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Métodos basados en la interacción

de la radiación con la materia
Aquí se agrupan las técnicas cuyo fundamento
sobrelleva la interrelación entre la energía
electromagnética y la materia.
En general se asigna también a estos métodos el
nombre global de espectroscopia o métodos
ópticos
Debemos repasar
¿Que es la radiación electromagnética?
¿Qué es el espectro electromagnético?
Dualidad de la radiación
electromagnética
velocidad, amplitud, frecuencia o longitud
de onda.
fotones
¿Que es la radiación
electromagnética?
La radiación electromagnética es una forma
de propagación de energía a través del
espacio sin soporte material y emitida por
una sustancia en estado excitado.
Espectro electromagnético
Se denomina espectro electromagnético a
la distribución de energía del conjunto de
las ondas electromagnéticas
Dualidad de la radiación electromagnética
Tiene naturaleza ondulatoria en su
movimiento, definida por parámetros como
velocidad, amplitud, frecuencia o longitud
de onda.
Es un flujo de partículas de energía
llamadas fotones. La energía de un fotón es
proporcional a la frecuencia de radiación.
Parámetros ondulatorios
la longitud de onda (λ)
se define como la longitud de un ciclo, o
bien como la distancia entre dos máximos o
mínimos sucesivos.
Parámetros ondulatorios
la frecuencia (v)
es el número de ciclos por segundo
la frecuencia es la única característica
constante en una radiación, ya que la
longitud de onda y la velocidad dependen
de la naturaleza del medio de propagación.
La radiación como partícula
Por otra parte la radiación
electromagnética como transportadora
de energía fue definida por Planck
(1900) considerando que la energía de
las partículas está cuantificada, sólo
están permitidos ciertos niveles de
energía
La radiación como partícula
Cuando una partícula pasa de un nivel de
menor energía a uno de mayor energía
sólo absorbe un cuanto de energía, que
está relacionado con la frecuencia de la
radiación absorbida
E= hυ=h×c/λ
Los efectos que provoca la radiación
sobre la materia son de varios tipos:
puede provocar la absorción de la
radiación
Los efectos que provoca la radiación
sobre la materia son de varios tipos:
Puede desviar el desviar la radiación
electromagnética
Los efectos que provoca la radiación
sobre la materia son de varios tipos:
Dispersar la radiación
Los métodos ópticos se
pueden clasificar en:
No espectroscópicos
Espectroscópicos
No espectroscópicos
Se basan en la medición del cambio en la
dirección o en las propiedades físicas de la
radiación electromagnética.
Ejemplos:
refracción, dispersión, interferencia.
Los métodos son:
refractometría, turbidimetría,
nefelometría, interferometría, etc.
Métodos espectroscópicos
Se basan en la medida de:
Intensidad de la energía radiante
longitud de onda de la energía radiante
Tienen en común:
Medida de un espectro
Pueden ser de absorción o emisión
Métodos espectroscópicos
Es frecuente dividir las técnicas ópticas de acuerdo
con la región espectral que interacciona con la
materia. Así, es frecuente denominar a la
espectroscopia como:
de rayos X,
ultravioleta lejano, ultravioleta cercano y visible
infrarrojo cercano y medio, infrarrojo lejano
microondas y radiofrecuencia
Región ultravioleta y visible
La más empleada por su sencillez y el
bajo costo de los equipos más sencillos
capaces de llevarla a cabo: los
colorímetros
Esta técnica es especialmente
cuantitativa
Región ultravioleta y visible
Se fundamenta en la disminución de
intensidad que sufre un rayo de luz
monocromática al atravesar una
disolución que contenga un constituyente
que absorba parte de la radiación.
aplicaciones tanto sustancias orgánicas
como inorgánicas
También se utiliza como indicadora del
punto final de una titulación.
Región ultravioleta y visible
Aplicaciones
Detección de sustancias orgánicas
Detección de sustancias inorgánicas
Indicadora del punto final de una
valoración.
Orbitales atómicos
Orbitales moleculares
Orbitales moleculares del
hidrógeno
¿Qué es el espectro?
Se define como una representación gráfica
o fotográfica de la distribución de
intensidades de la radiación
electromagnética emitida o absorbida por
la materia, en función de la longitud de
onda de dicha radiación.
Los espectros son debidos a transiciones
entre estados de energía característicos
de la materia.
