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María Leticia Cruz Blas 1 Laboratorio de Micología

PRÁCTICA No. 1
EXAMEN EN FRESCO:
CARACTERIZACIÓN DE DIFERENTES ESTRUCTURAS DE HONGOS

Objetivo general:

 Que el alumno realice mediante soluciones aclarantes la identificación de
las estructuras que se presentan en los diferentes tipos de hongos, para
así describir sus características morfológicas.

Fundamento.

Examen directo en microscopio

Es el método más sencillo para saber que un hongo es el causante de la
infección a estudiar. Este se realiza colocando el material, como escamas, uñas
y pelos en un portaobjetos al cual se agrega una gota de KOH (hidróxido de
potasio) al 10 ó 20%; esta sustancia sirve para disolver el material de fondo y
así poder observar mejor los elementos fúngicos, en algunos laboratorios se
añade DMSO (dimetilsulfóxido) en una proporción de 60/4 lo cual facilita la
absorción del KOH.

Sobre la muestra se coloca un cubreobjetos y se observa con el microscopio de
luz a un aumento de 10x ó 20x para localizar las estructuras del hongo y luego
estudiamos el campo sospechoso a un aumento de 40x. La luz se debe disminuir
y el condensador se pone en una posición baja para poder apreciar mejor los
elementos fúngicos los cuales no tienen color; utilizando el negro de clorazol
podemos evitar este problema ya que nos da mejor contraste.

Generalidades. Los hongos estás
formados por células eucariotas. El
DNA está organizado en cromosomas
que se hallan envueltos por la
membrana nuclear. El citoplasma, con
orgánulos membranosos y abundantes
ribosomas, está limitado por una
membrana citoplasmáticas rica en
ergosterol. Recubriendo la membrana
se encuentra una pared celular rígida
de estructura polisacárida compleja,
compuesta mayoritariamente por
quitina, mananos y glucanos, que
protege de la lisis osmótica y regula el
paso de moléculas.

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Los hongos pueden ser unicelulares o pluricelulares. Los primeros están
formados por células aisladas redondas u ovaladas, denominadas levaduras.
Los pluricelulares están constituidos por células alargadas que crecen por
extensión de sus extremos,
tabicándose de un modo
más o menos completo,
formando largos filamentos
denominados hifas que con
frecuencia se ramifican.
Estos hongos, denominados
mohos, al crecer forman
matas de filamentos
entrelazados.

La hifa es un tubo de
longitud variable formado
por una pared celular rígida,
en el que fluye protoplasma. El diámetro varía de 1 a 30 µm termina en una
punta, misma que constituye la zona de extensión y representa la región de
crecimiento.

Otros hongos filamentosos son macroscópicos, forman estructuras con un
elevado nivel de complejidad y organización de sus hifas y presentan una
morfología característica; constituyen las denominadas setas.

Algunos hongos microscópicos pueden causar diversas enfermedades
denominadas micosis; sin embargo, son escasas las especies adaptadas
estrictamente al hombre y la mayoría de las que producen enfermedad tienen
su reservorio natural en el medio ambiente.

En general las células fúngicas se observan bien por microscopía
convencional, aunque pueden requerir tinciones especiales para facilitar su
visualización. Crecen fácilmente en los medios de cultivo convencionales dando
lugar a colonias visibles macroscópicamente, con morfología bien diferenciada
según estén formadas por levaduras u hongos filamentosos.


Características generales de los Hongos
 Todos son heterótrofos (quimioorganotróficos) por lo que tienen que
alimentarse de materia orgánica preformada que utilizan como fuente de
energía y de carbono.

 Son eucariotas, es decir, presentan un núcleo diferenciado con
membrana bien organizada.

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 Tiene una pared celular formada por quitina; esta pared es rígida, por lo
que no pueden fagocitar alimentos sino que absorben nutrientes simples
y solubles que obtienen al desintegrar polímeros mediante enzimas
extracelulares llamadas despolimerasas.

 La estructura fúngica consta de un complejo llamado talo o micelio, que
a su vez está constituido por múltiples filamentos o hifas (hyphomycetes
o mohos) o, menos a menudo, por estructuras unicelulares o levaduras
(blastomycetes); estas últimas se reproducen por gemación
(Saccharomyces cerevisiae) y muy rara vez por fisión binaria
(Schizosaccharomyces pombe), también son una excepción los
Chytriomycetes, formados por células redondas grandes con rizoides, y
los mohos mucilaginosos, que carecen de pared celular y pueden
alimentarse por fagocitosis.


