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UNIVERSIDAD NACIONAL PEDRO RUIZ GALLO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS
DECANATO




PROYECTO DE TESIS

I. GENERALIDADES

1. Título del Proyecto:
“Efecto del Tacrolimus (inmunosupresor) en
población granulocítica de Cavia porcellus”

2. Personal Investigador:
2.1 Autor: CUBAS ALARCON, Deniss Manuel
2.2 Patrocinador: Blgo. ESPINOZA VALERA, Carlos

3. Carrera Profesional/Especialidad:
 Carrera Profesional de Biología
 Especialidad de Microbiología y Parasitología

4. Tipo De Investigación:
4.1 De acuerdo al fin que se persigue: Aplicada.
4.2 De acuerdo a la técnica de contrastación: Explicativa.

5. Régimen de Investigación: Libre

6. Localidad e Institución donde se desarrollará el proyecto:
Laboratorios de Microbiología y Parasitología de la Facultad de Ciencias
Biológicas de la Universidad Nacional Pedro Ruíz Gallo.

7. Duración del proyecto: 4 meses

Fechas de inicio y terminación:

7.1 Inicio: 17 de marzo
7.2 Terminación: 12 de junio




8. Cronograma de Trabajo

ACTIVIDADES MESES
Marzo
2014
Abril
2014
Mayo
2014
Junio
2014
FASES DE PLANEAMIENTO
o Revisión Bibliográfica X
o Elaboración de proyecto
X
o Presentación de proyecto
X
o Aprobación de proyecto
X
o Implementación de proyecto
X
FASES DE EJECUCIÓN

o Recolección de muestra
X X X
o Procesamiento de muestra
X X X
o Registro de datos
X X X
o Análisis estadístico de datos
X X
FASES DE COMUNICACIÓN

o Análisis e interpretación X
o Elaboración de informe X
o Presentación de informe X




9. Recursos disponibles:

 Personal:
Personal del servicio técnico del Laboratorio de Microbiología y Parasitología.
UNPRG- Lambayeque.

 Local:
Laboratorios del Área de Microbiología y Parasitología de la Universidad
Nacional “Pedro Ruiz Gallo”

II. PLAN DE INVESTIGACIÓN

 Realidad Problemática
La agranulocitosis es un trastorno hematológico grave, con una mortalidad de 3 a
8%. Se caracteriza por una reducción severa y selectiva de los granulocitos
(neutrófilos, eosinófilos y basófilos) circulantes y que tiene una causa genética,
congénita o adquirida, pero frecuentemente ocurre como una reacción adversa a
ciertos medicamentos. (Laporte JR.1989)
Se desconoce la incidencia y es difícil cuantificar el riesgo individual de cada
medicamento que lo produce. Sin embargo diferentes autores han estimado su
incidencia en 7,3 a 9,3 casos/millón de habitantes/año.
En la actualidad el uso de algunos medicamentos son los que generan la
agranulocitosis, que muchas veces favorece en los avances de la medicina, como
en los transplantes de órganos o en el tratamiento de algunas enfermedades
inflamatorias inmunes, como es el caso de Tacrolimus, un inmunosupresor muy
usado hoy en día con la finalidad de reducir la respuesta inmunológica frente a un
transplante.
Tacrolimus es un macrólido insoluble en agua con efectos inmunosupresores
derivado del actinomiceto Streptomyces tsukubaensis. Actualmente, se fabrica
para administración oral e intravenosa en la profilaxis del rechazo de órganos, en
pacientes que reciben un riñón alogénico o en trasplantes de hígado. Su uso se ha
visto complicada por varios efectos secundarios como la diabetes mellitus, la
hipertensión arterial y la neurotoxicidad.
La administración de Tacrolimus puede realizarse por vía intravenosa u oral para
conseguir un efecto sistémico. La absorción por vía oral es variable, presentando
una biodisponibilidad del 20-25%. Los alimentos reducen la absorción de este
fármaco, por lo que se aconseja retrasar la ingesta al menos una hora desde la
administración del fármaco. Administrado de forma tópica en la piel apenas se
absorbe, por lo que Tacrolimus no se detecta en sangre salvo que exista una
alteración importante en la función de barrera cutánea.
La elevada variabilidad farmacocinética interindividual, la ausencia de una
estrecha correlación entre la dosis administrada y las concentraciones obtenidas y
un intervalo terapéutico estrecho han puesto de manifiesto que el análisis de los
fármacos inmunosupresores es un prerrequisito para el ajuste de las dosis según
necesidades de cada paciente. Es por ello la importancia de este trabajo, para
determinar a qué concentraciones y por qué vías de aplicación serán las más
efectivas y las que menos efectos adversos conlleven.
 Planteamiento del problema
¿Administrando Tacrolimus (inmunosupresor) a Cavia porcellus (cobayo) se
podrá generar variación en su población granulocítica ?
 Objetivos
Demostrar la acción del Tacrolimus (inmunosupresor) frente a los granulocitos
de Cavia porcellus (cobayo) mediante la inoculación vía intraperitoneal u oral.
 Hipótesis
Administrando Tacrolimus a Cavia porcellus producirá variación poblacional de
granulocitos.
 Justificación e importancia
Teniendo en cuenta, que existe la frecuente utilización de Tacrolimus, y no
existen datos científicos de tipo experimental que informen sobre la prevalencia
de agranulocitosis, ni los posibles factores de riesgo al administrar este fármaco,
es oportuno este estudio encaminado a cubrir ese vacío del conocimiento.
Es por ello que la finalidad de este trabajo es informar a la comunidad mediante
los resultados obtenidos durante el transcurso de la ejecución del proyecto y
sensibilizarlos a tomar conciencia del problema que constituye.

