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n
Mitad concent.
Concent.
recomendada
Doble concent.
Control
79
Tabla 16. Estadsticos descriptivos y T student para E.coli con 2 min de
contacto con el desinfectante.
Estadisticos Descriptivos
Numero de
muestras Mnimo Mximo Media
Desviacin
estndar
Concentracin 0.5%
6
25.00
55.00
42.5000
13.69306
Concentracin 1% 6 68.00 80.00 74.6667 3.82971
Concentracin 2% 6 100.00 100.00 100.0000 .00000
Control
6 100.00 100.00 100.0000 .00000
Analisis T-Student
Valor = 75
95% Intervalo de
confianza
t
Grados
de
Libertad
Sig. (1 y 2-
colas)
Diferencia
de medias
Bajo Alto
Concentracin
0.5%
-5.814 5 .001 .002 -32.50000 -46.8700 -18.1300
Concentracin
1%
-.213 5 .419 .840 -.33333 -4.3524 3.6857
En los anlisis descriptivos la media para la concentracin 0.5% fue de 42.50
con una desviacin estndar de 13.69 ,para la concentracin 1% la media fue
de 74.666 y la desviacin estndar de 3.829 y para la concentracin 2% y el
control la media fue de 100 por lo tanto arrojo una desviacin estndar de 0.
(Ver tabla 16).
En la prueba de T student para la concentracin 0.5% no existe evidencia
estadsticamente significativa de que el porcentaje de inhibicin del
desinfectante ante el microorganismo sea mayor al 75% ya que p<0.05
mientras que para la concentracin 1% existe evidencia estadsticamente
significativa de que el porcentaje de inhibicin del desinfectante ante el
80
microorganismo es mayor al 75% ya que p>0.05 (intervalo de confianza del
95%). Para la concentracin 2% la media fue de 100 por lo tanto el
desinfectante fue efectivo en un 100%. (Ver tabla 16).
Tabla 17. Estadsticos descriptivos para E. coli con 5 min de contacto con el
desinfectante.
Estadisticos Descriptivos
Numero de
muestras Mnimo Mximo Media
Desviacin
estndar
Concentracin 0.5%
6
31.25
62.50
48.9583
10.01301
Concentracin 1% 6 75.00 100.00 85.0000 11.83216
Concentracin 2% 6 100.00 100.00 100.0000 .00000
Control
6 100.00 100.00 100.0000 .00000
Analisis T-Student
Valor = 75
95% Intervalo de
confianza
t
Grados
de
libertad
Sig. (1 y 2-
colas)
Diferencia
de medias
Bajo Alto
Concentracin
0.5%
-6.371 5 .000 .001 -26.04167 -36.5497 -15.5337
Concentracin
1%
2.070 5 .046 .093 10.00000 -2.4171 22.4171
En los anlisis descriptivos la media para la concentracin 0.5% fue de 48.9
con una desviacin estndar de 10.01, para la concentracin 1% la media fue
de 85.0 y la desviacin estndar de 11.83 y para la concentracin 2% y el
control la media fue de 100 por lo tanto arrojo una desviacin estndar de 0.
(Ver tabla 17).
En la prueba de T student para la concentracin 0.5% no existe evidencia
estadsticamente significativa de que el porcentaje de inhibicin del
81
desinfectante ante el microorganismo sea mayor al 75% ya que p<0.05
mientras que para la concentracin 1% existe evidencia estadsticamente
significativa de que el porcentaje de inhibicin del desinfectante ante el
microorganismo es mayor al 75% ya que p>0.05 (intervalo de confianza del
95%). Para la concentracin 2% la media fue de 100 por lo tanto el
desinfectante fue efectivo en un 100%. (Ver tabla 17).
Tabla 18 . Estadsticos descriptivos para E. coli con 10 min de contacto con
el desinfectante.
Estadisticos Descriptivos
Numero de
muestras Mnimo Mximo Media
Desviacin
estndar
Concentracin 0.5%
6
40.00
62.50
50.4167
9.54158
Concentracin 1% 6 100.00 100.00 100.0000 .00000
Concentracin 2% 6 100.00 100.00 100.0000 .00000
Control
6 100.00 100.00 100.0000 .00000
Analisis T-Student
Valor = 75
95% Intervalo de
confianza
t
Grados
de
Libertad
Sig. (1 y 2-
colas)
Diferencia
de medias
Bajo Alto
Concentracin
0.5%
-6.311 5 .000 .001 -24.58333 -34.5966 -14.5701
En los anlisis descriptivos la media para la concentracin 0.5% fue de 50.41
con una desviacin estndar de 9.54, para las concentraciones 1% - 2% y el
control la media fue de 100 por lo tanto arrojo una desviacin estndar de 0.
(Ver tabla 18).
82
En la prueba de T student para la concentracin 0.5% no existe evidencia
estadsticamente significativa de que el porcentaje de inhibicin del
desinfectante ante el microorganismo sea mayor al 75% ya que p<0.05
mientras que para las concentraciones 1% y 2% existe evidencia
estadsticamente significativa de que el porcentaje de inhibicin del
desinfectante ante el microorganismo es mayor al 75% ya que p>0.05
(intervalo de confianza del 95%), por lo tanto el desinfectante fue efectivo en
un 100%. (Ver tabla 18)
PORCENTAJE DE INHIBICIN DEL DESINFECTANTE LARK SANITIZER
ANTE E.coli.
Grafica 2 . Porcentaje de inhibicin del desinfectante Lark Sanitizer ante E.coli
7.2.3 Bacillus subtillis
Las siguientes tablas corresponden a los anlisis estadsticos descriptivos y
anlisis T student para el porcentaje de inhibicin del desinfectante Lark
Sanitizer ante B. subtillis.
0
20
40
60
80
100
120
2min 5min 10min
Tiempo
%
I
n
h
i
b
i
c
i
n
Mitad concent.
Concent.
recomendada
Doble concent.
Control
83
Tabla 19 .Estadsticos descriptivos y T student para B.subtillis con 2 min de
contacto con el desinfectante.
