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Nucleótidos

Las unidades de los ácidos nucleicos

Base nitrogenada

Fosfato

5’

1’

Azúcar
Azúcares

La β-D-ribosa
forma parte del
Pentosa
un azúcar ácido ribonucleico
de 5 carbonos

La β-D-
Cada uno de los carbonos numerados desoxirribosa
del azúcar de un nucleótido se indica forma parte del ácido
con una comilla tras el número; así, desoxirribonucleico
se habla del “carbono 5-prima”, etc.
Bases
Son compuestos que contienen anillos nitrogenados, tanto pirimidinas como purinas

uracilo

adenina

citosina

Pirimidina Purina
guanina

timina
Fosfatos
Se unen al hidroxilo del carbono 5’ de la ribosa o desoxirribosa.
Existen los nucleótidos mono-, di- y trifosfato.

El fosfato hace que el nucleótido quede cargado negativamente


Nomenclatura

azúcar azúcar

Base + azúcar = NucleóSido Base + azúcar + fosfato = NucleóTido

Los nucleótidos se abrevian con 3


Base Nucleósido Abreviatura
letras mayúsculas, por ejemplo:
Adenina adenosina A
AMP = adenosin monofosfato
Guanina guanosina G
dAMP = desoxiadenosin
Citosina citidina C
monofosfato
Timina timidina T
UDP = uridin difosfato
uracilo uridina U
ATP = adenosin trifosfato
Formación de la Cadena de Ácido Nucleico

Extremo 5’-PO4

Extremo 3’-OH
Formas alternativas de
representar una cadena de
ácidos nucleicos
El Ácido Desoxirribonucleico (ADN o DNA)
Existe en la Célula como una Doble Hebra
ANTIPARALELA
El Ácido Desoxirribonucleico (ADN o DNA) es una Doble Hélice

10 pares de
bases por
cada vuelta de
hélice
Calor Renaturación

Nativo Denaturado, hebra simple Renaturado

DENATURACIÓN Y RENATURACIÓN DE
MOLÉCULAS DE DNA DE DOBLE HEBRA
Estructura del Ácido Ribonucleico (ARN o RNA)
Bases nitrogenadas del RNA

Guanina Citosina Uracilo Adenina

Reemplaza timidina
Estructura del RNA
Apareamiento de adenina con uracilo
Estructura del RNA
Cadena de RNA

base

ribosa

Extremo 5’-
5’-P

Unión 3’ Unión 5’

enlace fosfodiester
Extremo 3’-
3’-OH
Estructura del RNA
Estructura secundaria del RNA

El RNA puede formar pares de bases intramoleculares; es un ácido


nucleico de hebra simple, pero contiene regiones de apareamiento de bases
que pueden resultar de una complementariedad azarosa.
Diferencias Entre RNA y DNA

• El esqueleto de azúcar y fosfato del RNA


contiene ribosa en lugar de desoxirribosa

• El RNA contiene la base Uracilo (U) en


lugar de Timina (T)

• El DNA existe como una doble hélice,


mientras que el RNA existe como una
molécula de hebra simple con algunas
regiones de apareamiento
Identificación y localización de
Componentes Biológicos.

1.- Cultivo celular


2.- Microscopia
3.- Fraccionamiento subcelular
CULTIVO CELULAR
Terminologia
Clon
• Una población derivada de una única célula

Sub-cultivo
• Traslado de células de un frasco a otro

Linea celular establecida


• Un cultivo primario que se ha vuelto inmortal debido a algunas
transformaciones
• Comunmente derivadas de un tumor o transformada con un virus
tal como Epstein-Barr
• Una de las clásicas es las células Chinese Hamster Ovary (CHO)
• Las células SH-SY-5Y derivadas de un neuroblastoma

Número de pasaje
• Numero de sucesivos sub-cultivos desde el cultivo primario
Terminologia

Cultivo de organo (organotipico)


• Un cultivo tridimensional de tejido no disgregado que retiene algo
de las características del tejido in vivo

Cultivo celular
Células individuales, no organizadas en tejidos. Derivadas desde
células disgregadas del tejido original

Cultivo primario de células


• Derivado desde un explante, directamente desde el animal
• Usualmente sólo sobreviven por un periodo corto de tiempo
• Involucra disgregación enzimática y/o mecanica del tejido de
interes y pasos de selección para aislar las células a estudiar
Biopsia de cuello de útero

Cervix raft
Ventajas y desventajas del cultivo celular

Control de las variables físico-químicas: Temperatura, pH,


osmosis, presión de O2 y CO2.

