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CURSO : Microbiología Animal

PROFESOR : TAFUR ZEVALLOS, Lizandro
ALUMNA : BONIFACIO ESPINOZA, Jherson
CICLO : 2014 - I


TINGO MARIA – 2014







































I. INTRODUCCION

Se han utilizado huevos fecundados para cultivar virus durante más de 15
años. El cultivo de virus gripal en huevo embrionado fue empleado por primera
vez por Burnet en 1935, demostrando que el embrión de pollo es un medio muy
sensible para el aislamiento de estos virus, siendo además un medio estéril y
poco costoso. Ha sido posible cultivar virus de diversos grupos en varias
cavidades del huevo fecundado, o en el propio embrión en desarrollo.
También se emplearon huevos de pato y de ganso para cultivar ciertos virus,
pues estos animales tienen un periodo de incubación mas prolongado que el
pollo; pero como regla, sigue usándose huevo de gallina de 6 a 8 días de
incubación aproximadamente (a veces se usa huevos de mas tiempo de
incubación).
Los virus sólo pueden reproducirse en determinadas partes del embrión; por
consiguiente, se deben inyectar en la región apropiada, P. ej. los mixovirus
crecen bien en la membrana corioalantoidea, en tanto que el virus de la
parotiditis prefiere la cavidad alantoidea. La infección puede producir una lesion
tisular local conocida como pústula, cuyo aspecto, a menudo, es caracteristico
del virus.

Objetivo:

 Conocer y aplicar correctamente los métodos adecuados para realizar
inoculaciones de virus en embriones aviares.















II. REVISION BIBLIOGRAFICA.


2.1. HUEVO EMBRIONADO

Los virus pueden propagarse en las membranas extraembrionarias o en el
propio embrión. Anatómicamente el huevo embrionado de gallina presentan en
su estructura las siguientes partes:
2.2. VÍAS DE INOCULACIÓN


Las vías de inoculación y la edad del embrión a usar, depende del virus que va
a ser inoculado.
Con el objeto de visualizar las cavidades se inoculará un colorante por vía
alantoidea y otro por vía amniótica. También se inoculará por vía del saco de
yema o saco vitelino.

4.1 Biológico
Huevos embrionados de 7 a 8 días y de 10 a 12 días
4.2 Material de vidrio
Placas de petri
4.3 Equipos e Instrumental
Jeringas de tuberculina con aguja
Ovoscopio
Pinzas de disección
Punzones de acero
Solución fisiológica
Tijeras curvas
4.4. Soluciones y Colorantes
Alcohol yodado
Azul de metileno al 1 % en agua destilada
Cinta adhesiva
Fucsina al 1 % en agua destilada


2.3. INOCULACIÓN POR VÍA ALANTOIDEA

 Determinar mediante el Ovoscopio en huevos embrionados de 10 a
12 días, el límite de la cámara de aire y colorear una marca entre los
vasos sanguíneos de la membrana corioalantoidea, esta estaría
aproximadamente a 1 cm. por debajo de la cámara de aire
 Cargar la jeringa con azul de metileno.
 Desinfectar la cáscara con alcohol yodado sobre la cámara de aire
 Perforar con el punzón estéril hacer un pequeño agujero con cuidado
en las zonas marcadas.
 Introducir la aguja de jeringa de 1ml. cargada con fucsina
(aproximadamente ¼ de la aguja) en un ángulo de 45 grados, e
inocular 0,2 ml del colorante.
 Cortar con tijeras la cáscara siguiendo la marca que señala la
cámara de aire, levantar la membrana corioalantoidea y observar el
líquido alantoideo coloreado, el cual se elimina vertiéndolo en un petri
con cuidado

2.3.1. Inoculación por vía amniótica

 Determinar mediante el Ovoscopio en huevos embrionados de
10 a 12 días, el límite de la cámara de aire y colorear una marca
entre los vasos sanguíneos de la membrana corioalantoidea,
esta estaría aproximadamente a 1 cm. por debajo de la cámara
de aire.
 Cargar la jeringa con fucsina
 Desinfectar la cáscara con alcohol yodado sobre la cámara de
aire por encima del embrión.
 Realizar una perforación rectangular de 0,5 cm
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 Dejar caer una gota de solución fisiológica estéril
 Introducir con unas pinzas curvas a través de ésta área dentro de
la cavidad alantoidea cogiendo al membrana amniótica hacia
arriba, formar una pequeña “tienda” en cuya base se inyecta 0,2
ml de un colorante o del inóculo problema
 Tapar la abertura con cinta adhesiva
2.3.2. Cosecha