Estructuras de los Hongos

Somáticas

Las hifas pueden presentar septos
y entonces el micelio está tabicado.
Septos primarios son los formados
cuando hay división nuclear y
adventicios los otros. Si los tabiques
están ausentes se habla de micelio
continuo. Los mohos son
micromicetos filamentosos. Cuando
el hongo es una célula aislada se dice
unicelular o levadura. Los cortos
filamentos compuestos por las
células que brotan de una levadura
constituyen el pseudomicelio.

Plecténquima es un conjunto de
hifas entrelazadas que se asemejan a un
tejido. Se dice prosénquima si las hifas pueden ser reconocidas y
pseudoparénquima cuando han perdido su individualidad. Esclerocio es
un plecténquima generalmente macroscópico que puede permanecer en vida
latente.
Estructuras somáticas
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Rizomorfa es un cordón grueso donde el conjunto de las hifas fusionadas ha
tomado el aspecto de raíz. Rizoides son las hifas de succión, como raicillas, que
penetran en el substrato. Haustorio es la hifa de succión del hongo parásito
dentro de la célula del hospedador. Apresorios son unas hifas achatadas que
se adhieren al substrato o al hospedador como sostén, especialmente en el
comienzo de la infección.
Reproductoras

Anamorfo es el hongo con
multiplicación asexuada y
teleomorfo es el mismo con
reproducción sexuada. Se les
asigna distinto género y
especie. Holomorfo indica el
ciclo de vida total. Esporas
son los
elementos de
perpetuación de la especie.
De acuerdo a la morfología
reciben distinto nombre:
alantospora con forma de
banana, aleuriospora con base plana,
dictiospora con septos longitudinales y
transversales, didimospora con un tabique, equinulada como un erizo,
escolescospora como un gusano, estaurospora como una estrella, feospora de
color obscuro, fragmospora con tabiques transversales, fusiforme como un huso,
helicospora como una espiral, hialospora de color claro y translúcido,
planospora móvil, verrucosa con verrugas, zoospora con flagelos.
Las balistosporas son proyectadas violentamente una vez maduras. Las
hipnosporas son aquellas capaces de permanecer con vida latente por largo
tiempo.
Las esporas pueden ser de origen asexuado (mitosporas) o sexuado
(meiosporas), y por su ubicación relativa internas o externas. Las mitosporas se
originan en las estructuras anamórficas y las meiosporas en las teleomórficas.