Analisis Estadisticos
Numero de
muestras Mnimo Mximo Media
Desviacin
estndar
Concentracin 0.5%
6
.00
.00
.0000
.00000
Concentracin 1% 6 50.00 75.00 62.9167 11.44734
Concentracin 2% 6 70.00 82.00 78.1667 4.75044
Control
6 100.00 100.00 100.0000 .00000
Anlisis T-Student
Valor = 75
t
Grados
de
libertad
Sig. (1 y 2-
colas)
Diferencia
de medias
95% Intervalo de
confianza
Bajo Alto
Concentracin
0.5%
-2.586 5 .024 .049 -12.08333 -24.0966 -.0701
Concentracin
1%
1.633 5 .081 .163 3.16667 -1.8186 8.1519
En los anlisis descriptivos la media para la concentracin 0.5% fue de 0 con
una desviacin estndar de 0 ,para la concentracin 1% la media fue de
62.91 y la desviacin estndar de 11.44, para la concentracin 2% la media
fue de 78.16 y la desviacin estndar de 4.75 mientras que el control arroj
una media de 100 por lo tanto se obtuvo una desviacin estndar de 0. (Ver
tabla 19).
En la prueba de T student para la concentracin 0.5% no se realiz por tener
una media de 0, para la concentracin 1% no existe evidencia
estadsticamente significativa de que el porcentaje de inhibicin del
84
desinfectante ante el microorganismo sea mayor al 75% ya que p<0.05
mientras que para la concentracin 2% existe evidencia estadsticamente
significativa de que el porcentaje de inhibicin del desinfectante ante el
microorganismo es mayor al 75% ya que p>0.05 (intervalo de confianza del
95%). (Ver tabla 19)
Tabla 20. Estadsticos descriptivos para B.subtillis con 5 min de contacto
con el desinfectante.
Estadisticos Descriptivos
Numero de
muestras Mnimo Mximo Media
Desviacin
estndar
Concentracin 0.5%
6
.00
.00
.0000
.00000
Concentracin 1% 6 67.50 100.00 86.2500 15.30931
Concentracin 2% 6 100.00 100.00 100.0000 .00000
Control
6 100.00 100.00 100.0000 .00000
Analisis T-Student
Valor = 75
95% Intervalo de
confianza
t
Grados
de
libertad
Sig. (1 y 2-
colas)
Diferencia
de medias
Bajo Alto
Concentracin
0.5%
1.800 5 .065 .132 11.25000 -4.8161 27.3161
En los anlisis descriptivos la media para la concentracin 0.5% fue de 0 con
una desviacin estndar de 0 ,para la concentracin 1% la media fue de
86.25 y la desviacin estndar de 15.30, para la concentracin 2% y el
control la media fue de 100 por lo tanto se obtuvo una desviacin estndar
de 0. (Ver tabla 20)
85
En la prueba de T student para la concentracin 0.5% no se realiz por tener
una media de 0, para las concentraciones 1% y 2% existe evidencia
estadsticamente significativa de que el porcentaje de inhibicin del
desinfectante ante el microorganismo sea mayor al 75% ya que p<0.05
(intervalo de confianza del 95%). (Ver tabla 20).
Tabla 21. Estadsticos descriptivos para B.subtillis con 10 min de contacto
con el desinfectante.
Estadistica Descriptiva
Numero de
muestras Mnimo Mximo Media
Desviacin
estndar
Concentracin 0.5%
6
.00
.00
.0000
.00000
Concentracin 1% 6 100.00 100.00 100.0000 .00000
Concentracin 2% 6 100.00 100.00 100.0000 .00000
Control
6 100.00 100.00 100.0000 .00000
En los anlisis descriptivos la media para la concentracin 0.5% fue de 0 con
una desviacin estndar de 0 ,para la concentracin 1% , 2% y el control la
media fue de 100 y la desviacin estndar de 0 (Ver tabla 21).
La prueba de T student no se realiz en este caso por tener desviaciones
estndar de 0 por lo tanto no exista diferencia de medias.
86
PORCENTAJE DE INHIBICIN DEL DESINFECTANTE LARK SANITIZER
ANTE B.subtillis.
Grafica 3 . Porcentaje de inhibicin del desinfectante Lark Sanitizer ante
B.subtillis
7.2.4 Candida albicans
Las siguientes tablas corresponden a los anlisis estadsticos descriptivos y
anlisis T student para el porcentaje de inhibicin del desinfectante Lark
Sanitizer ante C.albicans.
Tabla 22 . Estadsticos descriptivos y T student para C.albicans con 2 min de
contacto con el desinfectante.
0
20
40
60
80
100
120
2min 5min 10min
Tiempo
%
I
n
h
i
b
i
c
i
n
Mitad concent.
Concent.
recomendada
Doble concent.
Control
87
Estadisticos Descriptivos
Numero de
muestras Mnimo Mximo Media
Desviacin
estndar
Concentracin 0.5%
6
37.50
62.50
50.8333
8.16497
Concentracin 1% 6 65.00 75.00 71.5833 4.36368
Concentracin 2% 6 75.00 75.00 75.0000 .00000
Control
6 100.00 100.00 100.0000 .00000
Analisis T-Student
Valor = 75
95% Confidence
Interval of the
Difference
t
Grados
de
libertad
Sig. (1 y 2-
colas)
Diferencia
de medias
Bajo Alto
Concentracin
0.5%
-7.250 5 .000 .001 -24.16667 -32.7353 -15.5981
Concentracin
1%
-1.918 5 .056 .113 -3.41667 -7.9961 1.1627
En los anlisis descriptivos la media para la concentracin 0.5% fue de 58.83
con una desviacin estndar de 8.164 ,para la concentracin 1% la media fue
de 71.58 y la desviacin estndar de 4.363, para la concentracin 2% la
media fue de 75.0 con una desviacin estndar de 0 y el control obtuvo una
media de 100 con una desviacin estndar de 0. (Ver tabla 22).
En la prueba de T student para la concentracin 0.5% no existe evidencia
estadsticamente significativa de que el porcentaje de inhibicin del
desinfectante ante el microorganismo sea mayor al 75% ya que p<0.05
mientras que para la concentracin 1% existe evidencia estadsticamente
significativa de que el porcentaje de inhibicin del desinfectante ante el
microorganismo es mayor al 75% ya que p>0.05 (intervalo de confianza del
95%), para la concentracin 2% no se realiz la prueba ya que el valor
arrojado para la desviacin estndar corresponde a 0 por lo tanto no exista
diferencia de medias. (Ver tabla 22).
88
Tabla 23. Estadsticos descriptivos para C. albicans con 5 min de contacto
con el desinfectante.
