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1. TTULO DA EXPERINCIA.
AO DE AGENTES ANTIMICROBIANOS


2. OBJETIVOS.
- Determinar a sensibilidade de um microorganismo a determinados agentes
antimicrobianos pelo mtodo de difuso;
- Identificar a rea que corresponde ao halo de inibio do agente antimicrobiano na
prtica;
- Determinar as condies necessrias para realizao do antibiograma de bactrias
aerbicas e anaerbicas facultativas.


3. FUNDAMENOS TERICOS.
Mecanismos de ao dos Antibiticos

Algumas bactrias so normalmente resistentes as determinado antibitico,
enquanto outras so sensveis. As bactrias podem ser classificadas como sensveis
ou resistentes aos antimicrobianos. A resistncia pode ser natural ou adquirida.
Na natural, todas as amostras de uma espcie possuem essas
caractersticas, e na adquirida, parte das amostras resistente e a outra sensvel.
A aquisio de resistncia por uma clula bacteriana sensvel decorrncia de uma
alterao gentica que se expressa bioquimicamente.
O antimicrobiano no induz a resistncia, mas um agente selecionador dos
mais resistentes existentes no meio de uma populao.
Existem vrios mecanismos diferentes que podem explicar a resistncia das
bactrias aos antibiticos, como:
Destruio ou inativao da droga, pela destruio do anel -lactmico, pela
enzima -lactamase ou penicilinase produzida pela bactria.
Incapacidade do antibitico de penetrar na superfcie das clulas bacterianas.
Alterao dos stios-alvo das drogas, como a troca de um aminocido. A
bactria pode possuir uma via bioqumica alternativa que desvia a reao
particular que inibida pelo antibitico da clula.
Fluxo rpido: ejeta a droga para fora antes que possa se tornar efetiva.
A resistncia mediada por mutaes normalmente simples, e atinge apenas um
antibacteriano. A resistncia mediada por fator R (plasmdeo) pode ser simples, mas
na maioria das vezes mltipla, tornando a bactria resistente a dois ou mais
antimicrobianos graas presena de genes de resistncia para diferentes
antimicrobianos em um s plasmdeo.
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A resistncia hereditria carregada pelos plasmdeos ou por transposons
(pequenos segmentos de DNA). A transferncia pode ocorrer de uma bactria para
outra por conjugao, transduo ou transformao.
Em bactrias frequentemente selecionadas em hospitais, pode ocorrer a
associao de resistncia por mutao e plasmdeo R em uma s bactria.
Grupos antibacterianos
-lactmicos: atravs da produo de -lactamases que as bactrias se
tornam resistentes a estes antibiticos. Estas enzimas hidrolisam o anel -lactmico,
transformando os antibiticos em produtos inativos.
Aminoglicosdeos: Existem trs mecanismos de resistncia a estes
antibiticos: alteraes na permeabilidade, modificaes ribossmicas e produo
de enzimas inativantes. Este ltimo mediado por plasmdeo, os outros por
mutaes.
Tetraciclinas: As bactrias se tornam resistentes s tetraciclinas por
aquisio de plasmdeos de resistncia.
Cloranfenicol: A resistncia bacteriana ao cloranfenicol feita pela enzima
cloranfenicol-acetil-tranferase (CACT), fazendo com que a droga perca afinidade
pelo seu alvo.
Eritromicina: Pode ocorrer por mutao ou plasmdios de resistncia.
Rifamicinas e quinilnicos: Ocorre devido a mutaes que alteram as
enzimas RNA polimerases e girases, fazendo com que as enzimas no mais se
combinem com os dois grupos de drogas.
Sulfonamidas e trimetoprim: A resistncia bacteriana as sulfonamidas pode
ser por mutao ou por plasmdios de resistncia. A resistncia ao trimetoprim
causada por plasmdeo.
Glicopeptdeos: Uma enzima que permite que o estgio final da ligao
bloqueado pela ao das drogas seja ento concludo produzida por enterococos
resistentes.
Aquisio de resistncia bacteriana
O primeiro antibitico, a penicilina, foi descoberta por Alexander Fleming, em
1929, em um hospital londrino. Ele observou a inibio do crescimento em placa de
uma cultura de estafilococos contaminada por um fungo, mais tarde identificado
como Penicillium notatum. Anos mais tarde, com o advento da Segunda Guerra
Mundial, foi imperativo que se estudasse e que se pesquisasse mais a quimioterapia
moderna, pois com a guerra eram inevitveis os ferimentos e, com eles, as
infeces. A penicilina foi ento extensamente utilizada contra estafilococos e
estreptococos, grandes causadores de pneumonias, infeces areas superiores,
septicemias etc. A nova droga tinha grande capacidade em dizimar essas infeces
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e, ainda, atuava de acordo com os princpios da quimioterapia moderna, ou seja,
com toxicidade seletiva.

A resistncia nova droga foi descrita quase que imediatamente, bactrias
produtoras de penicilinase, hoje chamadas b-lactamases, sobreviviam teraputica
clnica e s altas doses efetivamente atingiam sucesso, concentraes inatingveis
sem efeitos de toxicidade. O desenvolvimento de resistncia penicilina pelo
Staphylococcus aureus, atravs da produo de b-lactamase, diminuiu
significativamente o uso dessa droga em infeces estafiloccicas, principalmente
em pacientes hospitalizados nos quais as cepas resistentes so encontradas antes
de sua disseminao comunidade.

Com a evoluo da antibioticoterapia as cepas de S. aureus foram tornando-
se cada vez mais resistentes devido produo de b-lactamases. Em 1946, apenas
5% das cepas de S.aureus eram produtoras de b-lactamase, atualmente, relatos de
1990 mostram que 90% das cepas produzem a enzima.

Inicialmente o fenmeno da resistncia bacteriana no parecia ser um
problema to grande. Foi temporariamente resolvido com a introduo de novos
agentes antibacterianos, tais como os aminoglicosdeos, macroldeos,
glicopeptdeos e ainda alteraes estruturais nos compostos j existentes que
refletiam em alterao de sua atividade e espectro antimicrobiano.

Hoje se conhecem microrganismos multirresistentes, no sensveis a
quaisquer dos antibiticos disponveis clinicamente, levando rapidamente morte
pacientes hospitalizados. Esses casos so cada vez mais frequentes, inclusive no
Brasil.

O objetivo desta reviso mostrar quais as formas de aquisio de
resistncia por microrganismos, como essa resistncia tem se manifestado e mais, o
que cada profissional da rea de sade pode fazer para diminuir a disseminao de
microrganismos resistentes e o que rgos e associaes de sade do mundo todo
tm preconizado para esse fim.

As bactrias tm sido classificadas como resistentes ou sensveis de acordo
com dados de CMI (Concentrao Mnima Inibitria) CMB (Concentrao Mnima
Bactericida). So ditas resistentes quando so inibidas in vitro s em concentraes
superiores quelas atingidas in vivo.

Essa relao concentrao da droga-inibio de crescimento no deve ser
encarada como completamente verdadeira, pois o sucesso teraputico no depende
exclusivamente dessa relao, mas, sim, passa por fatores que incluem a
capacidade da droga em atingir o foco infeccioso, caso da eritromicina,
extremamente ativa contra o meningococo, mas que no penetra no sistema
nervoso central, ou seja, fatores farmacocinticos. Ainda o comprometimento
imunolgico do paciente, alvo da terapia, o quanto essa imunidade pode contribuir
para auxiliar a teraputica quimioterpica.

