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DETERMINACIN DE UNA BACTERIA MEDIANTE ENSAYO BIOQUIMICO

INTRODUCCIN A LA MICROBIOLOGA IWQ261




Autores (Grupo 8):
-Felipe Ortega
-Ignacio Pereira
-Nicols Rebolledo
-Sebastin Trautmann
-Javier Vidal


RESUMEN


(35%) (Texto justificado, tamao 12, un espacio en blanco sobre) (Mximo 200 palabras).
En esta seccin del documento se debe explicar brevemente todo el contenido del documento.
Debe incluir: introduccin, procedimiento experimental, resultados ms importantes y
conclusin general.
Esta seccin no se numera y debe ser escrita al finalizar el informe completo.


INDICE
1.-Introduccin
2.-Objetivos
3.-Procedimiento experimental
4.-Resultados y discusin
5.-Conclusiones
6.-Referencias y Apndice


















INTRODUCCIN

El estudio de los microorganismos representa un aporte fundamental a la supervivencia de
todos los seres vivos del planeta, esto es por su composicin de elementos importantes como C,
H, O, N, entre otros y tambin por su funcin, la cual consiste en liberar la energa qumica
almacenada por fotosntesis en los compuestos orgnicos, la cual se presenta en forma de
almidn o azcar. Algo similar ocurre con los compuestos inorgnicos.

El grupo de laboratorio se dividi para crear los medios de cultivo, para el caso particular del
grupo se trabaj con el medio Agar TSI que gracias a su composicin es uno de los medios ms
utilizados para diferenciar entero bacterias; por lo que sirve para comprobar la fermentacin de
azcares como glucosa, sacarosa y lactosa, tambin es usado para estudiar la produccin de
cido sulfrico y gases.
Los otros medios corresponden a McConkey, Urea, Citrato de Simmons, MIO, LIA, Tioglicolato y
Agar Sangre.

El fin de crear los medios de cultivos fue someterlos a ensayos bioqumicos con bacilos Gram-
negativos en diferentes tubos de ensayo, se hicieron al menos dos pruebas con el mismo medio
para asegurarse de los resultados, de esta forma se estudi la reaccin de cada medio y as se
pudo discernir la composicin de la muestra y con la ayuda de la tabla de ensayos se pudo
reconocer el tipo de bacteria que para el caso del grupo fue K.Penumoniae.

Las clulas de las bacterias resultan muy difciles de ver en el miroscopio, esto es por su tamao
y por el contraste entre la clula y el medio en donde se encuentra por lo que para aumentar el
contraste se utilizan colorantes, de manera de poder distinguir la presencia o ausencia de
clulas, o para dilucidar presencia de algunos constituyentes de stas tales como flagelos,
esporas, paredes celulares, etc.
Es por esto que la otra parte de esta experiencia fue dedicada a la tincin Gram, en donde se
prepar un frotis y con el procedimiento necesario se pudo identificar si la muestra era Gram
positiva o Gram negativa.









OBJETIVOS
Al realizar el estudio se tienen como objetivos principales los siguientes puntos:

Aprender el procedimiento necesario para realizar un ensayo Bioqumico.
Saber qu es un medio de cultivo, sus propiedades y cualidades.
Identificar diferentes grupos bacterianos dependiendo del comportamiento que
presenta ste en los diferentes medios de cultivos.
Conocer y entender cmo funciona un crecimiento bacteriano incubado en un medio.
Discernir entre diferentes tipos de bacterias para reconocer la que posea las
caractersticas de la que se estudia.
Aprender el procedimiento para realizar una tincin Gram y discernir si corresponde a
positiva o negativa.



























PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

El estudio de un cultivo bacteriano considera la siembra de microorganismos en medios slidos
tanto como medios lquidos. Primeramente se tiene un medio liofilizado del cual se toma una
porcin (masando 32,503 [g]), que es rehidratado con agua destilada. Debe tenerse en cuenta el
pH que debe tener el medio expresamente indicado en la preparacin. Posteriormente se
trasvasija a un vaso de precipitado donde es calentado hasta cerca del punto de ebullicin para
su correcta disolucin. Una vez calentado y correctamente disuelto, se trasvasija nuevamente a
tubos de ensayo que son tapados con algodn card, almacenados en un matraz que es
cubierto con papel aluminio asegurado con cinta de control de esterilizacin para el aislamiento.
Este matraz es llevado a un autoclave para la esterilizacin total.