Estadisticos Descriptivos
Numero de
muestras Mnimo Mximo Media
Desviacin
Estndar
Concentracin 0.5%
6
55.00
75.00
63.3333
7.18795
Concentracin 1% 6 75.00 75.00 75.0000 .00000
Concentracin 2% 6 75.00 75.00 75.0000 .00000
Control
6 100.00 100.00 100.0000 .00000
Analisis T-Student
Valor = 75
t
Grados
de
libertad
Sig. (1 y 2-
colas)
Diferencia
de medias
95% Intervalo de
confianza
Bajo Alto
Concentracin
0.5%
-3.976 5 .005 .011 -11.66667 -19.2100 -4.1234
En los anlisis descriptivos la media para la concentracin 0.5% fue de 63.33
con una desviacin estndar de 7.187 ,para la concentracin 1% la media fue
de 75 y la desviacin estndar de 0, para la concentracin 2% la media fue
de 75 con una desviacin estndar de 0 y el control obtuvo una media de
100 con una desviacin estndar de 0. (Ver tabla 23)
En la prueba de T student para la concentracin 0.5% no existe evidencia
estadsticamente significativa de que el porcentaje de inhibicin del
desinfectante ante el microorganismo sea mayor al 75% ya que p<0.05
(intervalo de confianza del 95%), para las concentraciones 1% y 2% no se
realiz la prueba ya que el valor arrojado para la desviacin estndar
corresponde a 0 por lo tanto no exista diferencia de medias. (Ver tabla 23).
89
Tabla 24. Estadsticos descriptivos para C. albicans con 10 min de contacto
con el desinfectante.
Estadisticos Descriptivos
Numero de
muestras Mnimo Mximo Media
Desviacin
Estndar
Concentracin 0.5%
6
100.00
100.00
100.0000
.00000
Concentracin 1% 6 100.00 100.00 100.0000 .00000
Concentracin 2% 6 100.00 100.00 100.0000 .00000
Control
6 100.00 100.00 100.0000 .00000
En los anlisis descriptivos la media para la concentraciones 0.5%, 1%, 2% y
el control fue de 100 con una desviacin estndar de 0 por lo tanto el
desinfectante tuvo un porcentaje de inhibicin del 100% (Ver tabla 24).
La prueba de T student no se realiz ya que los datos arrojaron una
desviacin estndar de 0 por lo tanto no exista diferencia de medias
PORCENTAJE DE INHIBICIN DEL DESINFECTANTE LARK SANITIZER
ANTE C.albicans.
Grafica 3 . Porcentaje de inhibicin del desinfectante Lark Sanitizer ante
B.subtillis.
0
20
40
60
80
100
120
2min 5min 10min
Tiempo
%
I
n
h
i
b
i
c
i
n
Mitad concent.
Concent.
recomendada
Doble concent.
Control
90
7.2.5 Aspergillus niger
Las siguientes tablas corresponden a los anlisis estadsticos descriptivos y
anlisis T student para el porcentaje de inhibicin del desinfectante Lark
Sanitizer ante A.niger.
Tabla 25. Estadsticos descriptivos y T student para A. niger con 2 min- 5
min-10 min de contacto con el desinfectante.
Estadisticos Descriptivos
Numero de
muestras Mnimo Mximo Media
Desviacin
estndar
Concentracin 0.5%
6
.00
.00
.0000
.00000
Concentracin 1% 6 .00 .00 .0000 .00000
Concentracin 2% 6 .00 .00 .0000 .00000
Control
6 100.00 100.00 100.0000 .00000
En los anlisis descriptivos la media para las concentraciones 0.5%, 1%, 2%
el control fue de 0 con una desviacin estndar de 0 por lo tanto el
desinfectante tuvo un porcentaje de inhibicin del 0%. El control arrojo una
media de 100% con una desviacin estndar de 0 (Ver tabla 25).
La prueba de T student no se realiz ya que los datos arrojaron una
desviacin estndar de 0 por lo tanto no exista diferencia de medias.
91
PORCENTAJE DE INHIBICIN DEL DESINFECTANTE LARK SANITIZER
ANTE A. niger.
Grafica 5 . Porcentaje de inhibicin del desinfectante Lark Sanitizer ante A.niger.
0
20
40
60
80
100
120
2min 5min 10min
Tiempo
%
I
n
h
i
b
i
c
i
n
Mitad concent.
Concent.
recomendada
Doble concent.
Control
92
8. DISCUSIN
8.1 Porcentajes de inhibicin
8.1.1 Staphylococcus aureus
Tal como se puede analizar en las tablas 8, 13 y en la figura 1 se demostr
que el desinfectante Lark Sanitizer a los dos minutos con una
concentracin a la mitad de la recomendada no tiene accin bactericida por
encima del criterio aceptado (75%) frente a este microorganismo. Al analizar
los datos empleando la concentracin al 1% que es la recomendada por la
casa comercial se observ un aumento en el porcentaje de inhibicin pero
tampoco cumpli con el mnimo de aceptacin (75%), sin embargo al
emplear una concentracin al 2% que es el doble de la recomendada se
logr un porcentaje de inhibicin del 100%.
En la tablas 8,14 y en la grfica 1 se demuestra que bajo 5 min de contacto
microorganismo-desinfectante la accin contra S.aureus es baja con la
concentracin a la mitad , al incrementarla a la recomendada y al doble
aumentan los porcentajes de inhibicin cumpliendo con el criterio de
aceptacin.
De la misma manera como se observa en la tabla 8,15 y grfica 1 a los 10
min se logr un aumento en el porcentaje de inhibicin a la mitad de
concentracin , mientras que a la concentracin recomendada y al doble el
porcentaje fue de 100%.
Esto demuestra que el dao est influido por el tiempo, y la concentracin
del agente, en este caso el desinfectante se debe usar a la concentracin
recomendada por el proveedor con un tiempo de cinco minutos, de lo
contrario al disminuir la concentracin y el tiempo no existe garanta de la
accin contra el microorganismo y al aumentar estos parmetros se corre el
riesgo de generar resistencias, y alterar el mecanismo de accin sobre estos
93
microorganismos que tal como observ en la revisin bibliografica
(MADIGAN,M.1991) se basa en la rpida atraccin del desinfectante con carga
positiva hacia la clula Gram. positiva con carga negativa en su superficie
gracias a los cidos teicicos presentes en su pared celular , posteriormente
el desinfectante acta contra los fosfolipidos presentes en la membrana
citoplasmtica inactivndola, destruyendo la integridad de la clula
liberndose al medio componentes que la integran, afectando el ATP y
cidos nucleicos compuestos de grupos fosfato (Mac Donell,G.1999)
producindose la muerte celular.