Dessa forma, um dado microrganismo sensvel ou resistente apenas
quando se observa o sucesso ou insucesso teraputico, respectivamente. Visto isso,
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deve-se encarar a teraputica de uma maneira mais abrangente, menos simplista,
considerando-se: droga, microrganismo, farmacocintica e imunidade do paciente.

A resistncia de dado microrganismo determinada droga pode ser
classificada inicialmente como intrnseca ou adquirida. A resistncia intrnseca
aquela que faz parte das caractersticas naturais, fenotpicas do microrganismo,
transmitida apenas verticalmente prole. Faz parte da herana gentica do
microrganismo.

O maior determinante de resistncia intrnseca a presena ou ausncia do
alvo para a ao da droga. Assim, antibiticos polinicos, como a anfotericina B,
atuam contra fungos devido sua capacidade de ligao a esteris componentes de
sua membrana. Alteram sua permeabilidade, levando-o morte.

Como bactrias no possuem esteris em sua membrana, sendo essa uma
caracterstica natural, so, portanto insensveis a essas drogas. Outro clssico
exemplo a relao entre inibidores da sntese da parede celular, tal como as
penicilinas e micoplasmas. Esses microrganismos no apresentam essa estrutura
celular, logo penicilinas no encontram alvo para sua ao nesses microrganismos.

Essa caracterstica fenotpica transmitida verticalmente de gerao a
gerao sem perda da caracterstica. A resistncia intrnseca ou natural no
apresenta qualquer risco teraputica, pois previsvel, bastando-se conhecer o
agente etiolgico da infeco e os mecanismos de ao dos frmacos disponveis
clinicamente.

A resistncia ainda pode ser no natural ou adquirida. Ocorre quando h o
aparecimento de resistncia em uma espcie bacteriana anteriormente sensvel
droga em questo. uma "nova" caracterstica manifestada na espcie bacteriana,
caracterstica essa ausente nas clulas genitoras. Essa nova propriedade
resultado de alteraes estruturais e/ou bioqumicas da clula bacteriana,
determinada por alteraes genticas cromossmicas ou extra-cromossmicas
(plasmdios). Uma simples alterao gentica pode levar ao aparecimento de um
exemplar muito resistente, que normalmente no perde viabilidade e patogenicidade.

A aquisio de resistncia tem diminudo muito a atividade de importantes
antibiticos, servindo como objetivo maior de pesquisadores para a busca de novas
drogas, associaes ou esquemas teraputicos.

O primeiro relato de resistncia adquirida foi dado por Paul Ehrlich entre 1902
e 1909, mostrou que algumas espcies de tripanossomas no respondiam mais ao
tratamento com azo-corantes. Em 1938, quase todas as cepas de Neisseria
gonorrhoeae eram sensveis s sulfonamidas, dez anos mais tarde, apenas 20%
dessas cepas ainda apresentavam suscetibilidade. Essa diminuio na atividade se
estendeu tambm a estreptococos hemolticos, pneumococos, coliformes e outras
espcies.

Faz-se imperativo salientar que antibiticos no so agentes mutagnicos,
portanto no causam mutao em microrganismos, no fazendo aparecer qualquer
nova caracterstica na bactria. preciso que se entenda que antibiticos exercem a
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chamada "presso seletiva", ou seja, em contato com microrganismos exercero sua
atividade, levando morte as cepas sensveis sobrevivendo ento as resistentes.

Com o uso frequente, essa seleo leva ao predomnio das cepas que de
alguma forma sobreviveram, multiplicaram-se e agora maioria. Portanto, fica claro
porque em ambientes hospitalares ou comunidades sem qualquer controle no uso
dessas drogas o aparecimento de cepas multirresistentes mais frequente e
tambm mais complicado.

O uso indiscriminado, irresponsvel e ignorante de antibiticos, teraputica ou
profilaticamente, humano ou veterinrio, passando ainda pelo uso no crescimento
animal e propsitos agrcolas, tem favorecido a essa presso seletiva, mostrando
como resultado a seleo e predominncia de espcies cada vez mais resistentes.

Em um artigo publicado na Inglaterra, em 1998, o autor mostra dados
relativos ao uso de antibiticos no mundo. Mostra que de todas as drogas utilizadas,
50% se destinam a uso humano e 50% ao agroveterinrio. Da frao de drogas
usada em humanos, 20% so em hospitais e 80% comunitria. Desse montante,
calcula-se que de 20% a 50% no haja necessidade de uso. Para o uso veterinrio,
os dados so mais alarmantes, 20% so usados terapeuticamente e at 80% para
uso profiltico e promoo de crescimento. Estima-se que at 80% do uso
agroveterinrio altamente questionvel.

Alguns autores ainda condenam o uso indiscriminado e sem controle de
antibiticos contra acne, o uso exagerado em hospitais, o uso em pacientes com
presena de H. pylori sem leso ulcerosa e, ainda, defende um maior controle do
uso em odontologia, pois genes de resistncia do Streptococcus pneumoniae
parecem ter se originado de estreptococos da cavidade oral. Esses mesmos autores
ainda implicam o ensino mdico como responsvel por grande parte do uso
indiscriminado de drogas, ressaltando a importncia da conscientizao do
estudante para esse grave problema.

O uso indiscriminado no se relaciona diretamente com a pobreza ou falta de
recursos de um pas. Na Frana, nos anos de 1991/92, foi realizado um
levantamento sobre o uso de antibiticos em crianas, chegando-se a valores
absurdos para o uso de antibiticos em infeces de etiologia viral. Em torno de 25%
das crianas da comunidade em estudo tomaram antibiticos contra infeces virais.

Em um estudo publicado no ano de 1987 os autores mostraram a quantidade
de antibiticos consumida teraputica, profilaticamente e na conservao de
alimentos no ano de 1980. Chegaram ao espantoso valor de 17 mil toneladas de
penicilina, o que naquele ano seria igual ao consumo de 3,84 g da droga para cada
habitante da terra.

Para uma melhor compreenso do fenmeno global de resistncia bacteriana
preciso entender como microrganismos adquirem resistncia, como passam a
expressar essa nova caracterstica, de onde vem essa informao.

A aquisio de resistncia pode aparecer originria de uma mutao ou ainda
transfervel.
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- Mutao

A mutao um fenmeno espontneo, resultado de um erro na replicao
do DNA, ocorre um mutante a cada 104 a 1010 divises celulares. Normalmente
envolve deleo, substituio ou adio de um ou mais pares de bases, levando a
alteraes na composio de aminocidos de determinados peptdeos.

Essa mutao ocorre na ausncia ou presena de antibiticos, o nico papel
que pode caber droga selecionar os mutantes, favorecendo seu crescimento por
sua atuao nas clulas normais sensveis. Esse problema tem se mostrado mais
alarmante com drogas destinadas a tratamentos prolongados, como as utilizadas
contra a tuberculose e hansenase.

A mutao leva muitas vezes alterao de permeabilidade da clula ou
ainda alterao de seu receptor. As clulas mutantes no tm qualquer vantagem
biolgica sobre as normais, ao contrrio so defectivas, morrendo a qualquer
alterao, seja de pH, temperatura, osmolaridade etc.