 Antecedentes
Habitualmente la neutropenia se presenta con un recuento de granulocitos < 1.500
células/ microlitro; hay neutropenia grave cuando el número de neutrófilos es
menor a 500/ microlitro, y agranulocitosis en casos de neutropenia grave (menos
de 100 células/microlitro) sintomática, como presencia de fiebre, deterioro del
estado general, ulceraciones orofaríngeas y/o perineales. (Banchero P, Giachetto
G. 2002)
Menciona que la agranulocitosis causada por fármacos tiene una incidencia
variable, con diferencias regionales importantes. En el caso de Suecia, la
incidencia es alta (1 cada 1.700 consumidores), por lo que se prohibió
definitivamente su consumo en 1999. (Elías PA, 2006)
La aplicación a corto plazo de la pomada de tacrolimus es eficaz en el tratamiento
de la dermatitis atópica, con la sensación de ardor siendo el principal efecto
secundario.( Ruzicka, 1997)
Hay marcada heterogeneidad en las concentraciones en sangre de tacrolimus tras
estándar con base en el peso corporal de la dosificación. Esto es más evidente en
los pacientes negros, que tienen un requerimiento de la dosis más alta en
comparación con otros grupos étnicos. El genotipo CYP3AP1 es un factor
importante en la determinación de la dosis requerida para el tacrolimus, y
genotipado puede ser de valor en la planificación de la dosificación del fármaco
específica del paciente. (Macphee, 2002)
Las reacciones hematológicas adversas comunicadas durante el tratamiento con
tacrolimus son anemia (30—59%), leucocitosis (32%), leucopenia (15%), y
trombocitopenia (24%). Los pacientes tratados con tacrolimus son más
susceptibles al desarrollo de linfomas o desórdenes linfoproliferativos. En algunos
casos el desorden linfoproliferativo ha estado asociado a una infección por virus
Epstein-Barr. (Staatz, 2004)

 Materiales
 Material Biológico
 Cavia porcellus (Cobayo)
 Material de Laboratorio
 Tubos de ensayo pyrex 10x50 mm, 13x100 mm
 Jeringas
 Centrifuga
 Gradilla
 Tabla de disección
 Reactivo de turk
 Anticoagulante
 Microscopio
 Cámara de Neubauer
 Reactivo de Ficoll-Hypaque
 Limaduras de hierro
 NaCl al 0.9%
 Diseño Metodológico
 Determinaciones basales:
Es necesario estar seguros de la ausencia de agranulocitosis por lo que
se determina el recuento basal de la siguiente manera:
 Obtención de muestra:
 Colocar el cobayo en la tabla de disección y sujetar
 Limpiar la zona cardiaca con alcochol e introducir la
tuberculina para obtener el líquido sanguíneo(1ml)
 Realizar el frotis: colocar una gota de sangre en uno de los
extremos del porta y coger otro porta objetos y colocar sobre
el.
 Primero en un angulo de 40 a 30 grados esperando que la
sangre se extienda por capilaridad realizando un movimiento
rápido a la izquierda.
 Técnica de coloración (Wright)
 Dejar secar espontáneamente al aire 5 minutos
 Coloración con el colorante Wright dejar actuar por 5 minutos,
luego cubrir con igual cantidad de agua por 4 minutos
 Luego lavar con agua destilada y dejar secar en posición
vertical 5 minutos.
 Agregar aceite de cedro y observar al microscopio óptico con
el objetivo de inmersión
 Recuento en diferentes campos y anotar el número de
granulocitos por campo.
 Determinación del peso del medicamento
El tacrolimus viene en capsulas de 0.5, 1 y 5 mg. Y se recomienda una
dosis oral de 0.05 -0.1 mg/kg/dia, es por eso que se determinó la
cantidad adecuado de este medicamento para cobayos en una regla de
tres simple:
0.5 mg -------------------------- 1kg
X mg -------------------------- 1.5 kg
X = 0.75 mg
Preparamos la solución con el capsula de 1 mg en solución salina
fisiológica (10ml)
10ml ---------------------------------1mg
X ml -------------------------------- 0.75mg
X = 10ml (0.75mg) / 1mg
X = 7.5ml
 Referencias Bibliográficas
 Banchero P, Giachetto G. Agranulocitosis inducida por
medicamentos.Arch Pediatr Urug 2002; 73(2): 74-7.
 Benet L, Keroetz D, Sheiner L. Farmacocinética dinámica de la absorción,
distribución y eliminación de fármacos. En: Hardman J, Limbrid L,
Molinoff P, Ruddon R, Goodman Gil-man A. Las Bases Farmacológicas
de la Terapéutica. 9 ed. Mexico: Mc Graw Hill, 1996: 3-30.
 Kiono W, Coates T. Estrategias prácticas en trastornos de neutrófilos.
Clin.Pediatric Norteam 2003; 49(5): 889-934.
 Staatz CE, Tett SE. Clinical Pharmacokinetics and Pharmacodynamics of
Tacrolimus in Solid Organ Transplantation. Clinical Pharmacokinetics
2004, Vol. 43 Issue 10, p623-54.
 Högenauer C, Wenzl HH, Hinterleitner TA, Petritsch W. Effect of oral
tacrolimus (FK 506) on steroid-refractory moderate/severe ulcerative
colitis. B Alimentary Pharmacology & Therapeutics, Aug2003, Vol. 18
Issue 4, p415-24.
 http://journals.lww.com/transplantjournal/Abstract/2002/12150/Tacrolimu
s_pharmacogenetics__polymorphisms.2.aspx