Dejado pasar unos das se retiran los tubos del matraz para comenzar la siembra de
microorganismos en medio lquido. Para esto, se toma el tubo que contiene el desarrollo
microbiano a cultivar y se coge una pequea muestra de este con una pipeta especial (pipeta
Pasteur) que previamente es esterilizada al mechero. Dependiendo de los ensayos bioqumicos,
se realizan diferentes operaciones de siembra.






















RESULTADOS Y DISCUSIN

Los resultados de siembra obtenidos en los diferentes medios se presentan como sigue:

ENSAYOS BIOQUMICOS OBSERVACIN

Negativo
Lactosa Positivo
Citrato de Simmons Positivo
Urea Negativo
Movilidad No hay movilidad
Indol Negativo
Ornitina Positivo
Lisina Descarboxilasa Positivo

El estudio de

dentro del medio Kligler o TSI, se observa cuando existe una produccin de
este gas que es detectado mediante la post produccin de sulfuro de hierro de color negro. No
existen evidencias de tonalidades negras en el medio por lo que la observacin es negativa.

Dentro del medio Kligler, hay aparicin de lactosa cuando la superficie de medio se vuelve
amarilla, debido a la fermentacin de la sustancia. Las observaciones permiten apreciar que
ocurre este cambio de color.

En el Citrato de Simmons, se evala el cambio de color, especficamente de verde a azul. Los
resultados indican una variacin de color efectiva, utilizando el medio como fuente de carbono
provocando una alcalinizacin de ste y por tanto haciendo variar el color del indicador.

En el agar Urea se evala un cambio de color a un rojo cereza que se debe a la produccin de
amonio que produce una alcalinizacin de este. Este cambio no es observado debido a que
mantuvo una tonalidad rosada clara, por consiguiente no ser un punto muy determinante en el
anlisis final.

El anlisis de la movilidad, evaluada en el medio MIO, se hace determinando si en el pinchazo
del medio donde se inocula la muestra, se extiende a travs de este. Los resultados indican que
no existe crecimiento en ese espacio.

El indol, analizado en el MIO, arroja resultados positivos si en la interfase se forma un anillo de
coloracin rojiza debido a la reaccin con el indol y el triptfano producido por la bacteria, lo
cual no es observado.

Para el caso de la ornitina, estudiada en el medio MIO, se debe mantener un color morado en el
medio que es fcilmente observable.

Por ltimo la lisina descarboxilasa, en el medio LIA, los resultados positivos se presencian
cuando el color amarillo plido del indicador presente, se torna a morado a causa de una
descarboxilacin de la lisina, formando cadaverina que es alcalina. Se observan resultados
positivos.
































[CONCLUSIONES] (10%) (Mximo 1 pgina)
En esta seccin se presentarn las conclusiones obtenidas luego del anlisis de los resultados.
Las conclusiones deben responder los objetivos presentados previamente.




































REFERENCIAS

-Tcnicas de Tincin: Fundamentos
http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioTinciones.htm

-www.britanialab.com.ar


Se presentan claramente las fuentes bibliogrficas utilizadas. Formato: 1) Publicaciones
(papers): Autores (Ao). Ttulo. Revista. volumen (pgina). 2) Libros: Autor (es). Ttulo. Edicin
(ao). Captulo. Pgina. 3) Pgina web: Ttulo. Link.

[APNDICES] (10%) (Sin lmite, pero no debe ser mayor al documento)
Los distintos apndices deben ser separados y numerados con letras (A, B X). La primera
pgina debe presentar un ndice que muestre los ttulos de cada apndice. Los apndices deben
presentar un ttulo y una breve introduccin que presente su contenido (un prrafo).
Apndices sugeridos:
A. Ejemplo de clculo: Utilizando un dato base, se muestran los clculos realizados para
obtener su resultado correspondiente.
B. Datos: Se presentan tablas con los datos originales obtenidos en el laboratorio.