As mutaes podem ser classificadas em: Single large-step quando uma
nica mutao, normalmente associada estrutura do receptor leva a um aumento
sbito da CMI para a bactria e, ainda, Multi-step quando sucessivas mutaes
levam a diminuies graduais da efetividade de antibiticos frente ao microrganismo,
caso tpico da Neisseria gonorrhoeae e da penicilina G, muito utilizada no passado
para esse fim que agora carece de efetividade e potncia.


- Resistncia transfervel

A resistncia transfervel ocorre quando um dado microrganismo recebe
material gentico de outro microrganismo, passando a expressar a caracterstica
contida no gene recentemente adquirido. Esse material gentico que contm a
informao que expressa resistncia pode ser transferido de algumas formas:
transformao, transduo, conjugao e ainda transposio.

- Transformao

A transformao um processo no qual h lise de determinado
microrganismo com liberao de seu material gentico para o meio, dessa forma,
outra bactria capaz de captar esse DNA incorporando-o ao seu genoma. Esse
DNA pode ser originrio de cromossomos, plasmdios ou ainda bacterifagos e para
que o processo ocorra bactria receptora tem de estar apta a receber esse
material, no estado dito de competncia, quando sintetiza protenas de superfcie
capaz de ligao ao DNA. Parece de pouca importncia clnica, pois s ocorre em
condies extremamente favorveis.

- Transduo

A transduo envolve a incorporao acidental de DNA bacteriano
cromossmico ou plasmidial por um bacterifago durante seu processo de infeco
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celular. Aps a lise celular, esse bacterifago atua ento como um vetor e ao infectar
nova clula pode introduzir o DNA contendo o gene de resistncia, tornando-a
resistente determinada droga. Ocorre somente entre bactrias de uma mesma
espcie e exerce papel importante na transferncia de plasmdios R (resistncia)
entre S. aureus e Streptococcus pyogenes.

- Conjugao

A conjugao um processo que requer contato fsico, bactria-bactria, em
que uma das clulas, a doadora, transfere atravs de fmbria ou pilus sexual o
material gentico a outra, chamada receptora. A habilidade de uma bactria em
conjugar normalmente codificada em plasmdios, chamados plasmdios F, de
fertilidade ou conjugativos. Esses plasmdios so segmentos de DNA de fita dupla
auto-replicantes que legam bactria que os possuem a propriedade de
estabelecer, atravs desse canal protico (fmbria), contato com outras bactrias
para a transferncia de genes plasmidiais.
Ao receber o material gentico sob a forma de plasmdios que pode conter
genes determinantes de resistncia (plasmdios R), a bactria receptora a partir
desse momento pode expressar uma nova caracterstica, tornando-se resistente.
Pode ainda conjugar com outra bactria, atuando agora como doadora, pois junto
com genes de resistncia, ela recebe genes conjugativos (plasmdios F), permitindo
ento repetir o processo agora em progresso geomtrica.

Esses plasmdios transferidos por conjugao podem conter genes
determinantes de resistncia a muitos antibiticos, ou seja, a presso seletiva
exercida por uma s droga pode selecionar microrganismos multirresistentes.

- Transposio

No fenmeno da transposio h a dependncia da presena na bactria de
segmentos curtos de DNA denominados transpossons. Transpossons podem conter
genes de resistncia para um ou mais antibiticos. Por no terem capacidade de
auto-replicao, unem-se a replicons, ou seja, "saltam" dentro da clula entre
plasmdios, cromossomos e bacterifagos, caracterizando uma promiscuidade
gnica celular. Esses "genes saltadores", ao se unirem a segmentos de DNA para
sua replicao, podem incorporar genes de resistncia nesse DNA.

A partir desses mecanismos, bactrias podem adquirir e/ou transferir
resistncia a outras bactrias, passando a elas a propriedade de defesa contra
determinada droga. importante salientar que no h necessidade de
patogenicidade do microrganismo para que carregue genes de resistncia, ao
contrrio, bactrias de microbiota normal so as que carregam maior quantidade de
genes de resistncia a uma ou mais drogas.

Atravs desses mecanismos, as bactrias garantem genes que detm
informaes que as tornam resistentes s mais diversas classes de drogas, mas
como? De que forma essa proteo se manifesta, como as bactrias se defendem?
Como til essa informao? H inmeros mecanismos atravs dos quais esses
microrganismos se tornam resistentes s drogas, manifestando a resistncia.

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1. Produo de enzimas inativadoras:

Bactrias podem conter genes que codificam a produo de enzimas com
propriedades de clivar, de quebrar ou ainda de promover alteraes estruturais na
molcula da droga tornando-a inativa contra aquele microrganismo.

Como exemplo de enzimas que quebram a estrutura da droga, temos as b-
lactamases, atuam promovendo a hidrlise dos derivados b-lactmicos deixando
aberta a estrutura do anel, fazendo com que com essa configurao molecular a
droga seja incapaz de se ligar ao seu stio receptor, as PBPs (penicillin binding
proteins), ficando impossibilitada para inibir a sntese da parede celular bacteriana.
Dessa forma a bactria continua seu ciclo reprodutivo normalmente, tornando-se
ento resistente aos antibiticos b-lactmicos.

Existem dezenas de tipos de b-lactamases, variando de substrato e
microrganismo produtor. A informao para sua produo em microrganismos pode
estar presente no cromossomo bacteriano, em plasmdios ou em transposson e,
como visto anteriormente, pode ser transferida a outras bactrias tanto vertical como
horizontalmente. Essas enzimas so, sem sombra de dvida, a grande causa de
insucesso teraputico de penicilinas e anlogos diante de inmeros microrganismos;
E. coli, P. aeruginosa, N. gonorrhoeae, N. meningitidis etc.

Existem ainda enzimas bacterianas que em vez de quebrar a estrutura
molecular da droga, apenas alteram sua conformao, promovendo adenilao,
acetilao e fosforilao de aminoglicosdeos, reduzindo sua afinidade pelo receptor
ribossmico, impedindo assim a inibio da sntese protica bacteriana, permitindo a
bactria sua reproduo normal. De modo estratgico, essas enzimas se fixam
membrana bacteriana, pois onde h grande quantidade de ATP e acetil coenzima
A, fonte de radicais fosfato, adenil e acetil que usa para modificar estruturalmente o
antibitico logo no processo de entrada de droga na clula. Essas enzimas so
encontradas em grande quantidade em gram-negativos patognicos, alvo principal
dessas drogas.

O cloranfenicol tambm sofre esse tipo de modificao estrutural, perdendo
sua afinidade pelo receptor e, portanto, sua atividade. transformado em
monoacetato ou diacetato de cloranfenicol por uma acetiltransferase no interior de
alguns microrganismos gram-positivos e gram negativos. Recentemente foi relatado
que a tetraciclina tambm pode sofrer modificao enzimtica estrutural em
microrganismos.

2. Interferncia com a entrada e acmulo de droga na bactria:

Muitos antibiticos b-lactmicos conseguem penetrar em bactrias gram-
negativas atravs de canais proticos presentes em sua membrana externa. A
funo fisiolgica desses canais parece ser entrada de aminocidos na bactria.

Atravs desses canais, as drogas conseguem atingir seu receptor na parede
celular e exercer sua ao bactericida. Para a E. coli, por exemplo, esses canais
permitem a passagem de molculas com at 600 daltons.

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Como mecanismo de defesa, as bactrias, atravs de geraes, passam a
sintetizar esse canal cada vez menor ou at a codificar a ausncia completa desse
canal, impedindo assim a entrada da droga na clula. Assim algumas bactrias no
permitem, pela ausncia ou modificao do canal, a entrada de alguns antibiticos,
como penicilinas, cefalosporinas e quinolonas.