 Cortar con las tijeras la cáscara a nivel del límite de la cámara de
aire.
 Descargar el líquido alantoideo,
 Extraer con pipeta Pasteur el líquido amniótico.
 En caso de no haber líquido, hacer un lavado con suero
fisiológico estéril (1mL) y luego se colecta este líquido

ESQUEMAS DE LAS VIAS DE INOCULACION














III. MATERIALES Y METODOS.

3.1. Lugar y Fecha

La practica acerca de técnicas de dilución, realizamos en el laboratorio de
sanidad animal de la facultad de zootecnia de la Universidad Nacional
Agraria de la Selva (UNAS - Tingo Maria) ubicado en el distrito de Rupa
Rupa, provincia de Leoncio Prado, departamento de Huanuco.
Geográficamente, esta zona se encuentra situada entre las cordilleras
central y oriental. Esta considerada como bosque Tropical. Ubicado a una
latitud sur 9° 17” 58” y longitud oeste 76° 01” 07” a 660 m.s.n.m. el clima
que presenta es tropical húmedo, temperatura media anual de 24°C, tiene
un precipitación pluvial de 3.660 mm y una humedad relativa de 84% .

3.2. Materiales
 huevos embrionados de 10 a 12 días, el límite de la cámara de aire y
colorear una marca entre los vasos sanguíneos de la membrana
corioalantoidea, esta estaría aproximadamente a 1 cm. por debajo de
la cámara de aire
 Cargar la jeringa con azul de metileno.
 Desinfectar la cáscara con alcohol yodado sobre la cámara de aire
 Perforar con el punzón estéril hacer un pequeño agujero con cuidado
en las zonas marcadas.
 jeringa de 1ml. cargada con fucsina
 0,2 ml del colorante.
 Cortar con tijeras la cáscara siguiendo la marca que señala la
cámara de aire, levantar la membrana corioalantoidea y observar el
líquido alantoideo coloreado, el cual se elimina vertiéndolo en un petri
con cuidado
3.3. Métodos

El método utilizado en la práctica fue teórico práctico con las adecuadas
indicaciones del encargado del curso el profesor Tafur Zeballos.

IV. RESULTADOS.























V. DISCUSION

En la práctica, con la inoculación de los virus New Castle ( virus solo como
suposicion en la practica) se debio
haber realizado una ensayo de Dosis letal 50%, pero por problemas de
mala manipulación, los resultados obtenidos no fueron suficientes para
poder calcularlos.
Como trabajo, se nos pidió realizar un ejemplo de DL50 y su breve
explicación.
La dosis letal 50 es la cantidad de una sustancia expresada en gr o mgr
capaz de matar al 50 % de los animales inoculados. La DL50 es una medida de
uso común en Toxicología y en Farmacología, también se aplica para el cálculo
de título de un virus que en ese caso sería la cantidad de virus necesaria para
matar al 50% de la población. En algunos casos suele usarse la DL25 o la
DL75.

VI. CONCLUCIONES

 Debido a la mala manipulación no se pudo realizar el cálculo de la
dosis letal 50.
 A través de la inoculación seriada de los huevos embrionados y
controlando cuantos mueren por cada dilución se puede formar una
tabla que nos serviría para poder hallar la dosis letal 50.


VII. BIBLIOGRAFIA

 ACTON, J. (1967) Virología. Edit. Interamericana. México D.F.
 MADIGAN, M. y J. PARKER (1997) Brock Microbiología de los
Microorganismos. 8º Edic. Edit. Mc Graw Hill. Mexico D.F.
 PRESCOTT L., J. HARLEY, D. KLEIN (1999). Microbiologia. 4º edic.
Edit. Mc Graw Hill Mexico D.F.