentan naturalmente, y por ello, a
veces, son tambin llamados anticuerpos naturales. Todos son del tipo IgM, que es
un tipo molecular de anticuerpo que posee una potente actividad aglutinante.

An cuando no se conoce con certeza el estmulo que genera su produccin,
se supone que pueden hacerlo determinantes A y B presente en polisacridos de
bacterias intestinales u otros microorganismos que pueden llegar al intestino. Evidencia
a favor de esta hiptesis es el hecho que estos anticuerpos no estn presentes al
nacimiento y se desarrollan durante el primer ao de vida, probablemente como
consecuencia de la colonizacin del tracto digestivo.

3. Gentica.
Los antgenos de grupo son controlados por 3 alelos: A, B y O. A y B son
dominantes sobre O, pero son codominantes entre ellos. Estos alelos codifican enzimas
de transferencia que permiten transferir residuos de azcares a una estructura base. As,
los genes A y B determinan la presencia de antgeno A y B respectivamente; el gen O es
inactivo y no codifica ni A ni B. Sin embargo, los eritrocitos O tienen una glicoprotena
de membrana llamada sustancia o antgeno H.

4. Ontogenia.
La molcula primaria es un paraglobsido que corresponde a un
tetrasacrido con una galactosa terminal. Genes ubicados en el cromosoma 1 codifican
una enzima llamada fucosil-transferasa que agrega fucosa a nivel de la galactosa
terminal del paraglobsido. Se genera as la sustancia H. Sobre la sustancia H pueden
actuar genes ubicados en el cromosoma 9, llamados genes A y genes B. El gen A
codifica una n-acetil galactosamina (galnac) transferasa, que agrega un grupo galnac a
la galactosa de la sustancia H. El gen B codifica una galactosil-transferasa que
transfiere galactosa sobre la galactosa de la sustancia H.


Se genera as el antgeno A (galnac en sustancia H) y el antgeno B
(galactosa en sustancia H). (Ver. Fig. 1).














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Fig. 1. Estructura qumica de antgenos A, B y H en el sistema sanguneo ABO.

El gen O no codifica enzimas, de modo que en la superficie de eritrocitos O,
slo se encuentran grandes cantidades de sustancia H.

Ya que la sustancia H es comn a todos los grupos (en A, B y AB no se
alcanza a saturar toda) en ningn grupo se produce anticuerpos anti H. Sin embargo, en
rarsimas ocasiones estos s se producen contra la sustancia H del grupo O. Este es el
grupo Bombay, que carece del gen fucosil transferasa y por lo tanto, no puede generar
sustancia H. Como sta es la base de los grupos A y B, estos individuos son O (no
tienen A ni B) y hacen anticuerpos contra A, B y H ya que no poseen esos antgenos.
Esto genera una situacin muy compleja, ya que tales individuos solo pueden recibir
sangre de otro grupo igual.

En resumen, los antgenos A, B y H estn presentes en eritrocitos, clulas
epiteliales y endoteliales. Las reacciones transfusionales se dan en caso de
incompatibilidad dador receptor, lo que lleva a destruccin de las clulas transferidas
por hemlisis u opsonizacin. Para evitar esta reaccin transfusional debe haber
compatibilidad dador-receptor; particularmente debe precaverse que los anticuerpos del
receptor no puedan reaccionar contra los antgenos del dador.


II. SISTEMA RH.
Este sistema fue descrito en 1940 por Landsteiner y Wiener quienes
encontraron que antisuero de conejo producido contra eritrocitos de Macacus Rhesus,
aglutinaba los glbulos rojos de aproximadamente el 85% de los humanos analizados.
Estos, tenan en su superficie un antgeno que fue llamado Rh (por Rhesus),
denominndose Rh+a quienes lo tienen y Rh- a quienes no lo tienen.






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1. Antgeno.
El antgeno Rh se puede detectar en fetos de 2-3 semanas de gestacin y est
bien desarrollado al momento del nacimiento. Este antgeno es de naturaleza proteica y
se encuentra ubicado solamente en la membrana de eritrocitos, no encontrndose en
otras clulas ni en secreciones del organismo.

A diferencia del sistema anterior, los individuos Rh-, no presentan
anticuerpos naturales contra el antgeno Rh, y la nica forma en que se producen es por
inmunizacin.

2. Gentica.
Se estima que hay ms de 30 distintas especificidades antignicas del
antgeno Rh. Estas estn codificadas por un locus simple Rh, con genes estrechamente
ligados y muchos alelos (brazo corto del cromosoma 1).

El antgeno D es el inmungeno ms fuerte y el ms importante de todos los
antgenos Rh. Sobre el 90% de los casos de incompatibilidad Rh se atribuyen
al antgeno D (Ver Tabla II).

Tabla II. Fenotipos Rh y su frecuencia en USA.

3. Incompatibilidad materno-fetal.
Problemas de incompatibilidad pueden producirse cuando madres Rh-
gestan un hijo Rh+. Durante la primera gestacin no hay problemas. Sin embargo, al
momento del parto, glbulos rojos del feto pasan al organismo materno induciendo una
respuesta inmune anti Rh, basada en anticuerpos IgG. En una segunda gestacin, con
un feto Rh+la madre ya tendr una alta tasa de IgG anti Rh, que puede atravesar la
placenta (por su fragmento Fc) y reaccionar con los eritrocitos del feto induciendo su
destruccin por clulas fagocticas del hgado. Esto produce una anemia hemoltica,
que tiene como mecanismo compensatorio en el feto una mayor liberacin de
eritroblastos, por lo que este cuadro se llama eritroblastosis fetal. La forma usada
clnicamente para prevenir este cuadro se basa en inyectar, al momento del parto 24-
48 hrs. despus, IgG anti Rh.

Fenotipo
(Nomenclatura
Fischer-Race



Frecuencia %


Reaccin con
anti D


Designacin grupo
Rh

DCe

54

+

Rh+
DCE 15 + Rh+
DcE 4 + Rh+
Dce 2 + Rh+
dce 13 - Rh-
dCe 15 - Rh-
dcE 0.5 - Rh-
dCE - - Rh-

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4. Test de Coombs.
Con el fin de poder determinar anticuerpos IgG anti Rh tanto en la madre
como en los eritrocitos del feto, se dise el test de Coombs directo e indirecto, que se
efecta de acuerdo al siguiente esquema:
























III. GRUPOS SANGUINEOS MENORES

A modo de ejemplo, se incluyen algunos grupos sanguneos menores (Ver Tabla III).

1. Grupo Lewis
Existen dos alelos: Lea y Leb , que codifican molculas estructuralmente
relacionadas al sistema ABO, pero que difieren en dos aspectos:

a) Los genes que regulan estos antgenos no estn ligados al locus ABO y
b) Las sustancias Lea y Leb son glicoprotenas que se encuentran en saliva y
suero y que se adsorben en la superficie del glbulo rojo. Antgenos Lea
pueden causar reacciones transfusionales.

2. Grupo MN
Es un grupo sanguneo menor e independiente del sistema ABO. Los
eritrocitos de cada individuo tienen antgeno M o N o ambos. Estas molculas son
codificadas (cromosoma 4) por los alelos codominantes M y N. La actividad antignica
est relacionada a glicoforina, una glicoprotena de 16.000 d de peso molecular.