Antibiticos aminoglicosdeos, para penetrao na bactria, utilizam-se da
diferena no potencial eltrico da membrana bacteriana, ou seja, por terem carga
positiva so atrados ao interior bacteriano negativamente carregado, por fora
desse potencial de membrana. Algumas cepas de P. aeruginosa alteram, via
plasmdio, o metabolismo energtico da membrana da bactria resultando em
diminuio desse potencial de membrana, dificultando muito a penetrao da droga
na bactria.

Outro mecanismo atravs do quais bactrias diminui a concentrao
citoplasmtica de drogas o bombeamento ativo de drogas para o meio
extracelular. Esse mecanismo chamou a ateno da comunidade cientfica em torno
de 1980, quando pesquisadores demonstraram esse mecanismo codificado em
plasmdios em cepas de E. coli.

A bactria passa a produzir protenas de membrana que funcionam como
uma verdadeira bomba para tetraciclinas bombeiam ativamente a tetraciclina para
fora da bactria. Parecem existir ainda dois subtipos de sistemas de bombeamento;
aquele dito "multi-drug-pump", ou seja, bombeia inespecificamente vrias drogas e
um sistema especfico para transporte de tetraciclina, muito comum em cepas de P.
aeruginosa.

A droga no atinge concentraes intracelulares suficientes para promover
inibio de sntese protica ribossomal, pois quase instantaneamente bombeada
para fora da bactria.

4. Alterao do receptor para a ao da droga:

Para que uma droga exera sua atividade farmacolgica ante a um
microrganismo imperativo que haja a ligao ou a interao frmaco-receptor.
Muitas vezes, por mutao cromossmica, h a alterao bioqumica desse
receptor, impedindo uma perfeita ligao entre a droga e seu receptor na bactria.
Esse mecanismo de manifestao de resistncia ocorre em inmeras bactrias para
grande quantidade de antibiticos; macroldios, b-lactmicos, cloranfenicol,
quinolonas, rifampicina e mais recentemente glicopeptdeos.

As PBPs (Penicillin Binding Proteins) so enzimas envolvidas na sntese da
parede celular bacteriana e servem como alvo para ao de drogas b-lactmicas.
Sua inibio por essas drogas determina a formao de uma parede celular frgil
que no suporta a diferena osmtica, levando lise celular bacteriana.

S. pneumoniae, S. aureus resistente meticilina (MRSA), N. gonorrhoeae,
Haemophilus influenzae so alguns exemplos de microrganismos que se tornam
insensveis ao de b-lactmicos atravs de alteraes nas PBPs, diminuindo a
afinidade da droga pelas enzimas. A origem desses genes de resistncia parece ser
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a captao de DNA bacteriano do meio. Os genes que codificam essa alterao no
S. pneumoniae so chamados de genes mosaico, pois so constitudos de genes
prprios misturados a segmentos de DNA de microrganismos mais resistentes
penicilina, tais como os S. viridans.

Alteraes no ribossomo bacteriano tambm so responsveis por resistncia a
grande nmero de drogas, ocorrendo com aminoglicosdeos, cloranfenicol e
principalmente macroldios. Para essas drogas, no S. aureus ocorre uma metilao
em um resduo de adenina no RNA ribossmico 23S, diminuindo a afinidade da
droga pelo receptor, impedindo a droga de inibir a sntese protica bacteriana.

Existe ainda outra maneira de impedir o contato droga-receptor promovido pela
bactria; o caso da produo de uma protena citoplasmtica que protege
fisicamente o ribossomo da inibio promovida pela tetraciclina.

Podem ocorrer ainda alteraes na DNA-girase ou topoisomerase, levando a
resistncia das quinolonas e tambm alterao da RNA polimerase para as
rifamicinas. Essa resistncia tem particular importncia clnica, pois pode aparecer
durante o longo curso de tratamento da tuberculose. Para preveno est
recomendada a associao de duas ou mais drogas.

5. Via metablica alternativa (metabolic bypass):

As sulfonamidas atuam inibindo a diidropteroato sintetase, enzima responsvel
pela ligao entre o cido p-aminobenzido e a pteridina na sntese de cido flico
bacteriano. Alguns bacilos gram-negativos sintetizam via plasmdio ou transposson,
uma diidropteroato sintetase alterada, sem afinidade pelas sulfas, mas que mantm
sua atividade bioqumica na produo do folato. Sem a inibio pelas sulfas, a
bactria cresce normalmente, tornando-se resistente droga. Mecanismo similar
acomete o trimetoprim, na fase seguinte sntese do cido flico, na reduo
tetraidrofolato pela diidrofolato redutase.

Todos esses mecanismos de expresso de resistncia so cada vez mais
frequentes em inmeros microrganismos, alguns deles expressando muitas formas
de resistncia. O que se pergunta : de onde vem informao para que o
microrganismo saiba exatamente como se defender de cada droga? Qual a origem
dos genes que codificam esses mecanismos de resistncia?

A resposta ainda no consenso entre a comunidade cientfica, mas existem
fortes evidncias de que esses genes sempre estiveram presentes na natureza,
principalmente em microrganismos produtores de antibiticos, pois se produzem
uma droga devem ter capacidade de se defender dela. Atravs de transmisses
verticais (replicao) e horizontais (conjugao), potencializadas ainda pela presso
seletiva com o uso crescente dessas drogas, esses genes foram disseminando-se,
adaptando-se a novas espcies e hoje alguns deles, por exemplo, os que codificam
a produo de b-lactamases, encontram-se disseminados por quase todos os
microrganismos de importncia mdica. A informao para a defesa sempre existiu,
ela s estava restrita a certas espcies de microrganismos.

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Com o uso crescente e indiscriminado de antibiticos, atravs de presso
seletiva, permaneceram vivos apenas os microrganismos capazes de se defender
da ao da droga.

Sabe-se, por exemplo, que uma cepa de Bacillus lincheniformes preservada na
raiz de uma planta em um museu britnico desde 1689 produz b-lactamase, ou seja,
no sculo XVII j havia a presena dessa enzima sem haver a presena de nenhum
tipo de antibitico.

A explicao mais razovel talvez seja mesmo a de que microrganismos
produtores de antibiticos obviamente codificam mecanismos e estratgias para se
tornarem resistentes droga por eles produzida. Esses genes responsveis pelo
mecanismo de defesa se disseminaram tornando a droga sem atividade em grande
nmero de espcies. So inmeros os exemplos citados em uma reviso entitulada
"Autodefesa em microrganismos produtores de antibiticos". Streptomyces
erythraeus produtores de eritromicina, tem seu ribossomo alterado, uma metilao
do RNA ribossmico 23S, tornando o microrganismo insensvel s drogas que tm
ao inibidora de sntese protica atravs de ligao subunidade 50S do
ribossomo bacteriano, ou seja, macroldios e lincosaminas.

- Novas perspectivas
O que deve ser feito para se combater o aparecimento e disseminao de
exemplares resistentes? Algumas estratgias vm sendo adotadas pela comunidade
cientfica para o controle da resistncia bacteriana.

1. Modificao qumica-estrutural de agentes antibacterianos preexistentes:

Atravs de alteraes qumicas na estrutura de agentes consagrados se
conseguem novas drogas. Mantm-se o grupo farmacofrico (o que detm a
atividade da droga), alterando-se radicais ligados a ele, modificando assim a
farmacocintica e espectro de atividade da droga criando-se um novo composto.
Como exemplo temos a modificao estrutural de fluoroquinolonas, originando o
trovafloxacin, com uma atividade anaerbica muito maior que os compostos
originais. Esse composto estar disponvel clinicamente na Inglaterra dentro de
alguns anos.