8.1.2 Escherichia coli
Los resultados de la inhibicin del desinfectante frente a E.coli se observan
en la tabla 9, al analizar las pruebas estadsticas se pudo concluir que a los
2-5 y 10 minutos de exposicin el desinfectante solo fue efectivo a la
concentracin recomendada y al doble ya que a la mitad no alcanz a
cumplir con el criterio aceptado.(Tabla16-17)
E.coli present un promedio de inhibicin de 74.7% (Tabla 16) con la
concentracin recomendada y en el menor tiempo empleado, cifra que
permite deducir que el desinfectante ejerce una buena accin sobre el
microorganismo y por ende se puede controlar (Grfica 2).
Su susceptibilidad se debi a que adems del peptidoglicano las bacterias
Gram. negativas poseen en su pared una capa adicional que no consta
solamente de fosfolipidos como la membrana citoplasmtica, sino que
contiene polisacridos y protenas (MADIGAN,M.1991). De esta manera el
compuesto activo del desinfectante polihexametilen biguanida se dirige a
los iones fosfato de los fosfolipidos ubicados en la membrana exterior y a los
que hacen parte del lipopolisacrido compuesto de (Heptosa-glucosa-
94
galactosa-n-acetilglucosamina y fosfato (MADIGAN,M.1991). As el
desinfectante desestabiliza la membrana y se une a los iones fosfato pero
de la membrana citoplasmtica que posee iones calcio y magnesio que
contribuyen a su estabilizacin a travs de interacciones inicas con los
grupos polares de carga negativa como el fsforo que al ser afectado por el
desinfectante rompe estos enlaces acabando con la estabilidad de la
membrana y permitiendo la fuga de componentes como el potasio e
interactuando con componentes que poseen la funcin fosfato como el ATP y
los cidos nucleicos (Mc Donell,G.1999), generando la muerte celular.
8.1.3 Bacillus subtillis
De acuerdo a los resultados obtenidos presentados en las tablas 10 y 20 , la
concentracin y el tiempo recomendado a utilizar para este microorganismo
es de 1% con cinco minutos de contacto.
Tal como se observa en la tabla 19 20 y 21 la concentracin a la mitad en
todos los tiempos evaluados fue totalmente ineficaz, la concentracin
recomendada (0.1%) fue til en los tiempos 5 y 10 mientras que la
concentracin al doble fue eficaz en todos los tiempos evaluados. (Grfica 3).
Comparndolo con S.aureus coco Gram. positivo la concentracin a la mitad
fue totalmente inefectiva en B. Subtillis mientras que al aumentarla a la
recomendada (concentracin al 1%) se igualaron los porcentajes de
inhibicin pero no los tiempos de contacto siendo Bacillus subtillis ms
resistente tal como se ve en las tablas 16 y 20.
Esta diferencia se debi tal vez a que est especie tiene la capacidad de
formar esporas como estructuras de resistencia , y si en el momento de
inocular el microorganismo en el tubo con la mitad de concentracin del
desinfectante existan bacterias esporuladas este tendra una dbil funcin
esporoesttica permitiendo as la recuperacin de las esporas en el medio
de cultivo al realizar la prueba de estras. Al aumentar el tiempo de contacto y
95
las concentraciones el desinfectante ejerci su accin contra las esporas
impidiendo la formacin del cortex entre la membrana interna y externa antes
de la maduracin y liberacin de la espora madura. (RUSELL,A.1990),
impidiendo nuevamente su desarrollo en el medio de cultivo propuesto para
desarrollar este estudio.
8.1.4 Candida albicans
El comportamiento de reduccin de esta especie frente al criterio de
aceptacin (75%) se evidenci a los cinco minutos con la concentracin
recomendada (tabla 23).
A los dos minutos de contacto tal y como se observa en la tabla 22 solo se
logr cumplir con el criterio de inhibicin aceptado para el desinfectante
aumentado la concentracin al doble, mientras que a los 10 minutos en todas
las concentraciones el porcentaje de inhibicin fue del 100% (Grfica 4).
No obstante se deben buscar breves plazos de destruccin de grmenes con
bajas concentraciones (WILDBRETT,G.2000) . As que para causar la lisis del
protoplasto y ocasionar la salida del material celular (MAC DONELL G.1999) se
deben manejar tiempos no mayores a cinco minutos y concentraciones que
no excedan la concentracin recomendada por la casa comercial 1% v/v.
8.1.5 Aspergillus niger
Este microorganismo para todas las concentraciones y todos los tiempos
evaluados en este estudio obtuvo un porcentaje de crecimiento del 100%
(tabla 12), lo que demuestra que el desinfectante probado no ejerce accin
funguicida ni fungiestatica (tabla 25- Grfica 5).
96
Los hongos son generalmente ms resistentes que las levaduras y
considerablemente ms resistentes que las bacterias no esporuladas. Las
esporas de los hongos son menos resistentes que las esporas bacterianas a
los agentes biocidas, (Mac Donell and Rusell. 1999)
Lo que tambin se corrobora con referencias bibliograficas (LEVEAU,J.2002)
ya que como se ha mencionado anteriormente el agente activo del
desinfectante polihexametilen biguanida acta primordialmente contra los
grupos fosfato, las paredes fngicas estn compuestas de polisacridos,
mientras que los lpidos, polifosfatos e iones inorgnicos forman nicamente
una matriz cementante (MADIGAN,M.1991) por lo cual el desinfectante no
puede ejercer su accin contra la quitina del hongo.
Segn los autores Mac Donall and Rusell estos microorganismos presentan
mecanismos de resistencia donde la clula presenta una barrera para reducir
la entrada de un agente microbiano; por esta razn se ha propuesto el uso de
este desinfectante a base de biguanidas polimricas con otras soluciones
que no conlleven a su desactivacin.
Por ejemplo la actividad fngica de los alcoholes esta bien documentada,
destruyen eficazmente las bacterias y los hongos pero no las endoesporas.
Tienen la ventaja de actuar y evaporarse con rapidez y de no dejar ningn
residuo. Dos de los ms usados son el etanol y el isopropanol (Tortora, G.