Test de Coombs directo Test de Coombs indirecto
Feto Rh+ Madre Rh-
Glbulos rojos fetales
lavados (cubiertos con
IgG materna)
Suero materno
(con anticuerpos anti Rh)
Agregar Glbulos rojos Rh+
y lavar para eliminar
anticuerpos libres que no se
unieron al antgeno Rh.
Agregar anticuerpos de
conejo anti IgG humana
Agregar anticuerpos de
conejo anti IgG humana
Aglutinacin
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3. Grupo Kell
El grupo Kell posee 2 formas allicas K y k. Aproximadamente el 10% de
la poblacin posee el antgeno K que es altamente inmunognico. Este antgeno,
presente en los glbulos rojos, puede inducir la generacin de anticuerpos por
inmunizacin al momento del parto o transfusin.

Tabla III.

1
Poblacin blanca, USA.































Grupo

Loci

Antgenos

Frecuencia
1

fenotipo


Kell

1

K o k

K

9%
k 91%

MN 1 M o N MM 28%
MN 50%
NN 22%

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NEOPLASIAS E INMUNIDAD

Un tumor representa, en general, el crecimiento de una simple clula que
ha sufrido una transformaci maligna y que expresa antgenos especficos de tumor
(AET). La caracterstica ms notoria de las clulas tumorales es su crecimiento
anrquico, causado por mutaciones que sacan a la clula de su control normal de
crecimiento. Los genes celulares que causan cncer cuando su funcin o expresin son
alterados se llaman proto-oncgenes. Los genes virales responsables de inducir esta
transformacin, directamente, se denominan oncgenos.

ANTIGENOS TUMORALES.
Corresponde a antgenos presentes en la superficie de clulas malignas y
que no estn presentes en las clulas normales. Existen tambin los llamados antgenos
asociados a tumores (AAT) que corresponde a una sobreexpresin a nivel de membrana
de antgenos cualitativamente no diferente a los normales, inducidos por oncogenes.
Otra categora de antgenos son los llamados antgenos oncofetales, que corresponden a
estructuras que estn presentes normalmente en clulas fetales o embrionarias y que
desaparecen en el individuo adulto.


CLASIFICACION DE ANTIGENOS TUMORALES.

Pueden clasificarse en cuatro categoras, que difieren en el factor que induce
la malignidad y las propiedades inmunoqumicas del antgeno tumoral.

1. Antgenos inducidos por carcingenos qumicos o fsicos.

Los antgenos inducidos por carcingenos qumicos muestran poqusima o
nula cross-reactividad; as cada tumor muestra una especificidad antignica nica.
En otras palabras, tumores diferentes inducidos por el mismo carcingeno son
antignicamente diferentes. Con los agentes fsicos, como radiacin X, ocurre lo
mismo.

Ya que muchos tumores humanos son atribuidos a agentes ambientales
qumicos y fsicos tales como radiacin, humo y alquitran de cigarrillos, se generan
tumores que no reaccionan cruzadamente, por lo que su diagnstico, profilaxis o
terapia inmunolgica son muy difciles.

2. Antgenos inducidos por virus.

Estudios en modelos animales han demostrado que tumores inducidos por
virus DNA o RNA oncognicos muestran gran cross-reactividad. Esto es porque un
virus oncognico en particular induce la expresin del mismo antgeno en las clulas
tumorales, independientemente del tejido de origen.

3. Antgenos oncofetales.

Muchos tumores expresan en la superficie, o secretan a la sangre, productos
que se producen normalmente durante la etapa embrionaria o fetal, pero que estn
ausentes o estn en muy baja concentracin en el adulto. Uno de estos antgenos es
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el antgeno carcinoembrionario (ACE), que se encuentra en pacientes con cncer del
tracto gastrointestinal. Otro es la alfa-feto-protena, presente particularmente en
hepatomas y carcinoma testicular.

4. Antgenos de tumores espontneos.

Corresponde a tumores de origen desconocido. El comportamiento es
variable: a veces se observa cross-reactividad y en otras no.


RESPUESTA INMUNE ANTITUMORAL.

Los mecanismos efectores de la respuesta inmune humoral o celular, capaz
de destruir tumores in vitro se resumen en la Tabla I. En general, la destruccin de
clulas tumorales por estos mecanismos es ms eficiente con tumores dispersos que con
tumores slidos.

Tabla I. Mecanismos efectores humoral y celular en la destruccin de tumores.

A. Mecanismos humorales.
Lisis por anticuerpo +complemento.
Opsonizacin (anticuerpo y complemento).
Prdida de adhesin tumoral por anticuerpos.

B. Mecanismos celulares.
Destruccin por clulas T citotxicas.
Citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC).
Destruccin por macrfagos activados.
Destruccin por clulas NK.

Limitaciones de la efectividad de la respuesta antitumoral.

El fenmeno de surveillance aparece como la primera y especfica defensa
contra clulas neoplsicas. Sea ello correcto o no, parece muy claro que se induce una
respuesta inmune contra tumores. Por qu entonces, y a pesar de ello, el tumor
continua creciendo en el husped?. Hay varios mecanismos posibles que pueden hacer
que las clulas tumorales escapen de la destruccin por el sistema inmune. (Ver Tabla
II).

Tabla II. Mecanismos por los que tumores escapan a la accin del sistema inmune.

1. 1. El tumor se ubica en sitios inmunolgicamente privilegiados.
2. 2. Modulacin antignica de los antgenos tumorales.
3. 3. Presencia de factores facilitadores o bloqueadores.
4. 4. Clulas T supresoras.
5. 5. Supresin inmune por productos tumorales.
6. 6. Masa tumoral excesiva.
7. 7. Baja inmunogenicidad
8. 8. Seleccin inmune de variantes pobres en antgenos.

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1. Sitios privilegiados. Hay lugares del organismo que son inaccesibles al sistema
inmune, por lo que se llaman sitios privilegiados. Ej. cristalino, tejido nervioso
central.

2. Modulacin antignica. Las clulas tumorales pueden cambiar sus caractersticas
antignicas o perder sus antgenos, lo que le permite escapar de la accin del sistema
inmune.

3. Factores facilitadores o bloqueadores. Desde un punto de vista terico la
destruccin de la clula tumoral puede ser bloqueada por antgenos solubles,
circulantes, derivados del tumor al unirse a los anticuerpos o clulas antitumorales.
Adems, puede producirse cierta interferencia entre algunos mecanismos. Por
ejemplo, anticuerpos antitumorales al unirse a los antgenos de superficie del tumor,
pueden producir proteccin y favorecer el crecimiento tumoral al bloquear la accin
de linfocitos T citotxicos.

4. Clulas T supresoras. Es posible que el sistema inmune genere clulas T
supresoras antgeno-especficas y que por esta va se regule la respuesta a los
antgenos tumorales.

5. Supresin no especfica. Ciertos tipos de tumores sintetizan varios compuestos
tales como TGF-, prostaglandinas, alfa-feto-proteina que han demostrado su
capacidad de inhibir la respuesta inmune.