2. Novos alvos (mecanismos) para a ao de drogas:

Novas abordagens farmacolgicas so necessrias para se "desviar" dos
mecanismos de resistncia preexistentes. A mupirocina tem como alvo a t-RNA
sintetase, essencial para a sntese protica bacteriana, atua de modo distinto dos
clssicos inibidores de sntese protica, tais como aminoglicosdeos, tetraciclinas,
macroldios etc. Alguns peptdeos de cadeia curta com ao em membranas
bacterianas tm sido testados a alguns anos. So retirados das mais diversas
fontes, pele de sapo, insetos e porcos. Infelizmente ainda grande o nmero de
efeitos colaterais nas clulas mamferas, porm so drogas com ao
completamente diversa daquelas disponveis em clnica.

Outra abordagem ainda mais interessante e promissora a de se utilizar
como alvo genes bacterianos que se expressam somente em indivduos infectados.
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Se houver sucesso com esse tipo de abordagem, aparecero novas drogas com
ao exclusivamente em bactrias patognicas, sem ao na microbiota normal.

3. Vacinas

Algumas vacinas tm sido testadas e usadas com sucesso em doenas de
etiologia bacteriana, principalmente naquelas em que o agente multirresistente,
caso dos pneumococos.

4. Introduo de associaes de drogas

Combinao de inibidores de b-lactamases (clavulanato, sulbactam,
tazobactam, brobactam) s drogas de estrutura b-lactmica que porventura possam
ser inativadas por b-lactamases. Dessa forma o antibitico sensvel enzima fica
livre para atuar, pois as b-lactamases esto inibidas ou ligadas de forma covalente a
um produto de degradao do inibidor. Alguns estudos foram conduzidos para se
produzir novos inibidores, no s para associao a b-lactmicos, mas inibidores de
acetiltransferases que inativam o cloranfenicol.

5. Controle no uso de antimicrobianos

O uso indiscriminado de antimicrobianos sem dvida foi o que nos levou at a
atual situao.

O uso descontrolado na agricultura, no desenvolvimento e crescimento pecurio
e avicultura selecionaram microrganismos altamente resistentes. Por tudo isso,
parece ser esse o caminho da volta, ou seja, um controle mais rgido no uso de
drogas, desde sua venda em farmcias, passando por um maior controle e
conscientizao no uso agropecurio e, finalmente, usado de forma mais racional e
prudente em clnica. A rea multiprofissional da sade tem de ser informada e
conscientizada do real e grande problema que isso significa.

O uso hospitalar tem de ser altamente controlado, pois nesse ambiente que se
criam com maior frequncia os exemplares multirresistentes. Os clnicos devem
respeitar as decises e deliberaes das comisses que padronizam o uso de
drogas no hospital, pois elas so escolhidas com base na microbiota local e no
padro de sensibilidade dos microrganismos mais encontrados.

Portanto, o controle no uso de antibiticos e combate resistncia bacteriana
tem de estar alicerado em dois pontos fundamentais: educao e comunicao.
Todos os profissionais de sade devem estar juntos nesta luta, cada qual exercendo
seu papel, se informando e policiando-se cada vez mais.

Penicilina: estrutura, produo, eficcia.
Em 1928, Alexander Fleming, mdico e bacteriologista escocs, descobriu
a penicilina, um antibitico natural derivado de um fungo (gnero Penicillium), que
revolucionou a medicina desde ento.

13

Em seu laboratrio, Alexander tinha diversas placas de petri
contendo cultura de alguns microorganismos para estudos. Em uma cultura
de Staphylococcus Aureus, o grande causador de infeco generalizada, Fleming,
percebeu algo estranho. A placa havia sido infectada por bolores, e em sua volta,
no havia nenhuma bactria.

Isolando este tipo de fungo, descobriu-se que era do gneroPenicillium, e a
substncia produzida por ele, tinha efeito bactericida. A esta substncia deu-se o
nome de penicilina, substncia que impede a produo das molculas de carbono
que so responsveis pela formao da membrana da bactria.
O primeiro tratamento com penicilina em seres humanos aconteceu em 1941,
em um agente da polcia que sofria de uma infeco chamada septicemia. A
penicilina se tornou um importante medicamento da poca e de grande eficcia no
tratamento de doenas infecciosas de origem bacteriana.
A penicilina tem a seguinte frmula estrutural plana: (Figura a- Anexos)
A penicilina possui ao bactericida e age inibindo a sntese da parede celular
e a ativao do sistema autoltico endgeno das bactrias. Ao acoplar num receptor
na parede celular bacteriana, a penicilina, interfere com a transpeptidao que
ancora o peptidoglicano estrutural de forma rgida em torno da bactria. Com uma
parede fina e interior hiperosmtico, h um afluxo de gua do exterior fazendo com
que a bactria entre em processo de lise, o que leva a bactria a explodir.
Classificao das Penicilinas
Penicilinas naturais: Neste grupo esto penicilina G e a penicilina V. So
eficazes no combate a estreptococosdos grupos A e B, contra sfilis e outras
doenas.
Aminopenicilinas: As aminopenicilinas foram s primeiras penicilinas com
atividade contra bactrias Gram-negativas. Pertencem a esta classificao a
amoxicilina e ampicilina.
Penicilinas resistentes penicilinase: Nesta categoria as penicilinas so
modificadas quimicamente e possuem uma cadeia lateral para inibir a ao da
penicilinase. Como exemplo, pode-se citar a
isoxazolilpenicilinas.Estafilococos resistentes oxacilina so resistentes a este
tipo de penicilina.
Carboxipenicilinas: A carbenicilina e a ticarcilina esto presentes neste grupo.
Principalmente na ticarcilina, nota-se alguma atividade antipseudomonas.
Ureidopenicilinas: A azlocilina, mezlocilina e piperacilina, so consideradas
penicilinas de maior espectro. Tambm so eficazes no combate a bactrias
Gram-Negativas e enterococos.
Diferentes formas de fazer o antibiograma
Antibiogramas so provas in vitro para a determinao da sensibilidade dos
agentes microbianos aos antibiticos, ou seja, a medida da concentrao (ou mdia
14

de concentrao) que capaz de provocar alguma inibio no crescimento do
microrganismo em prova.
Os mtodos mais utilizados podem-se esquematizar:


Mtodos de diluio
Lquido
Slido
Mtodos de difuso em gar
Mtodo da placa escavada em
goteira
Mtodo dos cilindros
Mtodo dos discos
Mtodo das ranhuras radiadas