Estrictas condiciones asépticas, se debe además agregar a los


medios de cultivo suplementos como suero, plasma, fluidos
intersticiales para dar a las células un medio semejante al in vivo.
Problemas de inestabilidad genética, dificultad de relacionar lo
que sucede in vitro con in vivo.
Enemigos del cultivo celular

Micro-organismos crecen ~10-50 veces más rápido que las


células de mamíferos, a las cuales les toma ~8-16 horas
para dividirse. Las bacterias son más tolerantes a las
variaciones de temperatura, pH y nutrientes que las células.

Celulas son más vulnerables a la contaminación cuando la


asespsia es mala

Esto puede conllevar al desarrollo de micro-organismos


resistentes a antibioticos.
MICROSCOPIA
Se define como microscopio cualquiera de los distintos
tipos de instrumentos que se utilizan para obtener una
imagen aumentada de objetos minúsculos o detalles
muy pequeños de los mismos.

El tipo de microscopio más utilizado es el microscopio


óptico, que se sirve de la luz visible para crear una
imagen aumentada del objeto.
El microscopio compuesto de Hooke
Óptica de un
microscopio de luz
transmitida
HL60 AntiS HeLa AntiS HepG2 AntiS

HL60 Sense HeLa Sense HepG2 Sense


MEB MET
El microscopio electrónico de barrido (MEB) es similar al microscopio
electrónico de transmisión (MET). Ambos tienen ciertas características
comunes tales como un cañón de electrones donde se genera el haz
de electrones, lentes condensadoras y objetivo, sistema de vacío.

La diferencia principal entre ellos es la manera en que forman y


magnifican la imagen.

Esto hace que la información que se obtenga de cada uno sea distinta.

Mientras el MET permite el estudio de la ultraestructura de muestras


delgadas, el MEB posibilita conocer la morfología superficial.
Microscopio de fluorescencia
En la microscopia de fluorescencia los objetos son iluminados por rayos
de una determinada longitud de onda.

La imagen observada es el resultado de la radiación electromagnética


emitida por las moléculas que han absorbido la excitación primaria y
reemitido una luz con mayor longitud de onda.

Para dejar pasar sólo la emisión secundaria deseada, se deben colocar


filtros apropiados debajo del condensador y encima del objetivo.

Se usa para detectar sustancias con autofluorescencia (vitamina A) o


sustancias marcadas con fluorocromos
RNAmtnc RNAmtnc

PCNA Ki67

Merge Merge
Microscopio Confocal

Un microscopio confocal es un microscopio capaz de obtener imágenes


tridimensionales de la célula.

Se basa en un principio similar al de un microscopio de fluorescencia, pero se


utilizan dos diafragmas confocales (uno antes de la muestra y otro después)
capaces de enfocar la iluminación en un único punto de la muestra.

Se utiliza un láser como fuente luminosa, y con él se va barriendo la muestra por


todo su volumen, plano a plano, creando muchas imágenes bidimensionales que
un ordenador interpreta, generando finalmente una imagen tridimensional del
objeto.
Superposición de imágenes Imagen 3D

Galería de imágenes
Colocalización
FRACCIONAMIENTO CELULAR
Es en donde la solución de una muestra contiene partículas para ser
separadas en capas o zonas (zonal) en una columna de gradiente de densidad
elaborado. Las moléculas y organelos son separados de acuerdo a su masa y
forma.

Diagrama de la Técnica de Centrifugación Zonal


Comparación de los
métodos de centrifugación
mas usados
Identificación y localización de
Componentes Biológicos.

¿ donde están ?