6. Masa tumoral. La respuesta inmune antitumoral tiene una capacidad definida de
accin frente a clulas tumorales. Cuando la masa tumoral crece excesivamente o
con mucha rapidez, puede sobrepasar la capacidad del sistema inmune, lo que se
traduce en una progresin del tumor.

7. Baja inmunogenicidad. No se produce el complejo pptido: MHC ligando,no se
expresan molculas de adhesin o molculas co-estimuladoras.

DIAGNOSTICO.

Desde un punto de vista general, el diagnstico inmunolgico puede
realizarse determinando la presencia de antgenos especficos de tumor o los productos
de la respuesta inmune frente al tumor (Ver Tabla III).

Tabla III. Diagnstico Inmunolgico

A. Deteccin de clulas tumorales o sus productos.
1. Protenas de Bence-J ones (tumores de clulas plasmticas).
2. Alfafetoprotena (AFP)(Cncer heptico).
3. Antgeno carcinoembrionario (ACE)(Cncer gastrointestinal).
4. Antgeno prosttico especfico (APE).
5. Antgeno especfico de tumor.

B. Deteccin de respuesta inmune.
1. Anticuerpos antitumorales.
2. Inmunidad celular antitumoral
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A1. Deteccin de protenas de mieloma. Los tumores de clulas plasmticas se
traducen en concentraciones anormalmente altas, en el suero, de
inmunoglobulinas monoclonales, o de sus cadenas livianas (Protena de Bence-
J ones) en la orina. La concentracin de estas protenas de mieloma en la sangre u
orina es el reflejo de la masa del tumor.
A2. Deteccin de alfafetoprotena. AFP es una protena de alta concentracin en el
feto y que cae bruscamente al nacer (2.0 ng/ml). Los niveles de AFP estn
elevados en pacientes con cncer heptico, aunque tambin estn elevados en
alteraciones no neoplsicas del hgado como cirrosis y hepatitis. Niveles de 500-
1000 ng/ml, a pesar de ello, generalmente indican la presencia de un tumor.
A3. Deteccin de antgeno carcinoembrionario. ACE es una glicoprotena producida
normalmente por clulas del tracto gastrointestinal, particularmente del colon. Al
malignizarse las clulas, el ACE es vaciado a la sangre en lugar del colon.
Concentraciones sanguneas de ACE que exceden 2.5 ng/ml, generalmente
indican malignidad y tal como en los dos casos anteriores los niveles del ACE
pueden ayudar al monitoreo del crecimiento o regresin del tumor.
Aqu tambin puede encontrarse altos niveles en casos de cirrosis heptica y
enfermedades inflamatorias del digestivo o pulmones.
A4. Deteccin de antgeno prosttico especfico. APE es actualmente muy usado
para la deteccin precoz del cncer prosttico. Niveles sobre 8-10 ng/ml sugieren
cncer prosttico. En todo caso, se requieren test confirmatorios ya que la
prostatitis e hipertrofia benigna de la prstata tambin cursan con elevacin de los
niveles de APE.
A5. Deteccin de antgeno especfico de tumor. La disponibilidad de anticuerpos
monoclonales especficos para tumor no slo ha mejorado la deteccin de
antgenos y productos asociados a los tumores, sino tambin la localizacin y
definicin en imagen del tumor. La inyeccin de anticuerpos radiomarcados,
permite la visualizacin de los anticuerpos unidos al tumor, por tomografa
asistida computacionalmente. Este mtodo permite la deteccin de pequeas
metstasis, as como las masas tumorales primarias.

B. Deteccin de respuesta inmune. An cuando se ha demostrado que pacientes
con ciertos tumores desarrollan inmunidad celular y humoral en contra del tumor,
en general su determinacin no constituye un mtodo confiable para la deteccin
precoz del cncer.


INMUNOTERAPIA DEL CANCER.

An cuando en la literatura hay reportes de tratamiento inmunolgico del cncer,
en la actualidad representa un mecanismo de efectividad limitada ya sea cuando se usa
solo o en conjuncin con otras formas de terapias.

En la Tabla IV se presenta un resumen de las aproximaciones al tratamiento ms
usadas.





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Tabla IV. Cuadro resumen de Inmunoterapia de tumores.


a) Activa
No especfica BCG, Corynebacterium Parvum,
levamisole.

Especfica Vacunas de clulas tumorales, extractos
celulares, antgenos purificados o
recombinantes o idiotipos.





b) Pasiva

No especfica

Clulas LAK, citoquinas.

Especfica Anticuerpos solos o acoplados a drogas,
pro-drogas, toxinas o radioistopos.
Anticuerpos biespecficos.
Clulas T.

Mixta Clulas LAK y anticuerpos biespecficos.


As mismo en la Tabla V se incluye el efecto de modificadores de la respuesta
inmunolgica y en la Tabla VI el efecto de citoquinas.



Tabla V. Inmunoterapia activa no especfica: Modificadores de Respuesta Biolgica
(MRB).


Tipo de MRB

Ejemplo

Efecto principal


Producto bacteriano

BCG, C. parvum
Dimicolato trehalosa


Activa macrfagos y clulas NK.
Molculas sintticas Copolimero Pyran,
poli I:C.

Induce produccin de Interferon.
Citoquinas IFN, IFN, IFN
IL-2, TNF.

Activa macrfagos y clulas NK.
Hormonas Timosina, Timulina
Timopoyetina.

Modula funcin T.






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Tabla VI. Terapia de tumores con citoquinas





























Citoquina


Tipo de tumores y efecto

Efecto citoquina y posible
mecanismo antitumoral.


IFN

Remisin prolongada en
leucemia.
Efecto leve sobre carcinomas

Posible efecto citosttico sobre
tumor.
Aumento en expresin de MHC
clase I, citostasis

IFN Carcinoma de ovario Aumenta expresin de MHC
clase I y II, activa macrfagos.
Activa clulas T citotxicas.
Citosttico.

IL-2 Remisin en cncer renal y
mieloma.
Activacin y proliferacin de
clulas T, activacin de NK.

TNF Reduce ascitis maligno Activacin de macrfagos y
linfocitos.

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RELACION MATERNO-FETAL


Uno de los aspectos ms intrigantes, relacionados a los aloinjertos, es la
razn por la cual una madre no reacciona inmunolgicamente contra el feto,
estableciendo una reaccin de rechazo. El feto es tolerado, a pesar de ser
antgenicamente incompatible con la madre, ya que posee los antgenos paternos no slo
del CMH sino tambin de loci menores de histocompatibilidad.

Est claro si, que la madre puede montar respuestas inmunes contra
antgenos fetales (ej: anticuerpos anti Rh) y de hecho mujeres multparas tienen altas
tasas de anticuerpos contra los antgenos del CMH del padre y en realidad esta es la
mejor fuente de anticuerpos para la tipificacin del CMH humano. La pregunta es
entonces cmo el feto puede llegar normalmente a trmino, sin que el sistema inmune
de la madre lo rechace, ya que la inmunidad materna es plenamente funcional?.
Veremos algunos posibles mecanismos.