Anamórficas
Artrosporas o artroconidios son esporas desarrolladas en una hifa terminal
que al madurar se separan. En algunos hongos se forman artrosporas
Tipos de esporas
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separadas por una zona libre de citoplasma (disyuntor ) cuya pared se rompe
liberando las entosporas o clamido-artrosporas.
Clamidospora o clamidoconidio es una hipnospora o célula de resistencia,
terminal o interh ifal, con pared gruesa y substancias de reserva. Blastosporas
o blastoconidios son las esporas que se originan de una parte de una célula
somática, una hifa, un conidióforo u otra espora, y se desarrollan antes de la
formación del septo que lo separa de la célula de origen.
Conidios o conidiosporas son
las esporas asexuadas externas.
Si están implantadas
directamente sobre la hifa se
llaman sésiles. La parte del
micelio que origina y sostiene a
las esporas se denomina
esporóforo y si se trata de
conidios se dice conidióforo.
Fiálide es la célula conidiógena
que desde un extremo origina por
brotación y sin aumentar su
longitud, los fialoconidios o
fialosporas. La pared de la fiálide
suele extenderse en el ápice
formando un collarín.
Anélide es una célula
conidiógena con el ápice ancho y cicatrices en anillo, que se alarga con la
formación de cada espora. Los conidióforos pueden ser simples o ramificados y
a veces están agrupados en un conidioma. En Penicillium cada nivel de
ramificaciones recibe
distinto nombre, se
llama métulas a las
que sostienen a las
fiálides productoras de
esporas. En Aspergillus
las fiálides o las
métulas están
implantadas sobre una
vesícula o dilatación del
esporóforo.
Los conidios nacen de
los conidióforos
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aisladamente o quedan reunidos, ya sea en una cabezuela mucosa o en
cadenas. Éstas se forman por sucesión basípeta cuando todas las esporas
surgen de la célula conidiógena o basífuga si es por brotación de la espora
anterior. A veces después que se forma un conidio, el conidióforo se alarga
lateralmente y origina el segundo conidio. El proceso continúa y las esporas
quedan en zig-zag (proliferación simpodial). En algunos hongos surgen,
simultáneamente o no, varios conidios en diferentes puntos de la misma
célula conidiógena (brotación múltiple).
Teleomórficas
Gametas son las células
diferenciadas que se fusionan
y gametangios las estructura s
que las producen. Homotálicos
son los hongos que forman los
gametangios de distinta
polaridad en el mismo micelio.
Cuando cada micelio da sólo
gametangios de la misma polaridad, es necesario enfrentar dos micelios
distintos del mismo hongo heterotálico para originar las esporas
sexuadas. En muchos macromicetos se produce la somatogamia o fusión de
células no diferenciadas que originan un micelio dicariótico, a veces con una
conexión hifal a manera de puente (fíbula) entre cada célula.
Las oosporas son hipnosporas sexuadas originadas por heterogamia. La
estructura femenina u oogonio produce unos elementos grandes inmóviles u
oosferas que en algunos hongos se fusionan con los anterozoides (zoosporas)
producidos en la estructura masculina o anteridio, y en otros se ponen en
contacto con el anteridio por medio de los tubos de fertilización.
Las zigosporas son hipnosporas sexuados formados por isogamia. La hifa
emite un mamelón en el que se diferencian dos partes: suspensor y gametangio.
Los gametangios se fusionan originando la zigospora que suele estar rodeada
por hifas protectoras nacidas de los suspensores.
Ascosporas son las esporas sexuadas internas que se originan en un número
limitado (generalmente 4 u 8) dentro de una célula llamada asco. En las
levaduras se fusionan los citoplasmas de dos células de polaridad distinta e
inmediatamente o mucho después de la cariogamia ocurre la meiosis
formándose las ascosporas dentro del asco libre.
En los hongos filamentosos se producen gametangios (anteridio y ascogonio),
en general morfológicamente distinto, y los núcleos pasan a través del poro
formado en el punto de contacto o de un tubo receptivo llamado tricogino. En
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algunas especies heterotálicas los espermacios, microconidios incapaces de
germinar, cumplen la función de gametas masculinas. Después de la
fecundación nacen hifas ascógenas binucleadas cuyas células terminales, en
forma de cayado, se convierten en ascos.


Basidiosporas son las esporas sexuadas
externas que se originan en el basidio.
Este es una célula hifal binucleada que
sufre cambios morfológicos y se llama
probasidio al estado o parte de la misma
donde se produce la cariogamia. Se
denomina metabasidio a la parte o estado
en el cual ocurre la meiosis y forma 4 (a
veces 2) tubos pequeños o esterigmas en
cada uno de los cuales se forma una
basidiospora.

Hay dos tipos de metabasidios. El holobasidio es cilíndrico o con aspecto de
clava y en algunos hongos tiene forma de tenedor. Los fragmobasidios están
divididos generalmente en 4 células por septos transversales o longitudinales.
En muchos hongos las hifas se agregan para formar un basidioma macroscópico
y en aquéllos con el himenio expuesto, las basidiosporas están sobre unas
laminillas radiales o
tubos o espinas
ubicados generalmente
en el envés.
Algunos basidiomas
son como una
sombrilla extendida
(píleo) sostenida por
un pie que a veces
tiene un anillo o resto
de una membrana que
unía al píleo con el pie.
Otras veces hay en la
base una volva o resto de un velo que envolvía a todo el basidioma joven.
Hay hongos cuyos basidiomas se asemejan a un abanico, en otros son
cilíndricos, esféricos o coralinos.
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Metabolismo de los Hongos

Los hongos tienen escasas necesidades nutricionales por lo que pueden
crecer fácilmente. El lugar más frecuente es el suelo, a temperaturas entre 10 y
50 °C dependiendo de la especie, aunque algunos pueden crecer
indistintamente a bajas o altas temperaturas. Por otra parte, su pH varía entre
4,5 y 8 y se ven favorecidos por cierto grado de humedad.

