You are on page 1of 3

Comparativa de diferentes metodos de

determinación de biomasa a partir de
productos de fermentacion de 24 en
fermentador tipo Bach.

Dra. Ana Karin Navarro, Claudio Angel Zepeda del Valle
Instituto de Biotecnología, Universidad del Papaloapan Campus Tuxtepec
Circuito Central #200 Col. Parque Industrial
Tuxtepec, Oax., México
C.P. 68301





1 RESUMEN
En la formación biomasa apartir de azucares reductores con microorganismos se pueden usar varias
metodologias para la determinación la cantidad de biomasa formada.
En el presente trabajo se muestran las diferentes metodologias utilizadas como son la tecnica de peso
seco, conteo de unidades formadoras de colonias y la cuenta directa en microscopio.
Tambien se hace una comparación entre las diferentes tecnicas, como son sus ventajas y desventajas y
en que clase de ensayos es recomendable utilizar cada uno.

PALABRAS CLAVES: Metodologia, peso, seco, unidades, formadoras , colonias, cuenta, directa,
microscopio.




1.1 METODOLOGIAS

1.1.1 Técnica de peso seco
Es una manera indirecta de estimar la carga
microbiana de una muestra. El peso neto se
puede medir centrifugando una alícuota de la
muestra y pesando posteriormente el depósito
de células obtenido.
1.1.1.1 Ventajas
Esta técnica es útil para grandes
volúmenes de muestra, debido a que
diferencias del orden de los miligramos
representan el peso de un gran número de
bacterias.
1.1.1.2 Desventajas
La desventaja de este método es que
componentes volátiles de la célula pueden
perderse por el secado y puede existir alguna
degradación. También la muestra seca puede
recobrar humedad durante el pesado,
principalmente si el ambiente tiene una
humedad relativa alta.

1.1.2 Técnica de UFC
Método más usado para contar bacterias.
Un caldo de cultivo con microorganismos es
diluido y posteriormente muestras del mismo
son distribuidas en la caja de petri contenedora
de agar. Es de suponerse que cada célula se
dividirá en sus múltiples alrededores para
producir colonias separadas en el agar. Cada
célula es llamada unidad formadora de
colonias (UFC). Después de la incubación, el
número de colonias se reflejará en el número
de células UFC originalmente presentes. Es
importante considerar un número limitado de
colonias pues de no ser así, éstas pueden sobre
poblarse y dificultar el conteo de las mismas
(rango sugerido de acuerdo a FDA 25-250
colonias). El conteo se facilita utilizando
un contador de colonias.
1.1.2.1 Ventajas
Este método es deseable porque arroja
el total de células viables (sólo células vivas).
1.1.2.2 Desventajas
Una desventaja se encuentra en el
tiempo que requiere para producir las colonias,
ya que se necesitan como mínimo 24 horas o
más. Por otra parte, no es 100% fiable porque
regularme las colonias crecen unidas en
cadenas o en grupos.

1.1.3 Técnica de conteo directo
Método para contar células de una muestra de
cultivo diluida en cámara de volumen pequeño
y conocido. Se cuentan células en varios
cuadrados de la cámara y se realiza promedio.
1.1.3.1 Ventajas
Es rápido, Las exigencias del equipo son
mínimas, se pueden observar las diferencias
morfológicas de los microorganismos.
1.1.3.2 Desventajas
No se distinguen células vivas de muertas,
Se analiza poca cantidad de muestra, provoca
cansancio del operador, sólo sirve para
muestras con cargas superiores a 10.000 por ml,
difícil distinguir los m.o de las partículas de la
muestra Una inadecuada distribución de la
muestra sobre la superficie del portaobjetos.





1.2 RESULTADOS



La grafica anterior muestra cómo fueron los
conteos para peso seco (línea verde), esporas
(línea roja) y bacilos (línea azul).
Se puede observar que si existe una relación
entre la fase de muerte de los bacilos con las de
generación de esporas, y que posteriormente se
observa que al aumentar la concentración de
bacilos, la concentración de esporas se
mantiene.
En cambio la línea del peso seco si está acorde
con la fase exponencial, de ahí hay un aumento
en el peso de los papeles filtro que podría
indicar más generación de bacilos o mejor dicho
biomasa.

1.3 REFERENCIAS
 http://es.wikipedia.org/wiki/Conteo_ba
cteriano
 http://www.fagro.edu.uy/~microbiologi
a/docencia/materiales%20teoricos/eval
uacion%20del%20crecimiento.pdf
 http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.
ar/SeminarioRecuento.htm