1. Mecanismos maternos que protegen el desarrollo fetal.
La placenta, que es un tejido derivado del feto, logra aislar al feto de la
accin de clulas T de la madre. La placenta humana se clasifica como hemocorial
(la sangre materna est en contacto directo con el trofoblasto fetal) y no expresa las
protenas clsicas del CMH (clase I y II) probablemente debido a un inhibidor
transcripcional. En relacin a esto es importante destacar que al no expresarse
molculas clase I, la eventual presentacin de antgeno a clulas T citotxicas no
existe. La capa externa del trofoblasto expresa, en su superficie, molculas de
histocompatibilidad de clase I, llamadas HLA G. Estas molculas no corresponden a
las clsicas, son ms pequeas, no polimrficas y no est claro su rol. Pueden limitar
la invasividad del trofoblasto y ciertamente proteger al feto. Lo que si est claro es
que estas molculas slo se encuentran en el trofoblasto temprano de carcter
altamente invasivo.

Adicionalmente siendo la tolerancia al feto un proceso multifactorial, hay
evidencias en animales de experimentacin que demuestran la existencia de
tolerancia materna especfica contra los aloantgenos CMH paternos.

Un factor adicional que puede contribuir es la secrecin de citoquinas en la
interfase materno-fetal. Tanto el epitelio uterino como el trofoblasto secretan
citoquinas que tienden a inducir respuestas de tipo Th2: TGF, IL-4 e IL-10, que
desvia la respuesta inmune local hacia la rama humoral, inhibe la respuesta celular y
tienen un efecto beneficioso sobre el crecimiento del embrin. Por el contrario la
induccin o inyeccin de citoquinas tipo TH-1 como IFN- e IL-12, tienden a
interrumpir el embarazo y favorecen el aborto espontneo.

Por otra parte, es probable que existan, adems, produccin de factores que
inducen inmunosupresin local no especifica, como es el caso de ciertas hormonas.
Protenas asociadas a la gestacin, incluyendo lactgeno placentario, se han
demostrado inmunosupresores in vitro, aunque su rol in vivo no est tan claro. Sin
embargo, pacientes con bajos niveles de estas protenas tienen una mayor tendencia
al aborto. En la Tabla I se puede ver algunos de estos factores.

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Tabla I. Posibles factores sricos que pueden causar inmunosupresin materna
inespecfica.
1. Protenas plasmticas
Protenas asociadas a la gestacin.
Protenas de fase aguda.
Alfa-feto-protena.

2.

Hormonas
Hormonas placentarias.
Progesterona y estrgeno
Corticosteroides


2. Proteccin del feto y neonato contra infecciones.
El feto se hace inmunocompetente muy temprano en su vida intrauterina
(ver Tabla II). Una infeccin intrauterina con virus de la rubela induce la
produccin de IgM fetal tan pronto como a la semana 11. Sin embargo, la proteccin
principal deriva de la transferencia materna de IgG a travs de la placenta. Este
traspaso comienza alrededor de las 12 semanas, an cuando el grueso del traspaso
ocurre despus de la semana 32 de vida intrauterina.

Tabla II. Desarrollo de la capacidad inmune en un feto humano

Tiempo de Gestacin
(Semanas)

Desarrollo del sistema inmune

5,5

Sntesis de complemento
6 Desarrollo del epitelio tmico
7 Linfocitos en sangre
7-9 Linfocitos en timo
10 Clulas T identificables en el timo
11 IgM srica (en infeccin)
Clulas B en hgado y bazo
13 Actividad graft-vs-host
17 IgG fetal en suero (infeccin)
30 IgA en suero



En un recin nacido, a trmino, el nivel de IgG es equivalente al de la madre. Sin
embargo en esta etapa neonatal hay escasa sntesis de IgG o IgA. Esto se traduce en
una cada en lo niveles de anticuerpos (se cataboliza la IgG materna) entre los 3-6
meses, en que por ello se produce una relativa deficiencia de inmunoglobulinas. (Ver
Fig. 1.)




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Fig.1. Niveles de anticuerpos en el feto y neonato.


3. Proteccin a travs de leche materna.
Las propiedades anti-infecciosas de la lactancia materna han sido
ampliamente establecidas. Hay una inmensa lista de factores que contiene la leche
materna de gran beneficio para el recin nacido, algunos de los cuales se presentan
en la Tabla III.

Tabla III. Factores portadores de la leche materna.


IgA
Clulas
Complemento

Factor antiestafilococo
Lisozima
Lactoperoxidasa
Lactoferrina
Factor bifidus

-
-
-

-
-
-
-
-

Especialmente secretora
Macrfagos, polimorfonuclares, linfocitos.
Ayuda a la proteccin activndose va
alterna.
Inhibe crecimiento de estafilococos.
Ataca la pared bacteriana.
Agente antiestreptococo.
Inhibe el crecimiento de bacterias.
Es un polisacrido que promueve el
crecimiento de lactobacillus bifidus que
mantiene el pH intestinal bajo inhibiendo el
crecimiento de E. coli, Candida, etc.









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REACCION ANTGENO-ANTICUERPO in vitro


La reaccin Antgeno-Anticuerpo (Ag-Ac) permite al laboratorista
informado determinar en un fluido corporal, la presencia de anticuerpos especficos para
el antgeno usado en la reaccin o al revs, determinar la presencia de un antgeno
determinado en fluidos corporales o trozos de tejido. En el primer caso la presencia de
anticuerpos y el nivel de ellos en el suero de un animal nos da pistas para el diagnstico
de una enfermedad determinada o nos informa de su vacunacin y estado inmune. En
el segundo caso cuando determinamos el antgeno si este corresponde a un
microorganismo, nos informar de su presencia, podremos por tanto sacar nuestras
conclusiones y establecer las medidas teraputicas del caso. Existen tambin ocasiones
que, teniendo el anticuerpo adecuado podemos determinar la presencia de un
determinado constituyente del organismo que nos interesa, por ejemplo: niveles de
progesterona u otra hormona.


GENERALIDADES

Sabemos ya que el antgeno reacciona con su respectivo anticuerpo en
forma especfica, esta interaccin ocurre entre el determinante antignico y el sitio de
unin al antgeno presente en el anticuerpo, originado por las partes variables de las
cadenas pesada y liviana del anticuerpo.

La unin entre el anticuerpo y el antgeno se produce por la
complementariedad espacial entre ambas estructuras y no involucra la formacin de
enlaces covalentes, por lo tanto la unin del antgeno con el anticuerpos es reversible.
La unin Ag-Ac involucra la formacin de mltiples uniones no-covalentes, que
pueden agruparse en cuatro tipos de fuerza (Ver tabla 1).

Tabla1: Fuerzas involucradas en la interaccin Antgeno-Anticuerpo.




Tipos de fuerzas Descripcin
Puentes de hidrgeno Se producen entre estructuras atmicas apropiadas, tales
como grupos hidroflicos ( OH, NH
2
y COOH )
Fuerzas electrostticas Fuerzas de atraccin dadas por grupos de tomos del
anticuerpo con tomos de distinta carga ubicados en el
determinante antignico.
Fuerzas de Van der Waals Interaccin entre nubes de electrones de los componentes
del determinante antignico y del sitio de unin del
anticuerpo.