1993). La concentracin optima del etanol es de 70% con 5 minutos de
contacto. Es importante tener en cuenta que el alcohol puro es menos eficaz
que las soluciones acuosas de esta manera, con esta solucin es suficiente
para que se de una coagulacin de las protenas que trae como
consecuencia la perdida de las funciones celulares especificas, adems
pueden interferir con el metabolismo ejerciendo una accin bacterioesttica
97
que es debida a la inhibicin de la produccin de metabolitos esenciales para
la rpida divisin celular. (Aldana-Sarasa. 1999).
As mismo se ha utilizado conjuntamente con amonios cuaternarios para
incrementar su eficacia (Mateos, F.1999). Los cuales actan sobre las
protenas, por el efecto tensoactivo desnaturaliza la protena por disociacin
a nivel del grupo prosttico.
Afecta el metabolismo ya que interacta con las enzimas a nivel
citoplasmtico, estimulndola gliclisis y alterando la dinmica enzimtica de
la clula completando la accin de las biguanidas. (Aldana-Sarasa. 1999).
Es importante tener en cuenta que una mezcla inadecuada de estas
soluciones puede resultar en desactivacin de las mismas, por esta razn
hay que realizarlas siguiendo los parmetros adecuados.
Gracias a los resultados obtenidos se puede determinar que el desinfectante
Lark Sanitizer para uso sobre superficies present un buen
comportamiento inhibitorio sobre los microorganismos excepto A. niger,
teniendo un porcentaje igual o mayor al 75% utilizando la concentracin
recomendada por la casa comercial 1% v/v con cinco minutos de contacto
microorganismo desinfectante.
Es importante anotar que los controles realizados para esta metodologa
fueron satisfactorios con un 100% de crecimiento.
98
9. CONCLUSIONES
Los datos de la evaluacin del desinfectante Lark Sanitizer
demostraron que la dilucin de uso segn la casa comercial proveedora
es efectiva para los microorganismos E.coli ATCC 25922, S.aureus
ATCC 25923, C.albicans ATCC 18804, B.subtillis ATCC 9372 .
Se logro concluir segn los datos de la evaluacin del desinfectante
Lark Sanitizer que el tiempo efectivo en este estudio contra los
microorganismos E.coli ATCC 25922, S.aureus ATCC 25923,
C.albicans ATCC 18804, B.subtillis ATCC 9372 es de cinco minutos.
La eficacia del desinfectante Lark Sanitizer frente a A.niger ATCC
16404 es nula, ya que present 0% de inhibicin.
Se comprob que el dao celular es un proceso que esta influido por
el tiempo de exposicin, la concentracin del agente y la cepa patgena.
99
10. RECOMENDACIONES
Es importante continuar con la segunda fase de este estudio, donde se
deben aislar e identificar los microorganismos que puedan encontrarse
en las reas de produccin y probar sobre estos las diluciones del
desinfectante.
Se debe incluir dentro del programa de desinfeccin desinfectantes con
alto espectro para hongos, levaduras y microorganismos esporulados.
Realizar pruebas In Vivo donde se midan cuantitativamente los
microorganismos antes y despus de realizar el proceso de desinfeccin.
Es recomendable realizar estudios similares con el otro desinfectante
usado en las superficies de ECSI S.A., as como al jabn y al gel
desinfectante empleado por los manipuladores.
100
11. BIBLIOGRAFA
ALDANA, Luisa y SARASSA, Sandra. 1999. Efecto de
desinfectantes y antimicrobianos naturales frente a cepas de Listeria
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102
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www.infodynamics.com.uy/validation.as (Consulta: Septiembre 8.
2006)
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103
12. ANEXOS
ANEXO A. IMGENES
FIGURA 9. Siembra en estra para S. aureus.
FIGURA 10. Siembra en estra para E. coli.
104
FIGURA 11. Siembra en estra para B. subtillis.
FIGURA 12. Siembra en estra para Calbicans.
105
FIGURA 13. Siembra en estra para Calbicans.
106
ANEXO B
Composicin de los Medios de Cultivo
OGY AGAR (Oxitetraciclina Glucosa Levadura Agar)
Extracto de Levadura 5.0
Glucosa 10
Agar-agar 15
Oxitetraciclina 0.1
Gentamicina 0.05
TRIPTICASA DE SOYA AGAR
Peptona de Caseina
Peptona de soya
Lactosa
Cloruro de sodio
Polisorbato
Lecitina
Agar-agar
107
EVALUACIN DE LA EFICACIA DEL DESINFECTANTE LARK SANITIZER
EMPLEADO EN LAS AREAS DE ELABORACIN DE ENVASES Y TAPAS
PLSTICAS EN ECSI S.A.
EVALUACIN DE LA EFICACIA DEL DESINFECTANTE LARK SANITIZER
ANDREA DEL PILAR MORALES CHAPARRO
PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA
Correo electrnico: and1716@yahoo.com
BOGOT
108
Resumen
La contaminacin de los alimentos y bebidas por parte de los
microorganismos, es un tema de gran precaucin, debido a la capacidad que
tienen de afectar la seguridad del producto y la aceptacin por parte del
consumidor. Problemas de calidad se asocian directamente con la
contaminacin microbiana de materias primas, antes o durante el
procesamiento del producto o a travs del empaque. Los errores en los
planes de saneamiento y desinfeccin son generalmente los responsables de
la contaminacin y por lo tanto la perdida del producto.
En el presente trabajo se busc evaluar el desinfectante Lark Sanitizer
usado en la desinfeccin de las superficies de las reas de produccin de
envases y tapas en ECSI S.A.
El mtodo utilizado fue el de siembra en estras, se evalu el porcentaje de
inhibicin del desinfectante a base de Biguanidas cuyo compuesto activo es
el polihexametilenbuguanida ante 5 microorganismos con propiedades y
caractersticas diferentes: S. aureus ATCC 25923, E. coli ATCC 25922,
C. albicans ATCC 18804, B.subtillis ATCC 9372 y A. niger ATCC 16404.
Se determin la eficacia de tres concentraciones, a la mitad, a la
recomendada, y al doble de la sugerida por la casa comercial, adems se
conjugaron con tres tiempos diferentes 2-50 y 10 minutos.