Mecanismo de reproducción

Se pueden reproducir por tres mecanismos:

1. Reproducción sexuada.
2. Reproducción asexuada.
3. Reproducción parasexuada.



Reproducción
Para conservar su capacidad de
adaptación, los hongos deben
reproducirse fácilmente. Las hifas
se desarrollan a partir de una
espora por emisión de un tubo
germinativo; la forma más simple
ocurre por crecimiento apical de las
hifas; no hay crecimiento intercalar,
pero las células no terminales
pueden emitir ramificaciones. La
reproducción se realiza por medio
de esporas y puede ser sexuada
(teleomorfa) o asexuada (anamorfa).
Los hongos que presentan ambas
formas se llaman holomorfos.
Reproducción sexuada
La reproducción sexuada o perfecta se produce por la unión de dos núcleos,
mientras que la asexuada o imperfecta (hongos mitospóricos), se da a partir de
Esquema del crecimiento apical
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un micelio aéreo o reproductor, sin fusión de los núcleos. Las esporas o
elementos celulares que sirven para la dispersión se denominan propágulos.
Consta de una serie de fenómenos como: producción de órganos sexuados y
gametos; fusión de protoplasma de éstos (plasmogamia) y fusión nuclear
(cariogamia); meiosis en hongos haploides; aparición de factores genéticos, así
como desarrollo de cuerpos fructíferos y esporas sexuadas.
En ocasiones, la plasmogamia se acompaña de formación de hifas protectoras
alrededor del huevo y evoluciona de manera diferente según se trate de hongos
inferiores o superiores. En los superiores (ascomicetos o basidiomicetos), la
fusión nuclear da lugar a células binucleadas o dicariones, y en los inferiores
(zigomicetos) se observan heterocariones, es decir, núcleos distintos desde el
punto de vista genético.

Algunos hongos no septados producen
esporas sexuales llamadas oosporas, que
son el resultado de la fusión de un
anteridio pequeño y de un oogonio mucho
más grande. Las oosporas se forman
dentro del oogonio y pueden formarse una
o más esporas en cada uno, dependiendo
del número de células que contenía éste.






.
Otros hongos no septados producen zigosporas al unirse las porciones
apicales de nos hifas, frecuentemente indistinguibles y que pueden proceder del
mismo o de diferentes micelios. En este tipo de esporas, la meiosis ocurre
durante la germinación de la espora y la hifa que emerge produce un
esporangio. Las esporas haploides que salen del esporangio dan origen al
micelio.









Oospora
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Existen hongos septados que producen esporas llamadas ascosporas por la
unión de dos núcleos compatibles del mismo micelio o de micelios diferentes. La
característica de estas esporas es que se forman dentro de un saco llamado
asca. En muchos de los hongos se producen ascosporas. Varias ascas se
encuentran dentro de una estructura llamada ascocarpo, las cuales varían
mucho en tamaño y en forma, entre los diferentes géneros.



Ciertos hongos septados desarrollan, después de
la unión de dos núcleos compatibles, una
estructura en forma de mazo llamada basidia, en
cuyo extremo se forman, usualmente cuatro
esporas sexuales llamadas basidiosporas. En
muchas especies, las basidias se encuentran en
una estructura altamente organizada llamada
basidiocarpo. Los hongos de sombrillita o setas
son los basidiocarpos más conocidos.





.










Reproducción asexuada

En este tipo de reproducción no existe fusión de núcleos, sino que hay un
crecimiento del micelio. Los hongos que poseen este tipo de reproducción se
denominan hongos imperfectos.
Existen varios tipos de reproducción asexuada:

Esquema de formación de zigosporas
Ascosporas y ascos. Xylaria
(40x)
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a) Fragmentación: las hifas fragmentadas dan lugar a una nueva
colonia.

b) Gemación: ocurra por la formación en la célula madre de una yema a
partir de la cual se origina la célula hija.

c) Esporulación: se forman esporas que germinan posteriormente:

- Si se desarrollan directamente de la célula vegetativa se
denominan talosporas.
Existen tres tipos de talosporas:
 Artrosporas: aparecen por segmentación de las hifas.
 Blastosporas: se forman por gemación, sin separación entre
ellas, originando las pseudohifas o pseudomicelios.
 Clamidosporas: son esporas grandes rodeadas de una pared
gruesa. Son también formas de resistencia.