Fuerzas hidrofbicas Estn originadas en zonas de anticuerpo y del antgeno con
caractersticas no-polares, hidrofbicas, como las cadenas
laterales de valina, leucina y fenilalanina. de tal manera que
al interactuar repelen el agua.
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AFINIDAD DE LOS ANTICUERPOS

La afinidad de un anticuerpo se define como la fuerza con la cual se unen
antgeno y anticuerpo. La determinacin de la afinidad de un anticuerpo por su
antgeno es compleja, ya que cada anticuerpo tiene al menos dos sitios de unin al
antgeno y a su vez el antgeno puede tener varios determinantes antignicos
independientes. Si embargo, en el laboratorio podemos determinar la afinidad de un
anticuerpo usando un hapteno, que equivale a un determinante antignico.

Antgeno (Ag) + Anticuerpo (Ac) Complejo Antgeno-Anticuerpo (Ag-Ac)

Luego aplicamos la Ley de accin de Masas y podemos expresar la
Constante de Equilibrio de la reaccin de asociacin o Constante de AFINIDAD.

[Ag-Ac]
Ka =----------------
[Ag][Ac]

Donde [ ] corresponde a la concentracin molar en estado de equilibrio. Por
lo tanto cuando el equilibrio este desplazado a la derecha, tendremos un anticuerpo de
ALTA AFINIDAD.

De lo anterior se desprende que la interaccin antgeno-anticuerpo, cuando
esta se realiza "in vitro" depende de condiciones fisicoqumicas, tales como
temperatura, pH, osmolaridad, La alteracin de estos parmetros puede llevar a la
disociacin del complejo antgeno anticuerpo formado.

Sin embargo, hay algunas excepciones a esta regla general, los anticuerpos
de las aves por ejemplo dan las mejores reacciones de precipitacin en condiciones de
hiperosmolaridad y la IgG bovina aglutina el antgeno en forma ptima a pH 3,6.



TECNICAS DE LABORATORIO QUE UTILIZAN LA
REACCION ANTGENO-ANTICUERPO.

A continuacin enumeraremos y explicaremos las bases generales de las
tcnicas de laboratorio que se basan en las reacciones Ag-Ac, las cuales son utilizadas
tanto en diagnstico como en la investigacin. Las podemos clasificar de la siguiente
forma:

A. Reacciones que no requieren de reactivos marcados
1. Reacciones de Aglutinacin
Aglutinacin directa
Aglutinacin pasiva
Inhibicin de la aglutinacin




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2. Precipitacin en medio lquido.
Precipitacin en tubo (anillo de Ascoli)
Nefelometra

3. Precipitacin en medio semi-slido.
Inmunodifusin doble.
Inmunodifusin radial.
Inmunoelectroforesis.
Inmunoelectroforesis en "Rocket".
Contrainmunoelectroforesis.

4. Activacin del complemento.


AGLUTINACIN:

La aglutinacin es definida como la formacin de conglomerados o grumos de
clulas, este fenmeno fue primero observado con los glbulos rojos y suero de individuos
de diferentes grupos sanguneos. Hoy sabemos que esto se debe a una reaccin
ANTIGENO-ANTICUERPO, entre los antgenos presentes en la superficie del glbulo
rojo y los anticuerpos especficos para los glbulos rojos, es lo que se denomina
hemoaglutinacin directa, sta fue una de las primeras pruebas de laboratorio que
permiti la determinacin de la reaccin antgeno-anticuerpo (Fig. 1).






















Fig. 1. Esquema de hemoaglutinacin directa.



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Basada en el mismo principio de aglutinacin, se desarroll la prueba de
hemoaglutinacin pasiva (Fig. 2), usando como partcula transportadora el glbulo rojo,
ya que se unen a la superficie de estas clulas antgenos solubles, permitiendo el uso de
esta prueba en la determinacin de anticuerpos especficos para antgenos no particulados.
Sin embargo, rpidamente se deriv a partculas ms estables que los glbulos rojos,
apareciendo las partculas de poliestireno, por ejemplo ltex, como elementos carrier. La
prueba de aglutinacin en ltex es usada en la actualidad en el diagnstico de patologas
como rubola, artritis reumatoide, lupus eritematoso, etc.
Figura 3.









































Glbulos rojos
Fig. 2. Esquema de hemoaglutinacin pasiva.
Antgeno
Anticuerpo
IgG
Antgeno
Ltex
Aglutinacin
pasiva
Anticuerpo
Fig. 3. Test de fijacin en ltex.
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Otra tcnica que usa los principios de aglutinacin es la inhibicin de
aglutinacin, ampliando el rango de aplicacin no slo a la determinacin de anticuerpos
sino tambin de antgenos, podemos mencionar la determinacin de gonadotrofina
corionica humana, como prueba de embarazo. Esta prueba consiste en hacer reaccionar
conjuntamente antgenos unidos a un carrier (ltex o GR), antgeno libre (no particulado)
con el anticuerpo especfico, de esta forma, el antgeno libre inhibe la reaccin de
aglutinacin al reaccionar con los anticuerpos presentes (Fig. 4).















Fig. 4. Esquema de inhibicin de la aglutinacin

Variantes de esta tcnica existen muchas: Se pueden unir los anticuerpos a
partculas para que stas ms el antgeno soluble o particulado aglutinen o se puede
agregar a la reaccin un anticuerpo anti la Ig usada en la reaccin (Reactivo de Coombs)
para aumentar la aglutinacin.



PRECIPITACIN.

La reaccin antgeno-anticuerpo se produce en este caso entre un antgeno
soluble y el anticuerpo correspondiente. El complejo inmune se visualiza como
turbidez si se utiliza medio lquido y como bandas opacas de precipitado si se utiliza un
medio semislido. Aunque tiene importancia el pH, los electrolitos del buffer y la
temperatura, lo que determina que exista una reaccin de precipitacin es la
concentracin relativa del antgeno y del anticuerpo. Tal como se observa en la figura
5, la precipitacin mxima se encuentra en la zona de equivalencia y la cantidad
disminuye en las zonas de exceso de antgeno o de anticuerpo.









Antgeno particulado
Anticuerpo
Antgeno libre
Ausencia de Aglutinacin
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Precipitacin en medio lquido:

Anillo de Ascoli: Si uno pone en un tubo de dimetro pequeo un suero hiperinmune
que contenga anticuerpos contra un antgeno X y sobre l, sin mezclar pone el antgeno
en solucin, a los pocos minutos en la interfase se podr ver a simple vista la formacin
de un anillo opaco de precipitado que est formado por complejo del Ag X con los
anticuerpos del suero (Fig. 6).





















Fig. 6. Anillo de Ascoli



Fig. 5. Curva de precipitacin de la reaccin antgeno anticuerpo. Se obtiene al mezclar
cantidades crecientes de antgeno con una cantidad constante de anticuerpo.
Antgeno
Anillo de Precipitacin
Antisuero
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Nefelometra: Esta tcnica permite determinar los niveles de Ag o de Ac en soluciones
diluidas (baja concentracin ) que al mezclarse forman pequeos agregados que
producen una nubosidad o turbidez que pueden ser medidos por la dispersin de una
fuente de luz incidente. Se puede obtener una gran sensibilidad usando luz
monocromtica de un rayo lser y por adicin de polietilenglicol que aumenta el tamao
de los agregados.