Segn los resultados, se concluy que el desinfectante Lark Sanitizer es
efectivo a una concentracin de 1% por un tiempo de 5 minutos para
S. aureus , E. coli , C. albicans y B.subtillis sin embargo no tuvo ninguna
accin inhibitoria contra A. niger.
Palabras clave: Desinfectante, microorganismos, porcentaje de inhibicin.
109
Abstract
The food and drink contaminate for microbial is a topic of big precaution
because the capacity that they have to affect the product, safety and the
acceptation for the client. Quality problems are associated directly with the
microbe contamination of primary ingredients before or during the product
process, or through of the pack. The mistakes in surety and safety are
commonly culprit of the contaminate and the loss product.
The purpose of this study was evaluate the disinfectants Lark Sanitizer
used in cleaner and disinfections process of surface in the production rooms
of container and cover.
The technique used was sowing in groove, the inhibit percentage was
evaluate with the disinfectant with PHMB, opposite to 5 microbes with
property different: S. aureus, E. coli, B. subtillis, C. albicans and A. niger.
The efficacy was determinate with three concentrations : the middle,
recommend and the double recommended by the business house, further
more this concentrations were combine with three different times: 2-5-10
minutes.
According to the result, was deduce that Lark Sanitizer disinfectant is
effective with 1% concentration whit 5 minutes of time for S. aureus, E. coli,
B. subtillis and C. albicans, in the other hand this hadn any inhibit action
with A. niger.
Keywords: Disinfectant, microbes, inhibit percentaje.
110
1. Introduccin
El mantenimiento de unas condiciones adecuadas y seguras en la
manipulacin industrial de alimentos exige la implementacin de mecanismos
que aseguren la higiene total de superficies, equipos, manos y utensilios de
trabajo.
Eliminar o neutralizar las impurezas y suciedades siguiendo un Programa de
medidas de Limpieza y Desinfeccin teniendo en cuenta que es un flujo
constante resulta fundamental para prevenir contaminaciones y por lo tanto el
riesgo de infecciones alimentaras.
El pblico consumidor espera disponer de alimentos exentos de
microorganismos patgenos y toxinas con una capacidad de conservacin
especfica y el fabricante espera que su producto se mantenga en el
mercado, por esta razn para eliminar patgenos o elementos contaminantes
de superficies, instalaciones o manos no basta con aplicar mtodos de
limpieza convencionales por el contrario, se necesita implementar algn
sistema capaz de vencer las fuerzas de unin electrostticas o fisicoqumicas
que se dan entre las impurezas y las superficies.
El objetivo de este trabajo fue evaluar la eficacia del desinfectante LARK
SANITIZER utilizado en las reas de produccin de envases y tapas
plsticas destinados a contener alimentos teniendo como referencia 5
microorganismos contaminantes.
2. Materiales y mtodos
2.1 Muestreo: Para cada muestreo, se tomaron las cantidades de
desinfectante Lark Sanitizer y de agua de la utilizada normalmente en los
procedimientos de limpieza y desinfeccin de las superficies de ECSI S.A.
Posteriormente las muestras se llevaron al Laboratorio de Microbiologa de
Flexo Spring S.A. para realizar los respectivos anlisis.
2.2 Preparacin de la dilucin del desinfectante : Para cada uno de los seis
muestreos se prepararon las siguientes diluciones: A la mitad de la
concentracin de la recomendada por el fabricante: 0.5 ml de desinfectante
Lark Sanitizer y 50 ml de agua. A la dosis recomendada por el fabricante: 1
ml de desinfectante Lark Sanitizer y 100 ml de agua. Al doble de la dosis
recomendada: 2 ml de desinfectante Lark Sanitizer y 100 ml de agua.
2.3 Preparacin de la emulsin de bacterias de hongos y levaduras.
Se tomaron 5 tubos 13x100 estriles, a cada uno se les aadi 2 ml se agua
peptonada y con asa redonda estril se aadi la cantidad de cepa adecuada
de los cultivos madre (E.coli, S.aureus, B.subtillis. A.niger y C. albicans )
que correspondiera con el patrn de turbidez del tubo # 2 de Mac Farland.
111
2.4 Evaluacin del desinfectante lark sanitizer: Se tomaron 2ml de cada
concentracin (a la mitad, a la recomendada y al doble) y del control (agua)
con pipetas estriles y se llevaron a cuatro tubos 13x100 para cada
microorganismo posteriormente se aadieron 0.2 ml de la suspensin de
cada una de las 5 cepas a las concentraciones y al control. Se agitaron los
tubos y a partir de este momento se empez a contabilizar 2 min, 5 min y 10
min. Luego se sembr por el mtodo de estras en las cajas con los medios
de cultivo OGY para C.albicans y A.niger y Tripticasa de soya para
B.subtillis, E.coli y S.aureus.
Las cajas se incubaron a 22C por 5 das para Hongos y Levaduras y a 37C
por 48 horas para bacterias.
2.5 Al cumplirse el tiempo de incubacin se leyeron los resultaron para el
posterior informe.
3. Resultados
3.1 S. aureus
Para los 2 min en los anlisis descriptivos la media para la concentracin
0.5% fue de 5.83 con una desviacin estndar de 6.45 ,para la concentracin
1% la media fue de 45 y la desviacin estndar de 7.90 y para la
concentracin 2% y el control la media fue de 100 por lo tanto arrojo una
desviacin estndar de 0.
En la prueba de T student para las concentraciones 0.5% y 1% no existe
evidencia estadsticamente significativa de que el porcentaje de inhibicin del
desinfectante ante el microorganismo sea mayor al 75% ya que p<0.05
(intervalo de confianza del 95%). Para la concentracin 2% la media fue de
100 por lo tanto el desinfectante fue efectivo en un 100%.
A los 5 Min en los anlisis descriptivos la media para la concentracin 0.5%
fue de 4.1667 con una desviacin estndar de 6.45 ,para la concentracin
1% la media fue de 77.08 y la desviacin estndar de 12.2 y para la
concentracin 2% y el control la media fue de 100 por lo tanto arrojo una
desviacin estndar de 0.
En la prueba de T student para la concentracin 0.5% no existe evidencia
estadsticamente significativa de que el porcentaje de inhibicin del
desinfectante ante el microorganismo sea mayor al 75% ya que p<0.05
mientras que para la concentracin 1% existe evidencia estadsticamente
significativa de que el porcentaje de inhibicin del desinfectante ante el
microorganismo es mayor al 75% ya que p>0.05 (intervalo de confianza del
95%). Para la concentracin 2% la media fue de 100 por lo tanto el
desinfectante fue efectivo en un 100%.
