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Testosterona

Código:9001103
Ensayo inmunoenzimático por Quimioluminiscencia para la medición cuantitativa
de Testosterona (TEST) en el suero humano.
96 PRUEBAS

USO

El equipo de Testosterona CLIA se destina para la determinación
cuantitativa de concentración de TEST en el suero humano.

INTRODUCCIÓN
La Testosterona se forma en los capilares y las venas la
transportan a la periferia o atraviesa las células testiculares y entra
a los túbulos seminíferos donde se involucra en la
espermatogenesis. En los conductos seminíferos la testosterona
estimula a los espermatocitos primarios para formar
espermatocitos secundarios y finalmente espermatocitos jóvenes.
La secreción testicular representa el 95% de la testosterona
circulante en los varones. En la mujer el ovario y adrenal secretan
pequeñas cantidades de testosterona; sin embargo, la mayoría de
la testosterona en la sangre deriva del metabolismo
antroestenedional.
La medición de testosterona serica en hombres y niños esta
relacionada a la investigación de disfunción testicular y es usada
para monitorear el tratamiento de pacientes con hiperplasia
adrenal congénita. En las mujeres testosterona serica es útil para
evaluar hirsutismo, alopecia y desordenes menstruales. La
concentración de testosterona en la plasma es también parte de la
evaluación de recién nacidos e infantes con genitales ambiguos
El ensayo tradicional de testosterona plásmica involucra la
extracción de esteroides, purificación cromatográfica, RIA y ELISA.
Este sistema es usado para establecer un método de detección de
la testosterona total en el suero CLIA.

PRINCIPIO DE LA PRUEBA
En el procedimiento del ensayo TEST CLIA, el estándar de
Testerona o el suero del paciente es incubado con anticuerpo de
Testosterona y con testotsterona-peroxidasa equina conjugado
en el pocillo impregnado con anti-conejo Testosterona. En este
sistema de fase sólida, anticuerpo adherido de testosterona
permanecerá en el pocillo mientras que la no adherida será
eliminada por lavado. Una reacción de quimioluminisencia se
desarrolla cuando el substrato de CLIA es mezclado don el
anticuerpo de la testosterona adherida con peroxidasa equina
La Unidad de Luz Relacionada (RLU) es proporcional a la cantidad
de enzima presente e inversa a la cantidad de testosterona
desetiquetada en la muestra. Por referencia de una serie de
estándar de de testosterona probados en la misma manera, la
concentración de testosterona en la muestra desconocida es
cuantificada.
MATERIALES Y COMPONENTES
Materiales suministrados con el equipo:
 Plato con 96 micropozos impregnado con reactivo Anti-Test
 Enzima conjugada reactivo, 6ml.
 Anticuerpo testosterona en solución 6ml
 TEST estándar de referencia 1 set contiene 0, 0.5, 1.0,2.5,
10.0 y 20.0ng/ml. Liofilizado
 Solución de Lavado concentrado de 2 viales
 CLIA sustrato A, 3.5 ml
 CLIA sustrato B, 3.5 ml








Material necesario pero no suministrado:
 Pipetas de precisión y puntas,, 0.1ml,0.025ml, 0.05ml
 Agua destilada.
 Tubos de vidrio o frascos para mezclar CLIA sustrato A y B
 Papel absorbente o una toalla de papel
 Papel para grafica logarítmica
 Un luminómetro

RECOLECCIÓN Y PREPARACIÓN DE LA MUESTRA
1. La sangre debe extraerse usando técnicas estándar de
venopunción y el suero debe ser separado de los glóbulos rojos
de la sangre tan pronto como sea posible. Evite totalmente
hemólisis, lipemia o turbidez en las muestras.
2. Muestras de plasma recogidas en los tubos que contengan
EDTA, heparina, oxalato o puede interferir con los
procedimientos de ensayo y debe evitarse.
3. Las muestras deberán ser niveladas y se puede almacenar
hasta 48 horas a 2-8 °C, antes de ensayo. Los especimenes
retenidos para un tiempo más largo pueden ser congelados a -
20 °C. Los especimenes deben ser mezclados antes de la
prueba.

ALMACENAMIENTO DEL EQUIPO E INSTRUMENTACIÓN

1. El equipo sin abrir debe guardarse a 2-8 ℃ a partir de la
recepción y la placa debe guardarse en una bolsa sellada con
desecantes para minimizar la exposición a la humedad del aire.
El equipo se puede utilizar en toda la fecha de caducidad del
equipo. Consulte la etiqueta del frasco para la fecha de
caducidad.
2. El equipo abierto se mantendrá estable hasta que expira la
fecha indicada, siempre y cuando se almacena según lo
estipulado anteriormente.