Espectros de absorción
Región del infrarrojo
emplea con fines cualitativos en química
orgánica, pues permite el análisis sencillo
de los grupos funcionales de una molécula.
Ello es debido a que la radiación infrarroja
interacciona con los estados de energía
vibracional de los enlaces y éstos son
característicos de los átomos que los
forman.
Espectro infrarrojo de la lactosa
Espectroscopia de
absorción molecular
Ley de Lambert Beer
Medida cuantitativa de la
radiación
Ley de Lambert Beer
La potencia radiante de una línea o banda
depende del número de átomos o moléculas
excitadas, entonces es directamente
proporcional a la concentración
P = k×C
donde k es una constante de proporcionalidad
A consecuencia de las interacciones entre
los fotones y las partículas absorbentes,
la potencia del haz se atenúa de P0 a P1.
Por lo tanto podemos definir:
la transmitancia T de la solución
Como la fracción de radiación incidente transmitida
(o no absorbida) por la solución según:
T =P1/P0
%T = 100×P1/P0
Absorbancia
Una magnitud física más útil que la
transmitancia, es la absorbancia, que se
define como:
T
P
P
A log log
0
10
− =






=
Relación entre la absorbancia y
el espesor
La ley de Lambert relaciona el espesor de la muestra de análisis con la
relación entre la potencia incidente sobre la muestra y la potencia
transmitida por la muestra. Si todos los factores que intervienen en la
medición se dejan constantes y se varía el espesor de la muestra
tenemos que:
al aumentar el espesor, la potencia de la luz
transmitida disminuirá, aumentando la absorbancia.
Entonces:
A = es directamente proporcional al espesor o
camino óptico
A = k× b
Relación entre la absorbancia
y la concentración
La Ley de Beer relaciona la concentración de la
especie absorbente con la relación de la potencia del
haz transmitido por el medio absorbente y la potencia
del haz incidente.
Todo aumento en la concentración de la especie
absorbente habrá de aumentar el número de fotones
absorbidos
Entonces:
A = es directamente proporcional a la
concentración
A = k× C
La ley de Lambert-Beer
A= ε×b×C (ε es la absortividad molar)
A=a×b×C (a es la absortividad específica)
La absorbancia, A, es adimensional.
La concentración de la muestra, C, se suele
expresar en moles/litro (M) o en g/litro
La longitud del camino óptico, b, se expresa en cm.
La cantidad ε se llama absortividad molar y sus
unidades son litro/mol ×cm.
Cuando la concentración es expresada en g/l, debe
hablarse de la absortividad a , y sus unidades son
litro/g×cm.
Medida experimental de la
absorbancia
la solución en estudio debe estar dentro de un
recipiente.
La interacción de la radiación con las paredes del
mismo es inevitable,
por lo tanto se producirán pérdidas de potencia
en cada interfase como resultado de las
reflexiones y las absorciones.
Las pérdidas por reflexión pueden llegar a ser del
orden de 8%.
Deben sumarse las pérdidas por dispersión dentro
de la solución debido a la presencia de moléculas
grandes o a inhomogeneidades del disolvente.
Medida experimental de la
absorbancia
Medida experimental
C b
P
P
P
P
A
solución
solvente
× × = = = ) ( log log ) (
0
λ ε λ
Expresión experimental
Representación de la ley de
Lambert -Beer
Limitaciones de la ley de
Lambert Beer
La relación lineal entre la absorbancia y la longitud de camino
óptico para una concentración fija de sustancia absorbente es
una generalización de la que no se conocen excepciones.
La ley de Lambert – Beer establece que la absorbancia es
proporcional a la concentración de las especies absorbentes.
Esto se verifica estrictamente para luz monocromática y muy
bien en el caso de soluciones diluidas (≤ 0,01M) de la mayoría
de las sustancias.
Limitaciones Reales
A concentraciones altas (> 0.01M)
Las distancias medias entre las partículas
disminuyen hasta tal punto que cada partícula
afecta la distribución de carga de los vecinos.
Estas interacciones alteran la capacidad
absorbente de las partículas respecto a una
radiación de determinada longitud de onda.