Por ultimo con 10 min de contacto En los anlisis descriptivos la media para
la concentracin 0.5% fue de 43.75 con una desviacin estndar de 10.458,
para las concentraciones 1 %- 2% y el control la media fue de 100 por lo
112
tanto arrojo una desviacin estndar de 0. En la prueba de T student para la
concentracin 0.5% no existe evidencia estadsticamente significativa de que
el porcentaje de inhibicin del desinfectante ante el microorganismo sea
mayor al 75% ya que p<0.05 mientras que para las concentraciones 1% y 2%
existe evidencia estadsticamente significativa de que el porcentaje de
inhibicin del desinfectante ante el microorganismo es mayor al 75% ya que
p>0.05 (intervalo de confianza del 95%), por lo tanto el desinfectante fue
efectivo en un 100%.
3.2 E. coli
En los anlisis descriptivos a loS 2 minutos la media para la concentracin
0.5% fue de 42.50 con una desviacin estndar de 13.69 ,para la
concentracin 1% la media fue de 74.666 y la desviacin estndar de 3.829 y
para la concentracin 2% y el control la media fue de 100 por lo tanto arrojo
una desviacin estndar de 0.
En la prueba de T student a los 2 minutos para la concentracin 0.5% no
existe evidencia estadsticamente significativa de que el porcentaje de
inhibicin del desinfectante ante el microorganismo sea mayor al 75% ya
que p<0.05 mientras que para la concentracin 1% existe evidencia
estadsticamente significativa de que el porcentaje de inhibicin del
desinfectante ante el microorganismo es mayor al 75% ya que p>0.05
(intervalo de confianza del 95%). Para la concentracin 2% la media fue de
100 por lo tanto el desinfectante fue efectivo en un 100%.
Con 5 minutos de contacto En los anlisis descriptivos la media para la
concentracin 0.5% fue de 48.9 con una desviacin estndar de 10.01, para
la concentracin 1% la media fue de 85.0 y la desviacin estndar de 11.83 y
para la concentracin 2% y el control la media fue de 100 por lo tanto arrojo
una desviacin estndar de 0.
En la prueba de T student para la concentracin 0.5% no existe evidencia
estadsticamente significativa de que el porcentaje de inhibicin del
desinfectante ante el microorganismo sea mayor al 75% ya que p<0.05
mientras que para la concentracin 1% existe evidencia estadsticamente
significativa de que el porcentaje de inhibicin del desinfectante ante el
microorganismo es mayor al 75% ya que p>0.05 (intervalo de confianza del
95%). Para la concentracin 2% la media fue de 100 por lo tanto el
desinfectante fue efectivo en un 100%.
Finalmente a los 10 minutos En los anlisis descriptivos la media para la
concentracin 0.5% fue de 50.41 con una desviacin estndar de 9.54, para
las concentraciones 1% - 2% y el control la media fue de 100 por lo tanto
arrojo una desviacin estndar de 0.
En la prueba de T student para la concentracin 0.5% no existe evidencia
estadsticamente significativa de que el porcentaje de inhibicin del
desinfectante ante el microorganismo sea mayor al 75% ya que p<0.05
mientras que para las concentraciones 1% y 2% existe evidencia
113
estadsticamente significativa de que el porcentaje de inhibicin del
desinfectante ante el microorganismo es mayor al 75% ya que p>0.05
(intervalo de confianza del 95%), por lo tanto el desinfectante fue efectivo en
un 100%.
3.3 B. subtillis
A los dos minutos en los anlisis descriptivos la media para la concentracin
0.5% fue de 0 con una desviacin estndar de 0 ,para la concentracin 1% la
media fue de 62.91 y la desviacin estndar de 11.44, para la concentracin
2% la media fue de 78.16 y la desviacin estndar de 4.75 mientras que el
control arroj una media de 100 por lo tanto se obtuvo una desviacin
estndar de 0.
En la prueba de T student para la concentracin 0.5% no se realiz por tener
una media de 0, para la concentracin 1% no existe evidencia
estadsticamente significativa de que el porcentaje de inhibicin del
desinfectante ante el microorganismo sea mayor al 75% ya que p<0.05
mientras que para la concentracin 2% existe evidencia estadsticamente
significativa de que el porcentaje de inhibicin del desinfectante ante el
microorganismo es mayor al 75% ya que p>0.05 (intervalo de confianza del
95%).
Con cinco minutos de contacto en los anlisis descriptivos la media para la
concentracin 0.5% fue de 0 con una desviacin estndar de 0 ,para la
concentracin 1% la media fue de 86.25 y la desviacin estndar de 15.30,
para la concentracin 2% y el control la media fue de 100 por lo tanto se
obtuvo una desviacin estndar de 0.
En la prueba de T student para la concentracin 0.5% no se realiz por tener
una media de 0, para las concentraciones 1% y 2% existe evidencia
estadsticamente significativa de que el porcentaje de inhibicin del
desinfectante ante el microorganismo sea mayor al 75% ya que p<0.05
(intervalo de confianza del 95%).
En ltimo lugar a los 10 minutos en los anlisis descriptivos la media para la
concentracin 0.5% fue de 0 con una desviacin estndar de 0 ,para la
concentracin 1% , 2% y el control la media fue de 100 y la desviacin
estndar de 0 .La prueba de T student no se realiz en este caso por tener
desviaciones estndar de 0 por lo tanto no exista diferencia de medias.
3.4 C. albicans
Alos dos minutos en los anlisis descriptivos la media para la concentracin
0.5% fue de 58.83 con una desviacin estndar de 8.164 ,para la
concentracin 1% la media fue de 71.58 y la desviacin estndar de 4.363,
para la concentracin 2% la media fue de 75.0 con una desviacin estndar
de 0 y el control obtuvo una media de 100 con una desviacin estndar de 0.
114
En la prueba de T student para la concentracin 0.5% no existe evidencia
estadsticamente significativa de que el porcentaje de inhibicin del
desinfectante ante el microorganismo sea mayor al 75% ya que p<0.05
mientras que para la concentracin 1% existe evidencia estadsticamente
significativa de que el porcentaje de inhibicin del desinfectante ante el
microorganismo es mayor al 75% ya que p>0.05 (intervalo de confianza del
95%), para la concentracin 2% no se realiz la prueba ya que el valor
arrojado para la desviacin estndar corresponde a 0 por lo tanto no exista
diferencia de medias.