Precipitacin en medio semislido:

Los mtodo de precipitacin en medio semislido , tambin llamados
precipitacin en gel, permiten detectar la presencia y/o concentracin de Ag y/o Ac
presentes, por la formacin de bandas opacas de precipitado que corresponden a
complejos Ag-Ac en la zona de equivalencia.

Prueba de inmunodifusin doble o de Ouchterlony: En un agar dispuesto sobre un
vidrio se disponen una serie de orificios previamente establecidos, las soluciones de Ag
y Ac se colocan en perforaciones adyacentes y se deja difundir hasta formar lneas o
bandas de precipitacin. La intensidad, nitidez y posicin de estas bandas es
dependiente de la concentracin de Ag y Ac

Esto permite analizar mezclas de antgenos relacionados frente a un suero
inmune polivalente. Se pueden distinguir tres tipos de reactividad, como se muestra en
la figura 7.


























Fig. 7. Esquemas de inmunodifusin doble

Reaccin de
Identidad

Reaccin de no
identidad

Reaccin de identidad
parcial

A = Antgeno A a - A = Anti A
B = Antgeno B a - B = Anti B
A = Antgeno A ms otros determinantes a - A = Anti A
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Inmunodifusin Radial o Prueba de Mancini: Una placa de vidrio o plstico se cubre
con una capa de agar al que se ha incorporado un antisuero monoespecfico, es decir con
anticuerpos contra un solo antgeno. Luego se hacen orificios en el agar en una
disposicin lineal tal como se muestra en la figura 8. Posteriormente se siembran
cantidades conocidas del antgeno que al difundir en el agar forman un anillo de
precipitacin una vez que halla alcanzado la zona de equivalencia. El dimetro del
anillo est en proporcin directa a la concentracin del antgeno y es posible construir
una curva de calibracin. En forma paralela a la siembra del antgeno conocido para
construir la curva de calibracin, EN LA MISMA PLACA, se ponen las muestras
problema cuyo anillo se mide y el resultado se interpola en la curva.

El Mancini se usa normalmente para determinar los niveles de
inmunoglobulinas de un animal, en este caso las Igs problema son el antgeno, contra
el cual se usa en el agar un suero monovalente anti IgM, IgG o IgA. Esta tcnica no
permite determinar IgE ni IgD.



































Anillos de Precipitacin Gel con anticuerpos
(Dimetro
Concentracin de antgeno
Fig. 8. Esquema de inmunodifusin radial
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Inmunoelectroforesis: Esta tcnica permite el anlisis de antgenos presentes dentro
de una mezcla, los que son separados mediante electroforesis. Se basa en dos pasos
principales como se muestra en la figura 9.
a) Electroforesis: Los componentes antignicos puestos en pocillos en una placa con
agar se hacen migrar en un campo elctrico, logrando la separacin de los diferentes
antgeno con propiedades electroforticas diferentes.
b) Luego de separar los componentes antignicos segn su carga elctrica se abre una
canaleta paralela al sentido que corri la muestra y en esta canaleta se pone el suero
con los anticuerpos especficos para los componentes o el componente de la mezcla
antignica que queremos investigar. Se dejan difundir los anticuerpos que al
encontrar su punto de equivalencia con cada uno de los antgenos de la muestra
formarn arcos de precipitado. En la figura 10 se observan los arcos de precipitacin
de algunas protenas al realizar la inmunoelectroforesis de suero humano contra
antisuero humano




































Antgeno

Anticuerpos
Fig. 9. Esquema de inmunoelectroforesis

Fig. 10. Inmunoelectroforesis de suero. Se muestran las lneas de precipitacin producidas
por algunas de las protenas sricas ms importantes.
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Electroforesis en "Rocket": Esta tcnica aplica el mismo principio bsico de la
tcnica de inmunodifusin radial, en que tambin se usa agar con anticuerpos
disueltos, dispuesto sobre un vidrio, las muestras para establecer la curva de
calibracin y las muestras problemas se ponen en orificios dispuestos en forma lineal y
la placa se somete a la accin de un campo elctrico que hace migrar al antgeno
(cargado negativamente) hacia el polo (+) originando en vez de un halo circular un
precipitado en forma de cohete cuya altura se puede medir fcilmente. La altura del
rocket es proporcional a la concentracin de la muestra (Fig. 11).
























Fig. 11. Esquema de Electroforesis en "rocket"




Contrainmunoelectroforesis: Se realiza sobre un gel de agar, donde el pH del buffer
de elctroforesis permite que el Anticuerpo se cargue positivamente y el Antgeno
negativamente (Fig. 12). La sensibilidad de este mtodo es 20 veces mayor que a la
inmunodifusin doble, ya que tanto Ag y Ac son forzados a migrar hacia los polos
correpondientes, evitando la difusin libre de los componentes.








Arco de
Precipitacin

Gel de Agarosa
con
anticuerpos
Concentracin
de antgeno


Pocillo con antgeno
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Fig. 12. Esquema de contrainmunoelectroforesis

TECNICA BASADAS EN LA ACTIVACIN DE COMPLEMENTO

En estos casos se hace uso de la capacidad de lisis del complemento cuando
anticuerpos que activan este sistema reconocen antgenos sobre clulas vivas o
alternativamente se puede medir su consumo en una reaccin antgeno-anticuerpo que
de otra forma es invisible. (Ejemplo: Virus +anticuerpos anti virus).

Tcnicas basadas en la capacidad ltica del Complemento: Clulas que llevan
naturalmente al antgeno que nos interesa o a las que les ha sido pegado un antgeno
son puestas en presencia de anticuerpos capaces de fijar complemento (IgM o IgG), con
especificidad para ese antgeno, se los deja reaccionar y luego se agrega complemento
(suero de Cuy o de conejo generalmente), los anticuerpos unidos al antgeno disparan la
cascada del complemento y las clulas son lisadas: cuando las clulas son glbulos
rojos se habla de HEMOLISIS, cuando son otras clulas se habla de ENSAYO DE
CITOTOXICIDAD.

La hemlisis puede ser cuantificada en un fotocolormetro o
espectrofotmetro y el ensayo de citotoxicidad mediante microscopa usando tinciones
vitales.

Fijacin de complemento: En esta tcnica se hace reaccionar antgeno y anticuerpo en
presencia de complemento, luego en un segundo paso la solucin en que estaba el Ag, el
Ac y el C, se usa como fuente de complemento para lisar glbulos rojos +anti
glbulos rojos. Si el complemento est presente, hay lisis de los glbulos rojos, esto
quiere decir que, en la primera reaccin este NO SE GASTO por lo tanto fue negativa.
Por el contrario si la reaccin de hemlisis usada como indicador es negativa, el
complemento SE CONSUMI en la primera reaccin por lo tanto la reaccin fue
positiva.