Causa desviaciones de a relación lineal
Limitaciones reales
A concentraciones muy diluidas (con muy
baja concentracón del absorbente)
La presencia de electrolitos (o el
solvente)se aproximan mucho a las especies
absorbentes alterando la absortividad
molar debido a interacciones
electrostáticas
Causa desviaciones de a relación lineal
Desviaciones químicas
Se presentan desviaciones de la ley de
Lambert-Beer cuando
el analito experimenta asociación
disocición
reacción con el solvente
para dar productos con propiedades
diferentes a las del propio analito
Desviaciones químicas
Presencia de otras sustancias
(interferencias) que absorben luz a a
misma longitud de onda (o muy cercana) que
el analito
Desviaciones instrumentales
La ley de Lambert-Beer es una ley límite en
el sentido de que se aplica sólo cuando la
absorbancia se mide con una radiación
monocromática.
Los instrumentos de rutina no emplean
fuentes monocromáticas sino fuentes
continuas
Desviaciones instrumentales
Las desviaciones de la ley de
Lambert-Beer que resultan
del uso de un haz
policromático no son
apreciables, siempre que la
radiación usada abarque un
tramo espectral dentro del
cual el absorbente no
presenta grandes cambios en
función de la longitud de onda
Selección de la
longitud de onda
de trabajo
COMPONENTES BASICOS DE UN ESPECTROMETRO Vis-UV
3 4 1 2
1
FUENTE DE RADIACIÓN o LÁMPARA
SISTEMA ÓPTICO
a) Sistema para dirigir la radiación
b) Sistema de aislamiento de la longitud de onda
2
3
RECIPIENTE PARA LA MUESTRA (GENERALMENTE
LÍQUIDA)
4
SISTEMA DE DETECCIÓN (TRANSDUCTOR DE LA RADIACIÓN)
a) b)
Fuentes de radiación
Requisitos:
Intensidad de radiación elevada.
Emitir en un amplio rango de λ (emisión continua).
Intensidad constante con el tiempo.
Fuentes de radiación -visible
Lámpara de Wolframio
(lámpara de inscandescencia).
Se basa en la incasdencencia,
emite luz en el visible e IR
cercano desde 350-2500 nm
regida por las leyes de emisión
del cuerpo negro. La radiación
emitida depende de la
temperatura.
Filamento de W
o W+I2
Fuentes de radiación -UV
Lámpara de Arco de Xenón
(lámpara de descarga)
Se basa en la descarga entre dos
electrodos en un bulbo de cuarzo
con Xe a alta presión, la excitación
de Xe produce la emisión de luz
contínua entre 250 y 600 nm.
Selector de longitudes de onda
Monocromador con red
Selector de longitudes de onda
Monocromador con prisma
Selector de longitudes de onda
Los filtros trabajan absorbiendo todas las radiaciones
excepto una banda estrecha de radiación procedente
de la fuente continua. A un filtro se lo caracteriza por
o general por una longitud de onda nominal, un
porcentaje máximo de transmitancia y un ancho de
banda efectivo.
Recipientes para la muestra
Los recipientes que contienen la
muestra normalmente se llaman
celdas o cubetas y deben estar
fabricados de un material
transparente en la región
espectral de interés.
Detectores
LOS DETECTORES DE FOTONES SON
DISPOSITIVOS QUE TRANSFORMAN
LA ENERGIA RADIANTE EN UNA SEÑAL
ELÉCTRICA
Detectores: Requisitos
responder rápidamente a bajos niveles de energía radiante en un
amplio rango de longitudes de onda
debe producir una señal eléctrica que se amplifique fácilmente
tener un nivel de ruido relativamente bajo
la señal eléctrica producida debe ser directamente proporcional
a la potencia del haz.
G = kP + k´
Siendo:
G = es la respuesta (en unidades de corriente, resistencia o
potencial)
k = cte que mide la sensibilidad del detector
k´= respuesta constante, conocida como corriente oscura, aún
cuando no llegue radiación al detector.
Detectores
Fototubo: La radiación
causa una emisión de
electrones de una
superficie sólida
fotosensible.
Basado en el
efecto fotoelectrico.
•Son muy sensibles a la
radiación VIS y UV.
•Tienen tiempos de
respuesta muy rápidos.
•Solo pueden medir
radiación de baja
potencia.
•Su sensibilidad viene
limitada por la corriente
oscura debida a la
amplificación.