- Otras esporas se originan de estructuras especializadas, como es el
caso de:

 Esporangiosporas: se forman dentro de estructuras saculares
que se encuentran en los extremos de las hifas no tabicadas.
 Conidias: se originan a partir de hifas y por un mecanismo de
gemación, separándose posteriormente ellas.
 Aleurispora: similares a las anteriores pero se separan por
ruptura del septo.

Reproducción parasexual

Es una forma de reproducción muy rara, que consiste en la unión de una o
varias hifas pero sin existir una fusión nuclear, dando unas estructuras con
núcleos haploides.

Identificación de los hongos.
La identificación de los hongos se basa en tres características:
1. En el aspecto macroscópico de las colonias y su observación microscópica,
que permite confirmar si se trata de hongos levaduriformes o
filamentosos.
2. Las características bioquímicas, útiles para la identificación de
lavaduras.
3. La morfología microscópica, que permite identificar los hongos
filamentosos

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Material.

 Portaobjetos.
 Cubreobjetos.
 Asa de platino o micromel.
 Porta asa.
Equipo.

 Mechero bunsen.
 Microscopio.

Reactivos.

 KOH (del 10 al 30%).
 NaOH (del 10 al 30%).



Función: Con la utilización de la solución aclarante las proteínas, grasas y
muchos polisacáridos del sustrato son solubilizados (hidrolizados) y los tejidos
aparecen óptimamente claros. Las paredes celulares de la mayor parte de los
hongos permanecen intactas a causa de la resistencia a los álcalis de los
glucanos.
Muestra biológica.
Cualquier alimento u objeto que tenga hongos.
 Tortilla, tomate, pan, melón, limón, papaya.

Técnica.

1) Flamear y enfriar el asa.
2) Poner una gota de solución aclarante sobre un portaobjetos.
3) Tomar una asada de la muestra biológica y depositarla sobre la gota de
solución aclarante.
4) Cubrir la preparación con un cubreobjetos.
5) Flamear el asa.
6) Observar al microscopio la preparación en seco débil y seco fuerte.
7) Anotar las observaciones macroscópicas y microscópicas.
8) De la misma forma montar las preparaciones necesarias y obtener así
muchas observaciones de las distintas muestras.

Observaciones generales y resultados








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Muestra analizada: limón.
Color de la colonia: blanca.
Aspecto: lechosa.
Consistencia: blanda.
Estructura observada: conidio, levaduras y
talos.
Visto a: 40x.




Conclusiones

 Aprendimos a llevar a cabo el examen en fresco a muestras de varias
frutas que estaban ya infectadas por hongos.

 Con esta práctica se lograron observar cómo eran las muestra infectadas
por hongos tanto de forma macroscópica y también microscópicamente
debido a las soluciones aclarantes utilizadas para dicha observación, y
así pudimos describirlas claramente.

 La identificación de estructuras fue muy variada por el número de
muestras analizadas en esta práctica, algunas no se lograron observar
bien, debido a que ciertas muestras no tenían suficiente moho.

Bibliografía

Muestra analizada: pan.
Color de la colonia: gris.
Aspecto: lechosa.
Consistencia: blanda.
Estructura observada: levaduras.
Visto a: 40x.

Muestra analizada: melón.
Color de la colonia: blanca.
Aspecto: lechosa.
Consistencia: blanda.
Estructura observada: pequeños
talos y levaduras.
Visto a: 40x.

María Leticia Cruz Blas 14 Laboratorio de Micología

 García, Vera. Introducción a la Microbiología. España (2005). Editorial
EUNED. Pp. 93-95.

 Hidalgo Togores, José. Tratado de Etnología. México (2002). Editorial Mundi-
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laboratorio de atención primaria. España (2006). Editorial MAD. Pp. 248-
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 http://www.unsa.edu.ar/matbib/micragri/micagricap4.pdf

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hill.com/sites/dl/free/6071505101/895610/Arenas_MicologiaMedica_4a_
capitulo_muestra.pdf