PREPARACIÓN DE REACTIVOS
1. Todos los reactivos deben ser sometidos a la temperatura
ambiente (18-25℃) antes de su uso. Todos los reactivos deben
mezclarse suavemente a través de invertir o agitación antes de
su uso. No inducir la formación de espuma.
2. Reconstituir cada liofilizado estándar con 0,5 ml de agua
destilada. Deje que el material reconstituido reposar durante un
mínimo de 10 minutos. Los estándares reconstituidos deben
almacenarse a 2-8º C sellado y deberán utilizarse dentro de 14
días y ser congelados a -20 ℃ para almacenamiento a largo
plazo.
3. Para preparar Buffer de Lavado: añadir 1 bolsa de Lavado de
amortiguación concentrado a 500ml de agua destilada y mezclar
bien. El lavado de amortiguación se mantiene estable en
temperatura 2-8ºC.
4. Para preparar CLIA sustrato: mezclar suavemente el sustrato A
y B sustrato en la proporción de 1:1 20 minutos antes de usarla.
El preparado CLIA solución de sustrato (después de la mezcla)
es estable a temperatura ambiente, en la oscuridad, durante 12
horas. Descartar el exceso después de cada uso.

PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO
1. Asegure el número deseado de revestimiento de pozos en el
receptor. Dispensar 25 μ l de Standard TEST, especímenes, y
los controles en los pocillos apropiados.
2. Dispensar 50 μ l anti cuerpo Testosterona a cada pocillo.
3. Dispensar 50 μ l de enzima conjugada a cada pocillo. Mezclar
suavemente durante 30 segundos.


4. Incubar a 23±2 ºC por 60 minutos. Preparar sustrato CLIA
20 minutos antes de usarla.
5. Al final de la incubación, retire la mezcla de incubación
vaciando el contenido de la placa en un contenedor de
residuos. Enjuagar y vaciar la placa 5 veces con solución de
lavado de amortiguación. Secar la placa sobre un papel
absorbente o toallas de papel para eliminar todas las gotas de
agua residual. El volumen del pozo es de aproximadamente
300μl.
6. Dispensar 50μl de la CLIA sustrato preparado en cada
reactivo. Mezcle Suavemente durante 10 segundos.
7. Incubar a temperatura ambiente en la oscuridad durante 10
minutos sin agitar y leer los valores de RLU con un
Luminometro

Notas importantes:
1. El procedimiento de lavado es fundamental. La insuficiencia
de lavado se traducirá en mala precisión y lecturas de
absorbancia falsamente elevadas.
2. Se recomienda que no más de 32 pozos sean utilizados para
cada ensayo p, si el pipeteado es manual, ya que los
especimenes y los controles deben ser completado dentro de
5 minutos. Una placa de 96 pocillos pueden utilizarse si el
pipeteado es automático.
3. La duplicación de todas los standards y especímenes, aunque
no es obligatorio, se recomienda

CALCULO DE RESULTADOS
Recomendamos utilizar el software apropiado para el calcuelo de
los resultados, si este no este a su alcance, construya una curva
estándar trazando el RLU obtenido a partir de cada Standard de
referencia en contra de su concentración en µIU/ml en papel
logarítmico cuadriculado, con valores RLU en la vertical o eje Y las
concentraciones en la horizontal o eje X. Utilice el RLU valores
para cada muestra para determinar la concentración
correspondiente de TEST en µIU/ml de la curva estándar.
Cualquier espécimen diluido debe ser corregido por el factor de
disolución apropiado.

VALORES ESPERADOS
Cada laboratorio debe establecer sus propios rangos normales
sobre la base de población de pacientes. Los resultados
mostrados abajo fueron tomados en un laboratorio con muestras
de pacientes tomadas al azar.

Testotsterona (n...g/ml)
Rango
Hombre 2.8 - 12.0
Mujer 0 - 2.0

La concentración minima detectable de TEST humano por este
ensayo se estima que es de 0.1 n...g/ml

RESUMEN DEL PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO
Dispense 25 µl de estándares, especimenes, controles
Dispense 50µl de Solución anticuerpo TEST
Dispense 50µl de enzima conjugada
Incube por 60min a 37ºC
Lave 5 veces

Dispense 50µl de CLIA sustrato
↓ Incube por 10min. a temperatura ambiente
Lea los valores RLU

REFERENCIAS
1. DM Styne and MM Grumbach. Puberty in the Male and Female: Its physiology
and disorders. In Reproductiove Endocrinology: Pathophysiology and Clinical
Management, SSC Yen, RB Jaffe (eds). Philadelphia, Saunders, 1978,pp 189-
240.
2. M Sanchez-Carbayo, M Mauri, R Alfayate, C Miralles, and F Soria. Elecsys
Testosterone Assay Evaluated. Clin Chem 44(8): 1744-1746,1998
3. JS Fuqua, ES Sher, CJ Migeon, and D Berkovitz. Assay of Plasma
Testosterone During the First Six Months of Life: Importance of
Chromatographic Purification of Steroids. 41(8): 1146-1149
4. R L Fitzgerald and DA Herold. Serum Total Testosterone: Immunoassay
Compared with Negative Chemical Ionization Gas Chromatography-mass
Spectrometry. Clin Chem 42(5): 749-755,1996.
5. RV Haning Jr, IH Carlson, J Cortes, WE Nolten and S Meier. Danazol And Its
Principal Metabolites Interfere with Binding of Testosterone, Cortisol, and
Thyroxin by Plasma Proteins, Clin Chem 28(4): 696,1996
6. SJ Winters, DE Kelley and B Goodpaster. The Analog Free Testosterone
Assay: Are the Results in Men Clinically Useful? Clin Chem 44(21): 2178-
2182, 1998

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