Mtodos de diluio - Baseiam-se na obteno de solues cada vez mais
concentradas de antibitico, onde se lana um determinado nmero de bactrias da
estirpe em estudo. (Figura 1).
Para explicar melhor esse mtodo, tomamos este exemplo da Figura 1.
A concentrao do antibitico feita em progresso geomtrica crescente de
razo 2.
Em diferentes tubos de ensaio (Figura 1- Anexos) lana-se a mesma
quantidade de caldo nutritivo j sujeito a incubao (portanto iguais os nmeros de
bactrias) e quantidades crescentes de antibitico, exceto no primeiro - TUBO
TESTEMUNHA.
Aps 24 horas de incubao a 37C observa-se.
- Nota-se que a cultura se desenvolveu no tubo testemunha, e em tubos sucessivos,
at que num deles j no se observa desenvolvimento cultural. A concentrao
desse tubo ser a CONCENTRAO MNIMA INIBIDORA [C.M.I.] (tambm
conhecida como taxa inibidora ou taxa de sensibilidade a espcie estudada).
Se as solues de antibitico se juntar gar, obtm-se o mtodo de diluio
slido.
Estes mtodos no so prticos em clnica, pois, para um determinado agente
isolado, e necessrio fazerem-se tantos ensaios quantos os antibiticos a utilizar, o
que resulta moroso e onoroso.
Mtodos de difuso em gar - Estes mtodos consistem em dispr,
superfcie de gelose contida numa caixa de Petri, diferentes tipos de antibiticos,
15

que se vo difundindo, determinando concentraes inversamente proporcionais
distncia.
A deposio dos antibiticos pode ser feita segundo diferentes tcnicas:
a) Mtodo da placa escavada - so feitas pequenas escavaes na placa contendo
o meio, onde se colocam os agentes anti-microbianas.(Figura 2- Anexos).
b) Mtodo dos cilindros - as solues de antibiticos so colocadas em pequenos
cilindros que se depositam superfcie do gar semeado. (Figura 3- Anexos).
c) Mtodo das ranhuras radiadas - praticam-se ranhuras a partir do centro da placa,
onde se depositam os antibiticos. (Figura 4- Anexos).
d) Mtodo dos discos - este mtodo hoje em dia o mais utilizado, e baseia-se no
depsito de discos de papel de filtro impregnados de antibitico que se
depositam superfcie das placas de Petri. (Figura 5- Anexos).
Explicando o mtodo dos discos:
Em qualquer destes mtodos, as placas de Petri so levadas a incubar 24
horas a 37 C.
Dois fenmenos se podem observar:
- Se as bactrias so sensiveis aos antibiticos, forma-se um halo volta do
local onde depositado o antibitico. O ponto a partir do qual no houve crescimento
o local onde C.M.I. existe.
- Se as bactrias so resistentes, crescem mesmo no local de deposio do
antibitico.(Figura 6).
A distncia do centro do halo at a periferia inversamente proporcional
concentrao de antibitico. Quanto maior for essa distncia menor a C.M.I.(Figura
7).
Crticas aos Antibiogramas
Estas provas so muito relativas, pois esto dependentes de muitos fatores:
a) O facto de determinada estripe ser sensvel a um antibitico "in vitro", no
significa que "in vivo" o mesmo se passe;
b) A concentrao de antibitico no sangue pode no atingir a C.M.I.
c) O germe isolado pode no ser o responsvel pela infeco;
d) Na observao "in vitro", o pH; a qualidade do papel; a quantidade de antibitico
realmente difundido, a espessura da camada de gar, o meio de cultura, a
concentrao da sementeira, a rapidez do desenvolvimento, a velocidade de
difuso, a estabilidade do antibitico, a durao da incubao, etc, so fatores que
influem nas observaes;
e) "in vitro", a resposta imunolgica do hospedeiro, a natureza e localizao da
leso, a extenso e grau da reao inflamatria, o nmero de microorganismos na
leso, a quantidade de tecido fibroso e de granulao existentes; a capacidade do
16

antibitico de penetrar e de se difundir no foco infeccioso, so fatores capazes de
alterar a capacidade bactericida (ou bacteriosttica) do antibitico.

6. MATERIAIS, VIDRARIAS E UTENSLIOS.
Proveta de 250 ml
2 becker de 250 ml
2 frascos com tampa de 250 ml
2 bastes de vidro
Tela de amianto
Trip
8 placas de petri
12 tubos de ensaio com tampa
4 alas de drigalski
4 alas de nichrome
Papel de filtro
4 pinas metlicas
Tesoura
Esptula metlica
Becker de alumnio
Papel pardo
Barbante
4 pipetas graduadas de 1 ml
4 swabs
4 pipetadores automticos


7. EQUIPAMENTOS.
Bico de Bunsen
Mesa agitadora (110V) Lucadema
Forno Pasteur a 165C- 90 min
Balana semi-analtica Mettler PC 2000- 220V
Estufa para cultura Bacteriolgica Olidy cz 220V- 15 min
Geladeira cnsul buplex(110V) a 4C


8. REAGENTES USADOS.
No houve reagentes utilizados.


9. MEIOS DE CULTIVO.
Meio de cultivo slido:
17

- Agar Sal Manitol
Composio:
Peptona de carne 10g/L (fonte de protena)
Extrato de carne 1g/L (fonte de protena)
NaCl 75g/L (seleciona o tipo de microrganismo e mantm o equilbrio osmtico)
D. Manitol 10g/L (fonte de carboidrato)
gar 15g/L (solidificar o meio)
Vermelho de fenol 0,025g/L
pH: (indicador de pH a 25C=7,5)
Fabricante: Himedia Meio de cultivo lquido: - Caldo Glicosado
Composio:
Peptona de carne 10g/L (fonte de carboidrato)
Extrato de levedura 5g/L (fonte de carboidrato) * Glicose 5g/L (fonte de energia)
Validade: 30/04/2016, 12/1013 e 03/2011
pH: 5,2 a 6,2 * Fabricante: Himdia, Proquimios e Vetec Meio de cultivo slido: -
APC
Composio GMs/Litro
Extrato de levedura
Dextrose
gar
pH final (at 25C)= 7,00 +-0,2
Validade: 28/02/14
Fabricante: Himedia
Meio de cultivo slido: - TSA
Composio:g/L: * Casena enzimtica hidrolisada: 15.00
Digesto papaica da soja: 5.00
Cloreto de sdio: 5.00
Agar: 15.00
Validade: 5 anos
Fabricante: Himedia
Meio de cultivo slido: * TSBI (no conhecido)


10. AMOSTRA.
Nasofaringe
Origem: cada pessoa
Data da coleta: 22/01/14
Temperatura: ambiente
18

11. PROCEDIMENTO.
Montagem e esterilizao das placas de petri:
- Cortar um crculo de papel de filtro utilizando a tampa da placa como molde,
tampar e pressionar, fazendo com que o papel fique perfeitamente acondicionado
sobre a tampa da placa.
- Envolver com papel manilha ou pardo, as placas reunidas para cada grupo,
amarrar com barbante e identificar. Esterilizar em forno Pasteur.
- O papel deve ficar com o lado mais spero em contato com a vidraria. As placas
sero colocadas com o fundo para cima sobre o papel manilha. No momento de
fechar o embrulho com barbante sempre dar um lao.
Preparo de meio de cultivo lquido (Caldo glicosado 20g/L):
- Pesar em um Becker: Peptona de carne (10g/L), Extrato de levedura (5g/L) e a
glicose (5g/L).
- Diluir na quantidade necessria de gua, obedecendo concentrao acima.
- Distribuir por tubos de ensaios com tampa.
Preparo de meio de cultivo solidificado (gar sal Manitol):
- Calcular a quantidade necessria de meio de cultivo Manitol para contagem de
microrganismos para preparar o volume desejado de soluo.
- Pesar em um Becker a quantidade calculada do meio de cultivo, de acordo com a
especificao do fabricante. Acrescentar gua destilada com o auxlio de uma
proveta.
- Aquecer o meio (j pesado e adicionado de gua deionizada) at sua fervura
(100C) com o objetivo de dissolver o gar. O lquido deve ficar translcido.
- Aps a dissoluo do meio, transferir para frascos apropriados para
acondicionamento de meios de cultivo, enroscar sua tampa e dar meia volta para
trs, para evitar riscos de acidentes na hora da esterilizao, e envolv-lo com papel
pardo ou alumnio.
- Aps a autoclavao (121C-15 min), manter os meios em banho-maria ou estufa
previamente regulados a 50C para que no haja solidificao antes do
plaqueamento. Faa isso quando for utilizar o meio imediatamente ainda no mesmo
dia, se o meio s for ser utilizado dias depois o ideal que aps o esfriamento a
temperatura ambiente seja armazenado em geladeira e aquecido posteriormente
para ficar novamente liquefeito.
Esterilizao das pipetas:
- Colocar um pouco de algodo na parte superior da pipeta, para evitar
contaminao, e na hora de pipetar evita que algum lquido entre em contato com o
pipetador automtico.
19