B. Reacciones que requieren de reactivos marcados:
1. Marcados con enzimas:
ELISA
Western-blot
Dot-immunobinding
Inmunohistoqumica.


Agar pH8
Ag Ac
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2. Marcados con fluorocromos:
Inmunofluorescencia directa
Inmunofluorescencia indirecta
Citofluorometra

3. Marcados con elementos radiactivos:
Radioinmunoanalisis
Autorradiografa


ELISA

El ensayo de ELISA (Enzime Linked ImmunoSorbent Assay), tambin
denominado EIA (EnzimeImmunoAssay), permite la deteccin y cuantificacin de
sustancias tales como: pptidos, protenas, anticuerpos y hormonas, en los cuales el
elemento crucial de la deteccin es la reaccin antgeno-anticuerpo.


Componentes bsicos del ELISA

Fase slida: El soporte o fase slida de los ensayos de ELISA son usualmente placas de
microtitulacin de 96 pocillos, hechas de poliestireno o polivinilo, al cual se unen los
anticuerpos y otras protenas usando buffers tales como : carbonato-bicarbonato pH
9.6, buffer fosfato salino (PBS) pH 7.2. Cuando se requiere unir molculas pequeas,
tales como pptidos y drogas, es necesario usar placas activadas (Ej. placas activadas
con anhidrido maleico).

Enzimas: Una caracterstica clave de todos los ELISAs es el hecho que uno de los
reactantes esta marcado con una enzima, lo ms comn es usar un anticuerpo marcado
(denominado conjugado), la siguiente tabla muestra las enzimas ms utilizadas y sus
caractersticas:

Enzima Sustrato Color Lectura
Peroxidasa 3,3,5,5-
Tetrametilbenzidina
(TMB)
Azul 450 nm
o-fenilendiamina (OPD) Cafe 492 nm

Fosfatasa alcalina p-Nitrofenilfosfato
(pNPP)

Amarillo 405 nm

Tipos de ensayo: Los tipos de ensayo ms comunes son ELISA indirecto, ELISA
sandwich y ELISA competitivo.





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Amplificacin de los ensayo de ELISA: Con el fin de aumentar la sensibilidad
tambin se pueden aplicar un sistema de amplificacin como la interacciones no
inmunolgicas AVIDINA-BIOTINA, lo mas comn es utilizar anticuerpos marcados
con biotina (anticuerpos biotinilados) y complejos de avidina-enzima o streptoavidina-
enzima.

1.- ELISA indirecto

Consiste en unir un antgeno a la placa de ELISA, luego se aplica un
primer anticuerpo que reconoce el antgeno en cuestin, luego se agrega un
segundo anticuerpo conjugado, este anticuerpo debe estar conjugado a una enzima
(peroxidasa o fosfatasa alcalina) y reconoce al primer anticuerpo, posteriormente se
agrega el sustrato adecuado para la enzima, generando un producto final coloreado,
cuya intensidad es determinada mediante la lectura de densidad ptica (DO) a la
longitud de onda adecuada (Fig. 13).

Aplicacin: La mayora de los kits de ELISA disponibles para el diagnstico de
enfermedades que cursan con una respuesta inmune humoral, se pesquisan en el
suero humano los anticuerpos dirigidos contra los patgenos virales
(Citomegalovirus, Virus Eptein Barr,HIV, Rubeola, Varicella-Zoster,Hanta virus)
parasitarios (Toxoplasma gondii, Entamoeba histolytica, Taenia solium, Toxocara
canis) y bacterianos (Haemophilus influenzae, Neisseria meningitidis, Clostridium
tetani).












2.- ELISA sandwich

Este mtodo consiste en la unin a la fase slida de un primer anticuerpo
(anticuerpo de captura) el que reconoce al antgeno en cuestin, luego se agrega el
antgeno, en concentraciones conocidas para la realizacin de curva de calibracin o
la muestra problema (Fig. 14). Luego se agrega un segundo anticuerpo (anticuerpo
detector conjugado) tambin esta dirigido contra el antgeno y esta conjugado a una
enzima(si es un anticuerpo monoclonal debe reconocer un eptope diferente al que
reconoce el anticuerpo de captura), finalmente se agrega el sustrato adecuado para la
enzima, generando un producto final coloreado, cuya intensidad es determinada
mediante la lectura de DO a la longitud de onda adecuada.




A
A
Antgen
Segundo anticuerpo
conjugado a enzima
Primer
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Aplicacin: La determinacin de concentracin de hormonas (PRL, LH,
Progesterona, Estradiol, etc), citoquinas (IL-1, IL-2, TNF, etc) en suero y otros
fluidos biolgicos de humano y de otras especies. Semi-cuantificacin del antgeno
de membrana del virus de la hepatitis B.











Fig. 14. Esquema ELISA "sandwich".


3.- ELISA competitivo usando un antgeno marcado:

Este mtodo consiste en la unin a la fase slida de un anticuerpo de
captura, especfico para el antgeno en estudio, luego se agrega en forma conjunta el
conjugado (Antgeno marcado con enzima) + antgeno no marcado en
concentraciones conocidas (para la obtencin de la curva de calibracin) o la muestra
problema, finalmente se agrega el sustrato adecuado para la enzima, generando un
producto coloreado, cuya intensidad es determinada mediante lectura de densidad
ptica (Fig. 15).

Luego se grafica densidad ptica versus concentracin de antgeno no
marcado, en que a menor concentracin de antgeno se obtendr mayor lectura de
densidad ptica.

Aplicacin: Determinacin cuantitativa de drogas y pptidos pequeos.















Fig. 15. Esquema ELISA competitivo usando antgeno marcado

Antgen
Segundo anticuerpo
conjugado a enzima
Anticuerpo de captura
Antgeno l ibre
Antgeno
con enzima
Anticuerpo de
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WESTERN BLOT:

Consiste en separar los componentes antignicos de una mezcla de protenas
en un gel de poliacrilamida (PAGE-SDS) y transferir los antgenos ya separados
mediante corriente elctrica a papel de Nitrocelulosa. All, se inicia el proceso de
inmunodeteccin, utilizando anticuerpos especficos a los antgenos separados, luego se
agrega un segundo anticuerpo conjugado (anti- inmunoglobulina conjugado a una
enzima), posteriormente se aplica el sustrato para la enzima utilizada (Fig. 16). A
diferencia de de los sustratos utilizados en ELISA, aqu el sustrato debe generar un
producto insoluble, el cual queda inmobilizado en el papel de nitrocelulosa, de esta
manera nosotros podemos identificarlos y estudiar sus caractersticas fsico-qumicas
como su peso molecular.


















Fig. 16. Esquema de Western-blot.

DOT IMMUNOBINDING:

Esta tcnica se basa en la inmovilizacin de antgenos en papel de
nitrocelulosa directamente, se coloca una gota de antgeno directamente sobre el papel
de NC, luego se siguen los pasos descritos para un ELISA indirecto, con la diferencia
que se usa un sustrato que debe dar un producto coloreado insoluble, esto ocurre en el
sitio de la aplicacin del antgeno formando un PUNTO coloreado (DOT), el que revela
la reaccin positiva. Este es un ensayo generalmente cualitativo, no cuantitativo.