Con cinco minutos de contacto la media para la concentracin 0.5% fue de
63.33 con una desviacin estndar de 7.187 ,para la concentracin 1% la
media fue de 75 y la desviacin estndar de 0, para la concentracin 2% la
media fue de 75 con una desviacin estndar de 0 y el control obtuvo una
media de 100 con una desviacin estndar de 0.
En la prueba de T student para la concentracin 0.5% no existe evidencia
estadsticamente significativa de que el porcentaje de inhibicin del
desinfectante ante el microorganismo sea mayor al 75% ya que p<0.05
(intervalo de confianza del 95%), para las concentraciones 1% y 2% no se
realiz la prueba ya que el valor arrojado para la desviacin estndar
corresponde a 0 por lo tanto no exista diferencia de medias.
A los 10 minutos la media para la concentraciones 0.5%, 1%, 2% y el control
fue de 100 con una desviacin estndar de 0 por lo tanto el desinfectante
tuvo un porcentaje de inhibicin del 100% .
La prueba de T student no se realiz ya que los datos arrojaron una
desviacin estndar de 0 por lo tanto no exista diferencia de medias.
3.5 A. niger
En los anlisis descriptivos la media con los tiempos 2-5-10 min y para las
concentraciones 0.5%, 1%, 2% el control fue de 0 con una desviacin
estndar de 0 por lo tanto el desinfectante tuvo un porcentaje de inhibicin
del 0%. El control arrojo una media de 100% con una desviacin estndar de
0.
La prueba de T student no se realiz ya que los datos arrojaron una
desviacin estndar de 0 por lo tanto no exista diferencia de medias.
4. Discusin
4.1 S. aureus
El dao est influido por el tiempo, y la concentracin del agente, en este
caso el desinfectante se debe usar a la concentracin recomendada por el
proveedor con un tiempo de cinco minutos, de lo contrario al disminuir la
concentracin y el tiempo no existe garanta de la accin contra el
microorganismo y al aumentar estos parmetros se corre el riesgo de
115
generar resistencias, y alterar el mecanismo de accin sobre estos
microorganismos que se basa en la rpida atraccin del desinfectante con
carga positiva hacia la clula Gram. positiva con carga negativa en su
superficie gracias a los cidos teicoicos presentes en su pared celular ,
posteriormente el desinfectante acta contra los fosfolipidos presentes en la
membrana citoplasmtica inactivndola, destruyendo la integridad de la
clula liberndose al medio componentes que la integran, afectando el ATP
y cidos nucleicos compuestos de grupos fosfato (Mac Donell,G.1999)
producindose la muerte celular.
4.2 E. coli
La susceptibilidad del microorganismo se debi a que adems del
peptidoglicano las bacterias Gram. negativas poseen en su pared una capa
adicional que no consta solamente de fosfolipidos como la membrana
citoplasmtica, sino que contiene polisacridos y protenas (MADIGAN,M.1991).
De esta manera el compuesto activo del desinfectante polihexametilen
biguanida se dirige a los iones fosfato de los fosfolipidos ubicados en la
membrana exterior y a los que hacen parte del lipopolisacrido compuesto de
(Heptosa-glucosa-galactosa-n-acetilglucosamina y fosfato (MADIGAN,M.1991)).
As el desinfectante desestabiliza la membrana y se une a los iones fosfato
pero de la membrana citoplasmtica que posee iones Calcio y Magnesio
que contribuyen a su estabilizacin a travs de interacciones inicas con los
grupos polares de carga negativa como el Fsforo que al ser afectado por el
desinfectante rompe estos enlaces acabando con la estabilidad de la
membrana y permitiendo la fuga de componentes como el potasio e
interactuando con componentes que poseen la funcin fosfato como el ATP y
los cidos nucleicos (Mc Donell,G.1999), generando la muerte celular.
4.3 B.subtillis
Esta especie tiene la capacidad de formar esporas como estructuras de
resistencia , y si en el momento de inocular el microorganismo en el tubo con
la mitad de concentracin del desinfectante existan bacterias esporuladas
este tendra una dbil funcin esporoesttica permitiendo as la recuperacin
de las esporas en el medio de cultivo al realizar la prueba de estras. Al
aumentar el tiempo de contacto y las concentraciones el desinfectante ejerci
su accin contra las esporas impidiendo la formacin del cortex entre la
membrana interna y externa antes de la maduracin y liberacin de la espora
madura. (RUSELL,A.1990), impidiendo nuevamente su desarrollo en el medio
de cultivo propuesto para desarrollar este estudio.
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4.4 C. albicans
Para causar la lisis del protoplasto y ocasionar la salida del material celular
(MAC DONELL G.1999) se deben manejar tiempos no mayores a cinco minutos
y concentraciones que no excedan la concentracin recomendada por la
casa comercial 1% v/v.
4.5 A. niger
Este microorganismo para todas las concentraciones y todos los tiempos
evaluados en este estudio obtuvo un porcentaje de crecimiento del 100% , lo
que demuestra que el desinfectante probado no ejerce accin funguicida ni
fungiestatica .
El agente activo del desinfectante polihexametilen biguanida acta
primordialmente contra los grupos fosfato, las paredes fngicas estn
compuestas de polisacridos, mientras que los lpidos, polifosfatos e iones
inorgnicos forman nicamente una matriz cementante (MADIGAN,M.1991) por
lo cual el desinfectante no puede ejercer su accin contra la quitina del
hongo.
5. Agradecimientos
Este estudio fue realizado gracias a la colaboracin de ECSI S.A quien
financi y asesoro la realizacin de este proyecto. Gracias a la Dra Janeth
Arias por su colaboracin, a la Dra Rosa Edith Useche por su apoyo y a la
Dra Paola Rojas su constante ayuda.
6. Literatura citada
1) BROCK T. 1991. Microbiologa. Ed Prentice Hall. Mxico.
2) MAC DONELL G.1999. Antiseptics and disinfectants: Activity, Action,
and Resistance. Clinical Microbiology Reviews. 147-179 pag.
3) RUSELL A. 1990. Bacterial spores and chemical sporicidal agents.
Clinical microbiology Rewiew.3 (2). 99-119.