- Medir o papel manilha utilizando a pipeta como medida cort-lo com um excesso
de aproximadamente quatro dedos.
- Depois se deve dobr-lo por inteiro formando linhas de aproximadamente 4
centmetros. Assim feito, cortar no sentido contrrio para formar quadrados.
- Pegar cada quadrado e desdobrar. Dobrar para dentro um dos lados e posicionar
a ponta da pipeta nessa dobra e enrolar at o final da pipeta. Nesse momento
enrolar, para que fique vedado, e na sobra de papel fazer a identificao da
capacidade, ou qualquer outro dado que se faa necessrio.
Esterilizao da ala de Drigalski:
- Cortar pedaos de papel alumnio que sejam suficientes para enrolar a parte
triangular da ala.
- Enrolar a parte triangular e levar para esterilizao em forno Pasteur.
Plaqueamento:
- Plaquear significa distribuir os meios e serem solidificados em placas de Petri que
foram previamente esterilizadas. Este procedimento pode ser feito utilizando-se
pipetas estreis ou simplesmente derramando o meio de cultivo na quantidade
necessria para cobrir o fundo da placa (em torno de 20 ml).
- No momento do plaqueamento devemos esterilizar a tampa e a boca do frasco
contendo o meio de cultivo, para evitarmos contaminao, em seguida prximo a
chama do bico de bunsen, distribuir o meio, de forma a cobrir todo o fundo da
mesma, nunca trabalhar fora da zona estril da chama do bico de bunsen.
- Deixar as placas temperatura ambiente para que haja solidificao (15 min).
Inculo com material da narina:
- Realizar esse procedimento com o meio de cultivo Manitol, depois de solidificado,
inserir um swab na narina, na parte mais interna que conseguir;
- Coletar o material e passar o swab levemente sobre a placa j com o meio
solidificado (inculo);
- Deixar na estufa para crescimento por 96 horas.
- Aps esse perodo fazer a avaliao do crescimento no Manitol, analisando a cor
do meio e das colnias.
- Atrs da chama do bico de Bunsen e com auxlio da ala de Nichrome, fazer uma
alada com maiores e mais amarelas que encontrar no Manitol;
- Depois transferir a alada para o caldo glicosado preparado anteriormente, ainda
sobre a chama do bico de bunsen, tampar o tubo;
20

- Agitar o tubo de ensaio para diluir a colnia transferida para ele, batendo de leva
na palma da mo;
- Colocar sobre a mesa agitadora por 48 horas a 30C.
Tcnica de Difuso em disco:
- Dividir as placas de Petri em quatro quadrantes.
- Atrs da chama do bico de bunsen:
- Pipetar 0,3 ml de do caldo glicosado inoculado;
- Transferir para a placa com meio de cultivo (APC, TSA, TBI);
- Deixar a tampa da placa para cima, e espalhar o lquido pipetado, com auxlio da
ala de Drigalski. Realizar esse procedimento em todas as placas de Petri.
- No meio de cada quadrante colocar um disco de papel embebido em antibitico,
com auxlio de uma pina metlica;
As placas de TSA e TSBI referentes ao grupo devem ser dividas em 2 quadrantes, e
devem ser colocados dois tipos de antisspticos no centro de cada, um por 48h.
As placas com os discos de antibitico e antissptico devem ser incubadas por um
perodo de 48 horas.
- Aps esse perodo deve ser feita a anlise do halo de inibio. Medindo-o em
milmetros com o auxlio de uma rgua.
- Com o auxlio de uma tabela para interpretao do resultado de antibiogramas,
comparar os resultados e classificar o microrganismo quanto a resistncia ou
sensibilidade para cada tipo de antibitico. No h uma tabela para os antisspticos,
ento ele deve ser considerado eficiente ou no.


12. REAES.
No ocorreram reaes


13. CLCULOS E/OU RESULTADOS.
Clculo do Manitol:
12 placas de Petri 20 ml para cada uma
12 x 20 = 240
Manitol concentrao: 111,02 g/L
21

111,02 ---- 1000 ml
X ---- 240 ml
X = 26,65 g de Manitol

Clculo do caldo glicosado:
6 ml para cada tubo
Total: 12 tubos
6 x 12 = 72 ml

Peptona de carne 10g/L
10 g ---- 1000 ml
X ---- 72 ml
X = 0,72g

Extrato de Levedura 5 g/L
5g ---- 1000 ml
X ---- 72 ml
X = 0, 36 g

Glicose 5 g/L
5g ---- 1000 ml
X ---- 72 ml
X = 0,36 g

ANA LUZA
Avaliao do crescimento no Manitol: (96h de incubao)
Anlise Macroscpica: cor do meio e cor da colnia
Foram observadas 14 colnias pequenas e brancas, 6 colnias pequenas
amareladas e 1 colnia grande amarela.
Houve alterao da cor do meio, de vermelho ficou laranja por quase toda a
superfcie e amarela em volta da colnia grande amarela.
DANIELLA

Avaliao do crescimento no Manitol: (96h de incubao)
Anlise Macroscpica: cor do meio e cor da colnia
22

Foram observadas 28 colnias pequenas e brancas, 6 colnias pequenas e
claras.
No houve alterao da cor do meio, permaneceu vermelha, cor caracterstica
do meio.

DANIELI
Avaliao do crescimento no Manitol: (96h de incubao)
Anlise Macroscpica: cor do meio e cor da colnia
No houve alterao da cor do meio, manteve-se a cor original vermelho.
Foram observadas 4 colnias pequenas e brancas, e a maior parte das outras
colnias de cor bege.

KAMILLA
Avaliao do crescimento no Manitol: (96h de incubao)
Anlise Macroscpica: cor do meio e cor da colnia
Foi observado o crescimento de 5 colnias pequenas e amareladas e uma
nica colnia grande e branca.
Houve alterao da cor do meio, de vermelho para o amarelo por toda a
superfcie.