INMUNOHISTOQUMICA O INMUNOCITOQUMICA

Las tcnicas de inmunocitoqumicas se basan en la identificacin de un
constituyente (antgeno) del tejido "in situ" por medio de una reaccin Ag-Ac, que
puede ser visualizada mediante microscopa de luz o electrnica. En este caso se usan
anticuerpos marcados con enzimas y dirigidas contra algn antgeno particular de un
tejido o clula, para esto un corte histolgico o un extendido celular se incuba con el
anticuerpo marcado, se lava y luego se le pone el sustrato que da un precipitado
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coloreado justo sobre el lugar en que ha ocurrido la reaccin antgeno-anticuerpo,
pudiendo as determinar la ubicacin dentro de la clula o en el tejido aplicado.

Ac tambin existen otras variantes ms complejas que permiten visualizar
la reaccin a veces en mejores condiciones que la metodologa descrita. Lo que hemos
descrito es la tcnica bsica o directa. Tambin es comn la tcnica indirecta, donde el
primer anticuerpo no est marcado, por lo que se usa un segundo anticuerpo marcado
con la enzima que sirve de elemento detector.

INMUNOFLUORESCENCIA

Esta tcnica consiste en utilizar anticuerpos marcados con sustancias
llamadas fluorocromos, las cuales tienen la propiedad para ser excitadas con luz de una
determinada longitud de onda y emitir luz a otra longitud en el espectro visible. El
fluorocromo ms usado es la fluorescena pero tambin existen otros como la
phycoeritrina, eritrina, rodamina, etc.
Se conocen bsicamente dos formas de ensayo (Fig. 17), la
inmunofluorescencia directa, que permite detectar antgenos en tejidos o clulas, para
esto debemos tener un corte histolgico o un extendido celular sobre un portaobjeto, se
incuba la muestra con un anticuerpo especfico conjugado a fluorescena u otro
fluorocromo, se lava y se observa bajo el microscopio de fluorescencia.

La otra forma de ensayo es la inmunofluorescencia indirecta, en este caso
el tejido se incuba en primer lugar con el anticuerpo especfico no marcado y luego se
aplica un "segundo anticuerpo" marcado (conjugado anti-Ig con fluorocromo).
Luego se observa bajo el microscopio de fluorescencia. Esta tcnica tambin puede ser
aplicada al estudio de anticuerpos especficos, tales como autoanticuerpos.



















Fig. 17. Esquema de inmunofluorescencia



Inmunofluorescencia
directa
Inmunofluorescencia
indirecta
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CITOMETRA DE FLUJO

La citometra de flujo se basa en la utilizacin de anticuerpos marcados con
fluorocromos, los que son aplicados a una suspencin celular, la cual se hace pasar por
un instrumento llamado CITOMETRO DE FLUJ O. En este instrumento las clulas
atraviesan un rayo laser y son analizadas individualmente, las clulas que tienen unido
un anticuerpo marcado con fluorocromo emiten luz a una determinada longitud de onda,
lo que es detectado por el instrumento, luego mediante programas computacionales, el
instrumento nos entrega informacin acerca del nmero de clulas fluorescentes y de la
intensidad de la fluorescencia. Esta tcnica facilita la identificacin y tipificacin de
diferentes poblaciones celulares con una extraordinaria sensibilidad eficacia y rapidez.

.
RADIOINMUNOENSAYO

Este ensayo se basa en la utilizacin de antgenos o anticuerpos
radiomarcado, marcados con isotopos radiactivos como
125
I o eventualmente
131
I.

Existen para este ensayo, como para todos, variantes que permiten
acomodarlo a las condiciones que requiere el laboratorista. Clsicamente fue diseado
como un ensayo de competencia. Si queremos determinar pequeas cantidades de un
antgeno como por ejemplo una hormona en una muestra se procede de la siguiente
forma: Se toma antgeno marcado (cantidad conocida) y se hace reaccionar con una
cantidad de anticuerpos que previamente sabemos es equivalente (al reaccionar no sobra
ni antgeno ni anticuerpos libres) al precipitar los anticuerpos llevarn el antgeno
marcado con ellos, pudindose determinar la radioactividad en el precipitado en un
contador para radiacin. Luego se hace la misma reaccin pero en presencia de la
muestra problema, si esta contiene el antgeno (la hormona) ocupar los sitios de unin
de los anticuerpos, no dejando que el antgeno marcado (radioactivo) se le una (el
antgeno marcado es desplazado), se precipitan los anticuerpos y stos en caso de ser
positiva la muestra arrastrarn menos antgeno marcado.
Previamente se debe tener confeccionada una curva de calibracin que nos
permita calcular, en el caso de nuestro ejemplo, cuanta hormona (Ag) tena la muestra
problema.

La curva de calibracin se hace usando cantidades conocidas de antgeno no
marcado que se agregan a los reaccionantes, generando una curva donde la radiactividad
es inversamente proporcional a la cantidad de antgeno en nuestra muestra..

Tambin tenemos el Radioinmunoensayo directo. En este caso para evaluar
la presencia o cantidad de antgeno insoluble (unido a una fase slida o particulado) los
anticuerpos marcados con un istopo radioactivo se hacen reaccionar con el antgeno, se
lava y luego se ve la cantidad de radiacin que contiene la muestra problema, la que
ser directamente proporcional a la cantidad de anticuerpos marcados unidos, y estos
correspondern a su vez a la cantidad de antgeno problema en la muestra.





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AUTORRADIOGRAFA

Se usa para determinar y localizar antgeno en un corte de tejido o en
clulas. Para esto se hace una preparacin histolgica convencional sobre un
portaobjeto, luego sta se incuba con los anticuerpos radioactivos, se lava y se cubre con
un film o emulsin fotogrficos y se incuba por das o semanas de manera que la
emisin radioactiva de los anticuerpos marcados, unidos al antgeno que nos interesa
forme un precipitado de sales de plata en la emulsin fotogrfica que se visualiza como
puntos microscpicos sobre la estructura histolgica donde se encuentra el antgeno.


CONSIDERACIONES GENERALES.

En general, para medir el anticuerpo presente en un determinado suero se
utiliza el mtodo de diluciones, generalmente logartmicas (Log base 2), es decir, de
doble en doble (1:1; 1:2; 1:4; 1:8; 1:16) esto da origen al concepto de TITULO que es la
ltima dilucin del anticuerpo que da positiva la reaccin.

Cualquier tcnica permite TITULAR un suero inmune, la sensibilidad sin
embargo depender de la tcnica que se utilice.

En el momento de escoger la tcnica que se va a usar se debern tener en
cuenta muchos factores:

- Sensibilidad requerida.
- Equipamiento necesario.
- Costo.
- Exactitud y precisin que sean requeridos.
- Tiempo que demande.
- Fragilidad de los reactivos.

Del anlisis cuidadoso de estos factores depender la tcnica que se requiera
implementar: Esto es vlido para un individuo que atiende un sofisticado laboratorio,
para el clnico de campo que necesita una rpida forma de detectar un antgeno o un
anticuerpo o para un estudiante que planea su tesis o un trabajo de investigacin.


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