Fototubo UV
Otros equipos de
espectroscopia UV-visible
Otros equipos de
espectroscopia UV-visible
Spectronic 20
Espectroscopia
de emisión y absorción
atómica
Mientras que la mayoría de las técnicas
espectroscópicas se utilizan para el estudio y
caracterización de moléculas o iones en su entorno
cristalino, la espectroscopía de emisión y absorción
atómica se usa casi exclusivamente para el análisis de
átomos.
La técnica resulta casi insuperable como método de
análisis elemental de metales.
La espectroscopía de emisión puede utilizarse para la
identificación y para la determinación cuantitativa de
todos los elementos de la tabla periódica.
Pueden identificarse tres clases diferentes de procesos
de emisión que difieren en cómo la sustancia alcanza el
estado excitado previo a la emisión.
a) Emisión a partir de una excitación electromagnética.
b) Emisión a partir de excitación térmica.
c) Emisión a partir de excitación eléctrica.
Los tipos más importantes de espectros de
emisión se basan en la utilización de energía no
electromagnética para llevar a un átomo o a una
molécula al estado excitado, a partir del cual se
miden las emisiones de radiación. El proceso
puede describirse según:
X + energía térmica o eléctrica →X* (excitado)
X* → X + hν (emisión)
El estudio espectroscópico de
átomos (iones o moléculas) se
hace en fase gaseosa.
Primer paso es la atomización de la
muestra y con ello se determina la
sensibilidad, precisión y exactitud
del método.
Clasificación de los métodos espectrales atómicos
método de
atomización
temperatura
típica de
atomización (ºC)
Base del método nombre común y abreviatura del método
Absorción Espectroscopía de absorción AAS
Emisión Espectroscopía de emisión atómica AES
Llama 1750-3150
Fluorescencia
Espectroscopía de fluorescencia atómica
AFS
Absorción
Espectroscopía de absorción atómica
electrotérmica
Electrotérmico 1200-3000
Fluorescencia
Espectroscopía de fluorescencia atómica
electrotérmica
Plasma de Ar
acolado por
inducción
6000-8000 Emisión
Espectroscopía de plasma acoplado por
inducción ICP
Plasma de Ar de
corriente continua
6000-10000 Emisión
Espectroscopía de plasma de corriente
continua DC
Chispa eléctrica o
arco
40000 Emisión Espectroscopía de emisión de chispa
Equipos
emisión
absorción
Aplicaciones
Señal = k × C
análisis de rutina de los metales alcalinos, alcalino-
térreos, (son los más fácilmente excitables y cuya
determinación por otros métodos es por lo general
complicada, ejemplo sodio en aguas)
Dificultad: controlarlas distintas variables:
temperatura de la llama
presión de los gases
Altura de la llama
La correlación entre la intensidad de la señal y la
concentración del elemento emisor en una solución
permita la utilización de este fenómeno con fines
cuantitativos.
Señal = k × C
Fuentes de error
Factores instrumentales
dependen del
instrumento:
tipo y forma de
mechero
tamaño de la llama
presión del comburente
-combustible, etc.
Interferencias:
dependen de la
composición de la
solución y de la
presencia de otras
especies diferentes
del analito.
causan aumento o
depresión de la señal
Interferencias
Disminución de la señal por disminución del
grado de disociación de la sal del analito
Aumento de la señal debido a la presencia de
otro metal fácilmente ionizable
Aumento de la señal debido a la presencia de
elementos que emiten a longitudes de onda
muy cercanas a la del analito y el equipo
empleado no puede separarlas
Fluorescencia y Fosforescencia
Fluorescencia
Es una técnica de emisión de radiación
se produce después de la absorción de un fotón por
parte del constituyente, seguida por la pérdida de la
energía adquirida por un mecanismo de intercambio de
calor (choques moleculares) y por emisión de un nuevo
fotón.
Las sustancias orgánicas de moléculas grandes y rígidas
son las que presentan esta importante cualidad analítica
cuantitativa. La fluorimetría utiliza en general la
radiación ultravioleta como agente de excitación y la
radiación emitida cae frecuentemente en la zona visible.
Fosforescencia
Se diferencia de la fluorescencia en que la
molécula excitada queda después de los choques en
un estado metaestable y no emite el fotón
inmediatamente, sino lo que retiene un cierto
tiempo. Se aplica a sustancias orgánicas con dobles
enlaces conjugados y en general se debe hacer a
bajas temperaturas.