23

Resultado da tcnica de Difuso em disco: (48h de incubao)
ANTIBITICOS TAMANHO DO
HALO (TSBI)
TAMANHO
DO HALO
(TSA)
TAMANHO
DO HALO
(APC)
Ana Luza

CEFACLOR
11 mm 22 mm 37 mm
SINOT CLAV
No houve halo 12 mm 16 mm
AZITROMICINA
17 mm 20 mm 20 mm
NEO MOXILIN
No houve halo 9 mm 28 mm
Danieli

CEFACLOR 10 mm 27.5 mm 47 mm
SINOT CLAV No houve halo
No houve
halo 15 mm
AZITROMICINA No houve halo
No houve
halo 8 mm
NEO MOXILIN No houve halo
No houve
halo 28 mm
Daniella
CEFACLOR 12 mm 25 mm 36 mm
SINOT CLAV No houve halo 10 mm 24 mm
AZITROMICINA No houve halo 13 mm 22 mm
NEO MOXILIN 12 mm 13 mm 23 mm

Kamilla
CEFACLOR 21 mm 32 mm 38 mm
SINOT CLAV No houve halo 24 mm 37 mm
AZITROMICINA 1,9mm 22 mm 25 mm
NEO MOXILIN No houve halo 25 mm 40 mm

PLACA DO GRUPO (TSA) (TSBI)
Anti mais que assptico 17 mm 1 mm
Riodeine 15 mm 11 mm



14. CONCLUSES.

Avaliao do crescimento no Manitol: (96h de incubao)

ANA LUZA
24

Aps a anlise macroscpica das colnias fica confirmada a presena de
Stafilococos aureus, porque a fermentao com manitol, conforme indicada por uma
alterao no indicador vermelho de fenol, ajuda na diferenciao das espcies de
estafilococos. Os estafilococos com resultados positivos para a coagulase
(Stafilococos aureus) produzem colnias amarelas e um meio amarelo circundante
ao passo que os estafilococos com resultados negativos para a coagulase produzem
colnias vermelhas e nenhuma alterao na cor do indicador vermelho de fenol.
DANIELI
DANIELLA

Com a anlise (macroscpica) realizada nas colnias, foi constatada a presena
do Stafilococos aureus. O manitol permaneceu na cor de origem, vermelho, logo
ento no houve alterao do pH. As colnias de tamanhos diversificados possuam
a cor clara at se aproximar da cor branca.

Com tudo, a importncia do antibiograma foi analisada atravs de teste similar
para a sua compreenso. E atravs desse teste podemos classificar os antibiticos
utilizados.

KAMILLA
Nos resultados obtidos o meio de cultivo APC, apresentou melhores resultados
em comparao ao meio de cultivo TSBI, portanto conclui-se que o meio interfere no
crescimento de microrganismo.
A importncia de fazer o antibiograma que atravs dele ser possvel identificar
quais os microrganismos que sero sensveis ou resistentes ao do mesmo,
portanto cada pessoa ter uma reao diferente.
Nesta prtica o antibiograma realizado possua algumas limitaes, visto que nos
discos de papel no sabamos a concentrao exata do antibitico.


Avaliao da tcnica de Difuso em disco: (48h de incubao)

ANTIBITICOS
CLASSIFICAO DO
ANTIBITICO
Ana Luza

(TSBI)
CEFACLOR
Resistente
SINOT CLAV
Resistente
AZITROMICINA
Resistente
NEO MOXILIN
Resistente
25


(TSA)
CEFACLOR
Resistente
SINOT CLAV
Resistente
AZITROMICINA
Resistente
NEO MOXILIN
Resistente
(APC)
CEFACLOR
Sensvel
SINOT CLAV
Resistente
AZITROMICINA
Resistente
NEO MOXILIN
Sensvel
Danieli

(TSBI)
CEFACLOR
Resistente
SINOT CLAV
---------
AZITROMICINA
---------
NEO MOXILIN
----------
(TSA)
CEFACLOR
Intermedirio
SINOT CLAV
---------
AZITROMICINA
---------
NEO MOXILIN
----------
(APC)
CEFACLOR
Sensvel
SINOT CLAV
Sensvel
AZITROMICINA
Resistente
NEO MOXILIN
Sensvel
Daniella
(TSBI)
CEFACLOR
Resistente
SINOT CLAV
----------
AZITROMICINA
----------
NEO MOXILIN
Resistente
(TSA)
CEFACLOR
Sensvel
SINOT CLAV
Resistente
AZITROMICINA
Resistente
NEO MOXILIN
Intermedirio
(APC)
CEFACLOR
Sensvel
SINOT CLAV
Sensvel
AZITROMICINA
Intermedirio
NEO MOXILIN
Sensvel
26


Kamilla
(TSBI)
CEFACLOR
Resistente
SINOT CLAV
---------------
AZITROMICINA
Resistente
NEO MOXILIN
----------------
(TSA)
CEFACLOR
Sensvel
SINOT CLAV
Sensvel
AZITROMICINA
Intermedirio
NEO MOXILIN
Sensvel
(APC)
CEFACLOR
Sensvel
SINOT CLAV
Sensvel
AZITROMICINA
Intermedirio
NEO MOXILIN
Sensvel


Concluso dos resultados do grupo
Placa do Grupo testada com antisspticos:
Tanto na placa com TSA como com o TSBI, houve um grande crescimento
bacteriano, embora a ao dos antisspticos seja diferente da dos antibiticos, ou
seja, no matam as bactrias, apenas promovem a limpeza do local, no foi
observada uma boa eficcia nos dois tipos de antisspticos.

15. ESQUEMA.
(...)

16. ATIVIDADES DE VERIFICAO.
a) Explique por que se deve realizar a semeadura da amostra utilizando a ala de
Drigalsky?
Deve-se utilizar a ala de Drigalsky para espalhar o microrganismo no meio
lquido no meio de cultura slida.
b) Como podemos determinar se um microrganismo sensvel ou no a um
determinado antibitico?
27

Atravs do halo de inibio. Quanto maior for o halo maior ser a sensibilidade
do microrganismo a um antibitico e quanto menor for o halo de inibio, menos
resistente o microrganismo .
c) Mencione algumas limitaes desta prtica.
A concentrao do antibitico, pois no sabemos o quanto foi adicionada ao
disco, o pH do meio, o tempo na estufa, etc.
d) Qual a importncia da prova de pesquisa de agentes antimicrobianos?
A pesquisa de agentes antimicrobianos importante para determinar ao certo
qual antibitico melhor para um determinado tipo de bactria.
e) O que halo de inibio?
uma zona formada em volta do disco contendo o antibitico, onde no crescem
microrganismos.
f) Por que foi necessria a agitao do tubo de caldo glicosado contendo
Staphilococcus e no foi necessria para os coliformes?
Foi necessria a agitao do tubo de caldo glicosado contendo Staphilococcus
para que o oxignio fique em toda a parte do tubo e no s na parte superior para
um melhor crescimento do microrganismo.


17. REFERNCIAS BIBLIOGRAFICAS.
http://www.infoescola.com/farmacologia/mecanismos-de-acao-dos-antibioticos/
07/02/2014 17h40min
http://www.portaleducacao.com.br/odontologia/artigos/2835/resistencia-
bacteriana#ixzz2sfRm40NX 07/02/2014 17h48min
http://www.infoescola.com/farmacologia/penicilina/ 07/02/2014 21h42min
ecaths1.s3.amazonaws.com/micologia/1812033032.antibiograma.doc
08/02/2014 20:24



18. ANEXOS.
Figura a
28


Figura 1

Figura 2

Figura 3
29


Figura 4

Figura 5
30


Figura 6

Figura 7

31

19. ASSINATURA DO(S) AUTOR (ES) DO RELATRIO.


______________________________________________________
Ana Luza Magalhes Nunes Vieira
______________________________________________________
Daniella Soares Nogueira Ribeiro
______________________________________________________
Danieli Moreira Loureno
______________________________________________________
Kamilla Carvalho da Silva