Diagrama de niveles de
energía
Salto electrónico
Diagrama de niveles
electrónicos
Espectro de absorción y
fluorescencia
Instrumental
Medida
Requiere curva de calibración
Preparación de soluciones patrón
La señal es directamente
proporcional a la concentración
S = kC
Curva de calibración
Aplicaciones
Sin duda alguna las aplicaciones más
importantes en la fluorométria son:
en análisis de alimentos
de productos naturales
Aplicaciones
Compuestos Orgánicos:
adenina, ácido antranílico, cisteína, hidrocarburos
aromáticos policíclicos, indol, naftol, proteínas,
ácido salicílico, escatol, triptófano, ácido úrico,
adrenalina, alquilmorfina, LSD, penicilina,
fenobarbital, procaína, reserpina, clorofila,
alcaloides, flavonoides, esteroides, ácido ascórbico,
ácido fólico, nicotinamida, piridoxal,
corticoesteroides, estrógenos, progesterona,
andrógenos, ácidos biliares, colesterol, triglicéridos,
creatinina, deshidrogenasas, transaminasas,
fosfatasas, perioxidasas, ATP, luciferina, luciferasa,
vitaminas: A, B1, B2, B6, C y la E, etc.
Aplicaciones
Compuestos Inorgánicos:
cianuro, fluoruro, sulfatos, fosfatos, aluminio,
arsénico, berilio, boro, calcio, magnesio,
tierras raras, selenio, uranio, etc.
Ventajas frente a otras
técnicas espectroscópicas
Alta sensibilidad
Límites de detección del orden de las
partes por billón
gran intervalo de linealidad
Alta selectividad
Técnicas no
espectroscópicas
Turbidimetría y Nefelometría
Turbidimetría y Nefelometría
Se aplica a soluciones turbias o sea cuando
debemos analizar una suspensión de
partículas sólidas en un líquido
Se basan en la dispersión de la luz
¿Qué fenómeno ocurre?
Cuando una solución turbia se interpone en la
trayectoria de la luz:
la potencia radiante que llega al detector es menor
que la que llegaría si se tratara de un líquido
transparente (no absorbente).
Esta reducción es el resultado de la dispersión
causada por reflexión y refracción en las partículas
suspendidas.
La luz se dispersa en todas direcciones y por
consiguiente el poder de radiación del haz que llega
al detector disminuye de modo considerable.
De que depende
La concentración: Mayor sea el número de
partículas, mayor es la dispersión.
Tamaño de la partícula: Factores como el pH, la
velocidad y orden de la mezcla, concentración de
los reactivos, duración del estado de reposo y la
fuerza iónica.
Longitud de onda: Generalmente las muestras se
iluminan con luz blanca, pero si están coloreadas,
se debe escoger una porción del espectro
electromagnético en la que la absorción del medio
se reduzca al mínimo.
¿Qué medimos?
La luz que lega al detector
Igual que en espectrofotometría de
absorción
Podemos usar el mismo
equipamiento que en absorción
Turbidímetro de campo
Turbidímetro de laboratorio
Turbidímetros
Aplicaciones
concentración bacteriana
sulfato en aguas
Nefelometría
Se basa en la dispersión de la radiación que
atraviesan las partículas de materia.
Cuando la luz atraviesa un medio transparente en
el que existe una suspensión de partículas sólidas,
se dispersa en todas direcciones y como
consecuencia se observa turbia.
La intensidad depende de: el número de partículas
suspendidas, su tamaño, su forma, los índices
refractivos de la partícula y del medio
dispersante, y la longitud de onda de la radiación
dispersada
Instrumento
Un nefelómetro.
Los componentes principales son muy similares
a los del instrumental empleado en las
mediciones especpectrofluorimétricas.
El detector generalmente forma un ángulo de
90° con el haz incidente.
Instrumento
Ventajas
Diferencia con la turbidimetría
La elección entre uno de ambos métodos
reside en la dispersión de luz, si es extensa,
es apropiado aplicar la turbidimetría, en
cambio si es mínima es apropiada la
nefelometría. De la nefelometría se obtienen
mejores resultados, porque determina
concentraciones de pocas partes por millón
(ppm), con una precisión de 1 al 5%.